vii.platica validacion doc angel final-1con ejercicios.pdf

8/16/2019 VII.PLATICA VALIDACION doc angel FINAL-1CON EJERCICIOS.pdf

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NORMATIVIDAD

1.- Norma ISO 17025(Acreditación de laboratorios de ensayo ycalibración).

2.- BPM (Industria Farmacéutica )

3.- Norma ISO 15189

(Acreditación de laboratorios clínicos).

4.- Organismos Internacionales como FAO, USP

y otras farmacopeas, OMS, OIE, ICH.(Conferencia Internacional tripartita sobre

armonización).



GUÍAS DE REFERENCIA

EURACHEM . The fitness for porpose ofanalytical methods:

- A Laboratory guide to method validation andrelated topics, 1998.

- Guide to Quality in analytical Chemistry: An aid

to accreditation (2002).- Quantifying Uncertainty in Analyticalmeasurements 2ª ed. (2000)

www.eurachem.org

http://www.eurachem.org/

http://www.eurachem.org/



IUPAC

(International Union of Pure and AppliedChemistry):

- Harmonized guidelines for single laboratoryvalidation of methods of analysis(2002).

- Nomenclature in evaluation of analyticalmethods including detection and quantificationcapabilities (IUPAC Recomendations)www.iupac.org

ICH :

Validation of analytical procedures:

Text and Methodology Q2(R1) 2005. www.ich.org

http://www.iupac.org/

http://www.iupac.org/



¿QUE ES LA VALIDACION?

ISO-9000-2000: Es la confirmación medianteel aporte de pruebas objetivas de que se han

cumplido los requisitos para el usopretendido o una aplicación especifica de unmétodo o prueba microbiológica.



TIPOS DE METODOS CUALITATIVOS

CUANTITATIVOS



PARA QUÉ SE VALIDA UN METODO

- Para saber si el laboratorio tiene laresponsabilidad de garantizar que los resultadosson exactos, validos y confiables.

- Para saber si ese ensayo sirve para lo que sequiere utilizar.

- Para conocer el comportamiento del método

- Para tomar decisiones técnicas y administrativas



¿POR QUE VALIDAR UN METODO?

- Porque cuando el usuario solicita un análisis lohace para resolver un problema.

- Porque si el resultado de un ensayo no presenta

ninguna utilidad mejor no utilizarlo.



¿QUE METODOS SE VALIDAN?



1) METODOS NO NORMALIZADOS

- Validar antes de usarlos- Buscar información sobre validación previa

- Especificar los requisitos del cliente yobjetivos del ensayo.

2) METODOS QUE DISEÑA ODESARROLLA EL LABORATORIO.

- Procedimiento

- Asignarlo a personal calificado

- Proveer los recursos necesarios



3) METODOS NORMALIZADOS

UTILIZADOS FUERA DELALCANCE PREVISTO.

- Son métodos aplicados a matrices que no se

especifican en el procedimiento normalizado.- Ampliaciones y modificaciones de los

métodos normalizados.

- Para demostrar que una versión modificadade un método cumple las mismasespecificaciones que el método original.



4) SISTEMAS DE ENSAYO

COMERCIALES (KITS)- Los laboratorios deben conservar los datos

sobre la validación de los sistemas de ensayo

comercial que se utilicen- Los datos se pueden obtener de ejercicios de

inter comparación o de datos sobre validaciónremitidos por el fabricante y sujetos a laevaluación de una tercera parte (p. ej. aoac)

- Si no se disponen de datos sobre validación osi no son plenamente aplicados, el laboratorio

completara la validación del método



PUNTOS A CONSIDERAR

CUANDO SE SELECCIONA UNMETODO DE ENSAYO

– Propiedades analíticas, precisión, exactitud,

especificidad, sensibilidad, limite decuantificación y/o de detección, los efectosmatriciales.

–

Factibilidad de uso o automatización. – Rapidez de análisis o respuesta.

– Costo.

–

Tipo de método.



PRINCIPIOS DE LA PRACTICA

ANALITICA QUE SE DEBENCONSIDERAR PARA TENERBUENOS RESULTADOS DEL

ENSAYO− Hacer las mediciones de forma tal que

satisfagan el requerimiento acordado.

