labotario clinico

LABORATORIO CLINICO VETERINARIO –SEPTIMO SEMESTRE-UNIVERSIDAD DE LA AMAZONIA

BIOSEGURIDAD ESTERILIZAR =Procedimiento Físico–Químico que mata toda forma de vida , en estado vegetativo y/o esporulado (forma de activa y forma de resistencia respectivamente). DESINFECTAR = Es eliminar todos los Microorganismos pero no sus formas de resistencia. DESINFECTANTE = Sustancia química que produce la desinfección de material y que, por sus características, resulta tóxica o irritante para los tejidos vivos; por lo que su uso está limitado a objetos y/o superficies inanimadas. ANTISÉPTICO = Es una solución que puede provocar inhibición del crecimiento microbiano y/o la muerte de los microorganismos; y que , por sus características químicas puede ser aplicada sobre tejidos vivos (piel, mucosas, heridas, etc.)

MATERIAL BIOLÓGICO = Material orgánico o inorgánico que pueda contener o ser reservorio de agentes patógenos. EXPOSICIÓN = Contacto de :

- Piel y mucosas no intactas - Piel y mucosas intactas pero por tiempo prolongado con material

biológico - Lesión percutánea - Área extensa

ACCIDENTE BIOLÓGICO = Toda exposición accidental de un individuo a un material biológico. Los procedimientos básicos ante un accidente biológico son :

1.- Manejo adecuado del personal expuesto 2.- Reporte del accidente (en ficha epidemiológica) 3.- Evaluación clínica del personal expuesto 4.- Tratamiento del personal expuesto

CONCEPTO DE BIOSEGURIDAD = Es una disciplina encargada de prevenir accidentes biológicos, para ello se vale de un conjunto de medidas y controles destinados a disminuir el riesgo de exposición a agentes infecciosos o patógenos en clínicas, hospitales, industrias, etc. Objetivos Primarios: 1.- Proteger la vida del individuo, la comunidad y el medio ambiente. 2.- Evitar el contagio y/o infección del operador o terceros en un laboratorio que maneje material biológico Pretende :

a.- Alertar sobre los riesgos potenciales b.- Brindar conocimientos necesarios sobre las que permitan adoptar las normas de conducta

apropiadas para medidas preventivas y de acción inmediata manejar material biológico

frente a un accidente biológico

TIPOS DE ACCIDENTE BIOLÓGICO PRECAUCIONES UNIVERSALES Por Herida Cortante o Punzante 1. Considerar toda muestra como peligrosa y tratarla como tal Por contacto con piel lesionada 2. Tener la vacunación específica Por Inoculación Parenteral 3. Cubrir correctamente cualquier lesión cutánea Por Inhalación 4. Lavarse meticulosamente las manos después de manipular

muestras y antes de salir del laboratorio (al concluir la tarea) Por Ingesta 5. Uso de protectores de barrera (guantes, máscaras, bata,

etc.) Por Rotura de Recipiente contenedor de material infeccioso

6. Esterilizar correctamente los instrumentos y desinfectar las superficies.

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BIOSEGURIDAD EN EL LABORATORIO DISCIPLINA DEL PERSONAL DE LABORATORIO Tener conocimiento del elemento de riesgo No ingresar efectos personales al laboratorio Saber como manejar elementos de riesgo y usar el equipamiento necesario para hacerlo

Controlar el equipo y quitar elementos innecesarios del área de tarea

Adoptar técnicas apropiadas para la contención del elemento de riesgo

Limpiar y ordenar las superficies de trabajo

Solicitar los elementos necesarios para implementar dichas técnicas y todas las medidas de protección

No llevarse a la boca dedos u objetos (etiquetas para rotular, etc.)

Convertirse en docente para el personal recién incorporado al equipo de trabajo del laboratorio

No guardar alimentos ni bebidas en la zona de trabajo

Observar y hacer observar las medidas de precaución universales.

No fumar, No comer, No beber ni maquillarse en el área de trabajo

--- No secar las manos sobre la indumentaria particular (usar las toallas descartables)

--- Observar las normas generales de higiene --- Evitar las distracciones y permanecer en el lugar de

trabajo (en lo posible hasta concluir las tareas programadas)

NIVELES DE BIOSEGURIDAD : Si se trabaja con microorganismos potencialmente peligrosos o letales, las precauciones deberán extremarse. Según la peligrosidad del microorganismo, los niveles de bioseguridad se clasifican en :

NIVEL de BIOSEGURIDAD

TIPO de AGENTE a MANIPULAR

MEDIDAS a ADOPTAR

NIVEL 1 (de Bajo Riesgo)

Apatógenos para el hombre

Medidas Generales o de precaución universales

NIVEL 2 (de Riesgo Moderado) Acceso sólo a personal de laboratorio, Prohibir el ingreso a la población de alto riesgo (Ancianos, Niños, Embarazadas e inmunodeprimidos)

Patógenos de riesgo moderado - VHB (Virus de la Hepatitis B) - Salmonella

Procedimientos de Riesgo Moderado : - Exhibir visiblemente en los accesos , las debidas señales de Riesgo Biológico y los requerimientos para ingresar. - Trabajar en Cabinas de Flujo Laminar de Seguridad Biológica - Personal con vacunación específica - Usar guantes y delantal (quitárselos antes de abandonar la zona de trabajo) - Residuos y animales de experimentación deben ser decontaminados antes de su eliminación - Evitar el uso de jeringas, agujas y las prácticas que generen aerosoles - Realizar control de roedores e insectos y no permitir el acceso a animales que no sean los de experimentación.

NIVEL 3

Patógenos de riesgo moderado y

Procedimientos de Riesgo Moderado y de Alto Riesgo para la Vida : - Exhibir en los acceso las señales de peligro recomendadas y registrar el ingreso de visitas autorizadas




LABORATORIO CLINICO VETERINARIO –SEPTIMO SEMESTRE-UNIVERSIDAD DE LA AMAZONIA (de Alto Riesgo) Acceso restringido sólo a personal autorizado del laboratorio. Registro obligatorio de accidentes Registrar visitas y el acceso del personal de servicio.

que por el tipo de procedimiento empleado adquieren alto riesgo : - Mycobacterium Tuberculosis, Brucella, etc. - HIV y Virus oncogénicos Patógenos capaces de causar la muerte : - Bacillus Antrhacis

- Inicial y periódicamente tomar muestras de suero del personal involucrado (para detectar posibles contaminaciones) - Trabajar en cabinas de seguridad y emplear filtros Hepa interpuestos en la línea de vacío - Usar indumentaria protectora y sistemas de protección contra aerosoles - Sellar tapas y rotores en centrífugas - Utilizar cajas de contención para animales de infectados - Limpiar y desinfectar meticulosamente las superficies de trabajo al finalizar la tarea

NIVEL 4 (de Alto Riesgo para la Vida) Acceso Altamente Restringido , sólo personal especializado Registro Obligatorio Accidentes

Agentes Patógenos Exóticos y Altamente Peligrosos : - Virus Lassa, - Virus Machupo , - Virus Junín, - Virus del Ebola

Procedimientos de alto Riesgo para la Vida : - Exhibir en los accesos las señales de peligro correspondientes y llevar registro de visitas autorizadas - Trabajar en áreas especiales donde existan barreras de aire con el exterior y cabinas de alta seguridad - El personal debe ducharse y cambiarse íntegramente al ingresar y al salir - El pasaje de material limpio y/o contaminado se efectuará por canales especiales donde se puede efectuar la decontaminación - Realizar decontaminación Periódica

DIAGNOSTICO DE LAS ENFERMEDADES INFECCIOSAS (ANEXO 2)

El Diagnóstico definitivo de las Enf. Infecciosas se basa en :

Diagnóstico Clínico =Consiste en la evaluación de signos y síntomas, lo que nos llevará a

establecer un Diagnóstico Presuntivo. Diagnóstico Complementario = Comprende métodos y/o estudios como: -Imagenológicos -Bioquímicos Contribuyen a establecer o a completar el diagnóstico

definitivo -Histopatológicos, etc. Diagnóstico Microbiológico = Comprende un conjunto de procedimientos y técnicas por los

cuales podemos llegar a conocer al agente etiológico de la enfermedad y su susceptibilidad.

Para llegar a ello es imprescindible que se realice precozmente (de manera que sea beneficioso





para el paciente y la comunidad). Debe ser lo más exacto posible (para que nos permita instaurar una terapéutica adecuada)

En una Enfermedad Infecciosa se requiere : Aislamiento e identificación del Agente Etiológico de forma Rápida y Específica Esto permite instaurar una

Terapia Adecuada Eliminar el Agente Patógeno

Con el objetivo de Disminuir la Morbimortalidad

Diagnóstico Definitivo : Paciente Infectado

Sintomático Asintomático

Examen Clínico Examen Microbiológico Exámenes Complementarios Diagnóstico Presuntivo Pedido o solicitud de estudio Diagnóstico de Confirmación Recolección de Muestra Métodos Directos Métodos Indirectos Microscopía Cultivo, etc Pruebas Serológicas Pruebas de Hipersensibilidad Identificación de germen MUESTRAS PARA DIAGNOSTICO DE LABORATORIO EN ANIMALES DOMESTICOS. 1. INTRODUCCION Los veterinarios tienen la necesidad de consultar laboratorios para resolver determinados problemas de diagnóstico. Sin embargo, este




LABORATORIO CLINICO VETERINARIO –SEPTIMO SEMESTRE-UNIVERSIDAD DE LA AMAZONIA esfuerzo puede verse mermado por una selección, preparación, manejo y envío inadecuado de las muestras. Esta situación puede ser evitada mediante el seguimiento cuidadoso de algunos principios generales:

La muestra seleccionada deberá ser representativa del padecimiento. Suele ser preferible el envío de varios especimenes del mismo lugar. Las muestras deberán ser perfectamente identificadas. Deberá incluirse la Historia Clínica del individuo. Para cada caso se elegirá el tipo de recolección, manejo, conservación y

envío más adecuado, a la especie y tipo de padecimiento presentado. Cuidar en lo posible, el manejo estéril de la muestra y en una cantidad

adecuada. En caso de envío Postal, especificar en la envoltura el tipo de muestra,

forma de manejo y verificar que se lleve a cabo en el menor tiempo posible. En esta práctica se llevarán a cabo las técnicas de Punción venosa en distintas especies domésticas, así como la toma de Muestra de orina y Recolección de heces. 2. PRINCIPIO Y METODOLOGIA DE LA DETERMINACIÓN TECNICA DE PUNCION VENOSA En la práctica veterinaria los exámenes hematológicos se realizan más satisfactoriamente con la sangre venosa. La punción venosa, se realiza con aguja y jeringa de distintas medidas según el caso, ejecutándola sobre cualquiera de las venas superficiales del individuo: Por ejemplo en el caballo, la vaca y la oveja se emplea la vena yugular; Las venas safena y radial, pueden sugerirse para el perro y gato; El cerdo es sangrado normalmente en la vena cava anterior y en algunas razas en la auricular; Losanimales de laboratorio como el cobayo, ratón, rata y conejo son desangrados fácilmente en el corazón, vena caudal o auricular. Laboratorio Clínico Veterinario Facultad de Bioanálisis, Veracruz Manual de Procedimientos de Laboratorio . TECNICAS DE SANGRADO EN PERRO Y GATO. El sangrado en perro y gato se lleva a cabo principalmente en las venas safena y radial. Lo más importante para una correcta obtención de muestra será la adecuada sujeción del individuo. Posteriormente se deberá ocluir la vena por presión digital o torniquete. La piel sobre la vena es móvil,por lo cual se deberá inmovilizar con los dedos de la mano que sujeta elmiembro. La aguja deberá insertarse con el bisel hacia arriba (No 21 para perros y 22 al 25 para gatos). Se deberá evitar interrumpir la circulación por tiempos prolongados para evitar hemoconcentración. La cantidad a obtener será de 5 a 10 ml. evitando colapsar la vena. Al final se retirará la aguja y se vaciará cuidadosamente en un tubo previamente preparado. TOMA DE MUESTRA DE ORINA. El análisis de orina es uno de los procedimientos de laboratorio más comunes aplicados a la practica veterinaria, es de gran ayuda para el diagnóstico diferencial tanto de padecimientos generalizados como del aparato genitourinario. Laboratorio Clínico Veterinario Facultad de Bioanálisis, Veracruz Manual de Procedimientos de Laboratorio Para su recolección es necesario emplear recipientes limpios, preferentemente estériles. La muestra se recogerá durante la micción o por sondeo, siendo este último más adecuado por estar libre de detritus uretral o vaginal. Es difícil cateterizar a un perro más de una o dos veces al día puesto que la reacción tisular al traumatismo, causa un estrechamiento del Lumen uretral a través del os penis. RECOLECCION DE MUESTRA DE HECES. Es indispensable la aplicación de medidas higiénicas estrictas como medida de protección en la toma de muestras de heces, así como seguir las indicaciones especificas para cada tipo de animal, utilizando recipientes limpios o estériles para la recolección de la muestra. En las especies de talla grande es más práctico e higiénico obtener muestras directamente del recto del animal, con un guante de plástico. Una vez obtenida una muestra adecuada, el guante es reversado




LABORATORIO CLINICO VETERINARIO –SEPTIMO SEMESTRE-UNIVERSIDAD DE LA AMAZONIA hacia adentro, sirviendo de esta forma como recipiente de recolección, una vez colectadose sella, se identifica y se envía refrigerada al laboratorio. En los animales pequeños, las muestras fecales son obtenidas por medio del termómetro o una varilla de vidrio, aunque esta pequeña cantidad será apenas suficiente para un examen directo. En caso de no ser posible la recolección directa se procederá a tomar la muestra directamente del recto, se cuidara que la defecación ocurra sobre un piso previamente lavado. En este caso la muestra se recogerá con guante plástico, espátula de madera, tomando solo la capa superior que no entró en contacto con el suelo.

Hematología

La hematología estudia las enfermedades que afectan a la sangre, a los órganos hematopoyeticos o hemolíticos y los procedimientos de laboratorio para su diagnóstico.

La sangre puede ser considerada como un tejido corporal que representa la porción circulatoria del sistema hematopoyetico; la medula osea , los ganglios linfáticos y el sistema reticuloendotelial es la parte no circulante.

La sangre es un liquido que contiene en suspensión células y fragmentos citoplasmicos.

La parte liquida se llama plasma sanguíneo y es una solución de coloides y cristaloides.

Las células son de dos tipos: los glóbulos rojos o eritrocitos o hematíes, y los glóbulos blancos o leucocitos; los fragmentos de citoplasma son las plaquetas o trombocitos.

El plasma constituye el 60-70 % del volumen de la sangre y las células constituyen el 30- 40% restante.

El suero sanguíneo es el plasma desfibrinado que se forma al coagularse la sangre.

Algunas de las propiedades de la sangre es la gravedad especifica la cual oscila





entre 1.042 y 1.062 en las diferentes especies.

La gravedad especifica de los eritrocitos es mayor que la de los leucocitos y la de estos es mayor que la del plasma.

En la sangre no coagulada y en reposo los eritrocitos se van al fondo, el plasma hacia arriba y los leucocitos ocupan una posición intermedia entre el plasma y los eritrocitos.

El pH promedio de la sangre es de 7.4 en las diferentes especies.

Tanto las células de la sangre como sus componentes líquidos tienen un papel en el cumplimiento de estas funciones.

Los leucocitos defienden el cuerpo; la hemoglobina del interior de los eritrocitos transporta oxigeno y el dióxido de carbono. Los constituyentes extracelulares incluyen agua, electrolitos, proteínas, glucosa, enzimas y hormonas.

El mantenimiento de la uniformidad y estabilidad de este liquido extracelular se denomina hemeostasis. Es en este medio en el que las células funcionan en su óptimo.

La sangre sirve como medio de transporte de nutrientes desde el aparato digestivo a los tejidos; productos finales del metabolismo desde las células a los órganos de excreción; oxígeno desde los pulmones a los tejidos; dióxido de carbono desde los tejidos a los pulmones, y las secreciones de las glándulas endocrinas. La sangre ayuda también a regular la temperatura orgánica, mantiene una concentración constante de agua y electrolitos en las células, regula la concentración de hidrogeniones del cuerpo y defiende a este de microorganismos y otros elementos extraños.

El plasma forma el 60- 70 % del volumen de la sangre.

La composición química del plasma es muy compleja, siendo semejante en todos los mamíferos. Contiene agua que forma entre el 85-90 % de la totalidad del plasma.

El 10-15% restante son componentes sólidos, constituidos por:

Proteínas: albúmina, globulinas y fibrinógeno.





Carbohidratos: glucosa, lactato, piruvato.

Lípidos: grasas neutras, lecitina, colesterol.

Sustancias nitrogenadas no proteicas como aminoácidos, urea, creatina, creatinina.

Sustancias inorgánicas : sales como bicarbonato, cloruros, sulfatos y fosfatos de k, Na, Mg, Fe. También se encuentran trazas de Mn, Co, Cu, Zn, I .

Además el plasma contiene enzimas, hormonas, vitaminas, anticuerpos y pigmentos.

GLÓBULOS ROJOS

Los glóbulos rojos de los mamíferos son discos circulares planos no nucleados. Los glóbulos rojos del hombre y caninos son discos circulares y bicóncavos. Con los colorantes de Giemsa o Wright toman un color rojizo o ladrillo.

En los animales mamíferos ( aves, reptiles ) son elípticos y nucleados

Los miembros de la familia de los camellos ( dromedarios, llamas, alpacas ) tienen eritrocitos ovalados, no nucleados.

La estructura del eritrocito es la de una malla esponjosa o estroma, entre cuyas redecillas se encuentra depositada la hemoglobina y está rodeada por una condensación lipoprotéica que le sirve como membrana de envoltura.

El diámetro de los eritrocitos expresado en micras varía entre 5 a 7.5 u y el grosor de





1-2 u.

TABLA 1. Diámetro de los eritrocitos en diferentes especies de mamíferos.

ESPECIES Diámetro promedio en micras

Oveja 5.0

Cabra 5.0

Caballo 5.6

Bovino 5.6

Cerdo 6.2

Gato 6.5

Perro 7.3

Hombre 7.5

Los glóbulos rojos están compuestos de agua de 59-64 % y sólidos totales el resto, o sea 36-41 % . De los sólidos totales el 90 % está formado por la hemoglobina y el 10 % está formado por el estroma globular.

El estroma globular está compuesto principalmente de proteínas, lípidos como lecitina, colesterol y sales inorgánicas.

La función primaria de los eritrocitos es transportar la hemoglobina y ésta a su vez sirve para transportar el O2 y el dióxido de carbono, por eso se le denomina pigmento respiratorio. Además los eritrocitos por medio de su masa contribuyen el volúmen sanguíneo e influyen en la dinámica del flujo sanguíneo.

El periodo de vida de un eritrocito oscila en las diferentes especies entre 60 y 160 días.





TABLA 2. Período de vida de los eritrocitos en diferentes especies animales.

_________________________________________________________________

Especies Período de vida en días

_________________________________________________________________

Bovino adulto 160

Bovino 3 meses 55

Caballo 140-150

Ovejas 70-153

Cabra 125

Perro 110-122

Gato 68

Cerdo 63

Conejo 68

Pollo 20

_________________________________________________________________

Los eritrocitos son formados en la medula ósea cada día por millones y destruídos en igual número por las células del sistema retículo endotelial que se encuentra en el bazo, hígado, medula ósea y ganglios linfáticos.

La masa de células rojas circulantes y el tejido eritropoyético en la medula ósea constituyen la unidad funcional, el eritrón. Para que los eritrocitos sean producidos, se deben cumplir ciertos requerimientos: debe haber un adecuado suministro de proteínas para la producción de globina, hierro y otros elementos tales como cobre, cobalto y vitaminas. Debe haber un adecuado suministro del factor hematopoyético el cual es el responsable de una maduración ordenada normal, además debe haber una adecuada cantidad de protoporfirina y ciertas vitaminas. Si todos esos factores están presentes en cantidades normales, la maduración de los precursores de los eritrocitos ocurrirá en un proceso ordenado en el cual las células en el estado apropiado de maduración comenzaran a sintetizar las moléculas de hemoglobina normal.





En ausencia de esos factores, puede ocurrir una eritropoyesis anormal. Esto puede aparecer como producción de eritrocitos incompletamente hemoglobinados o como células anormales caracterizadas por ser deficientes en número y por tener anormalidades morfológicas. La eritropoyesis anormal puede no siempre resultar en una deficiente producción de eritrocitos o de hemoglobina, si no bajo algunas circunstancias, se pueden producir números excesivos de eritrocitos. Los estados fisiológicos o patológicos pueden afectar el eritrón resultando en un cambio absoluto o relativo por encima o por debajo del nivel normal: a) atrofia o anemia b) hipertrofia o policitemia c) hidremia o hemodilución d) deshidratación o hemoconcentración. El eritrón en estado de salud permanece en balance delicado, con la producción diaria de eritrocitos igual al de la destrucción de eritrocitos viejos.. La rata de reemplazo de eritrocitos en un individuo normal es increiblemente rápida, casi un millón de eritrocitos son reemplazados cada segundo por ejemplo en un perro sano de 15 kg. En respuesta a la anemia, los tejidos hematopoyéticos normales pueden sufrir un aumento hasta de 6 a 8 veces en la producción de eritrocitos. Para el tratamiento efectivo del paciente anémico es básico una comprensión del proceso de eritropoyesis y los factores endógenos y exógenos que intervienen en su regulación. La función principal del eritrocito es la de servir como transportador de la hemoglobina por medio de la cual son los principales transportadores de oxígeno a las células y tejidos del cuerpo. La incorporación de la hemoglobina en una célula especial para la circulación en la corriente sanguínea hace posible la compleja estructura y actividades especializadas de los vertebrados. La hemoglobina en solución, a la concentración encontrada en los eritrocitos de los mamíferos, no aumenta la viscocidad de la sangre. A tal concentración, sin embargo ejerce una presión osmótica cerca de tres veces mayor que la causada por las proteínas plasmáticas solas. Esta presión podría tener profundos efectos en el movimiento de fluídos a traves de las paredes de los capilares y particularmente sobre la filtración en los glomérulos renales. Esos efectos son evitados colocando la hemoglobina dentro de una célula que es capaz de pasar a través de la luz de los capilares más pequeños. Otra ventaja es obtenida al estar la hemoglobina en el interior del eritrocito, es que está en un ambiente ligeramente más ácido que el plasma, al cual la hemoglobina es más eficiente como pigmento respiratorio. Otra ventaja del empaquetamiento de la hemoglobina en unidades celulares son: la hemoglobina es removida del pool metabólico general , impidiendo su rápido recambio ( la vida media de la hemoglobina libre en el plasma es cerca de 3 horas, lo opuesto a semanas y meses dentro de los eritrocitos ) y la hemoglobina es mantenida en estrecha proximidad al sistema enzimático para mantener su estado químico requerido para el transporte del oxígeno.

SINTESIS DE LA HEMOGLOBINA La hemoglobina es una proteína conjugada que consta de heme y de globina. Cada molécula consta de 4 unidades de heme y cada unidad está asociada con una cadena polipéptida individual. Síntesis del heme El heme consta de un anillo de protoporfirina ( tipo III ) en el centro del cual hay un átomo de hierro en el estado ferroso. La estructura básica consta de 4 anillos pirrólicos unidos por 4 puentes metenos para formar el núcleo de porfina común a todas las porfirinas. La succinil-coenzima A ( Co A ) y la glicina formada en el ciclo del ácido tricarboxílico, reaccionan para formar ácido delta- aminolevulínico ( ALA ). Este ácido es sintetizado únicamente en la mitocondria, y la enzima ALA-sintetasa es un factor limitante en toda la secuencia de síntesis del





ACIDO SUCCINICO - COENZIMA A (del ciclo de Krebs)

heme. El fosfato de piridoxal ( vitamina B6 ) es necesaria para la actividad de glicina requerida para su condensación inicial con succinil-Co A. La deficiencia de vitamina B6 produce una anemia hipocrómica. El ácido pantoténico es un componente de la coenzima A, su deficiencia produce una anemia hipocrómica. Dos moléculas de delta- ALA reaccionan para formar porfobilinógeno ( PBG ). Cuatro moléculas de PBG reaccionan, formando el anillo tetrapirrólico componente del uroporfirinógeno III. Para la formación de éste se requieren tanto de la uroporfirinógeno I sintetasa y la uroporfirinógeno III cosintetasa. El uroporfirinógeno III es convertido a coproporfirinógeno III y luego a protoporfirinógeno, el cual al ser oxidado produce protoporfirina III. Esta posteriormente se combina con 4 moles de hierro en estado ferroso para formar heme, ( Diagrama 1 ), 4 moléculas de éste se conjugan con 4 moléculas de globina para formar una molécula de hemoglobina. El heme es sintetizado en la mitocondria y los eritrocitos maduros no lo pueden sintetizar debido a la falta de las mitocondrias y del núcleo. Tanto la ALA-sintetasa involucrada en el primer paso de la síntesis del heme y la heme sintetasa involucrada en el último paso de la síntesis son enzimas intramitocondriales y por lo tanto están limitadas a los precursores eritroides incluyendo los reticulocitos. La protoporfirina III se acumula en alguna medida en los eritrocitos maduros y por lo tanto está aumentada cuando hay reticulocitosis como en hemorragia o hemólisis agudas. Las condiciones asociadas con reducción en la formación del heme (ejemplo anemia por deficiencia de hierro, anemia de infección crónica e intoxicación por plomo) resultan en un aumento de la protoporfirina libre en el eritrocito. El plomo produce profundas alteraciones en la síntesis de la hemoglobina, reduce la síntesis de heme inhibiendo la ALA-sintetasa, ALA-dehidrasa y heme sintetasa y tambien retarda la biosíntesis de globina inhibiendo la formación de cadenas de polipéptidos. Puesto que la anemia por intoxicación por plomo se debe en parte a la inadecuada formación de hemoglobina , la anemia es progresiva y se caracteriza por la presencia de muchos eritrocitos nucleados en la sangre, basofilia punteada prominente en eritrocitos maduros y también en los policromáticos. La reticulocitosis está ausente o es escasa. La deficiencia de hierro aumenta el riesgo de la intoxicación por plomo. Además de la protoporfirina de la molécula de hemoglobina, las otras dos porfirinas naturales, la coproporfirina y la uroporfirina se encuentran en cantidades trazas en las heces y la orina; la primera tambien se encuentra en eritrocitos jóvenes y su excresión se aumenta cuando se intensifica la eritropoyesis. La porfirinuria es un término que se aplica para indicar la excresión aumentada de porfirinas en la orina, ésta es parda o color vino tinto debido a la gran cantidad de porfirinas presenters. Un ejemplo, además de su aumento después de hemorragias o enfermedades hemolíticas agudas, es la presentación aumentada de coproporfirina III en la orina en intoxicación por plomo. La porfiria es una enfermedad del metabolismo de las porfirinas y generalmente es congénita; tanto la coproporfirina y la uroporfirina son producidas en cantidades excesivas y puesto que la última tiene predilección por los dientes y huesos esas estructuras tienen un color pardo rojizo.

GLICINA + SUCCINIL COA





ALA sintetasa (intramitocondrial)

ACIDO DELTA AMINOLEVULINICO (ALA)

ALA dehidrasa (contiene cobre)

PORFOBILINOGENO (PBG)

PBG de aminasa

POLI - PIRRIL - METANO

UPG I sintetasa

UPG III cosintetasa

UPG I sintetasa

UROPORFIRINOGENO III (UPG) Uroporfirina III Uroporfirina UROPORFIRINOGENO I

UPG decarboxilasa

Coproporfirina III Coproporfirin COPROPORFIRINOGENO

CPG oxidasa





Diagrama 1. Representación esquemática de los pasos de la producción del heme. La globina requerida para la formación de hemoglobina es sintetizada en el citoplasma. La información genética contenida en la secuencia del DNA del núcleo es transportada al citoplasma para que los poliribosomas ensamblen las proteínas que van a formar las cadenas específicas de globina. La rata de síntesis de heme y globina puede ser alterada por varios factores como inanición, radiaciones ionizantes e intoxicación por plomo. Destrucción de los eritrocitos El promedio de vida de los eritrocitos varía con las especies, en el perro es de 120 días y en el gato de 70 días. El envejecimiento de los eritrocitos está acompañado por los cambios en el contenido enzimático y la estructura de la membrana celular haciendo que la célula sea menos deformable la cual es objeto de remoción por el bazo. En estado de salud los eritrocitos seniles abandonan la circulación por dos rutas: la fagocitosis por las células del sistema fagocítico mononuclear ( sistema retículoendotelial ) es la ruta principal ( hemólisis extravascular ) y por medio de la lisis intravascular y liberación de hemoglobina libre , la cual es una ruta menor. En la anemia hemolítica se producen rutas similares de destrucción.

COPROPORFIRINOGENO III (CPG)

PROTOPORFIRINOGENO III Se excretan en orina y

PPG oxidasa

PROTOPORFIRINA III

Fe ++

Heme - sintetasa (intramitocondrial) Pb

HEME





MATERIALES ESENCIALES PARA LA PRODUCCION DE ERITROCITOS La composición química de los eritrocitos incluyen: lípidos, proteínas, carbohidratos, minerales, vitaminas etc.. Cuando hay insuficiencia de esos factores que son los más críticos para la producción de eritrocitos se produce eritropoyesis anormal. Un perro mantenido en un estado anémico por repetidas remociones de sangre y alimentado con una dieta baja en proteínas no puede producir la cantidad usual de globina para la síntesis de hemoglobina aún en presencia de un exceso de hierro; en estas condiciones utiliza proteínas de sus propios tejidos y proteínas plasmáticas para producir hemoglobina. El hierro, cobre y cobalto son los principales minerales requeridos para la producción de eritrocitos. El hierro es una parte integral de la molécula de hemoglobina y por lo tanto es absolutamente esencial para la síntesis de hemoglobina. El cobre es un cofactor para la enzima ALA dehidrasa requerida para la síntesis del heme. El cobalto es requerido en la molécula de la vitamina B 12 (cianocobalamina) la cual es esencial para la eritropoyesis normal interviniendo en la síntesis del DNA. En casos de deficiencia de vitamina B 12 los períodos intermitóticos son prolongados y la maduración se detiene en el estado de pro-rubricito y rubricito, haciendo que esas células sean más grandes y más numerosas en la medula ósea; aunque la mitosis es lenta por falta de síntesis de nucleoproteínas la síntesis de hemoglobina continúa llegando a una eventual extrusión del núcleo y producción de algunos eritrocitos más grandes de lo normal; esos rubricitos grandes se les denominan megaloblastos, la anemia es macrocítica normocrómica. Las vitaminas esenciales para la eritropoyesis son las del complejo B : riboflavina ( B 2 ), piridoxina ( B 6 ), niacina, folato, tiamina y vitamina B 12. ERITROCINETICA

Características de la célula primordial hematopoyética.: la célula primordial es multipotencial; su morfología es desconocida, pero parace ser similar a un linfocito pequeño. Esta célula primordial se autoreplica o se diferencia en una célula primordial unipotencial, ésta incluye células primordiales unipotenciales que van a producir la serie de células eritrocíticas, o la serie granulocítica-monocítica ( neutrófilos, eosinófilos, basófilos, monocitos ), o la serie megacariocítica ( plaquetas ).

La célula primordial unipotencial eritrocítica se autoreplica y por acción de la eritropoyetina se produce diferenciación a un rubriblasto.

Producción de eritrocitos





Se ha postulado que las células primordiales primitivas pluripotenciales indiferenciadas en la medula ósea dan lugar a células unipotenciales cada una comprometida en la producción de las series eritrocítica, granulocítica-monocítica o megacariocítica.

La eritropoyesis en mamíferos comienza con la diferenciación de células primordiales pluripotenciales en dos células eritroides progenitoras: las desencadenadoras de unidades-eritroides (BFU-E ) y su progenie las unidades-eritroides formadoras de colonias ( CFU-E ), éstas últimas, bajo la influencia de la eritropoyetina, posteriormente dan lugar a los precursores eritroides morfológicamente reconocibles, los rubriblastos, los cuales sufren por lo menos 4 mitosis hasta producir eritrocitos maduros.

Una variedad de factores endógenos o exógenos influyen en la hematopoyesis; esos factores incluyen microambiente hematopoyético inductivo ( HIM ), ciertos factores hormonales tales como actividad promotora desencadenante ( BPA ) y algunas otras sustancias que influyen en la diferenciación inicial. La eritropoyetina y el Ca++ juegan un papel importante en la diferenciación a rubriblastos y los estados posteriores.





Diagrama 2. Secuencia de diferenciación de célula primordialy eritropoyesis.

La eritropoyetina es el regulador fisiológico principal de la eritropoyesis en humanos y animales en condiciones de salud y anemia. Normalmente se encuentra en pequeñas cantidades en el plasma y en la orina. El estímulo fundamental para la eritropoyesis es la hipoxia tisular, ya sea como consecuencia en el tamaño del eritrón ( anemia ) o como resultado de la alteración de la saturación de oxígeno de la hemoglobina.





En condiciones de hipoxia se aumenta la elaboración de la eritropoyetina la cual estimula la eritropoyesis. La hipoxia atmosférica, anémica o cardiopulmonar aumentan la eritropoyesis por aumento en la producción de eritropoyetina, y la hiperoxia y policitemia causada por transfusión de eritrocitos, disminuyen la eritropoyesis por disminución en la producción de eritropoyetina.

Los riñones son el sitio principal de producción de eritropoyetina en el adulto de muchas especies.

Hay un número de hormonas que juegan un papel fisiológico en controlar el tamaño del eritrón : la pituitaria , adrenales, tiroides y gónadas participan en la regulación de la eritropoyesis en gran medida a través de los efectos sobre el metabolismo y requerimientos de oxígeno, aumentando por lo tanto la producción de eritropoyetina. Los andrógenos, hormona tiroidea estimulante ( TSH ), hormona adrenocorticotrópica ( ACTH ), hormona del crecimiento, prolactina, cortisona ,tiroxina, epinefrina, norepinefrina y angiotensina producen aumento en la producción de eritropoyetina, mientras que el estrógeno ejerce una acción inhibitoria sobre la eritropoyesis

GLÓBULOS BLANCOS O LEUCOCITOS

Son mucho menos numerosos que los eritrocitos, encontrandose en una proporción de un leucocito por cada 500 a 1000 eritrocitos, se diferencias de los eritrocitos en que su interior no hay hemoglobina y porque poseen un núcleo bien formado. Se hallan en la sangre, linfa, fluido cerebro espinal y otros líquidos orgánicos.

1. Clasificación de los glóbulos blancos.

Los leucocitos observados en frotis de sangre normal pueden clasificarse en los siguientes grupos de acuerdo con su propiedad granular de citoplasma:





Neútrofilos

Granulocitos Eosinófilos o

Acidófilos Basófilos

Leucocitos

Agranulocitos Linfocitos

Monocitos

ORIGEN Y DESARROLLO DE LAS CÉLULAS SANGUÍNEAS

1. Teorías sobre la formación de las células sanguíneas.

Hay dos teorías sobre el orígen de las células sanguíneas :monofiléticas y polifiléticas.

La teoría monofilética afirma que todas las células sanguíneas se originan de una sola célula llamada hemocitoblasto ( sinónimo de linfocito maduro ). Se cree que el linfocito maduro puede volver a ser una célula inmadura pluripotencial y desarrollar otra célula nueva diferente, dependiendo de la necesidad corporal. Esta teoría es la más aceptada actualmente.





La teoría polifilética dice que cada tipo de célula sanguínea tiene su propia célula primordial.

2. Desarrollo hamatopoyético .

En el período embrionario aparecen las islas sanguíneas formadas de células mesenquimales. Estas células son pluripotenciales por su capacidad de originar varias clases de células. En estas islas sanguíneas se forma angioblastos que van a originar el endotelio de los primeros vasos sanguíneos y también los primeros glóbulos rojos.

En el período fetal comienza a funcionar el hígado produciendo granulocitos, eritrocitos y plaquetas ; más tarde en el mismo período el bazo produce los linfocitos y monocitos.

Casi simultáneamente el timo empieza a formar linfocitos ( timocitos ) y monocitos.

En la última parte del período fetal, la medula ósea asume la función hematopoyética a la vez que el higado suspende esta función.

En el período neo-natal, médula ósea tiene la función de producir todos los

eritrocitos , granulocitos y plaquetas. El bazo, los ganglios linfáticos y el tejido linfoide aislados continuan en la producción de células mononucleares.

Serie eritrocítica.

Hay disminución gradual en el tamaño de estas células a medida que maduran

Rubriblastos: Tamaño igual a otros blastos; citoplasma de color azul más intenso y oscuro que otros blastos; el núcleo es más rojo y más rugoso.





Pro - rubricito. Hay liger disminución en el tamaño; el citoplasma es de color azul grisáceo; núcleo rojo morado con textura rugosa.

Rubricito: De menor tamaño que el anterior; hay ya apariencia de hemoglobina, el citoplasma es anaranjado azuloso. Núcleo más pequeño, color rojo morado y textura rugosa.

Meta- rubricito: El citoplasma se ha convertido en estroma que contiene hemoglobina es de color anaranjado azuloso.

Núcleo denso, compacto, casi negro por picnosis.

Reticulosito: No tiene núcleo; se diferencia del eritrocito maduro por ser mas grande.

Eritrocito: Disco plano o bicóncavo, de 5-7 u; color anaranjado.

Serie trombocítica.

COLECCIÓN DE LA MUESTRA SANGUÍNEA

El procedimiento usual en grandes animales es colectar la sangre directamente en un tubo de ensayo o frasco que contenga una cantidad adecuada de anticoagulante

para la cantidad de sangre deseada.

Para la mayoría de exámenes hematológicos son suficientes 5 Ml de sangre.

Comúnmente la sangre de los diferentes animales se extrae así:





Animal

Sitio

Tamaño de la aguja

Calibre

Long. Pulgadas

Caballo

Vena Yugular

12_14

2.5 - 3.0

Vaca

vena yugular

12_14

2.5 - 3.0

Oveja , cabra

vena yugular

14

2.5 - 3.0

Cerdo

v. cava anterior

20

1.5 - 4.0

Perro

vena yugular

20

1.5

Gato

v. cefálica yugular

22_25

1.0

Conejo

Punción cardiaca o vena marginal de la oreja

18

3.0

La calidad de un resultado hematológico depende en gran parte de la técnica que se emplee para obtener la muestra, empacarla y su conservación.

Para evitar la hemólisis se deben tener en cuenta algunas recomendaciones:

1. El tubo o frasco donde se recolecte la muestra debe estar completamente seco, lo mismo que la aguja o jeringa para evitar la producción de hemólisis. El único líquido que debe haber es el anticoagulante.





2. La punción de la vena debe ser lo más exacta posible, para evitar traumatismos de los tejidos perivasculares, ya que éstos pueden secretar fluidos que contienen factores coagulantes.

3. Durante la toma de sangre no se debe aplicar demasiada fuerza de succión con la jeringa, para prevenir la hemólisis de los eritrocitos. Después de obtener la muestra de sangre debe quitarse la aguja de la jeringa antes de depositar la sangre en el tubo, porque al forzar la sangre a través de la aguja puede causar ruptura de los eritrocitos.

4. Invertir el tubo o la jeringa por lo menos 3-4 veces para mezclar bien el anticoagulante con la sangre.

Otras causas de hemólisis son: calentamiento o enfriamiento excesivos. Presencia de contaminantes químicos.

La contaminación bacteriana causa hemólisis, algunas de sus causas son:

Contaminación con materia fecal, barro, basuras, suciedad o pelos; temperaturas demasiado altas durante su transporte; transporte de larga duración.

Cuando ocurre hemólisis hay un cambio en el número de los eritrocitos, en el hematocrito y en el índice eritrocítico.

ANTICOAGULANTES

Hay una gran variedad de anticoagulantes que se pueden usar para preservar la muestra de sangre para exámenes hematológicos.

EDTA. Es la sal disódica o dipotásica del ácido etileno





Diaminotetracético: Actúa fijando los iones de calcio en su estructura molecular, impidiendo así la presencia de clacio libre que puede entrar en la coagulación.

La sal dipotásica es preferida porque es más soluble en agua.

Una muestra de sangre tomada con EDTA sirve para recuentos celulares, hematocrito, preparación de frotis aún 12-24 horas después de haberse colectado.

La gran ventaja de este coagulante es que mantiene la morfología normal de los glóbulos sanguíneos y además impide que las plaquetas se agrupen y adhieran a la superficie del tubo.

El EDTA se puede usar ya sea en forma liquida o seca. Sí se usa en forma liquida 1 gota de una solución al 10% es suficiente para prevenir la coagulación de 5 ml de sangre; en la práctica es mejor usar 2 gotas especialmente en bovinos.

Si se usa en polvo se empleará en concentración de 1 mg / 1 ml de sangre.

No se debe exceder en el nivel EDTA recomendado, se ha demostrado que el EDTA en exceso afecta adversamente el hematocrito, disminuyéndolo debido a que las células se contraen.

Oxalatos: Los oxalatos también impiden la coagulación de la sangre combinándose con el calcio.

El más conocido se llama oxalato doble u oxalato balanceado o solución de Paul y Heller, que consiste en una mezcla de oxalato de amonio 1,2 g, oxalato de potasio 0,8 g y agua destilada 100 ml. Para el uso de esta solución se coloca un ml en un tubo de ensayo y se calienta en la estufa a 60 grados centígrados ( no se debe pasar de 80 grados ya que el oxalato es convertido en carbonato) hasta cuando seque; el polvo que resulte es suficiente para prevenir la coagulación de 10ml de sangre.

Las muestras recolectadas de esta manera, se deben trabajar dentro de unas horas y aún así se presentan alteraciones celulares especialmente en los neutrófilos. La alteración más común es la cariorrexis o fragmentación del núcleo.





Si el recuento referencial se hace más tarde, usualmente hay tantos artificios en los leucocitos que el recuento es muy difícil.

Heparina: Se aisla del hígado del perro. Se encuentra en varios tejidos animales y en el torrente circulatorio en pequeñas cantidades.

Su modo de acción es por interferencia en la conversión de protrombina o trombina.

La Heparina tiene las siguientes ventajas:

a) Reduce al mínimo la hemólisis cuando se hace un exámen especial por ejemplo la fragilidad de los glóbulos rojos.

b) Por ser una sustancia biológica no altera el tamaño, ni la forma de las células.

Desventajas:

a) afecta la tinción de los leucocitos ( no toman bien el colorante ) cuando se usan en cantidades superiores a las normales.

b) Su efecto anticoagulante máximo es de 10-12 horas. Retarda la coagulación, no la evita.

c) Es el anticoagulante más costoso.

Se usa heparina en solución al 1 % , 2 gotas para 10ml de sangre.

La heparina no se emplea si se van hacer frotis, porque las células se tiñen azulosas con la solución de Wright.





Fluoruro de Sodio: Forma un complejo con el calcio, el fluoruro de calcio; inhibe el metabolismo enzimático de la glucosa por las células de la sangre o de las bacterias ;este anticoagulante es el de elección en la toma de las muestras para determinar glucosa en la sangre.

Se usa a una concentración de 10 mg / ml de sangre.

Citratos: Los citratos de sodio y potasio se usan como anticoagulante pero principalmente en las transfusiones sanguíneas, en pruebas de coagulación y sedimentación de eritrocitos. En la determinación hematólogica son de poco uso, porque se cambia la morfología de los eritrocitos. Se usa en solución acuosa al 3.8 %, 1 ml de la solución anticoagulante por 9 ml de sangre.

Solución para transfusiones: Citrato de sodio 1.32 gr, ácido cítrico 0.48 g, dextrosa 1.4 g, agua destilada 100 ml, se usa 1 parte de la solución por 4 partes de la sangre

TINCIONES HEMATOLÓGICAS

La realización de extensiones y tinciones es práctica habitual en el laboratorio. Pese a no realizarse a todas las muestras, al no ser considerado procedimiento de rutina, es necesario en aquellos casos en los que se detecte mediante análisis previos alguna alteración.

La correcta realización, así como una buena interpretación de lo observado, permite en muchos casos el diagnóstico de hematopatías.

INTRODUCCIÓN.

Las tinciones hematológicas son un conjunto de procesos que conducen a la coloración de las estructuras que componen las células sanguíneas. Esto tiene por objeto el aumentar el contraste entre esas estructuras y el medio que las rodea, y permite por tanto que las células sean visual izadas microscópicamente con mayor facilidad.

TIPOS DE TINCIONES.

Las tinciones hematológicas pueden clasificarse según distintos criterios:

Atendiendo al nivel de vitalidad de las células que se pretende colorear, se dividen en tinciones vitales y no vitales.

Atendiendo al momento en el que empezaron a ser utilizadas para el diagnóstico hematológico, se dividen en tinciones tradicionales y especiales.

TINCIONES VITALES Y NO VITALES.

Las tinciones vitales y supravitales son aquellas que se practican sobre células que están vivas.




LABORATORIO CLINICO VETERINARIO –SEPTIMO SEMESTRE-UNIVERSIDAD DE LA AMAZONIA Las tinciones vitales son aquellas que se efectúan sobre células que están vivas, mediante la introducción de un colorante en la circulación de un organismo vivo. Son colorantes vitales, por ejemplo, el verde Jano y el azul de metileno.

Las tinciones supravitales son aquellas que se realizan sobre células o tejidos vivos, pero que están aislados del organismo del que proceden. Las tinciones no vitales se realizan sobre células muertas. La coloración de células muertas requiere un proceso previo de fijación, que tiene por objeto el mantener inalterada su estructura y el adherirlas firmemente a la superficie del portaobjetos. La fijación puede realizarse mediante calor, aunque habitualmente se realiza con etanol o metanol.

TINCIONES TRADICIONALES Y ESPECIALES.

Tradicionalmente, las tinciones se han logrado mediante el uso de colorantes que con frecuencia derivan de la anilina (tinciones tradicionales o clásicas). Estos colorantes se reúnen en 4 grupos:

Colorantes ácidos: tienen una especial afinidad por las estructuras alcalinas de las células, como por ejemplo la hemoglobina. El principal de ellos es la eosina.

Colorantes básicos: tienen una especial afinidad por las estructuras ácidas de las células, como por ejemplo los ácidos nucleicos. Uno de ellos es el azul de metileno.

Colorantes neutros: son sales de un ácido y de una base coloreados. Tiñen el núcleo de un color y el citoplasma de otro. Uno de ellos es el eosinato de azul de metileno.

Colorantes indiferentes: son los que no tienen afinidad por estructuras ácidas o básicas. Son insolubles en el agua y tiñen a aquellas sustancias que tienen un poder de disolución superior al del líquido empleado para preparar la solución colorante. Uno de ellos es el Sudán III empleado para teñir las grasas.

También hay combinaciones de colorantes que dan lugar a tinciones polícromas. Una coloración es panóptica cuando se utilizan sucesivamente sustancias colorantes neutras y es pancrómica cuando se aplican todas las sustancias colorantes neutras juntas.

El primero que tuvo la idea de realizar una de estas combinaciones fue Romanowsky, y los colorantes hematológicos utilizados en la actualidad suelen derivar del que él preparó.

Los colorantes de tipo Romanowsky constan de un colorante ácido (eosina) y de colorantes básicos (tiacinas). Las tiacinas son el azul de metileno y sus derivados obtenidos por desmetilación oxidatiya (colorantes tipo azur).

Las tinciones realizadas con colorantes de tipo Romanowsky, que más frecuentemente se emplean en el diagnóstico hematológico, son la de Wright y la de Giemsa (utilizada sola o en combinación con la de May-Grünwald).

También hay tinciones panópticas rápidas que producen una coloración fácil y rápida de las estructuras celulares. Las tinciones especiales sólo se usan en circunstancias específicas. Son de dos clases:

Tinciones fluorescentes: emplean colorantes (fluorocromos) que se fijan a las células y que, cuando son estimulados por una luz ultravioleta, emiten una radiación visible, de un color característico. Los fluorocromos más utilizados en esta clase de tinciones son el naranja de acridina y el rojo neutro.





Tinciones citoquimicas: demuestran la presencia, más o menos abundante, o la ausencia de deteminadas sustancias, localizadas en el interior de los gránulos citoplasmáticos de los leucocitos.

Sirven para reconocer células leucocitarias (normales o anómalas) y, por tanto, para diferenciar unas clases de leucemias de otras. Por ejemplo, un colorante preparado a base de diaminobenzidina y de agua oxigenada, descubre la presencia de peroxidasa endocelular, y por consiguiente permite atribuir el origen de unas células leucocitarias inmaduras a la línea granulocítica o a la monocítica.

3. DENOMINACIÓN DE LAS ESTRUCTURAS COLOREADAS.

Atendiendo a sus apetencias tintoriales, las estructuras celulares pueden nombrarse de las siguientes formas:

Estructuras acidófllas u oxifilas: son aquellas que fijan colorantes de naturaleza ácida.

Si el colorante ácido que captan es la eosina, se dice que son eosinófilas. Con las tinciones tradicionales adquieren un color rosado.

Estructuras basófllas: son aquellas que fijan colorantes de naturaleza alcalina.

Con las tinciones tradicionales adquieren un color azulado. Si se tiñen de lila o púrpura con colorantes de tipo azur, se llaman azurófllas.

4. CAUSAS DE ERROR EN LAS TINCIONES REALIZADAS A FROTIS SANGUÍNEOS.

Si la tinción de una extensión sanguínea es demasiado rosa, probablemente esto se deba a:

Un pH bajo del colorante.

Un tiempo de coloración insuficiente.

Un lavado excesivamente prolongado.

Si la tinción es demasiado azul, posiblemente, esto esté causado por: un grosor excesivo de la extensión, o un pH alto del colorante.

Una coloración excesivamente prolongada.

Un lavado insuficiente.

Si tras la tinción aparecen artefactos o/y precipitados en la extensión, probablemente esto se deba a:

Un empleo de portaobjetos sucios.

Una falta de filtración del colorante.

Una coloración excesivamente prolongada.





Un secado del colorante durante la tinción.

Un lavado insuficiente.

Muchos de estos errores pueden obviarse utilizando teñidores automáticos de las extensiones sanguíneas. Actualmente, no suelen emplearse en la práctica clínica.

5. TINCIÓN GIEMSA.

Las tinciones hematológicas tipo Romanowsky utilizan azul de metileno y sus productos de oxidación (azur A, azur B y azur C) como colorantes básicos, combinándolos con la eosina como colorante ácido.

De este modo, obtenemos una tinción diferencial, es decir, una tinción que es capaz de discriminar entre las distintas estructuras celulares según se tiñan éstas con el colorante ácido, con el básico o con la mezcla de ambos.

Según la proporción de azul de metileno y de eosina que compongan el colorante tendremos distintos métodos de tinción. Entre ellos, los más conocidos son el método de Giemsa, el de Wright, el de Leishmany el pan óptico de Pappenheim.

Metódica

Es un extracto de las técnicas de tinción hematológicas de la casa Panreac.

Fundamento

Utilizamos como colorante la mezcla de azul de metileno y eosina propuesta por Giemsa.

Material necesario

Microscopio óptico.

Portas bien limpios.

Cristalizador.

Puentes de tinción.

Pipetas Pasteur con chupete.

Frascos lavadores.

Tubos de ensayo.

Reactivos

Colorante en solución según Giemsa de Panreac.

Solución tampón pH 7,2 de Panreac.





Metanol.

Aceite de inmersión.

Muestra

Sangre capilar fresca o venosa anticoagulada. El anticoagulante de elección es la heparina o el EDTA, ya que el citrato sódico y el oxalato potásico pueden dar preparaciones defectuosas.