− Utilizar métodos y equipos probados queaseguren que son aptos para un determinadopropósito.



− El personal que realiza el ensayo debe ser

competente y estar calificado.− Debe haber una verificación externa y

periódica de la competencia técnica dellaboratorio.

− Los ensayos que se realizan deben serconsistentes con lo que se realiza en cualquierotro lugar.

−

Debe haber procedimientos bien definidos decontrol de calidad y de aseguramiento de lacalidad.



CENTRO NACIONAL DE SERVICIOS DE DIAGNOSTICO

EN SALUD ANIMAL

SISTEMA INTEGRAL DE GESTION

PLAN O PROTOCOLO DE VALIDACION DE PRUEBAS DE LABORATORIO

No

1) ALCANCE DE LA VALIDACIÓN

Método

Procedimiento de validación

Analito

Matrices

2) REQUERIMIENTOS DEL MÉTODO

TipoValidación retrospectiva Validación prospectiva Verificación

3) DISEÑO EXPERIMENTALMatriz de la muestra(s): Testigo(s) reactivo: Tipo de Prueba a realizar:

Parámetros a evaluar: Número de análisis requeridos: Criterios de aceptación para cadaparámetro:

Material de referencia y/omaterial de referenciacertificado:

Analista (s) responsable: Fecha:

1 de 2




EN SALUD ANIMAL


PLAN O PROTOCOLO DE VALIDACION DE PRUEBAS DE LABORATORIO

No 4) MATERIALES, INSUMOS Y EQUIPOS NECESARIOS PARA DESARROLLAR LAVALIDACION

Plan de validación elaborado por: Firma Fecha deelaboración

Nombre:

Cargo:

Comentarios, observaciones o modificaciones al plan: Fecha Firma

2 de 2



Definición del método a validar: Cuali o Cuantitativo-Analíto-Matriz- Concentración-principio.

Tipo de método

Normalizado Normalizado

modificado

No normalizado: nuevo o

desarrollado por el

laboratorio

No normalizado

Tradicional: utilizado por

el laboratorio hace años

Se trata de un método normalizado NoSi

Verificación

Desarrollar pruebas experimentales

Validación

Retrospectiva

NoTiene una modificación significativa?

Si

Establecer parámetros a evaluar

Establecer pruebas elementales

Establecer criterios de aceptabilidad

Validación prospectiva

Evaluar resultados

INFORME DE VALIDACION

REVISION DE INFORME

Comparar resultados

versus criterios



PROCESO DE VALIDACION

METODO A VALIDAR

DISEÑO Y

EJECUCION

DE

ENSAYOS

DATOS

ANALISIS

ESTADISTICO

METODO

VALIDADO

COMPARACION CON

REQUISITOS DE USO

PREVISTO



1 Introducción al método

2 Parámetros de validación

3 Etapa 1 selección y factibilidad

4 Etapa 2 Desarrollo yestandarización

5 Etapa 3 Ejecución del método

6 Etapa 4 Validación

7 Etapa 5 Mantenimiento y mejora8 Verificación del método

9 Puntos a considerar

Etapas del proceso de validación de métodos



PARAMETROS A INCLUIR EN LAVALIDACION

PARAMETROS DELMETODO

METODOMICROBIOLOGICO

CUALITATIVO

METODOMICROBIOLOGICO

CUANTITATIVO

METODO ANALITICOFISICOQUIMICO

LIMITE DE DETECCION + - +

LIMITE DECUANTIFICACION

- + +

DESVIACION NEGATIVA + + +

DESVIACION POSITIVA + + +

FALSOS POSITIVOS + + +

FALSOS NEGATIVOS + + +

SENSIBILIDAD + +

ESPECIFICIDAD + + +

EXACTITUD RELATIVA + + +

REPETIBILIDAD + + +

REPRODUCIBILIDAD + + +

EXACTITUD + - +

PRECISIÓN - - +

LINEALIDAD - - +

RANGO - - +

ROBUSTEZ - - +



Grupo de ensayo Pruebas realizadas Parámetros de validación queaplican

FISICOQUIMICOS

Análisis de concentración de inactivantes. LinealidadPreservantes

Adyuvante

Proteínas

BIOLOGICOS

Titulación Repetibilidad, reproducibilidad,sesgo, sensibilidad,especificidad

Inocuidad o seguridad N/A

Potencia en animales de laboratorio ométodos alternos reconocidosinternacionalmente.