Técnica

Preparamos un frotis sanguíneo según la técnica descrita con anterioridad.

Colocamos el frotis sobre el puente de tinción, en el cristalizador y en posición horizontal.

Cubrimos el frotis con metanol durante 3 minutos. Escurrimos y lo dejamos secar al aire. Con esto procedemos a fijar el frotis.

Diluimos en un tubo de ensayo 0,2 ml de azur-eosina-azul de metileno según Giemsa con 2 ml de solución tampón pH 7,2. Es importante realizar esta dilución en el momento de la tinción, ya que el colorante precipita y no es válido para otro día.

Mezclamos suavemente en el tubo y con una pipeta Pasteur cubrimos el frotis con la dilución de colorante, dejándolo actuar durante 25 minutos.

Escurrimos y lavamos con agua del grifo. Posteriormente lavamos con tampón pH 7,2 hasta eliminar los restos del colorante. Dejamos escurrir y secamos en posición vertical.

Lectura de resultados

Una vez seca la tinción, echamos una gota de aceite de inmersión y examinamos al microscopio óptico con el objetivo de 100 x.

Los eritrocitos se tiñen de color rosa asalmonado y las plaquetas de color violeta.

Los neutrófilos presentan el núcleo de color azul violeta, el citoplasma rosa y la granulación de un color violeta rojizo.

6. TINCIÓN DE WRIGHT.

Metódica

Extracto de las técnicas de tinción hematológica de la casa Panreac.

Fundamento

El colorante utilizado es una solución de eosina y una mezcla de azul de metileno (del 50 al 75%) y azur B (del 10 al 25%) junto con otros derivados del alcohol metílico.




LABORATORIO CLINICO VETERINARIO –SEPTIMO SEMESTRE-UNIVERSIDAD DE LA AMAZONIA Dada la presencia de metanol en la composición del colorante, no es necesario un paso previo de fijación antes de la coloración.

Sólo si se van a guardar las extensiones sin teñir de un día para otro precederemos a su fijación para evitar el deterioro del frotis.

Material necesario

Microscopio óptico.

Cristalizador.

Puentes de tinción.

Pipetas Pasteur con chupete.

Frasco lavador.

Guantes.

Tubos de ensayo.

Reactivos

Solución de eosina-azul de metileno según Wright.

Solución tampón pH 7,2.

Aceite de inmersión.

Muestra

Sangre capilar fresca o venosa anticoagulada. Los anticoagulantes más adecuados son la heparina y el EDTA.

Técnica

Realizar un frotis sanguíneo muy fino. Dejar secar al aire.

Sobre la extensión colocada horizontalmente en el puente de tinción verter 1 ml de eosina-azul de metileno. Dejamos actuar un minuto y lavamos con solución tampón pH 7,2. Dejamos escurrir y secar en posición vertical.

Inmediatamente antes de su empleo y en un tubo de ensayo, diluimos 0,5 ml. de eosina-azul de metileno con 0,5 ml de solución tampón pH 7,2. Mezclamos bien y cubrimos con esta dilución la extensión. Teñimos durante 3-5 minutos y lavamos con agua del grifo. Volvemos a lavar con solución tampón pH7,2. Dejamos escurrir y secar en posición vertical.

Lectura de resultados




LABORATORIO CLINICO VETERINARIO –SEPTIMO SEMESTRE-UNIVERSIDAD DE LA AMAZONIA Depositamos una gota de aceite de inmersión y observamos con el objetivo de 100 x.

Las células se observan coloreadas de la misma manera que con la tinción de Giemsa

COLORANTES

Existen colorantes ácidos ( eosina ) que se unen a los componentes básicos célulares

usualmente al citoplasma y colorantes básicos ( azul de metileno ) que se une a las partes ácidas como el núcleo.

De ahí se derivan los términos coloración basofílica ( toma color azul ) en cuanto al núcleo y acidofílica ) ( toma color rosado ) en cuanto al citoplasma.

Los colorantes más utilizados son el Wright y el Giemsa.

Técnica de coloración de Wright.

1. Secar al aire el frotis de sangre .

2. Cubrir la lamina con colorante 2 a 4 minutos ( Período de Fijación ). Si no se emplea suficiente colorante ocurre evaporación y posterior precipitación.

3. Diluir el colorante con un vólumen igual de solución Buffer ( Ph 6.4 - 6.8 ) o agua destilada , también se puede usar agua corriente si se tiene el Ph apropiado. Se deja actuar entre 2 a 5 minutos durante el cual se forma una película de color verde metálico en la superficie del colorante, durante este periodo se produce la coloración de las células.

4. El frotis se lava con agua abundante hasta cuando quede de color rosado o violeta.

Si no se lava abundantemente se colectan precipitados sobre el frotis.





Técnica de coloración de Giemsa.

1. Secar el frotis al aire

2. Fijarlo en alcohol metilico absoluto durante 1 a 3 minutos. Si hay contaminación del alcohol con agua queda deficiente la fijación.

3. Secar el frotis al aire y sumergirlo en la solución de colorante diluído ( 2 ml de colorante por 50 ml de solución Buffer ) durante 20-45 minutos.

4. Lavar con solución buffer.

Además de los colorantes anteriores hay otros como el de May Gruenwald; May Gruenwald Giemsa; el de Leishman o el de Jenner Giemsa.

Colorantes rápidos como: Hemacolor, Hemal, Diff Quik, Camco Quik.

FROTIS SANGUÍNEO O EXTENDIDO DE SANGRE.

El examen de un frotis de sangre periférica es uno de los procedimientos de laboratorio que dan mayor información.

Enfermedades sanguíneas como la leucemia pueden ser diagnósticadas por examen de frotis sanguíneo; también se puede obtener información relativa al estado de los eritrocitos: Observar en ellos el tamaño, forma, reacción de coloración, inclusiones intracitoplasmáticas y presencia de núcleo; el estado de los leucocitos ( estado de madurez, anormalidades del núcleo y del citoplasma ) y el estado de las plaquetas.

En un frotis sanguíneo se puede observan parasitos sanguíneos como aperitozoon, tripanosomas, anaplasmas, babesias, ehrlichia, microfilaria etc.





El frotis sanguíneo debe hacerse lo más pronto posible después de tomada la muestra y sin el uso de anticoagulante.

Si se uso EDTA hacer el frotis máximo 1 hora después de colectada la muestra.

Método de porta-objetos. Se coloca un porta objeto limpio, desengrasado sobre la superficie horizontal y se deposita una gota pequeña ( 2 a 3 mm ) de sangre bien mezclada en uno de los extremos. Se puede usar un palillo redondo o el tubo capilar del microhematrocito para pasar la sangre del frasco al porta - objetos y regular así el tamaño de la gota.

Extienda la sangre en una película uniforme. 3/4 partes de la longitud del portaobjeto, con otro porta objeto. El borde con que se hace la extensión debe ser liso y sus esquinas deben ser cortadas de modo que el borde que obra en la extensión sea algo menor que el ancho del porta objeto en que se extiende la sangre.

El porta objeto extensor se pone en contacto, con la sangre, ésta se extiende por el borde, luego se desliza hacia adelante suavemente, un movimiento rápido produce extensiones gruesas por lo tanto más cortas y viceversa. El ángulo en que se sostienen el porta objeto extensor determina el grosor del frotis, a mayor ángulo más grueso es el frotis, resulta satisfactorio un ángulo entre 30-45 grados.

El frotis se mueve en el aire para acelerar su secado, pues si este es lento sale agua de los eritrocitos, lo que origina la creación de estos. Para obtener un buen frotis este debe ser secado rápidamente, debe ser delgado, liso, libre de surcos, aristas, hondas o huecos.

Cuidados del frotis:

1. Tiña el frotis inmediatamente si es posible. De no hacerlo, guardalo en un sitio protegido y colorear en las 24 horas siguientes, mejor fijarlo con alcohol metílico y conservarlo, ésto estabiliza las células e impide la degeneración celular.

2. Los frotis efectuados en el campo deben protegerse de las moscas que pueden ingerir eritrocitos y en pocos minutos llenar de huecos el frotis.





TÉCNICAS DE EXAMENES DE ERITROCITOS

1. Recuento total de eritrocitos.

Limitaciones de la técnica de laboratorio. Los errores más comunes encontrados en el examen de recuento de eritrocitos incluyen aquellos asociados con :

a) La recolección

b) Dilución

c) Recuento

a) Errores de recolección: Si se usan anticoagulantes líquidos se debe evitar excesiva dilución de la muestra.

Para evitar estos errores se deben utilizar anticoagulantes secos, pero el uso de ellos pueden tener un problema adicional cuando se obtiene una pequeña cantidad de sangre y no se pueden mezclar bien con el anticoagulante. La hemólisis de una muestra de sangre interfiere con las determinaciones.

b) Errores de dilución: se debe tener cuidados extremos al hacer las diluciones de sangre en las pipetas diluidoras para obtener buenos resultados. El error más común asociado con la dilución es error humano

c) Errores de conteo: Se deben comunmente a una inadecuada iluminación del campo microscópico y un examen poco cuidadoso en el recuento de las células. Es fácil confundir detritus y suciedad del equipo o de los líquidos diluyentes.

Recuento de eritrocitos, en el hemocitómetro. El hemocitómetro consta de una pipeta para diluir eritrocitos, una pipeta para dilución de leucocitos y una cámara de recuento.





Llenado de la pipeta. La pipeta de dilución consta de una parte tubular calibrada y de un búlbo o cámara de mezcla con una perlita de vidrio de color rojo para facilitar la dispersión uniforme de las células en el diluyente. La parte calibrada se divide en 10 partes iguales, cuyo total es una unidad; en el lado opuesto del bulbo aparece el número 101.

Al extremo superior de la pipeta se une un tubo de goma que tiene una boquilla de plástico; por suave succión se aspira la sangre en la pipeta hasta la marca 0.5 si la sangre pasa la marca 0.5, el exceso pude extraerse con un algodón o gasa tocando la punta de la pipeta; luego se introduce por aspiración el diluyente ( solución salina fisiológica o solución de Hayem o solución de Gower ) a medida que el diluyente entra en la pipeta, la sangre se mueve hacia la cámara mezcla

El líquido debe detenerse exactamente en la señal superior 101, así queda una dilución de 1.200.

Cámara de recuento. Es una pieza rectangular de cristal grueso con dos barras realzadas transversales en que se apoya el cubre objeto. En la zona central, entre la dos barras hay dos plataformas ambas rodeadas por una depresión.

La superficie pulida de cada plataforma está a 0.1 mm del cubre objeto, de manera que al llenarse la cámara la profundidad del líquido es de 0.1 mm.

Cada plataforma tiene una zona cuadriculada con 9 cuadros principales, cada uno de 1 mm 2, Cada uno de los cuadros de las 4 esquinas se subdividen en 16 cuadros secundarios para mayor facilidad del recuento de leucocitos.

El cuadro principal del centro se usa para el recuento de eritrocitos y tiene 25 cuadros secundarios, cada uno de los cuales a su vez tienen 16 cuadros terciarios, es decir que el número de cuadros terciarios es de 400. Se acostumbra contar los eritrocitos en 5 e los cuadros secundarios, empleando los 4 de las esquinas y el del centro.

Antes de llenar la cámara debe agitarse la pipeta durante dos minutos para hacer una dispersión uniforme de los eritrocitos en el liquido de la dilución. La pipeta se sostiene colocando el pulgar en una punta y el indice o dedo medio en el extremo. La agitación se hace con movimientos de vaiven en ángulo recto con el eje mayor. Sóplese la pipeta para descargar hasta la mitad de su contenido, arrastrando el líquido sin células de la parte tubular, tóquese el bode de la plataforma de la cámara de recuento con la punta de la pipeta y déjese que el líquido fluya por debajo del





cubre objeto por capilaridad. El llenado de la cámara debe verificarse por un movimiento uniforme del liquido sobre la plataforma. El líquido depositado debe llenar la cámara únicamente sin caer en los surcos.

Se puede utilizar el lado de la cámara para el recuento de eritrocitos y el otro lado por leucocitos.

Después del llenado de la cámara se esperan tres minutos dando tiempo para que los eritrocitos se depositen en la superficie de la plataforma; observar que haya distribución uniforme de los eritrocitos.

Luego se procede el recuento empleando objetivo seco a gran aumento ( 40x ). Se cuentan los eritrocitos en 5 cuadros secundarios ( 80 cuadros terciarios ) y se multiplican por 10.000, lo que representa el número de eritrocitos por mm3 o ul de sangre.

Área de 1/5 mm2 contada x 1/10 de mm de profundidad x 1/200 de dilución= 1/10.000 de mm 3 de sangre sin diluir.

Debe seguirse un método preciso de recuento para no saltar células o contarlas más de una vez. La práctica corriente es la de comenzar en el cuadro superior izquierdo incluyendo en la numeración todas las células que tocan las líneas que forman los lados superiores e izquierdo, sin tomar en cuenta las que tocan el lado inferior y el derecho.

Continúese con la fila superior de cuadros izquierda a derecha y pásese luego a la segunda fila contándolos de derecha a izquierda y así se sigue este procedimiento hasta contar todos los cuadros necesarios. Se calcula un error que puede variar entre 10 a 20 %, dependiendo de los cuidados que se deben tener para evitar errores en la dilución, en el conteo, y de la práctica del laboratorista.

Ejemplos de valores normales en: Caninos 6-9 millones / mm 3 Bovinos 5-8 millones / mm3

Un recuento por debajo del mínimo normal indica anemia y por encima del valor máximo normal indica policitemia.





Existe un método electrónico, más preciso; para ello se usan contadores electrónicos como: Coulter Counter, contadores de células Mallinkrodt, Clay Adams, Technicon, Hamalog, Hemac, etc.

Los avances en electrónica han llevado al desarrollo de diferentes contadores electrónicos de células sanguíneas; los hay de varias capacidades y conveniencias. Los modelos más costosos pueden hacer conteo de eritrocitos y leucocitos,suministran los valores de hemoglobina y del hematrocito y calcula los índices eritrocíticos dando lecturas digitales de todos los valores. Los menos costosos realizan solamente conteo de eritrocitos y leucocitos. Los contadores electrónicos son seguros, confiables y fáciles de usar.

Los métodos electrónicos para recuento de células sanguíneas usadas actualmente, emplean uno de los siguientes principios:

1. En un vaso de precipitado se hace la dilución de las células con un diluyente. Las células sanguíneas son aislantes, mientras que los diluyentes salinos son buenos conductores, la base de la operación son las diferencias de conductividad eléctrica entre las células sanguíneas y el diluyente. Las células pasan a través de una diminuta abertura produciendo cambios en la resistencia electrónica y son contados con pulsos de voltaje. Este principio se usa en los equipos Coulter Counter y contadores de células Mallikrodt Y Clay Adams.

2. Las células al pasar a través de un flujo celular desvían un rayo de luz. Un fotomultiplicador convierte esta luz a pulsos electrónicos y los cuenta. Este principio se usa en contadores de células mucho más costosos, tales como Technicon, Hamalog y el Hemac.

Los contadores electrónicos tienen como ventaja que las células pueden contarse con mayor rapidez que con el método de hemocitómetro, y es de gran utilidad cuando se hacen conteos diarios en gran cantidad. También es importante la reproducibilidad, sobre todo en los laboratorios de investigación; los conteos electrónicos por lo general producen menor variación que los conteos hechos manualmente.

Hematocrito.





Es el volúmen ocupado por los eritrocitos empacados en una cantidad dada de sangre expresado en porcentaje.

El término hematrocito significa separación de la sangre; en el laboratorio esto se logra mediante centrifugación, obteniendose 3 capas bien claras a saber:

a) La masa eritrocítica en el fondo denominada volúmen globular empacada o VGE o PCV.

b) Una capa blanca o gris de leucocitos y trombocitos situada inmediatamente por encima de la masa de eritrocitos y que se denomina capa anteada o costra flogística.

c) El plasma sanguíneo

El anticoagulante que se emplee no deben deformar los eritrocitos pués ellos serían causa de error, por eso se debe emplear el EDTA o heparina.

Existen varios factores técnicos que pueden causar errores en la medición del PCV: oclusión prolongada de la vena puede causar éxtasis venoso y aumento hasta un 5% del PVC.

En animales excitados liberan epirefrina con contracción esplénica, pueden aumentar el PCV. El excesivo uso de la EDTA puede reducir el PCV taanto como en un 37 %.

Hay dos métodos para determinar el hematrocito:

a) Macrohematocrito o método de Wintrobe.





b) El microhematocrito.

A) Método de Wintrobe o macrohematocrito

El tubo hematocrito de Wintrobe tiene un diámetro interior uniforme de 3 mm y está calibrado con doble escala de 10 cm con divisiones milimétricas. La escala de la izquierda se lee de arriba hacia abajo y la de la derecha a la inversa.

La sangre con anticoagulante ( EDTA ) será bien mezclada y luego y luego se procede a llenar el tubo hematocrito; para ésto se puede emplear una aguja despuntada de 5 a 6 pulgadas de largo, N 16 a 18 y una jeringa de 5 ml. La aguja es introducida hasta el fondo del tubo y se va introduciendo lentamente la sangre a medida que la aguja se va retirando; se debe tener cuidado que la punta de la aguja permanezca por debajo de la superficie de la sangre para evitar la formación de burbujas que interfiera con los resultados. Así se debe llenar hasta la marca 10 de la escala de la derecha; se necesita 1 ml de sangre; luego se lleva a una centrifuga tipo estándar de laboratorio, durante 30 minutos a 2000 o 2500 rpm.

Luego se hace la lectura en el nivel exacto de los eritrocitos inmediatamente debajo de la capa de leucocitos, en la escala de la derecha.

Método del microhematocrito

Las ventajas del microhematocrito sobre el método de Wintrobe son:

a) Los valores del volumen globular son más exactos y constantes.

b) El tiempo necesario para todo el procedimiento es de 5 minutos.

c) La cantidad de sangre requerida es mínima lo cual permite el empleo de sangre extraída por punción capilar de la vena marginal de la oreja por ejemplo.

Tiene como ventaja que necesita equipo especial, la centrífuga microcapilar y el instrumento para la lectura.





Para la determinación del microhematocrito se usa un tubo capilar de 75 mm de longitud y un diámetro interno de 1 mm.

Algunos capilares vienen con anticoagulante ( heparina ) para llenarlos directamente de una punción capilar.

Los tubos son llenados unos 2/3 - 3/4 por acción capilar y el exterior es secado cuidadosamente con gasa y el extremo opuesto del tubo es sellado con plastilina o arcilla o con la llama de un mechero de gas rotándolo suavemente. Los tubos sellados son colocados en una centrífuga microcapilar, con el extremo sellado hacia afuera, durante 5 minutos a 10.000 rpm. Luego se lee en el instrumento de lectura para determinar el porcentaje de eritrocitos.

La prueba del hematocrito proporciona información valiosa en casos sospechosos de anemia por diferentes causas. También proporciona una estimación aproximada del número eritrocitos circulantes por 3 mm y es de gran ayuda para determinar la necesidad de una transfusión debido a su precisión.

Una aproximación general del total de eritrocitos/mm3 en la sangre del perro principalmente se obtiene dividiendo por 6 el número que indica el hematrocito y la estimación de la hemoglobina puede obtenerse dividiendo el valor del hematrocito por 3.

Ejemplos de valores normales en: Caninos 37-52 %

Bovinos 24 - 45 %

Un aumento del PCV indica policitemia.

Se debe observar la capa del plasma, su color y transparencia. En ictericia el plasma es amarillo y no turbio. En hiperlipemia el plasma es blanco y turbio. En hemoglobinemia el plasma es rojizo y no turbio. El aspecto lechoso o palino indica lipemia que ocurre 2-3 horas después de las comidas abundantes en grasa. Se ven normalmente en animales animales alimentados con leche y cerdos que ingieren gran cantidad de grasa en una ración de desperdicios. En animales gordos con anorexia o privados de alimentos movilizan sus reservas de grasa lo que produce





lipemia ( en perro y caballo ); se ve lipemia en casos avanzados de diabetes mellitus, también en enfermedades del hígado y en hipotiroidismo.

Otro uso del microhematocrito es para el diagnóstico de microfilaria y tripanosomas ( técnica de Woo ) observando microscópicamente el plasma por encima de la capa de eritrocitos.

La columna del plasma también sirve para determinar las proteínas plasmaticas totales por refractometría y la concentración de fibrinógeno por precipitación por calor y refractometría.

Medición de la hemoglobina.

Método de Tallqvist.

Se coloca una gota de sangre en una pieza de color blanco absorbente, éste se coloca en una perforación central de una escala de colores rojos seriados que corresponden a diferentes concentraciones de hemoglobina. La intensidad del rojo de la muestra es comparado con el más parecido al de la escala y se lee el valor de la hemoglobina que está indicado en la escala.

Esta técnica es rápida sencilla y económica se emplea como una técnica de muestreo, rápida bajo condiciones de campo.

El error de esta prueba se estima entre + o - 10-40 %

Método de Oxihemoglobina.





Se emplea el hemoglobinómetro de Spencer que mide la oxihemoglobina por absorción luminosa con filtro verde. Se coloca una gota de sangre de una cavidad poco profunda de una placa de vidrio y es lisado con un agente hemolítico ( saponina ) tomando en la punta de un palillo aplicador, la sangre toma un color vino tinto. El adecuado grosor de la sangre lisada se consigue poniendo una segunda pieza de vidrio encima de la cámara y presionando las dos laminas de vidrio.

La cámara de vidrio se lleva al hemoglobinómetro y el color verde de la cámara se compara con el patrón verde que es un prisma de vidrio que puede moverse en direcciones opuestas. Este método tiene un margen de error de + o - 5-10 %.

Método espectrofotométrico de cianometahemoglobina.

Esta técnica es probablemente la más precisa de todos los métodos para determinar la concentración de hemoglobina.

Tiene un margen de error de + o - 2 % en equipos automatizados, y de 2-5 % en equipos manuales.

Tiene como limitantes en la práctica de rutina que debe ser afectuada con espectrofotómetro; se utiliza una longitud de onda de 540 mm.

Se usa una solución de ferrocianuro de potasio - cianuro de potasio. El ferrocianuro convierte el hierro de la hemoglobina dek estado ferroso al férrico para formar metahemoglobina se combina luego con el cianuro de potasio para producir el pigmento caianometahemoglobina que es estable.

Existe una solución comercial que está compuesta de :

Ferrocianuro de potasio 200 mg

Cianuro potásico 50mg

Bicarbonato de sodio 1g





Agua destilada 1000 ml

Procedimiento:

- Coloque en una cubeta de colorímetro marcada con blanco de reactivos, 5 ml de la solución de Drabkin o agua destilada; se usa pára calibrar a 100 % en la escala de transmitancia o cero en la escala de absorbancia, empleando una longitud de onda de 540 nm.

- Coloque 5 ml de la solución de Drabkin en otra cubeta de colorímetro, marcada con muestra o desconocido.

- Con una pipeta de Sahli 0.02 ml de sangre hemogenizada ( el extremo de la pipeta debe limpiarse del exceso de sangre ) a la cubeta marcada como muestra, después de añadir la sangre enjuague la pipeta por lo menos tres veces con el diluyente para asegurar que toda la sangre ha sido mezclada.

- Mezcle vigorosamente la solución y dejele es reposo durante 3 a10 minutos para que produzca la cianometahemoglobina.

- Haga la lectura de la cubeta de la muestra en el espectrofotómetro utilizando la absorbancia o transmitancia y determinar el equivalente de hemoglobina en una curva patrón previamente preparada.

También se puede utilizar una solución patrón de hemoglobina; para esto se utiliza una tercera cubeta marcada como patrón, a la cual añade 5 ml de solución Drabkin y 0.02 ml de solución patrón y se hace la lectura de la absorbancia del tubo muestra contra la absorbancia del tubo del patrón previa calibración con el tubo del blanco de reactivos y se aplica la siguiente formula:

Concentración de Absorbancia de muestra X Concentración del patrón

la muestra ___________________





Absorbanica del patrón

El valor de la hemoglobina ( Hb) se expresa en gramos de Hb/100 ml ó dl de sangre. Por ejemplo: Caninos 12-17 g / dl

Bovinos : 8-13 g / dl

Velocidad de sedimentación de los eritrocitos ( VSE )

Cuando la sangre contiene anticoagulante y se le deja en reposo en un tubo perpendicular los eritrocitos van al fondo porque son más pesados que el plasma.

La velocidad de sedimentación de los eritrocitos en la sangre de los animales normales es relativamente lenta; pero esta aumentada en enfermedades inflamatorias y en las que hay degeneración y necrosis de los tejidos.

En general los factores que afectan significativamente la VSE se pueden subdividir en factores del plasma y factores de los eritrocitos.

Factores del plasma. La elevación de algunas proteínas plasmáticas especialmente fibrinógeno y globulina favorece una sedimentación de los eritrocitos más rápida. Los niveles aumentados de fibrinógeno producen aumento en la formación de Rouleaux; cuando los eritrocitos se amontonan en rouleauz se aumenta el peso de las columnas de eritrocitos lo que acelera la VSE.

Otros factores del plasma que aumenta el VSE son el colesterol plasmático aumentado y niveles de albúmina disminuídos como sucede en hipoproteinemia.

Factores de los eritrocitos: Números disminuídos de eritrocitos aceleran la VSE cambiando la proporción de eritrocitos- plasma. Aumentando la formación de rouleaux.





Eritrocitos microcíticos como se observa en anemia por deficiencia de hierro disminuyen la VSE, mientras que los eritrocitos macrocíticos en anemias regenerativas con alto recuento de reticulocitos aceleran la VSE.

Factores que pueden influír en la VSE.

VSE aumentada.

1. Rouleaux aumentada

2. Aumentos de fibirnógeno, globulina, colesterol y gravedad específica del plasma.

3. Disminución de la albumina y del hematrocito

4. Irradiación por rayos X

5. Preñez ( perra )

6. Alta temperatura ambiental

7. Excesivo ángulo del tubo

8. Tubo largo

9. Leucocitosis

10. Nefritis intersticial crónica





11. Anemias.

VSE disminuída :

1. Rouleaux disminuído. Gravedad específica del plasma disminuida. Diámetro del tubo disminuido.

Temperatura ambiental disminuida. Albúmina aumentada. Hemoconcentración. Demora en hacer la prueba. Tubo corto. exceso de anticoagulante. sulfas. Glucocorticoides. ACTH. Poiquilocitosis. Anisocitosis.

Técnica para determinar la VSE.

Las dos técnicas comunes para la determinación con el método de Westergren y el de Wintrobe.

Método de Wintrobe: Es el método de elección. Se emplea un tubo de hematocrito de Wintrobe, en el cual la velocidad de sedimentación se lee en la escala de la izquierda de arriba hacia abajo.

Se llena el tubo hasta la marca cero ( columna izquierda )

Como se indico para el macrohematocrito, luego se coloca el tubo verticalmente en un soporte y en una superficie horizontal, donde no haya vibraciones. Anotar la hora para tomar lecturas cada 15 minutos durante 1 hora. La lectura en equinos se hace únicamente a los 10,20 y 30 minutos.

El resultado se reporta en mm de sedimentación después de un número de minutos dado. Ejemplo. 50 mm7 1 hora.

Ejemplo de valores normales de VSE. Perro: 5-15 mm/1 hora.

Caballo: 51-63 mm/ 1 hora.

El uso del VSE se emplea más en pequeños animales especialmente en perros.





Las enfermedades caninas que presentan una sedimentación acelerada son:

Enfermedades inflamatorias, tumores malignos, dermatitis, nefritis intersticial, preñez, anemias, leucocitos.

Sedimentación difásica:

Ocasionalmente en una determinación de la VSE no hay una línea de separación neta entre los eritrocitos sedimentados y el plasma. El plasma es claro con la excepción de un fenómeno de una cola de eritrocitos que aparece tras la masa de eritrocitos sedimentados como la cola de un perro.

Este fenómeno es el resultado de la presencia de reticulocitos y otras formas jóvenes de eritrocitos y puede ocurrir también si hay gran número de eritrocitos con anormalidades de forma. Este fenómeno ocurre porque esas células son más grandes y no participan en la formación de las pilas de eritrocitos ( rouleaux ).

La sedimentación difásica indica la presencia de una alteración eritrogénica.

Valores corpusculares ( o globulares ) medios o indices eritrociticos de Wintrobe.

De vez en cuando es necesario determinar el volúmen promedio de los eritrocitos y precisar si hay una cantidad normal de hemoglobina en cada uno.

Esta información se usa para determinar si los eritrocitos son normales y para dar nombra a la clase de anemia que se encuentra.

Los datos fundamentales para calcular estos índices son:





1. El volumen de los glóbulos rojos empacados (VGE) del hematocrito, el número de eritrocitos por mm3 de sangre y la cantidad de hemoglobina en gramos/dl de sangre.

2. La validez de dichos índices dependen de la exactitud del recuento de los eritrocitos, de la determinación de la hemoglobina y del valor hematocrito.

3. Con estos valores es posible calcular el volumen de un eritrocito promedio y su concentración de hemoglobina. Esos valores son de particular importancia para determinar morfológicamente el tipo de anemia y puede ser de ayuda en seleccionar una terapia.

El indice eritrocítico consta de tres partes:

a) El volumen corpuscular medio ( VCM ) que se reporta en u3 o femtolitro =10-15L

b) La hemoglobina corpuscular media ( HCM ) que se reporta en uu gramos ó picogramos = 10-12 g.

c) La concentración media de la hemoglobina corpuscular ( CMHC ).

que se reporta en porcentaje.

Volúmen corpuscular medio (VCM ). Se determina dividiendo el VGE del hematocritoen 1000 ml de sangre por el recuento total de glóbulos rojos/mm3

( expresado en unidades de millón ).

La fórmula se expresa así:

VCM = VGE en 1000 ml de sangre





____________________________

Recuento total de g. rojos

El resultado de este cálculo es expresado en micras cúbicas o femtrolitros que es el volumen de un eritrocito en particular.

Ejemplo: Una muestra de sangre de bovino que tiene un hematocrito de 43 % y un recuento total de eritrocitos/ mm 3 de 6.500.000 / mm 3 ; el VCM se obtiene así:

VCM = 43x10 430

______ = ______ = 66,2 fl ( volumen superior a los valores normales en

la especie )

6,5 6,5

Ejemplos de valores normales de VCM en : Caninos: 60-77 fl

Bovinos: 40-60 fl

1 mm 3 = 10 9 u 3

43% de 10 9 u 3 = 430.000.000. U 3

VCM = 430.000.000 = 66.2 u 3 ó fl

___________

6.000.000





Hemoglobina corpuscular media ( HCM ): Se determina dividiendo la hemoglobina presente ( en gramos ) en 1000 ml de sangre

por el recuento total de eritrocitos / mm 3 ( Expresados en unidades del millón )

HCM = Hemoglobina ( g / 1000 ml de sangre )

______________________________

Recuento total G. rojos / mm 3 ( unidades de millón )

Ejemplo: Con una muestra de sangre Bovino que tiene 13 gr / dl de hemoglobina y un recuento de eritrocitos de 6.500.000 / mm 3.

La fórmula es como sigue:

HCM = 13 x 10 = 130 = 20 pg ( Valor mayor a los valores

_______ ___ normales de la especie )

6.5 6.5

Ejemplo de valores normales de HCM en: Caninos: 20-25 pg

Bovinos: 11-17 pg

1 gramo de hemoglobina ( Hb ) = 10 12 pg.

La Hb se expresa en g / 100 ml de sangre y el número de eritrocitos en millones / mm 3 o ul de sangre, este valor debe convertirse en el número de eritrocitos por 100 ml de sangre; si hay 13g / 100 ml de Hb y 6.5 millones de eritrocitos / mm 3 el HCM es:





HCM = 13 X 10 12 pg = 13 X 10 12 = 20 pg

________________________ _________

6.500.000 x 100 ml x 1000 mm 3 6.5 x 10 11

Este índice da el peso de un eritrocito individual de un organismo, expresado en uu gramos de hemoglobina o picogramos.

Concentración media de hemoglobina corpuscular. ( CMH ) Este índice expresa el porcentaje de hemoglobina con respecto al volumen total de un eritrocito.

Se calcula dividiendo la hemoglobina en gramos / 10.000 ml de sangre por el volumen globular empacado ( VGE ) en 100 ml de sangre.

CMHC = Hb ( g / 10000 ml de sangre )

_______________________

VGE ( hematocrito )

Ejemplo: Con la muestra de sangre de Bovino que tiene 13 g / dl de Hb y 43 % de VGE la CMHC se obtiene así:

CMHC = 13 x 100 1300 = 30.2 %

________ = _____

43 43





Ejemplo de valores normales de CMHC en : Caninos: 31-34 %

Bovinos: 26-34%

Interpretación del índice eritrocítico. En el ejemplo anterior cada eritrocito tiene un volumen de 66.2 fl, un peso de Hb de 20 pg y el 30.2 % del volumen del eritrocito corresponde a la hemoglobina.

Tanto la HCM como CMHC tienen casi el mismo significado, porque ambas tratan sobre la cantidad de hemoglobina.

Si se conoce el volumen de cada eritrocito y su porcentaje de hemoglobina, no hay necesidad de calcular el peso de ella; en la práctica casi no se usa esta última determinación ( HCM ), debido a que para su determinación se usa el valor de recuento total de eritrocitos/ mm 3, el cual tiene una margen de error muy amplio cuando se hace por medio del hemocitómetro.

En estado de salud hay 30 + o - 4 % de hemoglobina de cada eritrocito; el único cambio que interesa y que tiene importancia es la disminución en este valor, lo que indica una insuficiencia en la producción del pigmento.

El índice eritrocítico se utiliza para clasificar las anemias morfológicamente.

La clasificación morfolócica hace poca referencia a la causa de la anemia, pero presenta una estimación de alteraciones en le tamaño y en la concentración de hemoglobina de eritrocitos individuales.

Se dice que los eritrocitos son:





Normocíticos : Cuando son de tamaño ( volumen ) normal

Macrocíticos : Cuando son más grandes de lo normal

Microcíticos : Si son más pequeños de lo normal

El contenido de hemoglobina se designa por los términos

Normocrómico : Cuando el contenido de hemoglobina es normal

Hipocrómico : Cuando los eritrocitos tienen una cantidad menor de hemoglobina

Verdaderas células hipercrómicas no existen

De acuerdo a los hallazgos anteriores pueden haber varios tipos de anemias morfologicas.

Anemia microcítica hipocrómica: En la sangre de este tipo de anemia hay predominio de eritrocitos de menor tamaño ( microcíticos ) y la cantidad de hemoglobina disminuye.

Esta anemia se presenta en deficiencia de hierro, o en la falla en la utilización del hierro para la formación de la hemoglobina; en pérdidas crónicas de sangre; en deficiencia de cobre y piridoxina.

Las anemias normocíticas se caracterizan por tener un VCM y HCM normales; se detectan solo por una disminución del número de eritrocitos o del hematrocito.

Este tipo de anemia ocurre con más frecuencia cuando hay una depresión de la eritrogénesis como sucede en enfermedades infecciosas crónicas, nefritis crónicas, animales irradiados, en neoplasias, en medulas óseas hipoplásticas, poco después de hemorragias agudas.

Este es el tipo de anemia más común en los animales domésticos.





Las anemias macrocíticas pueden ser hipocromicas o normocrómicas. La mayoría de las anemias macrocíticas son transitorias y se observan en los estados de recuperación en animales que han tenido una pérdida aguda de sangre o han tenido anemia hemolítica aguda.

Morfología normal de los eritrocitos

El eritrocito de los mamíferos es un disco redondo, delgado, anucleado (normocito); todos los otros vertebrados tienen los glóbulos rojos nucleados.

Las células rojas caninas normales son uniformemente bicóncavas con palidez central fácilmente aparentes y miden de 7 a 8 um de diámetro y un espesor de 1-2 um.

Los eritrocitos del gato tienden a ser discos planos por lo que se colorean uniformemente o revelan una evidencia limitada de palidez central. Su tamaño es un poco más pequeño que los eritrocitos del perro, tienen un diámetro aproximado de 6 um.

La forma bicóncava del eritrocito es una adaptación para maximizar el ´area de superficie a través de la cual se produce el intercambio de O2 y de CO2. La membrana celular encierra los componentes celulares y es vital para la supervivencia y función del eritrocito. Su forma y flexibilidad le permite al eritrocito penetrar al más pequeño de los capilares.

La forma normal del eritrocito depende del equilibrio determinado por las propiedades estructurales de la membrana y hemoglobina bajo la influencia del ambiente intra y extracelular.





El eritrocito es normalmente capaz de reobtener su forma después de repetidas alteraciones después del paso a través de microcapilares.

Los fosfolípidos, el colesterol y proteínas de la membrana son importantes y el ATP y CA++ son esenciales para mantener la forma normal.

Las variaciones en la forma de los eritrocitos pueden ocurrir bajo condiciones patológicas como resultado de anormalidades intrínsecas de la célula o a causa de cambios en su ambiente, tambien influyen en la forma muchos factores in vitro..

El significado diagnóstico de la morfología de los eritrocitos no se aprovecha con mucha frecuencia desafortunadamente en la práctica de la medicina veterinaria, desperdiciandose así un valioso recurso. De un examen cuidadoso de la morfología de los eritrocitos en un buen frotis sanguíneo coloreado con Wright se pueden obtener importantes pistas como las causas específicas o procesos patofisiológicos de la

anemia y de la actividad eritropoyética de la medula ósea.

Anormalidades morfológicas de los eritrocitos

Los eritrocitos serán examinados para observar anormalidades de tamaño, forma y color, el grado de tales anormalidades y la presencia de inclusiones.

La morfologia de los eritrocitos se observa fácilmente mediante el examen microscópico del frotis sanguíneo coloreado.

Bajo varias condiciones pueden presentarse 3 categorías de alteraciones morfológicas de los eritrocitos :

a) Anormalidades de tamaño ( Anisocitosis )





b) Anormalidades en forma ( Poiquilocitosis )

c) Aparición de inclusiones eritrocíticas

Anormalidades en tamaño o Anisocitosis.

La anisocitosis es una variación en el tamaño de los eritrocitos sin modificación de la forma celular. En condiciones normales, el perro y el gato presentan una ligera anisocitosis, que no tiene valor diagnóstico.

En una anisocitosis moderada o marcada puede ser debida a la presencia de microcitos y/o macrocitos entre los eritrocitos normales.

Los eritrocitos microcíticos pueden aparecer en la anemia hemolítica auto-inmune, en la microvasoconstricción, en la anemia precoz de cuerpos de Heinz y en la anemia por deficiencia de hierro. Los hematíes macrocíticos aparecen en anemias regenerativas y rara vez en leucemias eritrocíticas. Generalmente los macrocitos elevan el volumen corpuscular medio (VCM). Si la anemia microcítica es además una anemia regenerativa como ocurre en la anemia de cuerpos de Heinz, el VCM es normal, pero la correspondiente extensión sanguínea muestra una marcada anisocitosis.

Anormalidades de forma o poiquilocitosis





Los poiquilocitos son eritrocitos con una forma diferente a lo normal. De modo que poiquilocitosis es un término genérico que abarca todas las categorías de formas anómalas. A muchas de las formas anormales se les ha asignado nombres específicos como equinocitos, acantocitos, esquistocitos etc., por lo tanto se recomienda que el término poiquilocito se aplique para formas que no pueden ser categorizadas apropiadamente bajo la terminología corriente o cuando se necesita una descripción general.

La poiquilocitosis es una alteración inespecífica que se presenta en la pérdida crónica de sangre, en la anemia por deficiencia de hierro,en enfermedades caracterizadas por fragmentación de los eritrocitos y en la intoxicaciónn crónica por plomo.

Existen varios tipos de poiquilocitos:

1. Acantocitos. Tambien llamadas células espiculadas, son eritrocitos con proyecciones irregulares en su superficie, las cuales con frecuencia presentan un ensanchamiento “ abotonado” en su extremo terminal.

Los acantocitos se producen como resultado de cambios en los lípidos plasmáticos, con aumento del colesterol de la membrana sin modificación de los fosfolípidos dando lugar a eritrocitos con exceso de membrana formando así una serie de proyecciones.

Los acantocitos se observan en perros con hemangioma o hemangiosarcoma esplénicos, o en enfermedades hepáticas difusas, en anemia hemolítica inmuno-mediada, púrpura trombocitopénica.

2. Excentrocitos. Son eritrocitos con cambios en su forma por condensación de hemoglobina en un área de la célula que sugieren la exposición a alguna toxina oxidativa que lesiona la membrana con producción de cuerpos de Heinz; se observan en perros con intoxicación con acetilfenilhidrazina y cebolla.

3. Equinocitos o crenocitos. Son eritrocitos con diversas proyecciones puntiagudas o redondeadas en su superficie uniformemente separadas.





La crenación es un artefacto frecuente en frotis sanguíneos. Se produce cuando los eritrocitos del frotis secan lentamente o son expuestos a álcalis o ácidos sobre un portaobjeto contaminado o soluciones hipertónicas (anticoagulante en exceso), o cuando se utilizan muestras de sangre vieja al producirse depleción de ATP de los eritrocitos.

4. Esferocitos. Son eritrocitos pequeños y esféricos que se tiñen de un color rojo intenso. Los esferocitos se forman cuando los anticuerpos cubren el eritrocito y la célula pierde su forma de disco bicóncavo; son característicos en perros con anemia hemolítica inmuno-mediada, lupus eritematoso y después de transfusiones

5. Esquistocitos o esquizocitos. Son fragmentos irregulares de eritrocitos que han sido destruídos durante la circulación al ser cortados por filamentos de fibrina , son de diferentes tamaños y formas pero más pequeños que los eritrocitos normales ; pueden parecer triángulos, bastones, medias lunas o presentar otras formas caprichosas.

Se han observado en perros con coagulopatía intravascular diseminada ( CID ), anemia hemolítica microangiopática, insuficiencia cardiaca congestiva, glomerulonefritis, mielofibrosis y el hemangiosarcoma esplénico.

6. Leptocitos. Son eritrocitos de membrana delgada y débil con una superficie mayor que su contenido, por lo que tiende a plegarse adquiriendo muchas formas distintas. Los leptocitos pueden variar de tamaño y coloración : pueden ser ortocromáticos o policromáticos. Los leptocitos ortocromáticos se pueden ver en enfermedades hepáticas, ictericia obstructiva y deficiencia de hierro ; los leptocitos policromáticos se presentan en anemias regenerativas y corresponden a eritrocitos o reticulocitos policromáticos.

En la sangre periférica pueden encontrarse diferentes tipos de leptocitos :




LABORATORIO CLINICO VETERINARIO –SEPTIMO SEMESTRE-UNIVERSIDAD DE LA AMAZONIA a) Leptocitos en taza ( torocitos ). Son eritrocitos con una zona central redondeada de palidez bien

definida y un anillo periférico de hemoglobina más denso. Se presentan en anemias hipocrómicas por deficiencia de hierro en anemias crónicas.

b) Leptocitos en raqueta o dacriocitos. Son eritrocitos en forma de lágrima. Se han observado en perros con desórdenes mieloproliferativos.

c) Leptocitos estomatocitos. Son eritrocitos que tienen una hendidura pálida parecida a una boca en el centro de la célula. Se presentan en anemias crónicas y en la estomatocitosis hereditaria de los perros alaska malamutes.

d) Leptocitos en bolo. Tienen de 1 a 4 espacios redondeados, relativamente pequeños, decolorados, dando la apariencia de un bolo. Estos espacios pueden observarse en algunas ocasiones de forma piriforme pudiendo confundirse con babesias, cuando no se observan con el debido cuidado. Se presentan en anemias crónicas.

e) Leptocito de célula plegada o cnizocito. Son eritrocitos con una barra central de hemoglobina y un espacio claro a cada lado. La barra central corresponde a un pliegue levantado de la membrana hemoglobinizada. Se presenta junto con los estomatocitos en anemias crónicas.

f) Leptocito de tiro al blanco, o células en diana o dianocitos, codocitos o sombrero mejicano. Son eritrocitos en forma de taza, con una zona central densa de hemoglobina separada de un área hemoglobinizada periférica por una zona pálida. Aparecen en pacientes con anemia hipocrómica, hepatopatía colestásica, depresión de la medula ósea y después de esplenectomías.

7. Ovalocitos ( eliptocitos ). Son eritrocitos con una forma oval o elíptica o forma de cigarro. Se pueden observar en anemia, en leucemia linfocítica y en desórdenes mieloproliferativos.

8. Queratocitos. Son eritrocitos con una o más proyecciones puntiagudas a manera de cuernos y una superficie algo aplanada o ligeramente hundida entre dichas proyecciones. Las espículas se pueden formar de la ruptura de una vacuola que aparece cerca de la superficie celular o del trauma al atravesar las redes de fibrina.





Inclusiones en eritrocitos

1. Reticulocitos. Son eritrocitos inmaduros anucleados. Retienen una fina red de retículo endoplásmico que se tiñe con colorantes reticulocitarios como el nuevo azul de metileno. Con tinción de Wright los reticulocitos son policromáticos.

Estas células inmaduras son ligeramente más grandes que un eritrocito maduro y circulan normalmente en número reducido. Valores reducidos de reticulocitos circulantes aparecen en anemias hemorrágicas o hemolíticas agudas en la fase de recuperación con respuesta eritropoyética de la medula ósea. El tiempo necesario para la liberación a la circulación de un número elevado de reticulocitos en una anemia es de 3 a 4 días con valores máximos entre el 5 y el 7 día.

Una ausencia persistente de reticulocitos en sangre periférica de un animal anémico después de una terapia adecuada puede indicar depresión de la medula ósea y generalmente es de mal pronóstico..

La reticulocitosis sin evidencia de anemia puede indicar disminución de la oxigenación de la sangre, lo que produce aumento de los niveles de eritropoyetina .

Generalmente se realiza una estimación contando el número de reticulocitos por 100 eritrocitos.

Recuento de reticulocitos

Perros Gatos





Sin respuesta a la anemia < 1% < 1%

Respuesta ligera 2-4 % 1-2 %

Respuesta moderada 5-20 % 3-4 %

Respuesta marcada > 20 % > 5 %

2. Basofilia punteada o punteado basófilo se caracteriza por la aparición de agregaciones punteadas de material azul oscuro en la forma de gran número de gránulos finos o gruesos en los eritrocitos¸éstos se pueden colorear normalmente o pueden presentar policromatofilia. La basofilia punteada puede aparecer en algunos glóbulos rojos nucleados.

El punteado basófilo se puede producir en la anemia regenerativa; un número elevado de eritrocitos con punteado basófilo y un aumento desproporcionado de eritrocitos nucleados para una anemia indican intoxicación por plomo ; tambien el aumento del punteado basófilo sin reticulocitos es indicativo de intoxicación por plomo.

3. Basofilia difusa. Se caracteriza por un color azuloso combinado homogeneamente con el color rosado de los eritrocitos; después que el meta-rubricito pierde su núcleo permanece en el citoplasma una pequeña cantidad de sustancia basófila , que es característica de esta forma inmadura y está compuesta de RNA y de protoporfirina.

Cuando la distribución de la coloración azulosa homogénea aparece en forma de zonas irregulares entremezcladas con el color rosado normal se le denomina como policromatofilia. La presencia de eritrocitos con basofilia difusa es indicativa de eritropoyesis activa y de respuesta regenerativa a la anemia.





4. Cuerpos de Howell-Jolly. Son restos de material nuclear después que el núcleo ha sido extruído. Es una inclusión esférica rojo azulosa, de tamaño variable dentro de los eritrocitos, a veces aparecen dos.

Los cuerpos de Howell-Jolly son frecuentes en la anemia regenerativa y en animales esplenectomizados. En gatos sanos, más de 1 % de los eritrocitos pueden contener cuerpos de Howell-Jolly. En perros sometidos a terapia continua con corticosteroides aparece un número elevado de eritrocitos con estos cuerpos y con menor frecuencia eritrocitos nucleados, probablemente debido a una supresión de la función esplénica inducida por los corticosteroides.

5. Glóbulos rojos nucleados. Los hematíes nucleados son más grandes e inmaduros que los reticulocitos y los eritrocitos maduros. Los eritrocitos nucleados que aparecen anormalmente en la circulación pueden ser meta-rubricitos o células más jóvenes como rubricitos y se presentan en respuesta a una anemia hemorrágica o hemolítica agudas. La presencia de eritrocitos nucleados sin anemia o reticulocitosis concurrentes se observa en la enfermedad esplénica, en esplenectomía, en la hematopoyesis extramedular, en la intoxicación por plomo, en el hiperadrenocorticismo, en la leucemia, en la mielosis eritrémica del gato.

6. Anillos de Cabot. Son rastros de membrana nuclear dentro del eritrocito. Se presentan en anemias regenerativas severas.

7. Cuerpos de Heinz. Los cuerpos de Heinz, tambien llamados cuerpos eritrocíticos refringentes o cuerpos de Schmauch son pequeños elementos refringentes y excéntricos que aparecen en el interior de los eritrocitos; están constituidos por hemoglobina precipitada por fármacos oxidantes, toxinas vegetales o productos químicos. Los eritrocitos del gato son especialmente propensos a la formación de cuerpos de Heinz que pueden aparecer en algunos eritrocitos como una respuesta natural al envejecimiento de éstos.

Los cuerpos de Heinz pueden verse con facilidad en frotis teñidos con colorantes vitales como el nuevo azul de metileno, con este colorante se ven como cuerpos azulados, redondos y refringentes junto al borde de una célula o haciendo prominencia.





Causas de formación de cuerpos de Heinz : empleo de paracetamol, acetaminofen, azul de metileno como acidificantes de la orina y acuarios domésticos (en gatos); consumo de cebolla, administración prolongada de prednisolona en perros, benzocaína, esplenectomía, fenazopiridina, nitrofurantoína.

HEMOPATOLOGÍA

Desordenes de los eritrocitos

a) ANEMIAS.

La anemia se define como una disminución en el número de los eritrocitos, en la hemoglobina o de ambos en la sangre circulante.

La anemia es el desorden más común de los eritrocitos. La anemia ocurre debido a una pérdida excesiva de sangre (hemorragia), o por destrucción (hemólisis) o por producción disminuida de eritrocitos.

Todas las anemias se deberán identificar por la etiología hasta donde sea posible, debido a que el término anemia por si no constituye un diagnóstico.

Los signos clínicos que sugieren anemia se relacionan con la reducción en la capacidad del transporte de O2 y los ajustes fisiológicos para aumentar la eficiencia del eritrón y reducir el trabajo cardiaco.

Ellos incluyen: mucosas pálidas, debilidad y pérdida de vigor, intolerancia al ejercicio, taquicardia y polipnea, especialmente después del ejercicio, sensibilidad al frío; murmullo cardiaco debido a la viscosidad reducida y turbulencia aumentada de la sangre, puede haber shock, si se pierde 1/3 del volumen sanguíneo en poco tiempo. Dependiendo del mecanismo patofisiológico involucrado puede haber ictericia, hemoglobinuria, hemorragia o fiebre.

Los signos son menos marcados si la aparición es gradual y el animal se puede adaptar a un eritrón reducido. Debido a que no siempre están presentes los síntomas clínicos diagnósticos, es necesaria la confirmación por laboratorio, con frecuencia estos exámenes hechos en forma rutinaria en un animal enfermo descubren una anemia no sospechada.





1. CLASIFICACIÓN DE LAS ANEMIAS.

Las anemias se clasifican de varias maneras para determinar los posibles mecanismos patofisiológicos y reducir las causas probables en la investigación del diagnóstico etiológico.