Exactitud, repetibilidad,reproducibilidad, sesgo,sensibilidad, especificidad

MICROBIOLOGICOSPureza Límite de detección

Esterilidad Límite de detección

Identidad Repetibilidad, reproducibilidad,limite de detección

INMUNOLOGICOSTitulación in vitro. Repetibilidad, reproducibilidad,

sesgo, sensibilidad,especificidad

Identidad serológica Repetibilidad, reproducibilidad,sesgo, sensibilidad,especificidad

CONTROL DE CALIDAD A PRODUCTOS BIOLOGICOS



LIMITE DE DETECCIONEs la cantidad mínima de analito que puede ser

detectado por el método pero en cantidadesque no pueden estimarse con precisión. losresultados se expresan como detectadono detectado en una cantidad o volumendefinido.

LIMITE

DE CUANTIFICACIONEs la concentración de analito en una muestraque puede ser determinada con precisión yexactitud aceptables, bajo las condicionesexperimentales establecidas.



DESVIACION NEGATIVA (DN)

Es cuando el método a validar da unresultado negativo sin confirmación y elmétodo de referencia da un resultadopositivo.

DESVIACION POSITIVA (DP)Es cuando el método a validar da un

resultado positivo sin confirmación y elmétodo de referencia da un resultadonegativo.



FALSOS POSITIVOS F(+)•

Es la probabilidad que el ensayo arroje unresultado positivo cuando la muestra esnegativa.

• F( + ) = DP c / DP + NV = 1 - especificidad.DNc= numero de negativos del total de positivos.

FALSOS NEGATIVOS F(-)• Es la probabilidad de que el ensayo arroje un

resultado negativo cuando la muestra espositiva.

• F( - ) = DN c /DN + PV = 1 - sensibilidad.DPc = numero de positivos que salieron de los negativos.



SENSIBILIDADEs la capacidad del método de dar positivocuando las muestras son verdaderas positivas(PV)

sensibilidad % = PV / (DNc + PV) 100

ESPECIFICIDADEs la capacidad del método de dar negativocuando las muestras son negativas (NV)especificidad % = NV / (DPc + NV) 100



EXACTITUD RELATIVAGrado de concordancia entre los resultadosdel método evaluado y los obtenidos utilizandoun método de referencia reconocido

Exactitud relativa % =PV + NV / (PV + NV + DN + DP)100

REPETIBILIDADGrado de concordancia entre los resultados demediciones sucesivas, realizadas en lasmismas condiciones de medición.



Dichas condiciones son: el mismoprocedimiento, mismo analista/observador,

ubicación, instrumentos y condiciones demedicion y puede ser expresadacuantitativamente en terminos de los parametrosde dispersion de los resultadosp. ej.

se preparan las muestras a analizar encualquier orden y cada operador analiza

las muestras 5 veces y se anotan losresultados ( las muestras son conocidas)se pueden expresar en porcentaje losresultados de repetibilidad.



REPRODUCIBILIDAD

Grado de concordancia entre los resultados demediciones de la misma muestra realizadas en

diferentes condiciones de medición (pruebasinter-laboratorios)



EXACTITUDEs la proximidad de la concordancia entre elresultado de una medición y un valorverdadero del mensurando, este parámetrose puede determinar haciendo la

comparación con un método reconocidocomo exacto (método de referencia).Reportar el valor teórico, y el valor delensayo. Se calcula el promedio, la

desviación estándar, desviación estándarrelativa (coeficiente de variación).



PRECISION

Es el grado de concordancia entre losresultados independientes de una medición,obtenidos en condiciones estipuladas ya sea

de repetibilidad o de reproducibilidad ydepende de la distribución de los resultadossin estar relacionada con el valor verdadero.