Se han propuesto varias clasificaciones para las anemias, las más aceptadas son:

Clasificación morfológica o anemias morfológicas

Clasificación según la respuesta de la medula ósea

Clasificación etiológica

CLASIFICACION MORFOLOGICA

Las anemias se clasifican morfológicamente sobre la base del tamaño y contenido de hemoglobina de los eritrocitos, utilizando el VCM y la CMHC, para obtener estos datos se necesitan los resultados de laboratorio de hematocrito, hemoglobina y conteo de eritrocitos los cuales deben ser lo más exactos posibles para obtener los índices eritrocíticos confiables.

El siguiente esbozo indica las principales clases de anemias morfológicas, con algunas de las etiologías más comunes:

Anemias macrocíticas.

Anemia macrocítica normocrómica. Se pueden presentar debido a:

Deficiencia de cobalto (deficiencia de Vitamina B12) y de ácido fólico (puede presentarse en síndrome de malabsorción)

Porfiria congénita

Desórdenes mieloproliferativos en gato por el VLFe: mielosis eritrémica.

Enfermedades severas del hígado

Esplenectomía.

Anemia macrocítica hipocrómica.

Esta anemia es una condición transitoria que se observa durante la remisión en anemias hemorrágicas o hemolíticas agudas. La reticulocitosis en respuesta a la anemia contribuye a un aumento de VCM y a una disminución de la CMHC.

Puede presentarse en:

Hemorragias agudas en fase de recuperación, de diferentes causas ej.: intoxicación por trébol dulce, traumas, cirugías, etc.





Anemias hemolíticas agudas: hemoglobinuria bacilar, leptospirosis, hemoglobinuria post-parto, anaplasmosis, babesiosis, tripanosomiasis etc.

Anemias normocíticas.

Anemia normocítica normocrómica.

Ocurre cuando hay depresión selectiva de la eritrogénesis en enfermedades crónicas: infecciones, nefritis con uremia, neoplasias, ciertas enfermedades endocrinas. En esos casos la respuesta de los reticulocitos está ausente o es insignificante; puede ser debida a deficiencia en la elaboración de eritropoyetina, depresión de la medula ósea o utilización defectuosa del hierro.

Anemia normocítica hipocrómica

Infección por gusanos gástricos, excluyendo al Haemonchus que causa pérdida de sangre.

Leucemia u otro reemplazo de la medula ósea (mieloptisis).

Anemias microcíticas.

Anemia microcítica normocrómica

Es producida por anemia hipoplástica y por lesiones de la medula ósea por radiación, envenenamiento por tricloroetileno, helechos y algunas drogas.

Anemia microcítica hipocrómica.

Casi siempre es una anemia asociada a una deficiencia, o a la falta de hierro o a una falla de la capacidad de usar el hierro. El grado de los cambios en la morfología de los eritrocitos depende de la duración y severidad de la anemia; es la única anemia en la cual se reduce la CMHC a un nivel inferior del 30 %.

Causas:

Deficiencia de vitamina B 6 (piridoxina).

Deficiencia de hierro por pérdida crónica de sangre (úlceras, deficiencia de coagulación etc.); por falta de hierro en la dieta (anemia de los lechones); por parásitos hematófagos (Haemonchus, Strongylus, Ancylostoma, Uncinaria, garrapatas, piojos, pulgas etc.)

Defectos en el uso del hierro, por deficiencia de cobre en: deficiencia de cobre en la dieta; intoxicación por molibdeno que interfiere en la absorción del cobre. Hay deficiencia en la producción de ceruloplasmina, es una proteína que contiene cobre, es sintetizada en el hígado y es necesaria para la transferencia del hierro desde las células epiteliales intestinales y retículo-endoteliales a la transferrina.




LABORATORIO CLINICO VETERINARIO –SEPTIMO SEMESTRE-UNIVERSIDAD DE LA AMAZONIA - CLASIFICACION SEGÚN RESPUESTA DE LA MEDULA OSEA.

Basada en la respuesta eritropoyética de la medula ósea evidente en la sangre periférica, las anemias se clasifican como : regenerativas o respondedoras y no regenerativas o no respondedoras.

La separación de las anemias en una de estas dos clases es el primer y más importante paso en la clasificación debido a que se reducen las posibilidades diagnósticas.

Anemia regenerativa

Los animales adultos con anemias debidas a destrucción de eritrocitos o pérdida de sangre tiene una medula ósea normal y pueden responder de una manera completa y fuerte a la anemia. Más de 500.000 reticulocitos/ uL frecuentemente ocurren en perros con anemias hemolíticas, hemorragias internas o hemorragias externas recientes, por lo menos de 2-3 días de duración para una respuesta regenerativa evidente en la sangre periférica.

La habilidad de la medula ósea para responder indica que el estado patológico primario es extramedular. El examen de la medula ósea rara vez es necesario para detectar la regeneración; será evidente la hiperplasia eritropoyética en la medula ósea; el examen de ésta es el mejor medio para detectar anemia regenerativa en equinos debido a que ellos n o desarrollan reticulocitosis.

Los hallazgos que denotan regeneración son policromasia, reticulocitosis, eritrocitos nucleados, cuerpos de Howell Jolly, punteado basófilo y la medula hipercelular.

Anemia no regenerativa.

La medula ósea no puede responder al estado anémico; el efecto patológico primario reside en la medula ósea; el examen de ésta está indicado para confirmar y clasificar la anemia. La policromasia y reticulocitosis están ausentes.

Las anemias no regenerativas no son muy bien entendidas como las regenerativas, puesto que los mecanismos de las no regenerativas son generalmente complejos.

La anemia no regenerativa es un problema secundario a otras afecciones y el esfuerzo diagnóstico se debe orientar a las enfermedades primarias tales como: neoplasias, enfermedad hepática o renal o inflamación crónicas, o anemia de función endocrina disminuída (hipotiroidismo, hipoadrenocorticismo).

Para el abordaje diagnóstico, es importante detectar el número de líneas celulares deplecionadas en el hemograma para hacer la primera diferenciación. Una pancitopenia o bicitopenia usualmente indican enfermedad de la medula ósea, la cual es mejor diagnosticada por examen de biopsia o aspirado de medula. Si los eritrocitos son el único tipo de células disminuidas, el índice de eritrocitos y evaluación del frotis sanguíneo usualmente identifican uno de los 3 tipos de anemias no regenerativas: microcítica hipocrómica, macrocítica normocrómica o normocítica normocrómica

La anemia microcítica hipocrómica generalmente es debida a deficiencia de hierro.




LABORATORIO CLINICO VETERINARIO –SEPTIMO SEMESTRE-UNIVERSIDAD DE LA AMAZONIA La anemia macrocítica normocrómica sin reticulocitosis en gatos con frecuencia está asociada al VLFe (mielosis eritrémica); en perros se puede presentar por deficiencia de vitamina B12 o folato que pueden ser debidas a problemas de malabsorción o por el uso de algunos medicamentos como fenitoína y metotrexate que son antagonistas del folato; hay macrocitosis familiar en los poodles y malabsorción selectiva de cobalamina en schnauzers gigantes.

Las anemias normocíticas son las más comunes de las anemias no regenerativas; si son persistentes y suficientemente severas es necesario hacer una evaluación de la medula ósea. Se presentan en inflamación crónica, enfermedad renal, hepática o por función endocrina disminuida.

- CLASIFICACION ETIOLOGICA DE LAS ANEMIAS.

De acuerdo a la etiología las anemias se pueden clasificar en cuatro categorías:

_ Por pérdida de sangre (anemia hemorrágica).

_ Destrucción excesiva de eritrocitos (anemia hemolítica).

_ Depresión de la medula ósea (anemia hipoplástica o aplástica).

_ Deficiencia nutricional (anemia nutricional).

.- Anemias por pérdida de sangre.

Estas usualmente se asocian con hemorragias agudas, subagudas o crónicas; también pueden ser hemorrágias externas o internas.

Anemia aguda: hay una pérdida significativa de sangre en pocos minutos o en varias horas.

La anemia aguda ocurre después de una lesión traumática o una intervención quirúrgica, úlceras del tracto gastrointestinal; por procesos patológicos con daño de la pared vascular como ruptura de grandes vasos (ej: mesentéricos); ruptura de una neoplasia friable (ej: hemangiosarcoma esplénico).

Defectos hemostáticos como envenenamiento por helecho y heno de trébol dulce (dicumarol) en bovinos, intoxicación por warfarina, aflatoxinas.

Coagulación intravascular diseminada. Trombocitopenia. Deficiencia de vitamina K o deficiencia del factor X en cachorros.

Parásitos: Haemonchus, Ancylostoma, Uncinaria, Strongylus, coccidias.

Anemias crónicas: se deben a una remoción periódica de una pequeña cantidad de sangre de forma continua la cual no es compensada en un animal.

Como causas se pueden citar: Lesiones gastrointestinales: neoplasias particularmente leiomiomas; úlceras, coccidias.

Neoplasias con hemorragia en cavidades y tejidos corporales: hemangiosarcoma en el perro.




LABORATORIO CLINICO VETERINARIO –SEPTIMO SEMESTRE-UNIVERSIDAD DE LA AMAZONIA Desórdenes de la coagulación: deficiencia de vitamina K y protrombina, hemofilia A en perros. Trombocitopenia.

Parásitos: garrapatas, piojos succionadores de sangre, pulgas, gusanos ganchudos, Haemonchus, Strongylus.

Hematuria.

Características de hemorragia aguda.

Los signos clínicos dependen de la cantidad de sangre perdida, período de tiempo durante el cual ocurre la hemorragia y el sitio de la hemorragia.

Inicialmente el PCV será normal debido a que los componentes sanguíneos (células y plasma) se pierden en proporciones similares; el animal puede estar en shock hipovolémico.

La contracción esplénica libera sangre de alto PCV (80 %) a la circulación y puede transitoriamente elevar el PCV periférico.

El número de plaquetas generalmente aumenta durante las siguientes horas; ellas pueden disminuir si hay consumo abundante por excesiva coagulación.

Hay con frecuencia leucocitosis neutrofílica unas 3 horas post-hemorragia.

El volumen sanguíneo es restaurado por la adición de líquido intersticial hacia las 2 – 3 horas después de la hemorragia y hasta por 48 – 72 horas. Esto produce dilución del eritrón y los signos de anemia, los hallazgos de laboratorio (PCV, eritrocitos y hemoglobina ) están disminuidos. La concentración de PPT está también disminuida.

Los signos de producción eritrocítica aumentada (policromasia, reticulocitosis) se hace evidente hacia las 48 – 72 horas y alcanzará un máximo al séptimo día post-hemorragia.

Hay hiperplasia eritroide en la medula ósea y precede a la anterior.

La disponibilidad del hierro determina la magnitud de la reticulocitosis. El número de reticulocitos es de 4 – 5 veces lo normal en casos de hemorragia aguda debido a la lenta liberación del hierro de los depósitos.

La reticulocitosis es usualmente mayor en anemias hemolíticas debido a que el hierro de las células hemolizadas es reutilizado directamente

La reticulocitosis es mayor en hemorragias internas que en las externas por la misma razón.

El hemograma regresa a lo normal en 1 a 2 semanas después de un solo episodio hemorrágico agudo. Si la reticulocitosis persiste por más de 2 – 3 semanas se sospechará que la hemorragia continúa.

Características de la hemorragia crónica.





La anemia se desarrolla lentamente y no hay hipovolemia.

El PCV puede alcanzar valores bajos antes que los signos clínicos de la anemia lleguen a ser obvios debido a que la lenta aparición permite la adaptación fisiológica.

Generalmente se observa una respuesta regenerativa e hipoproteinemia.

Las reservas de hierro pueden deplecionarse y hay una anemia por falta de hierro caracterizada por hierro sérico bajo, capacidad de enlace del hierro total aumentado, ausencia de hierro en el SRE de la medula ósea y con frecuencia hay microcitosis e hipocromia.; los signos regenerativos son menos evidentes; en este estado es frecuente la poiquilocitosis.

La anemia por deficiencia de hierro se desarrolla más rápido en jóvenes, animales de rápido crecimiento debido a que tienen menos reservas de hierro.

En casos prolongados de hemorragia crónica y pérdida de hierro la respuesta de la medula ósea puede terminar abruptamente y causar una anemia no regenerativa por deficiencia de hierro.

Rasgos diferenciales entre hemorragia externa e interna.

La hemorragia externa impide la reutilización de ciertos componentes (hierro, proteínas plasmáticas); en la hemorragia interna pueden ser reabsorbidos.

Aproximadamente 2/3 de los eritrocitos en las cavidades corporales son reabsorbidos por los linfáticos en 24 – 72 horas y 1/3 son lisados o fagocitados; el hierro y las proteínas plasmáticas son reutilizados.

Anemias por destrucción excesiva de eritrocitos.

Las anemias hemolíticas resultan principalmente de una destrucción aumentada de eritrocitos o por un período de vida disminuido de ellos, destrucción que puede ser intravascular o extravascular.

Pueden ser causadas por una variedad de enfermedades: parásitos sanguíneos, infecciones bacterianas y virales, agentes químicos, plantas venenosas, enfermedades metabólicas y reacciones inmunomediadas.

Anemias hemolíticas causadas por hemoparásitos (protozoarios y ricketsiales)

Anaplasmosis. Es una enfermedad infecciosa de bovinos, ovejas, cabras y algunos rumiantes salvajes (venados, antílopes, búfalos) causada por varias especies de Anaplasma, un organismo ricketsial. Es un parásito intra-eritrocítico obligado y extremadamente huésped específico.

Los agentes causales de la anaplasmosis en bovinos son: Anaplasma marginale, A. centrale,





Paranaplasma caudatum y P. discoides; en la oveja y cabra: A. ovis.

En los bovinos el Anaplasma marginale es el más frecuente y el más patógeno, mientras que el A. centrale causa una enfermedad clínica y anemia leves. El A. ovis es poco patógeno.

La anaplasmosis es endémica en la mayoría de áreas tropicales en todo el mundo. La enfermedad puede ocurrir en forma aguda, subaguda o crónica. Durante la fase aguda de la enfermedad hay una parasitemia marcada, mientras que durante el estado portador puede detectarse un nivel bajo de infección, que puede durar de meses a años.

La anemia en la anaplasmosis resulta principalmente de la destrucción extravascular de los eritrocitos parasitados, por fagocitosis en el bazo y medula ósea, no hay hemoglobinemia ni hemoglobinuria.

Babesiosis.

Es producida por parásitos protozoarios, pertenecen a la familia Babesiidae, orden Piroplasmida, se presentan dentro de los eritrocitos de los vertebrados y causan anemia hemolítica.

La babesiosis en bovinos es causada por B. bigemina, B. bovis, (B. argentina), B. major y B. divergens; las dos primeras son las más importantes económicamente

En equinos (caballos, mulas, asnos y cebras): B. equi y B. caballi.

En perros: B. canis y B. gibsoni.

En ovejas y cabras: B. ovis y B. motasi.

En cerdos: B trautmani y B. perroncitoi.

En gatos: B. felis.

En los eritrocitos las babesias se observan en forma de gota, algunas veces se ven formas redondeadas, ovales, anulares. Estos parásitos con frecuencia se presentan en pares en una sola célula, sin embargo se pueden encontrar de 1 a 4 formas individuales por célula.

Hemobartonelosis.

Es producida por el parásito sanguíneo del género Haemobartonella; se observa sobre los eritrocitos como cocos pequeños o bacilos pequeños en cadena o anillos delicados. Afecta el gato, perro y bovinos.

Hemobartonelosis en gatos (Anemia infecciosa felina).

Es producida por H. felis. Los organismos pueden aparecer solos, en pares, en un pequeño grupo, o como cadenas cortas de cuerpos cocoides adheridos a los eritrocitos.





La hemobartonelosis en gatos es una enfermedad que se presenta en forma aguda, subaguda o crónica. En la forma aguda hay temperatura elevada, anemia hemolítica intensa, anorexia, depresión y pérdida de peso. El diagnóstico se hace por frotis sanguíneo generalmente.

Hemobartonelosis en perros.

Es producida por H. canis la cual se puede encontrar en perros normales, pero es rara vez patógena para un perro no esplenoctomizadc. La infección se puede contraer por transfusiones de donantes infectados o por garrapatas.

La enfermedad es de distribución mundial; rara vez causa franca enfermedad en perros sanos; éstos exhiben parásitos solo después de la esplenectomía. Anemia y malestar graves se ven si la infección es concurrente con B canis en áreas donde ésta no causaría por sí sola grave morbilidad.

Eperitrozoonosis.

Es una enfermedad de los cerdos, bovinos, ovejas y algunos animales de laboratorio (ratones afectados por E. muris.)

Los parásitos Eperythrozoon teñidos con Giemsa se ven como cuerpos de color rosado púrpura, en forma de anillo, ovales, de coma, de raqueta, bastones o arco de violín, con un tamaño de 0.3 – 1.5 um (al igual que la Haemobartonella); en un mismo eritrocito se pueden ver de 1 a 50 o 60 parásitos, ya sea dispersos regularmente formando cadenas o grupos; también pueden verse en la periferia de la célula los cuales se tiñen en forma más intensa que los colocados en el interior de ella.

Entre los animales mencionados el más seriamente afectado es el cerdo (E. suis y E. parvum), la enfermedad puede aparecer en forma hiperaguda, aguda y subaguda en cerdos jóvenes; hay fiebre alta (41 - 42 C), depresión, anorexia, debilidad muscular, anemia e ictericia. El parásito es tra nsmitido al cerdo por el piojo Haematopinus suis; la enfermedad subclínica no produce anemia marcada pero reduce la ganancia de peso. El E. wenyoni afecta a los bovinos; la infección es típicamente latente, pero se encuentra clínicamente en animales esplenectomizados o enfermos por otras causas.

Las ovejas son afectadas por el E. ovis, la cual puede producir un síndrome clínico de anemia en condiciones naturales.

Teileriasis.

Es causada por un pequeño parásito protozoario del género Theileria, que infecta los linfocitos y eritrocitos de rumiantes especialmente bovinos, ovejas y cabras; la infección es transmitida por artrópodos hematófagos especialmente garrapatas de la familia Ixodidae.

Hay varias especies de Theileria, pero T. parva es la más importante económicamente y es la causa de la enfermedad: Fiebre de la Costa del Este de los bovinos en el Africa Oriental y Central; produce una mortalidad del 100 % en animales susceptibles.





La enfermedad se caracteriza por fiebre de duración variable, tumefacción de los ganglios linfáticos superficiales, anorexia, lagrimeo, descarga nasal, depresión y diarrea con heces sanguinolentas; hay anemia que puede o no ser significativa, hay leucopenia marcada.

Otras especies de Theileria son: T. annulata, T. mutans, T. ovis, T. hirci.

Tripanosomiasis.

Los tripanosomas son protozoarios flagelados que aparecen en la sangre de toda clase de vertebrados. Muchas especies de tripanosomas infectan los animales sin ninguna especificidad de huésped; así que un tripanosoma en particular puede infectar varias especies animales, y más de una especie de tripanosoma se puede encontrar en el mismo animal.

Algunos tripanosomas importantes de los animales incluyen: T . congolense, T . vivax, T . brucei, T . evansi: infectan bovinos. T. suis infecta a los cerdos. T . Equiperdum. T. equinum, T. hippicum infectan a equinos; T. cruzi, T. evansi, T. brucei afecta al perro. Los animales salvajes sirven como reservorios y la transmisión la hacen insectos y artrópodos vectores.

La crisis hemolítica es por eritrofagocitosis, hay disminución del período de vida del eritrocito y es atribuida a efectos enzimáticos del parásito y mecanismos inmunes.

Citauxzoonosis en gatos.

Es producida por un hematozoario, el Cytauxzoon felis. Los signos clínicos son letargo, anorexia, mucosas pálidas e ictericia, fiebre, deshidratación; los gatos mueren en pocos días después de la evidencia clínica de la enfermedad.

Anemias hemolíticas producidas por bacterias.

Leptospirosis.

Una anemia hemolítica en terneros y corderos puede ser causada por la Leptospira. La enfermedad en bovinos y cerdos es causada por L . pomona, L . grippothyphosa, L. icterohaemohrragiae y L. canicola En ovejas es causada por las primeras dos y L. hardjo la cual puede causar una infección ligera en bovinos. La leptospira es eliminada en la orina y transmitida por contacto con gotas de orina.

Los signos clínicos son variables. En terneros, vacas y corderos la ictericia y la hemoglobinuria son bastante comunes y ocurren de 4 a 8 días post.infección junto con fiebre. La leptospirosis en vacunos produce leucopenia debido a la linfopenia y/o neutropenia, hay también





trombocitopenia como rasgo constante. La diátesis hemorrágica es una de las manifestaciones constantes en leptospirosis aguda.

Los signos clínicos de leptospirosis en perros varían de acuerdo a la forma de la enfermedad (leve a septicémica) e incluye fiebre (41 – 42 C), depresión, anorexia, vómito y sed aumentada. Los hallazgos hematológicos y otros hallazgos varían con la severidad de la enfermedad. Se han descrito anemia de moderada a marcada, ictericia y hemoglobinuria. La infección con L. canicola no es comúnmente asociada con proceso hemolítico, pero cuando la infección es debida a L. icterohaemorrhagiae se presenta crisis hemolítica y hemoglobinuria. Puede haber coinfección.

En los perros hay aumento de la VSE y una leucocitosis moderada (35000 leucocitos/ uL) con predominio de neutrofilia con desviación a la izquierda; el urianálisis revela una nefritis marcada.

Los cerdos son portadores asintomáticos de la leptospira, en algunos casos produce aborto y constituye una fuente de contaminación para otras especies animales.

Hemoglobinuria bacilar.

Es una enfermedad infecciosa producida por Clostridium novyi tipo D (anteriormente C. hemolyticum) en ovejas y bovinos, caracterizada por aparición súbita, fiebre alta, anorexia, depresión, hemólisis rápida, hemoglobinuria, descarga nasal rojiza y algunas veces muerte rápida. Hay pérdida brusca del apetito., cesan la lactancia, la rumiación y los movimientos intestinales. Se aislan del resto de la manada, dorso arqueado, abdomen hundido; dificultad para moverse; respiración superficial y dolorosa, heces hipercólicas o sanguinolentas, hay grave enteritis hemorrágica. La mortalidad puede ser del 90 – 95 %.

La lesión más característica es el infarto en el hígado, formado por una masa de tejido necrótico, suele ser moteado y de color más claro que el tejido hepático normal que lo rodea.

La enfermedad se disemina por ingestión de esporas con agua y alimentos contaminados, es más probable que ocurra en pasturas donde hay poco drenaje. Las esporas migran al hígado, donde germinan y producen toxinas bajo condiciones favorables como necrosis hepática por migración de fasciolas o intoxicaciones o congestión hepática severa.; el microorganismo produce una toxina altamente letal la cual degrada la lecitina y produce marcada destrucción intravascular de eritrocitos y también ejerce un efecto hepatotóxico.

Anemia hemolítica por infecciones virales.

Anemia equina infecciosa.

Es una enfermedad producida por un virus de la familia Retroviridae, género Lentivirus, afecta los équidos; se presenta en formas agudas y subaguda en caballos altamente susceptibles, pero con mayor frecuencia asume un curso crónico.

Tiene un período de incubación de 14 – 21 días y se caracteriza por presentaciones cíclicas de fiebre, debilidad y anemia. Los equinos que tienen una recuperación aparente pueden





permanecer portadores del virus por muchos meses y años y en algunos casos por toda su vida. La transmisión puede ocurrir mecánicamente a través de insectos hematófagos, especialmente tabanidos, o instrumentos quirúrgicos o agujas hipodérmicas sin desinfectar. Pueden suceder severas recaídas en animales portadores como resultado de enfermedades intercurrentes o condiciones que llevan al stress.

Son signos sugestivos de AEI fiebre intermitente, debilidad, emaciación, palidez, ictericia y edema de las partes declives del cuerpo, además pueden haber hemorragias petequiales y equimóticas en las mucosas y linfadenopatía.

Anemias hemolíticas producidas por algunas drogas y agentes químicos.

La lista de químicos y drogas que pueden causar anemia hemolítica es larga e incluyen: cobre, plomo, fenotiazina, azul de metileno, saponinas, naftaleno y ciertas drogas como nitrofurantoína, fenacetina y algunas sulfas.

Intoxicación por cobre.

Las ovejas son especialmente sensibles al desarrollo de crisis hemolíticas bajo condiciones de stress cuando el hígado tiene un alto contenido de cobre; el cobre se acumula en el hígado de animales que lo reciben en baños o se alimentan con forrajes contaminados con cobre o ciertas plantas que tienen alto contenido de cobre; esta acumulación ocurre por un período prolongado durante el cual los animales son asintomáticos; en condiciones de stress (como viajes largos, ayuno prolongado, exposición al frío, ejercicio no acostumbrado) el cobre es liberado a la circulación sanguínea produciendo la hemólisis de eritrocitos.

Hay crisis hemolítica aguda con hemoglobinemia y hemoglobinuria como hallazgos importantes, hay dificultad respiratoria, anorexia y debilidad extrema y puede ocurrir la muerte en 24 – 48 horas.

Intoxicación por plomo.

Puede ser aguda o crónica, pero la anemia es evidente solo al final. Los perros son altamente sensibles, especialmente los jóvenes, mientras que los bovinos, caballos y ovejas son menos susceptibles y los cerdos son relativamente resistentes a la intoxicación por plomo.

Los signos clínicos de la intoxicación por plomo en el perro comunmente se asemejan al de otras enfermedades y se pueden confundir con los del complejo del moquillo, hepatitis infecciosa y desórdenes gastrointestinales. Aunque la intoxicación por plomo puede ocurrir en perros de cualquier edad, se desarrolla con más frecuencia en animales jóvenes (< de 1 año de edad) debido al hábito de morder objetos de toda clase, algunos de los cuales pueden contener plomo o estar pintados con pinturas a base de plomo.

Los signos clínicos de la intoxicación por plomo se han dividido en: abdominales o gastrointestinales y nerviosos. Son manifestaciones frecuentes del plumbismo en el perro: el vómito, diarrea, cólico, dolor abdominal y desasosiego. El dolor en el área abdominal puede hacer que el perro gima o llore constantemente. Los signos del sistema nervioso incluyen irritabilidad, ladridos histéricos, convulsiones, tremor muscular, ceguera, masticación al vacío y





espumación por excesiva salivación, debilidad, letargo y ataxia. El perro pierde peso y no reconoce al dueño.

La intoxicación por plomo en el perro se sospechará por un examen de sangre que revela un número aumentado de eritrocitos policromáticos y eritrocitos nucleados aún sin haber anemia, el PCV puede estar dentro de lo normal. La anemia es común en el plumbismo crónico, pero con frecuencia no se presenta en la forma aguda; se observa basofilia punteada en eritrocitos nucleados y en eritrocitos maduros.

Anemias hemolíticas asociadas con cuerpos de Heinz.

Los cuerpos de Heinz son inclusiones intra-eritrocíticas que se producen después de la exposición a ciertas drogas que producen anemia hemolítica. Son gránulos altamente refráctiles, redondeados u ovales de tamaño variable, localizados cerca del margen de la célula o protuyendo de ella; estos cuerpos están formados por precipitación de hemoglobina desnaturalizada oxidada.

Algunas sustancias oxidantes como el azul de metileno y el acetaminofen en el gato, la fenotiazina en caballos y ovejas, o ingestión de materiales que contienen oxidantes como cebolla y hojas de maple rojo inducen la producción de cuerpos de Heinz.

La ingestión de la col rizada por bovinos, fenilhidrazina, fenazopiridina, benzocaína, nitrofurantoína, fenacetina. también pueden producir estos cuerpos. La presencia de excentrocitos es sugestiva de la exposición de los eritrocitos a alguna toxina oxidativa que lesiona la membrana con producción de cuerpos de Heinz.

Anemias hemolíticas producidas por algunas plantas.

La excesiva ingestión de algunas plantas o sus productos se ha encontrado en raras ocasiones que pueden producir anemia hemolítica, ellas incluyen: la higuerilla, col, cebolla silvestre, cólchico, ranúnculos, nabos congelados, retoños de encino, hojas de maple rojo.

Anemias hemolíticas asociadas con enfermedades metabólicas.

Hemoglobinuria post-parto.

La enfermedad se presenta en vacas de alta producción lechera, ocurre dentro de 2 – 3 semanas después del parto y se caracteriza por hemólisis intravascular con anemia y hemoglobinuria, las mucosas llegan a estar pálidas y más tarde ictéricas. Se considera que la enfermedad se debe a una deficiencia de fósforo inorgánico. La enfermedad también se puede presentar en búfalos de agua, en perros y gatos.

Anemias hemolíticas asociadas con defectos intra-eritrocíticos.

Deficiencia de piruvatoquinasa en el perro.

Se ha reportado una anemia hemolítica familiar en perros de la raza basenji, como una enfermedad genética autosómica recesiva causando una anemia hemolítica extravascular; se presenta principalmente en animales jóvenes de esa raza y otras razas como la West Highland blanco terrier o beagles.





El defecto es atribuido a una deficiencia de la enzima eritrocítica la piruvato quinasa (PK), el fosfoenol piruvato es el sustrato para la PK, el cual está bastante aumentado en los eritrocitos de los animales afectados, igualmente las otras enzimas del ciclo glicolítico. La deficiencia de la PK lleva a un metabolismo disminuido de la energía de los eritrocitos (disminuida utilización de glucosa y de producción de ATP) con una prematura destrucción de los eritrocitos.

Porfiria eritropoyética congénita.

Comunmente llamada enfermedad del diente rosado, es una enfermedad rara en bovinos debida a un error innato del metabolismo de la hemoglobina.

Se ha identificado como una deficiencia hereditaria de la enzima uroporfirinógeno III cosintetasa y se forman cantidades inadecuadas de protoporfirina III para la síntesis de hemoglobina, y cantidades anormales de uroporfirina y coproporfirina no utilizadas se acumulan en los huesos, dientes, tejidos y órganos y se produce el síndrome clínico.

Los terneros con porfiria congénita no crecen normalmente y las partes blancas del cuerpo están sujetas a fotosensibilización cuando son expuestas a la luz solar. Los animales están débiles y adquieren una condición pobre y desarrollan fotofobia y dermatitis, la orina está pigmentada de pardo rojizo por la uroporfirina, los dientes y huesos son pardo rojizos, cuando son expuestos a la luz ultravioleta producen una fluorescencia rosada.

En esta enfermedad hay inhabilidad para producir cantidades normales de hemoglobina, dependiendo del grado del defecto, la anemia varía en intensidad entre los individuos.

Anemias hemolíticas inmunomediadas.

Anemia hemolítica inmunomediada.

Son relativamente frecuentes, especialmente en perros, rara vez en equinos; es una consecuencia de una destrucción acelerada de eritrocitos por producción de suficientes anticuerpos o complemento que los recubren y son destruidos por los macrófagos.

En esta alteración se pueden presentar también trombocitopenia, la cual puede llevar a doble complicación debido a que los eritrocitos se escapan por diapédesis a través del endotelio capilar y a que también son destruidos por el sistema fagocítico mononuclear, además de ésto puede haber glomerulonefritis de origen inmune.

La anemia hemolítica inmunomediada puede ocurrir como un desorden de origen primario (idiopático), o se puede presentar asociado con otras enfermedades o condiciones, como enfermedades bacterianas (Clostridium perfringens, Streptococcus), virales (VLFe), ricketsiales (ej: Haemobartonella, Anaplasma) o por protozoarios ( Babesia), hepatopatías.

Los síntomas clínicos están relacionados con la enfermedad primaria y/o a la cantidad y naturaleza de los anticuerpos antieritrocíticos circulantes, y también son reflejo de la anemia, hemólisis, trombocitopenia y cianosis de las extremidades (acrocianosis) cuando están





involucradas las aglutininas frías; la anemia hemolítica puede tener una aparición hiperaguda o aguda, o más comúnmente puede ser crónica con una o más recaídas en el curso de semanas o meses.

El mecanismo de destrucción de los eritrocitos principalmente es por eritrofagocitosis por los macrófagos particularmente del bazo, como resultado del recubrimiento de los eritrocitos por anticuerpos (Ig G) y/o fijación del componente C3 del complemento; la eritrofagocitosis parcial se cree que es el resultado de la formación de esferocitos los cuales muestran fragilidad osmótica aumentada.

Isoeritrolisis neonatal o enfermedad hemolítica del recién nacido Ha sido reportada en potros y lechones. Los neonatos son normales al nacimiento, pero la hemólisis comienza en pocas horas después de la ingestión del calostro. Al principio las mucosas son pálidas, y luego se tornan ictéricas; hacia el segundo o tercer día puede haber hemoglobinuria; si el animal no muere la respuesta de la medula ósea es típica de una anemia hemolítica. El problema surge cuando la hembra es cubierta más de una vez por el mismo macho, de modo que los antígenos de los eritrocitos del macho son transmitidos a los eritrocitos del feto. La hembra desarrolla anticuerpos contra los eritrocitos fetales cuando ésta llega a ser sensibilizada por estos eritrocitos como resultado de una transferencia a través de la placenta.. El calostro entonces contiene los anticuerpos contra los eritrocitos del recién nacido. La vacunación de hembras con vacunas tisulares que contienen eritrocitos puede sensibilizar a la madre contra antígenos de los eritrocitos que pueden aparecer después en los eritrocitos del recién nacido, el cual al ingerir calostro que contiene anticuerpos contra los antígenos de sus eritrocitos pueden desarrollar anemia hemolítica.

Anemias hemolíticas de origen misceláneo.

Intoxicación por agua.

Los bovinos, particularmente terneros de 2 – 10 meses de edad pueden desarrollar hemoglobinuria por excesivo consumo de agua. Los terneros levantados con leche sin suplementación de agua pueden beber cantidades excesivas de agua, pudiendo morir en el lapso de 2 horas, o se pueden recuperar después de 2 días.

Los hallazgos hematológicos incluyen anemia hemolítica, PPT disminuidas y disminución de sodio, cloro séricos y la osmolalidad. Los signos clínicos son convulsiones, coma, dificultad respiratoria, hemoglobinuria y muerte; la gravedad específica de la orina es baja.

Se cree que la excesiva ingestión de agua disminuye los niveles de los electrolitos sanguíneos e induce la destrucción de los eritrocitos.

Anemias por depresión de la medula ósea (anemias hipoplásticas o aplásticas)





Las anemias aplásticas se caracterizan por pancitopenia y hematopoyesis deprimida como resultado de una medula hipoplástica o aplástica. La depresión de la medula también puede expresarse como una “ unicitopenia “ (reducción de un solo componente de los elementos figurados de la sangre) ej: una aplasia pura de células rojas, o una bicitopenia ( reducción de dos componentes) ej: anemia y trombocitopenia. Tales cambios usualmente significan una pancitopenia inminente.

Las depresiones de la medula ósea, rara vez son de origen congénito, generalmente son adquiridas, producidas por agentes virales, toxinas bacterianas, radiaciones, químicos, anemias de desórdenes o enfermedades inflamatorias crónicas, enfermedad renal con uremia, enfermedad hepática, neoplasia, enfermedades endocrinas y parasitismos en vacunos y ovinos.

1. Agentes físicos.

La irradiación producida por rayos X, radio, isótopos radioactivos, como ondas electromagnéticas pueden producir depresión de la medula ósea. Esta depresión ocasiona anemia, granulocitopenia marcada, linfopenia, trombocitopenia. Aproximadamente en 3 semanas después de la irradiación se comienzan a formar nuevas células y habrá anemia macrocítica.

2. Agentes químicos.

Los alimentos como la torta de soya extraída con tricloroetileno, el benceno, las sulfas, fenilbutazona, los arsenicales, sales de bismuto, naftaleno, antibióticos como el cloranfenicol, estreptomicina, griseofulvina,

estrógenos están implicados en la producción de anemia aplástica. 3. Intoxicación por helecho común.

Esta es una enfermedad del ganado que sucede por consumo prolongado de helecho cuando otro forraje es escaso. Los signos clínicos no se desarrollan hasta después de 1 a 3 meses de consumo continuo de la planta. La enfermedad se caracteriza por temperatura alta, depresión, anorexia, hemorragia por las aberturas corporales y alta mortalidad.

Inicialmente hay trombocitopenia y leucopenia y posteriormente hay reducción en el recuento de eritrocitos.

4. Anemias secundarias a hipoplasia eritroide.

Las anemias secundarias a una variedad de enfermedades son probablemente el resultado de inhibición metabólica de la medula ósea por lesiones directas a las células primordiales o al microambiente

necesario para sostener la hematopoyesis o por sustitución del tejido medular por otro tipo de tejido. _ Anemia de inflamación crónica. Se ha atribuido a una variedad de causas como disminución del período de vida de los eritrocitos, falta de respuesta apropiada de la medula ósea a la eritropoyetina, o secuestro del hierro por los macrófagos los cuales durante la inflamación liberan interleucina- 1 o pirógeno endógeno de los leucocitos, el cual inicia varios procesos incluyendo la fiebre. La IL-1 hace que el hierro sea “ secuestrado “ en los macrófagos en una forma menos disponible y así reduce el hierro sérico y restringe la disponibilidad del hierro para el desarrollo de los rubricitos.




LABORATORIO CLINICO VETERINARIO –SEPTIMO SEMESTRE-UNIVERSIDAD DE LA AMAZONIA La anemia de este origen es probablemente la forma más común de anemia no regenerativa en el hombre y en el perro. Se desarrolla en asociación con muchas inflamaciones infecciosas, no infecciosas y neoplasias.

_ Enfermedad renal con uremia. En el perro está acompañada por una anemia normocítica normocrómica, el grado de anemia está directamente relacionada al grado de retención de sustancias nitrogenadas no proteicas.

La anemia de enfermedad renal es debida a producción inadecuada de eritrocitos, debido quizá a varios mecanismos patogénicos incluyendo producción disminuida de eritropoyetina debido al daño renal; producción de factores que inhiben la actividad eritropoyética por hipoplasia de la medula ósea como el ácido guanidosuccinico, fenoles, úrea, y disminuida supervivencia de los eritrocitos.

_ Enfermedad hepática crónica. En cirrosis y otras enfermedades hepáticas crónicas se observa una anemia normocítica normocrómica. La anemia de enfermedad hepática es debida a varios factores: cambios observados en los lípidos de la membrana de los eritrocitos (fosfolípidos y colesterol), a disminución del ATP intra-eritrocítico probablemente debido a una hipofosfatemia en la enfermedad hepática, lo que altera la forma normal de los eritrocitos promoviendo su lisis y acortamiento de la vida de ellos; hay deficiencia de una alfa globulina producida por el hígado que se une al factor renal eritropoyético para formar eritropoyetina activa; hay defectos en la coagulación por síntesis hepática reducida de factores de coagulación y puede haber hemorragia; puede haber anemia de inflamación crónica y la función hepática disminuida puede producir deficiencias de nutrientes necesarios para la hematopoyesis.

_ Enfermedades endocrinas. Tanto el hipotiroidismo, el hipopituitarismo, hipoadrenocorticismo en caninos, se puede presentar anemia debido a que las hormonas producidas normalmente en esos órganos tienden a facilitar la acción de la eritropoyetina, y algunas hormonas (tiroides) contribuyen a la absorción del hierro.

_ Enfermedades neoplásicas. Especialmente cuando son malignas causan una depresión selectiva de la eritrogénesis, hay pérdida de sangre, producción de anticuerpos antieritrocíticos. También se pueden presentar neoplasias que ocasionan mieloptisis como leucemia granulocitica, leucemia linfocítica, neoplasias metastásicas, mielofibrosis.

_ Algunas enfermedades infecciosas: como el virus de la leucemia felina, virus de panleucopenia felina, la Ehrlichia canis, que producen anemia por depresión de la medula ósea.

Los parásitos trichostrongiloideos de bovinos y ovinos (excepto Haemonchus) pueden producir una severa anemia normocítica normocrómica por depresión selectiva de la eritropoyesis.

Anemias por deficiencia nutricional.





Las deficiencias nutricionales prolongadas de proteinas y varios minerales y vitaminas esenciales para la producción de eritrocitos pueden ocasionar anemia tanto en humanos como animales.

1. Anemia por deficiencia de minerales.

Los principales minerales que pueden estar deficientes y que producen anemia son el hierro, el cobre y el cobalto.

_ Deficiencia de hierro. Se puede presentar por ingestión reducida de hierro en la dieta: en lechones criados en pisos de concreto, o cachorros y terneros alimentados únicamente con leche; animales que se alimentan en pasturas deficientes en hierro; falta de absorción del hierro debido a síndromes de malabsorción; y más frecuentemente, hay deficiencia de hierro en animales con hemorragias crónicas de diferentes causas.

_ Deficiencia de cobre. El cobre es un constituyente de varias enzimas importantes: superóxido de dismutasa, ácido delta aminolevulínico deshidrogenasa que juega un papel importante en la eritropoyesis. La deficiencia de cobre interfiere en el metabolismo del hierro y puede causar absorción disminuida, transferencia defectuosa del hierro, de los macrófagos y hepatocitos al plasma, e inhabilidad de los rubricitos para utilizar el hierro intracelular para la síntesis de hemoglobina.

_ Deficiencia de cobalto. Su deficiencia determina una limitación en la síntesis de la vitamina B 12.

2. Anemia por deficiencia de vitaminas.

_ Deficiencia de vitamina B 12. Se puede presentar por falta en la dieta, malabsorción, necesidad fisiológica aumentada (durante la preñez y período neonatal), enfermedad hepática, administración de algunas drogas anticonvulsivantes como difenilhidantoína, primidona, fenobarbital.

_ Niacina. En el perro el grado de síntesis del ácido fólico está bastante disminuido cuando la niacina está restringida.

_ Piridoxina (vitamina B 6). La vitamina B 6 se requiere para la eritropoyesis principalmente porque sirve como cofactor para la síntesis del ácido delta aminolevulínico.

B. POLICITEMIAS.

Se define como cualquier condición clínica que se caracteriza por un aumento anormal en el número de eritrocitos circulantes, generalmente se aumentan la cantidad de hemoglobina y el PCV.

1. POLICITEMIA RELATIVA O APARENTE O HEMOCONCENTRACION





La masa de eritrocitos puede ser normal o disminuida, pero como el volúmen plasmático está disminuido, el número de eritrocitos por unidad de volúmen de sangre está aumentado; la concentración de PPT está aumentada.

Los problemas cardiovasculares críticos son causados por la hiperviscosidad de la sangre hemoconcentrada y el bajo volumen del plasma en la policitemia relativa severa. Un aumento marcado de la vicosidad de la sangre ocurre cuando el PCV llega a ser = o > 60 % en el perro. Debido a la escasa perfusión del cerebro se pueden presentar signos neurológicos como convulsiones y colapso.

Causas de policitemia relativa:

a) Deshidratación: hay hemoconcentración como resultado de una disminución en el volumen del plasma, sin cambio considerable en la masa total de eritrocitos.

- Pérdida de líquidos corporales: por diarrea, vómito, fiebre y poliuria de imbalance electrolítico (en enfermedad de Cushing, diabetes mellitus, pancreatitis crónica), hemorragias agudas, sudoración profusa en caballos durante carreras de resistencia.

Supresión de agua o reducción de la ingestión de líquidos.

b) . Desviación de los líquidos corporales del plasma al tejido intersticial:

- Shock: el aumento de la hemoconcentración podría actuar como una señal de alarma que anuncia insuficiencia cardiaca.

- Shock quirúrgico.

- Shock abdominal: especialmente en caballos, su presentación es rápida, con acumulación de plasma en y alrededor del tejido afectado. Ocurre en torsión intestinal, intususcepción y vólvulos.

- Shock anafiláctico: hay aumento de la permeabilidad vascular con hemoconcentración.

- Quemaduras: puede haber hemoconcentración porque la porción de líquidos de la sangre sale hacia los tejidos.

- Aumento de la presión hidrostática en los capilares y venas en caso de insuficiencia circulatoria aguda.

2. POLICITEMIA TRANSITORIA.

El bazo actúa como reservorio de los eritrocitos en el perro, gato, caballo y oveja; bajo la influencia de la epinefrina se contrae para forzar los eritrocitos a la circulación; la concentración de las PPT no se ve afectada; junto con el aumento de eritrocitos se presenta el de leucocitos, pero sin formas inmaduras.

Causas:

- Ejercicio.




LABORATORIO CLINICO VETERINARIO –SEPTIMO SEMESTRE-UNIVERSIDAD DE LA AMAZONIA - Excitación, temor, dolor. Se observa con mayor frecuencia en caballos y gatos: Algunas razas de

perros individuales cuando se les examina pueden mostrar aumento anormal en los niveles de eritrocitos, PCV y hemoglobina. Los perros que con mayor frecuencia padecen policitemia transitoria son el pastor alemán, boxer, beagles, chihuahua.

2. POLICITEMIA ABSOLUTA.

Hay aumento de la masa total de eritrocitos debido al aumento en su producción.

a). Policitemia absoluta primaria

1 a) Policitemia vera.

Es un desorden clonal adquirido de las células primordiales pluripotenciales produciendo la expansión de los grupos de células primordiales dedicadas principalmente a la generación de la línea eritrocítica; es un desorden mieloproliferativo que involucra la sobreproducción de eritrocitos.

Afecta al hombre, perro, gato y bovinos.

Los signos clínicos se relacionan directa e indirectamente con el aumento de la masa eritrocítica y con la hiperviscosidad de la sangre.

Las mucosas están bastante enrojecidas; polidipsia y poliuria (sin deshidratación), el aumento de la viscosidad de la sangre puede activar los mecanismos compensatorios del cuerpo.

Hay epistaxis, hematuria, hematemesis. Hay también trombosis que puede ser causada por disminución del flujo sanguíneo por la hiperviscosidad de la sangre, ya que es poco frecuente la trombocitosis.

Hay trastornos neurológicos o neuromusculares por la hipoxia tisular como resultado de la disminución del flujo sanguíneo por la hiperviscosidad: hay ceguera, convulsiones, enfermedad del torneo.

2 a). Policitemia familiar

Se caracteriza por la elevación absoluta en el volumen eritrocítico circulante, sin leucocitosis ni trombocitosis. Se presenta en el hombre y bovinos Jersey.

Signos clínicos: debilidad, congestión de las mucosas nasal y conjuntivas, piel de aspecto cianótico rojizo; pueden haber convulsiones, ceguera intermitente. El PCV puede llegar a 70 %, la Hemoglobina: > 20 g/dl.

B. Policitemia absoluta secundaria.

Hay aumento del estímulo de la producción de eritrocitos mediada por una excesiva producción de eritropoyetina.

Causas:




LABORATORIO CLINICO VETERINARIO –SEPTIMO SEMESTRE-UNIVERSIDAD DE LA AMAZONIA 1b) Hipoxia: hay liberación de eritropoyetina en respuesta a la hipoxia tisular (forma apropiada), hay disminución de la saturación de O2 arterial.

- Se presenta en aclimatación a grandes alturas donde el aire tiene la presión parcial del O2 baja.

- Enfermedad pulmonar crónica.

- En hipoventilación alveolar por depresión de la función del centro respiratorio.

- Enfermedad cardiaca: insuficiencia cardiaca, desviación circulatoria de derecha a izquierda; estenosis pulmonar.

- Hemoglobinopatías: producen un transporte de oxígeno defectuoso, como la metahemoglobina, sulfahemoglobina.

- Fisiológica: en algunos recién nacidos de ciertas especies: cuando la hemoglobina fetal del eritrocito está siendo reemplazada por la hemoglobina del adulto.

2b). Eritropoyetina inapropiada o producción excesiva de una sustancia similar a la eritropoyetina; la saturación del O2 es normal.

Causas:

- Tumor renal (linfosarcoma, carcinoma renales); quistes renales, hidronefrosis.

- Hemangioma cerebelar, mioma uterino, hepatoma, producen sustancias semejantes a la eritropoyetina.

HEMOPARASITOS.

ANAPLASMOSIS.

Es una enfermedad infecciosa del ganado, ovejas, cabras y algunos rumiantes salvajes (búfalo, venados, antílopes, camellos), causada por Anaplasma . El organismo es un parásito intraeritrocítico obligado y huésped específico. Ver figura 25

Los agentes causales de la anaplasmosis en bovinos son: A . marginale (es el más patógeno), A . centrale (produce enfermedad clínica y anemia leves)., Paranaplasma caudatum y Paranaplasma discoides.

En ovejas y cabras: A . ovis.




LABORATORIO CLINICO VETERINARIO –SEPTIMO SEMESTRE-UNIVERSIDAD DE LA AMAZONIA Los corpúsculos de Anaplasma son microorganismos del Orden Rickettsiales, Familia Anaplasmataceae; el cuerpo marginal es una inclusión que contiene un grupo de parásitos individuales (4 a 8 subunidades o cuerpos iniciales); aparecen como masas redondas que miden de 0.3 - 1.0 um, toman un color azul oscuro con la coloración de Wright, o rojo intenso con Giemsa.

Es una enfermedad endémica en la mayoría de las áreas tropicales del mundo; puede presentarse en forma aguda, subaguda y crónica. Durante la fase aguda se presenta una parasitemia marcada, mientras que un nivel bajo de infección que dura de meses a años, se puede detectar durante el estado de portador.

Hallazgos clínicos: La anaplasmosis se caracteriza por fiebre, anemia hemolítica marcada, sin hemoglobinemia, ictericia y esplenomegalia, es difícil diagnosticar la enfermedad por frotis sanguíneo si éstos se demoran muchos días después de la crisis hemolítica.

En el período de incubación el cual varía de 15 a 45 días, los cuerpos de Anaplasma van aumentando en número. Los eritrocitos parasitados pueden ser removidos en un período de pocos días y la masa de eritrocitos circulantes puede disminuir en un 50 –80 %; en el período de mayor disminución de eritrocitos la temperatura es bastante elevada (41 C ) y el animal muestra anorexia, depresión, deshidratación, pérdida de producción de leche, ictericia, respiración acelerada, pulso rápido, constipación, atonía ruminal, pelo áspero y seco, emaciación; puede haber abortos y aún la muerte.

Después de 4 – 5- días el Anaplasma puede disminuir de modo que es difícil de identificarlo en frotis sanguíneo.

En ese período la anemia está en remisión y se observará reticulocitosis, policromasia, macroanisocitosis y punteado basófilo; el PCV puede caer hasta 7 %.

Patogénesis. La anemia en la anaplasmosis resulta principalmente de la destrucción extravascular de los eritrocitos parasitados lo cual puede ser en el bazo y medula ósea, lo cual produce ictericia marcada sin hemoglobinuria y hemoglobinemia.

El grado de anemia con frecuencia no guarda proporción con el grado de parasitemia, esto se atribuye a que además se presenta una destrucción inmunomediada de eritrocitos no parasitados. Durante la enfermedad el huésped produce anticuerpos contra el Anaplasma, también como contra sus propios eritrocitos, solo los anticuerpos anti-eritrocíticos están implicados en la producción de anemia inmunomediada; los eritrocitos parasitados y los no parasitados recubiertos por los autoanticuerpos son fagocitados por células de sistema fagocitario monocítico.

BABESIOSIS ( PIROPLASMOSIS).

Los parásitos protozoarios que pertenecen a la Familia Babesiidae y orden Piroplasmida ocurren dentro de los eritrocitos de los vertebrados y producen anemia hemolítica intravascular. Los organismos (trofozoítos) tienen formas redondeadas, ameboides, irregulares, forma de bastón o típicamente

piriformes. Babesiosis en bovinos.




LABORATORIO CLINICO VETERINARIO –SEPTIMO SEMESTRE-UNIVERSIDAD DE LA AMAZONIA La babesiosis en bovinos es de gran importancia económica, especialmente en trópicos y subtrópicos. La enfermedad es transmitida por garrapatas ixodidas. Todas las especies de animales domésticas son susceptibles. Las Babesias son huésped específicas, sin embargo se presentan rara vez casos de infección en humanos con especies de Babesia de origen animal.