En el ejemplo veremos que se trabajan 10

muestras y se realizan 5 lecturas de cadauna.

Registrar los resultados y calcular la

media, desviación estándar y DER o CV.Criterio de aceptación: para muestrasbiológicas debe ser un CV o DER < 10%



LINEALIDAD

Es la capacidad de un método analítico paragenerar resultados directamente proporcionala la concentración del analito o valor delparámetro de la muestra dentro de un rango.



Hay 2 formas para determinar la linealidad.

a) Preparar soluciones patrón de por lo menos5 diferentes concentraciones del estándar queestén distribuidas regularmente y que cubran

del 80%-120% ó 50% - 150% del intervalo detrabajo esperado, con diluciones a partir deuna misma solución madre y analizando enduplicado para cada dilución o realizando por

duplicado la solución madre y analizando 1 vezcada dilución.



b) Usar 6 réplicas por concentración. Analizar

las soluciones conforme al método encuestión.



Criterio de aceptación.La curva de calibración se grafica colocando las

concentraciones de las soluciones en el ejehorizontal de la x y las respuestas delinstrumento en el eje vertical de la y, la relacióndebe ser lineal con un coeficiente de

determinación (r ² ) de por lo menos 0.98 – 0.99,los valores deben caer dentro de una zonahorizontal angosta, los que queden fuera no sonaceptables para ser incluidos en el intervalonormal de trabajo.

CV ≤ a 2% r ≥ a 0,99

r² ≥ 0,98



RANGO O INTERVALO

Intervalo entre la concentración máxima ymínima del analito en la cual se puededeterminar al analito con un nivel adecuado deprecisión, exactitud y linealidad utilizando elmétodo en cuestión.

Procedimiento.

Verificar que el método analítico proporcionalinealidad, precisión y exactitud aceptablescuando se aplica a muestras que contienen elanalito en los extremos y dentro del intervalo



Criterio de aceptación:

Determinar que los niveles de precisión,exactitud y linealidad de las mediciones en elrango de las concentraciones del analito

cumple con su respectivo criterio deaceptación.



EJEMPLOS

DEVALIDACION ENMETODOS MICROBIOLOGICOS

PARAPRODUCTOS BIOLOGICOS



Tres analistas realizaron por quintuplicado unamisma muestra. Dicha muestra es un material de

referencia de ensayo de aptitud.Valor asignado (log ufc/ml): 4,26 log¹º

1 Analista Medición

1 Medición

2

Medición

3

Medición

4

Medición

5 Promedio Desviación estándar

2

3 1 4,60 4,61 4,59 4,54 4,62 4,59 0,03

4 2 4,58 4,57 4,56 4,51 4,54 4,55 0,03

5 3 4,65 4,68 4,70 4,71 4,67 4,68 0,02

6 Sr 0,03

7 SR 0,07

Sr= V sr1² + sr2² + sr3² SR= Desviación estándar de los3 promedios de cada analista



Repetibilidad =

2,8* x Sr = 2.8 x 0,03=0,084 x 100 = 8,4%

Por lo tanto 8,4 < 10 la prueba es satisfactoria

Este método tiene un 91,6% de repetibilidad



Reproducibilidad =2.8 x 0,07= 0,196 x 100 = 19,6

Este método tiene un 80,4 % de reproducibilidad.

En este caso de reproducibilidad se espera quela variabilidad en esta determinación sea mayorque la repetibilidad, por lo tanto si se cumple.

* El 2.8 sale del promedio de las desviaciones estándar de cadaanalista y se multiplica por 100.



CV o DER= 0,028/ 4,61 (100)

= 0,60 por lo tanto el CV < a 10



Método a validar

ufc/g

Método de referencia

ufc/g

Método a validar

Log ufc/g

Método de

referencia

Log ufc/g

2000 2100 3,30 3,32

1800 2200 3,26 3,34

1900 2300 3,28 3,36

1800 2100 3,26 3,32

2100 2200 3,32 3,34

Promedio

Desviación estándar

Error absolutoError relativo

Coeficiente de variación

(DER)

3,28

0,03

0,061.7

0,91% < 2

3,34

0,02



EJEMPLO:

En un ensayocualitativo se

requiere saber

la especificidad,

sensibilidad yexactitud para

validar dicho

método.

NÚMERO DELECTURAS

METODO AVALIDAR

METODO DEREFERENCIA*

MUESTRA POSITIVA

1 - +

2 + +

3 + +

4 + +

5 - +

MUESTRA NEGATIVA

1 + -

2 - -

3 - -

4 - -

5 - -



*-Método investigado a fondo que describecon claridad y exactitud las condiciones y

procedimientos necesarios para medir losvalores de una o mas propiedades.

-Método que ha demostrado tener unaexactitud y una precisión apropiadas parael uso que pretende hacerse del mismo.

-Método normalizado nacional ointernacionalmente



RESULTADO DEL ENSAYOA VALIDAR RESULTADO ASIGANADO

( + )* RESULTADO ASIGANADO( - )* TOTAL

POSITIVO +/+ (PV) +/- (DP) PV + DP

NEGATIVO -/+ (DN) -/- (NV) DN + NV

TOTAL PV + DN DP + NV N

* Obtenidos por el método de referencia



Siguiendo el ejemplo tenemos

RESULTADO DEL ENSAYO

A VALIDAR

RESULTADO ASIGNADO

(+)

RESULTADO ASIGNADO

(-)

TOTAL

POSITIVO 3/5 1/5 3 + 1 = 4

NEGATIVO 2/5 4/5 2 + 4 = 6

TOTAL 3 + 2 1 + 4 10



FALSOS POSITIVOS F (+) =

DPc /DP + NV 1 / 1 + 4 = 1 – ESPECIFICIDAD

1/5= 0.2 = 1 – 80 = 20%

FALSOS NEGATIVOS F(-)=

DNc / DN + PV 2 / 2 + 3 = 1 - SENSIBILIDAD

2/5 = 0.4 = 1 – 60 = 40%NÚMERO DE LECTURAS METODO A VALIDAR METODO DE REFERENCIA*

MUESTRA POSITIVA

1 - +

2 + +

3 + +

4 + +

5 - +

MUESTRA NEGATIVA

1 + -

2 - -

3 - -

4 - -

5 - -



SENSIBILIDAD% =

PV/ (DNc + PV)100 = 3/ (2 + 3) 100

3/5 = 0.6 X 100= 60%

ESPECIFICIDAD =NV/(DPc + NV)100 = 4/(1 + 4)100 = 4 / (1 + 4)100 =

4/5 X 100 = 0.8 X100 =80%

EXACTITUD RELATIVA %

PV + NV / (PV + NV + DN + DP )100

3 + 4 /(3 + 4 + 2 +1)100 = 7/10 X 100 = 70%

NÚMERO DELECTURAS

METODO AVALIDAR

METODO DEREFERENCIA*

MUESTRA POSITIVA

1 - +

2 + +

3 + +

4 + +

5 - +

MUESTRA NEGATIVA

1 + -

2 - -

3 - -

4 - -

5 - -



No. DE

MUESTRA

RESULTADO

ASIGNADO

1 2 3 4 5 ACERTACION CONVERSION

A

DECIMAL

PORCENTAJE

DE

ACERTACION

1 + + + - - + 3/5 0.6 60%

2

+

+

+

-

-

-

2/5

0.4

40

3

-

-

+

+

-

+

2/5

0.4

40

4 + - - + + - 2/5 0.4 40

5

-

+

+

-

+

+

1/5

0.2

20

6 + - + + + - 3/5 0.6 60

7 - - - - - - 5/5 1.0 100

8

+

-

-

-

+

+

2/5

0.4

40

9 + + + + - + 4/5 0.8 80

10 + + + + + + 5/5 1.0 100

PROMEDIO

0.58

58

DS 0.274

REPETIBILIDAD ( ejemplo )



Lo anterior se repite en total 3 veces poranalista y se hace una tabla como la anterior,

por ejemplo en las otras lecturas se obtuvo losiguiente:

LECTURA No. 2

PROMEDIO 0.62 = 62%DS= 0.274

LECTURA No. 3

PROMEDIO 0.62 62%DS= 0.358



PROMEDIO DE LAS MEDIAS=

0.58+ 0.62 + 0.62 / 3 = 0.60

DS = 2.3

CV= 2.3/0.60 X 100 = 3.79

Se admite que el CV no sea mayor al 10%.