La babesiosis bovina es producida por B. bigemina y B. argentina (B. bovis). La B. bigemina es un piroplasma grande (4-5 x 2-3 um) mientras que la B. bovis es pequeña (2.4 x 1.5 um). Se dividen por fisión binaria o por proceso de gemación dentro de los eritrocitos y los destruye intravascularmente durante la salida de ellos.

Los síntomas aparecen después de un período de incubación de 8 a 20 días. La enfermedad en el adulto susceptible se caracteriza por fiebre de 40 a 41.6 C, por 2 a 3 días o más; durante ese tiempo hay depresión, pérdida de apetito, atonía del rumen, constipación, aumento del pulso, polipnea, disminución en la producción de leche, puede haber aborto; al comienzo de la enfermedad las mucosas están enrojecidas y el color de la orina es normal; a medida que hay destrucción de eritrocitos las membranas se tornan pálidas e ictéricas, hay debilidad, pérdida de peso, frecuencia cardiaca aumentada y hay hemoglobinuria. La diarrea sigue a la constipación con descarga de moco sanguinolento; los animales más gravemente enfermos se debilitan y postran en 2 a 5-7 días después de la iniciación de la enfermedad, a menudo gruñen de dolor, mostrando contracciones musculares, lagrimeo, salivación y un descenso de la temperatura que alcanza niveles subnormales poco antes de la muerte.

Un hallazgo con la infección de B. bovis es que la autoaglutinación de los eritrocitos parasitados o nó, bloquean los capilares de la piel y el cerebro; la B. bovis tiene predilección por los capilares del cerebro y pueden detectarse en frotis de materia gris de la corteza cerebral.

La CID puede ocurrir como una complicación de anemia hemolítica de la babesiosis.+

En la infección por B . bovis principalmente la liberación de sustancias farmacológicamente activas y la destrucción de los eritrocitos juegan un papel importante en la patogénesis de la infección por Babesia. Los niveles plasmáticos de kalicreina aumentan notoriamente 3 días después de la infección y luego caen a niveles subnormales finalmente, en la infección aguda hay masiva movilización y activación de la kalicreina; ésta produce aumento de la permeabilidad vascular y vasodilatación llevando a éstasis circulatorio y shock; la calicreina también dispara la CID.

La anemia está asociada con los parásitos que emergen de los eritrocitos; sin embargo la pérdida de eritrocitos excede a la atribuida por la rotura mecánica de los eritrocitos parasitados; hay evidencia que hay remoción directa por fagocitosis de eritrocitos no parasitados, y se considera que hay aumento de fragilidad osmótica de esos eritrocitos no parasitados lo que pueden predisponerlos a lisis espontáneas; otras explicaciones para la excesiva pérdida de eritrocitos incluyen la adsorción de complejos Ag – Ab sobre la superficie de los eritrocitos produciendo su remoción por fagocitosis.

Babesiosis equina.

La B. equi y B. caballi infectan caballos, mulas, asnos y cebras.




LABORATORIO CLINICO VETERINARIO –SEPTIMO SEMESTRE-UNIVERSIDAD DE LA AMAZONIA La B. caballi (mide de 2.5 - 4.0 um), es más fácilmente reconocida en los eritrocitos como cuerpos piriformes pares, unidos por sus extremos puntiagudos formando un ángulo agudo.

Los trofozoitos de B. equi son bastante pleomórficos con formas redondas, ovales y de anillo. Miden 2.0 um de longitud y se pueden disponer los cuerpos piriformes en grupos de 4 por sus extremos agudos formando una disposición denominadacomo la cruz de Malta. La B. equi se considera más patógena que la B. caballi.

Los animales infectados desarrollan fiebre, edema de las extremidades, anemia, ictericia y leucopenia o leucocitosis.

Babesiosis canina.

La enfermedad aguda se caracteriza por fiebre, anorexia, depresión, anemia hemolítica, hemoglobinuria, hemoglobinemia, bilirrubinuria e ictericia. La parasitemia con frecuencia es detectable al examen del frotis sanguíneo.

La babesiosis en el perro puede ocurrir concurrentemente con otros parásitos sanguíneos ej: Ehrlichia canis y Haemobartonella canis, presentando síntomas más graves.

TEILERIASIS.

La teileriasis es causada por parásitos protozoarios del género Theileria que infecta los linfocitos y eritrocitos de rumiantes especialmente bovinos, ovinos, cabras y búfalos de agua.; la infección es diseminada por artrópodos hematófagos, particularmente garrapatas de la familia Ixodidae.

Hay varias especies de Theileria, pero la T. parva es la más importante, es la causa de la Fiebre de la Costa del Este en Africa Oriental y Central. Los organismos ocurren tanto en los linfocitos como en los eritrocitos. Las formas en los eritrocitos son principalmente redondeadas (1.5- 2.0 x 0.5 –1.0 um), pero también hay formas ovales, de coma o anulares. Se pueden presentar varios parásitos en un eritrocito pero no hay multiplicación en ellos. Las formas multiplicantes del parásito ocurren en el citoplasma de linfocitos y ocasionalmente en las células endoteliales de los nódulos linfáticos del bazo, son los esquizontes, estructuras redondeadas o irregulares de unas 8 um de diámetro; hay dos formas de esquizontes: los que contienen gránulos de cromatina grandes (0.4 – 2.0 um de diámetro) son los macroesquizontes y producen macromerozoitos (2 –2.5 um de diámetro) y los que contienen gránulos más pequeños de cromatina (0.3 – 0.8 um de diámetro) se denominan microesquizontes y producen los micromerozoitos, éstos invaden los eritrocitos y pueden representar los estados sexuales del parásito; después que los estados intraeritrocíticos son ingeridos por las garrapatas, los merozoitos son liberados y se diferencian en los estados sexuales. Hay un desarrollo sexual de T. parva en la garrapata vectora lo cual resulta en esporozoitos infectantes; el ganado es infectado cuando las garrapatas vectoras se ingurgitan en un animal y así se transmiten los esporozoítos infectantes.

Síntomas. Fiebre alta (42 C), ocurre 7 – 10 días después de la picadura de las garrapatas y continúa durante el curso de la enfermedad, puede haber tumefacción de los ganglios linfáticos que es




LABORATORIO CLINICO VETERINARIO –SEPTIMO SEMESTRE-UNIVERSIDAD DE LA AMAZONIA pronunciada y generalizada; anorexia, pérdida de la condición, lagrimeo y descarga nasal, puede haber disnea; antes de la muerte puede haber descenso de la temperatura; la anemia no es un signo diagnóstico importante como en la babesiosis.

TRIPANOSOMIASIS Los tripanosomas son protozoarios flagelados y aparecen en la sangre de toda clase de vertebrados; en algunos casos pueden invadir tejidos.

Muchas especies de tripanosomas infectan los animales sin ninguna especificidad de huésped, así que un tripanosoma en particular puede infectar varias especies animales, y más de una especie de tripanosoma se puede encontrar en un mismo animal. Los animales salvajes sirven de reservorios.

Varias especies de tripanosoma en el ganado pueden ser distinguidos por su morfología y su comportamiento en preparaciones húmedas de sangre fresca.

La patogénesis involucra la multiplicación inicial del organismo en los ganglios linfáticos locales y luego se transportan a la sangre vía vasos linfáticos. El organismo se multiplica en la sangre por fisión binaria y muestra una parasitemia errática, la cual corresponde con los picos febriles.

La crisis hemolítica se desarrolla de la eritrofagocitosis y disminución del período de vida de los erotrocitos, lo cual es atribuido a efectos enzimáticos del parásito y mecanismos inmunes.

Los signos clínicos de tripanosomiasis incluyen fiebre intermitente, anemia, taquicardia, letargo, pérdida de peso, fertilidad disminuida, baja en la producción de leche, abortos, puede aún presentarse la muerte cuando condiciones de stress disminuyen la resistencia del animal; la muerte puede deberse a la tripanosomiasis misma o puede estar asociada con otras enfermedades bacterianas, virales o parasitarias, probablemente como resultado de supresión inmune por la tripanosomiasis.

El período de incubación en el ganado varía de 3 –20 días o más, mientras que los signos clínicos tardan unas 2 –4 semanas en aparecer. La enfermedad puede tener un curso agudo, subagudo o crónico. Una infección extremadamente aguda usualmente producida por T. vivax puede asumir una forma septicémica con fiebre, parasitemia marcada y hemorragia masiva.

HEMOBARTONELOSIS.

La enfermedad es producida por un microorganismo del género Haemobartonella, familia Rickettsiales, que parasita los eritrocitos.

Afecta a los gatos principalmente produciendo la anemia infecciosa felina; también afecta a los perros y bovinos.




LABORATORIO CLINICO VETERINARIO –SEPTIMO SEMESTRE-UNIVERSIDAD DE LA AMAZONIA Hemobartonelosis en perros.

Es producida por H. canis la cual se puede encontrar en perros normales, pero rara vez es patógena para un perro no esplenectomizado. La anemia clínica se puede desarrollar cuando un perro portador es esplenectomizado o cuando desarrolla otra enfermedad como enfermedad bacteriana o parasitaria, o cuando el animal esplenectomizado es transfundido con sangre de un portador de H. canis. Los perros clínicamente afectados muestran decaimiento, fiebre, anemia hemolítica, ictericia y bilirrubinemia; los hallazgos hematológicos son los de una anemia regenerativa.

Hemobartonelosis en bovinos.

La H. bovis se ha observado en ganado de algunos países de Asia, Africa y Europa, con frecuencia en asocio con otras enfermedades por protozoarios.

La H. bovis es relativamente no patógena; en casos raros puede producir anemia leve y síntomas similares a la anaplasmosis.

EPERITROZOONOSIS La enfermedad se presenta en cerdos (Eperythrozoon suis), ovejas (E . ovis) y vacunos (E. wenyoni). El cerdo es el animal más susceptible a sufrir la enfermedad. Clínicamente se caracteriza por debilidad de los cuartos traseros, fiebre moderada (39.5 C), taquicardia, mucosas pálidas y enflaquecimiento; puede haber ictericia y anemia.

Los vacunos y ovinos son menos susceptibles a la enfermedad, se presenta en animales esplenectomizados o severamente enfermos por otras causas pudiendo presentar síntomas similares a los del cerdo.

EHRLICHIOSIS.

Es una enfermedad transmitida por garrapatas, causada por un organismo Rickettsial del género Ehrlichia, afecta a equinos, bovinos y al perro.

Ehrlichiosis en vacunos (Ehrlichiosis bovina tropical).

Es producida por E. bovis, transmitida por garrapatas del género Amblyoma, Hyalomma y Rhipicephalus. La E. bovis se presenta en las células mononucleares del ganado vacuno. Se ha detectado en Africa del Norte y Central, en Ceilán.

Los signos clínicos varían desde formas inaparentes a formas fatales, con síntomas nerviosos, ataxia, piernas rígidas, caminan en círculos, hay fases de excitación seguida por somnolencia, salivación, ataques epilépticos, afecta principalmente animales importados. Para el diagnóstico es importante demostrar la E. bovis en monocitos o macrófagos en frotis de sangre periférica.

Ehrlichiosis europea.




LABORATORIO CLINICO VETERINARIO –SEPTIMO SEMESTRE-UNIVERSIDAD DE LA AMAZONIA Producida por E. phagocytophila la cual se observa en neutrófilos y eosinófilos de bovinos, ovejas y otros rumiantes domésticos y salvajes de Europa, transmitida por Ixodes ricinus.

Hay fiebre, la infección produce inmunosupresión, lo que predispone a una variedad de enfermedades secundarias; hay aborto y pérdida de peso.

Ehrlichiosis en equinos.

Es producida por E. equi; se encuentra en los neutrófilos y ocasionalmente en eosinófilos durante el estado agudo.

Los síntomas de la enfermedad son:. Fiebre, depresión, ataxia, edema de los miembros, petequias e ictericia.

HEMOPARASITOS EN CANINOS Y FELINOS

BABESIOSIS La babesiosis es una enfermedad de amplia distribución mundial, es causada por un parásito hematozoario del género Babesia,; afecta a animales domésticos, silvestres y al hombre. Varias especies de Babesia pueden afectar al perro y al gato produciendo anemia progresiva como el hallazgo principal. El perro es el animal de compañía huésped más importante del parásito Babesia. El gato es infectado con mucha menor frecuencia.. La Babesia sp. son piroplasmas intraeritrocíticos que son usualmente huésped específicos y son transmitidos por garrapatas ixodidas, siendo la principal vectora la Rhipicephalus sanguineus, tambien se han documentado varias especies de Dermacentor y Haemaphysalis como vectores de babesiosis canina. El perro es afectado por Babesia canis y Babesia gibsoni. La B. Canis son pleomórficas, con formas que varían desde formas ameboides a formas anulares; un eritrocito puede contener organismos únicos o múltiples, hasta 16; tambien se encuentran frecuentemente como trofozoitos piriformes pares. Además los organismos pueden encontrarse en células endoteliales de pulmones e hígado, en macrófagos del sistema fagocítico mononuclear y en neutrófilos en sangre periférica. La Babesia canis es un protozoario grande, los trofozoitos son más grandes que los de otras especies, variando de 2-4 x 4-7 um. La Babesia gibsoni es más pequeña que la B. Canis, mide de 1.1 – 2.0 x 1.2 – 4.0 um y es bastante pleomórfica; los organismos generalmente se encuentran en forma individual, pero ocasionalmente se pueden ver dos o más trofozoitos en un solo eritrocito.




LABORATORIO CLINICO VETERINARIO –SEPTIMO SEMESTRE-UNIVERSIDAD DE LA AMAZONIA En forma característica, los trofozoitos son anulares u ovales; los trofozoitos piriformes, de sortija y formas ovoides grandes elongados se encuentran menos frecuentemente. Este parásito se ha reportado en Africa y Asia y recientemente en Estados Unidos. Se conocen cuatro especies de Babesia que infectan los gatos domésticos y salvajes: B. Cati , B. Felis , B, herpailuri y B. Pantherae. Después de la infección experimental de perros susceptibles con sangre infectada con B. Canis, el primer día pot-inoculación comienza una parasitemia transitoria que dura de 3 a 4 días, después los protozoarios desaparecen de la sangre periférica por cerca de 10 días, para luego aparecer hacia las dos semanas de la exposición y desarrollar una segunda parasitemia más intensa, con un incremento en el número de hemoparásitos. Los perros que se recuperan de la infección inicial muestran períodos patentes e impredecibles que alternan con períodos latentes. La intensidad de la parasitemia es variable de un período patente a otro. La parasitemia intraeritrocítica produce tanto hemólisis intravascular y extravascular ; la babesiosis aguda se caracteriza predominantemente por hemólisis intravascular resultando en una anemia regenerativa sin supresión de la eritropoyesis. Durante los estados progresivos iniciales de la enfermedad se desarrolla hemoglobinemia, hemoglobinuria y bilirrubinuria. La pirexia se presume que es causada por la liberación de pirógenos endógenos de la eritrolisis y de la destrucción del parásito y de los eritrocitos por el sistema fagocítico mononuclear. A medida que avanza la enfermedad se desarrolla bilirrubinemia e ictericia ; debido a la congestión pasiva e hiperplasia del sistema fagocítico mononuclear se produce espleno y hepatomegalia.. La hemólisis resulta en una severa anoxia anémica, metabolismo con producción de ácido láctico y acidosis metabólica. El daño microvascular secundario a la hipoxia contribuye al desarrollo de coagulación intravascular diseminada ( CID ) la cual puede ser responsable de algunas de las manifestaciones atípicas de la enfermedad ; en particular, la babesiosis cerebral caracterizada por sedimentación de eritrocitos en los vasos y capilares del cerebro puede estar relacionado con la CID. La variación en la patogenicidad entre las diferentes cepas de B. Canis es un factor importante que contribuye a la variación en la severidad clínica en situaciones de campo. Cepas benignas del microorganismo pueden inducir un estado portador crónico sin sintomatología aparente. Otros animales pueden desarrollar un estado portador después de la supervivencia de una infección aguda.. La premunición caracterizada por un delicado balance entre el parásito y las defensas del huésped, se desarrolla en perros infectados cronicamente; este balance puede ser alterado por situaciones de stress, enfermedad intercurrente, inmunodeficiencia, esplenectomía o tratamiento inmunosupresor. La premunición se considera ventajosa en áreas que son endémicas puesto que la eliminación total del organismo del huésped por medios terapéuticos eliminaría cualquier protección para futuras exposiciones y podría resultar en babesiosis aguda fatal. Contrario a otros animales, los cachorros son más susceptibles a ciertas cepas de B. canis y con frecuencia adquieren una infección más severa que los perros adultos ; cepas benignas de B. Canis pueden causar enfermedades clínicamente apárentes solo en cachorros Hallazgos clínicos: La babesiosis canina puede ser subclínica, hiperaguda, aguda y crónica. Dos síndromes, uno caracterizado por shock hipotensivo ( enfermedad hiperaguda ) y el otro por anemia hemolítica ( enfermedad aguda ) representan la mayoría de los signos clínicos observados en perros con babesiosis.




LABORATORIO CLINICO VETERINARIO –SEPTIMO SEMESTRE-UNIVERSIDAD DE LA AMAZONIA La enfermedad hiperaguda ocurre con las cepas más virulentas; se caracteriza por shock hipotensivo, hipoxia, daño tisular extenso y estasis vascular. Se ha reportado en perros adultos pero ocasionalmente se puede presentar en cachorros. Se presenta shock, coma y muerte después de menos de un día de anorexia y letargo Puede haber hematuria. La enfermedad aguda se caracteriza por anemia hemolítica, trombocitopenia y esplenomegalia. Pueden haber víctimas mortales, especialmente en cachorros o adultos infectados por B. Gibsoni Hay depresión, desgano a moverse, anorexia, las membranas mucosas se tornan pálidas, puede haber vómito, hematuria e ictericia, linfadenopatía generalizada y edema periorbital. La hemoglobinuria se puede presentar en casos agudos con marcada destrucción de eritrocitos ; heces marcadamente amarillas ( excepto en casos hiperagudos tempranos ) y usualmente hay bilirrubinuria. Se presenta debilidad progresiva y la emaciación puede ser extrema. La anemia hemolítica inmunomediada es la enfermedad principal que debe ser diferenciada de la babesiosis. Las infecciones crónicas se caracterizan por fiebre intermitente, apetito caprichoso y marcada pérdida de la condición corporal. Se han reportado una gran variedad de signos atípicos; ocasionalmente se ven signos leves del tracto respiratorio superior y disnea, signos gastrointestinales como vómito, constipación, diarrea y estomatitis ulcerativa. Manifestaciones vasculares como edema, ascitis y púrpura. Rara vez, hemorragias que varían desde petequias a equimosis ocurren secundariamente a trombocitopenia o coagulopatía intravascular diseminada. Se ha descrito una miositis masticatoria asociada a Babesia. Otras manifestaciones musculo-esqueléticas atípicas son inflamación de articulaciones y dolor del dorso. Manifestaciones del sistema nervioso central secundario a la llamada babesiosis cerebral, incluyen convulsiones, debilidad y ataxia ; las manifestaciones neurológicas se achacan al estancamiento de los eritrocitos parasitados en los capilares del sistema nervioso central. Infecciones concurrentes de Babesia y Ehrlichia canis probablemente contribuyen a la diversidad de los signos clínicos aumentando la rata de mortalidad o induciendo una anemia no regenerativa. El sistema inmune no elimina completamente la infección y los animales que se recuperan son usualmente portadores crónicos del parásito; si los perros infectados están estresados o tratados con corticosteroides pueden presentar síntomas clínicos. Diagnóstico Las anormalidades hematológicas principales incluyen anemia con trombocitopenia ; en los primeros días de la infección hay una anemia normocítica normocrómica leve , a medida que la enfermedad progresa la anemia llega a ser macrocítica hipocrómica, regenerativa. Las respuestas leucocíticas son inconsistentes y puede presentarse leucocitosis, neutrofilia, neutropenia, linfocitosis y eosinofilia. Los valores de química sanguínea son generalmente normales. Puede haber hipokalemia en animales severamente afectados, pero es probable que sea debido a ingestión disminuída de potasio. La azotemia y acidosis metabólica son frecuentes y parecen contribuir a la morbilidad y mortalidad; ambas alteraciones son causadas por deshidratación y shock.. Se presenta hiperbilirrubinuria en los casos agudos. La actividad de las enzimas hepáticas puede estar aumentada. En el examen urinario puede haber bilirrubinuria, hemoglobinuria, proteinuria y cilindros granulares. El diagnóstico de babesiosis se hace demostrando la presencia de la Babesia dentro de los eritrocitos infectados. Las cepas de B. Canis producen parasitemias bajas ; la B. Gibsoni produce parasitemias altas ( 5 a 40 % ). Los frotis sanguíneos hechos con sangre de capilares periféricos, ejemplo de la oreja o uñas pueden observarse mayor número de parásitos y se encuentran más fácilmente en períodos agudos de la enfermedad que en enfermos crónicos o portadores asintomáticos. Tambien se emplea la prueba indirecta de anticuerpos fluorescentes , es bastante útil para el diagnóstico de la enfermedad, es un método confiable para detectar parasitemias patentes u ocultas ; títulos mayores de 1 :40 se consideran positivos para B. Canis y B. Gibsoni.




LABORATORIO CLINICO VETERINARIO –SEPTIMO SEMESTRE-UNIVERSIDAD DE LA AMAZONIA Otro método de diagnóstico menos usado es inyectar sangre de un animal sospechoso de tener la enfermedad a un perro esplenectomizado, y después examinar frotis sanguíneos diariamente para observar los micro-organismos. Tratamiento: El manejo de la babesiosis incluye el uso de drogas parasiticidas y tratamiento sintomático y atenuación de la respuesta inmune. Se han utilizado muchas drogas para combatir la babesiosis, las más efectivas son el aceturato de diminazene ( Berenil, Ganaseg ) a la dosis de 3.5 mg/ k via IM , y el dipropionato de imidocarb ( Imizol ), este producto es útil en el tratamiento de babesiosis y de ehrlichiosis concurrentes, dos inyecciones IM de imidocarb a la dosis de 5 mg / k dados aintervalos de 14 días es efectivo en eliminar infecciones tanto de B. Canis y Ehrlichia canis., además produce un efecto profiláctico entre 3 semanas y 1 mes. Tanto la anemia hemolítica y la trombocitopenia probablemente tienen un componente inmuno-mediado ; una respuesta inmune humoral por Ig G e Ig M es importante en la patogenesis de la hemólisis, de modo que una terapia inmuno supresora dirigida a la respuesta inmune parecería justificarse. La terapia de soporte es importante, se administrarán líquidos intravenosos en animales que estén deshidratados o en shock ; la transfusión de eritrocitos empaquetados o sangre fresca completa se recomienda cuando el hematocrito está por debajo de 15 % ; es importante el tratamiento de causas estresantes especialmente parasitismo gastrointestinal. Se puede utilizar hierro, vitaminas del complejo B y glucocorticoides anabólicos para ayudar a la producción de eritrocitos. Se debe corregir la acidosis metabólica ya que una acidosis severa representa un factor importante que determina la supervivencia en perros severamente afectados; tambien es importante el manejo médico de la coagulación intravascular diseminada. Prevención: El medio principal de prevención de la babesiosis es eliminando las garrapatas vectoras, con baños garrapaticidas periódicos programados y desinfección de las perreras. A los animales de un área endémica les serán aplicados baños garrapaticidas y sometidos a cuarentena por 3 semanas antes del ingreso a las perreras. En áreas endémicas, no se recomienda la eliminación completa de la parasitemia con drogas debido a que los animales en estas condiciones son susceptibles de reinfección. Los donantes de sangre serán chequeados de modo que perros asintomáticos infectados no se deben utilizar para tal fin. EHRLICHIOSIS CANINA La ehrlichiosis canina es una enfermedad transmitida por garrapatas, causada por un organismo ricketsial la Ehrlichia. Se conosen tres especies de Ehrlichia como causantes de ehrlichiosis en perros y son : Ehrlichia canis , E. Equi y E. Platys. Las ehrlichias son organismos pequeños, esféricos de 0.4 um de diámetro, que cuando están aislados se denominan cuerpos elementales, pero que tienden a agregarse formando inclusiones inmaduras denominadas cuerpos iniciales y miden de 0.5 a 2.5 um para luego formar una mórula o inclusión madura compuesta por un acúmulo de organismos la cual se puede distinguir con mayor facilidad por su mayor tamaño el cual varía de 1-4 um. La ehrlichiosis en sus diferentes estadios se presentan en el citoplasma de leucocitos en sangre circulante y presentes en los tejidos y tambien en las plaquetas o trombocitos. La Ehrlichia canis infecta monocitos y linfocitos circulantes de caninos domésticos y salvajes ( Ehrlichiosis monocítica canina ). La enfermedad donde las células infectadas son los neutrófilos y eosinófilos ( ehrlichiosis granulocítica canina ) , es más leve que la anterior, es producida por la E. Equi y la E. Ewingii. La E. Equi afecta varias especies animales como perros , gatos , equinos y primates no humanos.




LABORATORIO CLINICO VETERINARIO –SEPTIMO SEMESTRE-UNIVERSIDAD DE LA AMAZONIA La Ehrlichia platys es el agente causal de la trombocitopenia cíclica canina, y se replica únicamente en plaquetas, donde se encuentran entre 1 a 8 organismos incluídos en una vacuola ; repetidas divisiones binarias de los organismos dentro de una vacuola, forman inclusiones compactas llamadas mórulas. La E. Canis , E. Equi, y E. Platys se transmiten entre caninos mediante la garrapata Rhipicephalus sanguineus, la transmisión ocurre en los tres diferentes estados de evolución de las garrapatas: larva, ninfa, adulto ( trans estadial ), las cuales se alimentan de sangre de caninos y pueden transmitir la ehrlichiosis. Las ehrlichias se multiplican en los hemocitos, células intestinales y de las glándulas salivales de las garrapatas y aparentemente son liberadas de estas células antes de ser introducidas a un perro susceptible. Las larvas y ninfas de Rhipicephalus sanguineus pueden adquirir la infección de perros con infección aguda y así pueden transmitir la enfermedad a otros perros susceptibles por vía de la saliva. Las garrapatas adultas, tanto machos como hembras, que se desprenden de perros que estuvieran en fase aguda de la enfermedad cuando ellas fueron ninfas son capaces de transmitir la enfermedad a perros susceptibles por 155 días o más; esto no sucede si las garrapatas se alimentan de perros en fase crónica. Ehrlichiosis monocítica canina Es producida por la E. Canis y se caracteriza por una reducción de los elementos sanguíneos celulares. La E. Canis infecta las células mononucleares circulantes. La mórula se observa ocasionalmente en frotis sanguíneos durante los estados iniciales de la infección, pero rara vez en infecciones crónicas. Las infecciones con E. Canis se han reportado en perros con infecciones concurrentes con Babesia canis, Hepatozoon canis y Haemobartonella, todas transmitidas por las garrapatas vectoras. La E. Canis tambien puede ser transmitida a perros susceptibles por transfusión sanguínea aún de donantes con infección crónica. La enfermedad se contrae luego del contacto del perro con las garrapatas infectadas, con una fase aguda, subclínica y crónica ; el ´período de incubación es de 8 a 20 días, seguido por una fase aguda la cual se prolonga por 2 a 4 semanas. Durante este tiempo, los organismos se multiplican dentro de las células mononucleares circulantes y los tejidos fagocíticos mononucleares del hígado, bazo y ganglios linfáticos, produciendose linfadenomegalia e hiperplasia linfo-reticular del hígado y bazo. Las células circulantes infectadas son transportadas a otros órganos especialmente pulmones, riñones y meninges; las células infectadas se adhieren al endotelio vascular produciendo vasculitis e infección del tejido subendotelial. El consumo de plaquetas, secuestro y destrucción todos contribuyen a la trombocitopenia durante la fase aguda. La cuenta leucocitaria es variable, y la anemia, relacionada con la supresión de la eritropoyesis y acelerada destrucción de eritrocitos se desarrollan gradualmente durante la fase aguda. Los signos clínicos durante la fase aguda de la enfermedad varía desde depresión anorexia, fiebre severa , pérdida de la resistencia, pérdida de peso, secresión ocular y nasal, disnea, linfadenopatía y edema de las extremidades o escroto. Unos 10 a 20 días después de la infección generalmente hay trombocitopenia y leucopenia. Como resultado de la inflamación o hemorragia en las meninges pueden suceder una variedad de signos del sistema nervioso central incluyendo hiperestesia, temblor muscular. Laa fase subclínica puede ocurrir de 6 a 9 semanas post-inoculación y se caracteriza por persistencia de trombocitopenia, leucopenia variable y anemia en ausencia de síntomas clínicos. Los perros que no pueden desarrollar una respuesta inmune efectiva contra las ehrlichias desarrollan la enfermedad crónica.. Los signos clínicos en la fase crónica se caracterizan por síntomas de leves a asintomáticos en algunos perros , pero severos en otros. Trombocitopenia no detectada en esos pacientes podría potenciar la severidad de la hemorragia pulmonar asociada con tromboembolismo. Una combinación de tendencias




LABORATORIO CLINICO VETERINARIO –SEPTIMO SEMESTRE-UNIVERSIDAD DE LA AMAZONIA hemorrágicas, palidez por la anemia, pérdida de peso, debilidad y sensibilidad abdominal, uveitis anterior, hemorragias en la retina, signos neurológicos a consecuencia de meningoencefalitis. Rara vez se presenta epistaxis.. Además de los síntomas, se presentan hallazgos de laboratorio que aumentan la sospecha de la enfermedad como pancitopenia, anemia aplástica y trombocitopenia son consistentes con infección por E. Canis ; la trombocitopenia es la anormalidad hematológica consistente tanto en la fase aguda o crónica ; la pancitopenia es bastante frecuente; tambien se puede presentar función plaquetaria defectuosa originando hemorragias en perros con recuentos plaquetarios normales, aumentados o levemente disminuidos. Los hallazgos de la mórula de E. Canis en frotis de sangre periférica o de la capa anteada del microhematocrito son dignósticos ; sin embargo las mórulas se encuentran solo en las primeras 2 semanas después de la infección en bajo número. La anemia se presenta en grado variable en perros afectados, debido en parte a la presencia de anticuerpos circulantes contra los eritrocitos contribuyendo a una crisis hemolítica aguda, pero es más frecuente la anemia de tipo no regenerativo. El diagnóstico serológico de la ehrlichiosis, se hace frecuentemente utilizando la prueba indirecta de anticuerpos fluorescentes, es comunmente el único medio disponible para confirmar el diagnóstico de la enfermedad, es una prueba altamente sensible y específica. Tratamiento. Tratamiento curativo. Las drogas de elección son la tetraciclina a la dosis de 22 mg / k, tres veces al día, oral por 14 días o doxiciclina ( Vibramicina ) en la fase aguda, se recomienda una dosis de 5 mg / k / día, una sola dosis diaria, oral, por 7 a 10 días y en la fase crónica 10 mg / k / día, una dosis diaria oral por 7 a 14 días. Se ha usado con menor frecuencia, el dipropionato de imidocarb ( Imizol ) el cual se utiliza en una sola dosis IM ,de 5 mg/K, pero no es muy efectivo; es más efectivo contra Babesia canis. Cuando el control de las garrapatas no es posible se usan dosis preventivas de tetraciclina en forma continua, oral ( 6.6 mg / K / día ) u oxitetraciclina de depósito ( 200 mg IM, 2 veces por semana, se usan en regiones endémicas. Es bastante importante la terapia de soporte incluyendo líquidos, electrolitos, transfusiones sanguíneas, vitaminas. La mejor forma de prevenir y controlar la enfermedad es a través del control de las garrapatas. Los perros que van a ser usados como donadores de sangre deben ser negativos a Ehrlichia sp. para evitar la transmisión de la enfermedad. Ehrlichiosis granulocítica canina La ehrlichiosis que afectan los granulocitos se considera menos patógena, parece ser producida al menos por dos especies, la E. Equi y la E. Ewingii. Los síntomas clínicos incluyen cojera, afectando uno o más miembros, entumecimiento muscular, marcha envarada, reluctancia a levantarse, postura de dorso arqueado, tumefacción y dolor de las articulaciones. Poliartritis caracterizada por una respuesta inflamatoria neutrofílica, acompañada por fiebre, es la anormalidad reportada con mayor frecuencia asociada con ehrlichiosis granulocítica. Las anormalidades hematológicas, generalmente de menor severidad que las observadas en la infección de E. Canis incluyen anemia, neutropenia, trombocitopenia, linfocitosis, monocitosis y neutrofilia. La enfermedad se diagnostica por observación de la mórula en las células granulocíticas.




LABORATORIO CLINICO VETERINARIO –SEPTIMO SEMESTRE-UNIVERSIDAD DE LA AMAZONIA Trombocitopenia cíclica canina Es causada por Ehrlichia platys, y transmitida por la garrapata Rhipicephalus sanguineus. La E. Platys produce ricketsemia y trombocitopenia cíclicas a intervalos de 10 a 14 días aproximadamente, en su punto más bajo la trombocitopenia puede ser severa ( 20.000 a 50.000 plaquetas / ul ) y la agregación plaquetaria está disminuida. En frotis sanguíneos la E. Platys aparece como inclusiones basófilas únicas, o múltiples dentro de las plaquetas. Experimentalmente, unos 4 días, después de la aparición inicial de plaquetas infectadas, del 30-60 % de las plaquetas pueden contener inclusiones, siendo normal el conteo total de plaquetas. En los siguientes 3-4 días hay un marcado descenso del conteo plaquetario. Los organismos usualmente no son visibles durante la fase de conteo más bajo de plaquetas, y el número normal de ellas regresa a lo normal dentro de 3-4 días. En una a dos semanas , los organismos reaparecen en las plaquetas y el número de ellas comienza a disminuir. Con cada ciclo posterior, el porcentaje de plaquetas infectadas disminuyen hasta que solo unas plaquetas lo están, la trombocitopenia es menos pronunciada y los cambios hematológicos cesan. Los perros con trombocitopenia pueden sangrar después de traumas o cirugias; en parasitemia inicial se puede producir una fiebre ligera y presentar hematoquezia leve. Para el diagnóstico de E. Platys requiere observación del parásito en las plaquetas o detección de anticuerpos por la prueba indirecta de anticuerpos fluorescentes en muestras de suero. TRIPANOSOMIASIS Se han encontrado 4 especies de tripanosomas en perros infectados naturalmente : Tripanosoma cruzi, T. Evansi, T. Brucei, y T. Rangeli, siendo los 3 primeros patógenos, el último aparentemente no. El período de incubación en perros varía de 5 días a varias semanas. La enfermedad se caracteriza por fiebre intermitente, linfadenitis y edema subcutáneo. En casos crónicos puede haber atrofia muscular, parálisis lumbar e incoordinación. En algunos casos son evidentes la queratitis y conjuntivitis con secresión ocular. Los organismos pueden ser fácilmente detectados en la sangre de animales infectados. El curso de la enfermedad generalmente es de 1 a 2 meses y la muerte ocurre en la mayoría de animales no tratados. Son características de la tripanosomiasis la esplenomegalia y linfadenomegalia. Los riñones aumentan de volúmen y aparecen sobre su superficie hemorragias petequiales. Tripanosomiasis americana La tripanosomiasis americana o enfermedad de Chagas es causada por el parásito protozoario hemoflagelado el T. Cruzi. La infección ocurre cuando el artrópodo huésped intermediario defeca sobre la piel del huésped vertebrado mientras se alimenta de éste. ; los tripomastigotes en las heces del insecto son depositados y penetran en el sitio de la picadura, o pueden penetrar por las mucosas y entran a los macrófagos de la piel donde se transforman a la forma amastigote, de esta manera se localizan en los músculos principalmente en el miocardio.




LABORATORIO CLINICO VETERINARIO –SEPTIMO SEMESTRE-UNIVERSIDAD DE LA AMAZONIA Medios menos frecuentes de infección incluyen transfusión sanguínea, ingestión de carne infectada y transmisión congénita y a través de la leche de animales en lactación,; en los animales puede haber transmisión a través de la orina infectada o durante la cópula. El T. Cruzi es transmitido por los insectos hematófagos de la familia Reduviidae ( pitos ). El T. Cruzi puede infectar al hombre y un gran número de animales salvajes y domésticos en forma natural ( entre ellos el perro y el gato ). Ls distribución geográfica de la enfermedad se extiende desde el sur de los E. U. hasta la América del Sur. Las manifestaciones clínicas en el perro pueden ser una forma aguda o crónica.. La enfermedad aguda se caracteriza por anorexia, pérdida de peso, linfadenopatía generalizada, diarrea, miocarditis, disfunción cardiaca como taquicardia, mucosas pálidas, ascitis, pulso débil y hepatomegalia , puede haber muerte súbita por severas arritmias cardiacas. La enfermedad crónica ocurre entre 8 y 36 meses después de la infección inicial y se caracterizan por arritmias ventriculares, dilatación cardiaca.. El diagnóstico durante la fase aguda de la enfermedad se basa en la demostración del tripomastigote en la sangre. Se puede observar el parásito en la parte inferior del plasma del microhematocrito ( Técnica de Woo ), o del frotis de ese sitio o de frotis sanguíneos de sangre colectada de capilares como del extremo de la oreja, aumentando la posibilidad de hallar el organismo ; tambien se pueden observar de aspiración de ganglios linfáticos..En casos crónicos se deben usar pruebas serológicas como la prueba indirecta de anticuerpos fluorescentes para demostrar anticuerpos contra el parásito. Terapia: Como la enfermedad de Chagas es una enfermedad con frecuencia fatal que puede transmitirse al humano, la eutanasia del perro puede ser un tratamiento apropiado. Si el animal se va a tratar se puede usar Nifurtimox ( Bayer 2502 o Lampit ) : 8-30 mg / K / día, vía oral por 3 a 5 meses.; tambien se usa el diaceturato de diaminazeno ( Ganaseg, Berenil ). HEMOBARTONELOSIS Las ricketsias del género Haemobartonella son organismos hemotrópicos que se diferencian sobre la base de su huésped, incluyen H. Felis que infecta a los gatos y la H. Canis que infecta los perros. Aparecen como pequeños cocos, comas, anillos, bacilos de color púrpura o azuloso generalmente adheridas al eritrocito; los organismos son aproximadamente de 0.5 um de diámetro y parecen estar parcialmente enterrados en focos indentados en la superficie del eritrocito. La H. Felis, experimentalmente puede ser transmitida por inoculación de sangre infectada por via IV, IP u oral. Es probable que la transmisión ocurra por artrópodos hematófagos y por mordeduras de gatos. La hemobartonelosis felina se caracteriza por depresión, debilidad, anorexia, pérdida de peso, palidez de las mucosas y ocasionalmente esplenomegalia e ictericia. Si hay anemia gradual hay pérdida de peso, pero el gato está alerta ; si la anemia es rápida hay severa depresión y fiebre. Debido a la localización epicelular del organismo la destrucción inmuno-mediada de los eritrocitos está relacionada con anticuerpos antieritrocíticos, eritrofagocitosis, por células retículoendoteliales especialmente del bazo, aumento de la fragilidad eritrocítica y disminución del promedio de vida de los eritrocitos. En animales no tratados, cerca de un tercio de gatos con la enfermedad aguda pueden morir como resultado de la anemia severa. Los gatos que se recuperan sin tratamiento desarrollan episodios




LABORATORIO CLINICO VETERINARIO –SEPTIMO SEMESTRE-UNIVERSIDAD DE LA AMAZONIA recurrentes de parasitemia y permanecen infectados por meses y años. Los portadores crónicos parecen clínicamente normales, pero presentan anemia regenerativa. Hay factores de riesgo para la presentación de la Hemobartonelosis, como anemia, estado positivo al V.L. Fe, historia de abscesos por mordedura de gato, animales menores de 4 años, o animales que deambulan fuera de casa. La inmunosupresión producida por infección con VLFe, esplenectomía o terapia con corticosteroides aumentan la posibilidad de observar la ricketsia en frotis sanguíneos y pueden influir en la susceptibilidad y severidad de la enfermedad. La H. Canis puede ser transmitida experimentalmente por Rhipicephalus sanguineus y al igual que la H. Felis se puede transmitir por transfusión sanguínea. Se considera que la H. Canis es un hallazgo incidental durante el exámen de un frotis sanguíneo, el organismo es de poco significado clínico y que enfermedades infecciosas o no serán concurrentes en un perro con ricketsemia. La inmunosupresión potencia la parasitemia y en caso de esplenectomía, la severidad de la anemia. El diagnóstico de la hemobartonelosis en gatos y perros se hace mediante la observación del organismo en frotis coloreado de sangre periférica. El tratamiento de elección es la tetraciclina ( 20 mg / K / oral , t.i.d.) por 3 semanas . Con frecuencia es necesario detener la destrucción eritrocítica inmunomediada con drogas inmunosupresoras como glucocorticoides, como prednisolona ( 1-2 mg / K, b.i.d.) oral, por poco tiempo, para inhibir la eritrofagocitosis.

HEPATOZOONOSIS La hepatozoonosis ocurre en Cánidos y Félidos domésticos y salvajes, como tambien en pequeños mamíferos herbívoros e insectívoros. El agente causal de la hepatozoonosis canina y felina , el Hepatozoon canis, es un organismo protozoario coccidiano. La enfermedad se encuentra en todo el mundo. La transmisión se efectúa por la ingestión de la garrapata vectora ( Riphicephalus sanguineus ); ésta no puede transmitir la enfermedad a través de su picadura. Las garrapatas se infectan durante la succión de sangre por ingestión de monocitos y neutrófilos que contienen gametocitos. En áreas endémicas los carnívoros salvajes probablemente sirven como reservorios de la infección. Después de la ingestión de una garrapata infectada por un carnívoro, los esporozoitos del H. Canis son liberados y penetran el epitelio intestinal. Ocurren ciclos de esquizogonia primero en los fagocitos mononucleares y células endoteliales, luego en músculo esquelético, miocardio, pulmones, hígado, bazo, ganglios linfáticos y piel. Los microesquizontes resultantes pueden persistir en las células como estructuras vesiculares por varios períodos sin incitar una respuesta inflamatoria o pueden liberar micromerozoitos que producen inflamación granulomatosa. Los micromerozoiros eventualmente infectan monocitos y neutrófilos donde se desarrollan en gametocitos que pueden ser ingeridos por la garrapata vectora. Los síntomas clínicos son variables en perros infectados con H. Canis. Infecciones concurrentes especialmente con otros parásitos sanguíneos ( Babesia canis, Ehrlichia canis ) transmitidos por el mismo tipo de garrapatas, puede ser importante en el cuadro clínico. La presentación típica es fiebre intermitente crónica y pérdida de peso. Otros síntomas observados son anemia, diarrea sanguinolenta,




LABORATORIO CLINICO VETERINARIO –SEPTIMO SEMESTRE-UNIVERSIDAD DE LA AMAZONIA anorexia, depresión y parálisis lumbar, hiperestesia muscular especialmente notable en el dorso, secresión purulenta nasal y ocular. La hiperestesia se manifiesta por una renuencia a moverse y rigidez cervical y del tronco, probablemente como resultado de reacción perióstica o inflamación muscular. Los perros frecuentemente asumen una posición de “ sumisión al amo “. El dolor, particularmente en la región lumbar, puede parecer una enfermedad traumática o degenerativa de la espina dorsal. Debido a la fiebre, dolor lumbar y leucocitosis, algunos casos se pueden confundir con pielonefritis o discoespondilitis; otros síntomas observados son tos, poliuria y polidipsia. Se piensa que los síntomas son el resultado de una combinación de la inflamación de tejidos donde se produce la liberación de micromerozoitos y mecanismos inmunes. Son comunes la vasculitis, glomerulonefritis, amiloidosis hepática y esplénica, inflamación granulomatosa y necrosis del miocardio y músculo esquelético. La patología clínica y la radiografía son los recursos diagnósticos útiles en la evaluación de la hepatozoonosis. Un cuadro hemático revela una anemia no regenerativa de bajo grado, asociada con enfermedad crónica,; hay marcada leucocitosis ( de 20.000 a 200.000 leucocitos / uL ) con neutrofilia con o sin desviación a la izquierda, son frecuentes la monocitosis y linfocitosis; el leucograma puede variar bastante de un día a otro ; hay aumento de fosfatasa alcalina ; puede haber proteinuria con lesión glomerular. Las radiografías en forma característica revelan proliferación del periostio en los orígenes e inserciones de los músculos en vertebras, pelvis, radio, cúbito, húmero, fémur, peroné, tibia y mandíbula. El diagnóstico definitivo depende de la demostración del parásito en exámenes citológicos o histopatológicos. El H. Canis se puede observar en un frotis sanguíneo coloreado, aparece como una inclusión oval azul hielo pálida en el citoplasma de monocitos y neutrófilos. La parasitemia es baja ; los frotis de la capa anteada del microhematocrito y aspirados esplénicos aumentan la probabilidad de demostrar el organismo. La forma más consistente de demostrar es la histopatologá del tejido muscular. Tratamiento : No se conoce ningún tratamiento efectivo de la hepatozoonosis. Se ha usado tetraciclina, oxitetraciclina, imidocarb, aceturato de diminazeno, enrofloxacina, primaquina pero los resultados no son confiables. La primaquina ( 0.5 mg / K ) SCT por una vez parece ser más efectiva. El tratamiento paliativo con drogas anti-inflamatorias no esteroidales parece ser el aspecto más importante en la terapia ; drogas como aspirina, fenilbutazona o flunixina todas parecen ser de valor en mejorar el malestar en la enfermedad clínica. La prevención de la enfermedad se debe hacer controlando las garrapatas vectoras. CITAUXZOONOSIS La citauxzoonosis felina es una enfermedad con frecuencia fatal producida por el piroplasma Cytauxzoon felis, del orden Piroplasmida y familia Theileriidae ; esta familia tiene una fase eritrocítica y una fase leucocítica o tisular ; en el C. felis la fase leucocítica o tisular consta de grandes esquizontes que se desarrollan dentro de los macrófagos o monocitos. Además de los félidos el Cytauxzoon afecta animales ungulados de Africa, y a gatos de E. U. ( Florida, Texas, Georgia, Missouri ), donde es probablemente transmitido por la garrapata Dermacentor variabilis. El lince y la pantera parecen ser los reservorios naturales de la enfermedad. La enfermedad clínica es causada por la replicación del,parásito durante la fase tisular que ocurre en los monocitos sanguíneos y macrófagos tisulares, y hemólisis durante la fase eritrocítica..




LABORATORIO CLINICO VETERINARIO –SEPTIMO SEMESTRE-UNIVERSIDAD DE LA AMAZONIA En casos de citauxzoonosis en gatos domésticos que se infectan en forma natural se ha observado anorexia, disnea, letargo, deshidratación, depresión, ictericia y / o palidez y fiebre alta : 39.4- 41.6 C hacia el 5 día de iniciada la enfermedad y luego cae a la subnormal ; la mayoría de los gatos mueren de 2-3 días después del pico febril, apareciendo de 1 a 4 % de eritrocitos parasitados. Rara vez se observa hemoglobinuria y bilirrubinuria. En el tiempo de la parasitemia se desarrolla anemia, trombocitopenia, ictericia y esplenomegalia. La citauxzoonosis se diagnostica demostrando los organismos de 1.0 – 1.5 um redondos u ovales en forma de sortija dentro de los eritrocitos. La fase tisular del parásito puede ser demostrada histopatológicamente en ganglios linfáticos, bazo, hígado y pulmones. No se conoce un tratamiento exitoso de manera confiable. La terapia de soporte con líquidos y antibióticos de amplio espectro ( tetraciclina ) pueden prolongar el curso de la enfermedad pero no produce la curación, casi siempre es fatal. En áreas endémicas se deben aplicar medidas de prevención mediante el control de las garrapatas vectoras.

GLÓBULOS BLANCOS O LEUCOCITOS

Son mucho menos numerosos que los eritrocitos, encontrandose en una proporción de un leucocito por cada 500 a 1000 eritrocitos, se diferencias de los eritrocitos en que su interior no hay hemoglobina y porque poseen un núcleo bien formado. Se hallan en la sangre, linfa, fluido cerebro espinal y otros líquidos orgánicos.

1. Clasificación de los glóbulos blancos.

Los leucocitos observados en frotis de sangre normal pueden clasificarse en los siguientes grupos de acuerdo con su propiedad granular de citoplasma:

Neútrofilos

Granulocitos Eosinófilos o

Acidófilos Basófilos





Leucocitos

Agranulocitos Linfocitos

Monocitos

2. Características de los glóbulos blancos.

Neutrófilos: Tienen una vida de 6 -11 días. En condiciones fisiológicas esta célula no tiene función conocida.

En condiciones patológicas la función principal es la de fagocitar partículas pequeñas como bacterias, detritus, por esto esta célula se denomina micrófago.

Fuera de la capacidad de fagocitar antígenos o partículas que se presenten den tro del organismo tienen también función importante en la fagocitosis de los complejos antígeno- anticuerpo, en este caso lo hacen formando vacuolas o fagosomas, en las cuales vierten distintas enzimas para producir la digestión o alteración de la molécula

o el complejo fagocitado; la digestión puede ser completa y producir la degradación total del antígeno o incompleta y simplemente transformarlo para facilitar su digestión completa por parte de los macrófagos. Debido a su contenido en enzimas proteolíticas el neutrófilo interviene en la disolución y reparación de tejidos lesionados por infecciones, traumatismos.

Otros nombres que recibe el neutrófilo son: célula polimorfonuclear, célula del pus, segmentado. Los neutrófilos maduros tienen de 10-12 micras de diámetro, un poco más de eritrocito y medio en los frotis.





El núcleo de un neutrófilo maduro, está dividido en 2 a 5 lóbulos; el término lóbulo se refiere a una masa de sustancia nuclear que está completamente separada de las demás o unida a ellas por hebras muy finas de material nuclear.

Como los núcleos de los neutrófilos pueden tener un número variable de lóbulos a veces reciben el nombre de leucocitos polimorfonucleares, porque su núcleo presenta diferentes formas. Como es una palabra larga muchas veces se sustituye por la abreviatura polimorfo.

El núcleo tiene masas gruesas de cromatina las cuales son condensadas, compactas, por lo que se tiene intensamente de azul oscuro. El citoplasma es de color rosado pálido; el citoplasma del neutrófilo maduro ocupa más espacio que el núcleo y muestra pocos detalles estructurales excepto que esta bastante uniforme y completamente espolvoreado de gránulos pequeños. En muchas preparaciones son tan finos que resulta difíciles de observar en el microscopio de luz ; en general los gránulos son de color lila.

Neutrófilos no maduros. Son nutrófilos con núcleo con forma de herradura y se denominan neutrófilos en banda o en cayado. En condiciones normales el núcleo del neutrófilo en banda se segmenta para dividirse en dos o más lóbulos antes que la célula pase a la circulación; en condiciones normales en los frotis se ven 1-2% de neutrófilos en banda.

Cuando hay mayor necesidad de neutrófilos en la sangre pasan en mayor cantidad al torrente circulatorio forma de neutrófilos en banda.

Eosinófilos. Tienen de 10-15 u de diámetro. Los núcleos de los eosinófilos suelen tener dos lóbulos que pueden estar unidos o libres o unidos con una hebra de material nuclear.

Las masas gruesas de cromatina no estan condensadas en los núcleos de los eosinófilos como en los neutrófilos, por lo tanto los núcleos de los eosinófilos no se tiñen tan intensamente.