En el caso de la reproducibilidad se hace entre

laboratorios y no existe ningún criterio universalpara juzgar la reproducibilidad.



Analista DICT50 Lote 1 de antígeno Parámetros a evaluar

_

X DS CV

1

Ensayo

1 2 3

100 9 9 8 8,6 0,577 6,7

200 8 9 8 8,3 0,577 6,9

300 8 9 9 8,6 0,577 6,7

2Lote 2 de antígeno _

X DS CV

Ensayo

100 9 9 9 9,0 0 0

200 9 8 9 8,6 0,577 6,7

300 9 9 9 9,0 0 0

3

Lote 3 de antígeno _

X DS CV

Ensayp100 9 8 9 8,6 0,577 6,7

200 9 7 9 8,3 1,15 13,8

300 9 8 9 8,6 0,577 6,7

Los resultados son expresados en Log 2

Criterio de aceptación: CV ≤ 15%, por lo tanto si se cumple

Validación de la precisión inter-ensayos (Reproducibilidad) en una prueba de virus-suero-neutralización en cultivo celular para determinar la concentración de anticuerpos hacia elvirus Diarrea Viral Bovina con diferentes analistas, diferente lote de antí geno, diferentes

DICT50 y un suero de referencia con un tí tulo de anticuerpos de 1:512 ( 9 Log2 )



aLog Dilución ______________________________________________________________________________________________________________________________________

Replicas 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12

1 + + + + + + - - - - - -

2 + + + + + - + - - - - -

3 + + + + + - - - - - - -

4 + + + + + + - - - - - -

5 + + + + + - - - - - - -

6 + + + + - + + - - - - -

7 + + + + + + + - - - - -

8 + + + + + - - - - - - -

Total (X1) 8 8 8 8 7 4 3 0 0 0 0 0

8/8 8/8 8/8 8/8 7/8 4/8 3/8 0/8 0/8 0/8 0/8 0/8P1 1 1 1 1 0.875 0.5 0.375 0 0 0 0 0

Ejemplo de una lectura de un ensayo de dilución seriada para determinar el título de la TCID50 +Presencia de virus,- Sin presencia de virus. El ensayo se realizó con 12 diluciones y 8 réplicas por dilución. Total X1 es el número depositivos por dilución, P1 es la fracción de los pozos positivos/total.El método Spearman-Karber estima el título utilizando la siguiente fórmula:

m = Xk – d/2 + d ∑ (X1 / n) ó m= Xk – d/2 + d ∑ P1

m = Logaritmo negativo del título, considerando el volumen de inóculo por pozo.Xk = El logaritmo del valor recíproco de la dilución más baja donde todas las réplicas son positivos.d = El 10Log del factor de dilución(d = 1.00 cuando el factor de dilución es 1:10, d = 0.30 cuando el factor de dilución es 1:2, d = 0.48 cuando el factorde dilución es 1:3, etc.)n= Número de réplicas por dilución

X1 = El número de pozos positivos por dilución a partir de Xk P1 = Proporción de la reacción (X1 / n)



Siguiendo con el ejemplo:

En el ejemplo se considera que las diluciones fueron de 1:10 (d = 1)

Xk = 4d = 1n= 8X1 = 8/8, 7/8, 4/8, 3/8 ó 1, 0.875, 0.5, 0.375m = 4 – ½ + 1 (8/8 + 7/8 + 4/8 + 3/8)= 4 – 0.5 + 2.75= 6.25

Como el volumen de inoculo fué de 100 µl/pozo, el logaritmo de la dilución es 10m y ellogaritmo del título es por eso 6.25 /100 µl ó 7.25 / ml (107.25 TCID50 / ml.)