El citoplasma de los eosinófilos está lleno en forma característica de gránulos refrigentes voluminosos, redondeados y de tamaño uniforme, que en frotis bien teñido tien color rojo o anaranjado. El eosinófilo tiene una vida de 6-11 días.





La mayor fuente de histamina es la disolución de las células tisulares de mast y los basófilos en la sangre, con degranulación y liberación de histamina en los tejidos.

Los eosinofilos neutralizan la histamina, serotonina y bradiquinina produciendo un efecto anti-inflamatorio. Los gránulos eosinofílicos contienen peroxidasa que parece tener efecto anti-inflamatorio en sitios donde interactúan antígeno-anticuerpo. Los gránulos son lizosomas que contienen enzimas digestivas: fosfatasas alcalina y ácida.

Basófilo: Tiene de 10-12 u de diámetro. La mitad de la célula está formada por el núcleo que puede estar segmentado y casi siempre tiene forma muy irregular.

El núcleo se tiñe mucho menos intensamente que el del neutrófilo o el eosinófilo y esta enmascarado por los grandes gránulos teñidos de azul oscuro que hay en los citoplasmas y se observan cubriendo el núcleo más pálido.

El basófilo elabora dos sustancias químicas im´portantes: la heparina y la histamina. La histamina se libera en los sitios donde se localizan sustancias extrañas como bacterias, proteína extraña, para aumentar el flujo sanguíneo produciendo edema y para atraer a los demás leucocitos como los neutrófilos y los eosinófilos.

La heparina es secretada en los alrededores de una lesión crónica para mantener el estado líquido en el área con su actividad como anticoagulante potente, esto permite que circulen con facilidad las demás células blancas en el área lesionada

Linfocitos:El linfocito pequeño es una célula de diámetro relativamente reducido, tienen de 7-12 u, la mayor parte apenas son un poco más voluminosos que los eritrocitos.

Las característica más notable del linfocito pequeño es que esta formado casi totalmente de núcleo. La cromatina de los linfocitos pequeños está dispuesta en acúmulos gruesos que tiñen fuertemente de azul oscuro . El citoplasma es escaso,de color azul celeste oscuro; no posee gránulos citoplasmáticos, sin embargo algunas veces cintiene gránulos escasos de color lila.





Aunque la mayor parte de los linfocitos son pequeños, el 10% aproximadamente tienen un mayor volúmen, tienen un diámetro de 16 u más o menos y reciben el nombre de linfocitos grandes.

Los linfocitos son la fuente principal de la producción de anticuerpos; del citoplasma del linfocito se sintetizan las inmunoglobulinas. Otro tipo de linfocito mediante ciertos mecanismos influyen en la defensa del organismo mediante la llamada inmunidad celular.

Monocitos: aunque no todos los monocitos son mayores que otros tipos de leucocitos, las células blancas más voluminosas que se observan en los frotis de sangre suelen ser monocitos.

Tienen de 10-15 de diámetro. Los núcleos de los monocitos varían desde la forma oval con ligera hendidura, hasta la forma de herradura, en algunos casos la hendidura es suficiente grande. La cromatina del núcleo está dispuesta en una red de gránulos y manchas, la red es de textura más fina que la de lso núcleos de los linfocitos y toman un color azul menos intenso.

El citoplasma de los monocitos es relativamente abundante, comprende la mayor parte de la célula. En frotis teñido tiene un color gris azuloso pálido, en él se observan aveces gránulos finos de color lila, parecidos a los de los neutrófilos.

Los monocitos son células móviles. Una característica de su movimiento es la capacitar de emitir y retraer seudópodos citoplasmaticos.

Su función más importante es la fagocitosis especialmente de partículas grandes como eritrocitos, núcleos degenerados, protozoarios, hongos y algunas bacterias, por eso frecuentemente se llama macrófago.

Como célula fagocítica juega un papel importante en la depuración de los sitios de inflamación y por medio de enzimas intracelulares digiere las proteínas fagocitadas





Los fagocitos mononucleares circulan en la sangre como monocitos y se transforman en los tejidos en macrófagos o en células fagocitarias fijas como histiocitos o especializadas como las de Kupffer en el hígado ( sistema fagocítico monocítico ).

El macrófago degrada la bacteria o molécula antigénica de gran tamaño para separar de ella los inmunógenos o radicales a porciones verdaderamente antigénicas, las cuales presentan a los linfocitos transformandolos en células inmunológicamente activadas.

PLAQUETAS

En la sangre circulante son discos ovales, en frotis sanguíneo tienen forma redondeada.

El tamaño varía de 1a 4 u. Las plaquetas son fragmentos del citoplasma de un megariocito, que al liberarse quedan sólos o en grupos pequeños.

En una plaqueta en frotis coloreado se observan dos partes:

El hialómero o periferia que se ve lisa y de color azul claro; tien forma variable; el mielómero o parte central que es granular, de color azul rojizo , rojo o violáceo.

La función de las plaquetas es intervenir en el mecanismo de coagulación de la sangre.

FORMACIÓN DE LAS CÉLULAS EN LA MÉDULA ÓSEA Y SISTEMA LINFOIDE





Célula primordial. ( Stem Cell ). Todas las células sanguíneas maduras de la médula ósea se originan de ella.

Al hacer un examen de frotis de médula ósea coloreada con Giemsa o Wright se encuentra esta célula que se caracteriza por poseer un núcleo redondo, grande, central con cromatina fina que toma un color morado rojizo; se encuentran finos nucleolos. El citoplasma es abundante, toma un color azul pálido; la periferia es irregular, muchas veces se ven seudópodos.

El citoplasma tiene una apariencia espumosa y alrededor del núcleo está menos coloreado. Es una célula grande, es de las más grandes de la médula ósea.

Serie granulocítica

Los estados de desarrollo de las células de la serie granulocítica desde inmaduro a maduro son: mieloblastos - promielocito ( progranulocitos ) -- mielocito -- metamielocito-- célula de banda - - granulocito segmentado.

Mieloblasto: Tiene un citoplasma angosto de color azul grisáceo, es una célula esferica generalmente. Tienen un núcleo central redondo, casi del tamaño de la célula

con una estructura de cromatina fina, de color morado rojizo, con 1-4 nucleolos de color azul pálido. No tiene gránulos en el citoplasma.

Promielocito: Su núcleo es más denso, posee nucleolos y está ligeramente desplazado del centro. La presencia de gránulos no diferenciados irregulares y oscuros en las características que distingue esta célula.

Mielocito: En esta etapa es cuando se pueden observar las primeras diferencias entre células basofílicas, eosinofílicas y neutrofílicas. Estos tres mielocitos se distinguen de acuerdo con el color y la morfología de los gránulos del citoplasma.





El núcleo del mielocito es más ovoide y frecuentemente desplazado; en algunos mielocitos persisten los nucleolos.

A. Mielocito eosinofílico : Sus gránulos son esféricos, grandes casi de igual tamaño y de color rosado o anaranjado.

B. Mielocito basofílico: De gránulos irregulares en forma y tamaño, de color azul oscuro, casi negro.

C. Mielocito neutofílico: En el citoplasma hay gránulos pequeños, finos de un color neutro , no tienen afinidad por ninguno de los colorantes.

Metamielocito: La mayor diferencia entre los metamielocitos es la presencia de gránulos distintos, hay metamielocitos eosinofílicos, basofílicos y neutrofílicos.

El núcleo tiene una forma de un riñon y la textura es muy irregular porque hay áreas donde se concentran la cromatina y otras son muy pálidas. En esta etapa se inicia la capacidad de movimiento.

Banda. Los lados del núcleo son más o menos paralelos y forman una banda o cinta

El citoplasma queda con los gránulos característicos de cada uno de los tres tipos mencionados. En algunos animales aparece esta célula en la sangre periférica en pequeños números.

Segmentado. Se considera segmentados cuando hay una o varias constricciones de más del 50% del grosor del núcleo.

En los basófilicos y eosinófilicos segmentados casi nunca hay más de dos segmentos o lóbulos en el núcleo, mientras que en los neutrófilos puede haber de 3-5 lóbulos normalmente, de ahí su nombre polimorfonuclear.

Serie trombocítica.





Megacarioblasto: Blasto igual que los otros. Núcleo grande, con poco citoplasma; hay varios nucleolos.

Promegacariosito: Núcleo con dos o más lóbulos. Hay gran cantidad de citoplasma

Megacariocito: Es de las células más grandes del cuerpo de 50 a 150 u de diámetro; núcleo multilobulado , rugoso y morado rojizo.

Hay un a forma jóven y una madura de megacariocito. El núcleo es multilobulado en ambos ; en el megacariocito jóven el citoplasma es azul pálido . Ocasionalmente se encuentran seudópodos; la forma madura tiene un citoplasma más granular azul rojizo y se puede observar la primera formación de trombocitos en la periferia del citoplasma.

Trombocito o plaqueta: El citoplasma del megariocito maduro se fragmenta y se forma los trombocitos que quedan sólos o en grupos pequeños. Cada trombocito consta del hialómero o periferia azul pálido; el mielómero o parte central que es granular de color rojizo.

Series mononucleares.

Llamadas también agranulocíticas corresponden al desarrollo de linfocitos, monocitos y plasmocitos.

Se forman en el tejido linfoide en muchas partes del cuerpo ; en el bazo, timo tonsilas , ganglios linfáticos, placas de Peyer, bolsa de Fabricio en las aves.

Blastos : Se pueden llamar linfoblastos, monoblastos o plasmoblastos. Es dificíl diferenciar esta célula de otros blastos excepto cuando hay un número abundante de otras células acompañantes.

Prolinfocito: El citoplasma es azul claro, con un núcleo más pequeño que en el blasto,





debido a que el núcleo es más compacto y de apariencia más homogénea que en la etapa anterior. El contorno del núcleo es casi siempre irregular, ocasionalmente se observan nucleolos.

Linfocitos: Hay dos células maduras: El linfocito grande y el linfocito pequeño. En el primero el citoplasma es azul celeste claro, el linfocito pequeño tiene citoplasma azul celeste oscuro.

Promocito: Muy parecido al prolinfocito.

Monocito: Es la célula más grande que se encuentra normalmente en la circulación.

El citoplasma es azul grisáceo pálido; el núcleo tiene una invaginación que le da la apariencia de riñón.

Proplasmocito: Se observa un desplazamiento del núcleo hacia un lado de la célula que toma la forma de huevo.

Plasmocito: Tiene la forma de un huevo, con le núcleo localizado en la parte más ancha del citoplasma. El núcleo es denso y a su alrededor se encuentra un área que no toma muy bien la coloración y se llama halo perinuclear. El resto del citoplasma es de color azul oscuro.

LEUCOCITOS

La corriente sanguínea transporta los glóbulos blancos hasta el sitio donde van a cumplir sus funciones.

Por eso se emplea el examen de sangre periférica para determinar el número total y los diferentes tipos de leucocitos en un momento dado.

El recuento total y diferencial de leucocitos se hace como parte de un examen físico de rutina. Se hará cuando la historia y el examen clínico revelen la existencia de una anormalidad que pueda causar cambios en el cuadro de leucocitos en un momento dado.





El recuento total y diferencial de leucocitos se hacen como parte de un examen físico de rutina. Se hará cuando la historia y el examen clínico revelen la existencia de una anormalidad que puedan causar cambios en el cuadro de leucocitos lo que ayudaría a confirmar un diagnóstico y de ayuda al pronóstico.

Esas determinaciones son de mayor valor en los animales con enfermedades sistémicas o en individuos con una enfermedad localizada.

Recuento total de leucocitos.

Método del hemocitómetro: El equipo necesario para recuento total de leucocitos son la cámara de recuento de Neubauer, la pipeta para dilución de leucocitos y diluyente que puede ser ácido ácetico al 1-3 %, ó ácido clorhídrico 0.1 N ó solución al 1 %, frecuentemente s añade azul de metileno para identificar estas soluciones en el laboratorio. ( solución de Turk ).

La pipeta diluidora tiene dos marcas que se usa para hacer la dilución de sangre, una es 0.5 en la porción capilar y la marca 11 por encima del bulbo de la pipeta. La pipeta se llena aspirando la sangre con el tubo de látex, se llena hasta la marca 0.5 y el exceso de sangre se elimina con una gasa. Luego se aspira el diluyente hasta la marca 11 de la pipeta, quedando una dilución de 1.20, se agita la pipeta para homogenizar las células blancas, los eritrocitos son lisados por el ácido del diluyente.

Se elimina el liquido que haya en la porción capilar, se secara el extremo de la pipeta. La punta de la pipeta se coloca en un lado de la cámara y se deja caer una gota de solución que por capilaridad llena la cámara. El recuento total de leucocitos se hace después de 1 a 2 minutos para permitir que las células se sitúen en el mismo plano. Se usa el objetivo de bajo aumento ( 10X ) y se cuentan las células que se encuentran en los cuatro cuadros primarios de los extremos del área cuadriculada de la cámara. Después de hacer el recuento de los 4 cuadros se aplica la siguiente formula:

Total de leucocitos en 4 mm 2 x 20 x 10 = Recuento total

_______________________ Leucocitos / mm 3 o ul

4

ó total de leucocitos en 4 mm 2 x 50 = Leucocitos / mm 3 o ul.




LABORATORIO CLINICO VETERINARIO –SEPTIMO SEMESTRE-UNIVERSIDAD DE LA AMAZONIA Ejemplo de valores normales en: Caninos : 5500-18.000

Leucocitos / mm 3.

Bovinos: 4000-12.000

Leucocitos / mm3

Recuento celular relativo o recuento diferencial Es el porcentaje de cada clase de leucocitos en un frotis sanguíneo coloreado. Se cuentan 100 a200 células blancas en un frotis sanguíneo y el resultado se expresa en porcentaje.

Recuento diferencial normal en caninos:

Neutrófilos segmentados 60-77 %

Neutrófilos en banda 0-3 %

Linfocitos 12-30 %

Monocitos 3-10 %

Eosinofilos 2-10 %

Basofilos Raros.

Recuento celular absoluto.

Es la cantidad de cada clase de leucocitos por mm3 de sangre. Se calcula multiplicando el número total de leucocitos / mm 3 por el porcentaje celular del leucocito correspondiente y dividiendo por 100.

Los término neutrofilia relativa, linfocitos relativa, eosinofilia relativa, etc. indican un aumento en el porcentaje de la célula respectiva en el recuento diferencial.

Los términos neutrofilia absoluta, linfocitos absoluta, etc. corresponden al aumento en el número mm 3 de la célula anotada.





Corrección de la cuenta de leucocitos por la presencia de eritrocitos nucleados.

Si en un recuento diferencial hay más de 5 eritrocitos nucleados por 100 leucocitos, el recuento total de leucocitos, el recuento total de leucocitos debe ser corregido, para ello se aplica la siguiente fórmula:

x = 100

_____ X recuento total de leucocitos aparentes

100 + N

Donde :

x = valor del recuento leucocitario total real o corregido, con este valor se obtienen los valores absolutos de los glóbulos blancos.

N = al número de eritrocitos nucleados contados

Interpretación de los recuentos leucocitarios.

Si la interpretación se basa sólo en el recuento diferencial sin tener en cuenta el recuento total y el absoluto se puede incurrir en conclusiones erroneas.

Ejemplo : Tenemos dos vacas con el mismo recuento diferencial

Neutrófilos segmentados 56 %

Linfocitos 39 %

Fosinófilos 2 %

Monocitos 3 %





Este recuento diferencial indica un porcentaje aumentado

en los neutrófilos con una disminución en el porcentaje de linfocitos.

Si la vaca N 1 tiene un recuento total de leucocitos de 10.000/ mm 3 y la vaca N 2 tiene 15.000 / mm 3; estos valores convertidos en recuentos absolutos darán los siguientes resultados.

Vaca N 1 Vaca N 2

Neutrófilos segmentados 5600 8400

Linfocitos 3900 5850

Eosinófilos 200 300

Monocitos 300 450

La vaca N 1 tiene un aumento absoluto en el número de neutrófilos segmentados

( normal = 2240 ) y una disminución en el número total de linfocitos ( normal 4640 )

La vaca N 2 con el mismo recuento diferencial hay un aumento en el recuento absoluto en neutrófilos segmentados, pero a pesar del porcentaje disminuido en linfocitos el número total de esas células es casi normal. Por eso una interpretación basada sólo en un recuento diferencial no refleja la verdadera alteración en la distribución celular.

La interpretación segura de las alteraciones de los leucocitos depende de una comprensión de los diferentes factores que influyen en el recuento diferencial o total de leucocitos tanto en el animal sano como en el enfermo.

Para la interpretación del recuento de leucocitos se deben tener en cuenta algunos factores fisiológicos:

1 ) Edad del animal: En general el recuento total en el perro y terneros es alto al nacimiento. En cerdos jóvenes el recuento es bajo: El recuento total en le perro joven es mayor que en el adulto.

2 ) Especie animal. La variación de las especies animales es marcada variando de un predominio de linfocitos en el bovino, en perros hay predominio de neutrófilos segmentados.





3) Grado de excitación y actividad muscular del paciente en el momento de la toma de la muestra: En animales nerviosos o que han tenido un ejercicio violento antes de la toma de la muestra de sangre el número de neutrófilos será mayor que el normal.

4) Estado de preñez. En algunos animales ( vacunos y perros ) la preñez influye en el cuadro leucocitario: En un porcentaje alto de vacas hay un recuento alto de leucocitos en los últimos estados de preñez.

5 ) Estado del ciclo estral. En vacas puede haber un ligero aumento en el recuento total y en los neutrófilos el día del estro y hasta un día después.

6 ) Estado de digestión. El estado de digestión influye en el recuento total de neutrófilos en los caninos; no hay alteración en bovinos. Puede haber un aumento de leucocitos y neutrófilos una hora después de comer, alcanzando un máximo unas 3 a 4 horas.

ALTERACIONES EN LA DISTRIBUCIÓN DE LEUCOCITOS

Definiciones: Agranulocitósis ó granulocitopenia. Es la disminución del número de granulocitos.

Granulositosis. Es el aumento del número de granulocitos.

Leucocitosis.

Es un aumento en el recuento total de leucocitos por encima del límite máximo normal.




LABORATORIO CLINICO VETERINARIO –SEPTIMO SEMESTRE-UNIVERSIDAD DE LA AMAZONIA Este aumento en el recuento total de leucocitos es generalmente una consecuencia de un aumento en el número total de neutrófilos circulantes, aunque en algunas circunstancias otro tipo de células blancas pueden estar aumentadas.

Esta alteración en los leucocitos puede ser consecuencia de una respuesta fisiológica normal o debida a una condición patológica. La leucocitosis patológica como norma es un aumento en los neutrófilos segmentados.

Este aumento en los neutrófilos puede ser relativo ( un aumento en el porcentaje de neutófilos ) o absoluto ( un aumento en el número total de neutrófilos / mm 3 ).

Causas generales de leucocitosis:

a. Infecciones generalizadas

b. Infecciones localizadas

c. Intoxicaciones incluyendo aquellas que producen transtornos metabólicos (uremia, acidosis, eclampsia) por drogas y venenos.

d. En neoplasias de rápido crecimiento.

e. Hemorragias, particularmente en una cavidad corporal: torácica, peritoneal, articular.

f. Hemólisis súbita de eritrocitos.

g. Leucemias

h. Trauma

Neutrofilia

Es el aumento de neutrófilos por encima del límite máximo normal.

Causas de neutrofilia:

Infecciones sistemáticas: Causadas por bacterias principalmente, hongos, espiroquetas, rickettsias, protozoarios, parásitos.





En muchas de estas condiciones la neutrofilia puede estar precedida por leucopenia.

La neutrofilia que ocurre en infecciones sistemáticas como salmonelosis, pasterelosis, leptospirosis u otras septisemias usualmente no es marcada, pero los neutrófilos que aumentan son Neutrófilos inmaduros.

Infecciones localizadas: Incluidas en este grupo están las infecciones producidas por microorganismos piogénos como los estafilococos, estreptococos, corynebacterium, Pseudoma, pasteurella, Actinomyces, Nocardia y fusobacterium.

El grado de neutrofilia es usualmente mucho mayor en infecciones localizadas que en enfermedades sistemáticas. El grado de neutrofilia no está siempre relacionada con el tamaño del proceso piogéno localizado si no es más importante la presión ejercida dentro de él. Por ejemplo un absceso pequeño bajo considerable presión pero aun sin membrana limitante producirá una mayor neutrofilia que uno más grande pero con membrana limitante.

Hay neutrofilia en mastitis, piómetra, piotorax, pericarditis traumática, peritonitis, empiema, osteomielitis, pielitis, otitis, tonsilitis, faringitis.

Enfermedades no infecciosas. Incluidas en esta categoría están las alteraciones metabólicas como uremia, acidosis, diabetes y eclempsia. Químicos tóxicos como plomo, mercurio, arsénico; drogas como adrnalina, corticosteroides y digital pueden producir neutrofilia.

También tejidos destruidos como en postoperatorios a cirugías prolongadas con abundantes tejidos dañados, en quemaduras, infartos, trombosis.

En hemorragias en cavidades serosas dek cuerpo ( peritoneo, pleura, articulaciones ). En neoplasias malignas de rápido crecimiento con necrosis y hemorragia; en leucemia granulocítica neutrofílica.

Eosinofilia





Es el aumento en el número de eosinófilos circulantes en la sangre periférica. Se observa en las siguientes condiciones.

En respuesta de hipersensibilidad en parasitismo y reacciones alérgicas. En parasitismo cuando hay migración y penetración de los tejidos como en larvas de ascaris, triquinas, ancilosistomas, estróngilos , equinococos, cestodos, espirocerca, fasciola, esofagostomiasis, nematodos pulmonares. En reacciones alérgicas como en asma, urticaria, bronquitis alérgica, dermatitis alérgica y alergias alimenticias.

- Reacciones anafilácticas que son también respuesta de hipersensibilidad.

- Insuficiencia adrenocortical

- Leucemias granulocíticas eosinofílicas.

- Neoplasias de los ovarios, membranas serosas y huesos.

- Miosistis eosinofílica.

- Gastroenteritis eosinofílica en el perro.

- Granuloma eosinofílica en el gato.

Basofilia.

Es un aumento en el número de basofílicos. Es raro en los animales domésticos y ocurre más probablemente asociada con la eosinofilia u ocurre como resultado de una leucemia granulocítica basofílica. En el perro se encuentra basofilia cuando hay filarias en el corazón, también en bronquitis crónica.

Linfocitosis




LABORATORIO CLINICO VETERINARIO –SEPTIMO SEMESTRE-UNIVERSIDAD DE LA AMAZONIA Es un aumento en el número de linfocitos circulantes, ocurre ocasionalmente en los animales domésticos y puede ser causada por:

Leucemias linfocíticas; después de vacunaciones; hipertiroidismo, se puede observar en estados de recuperación de algunas infecciones crónicas, (causan estimulación antigénica de los linfocitos T ).

Monocitosis

Es el aumento de los monocitos. Ocurre en:

- Enfermedades crónicas especialmente en las que debe ser removido material particulado grande, como en infecciones micóticas profundas, tuberculosis y la mayoría de condiciones acompañadas por una reacción granulomatosa.

- Enfermedades infecciosas como erisipela del cerdo, listeriosis y brucelosis.

- En la leucopenia y neutropenia se puede observar una monositósis.

- en leucemias monocíticas.

- En período postparto en vacas ( unos 10 días después ); en período post operatorio; en retención de placenta.

- Exudado en cavidades pleural y peritoneal. En supuración en cavidades corporales. Leucopenia

Es una reducción en el recueno de leucocitos por debajo de lo normal. La leucopenia puede ser de varios o de todos los tipos de células blancas ( agranulocitosis, granulocitopenia, panleucopania ) o de un solo tipo celular: neutropenia, eosinopenia, linfopenia.




LABORATORIO CLINICO VETERINARIO –SEPTIMO SEMESTRE-UNIVERSIDAD DE LA AMAZONIA Las causas generales de leucopenia están relacionadas con alteraciones de la medula ósea y son conocidas como el mecanismo de las 4D:

1) Degeneración

2) Depresión

3) Depleción

4 ) Destrucción

Si aparece cualquiera de estas alteraciones en la medula ósea, hay disminución de leucocitos circulantes.

Degeneración de la medula: Es el resultado de una condición que causa una completa interrupción en la medula ósea quedando inhabilitada para madurar las células.

Esa condición se refleja por el gran número de formas inmaduras de neutrófilos en la circulación periférica.

Depresión de la medula : Resulta cuando la medula no esta formando células de manera normal. Esta alteración se caracteriza por un número disminuido de neutrófilos con ninguno o muy pocos neutrófilos inmaduros en sangre.

Depleción de la medula: Ocurre cuando la demanda de leucocitos es tal que el almacenamiento de esas células normalmente presentes en la medula está agotada y la reacción compensatoria funcional que tiene normalmente no se manifiesta. La depleciación se caracteriza por un recuento bajo de neutrófilos en la sangre periferica.

Destrucción de la medula : Es el resultado de agentes químicos y físicos que destruyen los elementos formadores de sangre en la medula ósea. Se manifiesta por disminución de todo tipo de células formadas en la medula y el animal llega a estar anémico además de la leucopenia.

Condiciones que puede causar la leucopenia.




LABORATORIO CLINICO VETERINARIO –SEPTIMO SEMESTRE-UNIVERSIDAD DE LA AMAZONIA 1 ). Infecciones virales como distemper canino, parvovirocis canina, hepatitis infecciosa canina, hepatitis infecciosa canina, panleucopenia felina, peste porcina, influenza porcina, enfermedades de las mucosas.

Se observa leucopenia en los estados iniciales de la enfermedad. Las infecciones secundarias que siguen la infección viral se acompaña de leucocitósis.

2 ) Infecciones bacterianas sobreagudas. Producen leucopenia, hay disminución de neutrófilos con un aumento de neutrófilos inmaduros.

3 ) En estados caquécticos y de debilidad que puede ser causa de carencia de ciertos factores nutricionales hay agotamiento de la medula.

4 ) Agentes físicos como rayos X y sustancias radioactivas que produce destrucción de los elementos celulares de la medula ósea.

5) Algunos agentes químicos como antibióticos: cloranfenicol, penicilina, estreptomicina, oxitetraciclina, griseofulvina, analgésicos, como fenacetina, antipirina, aminopirina, químicos inorgánicos: plomo, benceno, bismuto, mercurio, cortisónicos, antihistaminicos y sulfas, fenilbutazona.

6 ) En shock anafiláctico y en los estados iniciales de la reacción a proteína extraña, producen leucopenia por secuestro de neutrófilos.

Neutropenia

Es una disminución de los neutrófilos en la sangre circulante. Se puede presentar en:




LABORATORIO CLINICO VETERINARIO –SEPTIMO SEMESTRE-UNIVERSIDAD DE LA AMAZONIA Sepicemia general, intoxicación severa, enfermedades virales, ( hepatitis infecciosa y parvovirosis caninas ), tumor metastásico en medula ósea.

En infecciones bacteriales severas: peritonitis canina, neumonía por aspiración.

Linfopenia

Puede ser causada por :

a) Enfermedades virales como distemper, hepatitis infecciosa canina, parvovirosis canina, peste porcina, diarrea viral bovina.

b ) En respuesta a condiciones de estrés hay una moderada a marcada disminución en el número relativo y absoluto de linfocitos, probablemente como resultado de la secreción de sustancias adrenocorticales ( corticosteroides ) que causan disolución de esas células.

c) Radiaciones ionizantes o uso de drogas inmunosupresoras.

Eosinopenia

Es la disminución de los eosinófilos circulantes; se puede presentar en:

a) Estrés por enfermedades ya sea aguda o crónica.

b) En administración de ACTH o corticoides ( corticosteroides ).

c) Hiperactividad de adrenales como consecuencia de hiperplasia o neoplasia.

Clasificación de la respuesta leucocitaria




LABORATORIO CLINICO VETERINARIO –SEPTIMO SEMESTRE-UNIVERSIDAD DE LA AMAZONIA Comunmente se usan ciertos términos para referirse a alteraciones que ocurren en el recuento diferencial y total de los leucocitos.

Desviación a la izquierda. Significa aumento en el número de neutrófilos inmaduros en la circulación periférica en respuesta a una infección.

Se han descrito dos tipos de desviación a la izquierda:

a) Desviación a la izquierda regenerativa: Es el aumento del número de granulocitos jóvenes y a la vez con aumento proporcional en el número total de leucocitos por mm3.

b) Desviación a la izquierda degenerativa. Es el aumento en el número de neutrófilos inmaduros pero con caída en el número total de leucocitos por mm 3.

Esta es una condición grave porque significa que la medula ósea no puede producir un número adecuado de células en respuesta a una infección.

Desviación a la derecha o hipersegmentación

Es la aparición en el recuento diferencial de un número variable de neutrófilos en grado avanzado de madurez, son más segmentados que lo normal, frecuentemente tienen de 6 a 9 lobulaciones nucleares. Es indicativo de la cronicidad de la condición; el efecto de lo corticosteroides por estrés impide parcialmente la diapédesis de neutrófilos con mayor maduración en la circulación; sangre con anticoaugulante dejada por mucho tiempo produce este artificio.

Neutrófilos tóxicos.

Son neutrófilos considerados anormales y se presentan en la sangre como resultado de una condición tóxica.

Hay varios criterios usados para identificar esas células:

a) Aparición de gránulos azul oscuros desde pocos hasta muchos en el citoplasma de los neutrófilos. b) En perro y en gato: presencia de vacuolas en la periferia de la célula.

c) En condiciones de extrema toxicidad: presencia de basofilia difusa en citoplasma de neutrófilos.





Reacciones leucemoides.

Son similares a una desviación a la izquierda regenerativa en la que hay leucocitósis extrema (con presencia de neutrófilos en banda y metamielociotos) simulando lo que se observa en leucemias.

Interpretación de las alteraciones de los leucocitos.

En general se puede decir que la leucocitósis es un índice de la resistencia del individuo y que el grado de desviación ala izquierda es una indicación de la severidad de la infección.

Una caída simultánea en el número total de leucocitos y aumento del número de Neutrófilos inmaduros es un signo de pronóstico desfavorable.

Se puede obtener tres factores en relación con una infección y la interpretación del cuadro leucocitario:

a) Severidad de la condición: En este caso se aplican los términos: leve, moderada, marcada ( 14 ).

b) Duración del proceso. Se utilizan las palabras: corto ( agudo ), moderada y larga

( crónica ).

c) El pronóstico de la condición puede ser: favorable, reservado o desfavorable.

La severidad de una enfermedad es juzgada por las siguientes condiciones:

- Una neutrofilia con una ligera desviación a la izquierda y persistencia de eosinófilos y linfocitos sugiere una infección moderada que está siendo bien manejada por el mecanismo de defensa del organismo.




LABORATORIO CLINICO VETERINARIO –SEPTIMO SEMESTRE-UNIVERSIDAD DE LA AMAZONIA - Un recuento total alto de leucocitos principalmente de neutrófilos es indicativo de una condición más severa con buena respuesta de la medula ósea.

- Una neutrofilia con linfopenia y eosinopenia indica una condición de moderada a severa y refleja estrés.

- Si hay granulaciones tóxicas o neutrófilos tóxicos la condición responsable de esas células es severa.

- Si hay neutrófilos inmaduros en exceso con respecto a los maduros la condición severa.

- Si un animal tiene evidencia clínica de enfermedad de marcada a moderada severidad, y no hay respuesta en los leucocitos, la condición se debe considerar más severa que si ocurriera una alteración leucocítica.

- Un recuento total bajo con una proporción disminuida de neutrófilos y una recuperación de linfocitos y esosinófilos indica mejoramiento y posible recuperación.

La duración de la enfermedad puede ser estimada por un examen de las alteraciones de los leucocitos. Sin embargo no es una evaluación segura.

- La enfermedad aguda puede estar acompañada ya sea por una desviación a la izquierda regenerativa con la apariencia característica de neutrófilos inmaduros o como en el caso de estados agudos de enfermedades virales por una leucopenia.

- A medida que la enfermedad progresa el número de formas inmaduras disminuyen y aunque el recuento total de neutrófilos puede continuar siendo alto, la mayoría de las células con maduras.

- Enfermedades crónicas: Una de las alteraciones más características es un aumento absoluto en los monocitos.

El pronóstico de la enfermedad se logra por interpretación adecuada del recuento de leucocitos. Se deben hacer varios recuentos.




LABORATORIO CLINICO VETERINARIO –SEPTIMO SEMESTRE-UNIVERSIDAD DE LA AMAZONIA Los signos pronósticos desfavorables son:

- Desviación a la izquierda degenerativa.

- Linfopenia persistente.

- Intoxicación severa indica por aumento marcado en los neutrófilos tóxicos.

- Ausencia total de leucocitos con alto porcentaje de neutrofilos.

- Leucopenia persistente con disminución de todos los tipos de células.

Cuadro hemático Consta de un recuento total de leucocitos, recuento diferencial de leucocitos, determinación de la hemoglobina, volumen de glóbulos rojos empacados ( hematocrito ).

Algunos laboratorios además de estas determinaciones consideran parte del cuadro la velocidad de sedimentación, el recuento total de eritrocitos y el índice de eritrocitos.

NEOPLASIAS HEMATOPOYÉTICAS

LAS LEUCEMIAS

La leucemia es una proliferación neoplástica de las células hematopoyéticas caracterizada por la aparición de células inmaduras en la sangre periférica; la medula ósea esta usualmente involucrada. Se puede involucrar una o más de los tipos de células del tejido hematopoyético.

CLASIFICACIONES

El sistema aceptado depende de la determinación de 3 factores:




LABORATORIO CLINICO VETERINARIO –SEPTIMO SEMESTRE-UNIVERSIDAD DE LA AMAZONIA 1. El número de glóbulos blancos por mm3 en sangre periférica.

a) Leucemia lencémica: Recuento periférico muy alto de leucocitos ( Ejemplo 200.000 leucocitos / ul ) y células blancas anormales.

b) Leucemia Sublencemica: Recuento elevado pero no leucémico o recuento normal, pero con recuento diferencial anormal que muestra células primitivas o anormales.

c) Leucemia aleucémica: recuento casi normal, no se observas células anormales o inmaduras en sangre periférica.

2. La edad o madurez de las células.

a) Aguda: La mayoría de las células son jóvenes como blatos o células muy relacionadas.

b) Subaguda: Una mezcla de células jóvenes y maduras

c) Crónica: La mayoría de las células son maduras

d) Crónica: La mayoría de las células son maduras o casi maduras.

3. La clase de células involucradas

a) Neoplasia linfoproliferativa: Esas neoplasias se derivan de los linfocitos o células plasmáticas y usualmente forman masas sarcomatosa .

1. Linfosarcoma

2. Mieloma de células plasmáticas.





b) Neoplasia mieloproliferativa: Esas neoplasias se derivan de las células producidas normalmente en la medula ósea. No tienden a ocurrir masas sarcomatosas.

1b Leucemia granulocitica (neutrofílica o mielógena ).

2b Leucemia eosinofílica

3b Leucemia basofílica

4b Mielosis eritrémica

5b Eritrolencemia

6b Retículo endoteliosis

7b Lucemia monocítica

8b Leucemia megacariocítica

9b Leucemia de células de mast ( usualmente se origina de tejidos diferentes a medula ósea.

Ejemplos :

1. Leucemia linfocítica crónica: Una leucemia demostrable en sangre periférica por un recuento alto donde la mayoría de linfocitos son maduros.

2. Leucemia subleucemica granulocitica aguda: Es una leucemia demostrable en sangre periférica por un recuento mayor que el valor normal de leucocitos / mm 3 . La mayoría de las células son blastos o células muy jóvenes de la serie granulocítica.

NEOPLASIAS LINFOPROLIFERATIVAS

1. LINFOSARCOMA




LABORATORIO CLINICO VETERINARIO –SEPTIMO SEMESTRE-UNIVERSIDAD DE LA AMAZONIA - Definición y sinónimos

El linfosarcoma es una neoplasia de linfocitos o sus precursores.

La enfermedad se ha denominado linfoma maligno, linfomatósis, leucósis, leucemia linfocítica y linfocitoma. Es la forma más común de leucemia en los animales domésticos.

- Clasificación del Linfosarcoma.

El linfosarcoma en los animales se clasifica usualmente de acuerdo a su origen anatómico en: multicéntrico, alimentario y tímico. Esta clasificación varia ligeramente con cada especie.

La mayoría de los casos se originan en los ganglios linfáticos o bazo formando masas sarcomatosas; más tarde pueden llegar a ser leucémicas particularmente en los estados terminales.

En raras ocasiones se presenta como un linfosarcoma leucémico agudo.

- La subclasificación por tipo de célula puede ser importante para caracterizar la enfermedad y para estimar el curso clínico, pronóstico y respuesta a la terapia.

Los tipos celulares incluyen :

a) Linfosarcoma linfocítico: Predominan linfocitos, maduros, pequeños que se parecen a los normales. Esta forma rara en los animales.

b) Linfosarcoma prolinfositico: Las células neoplásica son grandes con citoplasma. La cromatina nuclear es moderadamente agujada, y se pueden observar vestigios de nucleolos. Este es el tipo celular de linfosarcoma más conocido en perros y bovinos.




LABORATORIO CLINICO VETERINARIO –SEPTIMO SEMESTRE-UNIVERSIDAD DE LA AMAZONIA c) Linfosarcoma linfoblástico: La célula neoplastica es mayor que el prolinfocito. Tiene un citoplasma más basofilo, menos condensación de cromatina y nucleolos prominentes.

d) Linfosarcoma de tipo hictiocitico: ( sarcoma de células reticulares ) Las células neoplásicas son más grandes y más pleomorficas que los linfoblastos. Tienen citoplasma abundante, núcleo indentado con cromatina fina y nucleolos.

e ) Linfosarcoma de tipo Hodglan: Este tipo raro esta compuesto de una mezcla de células incluyendo linfocitos, células plasmáticas y cocinófilos. Todos tienen células de Reed - Sternberg que son gigantes con núcleos múltiples y nucléolos prominentes de color rojizo.

- Diagnóstico clínico - patológico del linfosarcoma

a) Los linfocitos neoplásicos pueden demostrarse en:

1. Sangre periférica

2. Medula ósea

3. Efusiones de cavidades corporales

4. Aspirados con aguja de ganglios linfáticos aumentados de tamaño.

b) Biopsia de ganglios linfáticos, y el examen histológico revela obtileración de la arquitectura por una población homogénea de células linfoides.

c) Pruebas inmunológicas son disponibles para demostrar antiguos virales o anticuerpos en el gato y vacunos.

- Linfosarcoma canino

1. Tipos anatómicos incluyen:




LABORATORIO CLINICO VETERINARIO –SEPTIMO SEMESTRE-UNIVERSIDAD DE LA AMAZONIA a. Forma multicéntrica: Están afectados todos o algunos tipos de ganglios linfáticos periféricos. El hígado, el bazo y ganglios linfáticos internos pueden también estar afectados. Es la forma más común en caninos.

b) Forma alimentaría El neoplasma se origina en los ganglios linfáticos mesentericos y del tracto gastrointestinal.

2. Los hallazgos de laboratorio pueden incluir:

a) Leucemia en aproximadamente 50 % de los casos al primer examen. Un mayor porcentaje llega hacer leucémico a medida que la enfermedad alcanza los estados terminales.

b) El recuento linfocítico que varia de linfopenia absoluta a marcada linfositosis .

c) Anemia no regenerativa

d) Trombocitopémia

e) Hiperglobulinemia

f) Hipercolamia que sucede en casos de seudoliperperativos difuso ; se produce una sustancia similar a la ( PTH ) paratohormona por el neoplasma; ésos animales pueden terminar con insuficiencia renal ( nefrosis por calas ).

- Linfosarcoma Bovino:

1. Tipos anatómicos incluyen:

a) Forma adulta: Sucede en animales mayores de dos años de edad y se caracteriza por aumento de volumen de ganglios linfáticos periféricos, con afección de órganos viscerales en un alto porcentaje de casos corazón, abomaso, riñones, útero, grasa epidural. En muchos casos solo se afectan ganglios linfáticos internos y viseras.

b) Forma tímica ó adolescente: Esta forma ocurre en animales de 6-20 meses de edad y se caracteriza por aumento de volúmenes del timo. La linfodenopatía generalizada es rara.

c) Forma juvenil: Los terneros menores de 6 meses de edad presentan linfodenopatía generalizada y con frecuencia infiltración del hígado, bazo y riñones.




LABORATORIO CLINICO VETERINARIO –SEPTIMO SEMESTRE-UNIVERSIDAD DE LA AMAZONIA 2. Hallazgo de laboratorio:

a) Leucemia hasta el 30% de los casos, especialmente hacia el final del curso de la enfermedad.

b) Recuentos variables de GB variando desde leucopenia hasta recuentos especies de 100.000 / ul.

c) Linfocitos persistentes en un alto porcentaje de casos, particularmente aquellos hatos de incidencia múltiple.

La linfocitosis puede presentarse con otras enfermedades en bovinos.

d) Linfocitos anormales o atípicos en la sangre linfocitos binucleados. Esto ayuda en el diagnostico precultivo de la leucemia pero se puede encontrar en pequeños números en otras enfermedades del bovino.

e) anemia en casos prolongados; la infrecuencia de la anemia, se debe al rápido curso clínico de la enfermedad, y el período de vida prolongado de los estrictos ( 160 días ) y rara afección de la medula ósea.

3. El diagnóstico etiológico se hace por:

a ) Demostración de partículas virales tipo C por microscopio electrónico en las células de la capa anteada.cultivada 12 ntro y estimulada por la fitohemoglotimina.

b) Prueba de inmunodifusión usando suero de pacientes y antiguo viral; fijación de complemento.

c) Prueba indirecta de ( PIAF ) usando suero de pacientes y cultivo celular derivado de linfocitos de vacas leucémicas.

- Linfosarcoma felina:

1. Tipos anatómicos:

a) Forma alimentaria: esta forma se caracteriza por uno o más tumores sólidos u el tracto alimentario y ganglios linfáticos mesentéricos aumentados de tamaño; los ganglios linfáticos periféricos no son afectados.

b) Formas multicéntricas: Ganglios linfáticos periféricos generalizados aumentados de tamaño, esplenomegalia y hepatomegalia.





C ) Forma tímica: Se desarrollan en grandes masas en el timo y ganglios linfáticos del mediastino anterior; la efusión torácica es común. Esta es la forma usual en gatos menores de un año.

d) forma leucemica primaria: Esta forma se caracteriza por células malignas en la sangre, medula ósea, pulpesje del bazo, medula de ganglios linfáticos, finusoide del hígado; no se observan masas tumorales diferente.

2. Hallazgos de laboratorio:

a) Célula leucemica en sangre periférica y medula ósea es aproximadamente del 25 % de los ccm.

b) Anemia no regenerativa

c ) Recuento variable de leucocitos

3. Diagnóstico etiológico se hace usando la prueba de ( AF) anticipos fluorescentes detectando el virus de la leucemia felina en frotis de sangre y medula ósea. Esta es una prueba para el AG nivel en las células e indica infección con el virus. Esto no determina que el animal tenga linfosarcoma porque gatos clínicamente normales o con otros síndromes pueden ser positivos al FeLV.

- Linfosarcoma Equino:

Es rara en los equinos. La afección visceral es el ( ganglios linfáticos viscerales, hígado, bazo, tracto gastrointestinal y riñones ) aunque los ganglios linfáticos periféricos, pueden afectarse en algunos casos pueden asumir leucemia y a enema.

Leucemia Plasmocítica

Mieloma de células plasmáticas ( plasmotoma ), mieloma múltiple




LABORATORIO CLINICO VETERINARIO –SEPTIMO SEMESTRE-UNIVERSIDAD DE LA AMAZONIA A) Características generales

1. La neoplasia de las células plasmáticas o su precursor ocurren en los huesos y los tejidos viscerales .

2. Generalmente están afectados los huesos que intervienen en la hematopoyesis. Se observan áreas múltiples de osteórisis; se presentan con frecuencia fracturas patológicas, hay dolor oseo.

3. Las células de este tumor generalmente representan un sólo olor que produce una inmunoglobulina completa o una subumidad de IG en exceso.

B) Hallazgo de laboratorio

1. Hiperglobunimenia se presenta con un patrón monodonal observando en un electroforetograma de proteína.

a) La globulina puede ser un IG completa ( Ig, G, A, M ) o una cadena liviana o pesada de IG producida en exceso por las células plasmáticas neoplásticas.

b ) La globulina anormal puede ser refunde como una 12 paraproteina o componente M.

c ) Si la paraproteina es FgM puede ocurrir un síndrome caracterizado por infección, diabetes, hemorragia e hiperviscocidad PPT hasta 20 gldl.

d) Si la paraproteina es una cadena liviana, puede pasar el filtro glomelunar y presentarse en la orina ( proteimina de Bence Jones ) Esto ocurre en cerca del 20% de los casos de mieloma de células plasmáticas. Las pruebas usuales para proteína urinaria no detectará la proteina de Bence- Jones. La paraproteina puede demostrarse por electroforesis o inmunoelectrofóresis de orina concentrada 11 N NTRO.

La prueba de calor no es confiable

Anemia no regenerativa incide en cerca del 30% de los casos.





NEOPLASMAS MIELOPROLIFERATIVAS

Estas neoplasias se derivan de las células normalmente producidas en la medula ósea. No tienden a formas masas sarcomatosa.

1. Enfermedades mieloproliferativa del gato.

Este es un complejo de varios desordenes caracterizado por una proliferación anormal de una o más de las líneas celulares que se originan en la medula ósea.

a) Hallazgos Clínicos y morfológicos

1. Anemia regenerativa, severa y rebelde

2. Hepatomegalia y esplenomegalia

3. Aumento moderado de ganglios linfáticos

4. Ausencias de masas sarcomatosas

5. Prueba positiva de FeLV en cerca del 90% de los casos.

b) Los subgrupos incluyen:

1. Retículo endoteliosis. Están presentes en la sangre y medula ósea células primitivas no clasificadas. Esas células tienen un núcleo excéntrico, cromatina granular y nucleolos prominentes. Tienen un citoplasma abundante azuloso que puede contener gránulos púrpura y seudópodos. Esto puede ser una forma elástica de mielosis entrémica.

2. Mielosis eritrémica: En la sangre se presentan en pequeñas o grandes cantidades de entrocitos nucleados en ausencia de policromasia o reticulocitosis.




LABORATORIO CLINICO VETERINARIO –SEPTIMO SEMESTRE-UNIVERSIDAD DE LA AMAZONIA La M. O. presenta hiperplásia entroide: hay muchas células entroides inmaduras, y grandes precursores entroides megaloblásticos caracterizados por una maduración asincrónica del núcleo y citoplasma. Algunas de estas células pueden estar presentes en la sangre.

Esos casos pueden sufrir uan remisión clínica por un tiempo o progresar a un subgrupo diferente de enfermedades mieloproliferativa , o morir en el estado de la enfermedad.

3. Leucemia granulocítica: Se observan dos tipos:

a ) Leucemia leucémica granulocítica: Se caracteriza por leucocitosis inmaduros que incluyen progranulocitos y mieloblastos en la sangre. La medula ósea es hipercelular debido a la proliferación neoplástica de precursores mieloides; puede ser evidente la asincronía de la maduración.

b) Leucemia subleucémica granulocítica: Se caracteriza por neutropemia y células inmaduras ocasionalmente.

La medula ósea es hipercelular y similar al tipo leucemico.

4. Eritroleucemia: Esta enfermedad tiene características de mielosis estremica y leucemia granulocítica. Puede presentar una progresión de mielosis estrémica o leucemia granulocítica.

5. Mielofibrosis: Algunos casos de enfermedad mieloproliferativa termina como mielofibrosis; el tejido hematopoyético es reemplazado por tejido conectivo fibroso.

Leucemia granulocítica neutrofilico en el perro.

a. Rasgos Generales

1. La leucemia granulocítica neutrofilico es un neoplasma de los neutrofilos que se originan de la medula ósea. Generalmente es leucemica pero pueden suceder formas sub leucemicas.




LABORATORIO CLINICO VETERINARIO –SEPTIMO SEMESTRE-UNIVERSIDAD DE LA AMAZONIA 2. La invasión de los sinufoides pueden ocasionar esplenomegalia, hepatomegalia y aumento de volumen de los ganglios linfáticos, pero generalmente no se observan masas sarcomatosas.

b. Hallazgos de laboratorio

1. Marca de leucocitósis con gran número de neutrofilos inmaduros.

2. Maduración asincromica de neutrofilos. Esta asincromia se caracteriza por formar gigantes, aparecen nucléolos en formas más maduras, segmentación prematura y gránulos púrpura ( circulares a los de los progranulocitos ) que persisten en mielocitos o metamielocitos.

3. Medula ósea hipercelular compuesta de neutrófilos inmaduros atípicos y y números reducidos de células eritroides y megacariocitos.

4. Anemia severa no regenerativa.

5. Trombocitopemia

7. Leucemia eosinofilica y basofilica

Estas enfermedades se caracterizan por proliferación neoplasica de eosinofilos o basofilos con rasgos similares a los de leucemia granulocitica.

8. Leucemia monocítica.




LABORATORIO CLINICO VETERINARIO –SEPTIMO SEMESTRE-UNIVERSIDAD DE LA AMAZONIA Esta enfermedad es una proliferación neoplasica de monocitos caracteizada por una marcada leucocitosis compuesta principalmente de células monocitoides; monocitos inmaduros en grandes cantidades en la M.O. y anemia moderada.

9. Leucemia megacariocitica

Esta es una proliferación neoplásica de megacariocitos que producen trombocitemia con plaquetas gigantes y bizarra.

10. Leucemia de células de mast ( mastocitma )

a- Caninos: Las células de mast pueden encontrarse en la sangre y M.O. de perros en casos de tumores cutáneos malignos de las células de mast.

En esos casos los mastocitos probablemente presentan metástasis a m.O. con posterior afección en la sangre.

b- Felinos: En esta especie la enfermedad se origina en los tejidos del sistema retículo endotelial ej: M.O., Bazo, Hígado y ganglios linfáticos. Los mastocitos están presentes en la sangre en la mayoría de los casos.

HEMOSTASIS Y COAGULACIÓN DE LA SANGRE

La hemorragia inducida o espontanea es detenida por el proceso de hemostasis. En la hemostasis están incluidas tres factores:

a. Pared vascular

b. Trombocitos

c. Factores de coagulación sanguínea





a. Factores de la pared vascular. El componente vascular de la hemostasis depende de los vasos sanguíneos que sean normales funcionalmente y estructuralmente.

Las anormalidades vasculares se sospechan cuando hay evidencia clínica de tendencia a sangrar, sin embargo las determinaciones de laboratorio pueden estar normales.

En lesiones traumáticas que afectan la integridad de las paredes de los vasos grandes el

mecanismo de coagulación es efectivo sólo después que el defecto de la pared haya sido reparado por medio quirúrgicos. En lesiones de vasos más pequeños, la acción de las plaquetas y los factores de coagulación del plasma detiene la hemorragia en poco tiempo.

Cuando un vaso sanguíneo es lesionado casi inmediatamente se produce vasoconstricción y puede ser suficiente para disminuir la perdida de sangre si la lesión es menor. Además de la vaso construcción, al producirse la lesión de la pared vascular puede estar expuestas fibras de colágeno a las que se adhiere los trombocitos iniciando la hemostasis, liberándose histamina, serotonina y ADP ( adenosina disfofato ) lo que produce acumulo de trombocitos de modo que se forma una masa grande en la área afectada. Simultáneamente los trombocitos se rompen y liberan tromboplastina que inicia la coagulación de la sangre y la formación de fibrina.

El paso final de este proceso hemostático es la incorporación de las masas de plaquetas dentro de la fibrina formada para producir un coágulo efectivo en el área lesionada.

B. Trombocitos: Son pequeños fragmentos citoplasmáticos de los megacariocitos que se encuentran en la circulación sanguínea.

El papel de los trombocios en la hemostasis es el siguiente:

a) Acumulación y formación de un tapón hemostático.

b) Actividad tromboplásmatica.

c) Retracción del coágulo.




LABORATORIO CLINICO VETERINARIO –SEPTIMO SEMESTRE-UNIVERSIDAD DE LA AMAZONIA Una vez producida la lesión vascular las plaquetas se agrupan y se adhieren a la pared; las plaquetas liberan ADP que produce mayor acumulo de plaquetas y serotonina que actúa como vasodilatador.

La actividad tromboplástica de las plaquetas está relacionada con la liberación de un fosfolípido ( factor 3 ) que activa la secuencia de la coagulación, esta actividad procoagulante es esencial para la coagulación normal de la sangre siendo requerida para la vía de coagulación intrínseca o intravascular.

Otra actividad procoagulante de la plaquetas e la de que ellas actúan como una esponja, adquiriendo así cierta cantidad de otros factores de coagulación (II, VII,IX,X,XI,XII y XIII).

Las plaquetas juegan también un importante papel en l retracción del coágulo. AL coagularse la sangre y si se observa por un periodo de tiempo el coágulo disminuye de tamaño y el suero es expulsado; este fenómeno depende en gran parte de la acción de los trombocitos.

Cuando hay trombocitopenia la retracción del coágulo es escasa la retracción del coágulo es producida por una proteína contráctil denominada actinomiosina o ( trombostenina ).

Mecanismo de coagulación. Para que se produzca la coagulación se requiere unas reacciones complicadas de varios factores funcionan en una secuencia normal.

Nomenclatura de los factores de coagulación.

Factor Sinónimo

I Fibrinógeno

II Protrombina

III Tromboplastina tisular

IV Calcio

V Factor lábil, proacelerina




LABORATORIO CLINICO VETERINARIO –SEPTIMO SEMESTRE-UNIVERSIDAD DE LA AMAZONIA VII Proconvertina, factor estable

VIII Factor antihemolítico, tromboplastinógeno

IX Componentes de tromboplastina del plasma factor Christmas

X Factor stuart - Prower

XI Antecedentes de tromboplastina del plasma

XII Factor de Hageman

XIII Factor de la estabilización de la fibrina

Se considera que las reacciones que terminan en la coagulación de la sangre presentan cuatro fases interdependientes:

Fase 1. Reacción de iniciación o de contacto del cual depende que las reacciones tengan lugar en una superficie extraña.

Fase 2. O de tromboplastogénesis en la cual se forma la tromboplastina del plasma.}

Fase 3. O de trombogénesis, en la cual se forma trombina a partir de la protrombina.

Fase 4. Formación de fibrina a partir de fibrinógeno.

La secuencia es como sigue:

Fase 1. Cuando la sangre sale de los vasos se pone en contacto con una superficie más o menos extraña activando los factores de contacto y liberando pequeñas cantidades del factor 3 de las plaquetas.

Fase 2. El factor 3 de las plaquetas reaccionan con los factores VIII, IX y X en presencia de Ca ++ formando una pequeña cantidad de tromboplastina del plasma.

Fase 3. Hay conversión de protrombina Ca++ tromboplastina trombina





Fase 4. Fibrinógeno trombina - fibrina

MEDIOS DE LABORATORIO PARA LA EVALUACIÓN DE LA HEMOSTASIS.

Los trastornos de la coagulación nos son frecuentes en los animales y en general pueden afirmarse que están limitados a algunos casos especiales, por ejemplo: el envenenamiento del ganado por trébol dulce ( dicumarol ), helecho común, aflatoxicosis, envenenamiento del perro con Warfarina, tiempo de sangrado prolongado en los perros con hepatitis infecciosa, casos de hemorragia intestinal en caninos con cirrosis hepática ( falta de protombina por defectuosa absorción de vitamina K.

Se emplean algunas técnicas como:

A) Tiempo de sangrado o de hemorragia ( método de Duke ).

Se hace una punción cutánea moderadamente profunda ( con una hoja Bard - Parker # 11 ) de manera que se obtenga un flujo fácil de sangre. No debe emplearse la presión para extraer la sangre. A intervalos de 30 segundos se quitan gotas de sangre absorbiéndolas con papel de filtro y sin tocar la piel, se anota el tiempo transcurrido hasta que cesa la hemorragia. En los animales domésticos el tiempo de sangrado varía entre 1 a 5 minutos.

Interpretación. El tiempo normal de sangrado puede estar prolongado en las siguientes condiciones: defectos en las paredes de los vasos sanguíneos; defectos en las plaquetas como consecuencia de una trombocitopenia; enfermedades severas del hígado; uremia administración de dosis de anticoagulantes.

b) Tiempo de coagulación.




LABORATORIO CLINICO VETERINARIO –SEPTIMO SEMESTRE-UNIVERSIDAD DE LA AMAZONIA 1. En el método capilar hace una punción cutánea semejante a la de tiempo de sangrado. Después de secar la primera gota de sangre, se recoge sangre en un tubo capilar de aproximadamente 15 cm de largo y de 1 a 1.5 mm de diámetro. A intervalos de un minuto el tubo se rompe en pedazos de 1-2 cm. Cuando hay coagulación se ven hebras de fibrina entre los extremos rotos de los tubos y se anota el tiempo transcurrido.

Por este método el caballo y la vaca muestran tiempo de coagulación entre 3 - 15 minutos. En las otras especies domesticas varía entre 1 y 5 minutos ( porcino: 2,5 - 4,0 minutos , canino: 3-4; ovino: 1-6 ).

2. Método de portaobjeto. Póngase una gota grande de sangre en un porta - objeto limpio. A intervalos de 30 segundos métase la punta de un alfiler o de una aguja en la gota. Cuando la hebra de fibrina se adhiere a la punta o es estirada por la aguja o el alfiler al separarlo hacia arriba la coagulación a tenido lugar.

El tiempo que ha pasado hasta que la punta de la aguja alza un hilo de fibrina es el tiempo de coagulación.

Interpretación del tiempo de coagulación. La prolongación del tiempo de coagulación se puede observar en: hemofilia, trombocitopenia, enfermedades severas del hígado, anticoagulantes circulantes, uremia.

3. Recuento de plaqueta. Es el primer aspecto que debe considerarse porque el 75 % de los problemas de sangrado adquirido afecta a las plaquetas.

Hay dos métodos para calcular el número de plaquetas: el directo y el indirecto.

El indirecto ee el más práctico. Se hace un frotis sanguíneo y se colorea. Se anotan el número de plaquetas por campo con objetivo de inmersión con aceite y se cuentan 100 leucocitos en el frotis, así obtenemos un valor determinada cantidad de plaquetas por 100 leucocitos.

Este número relativo puede convertirse en número absoluto con el siguiente cálculo:

N de plaquetas X N total de leucocitos/mm 3 = N de plaquetas/ mm3

_____________

100 leucocitos





Interpretación del recuento de plaquetas. El recuento total de plaquetas en los animales domésticos varía entre 200.000 a 500.000/mm3 y en la mayoría de los animales menos de 100.000 se considera significativa, aunque una sangría prolongada rara vez se observa hasta que el recuento baja a 50.000 / mm3.

Muchos de los defectos hemostáticos identificables clínicamente se relacionan con una deficiencia en el número o funciones de las plaquetas.

Las hemorragias que resultan de trombocitopenia se presentan como petequias o equimosis de las mucosas o piel, aunque pueden haber hemorragias abundantes como epistaxis.

Como los megacariocitos son los precursores de las plaquetas y su sitio de formación es la medula ósea, cualquier enfermedad que le afecte puede producir trombocitopenia.

Puede haber disminución o ausencia de plaquetas en supresión de la medula ósea: por medicamentos ( ciclopentilpropionato de estradiol ), por virus ( septicemias virales que pueden afectar el endotelio vascular y las plaquetas); por irradiación.

Hay trombocitopenia también por aumento de la destrucción de las plaquetas, en casos de hipersensibilidad que puede ser: a ) por combinación de plaquetas hapteno; el agente sensibiliza a las plaquetas y se adhiere como un hapteno, la combinación estimula la producción de anticuerpos contra las plaquetas. Se presenta púrpura trombocitopénica idiopática: se desconoce la causa, podría ser por drogas, virus o bacterias. b) Autoinmune en : anemia hemolítica autoinmune; en lupus eritematoso sistémico. c) Isoinmune en : transfusiones de sangre incompatible. Otra causa de trombocitopenia es la hemorragia masiva; en ese caso puede utilizar todas las plaquetas disponibles produciendo una reducción severa.

Aunque es menos frecuente puede haber un aumento en la cuenta plaquetaria o trombocitosis. Este aumento puede ser transitorio y se produce después de una traumatismo o durante una enfermedad, y en casos de una anemia regenerativa. En algunos trastornos de la medula ósea hay aumento persistente de plaquetas en la circulación, el cual recibe el nombre de trombocitopenia. Las anormalidades en el número y función de los trombocitos son causadas casi siempre por trastornos mieloproliferativos como la leucemia, policitemia y trombocitemia.




LABORATORIO CLINICO VETERINARIO –SEPTIMO SEMESTRE-UNIVERSIDAD DE LA AMAZONIA En la trombocitosis pueden producirse episodios trombóticos y los de hemorragia, la hemorragia está con mayor frecuencia asociada con la persistente cuenta elevada de plaquetas, lo cual parece paradójico. Sin embargo se ha demostrado que la sobre abundancia de plaquetas interfiere en el mecanismo de coagulación y que tales plaquetas muestran anormalidades funcionales.

Aunque los aumentos transitorios de la cuenta de plaquetas, especialmente después de operaciones quirúrgicas, pueden favorecer los trastornos tromboembólicos, no debe suponerse que la elevada cuenta de plaquetas indica siempre tendencia a la trombosis.

Plaquetas anormales: La trombocitopatía y la trombastemia son estados de función normal de las plaquetas aunque éstas se hallen en número normal. Estas plaquetas pueden tener aspecto normal o quizá sean defectivas en la retracción del coágulo y en la coagulación de la sangre. En tales trastornos, los signos clínicos y las indicaciones del laboratorio son de diátesis hemorrágica con niveles normales de los factores de coagulación, cuenta normal de plaquetas y largo tiempo de sangrado.

Trombocitopatía. Es el término general usado cuando las plaquetas tienen algún defecto congénito o adquirido en su fosfolípido esencial para la coagulación de la sangre, el factor 3 plaquetario. La trombocitopatía adquirida se ve en casos de cirrosis hepática, leucemia, sangría excesiva, macroglobulinemia y uremia. En la trombocitopatía la prueba de generación de tromboplastina y del consumo de protombina son anormales y los tiempos de sangría son anormales.

La trombastenia. Generalmente se hereda como carácter autosómico y el defecto hemorrágico puede ser grave. La retracción anormal del coágulo es la normalidad más patente invitro y las plaquetas muestran adhesividad y agregación anormales. En muchos de estos casos, la reacción de las plaquetas a las fibras de tejidos ( Colágeno ) es anormal o está disminuida. Las plaquetas de estos individuos tienen bajos niveles de fibrinógeno y de ATP y en algunos casos hay escasez de enzimas de la glicólisis

( deshidrogenasa del fosfato de gliceraldehido y piruvato cinasa ).

Como las plaquetas no reaccionan con el tejido conjuntivo ( colágeno ) y no pueden formar el tapón hemostático, la tendencia hemorrágica es grave con fuertes hematomas y hemorragias por traumatismo, sangrado de las mucosa y epistáxis.

El tiempo de sangrado es largo y la fragilidad de los capilares está aumentado en mediano grado; las pruebas de coagulación son normales.




LABORATORIO CLINICO VETERINARIO –SEPTIMO SEMESTRE-UNIVERSIDAD DE LA AMAZONIA B. También colectar y congelar plasma-citrato. Las medidas terapéuticas interfieren con los resultados de los procedimientos que se pueden requerir después en la secuencia de eventos diagnósticos.

Usando material de laboratorio plástico, colectar nueve partes de sangre completa fresca en una parte de citrato trisódico al 3.8 %, mezclar, centrifugar, remover el plasma y congelarlo ( comercialmente hay disponibles recipiente con citrato ). El plasma no necesita congelarse si los procedimientos se hacen dentro de 20 a30 minutos después de tomada la muestra.

Se enviará un plasma control de un animal clínicamente sano con la muestra del paciente a los laboratorios que rutinariamente no manejan muestras animales.

Los procedimientos que pueden realizarse con plasma citratado son:

Tiempo de protrombina

Tiempo de tromboplastina parcial

Tiempo de trombina.

A) Tiempo de protrombina en una fase ( Quick ). El tiempo de protrombina mide el tiempo requerido para la formación de coágulo de fibrina de plasma citratado, fresco y calcificado después de la adicción invitro de tromboplastina tisular. Mediante esta prueba se miden la protrombina y los factores accesorios. Con la tromboplastina tisular el tiempo de coagulación depende de la concentración de protrombina, de los factores V, VII y X ( en el supuesto de que la actividad anticoagulante y el fibrinógeno sean normales).

Se mezcla la sangre con una cantidad medida de citrato y se obtiene el plasma por centrifugación. La prueba se basa en lograr una concentración optima de iones de calcio y un exceso de tromboplastina siendo la única variable la concentración de protrombina y los factores accesorios en un volumen de plasma cuidadosamente medido.

Reactivos:

1. Citrato de sodio, 0.0109 M

2. Simplastin*

_____________




LABORATORIO CLINICO VETERINARIO –SEPTIMO SEMESTRE-UNIVERSIDAD DE LA AMAZONIA * General diagnostics. Warner Lambert Pharmaceutical, Morris Plains, N.J.

Método:

1. Se miden 0,5 ml de citrato de sodio 0,109 M ( no se recomienda el oxalato ) en un tubo de centrifugación cónico y graduado.

2. Se obtiene sangre venosa con ayuda de una venipuntura muy cuidadosa. Se añaden exactamente 4,5 ml de sangre al citrato; se mezcla rápidamente invirtiendo al tubo.

3. Se centrifuga. Se aspira el plasma en un tubo limpio y se pone al baño maría a 37 C.

4. Se determina el tiempo de coagulación de una mezcla de 0.1 ml de plasma y o,2 ml de tromboplastina en tubo de ensayo de 12 x 75 mm. Poner en marcha el cronómetro.

5. Se determina el tiempo de coagulación del plasma control normal liofilizado.

Observaciones : Cuando se utiliza una tromboplastina corriente en lugar del reactivo tromboplastina- CaCl2, se realiza la prueba añadiendo 0,1 ml de CaCl2O, 025 M y 0,1 ml de suspensión de tromboplastina.

Valores normales en perro: 10-14 segundos.

b) Tiempo de tromboplastina parcial ( TTP ). Principio: El tiempo de tromboplastina parcial ( TTP ) es el de la coagulación del plasma con citrato y recalcificado al que se ha añadido tromboplastina parcial. Se da el nombre de tromboplastina parcial a la tromboplastina de tejido ( extracto de cerebro ) o cefalina que no compensa del todo le factor de coagulación del plasma en estados hemorrágicos como la hemofilia. Se prepara extrayendo con éter la tromboplastina “ completa “, y el material activo sobrenadante en el éter de la cefalina en crudo la cual suplanta el papel de las plaquetas. Convenientemente diluida, proporcionara un tiempo de coagulación mayor cuando se añada a plasma recalcificado con deficiencia de los factores VIII, IX, X, XI y XII, que cuando se añada el plasma con deficiencia del factor VII y prolongado en el plasma con carencia grave del factor V.




LABORATORIO CLINICO VETERINARIO –SEPTIMO SEMESTRE-UNIVERSIDAD DE LA AMAZONIA En el comercio existen reactivos de tromboplastina parcial con distintos materiales activantes, por ejemplo el caolín que se utiliza para activar el factor XII que inicia el proceso de coagulación. Cuando se utilizan esos reactivos, la prueba se denomina tiempo de tromboplastina parcial activada ( TTPA ).

Macrométodo no activado.

Método:

1. Obtener plasma citratado del paciente.

2. Si la prueba no se va a realizar inmediatamente, mantener el plasma con hielo o congelado.

3. Pipetear 0,1 ml de plasma del paciente en un tubo de ensayo de 12 x 75 mm. Incubar a 37 C durante 3 a 5 minutos.

4. Incubar en otro tubo con porciones iguales de CaCl2 0,025 M y platelin * durante 5 minutos.

5. Añadir 0,2 ml de platelin-CaCl2 al plasma y poner en marcha que el cronómetro.

6. Registrar el resultado.

Macrométodo activado

Método:

1. Obtener plasma citratado del paciente.

2. Si la prueba no va a praticarse inmediatamente mantener el plasma en hielo o congelado.




LABORATORIO CLINICO VETERINARIO –SEPTIMO SEMESTRE-UNIVERSIDAD DE LA AMAZONIA 3. Pipetear 0,1 ml de reactivo TTPA en un tubo de ensayo d e12 x 75 mm. Añadir 0,1 ml de plasma e incubar durante 5 minutos a 37 C.

4. Calentar el tubo donde se ha colocado CaCl2 0,025 M a 37 C.

5. Tras un período de incubación de 5 minutos, añadir 0,1 ml de CaCl2 al tubo de la mezcla plasma - tromboplastina y poner en marcha el cronómetro.

6. Registrar el resultado.

Valores normales en perro: 17-30 segundos.





C ) Tiempo de trombina ( TT). El tiempo de trombina mide el tiempo requerido para la formación del coágulo de fibrina en plasma citrato fresco, recalcificado después de la adición invitro de trombina.

Esta prueba sirve para medir la concentración de fibrinógeno plasmático y para detectar presencia de fibrina, la de plasmina o los productos de degradación de la fibrina.

Reactivos:

1. Fibrindex **

a. Se vierte 1 ml de solución salina en un recipiente para preparar una solución que contenga aproximadamente 50 unidades de trombina/ml

______________

* General Diagnostics, Div. Warner-Lambert Co, Morris Plains, N.J, U.S.A.

b. Se diluye ésta con solución salina, de modo que, cuando añada 0,2 ml a 0,2 ml de plasma normal, el tiempo de coagulación sea de 15 a 18 segundos.

Método:

1. Se obtiene plasma con citrato del paciente y de un donante normal.

2. Se añaden 0,2 ml de cada uno a tubos de vidrio corrientes de 12 x 75 mm. Se incuba al baño maría a 37 C durante 20 minutos.





3. Se agregan 0,2 ml de solución de fibrindex al tubo de control y se mide el tiempo de coagulación con un cronómetro. Se repite la operación con el tubo que contiene plasma del paciente.

Valor normal en el perro: 15-30 segundos.

Como aprovechar un hemograma

Cómo aprovechar al máximo un hemograma

respecto de los glóbulos blancos, "siempre deben hacerse los recuentos absolutos, es

decir la cantidad total de glóbulos blancos, tanto sea por litro como por microlitro. Los porcentajes no

tienen importancia, la interpretación sólo es posible con el recuento absoluto". En cuanto a los valores de

referencia, se recomienda seguir los de cada laboratorio. Rebar contó que para el recuento de glóbulos

blancos se guía con entre 6.000 a 17.000 para el perro y entre 6.000 y 18.000 para el gato.

En segundo término, el especialista planteó seis preguntas que él mismo se formula cada vez que recibe

los resultados de un hemograma, como una guía para su trabajo. Esas preguntas son:

1- ¿Hay evidencia de inflamación?

2- ¿Hay evidencia de stress?

3- ¿Hay evidencia de necrosis tisular?

4- ¿Hay evidencia de hipersensibilidad sistémica (reacciones alérgicas)?

5- Si hay inflamación, ¿es aguda, crónica o que compromete la vida?

6- ¿Hay evidencia de toxemia sistémica?

Para responder estas preguntas, Rebar aconsejó tener en cuenta las siguientes cuestiones:

1- Si encontramos desvío a la izquierda, eosinofilia persistente o monocitosis, hay inflamación.

2- El stress lo identificaremos si hay leve linfopenia (750-1.500/microlitro, lo normal es 1.000 a 5.000),

eosinopenia, leve neutrofilia de maduros y leve monocitosis (es el dato menos consistente). Estos signos

se dan por los altos niveles de glucocorticoides en sangre, es el leucograma de stress.





El hemograma es tan importante que nos permite anticipar y hasta imaginar lo que nos dará la

bioquímica, porque es esperable un aumento de la glucosa, la FAS y la ALT. Si los linfocitos bajan

mucho, entre 200 y 300, debemos estudiar otras causas. los linfocitos bajan, al igual que con la

prednisolona, por una marginación de los glóbulos blancos. La baja de los eosinófilos es menos

confiable, porque su vida media en sangre es de tres horas. ¿Por qué aumentan los neutrófilos? Porque

no se "pegan" tanto a los vasos sanguíneos, y entonces pasan a compartimento libre en sangre; porque

hay liberación desde la médula ósea; y porque aumenta la quimiotaxis. Estos efectos se pueden observar

ante una única dosis de prednisolona, en tres horas y durante un día. Si se da durante largo tiempo y

luego se saca, los efectos en el hemograma duran hasta tres días.

3- ¿Qué pasa si hay evidencia de necrosis tisular?: ¡¡¡Monocitosis!!! En el organismo se da un aumento

de la fagocitosis. En este punto, Rebar derrumbó un "mito" habitualmente repetido: "No siempre que

encontremos monocitos en lainflamación es crónica. Se pueden observar monocitosis en patologías de

ocho horas de curso", afirmó.

4- Hipersensibilidad sistémica. Se caracteriza por una eosinofilia persistente. La clave es no quedarse

con un solo recuento, sino realizar tres o cuatro antes de aceptar que el paciente tiene eosinofilia. Otro

mito es aquel que dice que si hay eosinofilia el problema son los parásitos. "Es falso , la persistencia de

la eosinofilia no se da por los parásitos sino por una reacción sistémica. En la mayoría de los perros

adultos las parasitosis son fenómenos locales del aparato digestivo, por lo tanto no generan eosinofilia.

En el único caso que podemos ver eosinofilia en perros adultos es en las hembras preñadas al momento

del destete, cuando aparecen larvas migrantes e inmunosupresión". Otros casos de parasitosis sistémica

son los parásitos del corazón presentes en sangre, las dermatitis alérgicas por pulgas, traqueobronquitis

alérgica, mastocitoma sistémico y, en los gatos, el granuloma eosinofílico.

5- ¿Cómo distinguir si la inflamación es aguda, crónica o conlleva riesgo de vida?

En la aguda típica hay neutrofilia con desvío a la izquierda, linfopenia leve y monocitosis (variable). Es el

ejemplo clásico.

En tanto, la Crónica se divide en dos tipos. El Tipo I se caracteriza por una leucocitosis "bestial", de





50.000 a 120.000 neutrófilos o más.

Se observan también neutrófilos tóxicos y aumento de monocitos. Este tipo de hemograma se

denomina leucemoide, porque lo primero que pensamos es que el paciente sufre de leucemia. ¿Cómo

diferenciar una de otra? En las leucemias el hematocrito es bajo (15-20%), mientras que en las

inflamaciones es de 30% a 40%.

Además, la morfología de los linfocitos se mantiene en los casos inflamatorios. Por otra parte, en las

leucemias no hay neutrófilos tóxicos.

Como conclusión de la Crónica Tipo I, la encontraremos en inflamaciones muy circunscriptas pero muy

intensas, como un absceso o una piómetra cerrada. Evidencia una respuesta positiva del organismo para

expulsar lo extraño.

En cambio, la Crónica Tipo II se presenta con una leucocitosis normal o levemente aumentada, sin

desvío a la izquierda, recuento de linfocitos normales y monocitosis (es la clave, ya que nos dice que es

crónico). ¿Cómo se llega a una inflamación crónica con tan baja respuesta celular? Hay un balance

entre lo que produce la médula y lo que se consume, por eso no hay desvío a la izquierda. "Sale uno de

la médula pero entra uno en los tejidos. Este tráfico tiene una velocidad increíble.

Por último, la variable que compromete la vida es el caso más grave, porque la médula no llega a

producir lo que demandan los tejidos. Si nos encontramos con un hemograma así estamos en

problemas. ¿Cómo es? Hay neutropenia con desvío a la izquierda, linfopenia y monocitosis variable. Es

una emergencia.

6- El último punto es si hay evidencia de toxemia sistémica. "El frotis es la clave. Veremos neutrófilos

tóxicos, porque las toxinas circulantes ingresaron a la médula e interfirieron con la producción de

glóbulos blancos. En general, este tipo de hemograma se ve en pacientes con infecciones bacterianas.

Caso 1

Caniche hembra de seis años, con vómitos, anorexia, poliuria y polidipsia. Rebar apuntó que es el

"famoso síndrome del perro enfermo", por lo inespecífico de los signos.

Hemograma (ponemos "alto" o "bajo" entre paréntesis para aclarar aún más, ya que las referencias

varían según cada laboratorio): HTO del 30%, glóbulos blancos 24.900, en banda 3.000 (desvío a la

izquierda regenerativo), neutrófilos 18.000 (altos), linfocitos 900 (bajos), monocitos 3.000 (altos).

¿Inflamación? Sí, monocitosis y desvío a la izquierda.





¿Stress? Sí, linfopenia

¿Necrosis? Sí, monocitosis.

¿Aguda, crónica o con riesgo de vida? Aguda, por tener neutrofilia, desvío a la izquierda y linfopenia.

¿Toxemia sistémica? Sí, por neutrófilos tóxicos.

¿Hay anemia? Algo, por la inflamación

¿Hay CID?, ¿cómo están las plaquetas? Siempre pensar en las plaquetas, ya que si son bajas hay riesgo

de CID. Los siete datos son importantes, pero la información la da el frotis.

Caso 2

Setter hembra con pérdida de peso y abdomen distendido.

Hemograma: HTO 25%, blancos 17.500, neutrófilos 10.000, linfocitos 3,000, monocitos 4.500, proteínas

totales 8,2.

¿Inflamación? Sí, monocitosis.

¿Stress? No

¿Necrosis? Sí, monocitosis.

¿Aguda, crónica o con riesgo de vida? Crónica Tipo II, porque hay neutrófilos normales con altos

linfocitos.

¿Toxemia sistémica? No.

El hematocrito está bajo, 25%; y las proteínas altas. Mirando sólo el frotis se ven muchos monocitos y

una cantidad normal de neutrófilos.

Caso 3

Hemograma: HTO 50%, blancos 5.500, en banda 1.100, neutrófilos 2,000, linfocitos 900, monocitos

1.500, proteínas totales 8,5.

¿Inflamación? Sí, monocitosis y desvío a la izquierda.

¿Stress? Sí, linfopenia

¿Necrosis? Sí, monocitosis

¿Aguda, crónica o con riesgo de vida? Con riesgo de vida, inflamación y necrosis tisular.

¿Toxemia sistémica? No.

¿CID? Las plaquetas están normales.





¿Anemia? No, aunque por el aumento de las proteínas se puede observar que hay deshidratación.

En este caso vemos una inflamación aguda fuerte, necrosis tisular, no hay CID y deshidratación. Todos

estos datos los aportó el hemograma. Es mucha información por poco dinero.

Diagnóstico: En los tres casos se trató de una piómetra por Escherichia Coli. Fueron tres casos diferentes

con el mismo diagnóstico final, pero con diferentes hemogramas. Muestra el diferente balance entre la

médula ósea y la utilización de los tejidos. También es importante juntar esta información con el estado

del paciente. Podemos predecir que en el Caso 3 el paciente es el más grave. Y que el caso que tiene

una enfermedad más crónica es el 2, la cirugía será más complicada, porque el útero estará más irrigado

y habrá tejidos fibróticos que dificultarán la operación. El tipo de piómetra también se puede conocer con

el hemograma: en el Caso 2, es abierta, porque bajaron los glóbulos blancos y también el HTO por las

pérdidas por sangrado.

La tecnología llegará a reemplazar al microscopio?

No me parece. Aunque lo intenté, aún no pude desarrollar un software que integre el conocimiento de

mirar un frotis en el microscopio. En las conferencias que doy sí puedo resumir lo que llevo visto en 30

años de carrera, pero no lo consigo a la hora de diseñar un programa de computación. Además, estoy

seguro de que los analizadores automáticos que se emplean en las clínicas nunca obtendrán la

información que puede darnos un frotis, que es la llave de la hematología y no puede ser olvidado ni

reemplazado. Cuantos más frotis hacemos, más sabemos. Es un tema de práctica, no hace falta ser un

genio iluminado.

Qué elementos debe tener el veterinario para hacer patología clínica en su veterinaria?

Aguja, jeringa, portaobjetos, refractómetro y microscopio, nada más.

¿Qué estudios mínimos son los que recomienda hacer?

Hemograma completo, que incluya parámetros de glóbulos blancos, rojos y plaquetas. También,





proteínas plasmáticas con el refractómetro, y frotis. A su vez, recomiendo no mandar orina fuera de la

clínica, hacer nosotros mismos los análisis. Cualquier clínico puede hacer la tirita, el sedimento y utilizar

el refractómetro

PARCIAL DE ORINA, USO E INTERPRETACION

El examen de orina suministra información muy valiosa para el diagnóstico de afecciones tanto del tracto genitourinario como de muchas enfermedades extraurinarias.

El sistema urinario juega un papel importante en el mantenimiento de la homeostasis eliminando los productos metabólicos de desecho del cuerpo, además los riñones están involucrados en la regulación de la eritropoyesis por la producción de eritropoyetina, de la homeostasis del calcio metabolizando la vitamina D (prohormona) a su forma metabólica más activa, y en el balance de líquidos y electrolitos por la formación de renina y prostaglandinas. Los riñones tambien degradan hormonas incluyendo la paratohormona, la insulina y hormona tirotrópica.

La hidrodinámica asociada con la colección y transporte unidireccional de la orina desde la pelvis renal hacia la vejiga y su posterior eliminación por el proceso de la micción son tambien esenciales para la homeostasis del cuerpo.

Los análisis diagnósticos de la orina son comparativamente sencillos, rápidos y económicos.

Como todas las pruebas de laboratorio, los resultados del examen urinario son útiles pero no infalibles. Su valor diagnóstico es directamente proporcional a la habilidad del clínico para interpretarlos. Debido a que los resultados del urianálisis son influídos significativamente por factores biológicos y tecnicos, los resultados se deben interpretar en combinación con los hallazgos disponibles, desde los anamnésicos, examen físico y datos de radiografías, ecografías, endoscopias, biopsias y otros procedimientos de laboratorio como hematología, química sanguínea, bacteriología, toxicología, inmunología etc. cuando sean necesarios y estén disponibles.

Un examen urinario consta de la evaluación de varias propiedades físicas y químicas de la orina, estimación de su concentración de solutos ( gravedad específica ) y examen microscópico del sedimento urinario. Todas estas pruebas se deben realizar debido a que ellas ayudan a la localización del problema en cuestión. Por ejemplo, la interpretación de las pruebas físicas, químicas y hallazgos del sedimento urinario es ayudada por el conocimiento de la gravedad específica ( G. E. ) ya que esta suministra información con respecto a la proporción de solutos y





solvente ( agua )´; por ejemplo una proteinuria de 2+ con una GE de 1.010 refleja una pérdida mayor de proteína que 2+ de proteinuria en una orina con GE de 1.030; el mismo concepto es aplicable a la interpretación del significado de glucosa, bilirrubina, sangre , color, volúmen etc. y los constituyentes del sedimento urinario.

El valor del examen microscópico del sedimento urinario en la interpretación del urianálisis es comparable al examen microscópico de un frotis sanguíneo en la interpretación de los hemogramas.

La interpretación significativa de los resultados de las pruebas físicas (color, turbidez) y químicas ( proteína, sangre oculta, pH ) en el urianálisis depende del conocimiento de la composición del sedimento urinario. Por ejemplo un grado moderado de proteinuria en ausencia de un número significativo de eritrocitos y leucocitos usualmente indica proteinuria de origen glomerular o pre-renal. Un grado moderado de proteinuria asociado con hematuria y piuria puede indicar una respuesta inflamatoria en algún sitio del tracto genitourinario.

Un urianálisis completo se deberá considerar en todos los pacientes sospechosos de tener enfermedad del sistema urinario, los datos colectados ayudan a verificar o eliminar posibilidades diagnósticas formuladas sobre la base de las observaciones obtenidas de los anamnésicos y del examen físico.

Los problemas nefrourinarios se pueden definir como :

- un síntoma clínico ( disuria, hematuria, poliuria etc. ).

- Un hallazgo de laboratorio anormal ( piuria, bacteriuria, leucocitosis etc. ), hallazgos radiográficos ( riñones aumentados de tamaño, vejiga urinaria desplazada etc. ) etc

- Un síndrome patofisiológico ( insuficiencia renal aguda o crónica, infecciones del tracto urinario, urolitiasis, síndrome nefrótico, defectos tubulares renales, retención urinaria, micción anormal y anormalidades urinarias subclínicas.

- Una entidad diagnóstica ( pielonefritis, urolitiasis por estruvita etc. ).





Ejemplos de algunos hallazgos asociados con algunas enfermedades urinarias incluyen:

a) Enfermedad renal. Indica la presencia de lesiones renales de cualquier tamaño, distribución ( focal o generalizada ) , o causa ( anormalidades, infección, toxinas endógenas o exógenas, obstrucción del flujo urinario, neoplasias, isquemia, desórdenes inmunes, hipercalcemia, traumas en uno o ambos riñones.

La enfermedad renal puede no ser sinónimo de falla renal y uremia debido a la tremenda capacidad de reserva de los riñones. En la enfermedad renal se pueden observar cilindruria, proteinuria, hematuria, piuria, bacteriuria y glucosuria.

b) Falla ( insuficiencia ) renal. La falla renal implica que 2/3 a ¾ o más de la capacidad funcional de los nefrones de ambos riñones han sido afectados. La falla puede o no ser de suficiente severidad para causar uremia.

En perros, la habilidad disminuída para concentrar y diluir la orina causada por enfermedad renal no puede ser fácilmente detectada hasta que la capacidad funcional de cerca de 2/3 de los nefrones o ambos riñones son afectados.

La azotemia renal y la retención de otros metabolitos normalmente excretados por los riñones no son usualmente reconocidos hasta que se afecte en un 70 % la capacidad funcional de los nefrones.

La insuficiencia renal puede precipitarse por enfermedades pre-renales, renales o post-renales agudas o crónicas, reversibles o irreversibles. Esto puede estar asociado con poliuria u oliguria. Los signos clínicos de desórdenes polisistémicos causados por anormalidades en el balance hídrico, electrolítico, ácido-básico, endocrino y de nutrientes no están presentes en pacientes con falla renal primaria ( ej : no todos estos pacientes son urémicos ). Esto se debe en parte, a la gran capacidad de reserva de los riñones y a la habilidad de los nefrones no afectados de sufrir una hiperplasia e hipertrofia compensatoria. La función renal adecuada para la homeostasis no requiere que todos los nefrones sean funcionales.

Los signos polisistémicos de falla renal ( ej : uremia ) incluyendo vómito, diarrea, depresión , anorexia, deshidratación, pérdida de peso, usualmente no ocurre hasta que aproximadamente el 75 % o más de los nefrones han sido afectados.

En algunos casos, las crisis urémicas pueden ser precipitadas súbitamente por desórdenes pre-renales ( ej: pancreatitis, gastroenteritis por cuerpo extraño, falla cardiaca congestiva ) o menos





comunmente por desórdenes post-renales ( obstrucción uretral, desplazamiento de la vejiga urinaria en una hernia perineal ), desórdenes que ocurren en pacientes con una falla renal primaria compensada anteriormente.

En la falla renal primaria hay grados variables de habilidad disminuída para concentrar o diluir la orina en respuesta a un estímulo apropiado, bajo pH, algunas veces hay proteinuria o glucosuria

c) Infección del tracto urinario: hay bacteriuria significativa asociada con grados variables de piuria, hematuria y proteinuria.

d) Cistinuria : hay precipitación de cristales de cistina especialmente en orina ácida.

e) Neoplasia : hay algunas veces presencia de células neoplásicas exfoliadas en el sedimento urinario.

La evaluación del urianálisis tambien es particularmente útil en la definición y verificación de problemas en pacientes con desórdenes no urinarios. Como los hemogramas, los resultados del urianálisis ssuministran información acerca de la integridad de muchos sistemas corporales. Por esta razón, se deben incluir examenes urinarios y cuadros hemáticos como una parte de la evaluación inicial ( como una base mínima de datos ) de todos los pacientes con una enfermedad de causa desconocida ; la detección de anormalidades en los hallazgos de esos examenes nos pueden indicar el órgano o sistemas del cuerpo afectados y así seleccionar otras pruebas diagnósticas más específicas para la identificación de la enfermedad.

Ejemplos de hallazgos en el urianálisis que pueden estar asociados con enfermedades extraurinarias incluyen :

a) Diabetes mellitus : en la que hay hiperglicemia, glucosuria, algunas veces cetonuria ,o evidencia de infección bacteriana del tracto urinario.

b) Diabetes insípida central : hay hipostenuria.

c) Enfermedad hepática : hay bilirrubinuria, algunas veces cristales de amonio o de tirosina.

d) Enfermedad hemolítica severa : hay hemoglobinuria, hiperurobilinogenuria.

e) Azotemia pre-renal : se encuentra formación de orina concentrada.





f) Acidosis sistémica ( acidemia ): frecuentemente la orina se torna ácida.

COLECCIÓN DE LA ORINA

Es preferible tomar la muestra en la mañana debido a que está más concentrada; es más probable que contenga constituyentes anormales y esta libre de influencias extrañas como alimentación y ejercicio.

Usar recipientes de vidrio o plástico limpios, que estén libres de detergentes, alimentos cosméticos, drogas etc. que pueden interferir con las pruebas enzimáticas y químicas.

El uso de recipientes transparentes de vidrio o plástico facilita la observación de las características manoscópicas de la orina. Si el examen no se puede efectuar durante 30 minutos después de la colección, se deben utilizar recipientes opacos, de vidrio de color

ámbar para minimizar la degradación fotoquímica de los constituyentes urinarios.

La orina obtenida para cultivos bacteriológicos debe ser colectada en recipientes esténtes.

Las muestras colectadas por cateterización o cistocentesis pueden ser almacenadas y transportadas en la jeringa colectora.

Técnicas de colección:

La vejiga puede ser removida de la vejiga por uno de los cuatro métodos:

Micción natural

Compresión manual de la vejiga urinaria

Caracterización

Cistocentesis





Hay que prevenir traumas de la uretra y vejiga urinaria e infecciones del tracto urinario.

Micción natural

Ventajas: no hay riesgo de complicación del paciente; puede ser tomada por el dueño del animal.

Desventajas: Las muestras pueden ser contaminadas con células, bacterias, moco y otros restos localizados en el tracto genital o en piel y pelos. El paciente no siempre orinará cuando se desee tomar la muestra.

El método es satisfactorio para análisis de rutina realizado como muestreo para determinar anormalidades del tracto urinarios y otros sistemas corporales. Las muestras colectadas por esté método son menos deseables para cultivos bacteriológicos que las tomadas por cateterización o cistocentesis.

La primera porción de la orina emitida se deberá excluir debido a que puede estar contaminada durante el contacto con el tracto genital, piel o pelos.

Compresión manual de la vejiga.

La aplicación de presión digital a la vejiga urinaria a través de la pared abdominal puede usarse para colectar muestras de orina en perros y gatos y otros animales pequeños.

Ventajas:

El riesgo de infección y trauma iatrogenico del tracto genitourinario es menor. Las muestras pueden colectarse de pacientes con vejiga urinaria distendida de acuerdo a la conveniencia del clínico.





Desventaja:

Pueden haber traumatismo de la vejiga cuando se aplica mucha presión y la hemeturia ocasionada interfiere los resultados.

La vejiga puede no contener un volumen suficiente de orina para facilitar esta técnica.

Las muestras frecuentemente se contaminan con células, bacterias y otros detritos localizados en el tracto genital o en la piel o con pelos.

La orina de la vejiga urinaria contaminada o infectada con bacterias puede ser forzada hacia uréteres, pelvis renal o riñones.

Cateterización:

La cateterización se emplea en muchas especies animales especialmente pequeñas especies, como un método de colectar muestras de orina para análisis.

Se debe lavar bien con jabón y secar el área periuretral para evitar contaminación. Se debe usar un material estéril, usando guantes estériles, para evitar la introducción de una infección bacteriana.

Se debe utilizar un catéter de menor diámetro que la uretra para evitar traumatismo y lubricando el extremo anterior con vaselina estéril, o con anestésico local lubricante como xylocaína en jalea. No se recomienda la adicción de excesiva cantidad de vaselina u otro lubricante ya que puede alterar las características físicas o químicas de la muestra. Se debe descartar la primera porción de la orina evacuada.





Indicaciones de la Cateterización:

Colectar orina de la vejiga para urianálisis o cultivos bacteriológicos. Hay veces que la cateterización es el único medio viable para obtener una muestra para diagnóstico.

Para instilación de medios de contraste para radiografía.

Evaluar la luz uretral para diagnostico de cálculos, o lesiones que invaden el espacio o constricciones .

Instilar medicamentos en la vejiga.

Facilitar reparaciones quirúrgicas de la uretra o estructuras vecinas.

Tamaño, composición y tipos de catetéres

Tamaño: La escala de medidas usadas comúnmente para calibrar el diámetro de los catéteres es la escala French ( abreviada ). Cada unidad French equivale a 1/3 mm, de modo que las unidades French pueden convertirse a mm dividiendo por 3. Un catéter 9F tiene un diámetro externo de 3 mm.

Los catéteres están disponibles en una variedad de diámetros y longitudes; son producidos en una variedad de materiales como caucho, plástico, metal, nylon, látex.

Cistocentesis

Es una forma de parasentesis que consiste en una punción con aguja de la vejiga urinaria con el propósito de remover una cantidad de orina por aspiración.





La cistocentesis bien realizada produce menos infección iatrogénica que la cateterización y es mejor tolerada por pacientes ( perros y gatos ) que la cateterización.

Indicaciones:

· Prevenir la contaminación de la muestra de orina con bacterias, células, detritos del tracto urinario bajo.

· Ayudar en la localización de la hematuria, piuria, bacteriuria.

· Minimizar la infección iatrogénica del tracto urinario cansada por la cateterización en pacientes con uretritis.

· Se puede hacer cistocentesis terapéutica para producir descompresión temporal cuando hay obstrucción uretral o herniación de la vejiga con impedimento de la micción normal.

Contraindicaciones:

No se recomienda cuando hay un volumen insuficiente de orina. No realizarla sin la

localización e inmovilización de la vejiga.

Equipo:

Usar agujas N 22, dependiendo del tamaño del animal y la distancia de la pared

ventral de la vejiga y de la pared abdominal ventral, usar agujas hipodérmicas de

1 ½ pulgadas o agujas espinales de 3 pulgadas de longitud.

Sitio:

La aguja debe insertarse en la pared ventral o ventrolateral de la vejiga para minimizar el

trauma de los ureteres y vasos abdominales principales.

En cistocentesis terapéutica, se recomienda la inserción de la aguja a una





distancia corta cranial a la unión de la vejiga con la uretra más que en el vértice de

la vejiga; esto permite la remoción de la orina y descompresión de la vejiga sin

necesidad de reinserción de la aguja en la luz de la vejiga; si la aguja se coloca en, o cerca al vértice de la vejiga , puede no permanecer en la luz de la vejiga a

medida que ésta disminuye progresivamente de tamaño al hacer la aspiración de

la orina.

Se recomienda que la aguja se introduzca a través de la pared vesical en un ángulo

aproximado de 45 ; haciendo así, la elasticidad de la musculatura vesical y el

ordenamiento entrelazado de las fibras musculares individuales sellan el pequeño

agujero que queda cuando se quita la aguja.

Rara vez se requiere tranquilización o anestesia general.

Técnica:

La vejiga debe contener un volumen suficiente de orina para permitir la

inmovilización y localización por palpación. Se debe lavar, rasurar y hacer

desinfección quirúrgica de la piel donde se va hacer la punción.

Hacer la punción en ángulo oblicuo y hacer aspiración suave con la jeringa; no se

debe hacer presión digital excesiva a la vejiga mientras que la aguja está en la luz

vesical para impedir que la orina sea forzada alrededor de la aguja hacia la cavidad

peritoneal .

Raras veces hay complicaciones potenciales de traumatismo de la pared vesical o

estructuras adyacentes, peritonitis local o generalizada, fistulas vesicoperitoneales

y adherencias de estructuras adyacentes ala pared vesical.





PROPIEDADES FISICAS DE LA ORINA

Volúmen

El voúmen normal de la orina está influenciado por varios factores incluyendo : la especie, peso y tamaño corporal, dieta e ingredientes que afectan la capacidad de concentración de la orina, ingestión de líquidos, pérdida de líquidos por el tracto gastrointestinal, actividad física, factores ambientales tales como temperatura y humedad, excresión de solutos urinarios.

Las indicaciones para la determinación del volúmen urinario incluyen : verificación de una observación de poliuria u oliguria ; cuantificación de sustancias excretadas en la orina

( ej : proteínas ) ; evaluación de la perfusión renal en pacientes con shock.

Poliuria. Se define como la formación y eliminación de grandes cantidades de orina.

Puede ser fisiológica o patológica.. Para determinar el significado de poliuria se debe tener

información sobre los anamnésicos, examen físico y los resultados del urianálisis.

Poliuria fisiológica. Es la causa más frecuente de poliuria y ocurre generalmente como una respuesta compensatoria a la ingestión aumentada de fluídos.

Poliuria farmacológica.. Puede ocurrir: después de la ingestión de suficiente cantidad de sal lo que aumenta la sed con mayor consumo de agua; tambien puede ser debida a la administración de diuréticos, de glucocorticoides ( especialmente en el perro ), o en la administración parenteral de líquidos.

Poliuria patológica. Puede clasificarse en poliuria por diuresis hídrica o diuresis de solutos.

La diuresis hídrica se caracteriza por una gravedad específica de ( 1.001- 1.006 ) inferior a la del filtrado glomerular. Esta diuresis se produce como resultado de la falta de hormona antidiurética ( ADH ) ( diabetes insípida de origen central ) ; o por una respuesta tubular renal disminuida a concentraciones adecuadas de ADH ( diabetes insípida renal ); o consumo de agua excesiva ( polidipsia sicogénica ).

La diuresis de solutos se caracteriza por una GE mayor que la del filtrado glomerular

( 1.008- 1.012 ). Esta diuresis resulta de la excresión de solutos en exceso de la capacidad tubular para reabsolberlos, ej : glucosa en diabetes mellitus; reabsorción tubular disminuida de uno o más solutos (





ej: urea, creatinina, fósforo y otros solutos en falla renal primaria. Otros desórdenes que producen diuresis de solutos son falla primaria crónica, la fase diurética de falla renal aguda, diuresis post-obstructiva, hiperadrenocorticismo

Las enfermedades que están asociadas con poliuria, vómito y deshidratación clínica incluyen falla renal primaria, cetoacidosis diabética y algunos casos de piómetra.

Oliguria. Se define como la formación disminuida de orina por los riñones o la disminución

en la eliminación de orina del cuerpo.

La oliguria asociada con escasa formación de orina está relacionada con la función renal.

Se presenta en ingestión disminuida de líquidos, alta temperatura ambiental y en hiperventilación.

En general las causas que producen azotemia pre-renal producen oliguria, en la que se producen pequeños volúmenes de orina con GE alta ; ejemplos : dshidratación (vómito, diarrea, fiebre etc. ), falla cardiaca, hipoadrenocorticismo, baja tensión sanguínea etc. En azotemia pre-renal implica que los riñones son normales estructural y funcionalmente. Si la causa pre-renal persiste por un tiempo se puede desarrollar enfermedad renal isquémica primaria.

Tambien se puede producir oliguria durante la fase inicial de falla renal primaria aguda causada por enfermedad tubular nefrotóxica o isquémica generalizadas.

La GE de la orina de pacientes con falla renal aguda refleja una capacidad de concentración disminuida si se han dañado una cantidad suficiente de nefrones. La oliguria puede presentarse como un evento terminal en enfermedad renal crónica progresiva generalizada.

Otras causas de oliguria están relacionadas con la eliminación de un volúmen disminuido de orina en enfermedades del tracto urinario inferior ( ureteres, vejiga urinaria, uretra ) por flujo de orina disminuido a través de las vías excretoras como en casos de neoplasias, constricciones o urolitos que ocluyen parcialmente esas vías ; en hernias de la vejiga urinaria que impiden parcialmente el flujo urinario a través de la uretra..

Anuria. Indica la ausencia de formación de orina por los riñones y ausencia de eliminación





de orina. Aunque la anuria podría resultar de una cesación de la función renal causada por

falta de perfusión o falla renal primaria, la anuria está generalmente asociada con una

uropatía obstructiva o roturas de los ureteres o vejiga.

Color

No se debe confundir el color con la transparencia. Puede haber una enfermedad significativa cuando la orina tiene un color normal. Debido a que la intensidad del color depende de la cantidad de agua en la que los pigmentos son excretados, se deberá interpretar de acuerdo a la GE, al igual que las otras características del examen urinario.

La detección del color anormal de la orina inducirá a preguntar acerca de la dieta, administración de medicamentos y medio ambiente; también se debe sustentar con el examen del sedimento.

El color normal de la orina es amarillo pálido, amarillo o amarillo ámbar.

El color amarillo es impartido principalmente por dos pigmentos : el urocromo de la oxidación del cromógeno, y la urobilina que es un producto de la degradación de la hemoglobina. Cantidades elevadas de urocromo pueden ser excretadas en casos de fiebre o inanición.

Orina de color amarillo pálido, amarillo o ámbar son colores normales por urocromos y urobilina normales.

Amarillo oscuro : se presenta por : orina altamente concentrada, quinacrina, nitrofurantoína, fenacetina, grandes cantidades de riboflavina Azul: por azul de metileno, indicán, infección urinaria por Pseudomona ( piocianina ). Verde: Azul de metileno, biliverdina, riboflavina. Amarillo anaranjado : orina concentrada, exceso de urobilina, bilirrubina conjugada, piridio.Rojo, rosado, rojo parduzco, rojo naranja, naranja : Hematuria, hemoglobinuria, mioglobinuria ( pardo rojizo ), porfirinuria, fenolsulfontaleína, warfarina, tetracloruro de carbono, fenotiazina. Parduzco: metahemoglobina, melanina, nitrofurantoína. Amarillo parduzco , verde parduzco : pigmentos biliares. Pardo o negro : melanina, metahemoglobina, mioglobina, pigmentos biliares. Incolora : orina muy diluída.