Cálculo de la desviación estándar:

√ [ d2 ∑{ P1 (1 – P1)/ (n – 1) } ]= √ [ 12 ∑{ P1 (1 – P1)/ (8 – 1) } ]

= P1 hasta P4 1.00 = > 1 ( 1 – P1 ) / 7 = 0P5 = 0.875 => 0.875 ( 1 – 0.875) / 7 = 0.016P6 = 0.500 => 0.500(1 – 0.500) / 7 = 0.036P7 = 0.375 = > 0.375 (1 – 0.375) /7 = 0.033P8 hasta P12 0.000 => 0 ( 1 – 0) / 7 = 0

DS = √ { 12 (0.016 + 0.036 + 0.033) }

DS = √ 0.085 = 0.292



Muestra Corrida 1Título DS

Corrida 2Título DS

1(Bajo)

3.74 0.193.39 0.213.74 0.18

3.56 0.193.82 0.183.48 0.22

2(Medio)

5.65 0.195.91 0.215.74 0.18

5.39 0.195.91 0.235.65 0.24

3(Alto)

7.48 0.207.82 0.21

7.56 0.20

7.39 0.227.74 0.24

7.39 0.20Pool de DS 0.205

Ejemplo: Prueba de repetibilidad de un ensayo de TCID50. 3 muestras son tituladas en trplicado en 2 corridasindependientes realizadas por un operador en el mismo día, resultando en logaritmos de títulos y desviaciónestándar de 18 ensayos ,el pool de las desviaciónes estándar es la repetibilidad del ensayo de TCID50 y escalculado en base a las desviaciones estándar individuales de los 18 ensayos.

Pool de DS = √ { [ (n1 – 1)DS12 + ……..(n1 – 1 )DSI2 ] / [ n1 + …. nI – 1 ] }

DS = desviación estándar de cada ensayon = número de réplicas dentro de cada ensayoI = Número de ensayos

REPETIBILIDAD

EJEMPLO DE LINEALIDAD



NIVEL Concentraciónmg/L( X ) ( X2 )

Promedio( Y ) ( Y2 )

( X.Y )DS

CV % Varianza

1 2 3

1 13,4 179,5 43,8 44,2 44,1 44,0 1936 589,6 0,2 0,4 0,0

2 26,6 707,5 86,2 86,1 87,6 86,7 7516,8 2306,22 0,8 1,0 0,7

3 40,8 166,6 131,2 132,7 133,6 132,5 17556,25 5406 1,2 0,9 1,4

4 54,7 2992 181,7 180,7 178,6 180,3 32508 9862,4 1.6 0,9 2,55 68,6 4705,9 221,6 224,2 221,8 222,5 49506,2 15263,5 1,4 0,6 2,0

Promedio 40,82 133,2

Desviaciónestándar

21,9 71,26

Sumatoria 204,1 10249,5 666 109023,2 33427,72

_X 2 1666,2

_ Y2 17742,24

Sxy=i=1∑n (X1.Y1)+(X2.Y2)….. – (Promedio de X . Promedio de Y) = 33427,72/5 – 5437,2 = 1248,3

nSx = √ ( (∑ X2 /n) – (Promedio de X)2 ) =√ 10249,5/5 – 1666,2 = √383,7 = 19,58

Sy= √ ( (∑ Y2 /n) – (Promedio de Y)2 ) = =√ 109023,2/5 – 17742,24 = √4062,4 = 63,7

r = Sxy / Sx . Sy = 1248,3/ 19,58 X 63,7 = 1248,3/1247,2 = 1,0008

r 2 = 1,001

Si el coeficiente es positivo, la correlación es directa y hay una dependencia funcional -1 ≤ r ≤ 1

Significancia: tr =│ r │ √ ( n – 2 )/ √ ( 1 – r 2 ) = │ 1.0008 │ √ 3 /√ 1 – 1,001 = 1,0008 x 1,73 / √ - 0,001 =0,729/0.031 = 23,5tr = 23,5 tt = 3,182 Por lo tanto tr > tt ( 23,5 >3,182 HAY UNA CORRELACION LINEALSIGNIFICATIVA