Blanco lechoso : quilo, pus, cristales de fosfato. Olor La orina normal tiene un olor característico que varía entre las especies. L a detección de un olor urinario anormal indica la necesidad de una posterior evaluación. Un olor anormal rara vez es de significado diagnóstico específico. La excresión de algunas drogas como la ampicilina, vitaminas del complejo B presentan un olor anormal característico. Para tratar de determinar la causa del olor urinario anormal se debe hacer un urianálisis completo; dependiendo de la causa se deben realizar examenes de laboratorio y clínicos adicionales. Olor amoniacal. Un olor amoniacal es una anormalidad común de la orina. El NH 3 confiere ese olor característico ; el NH 4 y la úrea son inoloros. La orina fresca normal a temperatura ambiente no tiene olor amoniacal debido a que contiene cantidades pequeñas de NH 3 . Esta contiene grandes cantidades de úrea y puede contener grandes cantidades de NH 4. Las causas potenciales de olor amoniacal incluyen : Degradación de la úrea a amoniaco por bacterias productoras de ureasa. Estas bacterias pueden ser contaminantes o patógenas ( Staphylococcus sp., Proteus vulgaris, Pseudomonas, Klebsiella ). La orina recién eliminada con un olor amoniacal sugiere una infección del tracto urinario con bacterias productoras de ureasa. El NH 4 es transformado a NH 3 por calor endógeno o exógeno. Olor pútrido. El olor pútrido indica una degradación de gran cantidad de proteínas y es anormal. Se puede presentar en inflamaciones del tracto urinario. Olor a cetonas. Cuando hay cetonuria se imparte ese olor característico. Las pruebas químicas del urianálisis dan una mayor confiabilidad de esta anormalidad. Se puede presentar cetonuria en diabetes mellitus, inanición, fiebre, cetonemia. Gravedad específica ( GE ). Hay dos indicaciones principales para la evaluación de rutina de la GE de toda muestra de orina analizada:

- La interpretación de otros resultados del urianálisis depende del conocimiento de la GE debido a que ella aporta información con respecto a la proporción de solutos y el solvente ( agua ).La interpretación semicuantitativa de resultados no es posible en tales muestras sin el conocimiento de la GE ; la proteina es usada como ejemplo, una proteinuria de 2 + en una GE de 1.010 refleja una mayor pérdida de proteina que 2 + de proteinuria con una GE de 1.030.

- El mismo concepto es aplicable a la interpretación del significado de glucosa, bilirrubina etc. y

constituyentes del sedimento urinario.





- La GE se usa para averiguar la habilidad de los túbulos renales para concentrar (remover agua en exceso de solutos ) o diluir ( remover solutos en exceso de agua) el filtrado glomerular. El conocimiento de la GE es muy útil cuando se desea localizar el tipo de azotemia..

La importancia diagnóstica de la GE está en su capacidad de reflejar la masa renal funcional. A medida que la función renal se deteriora progresivamente, la habilidad para diluir o concentrar la orina podrá perderse y la GE aproximarse a la del filtrado glomerular ( 1.008-1.012 ), en este momento se considera que la GE está fija o isostenúrica y refleja un deterioro sustancial de la función renal. La isostenuria es particularmente significativa con la presencia de deshidratación, azotemia o manifestaciones externas de uremia. Aumento de la GE. Pueden ocurrir aumentos fisiológicos o transitorios en : Ingestión disminuida de agua, en hiperventilación o en animales tenidos en ambientes Con altas temperaturas. Aumentos patológicos ocurren en : Deshidratación resultante de vómito, diarrea prolongados etc.; shock hipovolémico si el funcionamiento renal es normal ; edema asociado con insuficiencia. Cardiaca ; quemaduras extensas con abundante pérdida de líquidos; nefritis aguda; cistitis; diabetes mellitus. La GE está disminuida Fisiológicamente : por aumento en la ingestión de líquidos, o después de la administración de líquidos parenterales, corticosteroides, diuréticos, ACTH. Patológicamente : en nefritis intersticial crónica ; piómetra en la perra ; en hipercalcemia: el exceso de calcio inhibe la acción de la hormona antidiurética; en hipopotasemia, hipomagnesemia ; en pielonefritis crónica generalizada; amiloidosis renal; diabetes insípida; hiperadrenocorticismo. Transparencia En la mayoría de las especies la orina recientemente eliminada es clara o transparente. La orina concentrada es más probable que sea turbia que una orina diluída. La causa de orina turbia generalmente se explica mejor por evaluación del sedimento urinario. Las causas potenciales de turbidez en la orina pueden ser uno o más de los siguientes elementos : Cristales, eritrocitos, leucocitos, células epiteliales, espermatozoides, bacterias , levaduras, contaminantes del recipiente, lípidos ( tienden a ir a la superficie de la muestra de orina ), moco, contaminación con heces, barro etc. La hematuria típicamente produce orina turbia de color pardo a roja ( ocasionalmente negra ), y la hemoglobinuria o mioglobinuria producen una orina tambien parda o rojiza ( ocasionalmente negra ) pero de aspecto claro.





Espuma La orina normal cuando se agita después de la colección produce una espuma blanca en cantidad limitada y desaparece rápidamente. Si hay proteinuria se produce una espuma abundante, blanquecina y desaparece lentamente. Si hay pigmentos biliares la espuma puede ser verde, amarilla o amarillo parda ; si hay hemoglobina la espuma es roja o parda CARACTERISTICAS QUIMICAS PH urinario El pH urinario puede usarse como un índice crudo del balance ácido-básico del cuerpo. El cuerpo generalmente produce un exceso de metabolitos ácidos, los pulmones regulan el balance ácido-básico por retención o eliminación de CO 2 y por lo tanto de ácido carbónico, mientras que los riñones regulan el balance ácido-básico principalmente vía excresión de bicarbonato, ión amonio y fosfatos. La dieta y las enfermedades pueden tambien inducir considerable variación en el pH urinario.

El conocimiento del pH urinario puede ayudar en la determinación del tipo de urolitos presentes antes de su análisis mineral :

Los urolitos de fosfato de calcio ( apatita ) y de fosfato triple ( estruvita ) tienden a formarse en orinas alcalinas.

Los urolitos de cistina y ácido úrico tienden a formarse en orina ácida.

Los cristales de urato de amonio pueden ser precipitados por el ión H ( pH ácido ) o ión amonio ( pH alcalino ).

La formación de oxalato de calcio y de sílice no es influenciado significativamente por el pH urinario.

Las infecciones del tracto urinario causadas por bacterias productoras de ureasa

( principalmente Staphylococcus y Proteus sp. ) con frecuencia producen orinas que pueden llegar a ser alcalinas. Las infecciones del tracto urinario están tambien comunmente asociadas con orina ácida puesto que la mayoría de bacterias patógenas no producen ureasa..

El conocimiento del pH urinario puede ser importante en la interpretación de hallazgos del sedimento urinario. Los eritrocitos, leucocitos, cilindros y otras estructuras proteináceas tienden a desintegrarse en la orina alcalina.

El pH urinario es comunmente manipulado para disolver o impedir la recurrencia de ciertos urolitos, los que tienden a formarse en orinas alcalinas como los de apatita o estruvita son más solubles en orina ácida, los urolitos de cistina y ácido úrico son más solubles en orina alcalina.

La eficacia terapéutica de algunos agentes antimicrobianos pueden aumentar por alteración del pH urinario.





El conocimiento del pH urinario comunmente se usa como un índice crudo de la respuesta terapéutica cuando se intenta corregir estados de acidosis o alcalosis sistémicas.

El pH urinario del perro y del gato comunmente varía entre 5.5 y 7.0; hay que tener en cuenta la dieta, la ingestión de dietas ricas en proteína animal tiende a producir orina ácida y dietas ricas en vegetales y cereales tienden a producir orina alcalina.

La orina ácida ( aciduria ) puede estar asociada con varios desórdenes: acidosis respiratoria y metabólica, cetoacidosis diabética, insuficiencia renal primaria, diarrea severa, inanición , fiebre, catabolismo de proteínas endógenas y exógenas, deficiencia de O2..

Drogas que tienden a acidificar la orina : sales de fosfato de sodio, potasio o amonio, metionina, cloruro de sodio, de amonio ,de calcio, dosis bajas de furosemida..

La orina alcalina ( alcaluria ) puede estar asociada a varios desórdenes : infecciones del tracto urinario causadas por bacterias productoras de ureasa, alcalosis metabólica o respiratoria, vómito..

Drogas que tienden a alcalinizar la orina : bicarbonato de sodio, lactato de sodio, acetato de sodio, citrato de potasio, clorotiazida.

Glucosa

Puede haber una hiperglicemia con glucosuria después del stress significativo especialmente en gatos, lo cual está relacionado con la liberación de epinefrina y glucocorticoides endógenos que producen movilización de glucógeno almacenado en el hígado.

Glucosuria farmacológica :

Puede ocurrir hiperglicemia con glucosuria después de la administración parenteral de soluciones que contienen suficiente cantidad de glucosa.

La administración de glucocorticoides pueden producir grados variables de glucosuria. Otros agentes farmacológicos que pueden producir glucosuria incluyen : ACTH, glucagón, epinefrina, morfina, fenotiazinas.

Glucosuria patológica:

Hiperglicemia con glucosuria puede inducirse por : diabetes mellitus, pancreatitis aguda ( variable ), hiperadrenocorticismo ( variable ), lesiones del sistema nervioso central ( variable ), feocromocitoma.





Normoglicemia con glucosuria puede ser producida por : glucosuria renal primaria, síndrome de Fanconi ( tambien llamada amino-diabetes ), falla renal aguda asociada con lesión tubular significativa ( variable ).

Cetonas

Las cetonas incluyen el ácido diacético, acetona y el ácido beta-hidroxibutírico. La evaluación de cetonuria en pacientes con diabetes mellitus es especialmente importante puesto que la cetonuria diabética sugiere el desarrollo de la cetoacidosis diabética. La evaluación de las cetonas en la orina puede ayudar en la diferenciación de un coma diabético de un shock por insulina inducido terapeuticamente.

La ocurrencia de cetonuria en ausencia de glucosuria sugiere un trastorno en el metabolismo de los carbohidratos caracterizado por excesivo catabolismo de lípidos. Significado de la cetonuria : La cetosis y la cetonuria pueden ser causadas por cualquier desórden asociado con un cambio significativo de producción de energía a partir de carbohidratos a grasa. . La diabetes mellitus no controlada es la forma de cetonuria más común encontrada en perros y gatos. La excresión urinaria de cetonas induce a pérdida de electrolitos incluyendo hiponatremia. La pérdida de sodio y cetonas en la orina contribuye al aumento de la osmolalidad en la orina debido a la glucosa y por lo tanto se aumenta la magnitud de la poliuria en la diabetes. La inanición , dietas con bajo contenido de carbohidratos y alto en grasas ( dietas cetogénicas ), y síndromes hipoglicémicos ( insulinomas ) pueden tambien inducir cetonuria. Es más probable que los animales jóvenes desarrollen cetonuria como resultado de la inanición que los animales adultos. Bilirrubina Debido a que la detección de bilirrubina por el análisis de rutina puede preceder el reconocimiento clínico de la ictericia. La bilirrubinuria puede ser un indicador temprano de desórdenes que ocurren naturalmente con el potencial de inducir ictericia. Sin embargo, la falta de bilirrubinuria no excluye desórdenes asociados con el metabolismo de bilirrubina. La detección de cantidades anormales de bilirrubina en la orina se puede usar como un índice crudo de hepatotoxicidad causado ´por agentes terapéuticos potencialmente tóxicos. Significado : La magnitud de la bilirrubinuria siempre se debe interpretar a la luz de la GE de la orina. En perros : En orinas concentradas de perros normales comunmente se encuentran pequeñas cantidades de bilirrubina ; esta observación se atribuye al bajo umbral renal para la bilirrubina y este bajo umbral está asociado con bajas concentraciones plasmáticas de bilirrubina. Cuando la GE de la orina es de 1.040 o más se encuentran reacciones trazas o leves de bilirrubina. La detección de bilirrubina en orinas menos concentradas, o bilirrubinuria persistente, se deberán sospechar desórdenes del metabolismo de los pigmentos biliares de orígen pre-hepático, hepático o post-hepático. La bilirrubinuria puede preceder la hiperbilirrubinemia. Un grado variable de bilirrubinuria, generalmente leve, puede ser debido a inanición y/o fiebre. Un grado variable de bilirrubinuria puede estar asociada con hemólisis intravascular de suficiente magnitud para exceder la capacidad de la haptoglobina de ligarse a la hemoglobina; en este caso, la





bilirrubinuria puede estar asociada con la producción de bilirrubina a partir de la hemoglobina ´por las células de los túbulos renales.

La bilirrubinuria de gran magnitud está generalmente asociada con enfermedades hepatocelulares ( intrahepáticas ) o desórdenes que obstruyen los ductos biliares ( extrahepáticos ). Sin embargo en ausencia de bilirrubinuria puede existir una enfermedad hepática de grado significativo.

En gatos :

La bilirrubinuria en gatos es poco frecuente. La bilirrubinuria no es un hallazgo en gatos normales, aún en orinas altamente concentradas, cuando se detecta la alteración en exámenes de rutina debe tenerse en cuenta como consecuencia de alguna enfermedad, ejemplo : enfermedad hepática primaria, diabetes mellitus, peritonitis infecciosa felina, desórdenes relacionados con leucemia felina

Urobilinógeno A diferencia de la situación en el hombre, el examen de rutina del urobilinógeno no es particularmente útil, se incluye en las pruebas de rutina debido a que viene incluído en las tiras reactivas ( Multistix , Combur ) que se utilizan habitualmente La evaluación de urobilinógeno en la orina se puede usar como una prueba tamiz cuando se sospechan desórdenes hepáticos o hemolíticos o una prueba de patencia del conducto biliar. La mayoría de autores están de acuerdo en que los exámenes de urobilinógeno en orinas de perro son poco confiables. La evaluación de los resultados del urobilinógeno urinario se debe hacer a la luz de otros hallazgos clínicos , de laboratorio, radiográficos y de biopsias.

Concentración normal del urobilinógeno: La identificación de cantidades normales de urobilinógeno urinario sugiere al menos patencia parcial de los conductos biliares y función adecuada de la circulación enterohepática de los pigmentos biliares. Concentración disminuída de urobilinógeno : Como causas potenciales se pueden incluir : Absorción intestinal disminuída del urobilinógeno causada por diarrea o malabsorción. ; inhibición da la flora intestinal por agentes antibacterianos orales.; reducida excresión de bilis en el intestino como resultado de inanición u oclusión del conducto biliar ; reducción del urobilinógeno como resultado de poliuria fisiológica o patológica ; excresión de orina ácida. Ausencia de urobilinógeno urinario : Se puede presentar en obstrucción del canal colédoco. Concentración de urobilinógeno aumentado : Se puede presentar en crisis hemolíticas,; en disfunción hepática como resultado de disminución de la circulación enterohepática de los pigmentos biliares ; movimientos retardados del contenido intestinal que pueden aumentar la reabsorción con mayor excresión urinaria de urobilinógeno ; mayor excresión de urobilinógeno puede deberse a una orina de pH alcalino. Sangre oculta, hemoglobina y mioglobina Las pruebas químicas para eritrocitos y hemoglobina pueden ayudar a la identificación de la causa de un color anormal de la orina; esas pruebas se pueden usar para detectar cantidades de eritrocitos, hemoglobina o mioglobina ocultas en la orina, cuya presencia o ausencia puede ser de valor en localizar





la fuente de proteinuria. La evaluación química de eritrocitos puede ayudar en la interpretación del significado del sedimento urinario. Desordenes que pueden causar hematuria : Ejercicio agotador; trauma iatrogénico producido por la palpación renal o de la vejiga o cateterización de la vejiga ; trauma, cálculos urinarios , infartos renales ( se presentan tambien leucocitos, cilindros y proteína ) , infección del tracto urinario, neoplasias malignas o benignas en cualquier parte del tracto genitourinario, congestión pásiva, enfermedades sistémicas con tendencia a la hemorragia como trombocitopenia, leptospirosis, intoxicación por warfarina, hemofilia etc. ; parásitos como Dioctophyma renale, Capillaria plica, microfilaria de Dirofilaria immitis; estro. Hemoglobinuria: La hemoglobinuria no urinaria está asociada con hemoglobinemia y puede ser causada por : reacciones transfusionales, anemia hemolítica inmuno-mediada, babesiosis, leptospirosis, veneno de serpientes, plantas o toxinas químicas hemolíticas, drogas, hipofosfatemia severa, anemia hemolítica inducida por zinc. La hemoglobinuria urinaria es causada por destrucción de eritrocitos en orinas alcalinas o diluídas. Mioglobinuria: La mioglobinuria es poco frecuente en perros y gatos. Puede resultar de lesión traumática, tóxica o isquémica o necrosis ( rabdomiolisis ) de las células musculares, ej: aplastamiento muscular, golpe de calor, choque electrico. Proteina Las proteínas urinarias están compuestas por una cantidad variable de proteínas plasmáticas, proteínas provenientes del tracto urinario y del tracto genital. La evaluación de la proteína urinaria está incluída como parte del e´xamen completo de orina, porque cuando se interpreta junto con otros hallazgos clínicos y de laboratorio con frecuencia ayudan en la detección y localización de los desórdenes fundamentales. El significado clínico de la proteinuria es algunas veces difícil de averiguar debido a que puede ocurrir en asociación con una variedad de desórdenes urinarios y extra-urinarios. La proteinuria puede ser : * Proteinuria fisiológica * Proteinuria patológica : a) proteinuria no urinaria . b) proteinuria urinaria, que puede ser de orígen renal o no renal. Proteinuria fisiológica: Es de duración transitoria y de escasa cantidad. Puede ocurrir en ejercicios extenuantes no acostumbrados, incluyendo convulsiones y carreras, esa proteinuria por ejercicio puede estar acompañada por hematuria, cilindros y rara vez piuria. Otras causas son stress emocional, calor o frío extremos; durante los primeros días de vida. Proteinuria patológica :





Proteinuria no urinaria. Causas : congestión pasiva crónica de los riñones por falla cardiaca congestiva y presión intra-abdominal aumentada causada por neoplasias,; excresión de hemoglobina por hemólisis intravascular de suficiente magnitud que exceda la capacidad de ligamiento de la haptoglobina con la hemoglobina y la capacidad de reabsorción tubular; excresión de mioglobina en casos de enfermedades musculares generalizadas ; excresión de proteínas de Bence-Jones producida por neoplasias de células plasmáticas. Proteinuria urinaria: De orígen renal : Por paso de proteína plasmática a través del glomérulo lesionado a una rata que sobrepase la capacidad tubular de reabsorción de la proteína, en casos de glomerulonefropatía. La proteinuria persistente que ocurre en ausencia de hematuria y piuria significativa indica la presencia de enfermedad glomerular generalizada ( amiloidosis, glomerulonefropatía por complejo inmune etc. ). La enfermedad tubular puede resultar en proteinuria como resultado de reabsorción disminuída; la proteinuria no es un hallazgo consistente en pacientes con enfermedad tubular . Contaminación de la orina con exudado inflamatorio o hemorragia que se origina de los riñones. Proteinuria urinaria no renal : Está relacionada con lesiones hemorrágicas o inflamatorias de los ureteres, vejiga urinaria y uretra.. Es esencial evaluar el sedimento urinario para tratar de localizar la fuente de la proteinuria. Nitritos La evaluación clínica de esta prueba en perros y gatos revela que no detecta la bacteriuria significativa en forma consistente, por lo tanto no es una prueba muy útil, da un número muy alto de falsos negativos. EXAMEN DE SEDIMENTO URINARIO La evaluación significativa del sedimento urinario depende del reconocimiento de elementos celulares, cilindros, cristales y otros objetos; la orina es un medio no fisiológico para la mayoría de esas células, las cuales están sujetas a cambios osmóticos y de pH por períodos variados bastante diferentes a su ambiente natural, están tambien expuestas a enzimas o concentraciones tóxicas de otros metabolitos excretados en la orina o producidos por organismos patógenos que producen cambios en el tamaño, estructura y transparencia. El examen de sedimento urinario puede considerarse como una forma de biopsia ( citología exfoliativa ). Como en otras técnicas de citología exfoliativa, las caraterísticas morfológicas de las células, cilindros, cristales bacterias, etc. Suministran información útil, pero frecuentemente no permiten establecer un diagnóstico específico.

Aunque los estados de enfermedad pueden establecerse sobre la base de hallazgos positivos, ellos no pueden eliminarse por exclusión sobre la base de hallazgos negativos.





Por eso, los resultados del examen físico y químico de la orina cuando se deja a medio ambiente después de la colección es el aumento del ph secundario ala proliferación de bacterias contaminantes o patógenas productoras de urease y al escape del CO2 de la orina en la atmosfera.

La orina alcalina promueve la lisis de los eritrocitos, cilindros y especialmente de los leucocitos y puede alterar también la composición de los cristales.

La orina normal contiene un pequeño número de células y otros elementos procedentes del tracto genitourinario, células epiteliales de la vejiga, uretra, pelvis renal, ureteres, del nefrón.

Examen microscópico del sedimento urinario.

La orina normal contiene un pequeño número de células y otros elementos procedentes del tracto genitourinario, células epiteliales de la vejiga, uretra, pelvis renal, ureteres, del nefrón, fibras de moco y espermatozoides de la próstata. Además aparece un escaso número de leucocitos y ocasionalmente eritrocitos que llegan por diapédesis.

La orina de perros, gatos y otros carnivoros generalmente contienen cristales de fosfato; la orina del caballo por la presencia de cristales de carbonato de calcio y fibras de moco.

La orina normal en la vejiga está libre de bacterias, pero se contamina al ser emitida.

Pueden presentarse objetos extraños de contaminación fecal al menos que haya sido cuidadosamente colectada. Pueden encontrarse huevos de parásitos intestinales, esporas de hongos contaminantes, protozoarios de vida libre o del tracto digestivo, pelos y otro material orgánico.

Como la naturaleza del sediemento urinario cambia rápidamente, por tanto el examen debe realizarse en muestras frescas, máximo 30 minutos después de colectadas, en caso de demora conservarla en refrigeración por poco tiempo. Los sedimentos urinarios deben examinarse antes de 8 horas después de su obtención.

La muestra de orina se debe centrifugar para concentrar los elementos. Se centrifugan unos 5-15 ml de orina a baja velocidad: 2500 rpm ( 1000-3000 ) durante 3 a 5 minutos.





Se elimina el sobrenadante y se deja una pequeña cantidad ( 0.5 ml ) para resuspender el sedimento. Cuando el sediemnto es muy escaso se elimina todo el sobrenadante y se resuspende en la cantidad de orina que escurre por las paredes del tubo.

Para suspender se agita suavemente golpeando el fondo del tubo con los dedos; evitar introducir varillas en el tubo para resuspender.

Después que el sedimento es resuspendido se colocará una gota en una lámina limpia y se coloca el cubreobjeto. La gota no debe ser tan grande, que no flote el cubreobjeto.

El examen microscópico se debe hacer con cuidado, con luz de mediana intensidad y se empleará objetivo de pequeño aumento. El resultado del examen microscópico se reporta dando una idea aproximada del número de elementos, puede reportarse un número promedio de estructuras vistas por campo microscópico en pequeño o gran aumento en seco.

El número de células rojas y blancas se cuentan en por lo menos 10 campos microscópicos y se reporta el promedio por campo microscópico de gran aumento en seco. Los cilindros urinarios se recortan convencionalmente como el número promedio por campo de pequeño aumento. Las bacterias, parásitos, cristales, espermas y otros elementos se reportan como: ocasionales, frecuentes o muchos

( 40X ).

Se puede agregar colorante al sedimento para facilitar la identificación de células y estructuras. Se puede agregar colorante al sedimento para facilitar la identificación de células y estructuras. Se puede agregar una gota de solución de azul de metileno al 0.5 % preservada por 1 o 2 gotas de formol o el colorante de Sternheimer-Malbin ó se puede usar colorante de Wright.

Se agrega 1 gota de colorante al sedimento urinario se mezcla y se deja en reposo por 3 minutos luego colocar 1 gota de portaobjeto con laminilla.

El sedimento urinario se divide en elementos organizados y elementos no organizados .

Los elementos organizados son: leucocitos eritrocitos, células epiteliales, microorganismos ( bacterias, levaduras, protozoarios ). Cilindros, parásitos y espermatozoides.





Los elementos no organizados son: gotas de grasa, cristales y pigmentos.

Elementos organizados:

Leucocitos: En condiciones normales se encuentran leucocitos escasos (2-3/ campo). Se encuentran en mayor cantidad en procesos patológicos. La presencia de leucocitos en la orina se denomina piuria ( Leucocituria ). Se dice que más de 10 leucocitos por campo microscópico de gran aumento en seco es indicación de inflamación o necrosis de tejido en alguna parte del tracto urogenital. Se reporta número de leucocitos por campo microscópico ( 40X ).

Las enfermedades en las que se observa piurina incluyen: nefritis, pielonefritis, pielitis, uretritis, cistitis.

Los leucocitos en la orina llamados corpúsculos de pus, aparecen como células esféricas, granulares, un poco más grandes que los eritrocitos. Las granulaciones puede ser debidas a degeneración del núcleo o gránulos neutrofílicos en esas células, o material fagocitado.

Si la orina es alcalina, los leucocitos están generalmente hinchados, de apariencia raída, muy granulares y tienen tendencia a adherirse en racimo. Los leucocitos son lisados rápidamente en orinas alcalinas o hipotónicas.

Eritrocitos

La apariencia de los eritrocitos es variable dependiendo de la gravedad especifica.

En orina fresca con una gravedad especifica 1.010 -1.020 se observan como discos

retráctiles amarillo pálidos de forma redonda uniforme. Los eritrocitos que han estado en la orina por un periodo de tiempo pueden aparecer incoloros como resultado de pérdida de hemoglobina en el medio circundante.

Los eritrocitos son más pequeños que los leucocitos, no contienen ninguna estructura interna y pueden aparecer como discos bicóncavos.





En orinas concentradas pueden observarse más pequeños crenados y distorcionados

mientras que en orinas diluidas pueden aparecer más grandes, globulares y balonadas

En orinas muy diluídas o alcalinas sufren lisis y aparecen como una sombra tenue llamadas “ Células fantasmas “ o pueden ser no visibles.

Algunas veces los eritrocitos se parecen a gotas de grasa, levaduras o uratos amorfos. Sin embargo las grasas son esferas de tamaños variables y bastante refrigentes y se pueden observar fuera del foco de otros elementos del sedimento debido a que tienden a flotar y pueden tener una apariencia oscura cuando se les observa con luz reducida.

Las levaduras frecuentemente son gemadas, incoloras y ovoides o redondas. En el hombre los uratos amorfos pueden ser rojizos o pardo rojizos (por el pigmento urocritina) pero son mas oscuros que los eritrocitos, además los uratos amorfos son variables en tañamos y con frecuencia están en grandes cantidades.

Si no es posible diferenciarlos con objetivo de gran aumento, se agrega ácido acético diluido ( solución de Turh ) a la lámina y se producirá hemolisis, otros objetos con los que se pueden ser confundidos no serán lisados por el ácido.

La presencia de eritrocitos en número significativo ( normal < 5/c ) índice hemorragia en algún lugar del tracto genitourinario por inflamación, necrosis, trauma ó neoplasia.

* Significado : La hematuria puede ser macro o microscópica. La observación de los eritrocitos en el examen del sedimento urinario se deberá correlacionar con los resultados de la evaluación química de la orina para sangre. En un sedimento urinario normal con frecuencia se observan unos pocos eritrocitos ( < 5 eritrocitos por campo.) Grandes números de eritrocitos por campo de 40 X indica hemorragia, inflamación , necrosis, trauma o neoplasia en alguna parte del tracto genitourinario. Desórdenes que pueden estar asociados con hematuria ( ver sangre oculta en examen químico de la orina ). Leucocitos. Significado : Normalmente se pueden observar pocos leucocitos ( < 5 leucocitos por campo ).





Grandes números de leucocitos indican una lesión inflamatoria activa en cualquier parte del tracto genitourinario. La respuesta inflamatoria puede estar asociada con números variables de eritrocitos y proteinuria. Las bacterias en suficiente concentración serán visualizadas por el examen microscópico de orina y asociadas con hematuria, piuria y proteinuria indican que la lesión inflamatoria ha sido causada o complicada por infección bacteriana. La ausencia de piuria usualmente indica que el tracto urinario no está infectado. Sin embargo, es posible encontrar bacteriuria asintomática sin piuria en perros y gatos. La piuria ( leucocituria ) es un pobre indicio de bacteriuria y por lo tanto no es sinónimo de infección del tracto urinario ; aunque la piuria aumentará la sospecha de infección se deben considerar causas no septicas de inflamación ( urolitos, neoplasias etc. ).

Células epiteliales.

Las células epiteliales tubulares renales se originan de los túbulos renales, son pequeñas, redondas y tienen un núcleo redondo, grande central y citoplasma granular. Las células epiteliales de transición son variables en tamaño dependiendo de la profundidad de su orígen en el epitelio de transición; pueden tener forma de pera, ahusadas, caudadas o poligonales y tienen citoplasma granular. Las células epiteliales escamosas son las más grandes del sedimento urinario, con el borde irregular y un núcleo pequeño, denso. Las células epiteliales neoplásicas se pueden observar en el sedimento de pacientes con carcinomas de células de transición, rabdomiosarcomas u otro tipo de neoplasias. Significado : Las células epiteliales renales se encuentran normalmente en número escaso ( < 5 células por campo ); mayores cantidades podrían indicar enfermedad de los túbulos renales . Las células epiteliales de transición se originan de la pelvis renal, vejiga urinaria y uretra. Cuando se observan en números mayores de 5/c pueden indicar inflamación o neoplasia de los sitios indicados anteriormente. Las células epiteliales escamosas se originan de la vagina y uretra distal y podrían indicar inflamación de esos sitios. Células epiteliales neoplásicas. Se pueden observar en pacientes con carcinoma de células de transición, , rabdomiosarcoma. Rara vez se ven pacientes con carcinoma de células renales. Cilindros urinarios Los cilindros son estructuras compuestas principalmente de mucoproteínas denominadas de Tamm-Horsfall, la cual es secretada localmente por las células epiteliales que tapizan las asas de Henle, túbulos contorneados distales y túbulos colectores. Son de forma cilíndrica formados en la luz tubular; sus extremos pueden ser redondeados, cuadrados, irregulares o afilados. Los cilindros hialinos se pueden disolver en orinas neutras o alcalinas con una GE < 1.003; por esta razón estos cilindros se ven con menos frecuencia en orinas alcalinas ; la alta fuerza centrífuga o la reconstitución forzada del sedimento urinario pueden romper los cilindros.





Los cilindros se clasifican comunmente sobre la base de su apariencia morfológica como: hialinos, granulares, epiteliales, céreos, grasos, eritrocíticos, leucocíticos, de hemoglobina, anchos, teñidos de bilis y mixtos. Significado: Debido a que los cilindros se forman en las asas de Henle, túbulos distales y colectores la detección de un número significativo en el sedimento urinario (cilindruria) indica comprometimiento tubular en un proceso patológica activo; sin embargo, la ausencia de cilindros no excluye la enfermedad tubular renal. El número de cilindros no es un índice confiable de la severidad, duración, reversibilidad o no de la enfermedad fundamental, por ejemplo números grandes o pequeños de cilindros pueden ocurrir en pacientes con enfermedad renal aguda generalizada debido a que ellos tienden a ser eliminados en la orina en forma intermitente; de otra parte, solo unos pocos cilindros se pueden observar en pacientes con nefritis crónica, progresiva , generalizada. Cilindros hialinos Se ven comunmente en causas de proteinuria renal o extra-renal en enfermedad leve o severa. Cilindros epiteliales, grasos, granulares y céreos. Estos cilindros pueden estar asociados con enfermedades ( infartos, isquemia, nefrotoxinas ) que causan degeración y necrosis de las células epiteliales tubulares. Cilindros eritrocíticos. Ocurren en asocio con hemorragias en los túbulos renales Cilindros leucocíticos. Se observan en asocio con inflamación túbulo-intersticial ; la observación de este tipo de cilindro indica afección renal en el proceso inflamatorio. Cilindros de hemoglobina y mioglobina. Los cilindros de hemoglobina se pueden observar después de hemólisis intravascular severa y en hemoglobinuria. Los cilindros de mioglobina están asociados con mioglobinuria. Cilindros coloreados de bilis. Representan una variedad de cilindros que se pigmentan con bilirrubina. Cilindros mixtos. Estos cilindros pueden estar compuestos de una mezcla de cualquiera de los tipos de cilindros antes descritos. Bacterias. Se pueden observar cocos o bacilos en orinas centrifugadas o nó, si las hay en suficiente cantidad. El significado de la presencia de bacterias está relacionado con el método de colección y el tiempo de tomada la muestra; la presencia de bacterias en muestras viejas o tenidas al medio ambiente por largo rato no tienen significado clínico. Si la orina se colectó asepticamente por cistocentesis o cateterización y se observan bacterias indica que hay infección en los riñones o vejiga; puede haber gran número de bacterias en cistitis, pielonefritis o cualquier infección bacteriana del tracto genitourinario. Sin embargo hay que tener en cuenta que la falta de detección de bacterias en el sedimento no excluye su presencia.





Levaduras y hongos Las levaduras y hongos generalmente son contaminantes. Pueden ocurrir infecciones con Candida albicans, especialmente en pacientes con infecciones del tracto urinario resistentes que han sido tratados sin éxito con una variedad de agentes antimicrobianos por tiempo prolongado. Rara vez se pueden observar formas levaduriformes de hongos profundos ej : blastomicosis, criptococosis en el sedimento de pacientes con enfermedades micóticas polisistémicas que involucran el sistema urinario, especialmente los riñones. Parásitos Dioctophyma renale . Se pueden observar huevos de este parásito en el sedimento, especialmente en perros infectados, si hay presentes hembras grávidas en las vías excretoras del sistema urinario. Capillaria plica y C. feliscati. La Capillaria plica está ampliamente distribuída en el mundo ; se encuentra en la vejiga urinaria y con menor frecuencia en los ureteres y pelvis renal en perros, gatos, zorros etc. La C. feliscati se encuentra con menos frecuencia en la vejiga urinaria del gato. La mayoría de perros y gatos presentan polaquiuria, polidipsia, incontinencia urinaria. Microfilaria de Dirofilaria immitis. Se puede observar rara vez en el sedimento de perros infectados como consecuencia de hemorragias en las vías excretoras del sistema urinario. Espermatozoides Son un hallazgo normal en orina de perros y gatos no castrados. Lipiduria Las gotas de grasa se pueden originar como resultado de cambios degenerativos citoplasmáticos en el epitelio tubular, o como contaminación de la orina con lubricantes. Cristales. Con la llegada de protocolos médicos efectivos para disolver y prevenir los urolitos en perros y gatos ha habido un interés renovado en la detección e interpretación de la cristaluria. La evaluación de los cristales en la orina puede ayudar en la detección de desórdenes que predisponen a los animales en la formación de urolitos, estimación de la composición mineral de los urolitos, y en la evaluación de la efectividad de los ´protocolos médicos iniciados para disolver o impedir la urolitiasis. La cristaluria puede presentar un factor de riesgo para la urolitiasis, sin embargo la detección de cristales no es sinónimo de urolitos y los síntomas clínicos asociados con ellos ; ni los cristales en la orina son una evidencia irrefutable de una tendencia en la formación de cálculos.





La interpretación de la cristaluria a la luz de otros hallazgos clínicos con frecuencia permite establecer una identificación tentativa de la composición mineral de los urolitos especialmente de sus capas más superficiales. Los cristales de cistina tienen una forma característica de hexágono (anillo de benceno), son incoloros y se presentan más frecuentemente en orinas ácidas concentradas. No son constituyentes de orina normal, están asociados con desórdenes metabólicos de cistinuria; no todos los pacientes con cistinuria desarrollan urolitos de cistina. Los cristales de oxalato de calcio dihidratado tienen forma octaédrica o forma de sobre de carta. Se encuentran normalmente o en asocio con urolitiasis por oxalatos o en intoxicación con etilenglicol, y se encuentran con menor frecuencia que los cristales de oxalato de calcio monohidratados. Los cristales de oxalato de calcio monohidratado varían en tamaño y pueden tener forma de huso, oval, de mancornas. Grandes cantidades de oxalato de calcio monohidratado ( o dihidratado ) en orina fresca hacen sospechar de desórdenes de hipercalciuria o hiperoxaluria como intoxicación por etilenglicol. Fosfato de calcio. Hay varios tipos diferentes de fosfato de calcio descritos como fosfato amorfo y fosfato de calcio. Se encuentran normalmente en perros con orinas alcalinas persistentemente y en urolitos compuestos por fosfatos de calcio y oxalato de calcio. Leucina. Aparecen como grandes esferas amarillas o parduzcas con laminaciones concéntricas radiales. Son indicativos de enfermedad hepática severa. Tirosina Aparecen como agujas incoloras o amarillas, finas, altamente refráctiles agregadas en haces o racimos. Son indicativas de enfermedad hepática severa. Fosfato de amonio y magnesio. Son prismas incoloros con forma de ataud ; en ocasiones se observan como estructuras en forma de hoja de helecho. Aparecen en perros normales, o pueden aparecer en urolitos compuestos de fosfato triple. Acido úrico. Los cristales son con frecuencia amarillos o amarillos parduzcos y pueden aparecer en una variedad de formas. Las más características son placas en forma de diamante o rombos que pueden tener anillos concéntricos. Se encuentran en perros normales.





Cultivo Bacteriológico.

Si se observan bacterias en un sedimento de orina recientemente colectada, o si se sospecha una infección clínica, se ordena un cultivo bacteriológico.

La orina debe ser cultivada tan pronto como sea posible, después de colectada, preferiblemente en una hora, si no es cultivada inmediatamente se debe mantener en refrigeración ( 8 ).

Se puede sembrar en AS, MK y EMB y se incuba por 24 horas.

Se puede hacer antibiograma.

Para recuento de colonias se hacen diluciones en solución salina fisiológica o solución tampón estériles; se toman 5 tubos con 9 ml de solución salina, al primer tubo se agrega 1 ml de orina ( dilución 1: 10 ); de este tubo se agrega 1 ml al segundo tubo ( 1: 100 ) ; de éste se agrega 1 ml al tercer tubo ( 1:1000 ) ; de éste 1 ml al cuarto tubo ( 1: 10000 ) ; y de este 1 ml al quinto tubo ( 1: 100.000 ) ; luego se hace una siembra de 1 ml de la solución de cada tubo en cajas de petri con agar nutritivo líquido; o desoxicolato lactosa, se comienza con la dilución más alta, se homogeneiza y se deja solidificar, se lleva a incubación

( 37 C ) por 24 horas; se hace recuento de colonias de la caja de mayor dilución y el número de colonias se multiplica por el factor de dilución ( o recíproco de la dilución ) y se reporta como número de colonias por ml de orina ó número de unidades formadoras por ml de orina.

En medicina humana se sugiere que menos de 10.000 bacterias / ml de orina es insignificante y que por encima de 100.000 organismos/ml es indicativo de infección urinaria ( bactriuria significativa ). En medicina veterinaria hay estudios comparables.

En la interpretación se debe tener en cuenta el tipo de organismo aislado. Ejemplo: el hallazgo de 5000 Staphylococcus aureus/ml de orina es más importante que cinco veces ese número de E. Coli. Si el paciente ha recibido placa antibacterinana, los aurocultivos son negativos frecuentemente aún si se observa bacterias en le sedimento. Un examen seguro se puede hacer cuando la terapia se haya suspendido 3 a 5 días antes del cultivo o haciendo varios lavados del sedimento son solución salina fisiológica estéril, centrifugado y eliminando el sobrenadante para ser reemplazado nuevamente ( 4 ó 5 veces ), utilizando el sedimento final para el cultivo ( 8 ).

La azotemia se define como el aumento de las concentraciones de urea y creatinina (y de otras sustancias nitrogenadas no proteicas) en la sangre. (1) (2) Para realizar una correcta interpretación





de las concentraciones del nitrógeno ureico y creatinina como medidas de la función renal, es necesario conocer los mecanismos de producción y excreción de estas sustancias. (1) La urea se sintetiza en el hígado a partir del amoníaco, que a su vez es generado por el catabolismo de las proteínas ingeridas y endógenas. Hay aumento en la producción cuando: (1)

Hay una dieta muy rica en proteínas En el sangrado gastrointestinal anterior Hay estados catabólicos que provocan desdoblamiento de las proteínas corporales

En contraste hay una disminución en la producción cuando: (1)

Hay un bajo consumo de proteínas en la dieta En la hipofunción hepática o cuando no hay suficiente oferta de amoniaco al hígado como en los

casos de anastomosis portosistémica. La urea tiene un bajo peso molecular (60 Dalton) y ya que es un soluto permeable difunde de forma pasiva a través de los compartimientos acuosos corporales; se encuentra a la misma concentración en el líquido intracelular y extracelular e igualmente en el plasma, suero y sangre. (1) (2) Una pequeña cantidad de urea difunde hacia el lumen intestinal y es degradada por los organismos entéricos que tienen ureasa hasta amoníaco, el cual es reabsorbido y reconvertido en urea por el hígado. (1) (2) Su excreción se realiza principalmente por los riñones; es filtrada con libertad en los glomérulos y reabsorbida en forma pasiva por los túbulos. La reabsorción tubular de la urea incrementa cuando disminuye el flujo y volumen tubular. Por el contrario, la reabsorción tubular de la urea disminuye y la excreción incrementa en presencia de diuresis. La disminución del flujo sanguíneo renal (por causas prerrenales como deshidratación o caída del volumen minuto cardíaco) e hipoexcreción de orina (por causas posrenales como obstrucción uretral o ruptura vesical), así como también la disfunción renal primaria, producirán una menor excreción de urea. (1) La creatinina es el producto del metabolismo no enzimático de la creatina la cual almacena energía en el musculo en forma de fosfocreatina. La producción de creatinina es relativamente constante y no se reutiliza, también es proporcional a la masa muscular por eso los animales musculosos producen más creatinina que los ejemplares con masas musculares menores y se observa una concentración mayor en machos que en hembras. (1) (2) A diferencia del nitrógeno ureico la cantidad de creatinina sérica no se ve afectada por la dieta aunque si hay un consumo elevado de carne puede haber un aumento en la absorción intestinal y el subsecuente aumento en sangre de este. También enfermedades musculares y debilidad general pueden presentar una disminución en la creatinina y casos donde hay destrucción muscular (rabdomiolisis o entrenamiento excesivo) puede conllevar un aumento.

Su peso molecular es de 113 Dalton; por lo que, difunde con mayor lentitud a través de todos los compartimentos acuosos corporales. Parte de la creatinina pasa al lumen intestinal y es degradada por bacterias entéricas y excretada por heces; pero la mayor parte es excretada por los riñones. La creatinina es filtrada con libertad por los glomérulos y no hay reabsorción o secreción significativa por los túbulos renales por lo que es un buen indicativo de la tasa de filtración glomerular (TFG). (1) (2) Como la producción de creatinina es relativamente constante, el incremento de su concentración sérica es indicativo de hípoexcreción renal. Sin embargo, es importante recordar que los factores prerrenales y posrenales influyen en el funcionamiento renal y por lo tanto en la excreción de la creatinina. (1) Para el desarrollo de azotemia renal debe existir un daño funcional de mas del 70% de las nefronas, donde se observa la disminucion en la TFG y en la excrecion de urea y creatinina. En este caso la concentracion de BUN se duplica cada vez que la masa renal funcional disminuye a la mitad, por lo que cualquier cambio en la concentracion de BUN es muy significativo. (2) A menudo aparecen juntas la azotemia prerrenal y renal (tabla 1). La azotemia suele aparecer despues de las alteraciones en la concentracion de la orina, ya que debido al daño renal aunque haya un fuerte estimulo para que se concentre la orina, el riñon es incapaz de hacerlo (esto no sucede en los gatos donde puede persistir algo de capacidad de





concentracion en el riñon despues de la aparicion de azotemia). En los casos de glomerulopatias primarias la azotemia puede aparecer antes de que se evidencien los problemas de concentracion urinaria ya que el daño tubular se evidencia despues que el glomerular. (2) En el fallo renal vamos a encontrar el radio de urea urinaria/urea serica y creatinina urinaria/creatinina serica disminuido. (2) En la confirmacion por laboratorio de azotemia renal se debe tener en cuenta: (3)

La densidad urinaria que suele se <1,020 Ausencia de evidencia clinica de trastorno prerrenal como deshidratacion, hipotension sistemica

o hipoadrenocorticalismo. Evidencia de una via excretora normal (permeabilidad de ambos ureteres, uretra y vejiga

urinaria) Tabla 1. Diferenciacion entre azotemia prerrenal y falla renal aguda Indices Azotemia prerrenal Falla renal aguda Densidad urinaria Hiperestenúrica Isostenúrica o

concentracion minima Sodio en orina (mEq/L) <10-20 >25 Depuracion fraccional del sodio (orinaNa x SueroCr)/(OrinaCr x SueroNa)

<1% >2%

Cociente creatinina urinaria:creatinina serica

>20:1 <10:1

Indice de fracaso renal <1 >2 Respuesta a la fluidoterapia

Intensa Minima

Igualmente, la azotemia puede originarse por un daño agudo o más lento de los riñones. En ambos casos, el paciente presentara signos clínicos de: anorexia, deshidratación vómitos, diarrea, letargo, presencia de úlceras orales y aliento urémico, dolor a la palpación abdominal, baja condición corporal, asas intestinales distendidas. En los casos de daño renal agudo los pacientes pueden presentar oliguria o anuria mientras que en los casos crónicos pueden estar poliúricos. La azotemia, también es un componente más general de un síndrome llamado uremia, el cual incluye fallos en el volumen de fluido (edema o deshidratación), acidosis metabólica, hipercalemia e hipocalcemia, fallos en el sistema nervioso, lesiones hemorrágicas en el tracto intestinal, fallo cardiaco, hiperparatiroidismo y picores (la dos últimas situaciones suelen aparecer más en el fallo renal crónico que en el agudo).

CORPOLOGICO MANEJO DE MUESTRA RETRASADA Si las circunstancias en que ha de realizarse la toma de muestras, impone un retraso en su examen, superior a las 24 horas, deberán añadirse elementos que actúen como conservadores o fijadores. Entre los más utilizados para este fin se encuentran el formol al 5 % MONTAJE PREPARACION A.1.- Colocar en una copa cónica una porción (del tamaño de un garbanzo) de las heces a examinar. 2.- Añadir poco a poco, sobre todo al principio, solución salina fisiológica e ir deshaciendo las heces en el diluyente con ayuda de una varilla de vidrio, hasta conseguir una suspensión fina y homogénea. 3.- Colocar en los extremos de un portaobjetos limpio, sendas gotas de suspensión fecal.





4.- Sobre una de las gotas de suspensión, colocar una gota de lugol concentrado y mezclar con el extremo de un cubreobjetos. 5.- Cubrir ambas gotas y observar al microscopio. Como se ha indicado antes, el grado de dilución a que hay que someter la muestra dependerá de la consistencia de ésta, y no pueden darse pautas fijas. No obstante, como indicación, diremos que se ha conseguido una dilución adecuada cuando, tras confeccionar las preparaciones, pueden leerse a su través las letras deun libro. Es muy importante que, durante la observación microscópica de laspreparaciones, se recorra en toda su extensión la superficie de las mismas, primerocon pocos aumentos y con mayores aumentos después, incluso aunque en losprimeros campos observados se detecten formas parásitas (pueden darse casos deNmultiparasitismo). La preparación con lugol tiene una sola finalidad: confirmar la presencia de quistes. B.Montaje de la preparación: En un portaobjetos marcado con el número de registro del laboratorio, se coloca separadamente una gota de solución salina y otra de lugol. Con un aplicador o palillo se toma material de diferentes partes de la muestra y se hace una emulsión con la solución salina, se cubre con una laminilla de 22 x 22 mm; luego se repite el mismo procedimiento con la gota de lugol y se observa al microscopio con objetivo de 1OX y 40X. Si la muestra presenta partes blandas y duras, debe tomarse de la blanda o si posee moco y/o sangre se debe tomar de estos sitios para hacer el montaje de la lámina, en aves se debe tomar de la parte mas dura, y evitar tomar muchos uratos. Se deben evitar las preparaciones muy gruesas o muy delgadas; el grosor ideal se obtiene con 2 mg de heces que son preparaciones oscuras que permiten leer a través de ellas. En la solución salina se observan todos los estadios de los parásitos, y en el lugol se puede observar detalles de la morfología como los núcleos de los protozoarios. En el examen microscópico también se pueden observar elementos de origen vegetal o animal como leucocitos, eritrocitos, restos alimenticios y levaduras CENTRIFUGACION-Método de Baroody y Most Técnica:

Diluir de 10 a 15 g de heces en un matraz conteniendo unos 100 ml del reactivo.

Pasar la suspensión fecal por una malla colocada en un embudo y recoger el filtrado en un tubo de centrífuga de 50 ml de capacidad.

Centrifugar a 1.500 r.p.m. durante 30 segundos. Decantar y resuspender en agua a 40ºC. Centrifugar. Repetir las operaciones anteriores hasta conseguir sobrenadante limpio (es

suficiente unas tres veces). Tomar una muestra del sedimento y observarla al microscopio.

SEDIMENTACION-Tecnica faust-ingals

Reactivo: Solución agua-glicerina al 0,5% Técnica:

Triturar 5 g de heces e interponerlos en el agua glicerinada. Pasar la dilución fecal por una malla (1 mm de luz) colocada sobre un

embudo, para eliminar los restos más groseros y recoger el filtrado en un vaso de precipitado.

Llenar el vaso en el que se ha recogido la dilución con agua glicerinada.





Dejar reposar una hora y decantar el sobrenadante. Resuspender en reactivo nuevo y dejar sedimentar 45 minutos. Decantar. Resuspender en reactivo nuevo y dejar reposar 30 minutos. Decantar. Tomar muestras de la superficie, fondo y zona media del sedimento y

examinarlas al microscopio.

FLOTACION-Método de Willis Reactivo: Solución sobresaturada de cloruro sódico. Técnica:

Diluir 1 ó 2 g de heces en el reactivo diluyente. Verter la suspensión fecal homogénea en un recipiente de unos 2,5 cm de

diámetro hasta que esté totalmente lleno y forme un menisco en la superficie. Colocar un portaobjetos desengrasado en contacto con el menisco líquido.

Pasados 30-45 minutos, retirar rápidamente el portaobjetos, cubrirlo y observar los posibles elementos parasitarios retenidos en la porción líquida adherida al portaobjetos. DESCRIPCION DE ESTRUCTURAS LEUCOCITOS Los macrófagos suelen confundirse con trofozoítos de amibas por tener seudópodos y eritrocitos fagocitados, pero se diferencian de éstas por su aspecto granuloso, carecer de movilidad y no poseer las características de la morfología nuclear de las amibas. Para una mejor identificación se puede realizar un frotis delgado de materia fecal o mucosa rectal y colorearlo con azul de metileno, Wright o Giemsa. Cuando se requiere un estudio cuantitativo se deben contar 200 células con objetivo de 40X y se informa por cruces: + 1 - 10 leucocitos/campo ++ 11-30 leucocitos/campo +++ Más de 30 leucocitos/campo





RESTOS ALIMENTICIOS: Origen vegetal: Los almidones son frecuentes, se observan como gránulos de forma y tamaño irregulares. En las preparaciones con lugol toman color rojo o azul violeta según el grado de digestión que hayan sufrido. Las células y fibras vegetales se ven formando retículos en forma de panal o en forma de espiral que pueden confundirse con huevos o larvas de helmintos. Pueden aparecer en síndromes de malabsorción o en diarreas.

fibra vegetal Origen animal: Las grasas se presentan en forma de gotas de diferentes tamaños, transparentes o amanitas y las fibras musculares aparecen como rectángulos amarillentos con estrías transversales

globulos rojos





Residuos alimenticios: Fibras musculares: Se presentan en forma de cilindros con estrías longitudinales y transversales. Grasas neutras: Aparecen como esferas refringentes de diferentes tamaños. Acidos grasos: Se observan como agujas incoloras. Almidones: Tienen formas irregulares y son refractiles al agregar el lugol. Fibras vegetales: Se caracterizan por ser de doble pared, contienen clorofila y poseen un canal central muy marcado.