J O




EN SALUD ANIMAL


INFORME DE VALIDACION DE MÉTODOS DE ENSAYONo de validación:

IDENTIFICACION DEL METODO DE ENSAYO VALIDADO

Nombre completo del método:

Tipo de método:Cualitativo Cuantitativo

Normalizado Normalizado modificado No Normalizado Nuevo

Analito:

Unidades:Matriz ( o matrices)

Responsable Validación:

Firma:

Fecha:

IDENTIFICACIÓN DE MATERIALES INSUMOS O EQUIPOS EMPLEADOS

Equipos involucrados: (Nombre, marca, modelo, número de identificación, tipo de columna, tipo de detectores, etc.)

Soluciones estándares y/o patrones involucrados: (Nombre, marca, modelo, número de identificación, concentraciones, etc.)

Material de referencia: (Nombre, marca, código de identificación códigos asignados, unidades, etc.)

Material de referencia certificado: (Nombre, marca, código de identificación, No. Certificado, valores asignados, unidades,

trazabilidad, etc.)

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EN SALUD ANIMAL


PARAMETROS DE VALIDACION

Pruebas realizadas

Selectividad: Sensibilidad:Linealidad: Precisión:Exactitud: Veracidad Limites:Robustez:Otros:

RESULTADO DE LAS PRUEBAS EXPERIMENTALES REALIZADAS

Linealidad

Descripción: (Breve descripción de la experiencia analítica)

Tipo de calibración:Calibración externa: Calibración de matriz:

Calibración externa estándar interno (SI): Calibración en matriz estándar interno

(SI):

Ecuación recta: Intervalos de confianza:ICm max.: min.:ICLo max.: min.:

Valor obtenido Criterio de Aceptabilidad

Rango lineal:

Coeficiente de correlación ( ):

Comentarios:

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CENTRO NACIONAL DE SERVICIOS DE DIAGNOSTICOEN SALUD ANIMAL


Sensibilidad

Descripci n: (Breve descripción de la experiencia analítica)

Valor obtenido Criterio de Aceptabilidad

Comentarios:

Limites


Valor obtenido (unidades) Criterio de Aceptabilidad

Limite critico, LC:

Limite detección, LOD:

Limite de cuantificación, LOQ:

Comentarios:

3 de 6



CENTRO NACIONAL DE SERVICIOS DE DIAGNOSTICOEN SALUD ANIMAL


SELECTIVIDAD (ESPECIFICIDAD)


Valor obtenido (unidades) Criterio de aceptabilidad

Correlación(es) a Interferencias:

Comentarios

EXACTITUD

Precisión


Precisión en condiciones de repetibilidadNivel/ concentración(unidades)

SDr %CVr Criterio deaceptabilidad

Comentarios:

4 de 6




EN SALUD ANIMAL


Precisión en condiciones de reproducibilidadNivel/ concentración(unidades)

SDRi %CVRi Criterio deaceptabilidad

Comentarios:

Valor obtenido (unidades) Criterio de aceptabilidadPecisión del método %RSDHorrat

Comentarios:

Veracidad


Valor obtenido (unidades) Criterio de aceptabilidad

Lectura obtenida, X

Sesgo, s:

t-Student,t:

Comentarios:

ReproducibilidadNivel/ concentración(unidades)

R %R T obs Criterio deaceptabilidad

Comentarios:

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EN SALUD ANIMAL


Robustez


(X-x) Valor obtenido (unidades) Criterio de aceptabilidad

APLICABILIDAD(Declaración del campo de aplicación del método: Analito, rango de trabajo, unidades, matrices y advertencias acerca d la

interferencia conocida en las cuales se ha demostrado la validación.)

ANEXOS(Anexar al presente informe los documentos necesarios para respaldar la información los registros o reportes entregados

por el equipo y copia de la plantilla de cálculos generados en el proceso analítico):

Revisado por Validación Firma Fecha

Nombre :

Cargo:

Aceptada

Rechazada

OBSERVACIONES

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vii.platica validacion doc angel final-1con ejercicios.pdf

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