Productos de irritación de la mucosa: Moco: Se observa en cualquier patología. Glóbulos Rojos: Su hallazgo indica lesión en la parte baja del aparato digestivo. Células epiteliales: Indican una excesiva irritabilidad. Bacterias: Carecen de significación clínica. Leucocitos: Si hay gran cantidad indica irritación bacteriana. Cristales de Charcot-leyden: Se ven en forma de rombos alargados

epitelios





EXAMEN MICROSCÓPICO DE LA MATERIA FECAL

Montaje de la muestra:

Directo.

Flotación.

MÉTODO DIRECTO

Materiales:

Muestra de materia fecal.

Solución salina.

Lámina portaobjetos.

Lámina cubreobjetos.

Microscopio.

Procedimiento:

Se coloca en una lámina portaobjetos una muestra de materia fecal.

Se le adiciona tres gotas de solución salina estéril.

Se mezcla con un palillo hasta que quede de consistencia uniforme.

Se le coloca la lámina cubre objetos.

Se observa en 10X para buscar huevos de parásitos y a algunos artefactos y en 40X para

buscar protozoos y algunos artefactos.

MÉTODO DE FLOTACIÓN

Materiales:

Un gramo de materia fecal.

Un colador.

Un vaso graduado.

Solución salina isotónica.

Solución de caramelo.

Dos tubos de ensayo.

Macrocentrífuga.





Dos láminas cubre objetos.

Dos láminas portaobjetos.

Microscopio.

Procedimiento:

Se diluye un gramo (aproximadamente) de material fecal en solución salina estéril y se

filtra a través de un colador.

Se deposita el contenido en un tubo de ensayo (10ml).

Se centrifuga a 2000rpm durante 10 minutos.

Se deshecha el sobrenadante.

Se desprende el sedimento.

Se le adiciona solución de caramelo o sacarosa al sedimento llenando completamente el

tubo.

Se coloca un cubreobjetos en la boca del tubo por 30 minutos.

Se quita la laminilla y se coloca sobre una placa portaobjetos.

Se observa en el microscopio en 10X y 40X haciendo un barrido por toda la placa.

Cálculo: #de huevos X 100.

ELEMENTOS FORMES DE LA MATERIA FECAL

Flora bacteriana (cocos y bacilos).

Levaduras (si están muy aumentadas indica fermentación intestinal).

Restos vegetales (abundante en la mayoría de las heces).

Pigmentos biliares (si están muy aumentados puede ser signo de una afección hepática).

Células epiteliales (su aumento es directamente proporcional al grado de irritación

entérico).

Almidón (si está aumentado puede deberse a síndromes de mala absorción intestinal).

Moco (su aumento es directamente proporcional al grado de inflamación entérico).

Hematíes (su cantidad representa el volumen de sangre presente).

Leucocitos (su cantidad representa el volumen de sangre presente).

EXAMEN FÍSICO DE LA MATERIA FECAL

COLOR





Depende del régimen alimenticio.

Pardo:

Color normal.

Debido a la presencia de la estercobilina.

La estercobilina es producto del desdoblamiento del urobilinógeno.

Urobilinógeno: Es un producto incoloro. Se produce por acción de las bacterias de la flora intestinal

sobre la bilirrubina que proviene de las excreción biliar en el tracto digestivo. Es parcialmente

absorbido por el sistema vascular portal, pasando al hígado, donde es procesado por los

hepatocitos. Finalmente se excreta de nuevo en la bilis.

Blanco:

Presencia de grasa (esteatorrea).

Amarillo:

Lactantes de cualquier especie.

Verde:

Consumo de plantas.

Hipocólicas:

Insuficiencia de bilis (color arcilloso).

Afecciones hepáticas o pancreáticas.

Hipercólicas:

Exceso de bilis (color amarillo verdoso).

Afecciones hepáticas o pancreáticas.

Negro:

Consumo de carne.





Consumo de sulfato de cobre y sulfato ferroso.

Presencia de sangre → melena.

OLOR

Depende del régimen alimenticio y especie.

Sui Generis → desaminación y descarboxilación del triptófano por parte de las bacterias.

Ácido: consumo de granos harinas y concentrados.

Fétido: materia orgánica (sangre).

CONSISTENCIA

Depende de la dieta y del consumo de agua.

Normal.

Dura:

Bajo consumo de agua.

Alimentación inadecuada.

Obstrucción (resorción de líquido).

Neoplasias intestinales.

Suministro de opioides.

Líquida:

Hipermotilidad.

Condiciones osmóticas.

Hipersecreción.

Mala absorción.

ASPECTO

Normal.

Diarréico.

Mucoide (parásitos gastrointestinales).





Caprinoide: (alteraciones en colon).

Cremoso.

Granuloso.

Parasitismo Sin lugar a dudas, uno de los mayores obstáculos con que tropieza el desarrollo de laganadería es el parasitismo, tanto externo como interno. Los parásitos son animales que viven a expensas de otro animal llamado huésped. Elparásito siempre perjudica la salud del huésped y la intensidad y extensión de ese perjuiciovaría de acuerdo a la capacidad parasitaria, como también al número de parásitos presente(grado de parasitismo). Los animales jóvenes son mucho más susceptibles a la infestación que los animales adultos,sin embargo, el parasitismo afecta a los animales de todas las edades.

PARASITOLOGÍA VETERINARIA

En la naturaleza se presentan asociaciones de forma continua entre diferentes organismos, cuyos

procesos ocurren bajo condiciones ecológicas específicas. En este marco, se han desarrollado

dos grandes grupos de patrones de asociación. Las asociaciones homogenéticas, donde los

individuos son de un mismo genotipo y forman comunidades de una misma especie como sucede

en los hatos bovinos, las parvadas de aves, los panales de abejas y las colonias de hormigas

(Smyth J.D., 1994).

De otra parte, existen asociaciones mucho más complejas constituidas por individuos de diferentes

genotipos y denominadas asociaciones heterogenéticas, que han sido caracterizadas empleando

términos muy amplios pero que involucran conceptos ecológicos, fisiológicos y bioquímicos para

facilitar su comprensión. Dentro de las principales asociaciones heterogenéticas tenemos el

comensalismo, el mutualismo, el amensalismo, la exclusión competitiva y el parasitismo (Bryant &

Behm, 1989). Para comprender mejor estas definiciones es necesario emplear una matriz de dos

niveles donde se establezca el daño o el beneficio que recibe cada especie dentro de la asociación

como se observa en la Tabla 1.

Dentro de los diferentes tipos de asociaciones biológicas, tal vez el parasitismo es la más compleja

de describir puesto que es necesario determinar, dentro de un contexto ecológico, la naturaleza de





la asociación, el carácter fisiológico de la misma y la interdependencia bioquímica por adquisición o

pérdida de información genética (Smyth, 1994, Sánchez, 2000). Una especie parásita, es por

definición, un organismo que genera un efecto nocivo ya que no contribuye a la supervivencia de la

especie hospedadora (animales) y por el contrario se alimenta y crece a expensas de los recursos

necesarios para el crecimiento, mantenimiento y reproducción de esta última (Thomas et al, 2000).

Tabla 1. Matriz de posibles asociaciones heterogenéticas. 0 implica que la especie involucrada no sufre ningún daño ni obtiene beneficio, + implica que la especie involucrada recibe algún beneficio de la asociación, - implica que la especie involucrada sufre algún daño producto de la asociación. (Tomado y adaptado de Bryant & Behm, 1989).

Especie 2

Implicaciones

0

+

-

Especie 1

0

00

Interacción neutral

0+

Comensalismo

0-

Amensalismo

+

+0

Comensalismo

++

Mutualismo

+-

PARASITISMO

-

-0

Amensalismo

-+

PARASITISMO

--

Exclusión





competitiva

El parasitismo en veterinaria es una asociación biológica de gran importancia económica y

sanitaria ya que los parásitos son capaces de sobrevivir y reproducirse en diferentes

hospedadores, generando enfermedades de tipo crónico expresadas en disminución de la

producción, reducción de la vida útil de los animales, infertilidad, abortos e incremento en los

costos por mortalidad, indemnizaciones, decomisos o tratamientos (Cordero del Campillo, 1999).

Además, algunos pueden ser compartidos entre los animales y el hombre, causando

enfermedades denominadas zoonosis, de gran importancia desde el punto de vista de la salud

pública (Wattiaux, 1997).

CLASIFICACIÓN DE LOS PRINCIPALES PARÁSITOS DE LOS ANIMALES DOMÉSTICOS

Los parásitos, son un grupo de organismos invertebrados que se han encontrado sobre y dentro de

todas las especies animales de interés veterinario (Foreyt, 2001). En general, los parásitos

cuentan con diferentes mecanismos de adaptación, toma de nutrientes, digestión y metabolismo

energético que han permitido establecer algunos criterios para su clasificación como:

La naturaleza del parásito: Zooparásitos que parasitan animales y Fitoparásitos aquellos

que parasitan plantas.

El tamaño: Protozoarios Parásitos aquellos constituidos por una sola célula, Parásitos

Metazoarios organismos pluricelulares mucho más grandes y complejos que los anteriores

como los artrópodos y los helmintos

Tipo de nutrición: Holozoicos aquellos que cuentan con un tracto digestivo neto y se

alimentan a través de una apertura oral y Saprozoicos llevan a cabo su nutrición a través

de una membrana por difusión directa o simple, difusión auxiliar y transporte activo.





La localización en sus hospederos: Ectoparásitos aquellos que afectan piel y sus

estructuras anexas y Endoparásitos aquellos que afectan órganos internos y se dividen en

cavitarios o celozoicos (afectan cavidades como peritoneo o pleura), histozoicos (afectan

los intersticios celulares), citozoicos (afectan los espacios intracelulares como el citoplasma

– plasmozoicos – y el núcleo – cariozoicos –) y los parásitos intestinales.

Las especies de hospedadores que pueden ser afectadas: Eurioicos o Polixenos que

afectan muchas especies animales, Estenoicos u Oligoxenos que afectan pocas especies

animales y Monoicos los que habitan una sola especie.

El ciclo de vida: Monoxenos o de ciclo directo y Heteroxenos o de ciclo indirecto. Los

parásitos Autoheteroxenos son aquéllos cuyos hospedadores albergan inicialmente las

formas adultas y posteriormente las formas larvarias.

El tipo de dependencia con el hospedador: Obligados cuando tienen dependencia

metabólica estricta y selectiva o Facultativos los que viven libres y ocasionalmente pueden

acomodarse al parasitismo. Los parasitismos Accidentales u ocasionales son producto de

procesos meramente incidentales.

La duración de la estancia en el hospedador: Temporales breve permanencia sobre el

hospedador y Permanentes todos los estadios de vida parásita se llevan dentro del

hospedador.

La capacidad para generar enfermedad: Patógenos aquellos capaces de inducir por sí

mismos enfermedad, Facultativamente patógenos los que requieren un factor

predisponerte y Apatógenos los que estrictamente hablando son comensales.

Sin embargo, el sistema mundialmente aceptado para el reconocimiento y clasificación de los

parásitos es la denominada nomenclatura binomial la cual permite asignar el nombre científico a un

organismo mediante el uso de los taxones género y especie, los cuales constituyen la unidad

básica de la sistemática entendida como el conjunto de reglas y principios que permiten determinar

las características de cada especie y sus diferencias y afinidades con otras a fin de situarlas en un

sistema general natural.

Los zooparásitos de interés veterinario se encuentran clasificados dentro de las Ramas: Protozoa,

Nemathelminthes, Plathelminthes, Acanthocephala y Arthropoda





Figura 2. Clasificación taxonómica del Phylum Protozoa.

RAMA

PROTOZOA

Mastigophora

Apicomplexa

Ciliophora

Sarcodina Amoebida Amoebidae

Protomonadida Trypanosomatidae

PolimastigidaTrichonomadidae

Hexamitidae

Coccidia

Haemosporidia

Piroplasmida

Eimeriidae

Cryptosporidiidae

Plasmodiidae

Babesiidae

Theileriidae

Trichostomatida Balantidiidae

CLASE ORDEN FAMILIARAMA

PROTOZOA

Mastigophora

Apicomplexa

Ciliophora




Hexamitidae

Coccidia

Haemosporidia

Piroplasmida

Eimeriidae

Cryptosporidiidae

Plasmodiidae

Babesiidae

Theileriidae


CLASE ORDEN FAMILIA

PROTOZOA

Mastigophora

Apicomplexa

Ciliophora




Hexamitidae

Coccidia

Haemosporidia

Piroplasmida

Eimeriidae

Cryptosporidiidae

Plasmodiidae

Babesiidae

Theileriidae


CLASE ORDEN FAMILIA





Figura 3. Clasificación taxonómica del Phylum Plathelminthes.

RAMA

PLATHELMINTHES

Cestodea

Trematoda

CLASE SUBCLASE FAMILIAORDEN

Digenea

Cestoda

EchinostomidaParamphistomatidae

Fasciolidae

Plagiorchiida

Dicrocoeliidaeae

StrigeatoideaSchistosomatidae

Troglotrematidae

Cyclocoelidae

Eucotylidae

Pseudophyllidea

Cyclophyllidea

Diphyllobothriidae

Anoplocephalidae

Davaineiae

Mesocestoidae

Taeniidae

Dilepididae

Hymenolepididae

Caryphylliidae

RAMA

PLATHELMINTHES

Cestodea

Trematoda

CLASE SUBCLASE FAMILIAORDEN

Digenea

Cestoda

EchinostomidaParamphistomatidae

Fasciolidae

Plagiorchiida

Dicrocoeliidaeae

StrigeatoideaSchistosomatidae

Troglotrematidae

Cyclocoelidae

Eucotylidae

Pseudophyllidea

Cyclophyllidea

Diphyllobothriidae

Anoplocephalidae

Davaineiae

Mesocestoidae

Taeniidae

Dilepididae

Hymenolepididae

Caryphylliidae





Figura 4. Clasificación taxonómica del Phylum Nemathelminthes.

Nematoda

CLASE FAMILIAORDEN

Strongylida

Rhabditida

Ascaridida

Spirurida

Enoplida

SUPERFAMILIA

Trichostrongyloidea

Ascaridoidea

Oxyuroidea

Spiruroidea

Metastrongyloidea

Strongyloidea

Rhabditoidea

Trichuroidea

Dioctophymatida Dioctophymoidea

Trichostrongylidae

Dictyocaulidae

Strongylidae

Trichonematidae

Ancylostomatidae

Stephanuridae

Syngamus

Metastrongylidae

Protostrongylidae

Filaroididae

Strongyloididae

Ascaridae

Heterakidae

Oxyuridae

Spiruridae

Acuariidae

Thelaziidae

Trichinellidae

Trichuridae

Dioctophymatidae

Nematoda

CLASE FAMILIAORDEN

Strongylida

Rhabditida

Ascaridida

Spirurida

Enoplida

SUPERFAMILIA

Trichostrongyloidea

Ascaridoidea

Oxyuroidea

Spiruroidea

Metastrongyloidea

Strongyloidea

Rhabditoidea

Trichuroidea

Dioctophymatida Dioctophymoidea

Trichostrongylidae

Dictyocaulidae

Strongylidae

Trichonematidae

Ancylostomatidae

Stephanuridae

Syngamus

Metastrongylidae

Protostrongylidae

Filaroididae

Strongyloididae

Ascaridae

Heterakidae

Oxyuridae

Spiruridae

Acuariidae

Thelaziidae

Trichinellidae

Trichuridae

Dioctophymatidae





Figura 5. Clasificación taxonómica del Phylum Artrhopoda con énfasis en la Clase Insecta.

Diptera

Phthiraptera

CLASE FAMILIASUBORDEN

Nematocera

Brachycera

Cyclorrhapha

Muscidae

Calliphoridae

Oestridae

Linognathidae

Haemotopinidae

Simuliidae

Cerafopogonidae

Psychodidae

Culicidae

Anoplura

Ischnocera

Siphonaptera

Philopteridae

Pulicidae

Tabanidae

INSECTA

ORDEN

Pediculidae

Trichodectidae

Boopidae

MenoponidaeAmblycera

Ceratophyllidae

Tungidae

Faniidae

Hippoboscidae

Cuterebridae

Sarcophagidae

RAMA

ARTRHOPODA

ARACHNIDA

Diptera

Phthiraptera

CLASE FAMILIASUBORDEN

Nematocera

Brachycera

Cyclorrhapha

Muscidae

Calliphoridae

Oestridae

Linognathidae

Haemotopinidae

Simuliidae

Cerafopogonidae

Psychodidae

Culicidae

Anoplura

Ischnocera

Siphonaptera

Philopteridae

Pulicidae

Tabanidae

INSECTA

ORDEN

Pediculidae

Trichodectidae

Boopidae

MenoponidaeAmblycera

Ceratophyllidae

Tungidae

Faniidae

Hippoboscidae

Cuterebridae

Sarcophagidae

RAMA

ARTRHOPODA

ARACHNIDA





RAMA CLASE FAMILIASUBORDENORDEN

ARTRHOPODA

Demodecidae

Acarina

ARACHNIDA

MetastigmataIxodidae

Argasidae

TrombiculidaeProstigmata

Astigmata

Psoroptidae

Cnemidocoptidae

Sarcoptidae

Epidermoptidae

Dermanyssidae

Macronyssidae

INSECTA

Mesostigmata

Kytoditidae

Pentastomida LinguatulidaePorocephalida

RAMA CLASE FAMILIASUBORDENORDEN

ARTRHOPODA

Demodecidae

Acarina

ARACHNIDA

MetastigmataIxodidae

Argasidae

TrombiculidaeProstigmata

Astigmata

Psoroptidae

Cnemidocoptidae

Sarcoptidae

Epidermoptidae

Dermanyssidae

Macronyssidae

INSECTA

MesostigmataMesostigmata

Kytoditidae

Pentastomida LinguatulidaePorocephalida





Figura 6. Clasificación taxonómica del Phylum Artrhopoda con énfasis en la Clase Arácnida y

Pentastomida.

Tabla 2. Clasificación del número de especies parásitas ubicadas por Phylum.

RAMA

Nº especies

parásitas

Ectoparásitos

Endoparásitos

Grupo animal

afectado

Protozoa

1000

+

+

Peces

Aves

Mamíferos

Plathelminthes

- Tremátodos

Monogenea

Digenea

- Céstodos

150.000

20.000

130.000

500

+

+

+

Peces

Mamíferos

Peces

Aves

Mamíferos

Nemathelminthes

10.000

+

Peces

Aves





Mamíferos

Acanthocephala

1200

+

Peces

Mamíferos

Arthropoda

- Insectos

- Arácnidos

- Pentastómidos

6.000

100

+

+

+

+

+

Peces

Aves

Mamíferos

Peces

Aves

Mamíferos

Aves

Mamíferos

PRINCIPALES GÉNEROS Y ESPECIES DE PARÁSITOS

QUE AFECTAN A LOS RUMIANTES





PARÁSITOS EXTERNOS.

Ácaros:

Demodex bovis

Chorioptes bovis

Sarcoptes scabiei

Psoroptes ovis

caprae

Garrapatas duras:

Boophilus micropilus

annulatus

Amblyomma cajenennse

maculatum

variegatum

americanum

Ixodes ricinus

Garrapatas blandas:

Otobius megnini

Piojos:

Damalinia bovis

ovis

caprae

Haematopinus eurysternus

bufali





Linognathus vituli

pedalis

stenopsis

Moscas:

Causantes de miasis

Dermatobia cyaniventrix

Hypoderma bovis

lineatum

Cochliomyia hominivorax

Lucilia cuprina

sericata

Calliphora erythrocephala

vomitaria

Phormia regina

Oestrus ovis

Picadoras

Stomoxys calcitrans

Haematobia irritans

Mellaphagus ovinus

Tabanus bovinus

Chrysops laetus

No picadoras

Musca domestica





Mosquitos:

Culex pipiens

quinquefasciatus

Anopheles albimanus

darlingi

pseudopunctipennis

nimbus

boliviensis

veivai

Aedes aegypti

albimanus

albopictus

taeniorhynchus

scapularis

Simulium ornatum

damnosum

PARÁSITOS INTERNOS

Tremátodos:

Fasciola hepatica

Dicrocoelium dendriticum

Paramphistomun cervi

Céstodos:

Formas adultas - Teniosis.

Moniezia benedeni





expansa

Formas larvarias - Cisticercosis.

Cysticercus bovis

tenuicollis

ovis

Coenurus cerebralis

Quiste hidático

Nemátodos:

Gastritis verminosa.

Haemonchus contortus

placei

Ostertagia ostertagi

Teladorsagia circumcincta

trifurcata

Trichostrongylus axei

Mecistocirrus digitatus

Cooperia oncophora

punctata

pectinatia

curticei

Enteritis verminosa.

Neoascaris vitulorum

Strongyloides papillosus

Nematodirus filicollis





Bunostomum phlebotomum

trigonocephalum

Capillaria longipes

Oesophagostomum radiatum

venulosum

columbianum

Chabertia ovina

Trichuris ovis

Neumonía parasitaria.

Dictyocaulus viviparus

Muellerius capillaris

Protostrongylus rufescens

Mammomonogamus laringeus

Filarias.

Stephanofilaria stilesi

Onchocerca gutturosa/linealis

Setaria labiatopapillosa

Rickettsias:

Anaplasma marginale

centrale

caudatum

ovis

mesaeterum

Cowdria ruminantium





Ehrlichia bovis

ovina

ondiri

phagocytophila

Eperythrozoon ovis

wenyoni

Protozoos:

Hemoparásitos.

Babesia bovis

bigemina

divergens

major

ovata

occultans

jakimovi

motasi

ovis

Theileria parva

Trypanosoma vivax

evansi

theileri

Protozoos entéricos.

Giardia bovis

Cryptosporidium parvum

andersoni





Eimeria bovis

zuernii

ellipsoidalis

aubernensis

alabamensis

ovina

intrincata

parva

faurei

caprina

arlongi

ninakohlyakimovae

Protozoos del tracto reproductivo.

Tritrichomona foetus

Protozoos tisulares.

Toxoplasma gondii

Neospora caninum

Sarcocystis cruzi (bovicanis)

hirsuta (bovifelis)

hominis (bovihominis)


QUE AFECTAN LOS EQUIDOS (INCLUYENDO ASNOS Y MULAS)






Ácaros:

Psoroptes equi

Trombicula irritans

Garrapatas duras:

Dermacentor nitens

Garrapatas blandas:

Otobius megnini

Piojos:

Trichodectes equi

Haematopinus asini

Moscas:

Causantes de miasis gástrica.

Gastrophillus instestinalis

nasalis

haemorrhoidalis

Mosquitos:

Culicoides furens

insignis

nubeculosus

kingi





PARÁSITOS INTERNOS.

Céstodos:

Formas adultas - Teniosis

Anoplocephala magna

perfoliata

Paranoplocephala mamillana

Nemátodos:

Gastritis verminosa.

Habronema muscae

microstoma

megastoma

Trichostrongylus axei

Enteritis parasitaria.

Parascaris equorum

Strongyloides westeri

Strongylus vulgaris

equinus

edentatus





Triodontophorus serratus

tenuicollis

Coronocyclus coronatum

catinatum

Cyathostomum tetracanthum

pateratum

Coronocyclus labiatum

labratus

Cylicostephanus goldi

asymetricus

bidentatus

calicatus

Cylicocyclus nassatus

leptostomus

elongatus

Oxyuris equi

Neumonía parasitaria

Dictyocaulus arnfieldi

Filarias.

Onchorcerca cervicalis

reticulata

Setaria equina

Rickettsias:

Ehrlichia equi





risticii

Protozoos:

Hemoparásitos.

Babesia caballi

Theileria equi

Trypanosoma evansi

equiperdum


Eimeria leuckarti

Tritrichomona equi

Protozoos tisulares.

Sarcocystis neurona

Klosiella equi


QUE AFECTAN A LOS PORCINOS


Ácaros:

Sarcoptes scabie

Demodex phylloides





Garrapatas blandas:

Ornithodorus moubata

Pulgas:

Tunga penetrans

Piojos:

Haematopinus suis

PARÁSITOS INTERNOS:

Tremátodos:

Fasciola hepatica

Amphistoma giganteus

.

Céstodos:

Formas larvarias - Cisticercosis

Cysticercus cellulosae

tenuicollis





Nemátodos:

Gastritis parasitaria

Hyostrongylus rubidus

Physosephalus sexalatus

Enteritis parasitaria.

Ascaris suum

Strongyloides ransomi

Ancylostoma duodenale

Bunostomum trigonocephalum

Globocephalus urosubulatus

Oesophagostomum dentatum

Trichuris suis

Nefritis parasitaria

Stephanurus dentatus

Miositis parasitaria.

Trichinella spirallis

.

Neumonia parasitaria.

Metastrongylus elongatus

salmi

pudendotectus





Acantocephalos:

Macracantorhynchus hyrudinaceus

Rickettsias:

Eperythrozoon suis

Protozoos:

Hemoparásitos

Babesia trautmanni

perroncitoi

Trypanosoma cruzi


Isospora suis

Eimeria suis

debliecki

perminuta

scabra

scrofae

spinosa

Balantidium coli

Tritrichomona suis






QUE AFECTAN A LAS AVES


Ácaros:

Cnemidocoptes mutans

laevis

Epidermotes bilobulatus

Dermanyssus gallinae

Liponyssus bacotti

Garrapatas blandas:

Argas persicus

reflexus

Ornithodorus talaje

Piojos:

Menopon gallinae

Menacanthus stramineus

Lipeurus heterographus

caponis

Goniodes gigas

meleagridis

Goniocotes gallinae

Columbicola columbae

Pulgas:





Ceratophyllus gallinae

Echidnophaga gallinacea

Moscas:

No picadoras

Fannia canicularis

Muscina stabulans

Picadoras

Pseudolynchia canariensis

PARÁSITOS INTERNOS.

Tremátodos:

Tamerlania bragai

Monostomum flavum

Céstodos:

Davainea proglotina

meleagridis

Raillietina tetragona

echinobothrida

cesticillus

Amoebotaenia sphenoides

Choanotaenia infundibulum

Hymenolopis carioca





cantaniana

lanceolata

Nemátodos:

Gastritis parasitaria.

Tetrameres americana

crami

Acuaria spiralis

nasuta

hamulosa

Enteritis parasitaria

Ascaridia galli

Capillaria anatis

obsignata

annulata

caudinflata

bursata

contorta

Heterakis gallinarum


Syngamus trachea

Conjuntivitis parasitaria.

Oxyspirura mansoni





Rickettsias:

Aegyptianella pullorum

Protozoos:

Hemoparásitos

Haemoproteus columbae

Leucocytozoon simondi

caulleryie

smithi

Plasmodium gallinaceum

Protozoos entéricos

Eimeria tenella

necatrix

maxima

acervulina

brunetti

mitis

mivati

hagani

meleagridis

adenoides

gallopavonis

Histomona meleagridis

Trichomona gallinae






QUE AFECTAN A LOS CÁNIDOS Y FÉLIDOS

PARÁSITOS EXTERNOS

Pentastómidos:

Linguatula serrata

Ácaros:

Demodex canis

Sarcoptes scabie

Notoedres cati

Otodectes cinotis

Garrapatas duras:

Ripicephalus sanguineus

Dermacentor variabilis

Piojos:

Trichodectes canis

Felicola subrostrata

Heterodoxus spiniger

Linognatus setosus





Pulgas:

Pulex irritans

Ctenocephalides canis

felis

Mosquitos:

Lutzomyia longipalpis

PARÁSITOS INTERNOS

Tremátodos:

Paragonimus westermani

kellicoti

caliensis

Céstodos:

Formas adultas - Teniosis

Dipylidium caninum

Taenia pisciformis

hydatigena

ovis

serialis

multiceps

taeniformis

Echinococcus oligarthrus





granulosus

multilocularis

Nemátodos:

Esofagitis y enteritis parasitaria

Spirocerca lupi

Physaloptera canis

Enteritis parasitaria

Toxocara canis

mistax

Toxascaris leonina

Strongyloides stercolaris

Ancylostoma caninum

tubaeforme

Uncinaria stenocephala

Trichuris vulpis

Endocarditis parasitaria

Dirofilaria immitis

Nefritis parasitaria

Dioctophyma renale

Capillaria plica






Filarioides osleri

hirthi

Aelurostrongylus abstrusus

Capillaria aerophila

Rickettsias:

Ehrlichia canis

platys

Haemobartonella canis

felis

Protozoos:

Hemoparásitos.

Babesia canis canis

canis rossi

canis vogeli

gibsoni

cati

felis

herpailuri

pantherae

Trypanosoma cruzi

Leihsmania infatum






Isospora canis

felis

rivolta

Toxoplasma gondii

Neospora caninum

Giardia duodenale

Entamoeba histolytica/dispar

Los tres tipos de parásitos en cuanto a su relación con el huésped son: 1. Endoparásitos: viven en el interior del huésped. 2. Ectoparásitos: viven sobre el huésped. 3.Parásito accidental: Es aquel que se hospeda en un medio que no es el normal. Suele tener vida independiente, pero puede morar dentro del huésped durante cierto período de tiempo. Las condiciones del trópico presentan una temperatura y humedad favorables para el desarrollo y propagación de los parásitos.

CLASIFICACION DE LOS PARASITOS 1. ECTOPARASITOS = EXOPARASITOS = PARASITOS EXTERNOS: se ubican en el exterior del huésped, por lo general en piel. 1. Insectos: 3 pares de patas: Moscas, Tábanos, Zancudos, piojos, pulgas, cucarachas, chinches, pitos. 2. Arácnidos: 4 pares de patas: Garrapatas, Acaros de la sarna. 2. ENDOPARASITOS = PARASITOS INTERNOS: Se ubican en el interior del animal. 2.1. HELMINTOS: Gusanos planos (platelmintos) ó redondos (nematelmintos) que habitan en el interior de los animales en los sistemas digestivo, renal, genital, cardiovascular, pulmonar, muscular y nervioso. 2.1.1. Platelmintos: Gusanos planos cortos o largos en forma de cintas. a). Céstodos: Son parásitos largos en forma de cinta, lo constituyen las tenias. (solitaria en el humano) b). Tremátodos: Gusanos planos cortos como la Fasciola hepática. 2.1.2. Nematelmintos: Gusanos redondos que van desde 1 mm hasta 30 cms. a). Nemátodos: Comprende la mayoría de parásitos redondos que habitan principalmente en el sistema gastrointestinal. b). Acantochepala: Parásitos redondos de interior hueco. De importancia veterinaria: el Macracantorrynchus hirudinaceus del cerdo. 2.2. PROTOZOARIOS INTESTINALES: son seres microscópicos que se replican dentro de las células epiteliales o en la luz del intestino.





a). COCCIDIAS: corresponden a dos géneros muy similares: 1. Eimerias: Afectan a bovinos, ovinos, caprinos, conejos y aves 2. Isosporas: Afectan a perros, gatos y porcinos. b). CRYPTOSPORIDIUM: Protozoario que afecta tanto animales como al hombre. c). GYARDIAS: Afectan al perro a nivel intestinal, y en el hombre a nivel genital.

2.2.1. PROTOZOARIOS GENITALES: a). Trichomona: que afecta a toros y vacas, causando infecciones e infertilidad. b). Trypanosoma: Algunas especies son transmitidas por el coito y causan fallas reproductivas. 3. HEMOPARASITOS: Parásitos microscópicos que viven y se reproducen a nivel de vasos sanguíneos, por fuera o dentro de glóbulos rojos o blancos. 3.1. Protozoarios: a). Babesia: Parasita glóbulos rojos en diferentes especies y causa anemia, por ruptura de estas células. (piroplasmosis = ranilla roja = fiebre de garrapata) b). Trypanosoma: Subsiste en el plasma sanguíneo, causando enfermedad

c). Rickettsias: Son seres microscópicos parecidos a las bacterias, pero que necesitan multiplicarse dentro de una célula viva.

d). Anaplasma:Este microorganismo parasita glóbulos rojos, causando anemia por ruptura dentro del bazo. (Anaplasmosis = ranilla blanca). BOEC

ENDOPARASITOS

1. ENDOPARÁSITOS •Características generales •Los parásitos gastrointestinales por vivir profundamente en los tejidos de otro animal, están seguros, abrigados, bien protegidos contra las inclemencias del medio ambiente y además tienen ilimitado suministro de alimento que les da eLhuésped. Los parásitos gastrointestinales son organismos simples, comparados con el resto de los animales, su cuerpo está compuesto de músculos primitivos y otros órganos, los cuales se encuentran encerrados en una membrana protectora (cutícula). Notienen esqueleto, ni extremidades, sus órganos reproductivos son grandes, lo cual les confiere una gran capacidad de multiplicación. Los parásitos se multiplican dentro de los huéspedes, ya que su descendencia debe dejar el animal (huésped) en que fue producida y enfrentarse a las inclemencias del medio ambiente antes de alcanzar el estado en que pueda infestar a otro animal. En este sentido, los parásitos gastrointestinales se diferencian de las bacterias y los protozoarios, los cuales pueden multiplicarse libremente dentro del animal. Algunos ocupan un sitio especial en el animal; otros parasitan un huésped específico y se encuentran

exclusivamente en determinado tipo de animal o clase de ganado. • Endoparásitos o parásitos internos Los parásitos redondos dañan y reducen la eficiencia del intestino y los pulmones, ocasionando pérdida de peso. Los animales jóvenes son particularmente afectados, pierden apetito y el cuerpo no utiliza bien el alimento para el crecimiento; a medida que crece el número de parásitos, se observa diarrea y deshidratación, comenzando el animal a utilizar las reservas de grasa. La producción de carne y/o leche se reduce, disminuye la fertilidad, las crías nacen más pequeñas y débiles, y no reciben la suficiente leche de las madres. La exposición a una infestación puede desencadenar una enfermedad secundaria capaz de inutilizar el animal, en lugar de ser un producto de valor para el mercado de carne y/o leche. Un bajo nivel de infestación generalmente hace que los animales no muestren todos los síntomas, pero los parásitos pueden bien directamente o indirectamente debilitar el animal, retardando su crecimiento y disminuyendo la resistencia a otras enfermedades.





La importancia económica de la pérdida de peso y de las buenas condiciones del animal no se aprecia a menudo en la finca. Los animales de un año de edad, cuando están parasitados, aparecen delgados, barrigones, peludos, en malas condiciones y adelantan muy lentamente. No solo se desperdicia el capital que representan los animales jóvenes, sino que los potreros no se usan en todo su potencial y el costoso pasto se desperdicia en animales de muy lento crecimiento. Cuando los animales no muestran síntomas definidos de parasitismo, el ganadero cree que éstos no están afectados, sin embargo seguramente está sufriendo continuas pérdidas. DERMATOLOGIA

Raspados cutáneos y muestras de pelo 1. Los raspados cutáneos y las muestras de pelo son los procedimientos diagnósticos empleados más comúnmente en dermatología. El procedimiento es simple, pero puede brindar mucha información útil. 2. Propósitos de los raspados cutáneos y las muestras de pelo a. Establecer un diagnostico definitivo al encontrar un organismo. b. Descartar la probabilidad de posibles diagnósticos diferenciales. Recordar que un raspado cutáneo negativo puede significar simplemente que ese parásito en particular del cual se sospecha no fue observado en la muestra obtenida. Mientras que un raspado cutáneo positivo es siempre definitivo para una enfermedad sospechada, uno negativo es siempre inconcluso. 3. Enfermedades donde los raspados cutáneos y las muestras de pelo son beneficiosos a. Ectoparásitos – Ácaros, huevos de ácaros, otras larvas de artrópodos, y menos comunes, larvas de helmintos pueden ser hallados en la epidermis o la dermis superficial. b. Dermatofitos - Las enfermedades micóticas superficiales pueden ser diagnosticadas al encontrar artrosporas unidas al pelo. 4. Equipos Requeridos a. Espátulas u hojas de bisturí – Espátulas de hoja plana son preferidas ya que ocasionan menos trauma. Si se utilizan hojas de bisturí, la mayoría de los clínicos prefieren las hojas #10. Las hojas de bisturí pueden ser reutilizadas ya que no se necesita filo quirúrgico. b. Pinzas hemostáticas – hemostáticas curvas pequeñas son muy útiles para arrancar los pelos. c. Solución de raspaje – Un aceite mineral de grado medio es recomendado para intentar recuperar ectoparásitos ya que con otras soluciones se puede matar a los parásitos y prevenir de esta forma la determinación de la relación vivo/muerto (utilizado en demodicosis). En adición, otras soluciones pueden ser irritantes para la piel del paciente. Si se sospecha de dermatofitos se puede utilizar hidróxido de potasio al 10 % o clorfenolac. Estas soluciones contiene agentes clarificantes y mejoran la visualización de artrosporas no pigmentadas unidas a los pelos. Ambas soluciones clarificantes son altamente irritantes para la piel y pueden dañar los microscopios. d. Laminas porta y cubreobjetos – Los microscopios están diseñados para utilizar la refractibilidad de las laminas cubreobjetos (laminillas) para mejorar la visualización. En adición, las láminas cubreobjetos pueden prevenir que las soluciones clarificantes contacten con los objetivos y solubilicen la goma que mantiene seguro los lentes del objetivos. e. Microscopio – el microscopio debería tener lentes 4X, 10X, y 40X. El lente de aceite de inmersión no se requiere para los raspados cutáneos y las muestras de pelo. 5. Técnica del raspado de piel a. Las áreas deseadas deberían ser depiladas con una cuchilla eléctrica (cuchilla #40) antes de realizar el raspado. b. El borde de la espátula o de la hoja de afeitar es sumergida en aceite mineral o en la solución clarificante. Generalmente la espátula es sostenida entre el pulgar y el segundo dedo de modo que el índice queda libre para actuar como guarda para prevenir daños a la piel o estructuras adyacentes tales como los globos oculares. c. En enfermedades donde se sospecha la presencia de ectoparásitos foliculares (demodicosis, dermatitis rhabditica), la piel puede ser presionada en un intento de forzar los parásitos más superficiales en el folículo. Nota: el beneficio de este procedimiento no ha sido sostenido.





d. Con la hoja de la espátula raspar a lo largo de la piel manteniendo la hoja de la espátula perpendicular a la superficie de la piel. Raspar en dirección del crecimiento del pelo, facilitará la colección de la muestra. e. Profundidad del raspado – El raspado cutáneo puede ser muy superficial, primariamente colectando el estrato corneo, si se sospecha de dermatofitos o ectoparásitos viviendo en la superficie como Cheyletiella sp. Los ácaros que excavan en la epidermis (Sarcoptes y Psoroptes) requieren un raspado ligeramente más profundo. Ácaros foliculares (Demodex) o Pelodera sp. requieren un raspado que llegue a la unión dermis-epidermis. Los raspados cutáneos profundos son marcados por sangrado capilar. f. El material obtenido con el escalpelo debería ser extendido uniformemente con una gota de solución de raspado en una lamina portaobjeto para distribuirlo y luego cubrirlo con una laminilla. g. Interpretación microscópica – Los ectoparásitos deben ser buscados con los objetivos X4 y X10 bajo luz baja de manera que los parásitos parcialmente translúcidos no sean pasados por alto. La habilidad para identificar y diferenciar ectoparásitos es muy importante y relativamente fácil de aprender. Si se sospecha de dermatofitos, se debería utilizar los objetivos X4 y X10 para encontrar pelos anormales o engrosados con bordes irregulares. Aumento alto seco (X40) se requiere para confirmar la presencia de artrosporas de dermatofitos. La identificación microscópica de dermatofitos es muy difícil y requiere entrenamiento y experiencia importante. 6. Técnica de para arrancar los pelos a. La obtención de muestras de pelo solo se usa para demostrar la presencia de ácaros foliculares demodecticos. b. Los pelos de áreas que se sospechan albergan ácaros demodecticos son obtenidos con una hemostática. Usualmente, el pelo es arrancado en zonas parcialmente alopecicas. La obtención de muestras de pelo de esta manera es especialmente útil alrededor del ojo donde el raspado puede ser peligroso. Esta técnica también puede ser útil en animales donde la sujeción es difícil. c. Interpretación microscópica – la misma técnica descrita más arriba para el raspado cutáneo.

ENZIMOLOGÍA.

CONSIDERACIONES GENERALES.

La enzimología clínica es uno de los campos más importantes del diagnóstico en los análisis de Bioquímica Sanguínea, la determinación de la actividad enzimática proporciona al médico importante información diagnóstica y pronostica.

Cada célula del organismo tiene una función definida la cual desarrolla con la ayuda de las enzimas, las cuales son proteínas que catalizan las reacciones biológicas que tiene lugar en los seres vivos sin alterar el equilibrio de la reacción.

Existen en el plasma numerosas enzimas, que en general se dividen en dos: las enzimas endógenas las cuales son específicas del plasma y se producen para ser liberadas en la sangre en donde realizan sus funciones, como el caso de los factores de coagulación y enzimas del complemento, así como las enzimas encargadas del metabolismo de las proteínas circulantes en el plasma; el otro grupo son las enzimas exógenas las cuales llegan al plasma como resultado de la liberación celular por daño o alteración de la membrana celular.





ACTIVIDAD ENZIMÁTICA NORMAL EN SANGRE.

En general la actividad normal de la mayoría de las enzimas en sangre y otros líquidos corporales incluida la orina dependen principalmente de tres factores que influyen directamente en la vida media de cada enzima:

El recambio celular normal, en el cual las células sufren una muerte natural en cada uno de los tejidos, antes de esto libera al medio extracelular todo su contenido enzimático, sin embargo en la mayoría de los tejidos el recambio celular es un proceso lento y la liberación de estas enzimas no se da en forma masiva.

La depuración en sangre, este fenómeno se produce cuando las enzimas llegan al torrente circulatorio posterior a su liberación, una serie de enzimas proteásicas atacan las enzimas circulantes la inactivan y las metabolizan a diferentes velocidades dependiendo de la estructura de cada enzima y del proceso que sea necesario para su aclaramiento. Las enzimas inactivadas se eliminan por el sistema retículo endotelial de la medula ósea, el bazo y el hígado por un sistema de endocitosis regulada por receptores específicos en la superficie celular.

Otro factor que influye en la concentración de las enzimas en sangre es la excreción renal, solo muy pocas enzimas pueden pasar por el glomérulo y ser eliminadas en la orina como el caso de la amilasa pancreática, cuyo peso molecular es inferior a los 60.000 dalton.

LIBERACIÓN CELULAR DE LAS ENZIMAS:

Las enzimas se encuentran dentro de las células gracias a la acción de la membrana plasmática, la cual actúa como una barrera que impide la liberación del contenido celular, incluidas las enzimas. La membrana plasmática es una zona metabolicamente activa y su integridad depende directamente dela producción de energía celular; por lo tanto cualquier proceso que altere la producción energética promueve el deterioro de la membrana celular iniciando el proceso de liberación del contenido de la célula para finalmente producir la muerte. Sin embargo existen enzimas propias de la membrana celular como el caso de la Fosfatasa Alcalina y la Gamma Glutamil Trasferasa las cuales se liberan al espacio extracelular por alteraciones de la permeabilidad o daño de la membrana plasmática sin necesidad de que se lesione la célula completamente. En la Tabla 2 se observa la distribución celular de las principales enzimas utilizadas en diagnóstico.





Algunos de los factores que influyen en el daño celular y la liberación del contenido enzimático son la hipoxia, agentes químicos o farmacológicos, agentes físicos, agentes microbiológicos, mecanismos inmunitarios y los defectos genéticos.

LOCALIZACIÓN ENZIMA

Citoplasma ALT, AST (Enzima citosólica), SDH, CK, LDH

Mitocondria AST ( Isoenzima mitocondrial)

Retículo Endoplásmico GT

Membrana FAS y GT

Gránulos Cimógenos (intracitoplasmaticos) Amilasa, Lipasa Tripsina Inmunoreactiva

TOMADO DE MEYER Y HARVEY, 2000

Tabla 2 Distribución celular de las principales enzimas utilizadas en diagnóstico.

DETERMINACIÓN EN SANGRE.

La concentración de las enzimas en el plasma o en los líquidos corporales normalmente es muy baja, teniendo en cuenta los procesos normales de vertimiento enzimático, depuración y eliminación, por lo tanto no es práctico determinar las enzimas con base en su cantidad en plasma, su medición se realiza teniendo en cuenta su actividad in vitro bajo condiciones en las cuales la actividad es proporcional a la concentración plasmática. La actividad enzimática se expresa como la rata a la cual una enzima cataliza el consumo de un substrato o la formación de un producto, si estos últimos no son fácilmente medibles se realiza la medición de los cofactores, los mas usados y que se miden fácil y con seguridad son el NADH y NADPH. La determinación de la actividad de una enzima en el suero o en el plasma y la asignación de valor clínico dependerán de varios factores:

La enzima debe encontrarse en una concentración mínima que permita detectar y evaluar su actividad.

Su determinación debe ser económicamente viable teniendo en cuenta el numero de determinaciones que se realizan, la casuística y la frecuencia de presentación de entidades en las cuales la determinación de la actividad enzimática especifica sea útil.

La vida media de la enzima influirá en su valor diagnóstico, ya que si la enzima retorna rápidamente a sus niveles normales limita en tiempo para ser detectada en plasma.





La especificidad tisular de la enzima, las cuales por lo general se encuentran en concentraciones mas elevadas en algunos órganos o tejidos específicos, permitiendo evaluar la integridad o funcionalidad de los mismos con la determinación de sus enzimas, sin embargo, hay enzimas que se encuentran en casi todos los tejidos corporales como el caso de la Fosfatasa Alcalina Sérica (FAS) y Lactato Deshidrogenasa (LDH), por lo que su evaluación en sangre puede ser indicadora de alteraciones en varios sitios anatómicos, siendo necesario evaluar su actividad en conjunto con otras enzimas de especificidad tisular mas definida.

UNIDADES DE ACTIVIDAD ENZIMÁTICA:

Actualmente se utiliza la unidad propuesta en 1961 por la Comisión de Enzimas de la Unión Internacional de Bioquímica (UIB), la cual corresponde con la cantidad de enzima que cataliza la transformación de un micromol de sustrato por minuto, en condiciones definidas denominada Unidad Internacional (UI) En el Sistema Internacional de medidas se introdujo una nueva denominación que hace referencia a la concentración enzimática y tiene en cuenta que las magnitudes deben expresarse en moles para las cantidades de sustancia y en segundos para el tiempo, la unidad se denomina Katal (Kat) y refiere la actividad enzimática en términos moles por segundo mol/seg. y la concentración enzimática en Katales por Litro (Kat/L), así:

1 UI = 10 –6 mol/seg = 16,7 x 10 –9 mol/seg. ó 1,0 nKat/L = 0,06 UI/L

ISOENZIMAS.





Las isoenzimas son formas múltiples de una familia de enzimas que son capaces de catalizar la misma reacción bioquímica, cada isoenzima de una familia posee afinidad diferente por los substratos y cofactores, igualmente pueden ser distinguidas por la movilidad electrónica o la resistencia a la inactivacion de sus propiedades fisicoquímicas como la resistencia al calor.

Cada isoenzima puede tener afinidad por tejidos específicos e inclusive afinidad celular dependiendo de su actividad, la reacción que cataliza y el numero de subunidades que la componen, si una enzima tiene gran numero de subunidades, se presentaran mas isoenzimas de la misma; un ejemplo claro es la enzima Creatinina Kinasa (CK) la cual tiene tres subunidades y tres isoenzimas la CK – MM ( de afinidad por el músculo estriado) la CK - BB ( afinidad por el encéfalo) y la CK - MB ( con afinidad por el músculo cardiaco); igualmente existe 5 isoenzimas para la enzima Lactato deshidrogenasa distribuidas en diferentes tejidos. (Ver Tabla 5)

DISTRIBUCIÓN TISULAR DE LAS ENZIMAS.

En la Tabla 3 se ilustra la actividad de las principales enzimas utilizadas para diagnóstico en Medicina Veterinaria según su actividad y especificidad por los diferentes tejidos corporales. Esta información es útil para tomar decisiones en los planes de diagnóstico, para el clínico es importante seguir la metodología del problema orientado al diagnóstico en el momento de solicitar al propietario y al laboratorio la determinación de una o varias concentraciones de enzimas o metabolitos en sangre, ya que el costo de los mismos y el tiempo antes de obtener los resultados pueden ser decisivos en el pronóstico. Para la interpretación de los datos de laboratorio es muy importante conocer que metodología de análisis utilizada y los valores de sensibilidad y especificidad de cada prueba, igualmente estos resultados deben interpretarse a la luz del cuadro clínico del paciente y no como datos aislados.

ORGANO

ENZIMA Hígado Corazón Músculo Hueso Cerebro

FAS ++ + + +++ ++

CK --- ++ ++ -- ++

ALT +++ --- --- --- ---

AST ++ + ++ -

GGT +++ +

LDH ++ ++ ++ ++ ++





Tabla 3. Actividad enzimática de acuerdo a la especificidad tisular.

ALTERACIONES DEL SISTEMA HEPÁTICO Y BILIAR

El hígado es un órgano que realiza un gran numero de funciones metabólicas y sintéticas, igualmente excreta productos finales del metabolismo. Está compuesto por tres sistemas, el hepatocito (procesos bioquímicos fundamentales), el tracto biliar (excreción de bilirrubina) y el sistema Retículo endotelial (metabolismo de la Hemoglobina y las Bilirrubinas)

Microscópicamente el hígado esta compuesto de lóbulos hexagonales, en el centro la vena hepática central y en la periferia en cada esquina una tríada portal en donde se encuentran la Arteria hepática, la vena porta y los conductos biliares. El suministro de sangre oxigenada lo realiza la arteria hepática. Las venas mesentéricas y la esplénica drenan el intestino y forman la vena porta que proporciona el mayor flujo de sangre al sistema hepático hacia la vena central. Casi todos los nutrientes del Tracto Gastro Intestinal excepto las micelas grasas pasan a través de los espacios sinusoidales antes de llegar a la circulación sistémica.

En el hígado se sintetizan cerca del 90 % de las proteínas de la sangre y casi el 100 % de las proteínas específicas, por lo tanto la concentración de Proteínas Plasmáticas y la Albúmina son indicadores de la función hepática; todas las rutas metabólicas se llevan a cabo en el hígado incluyendo la del ácido cítrico, la glucólisis, la gluconeogénesis, ruta de la pentosa fosfato, síntesis y degradación de Ácidos Grasos, metabolismo de lipoproteínas y de aminoácidos y ácidos nucleicos. Hay dos vías metabólicas de importancia clínica, una la vía de ínter-conversión de aminoácidos a hidratos de carbono en la cual actúan directamente la ALT y AST, siendo la ALT la enzima de más alta concentración en el parénquima hepático en especies como el canino, felino y los primates. En el ciclo de la urea, en el que el amonio, un producto final del metabolismo de los aminoácidos y los ácidos nucleicos se convierte en urea y se excreta por vía renal, la mayoría de las enzimas que participan en este ciclo son únicas del hígado especialmente la Ornitil Carbamino Transferasa. (OCT) Igualmente el Hígado se encarga del metabolismo de la Bilirrubina, a partir de la degradación de la Hemoglobina, conjugándola con el Ácido Glucurónico en el retículo endoplásmico liso del hepatocito. El parénquima hepático tiene alta capacidad de regeneración, para que sea evidente una disfunción tisular, el 80% del tejido debe estar afectado o destruido. Las pruebas de función renal se usan fundamentalmente para:

A. Establecer si un paciente presenta enfermedad hepática. B. Como herramienta para un diagnóstico específico. C. Para conocer la gravedad de la disfunción hepática una vez establecido el

diagnóstico específico.





D. Para seguir el proceso de enfermedad y la respuesta a la interacción terapéutica.

Existen tres tipos de pruebas:

1) Pruebas basadas en sustancias producidas o sintetizadas por el Hígado. (Albúmina, Colinesterasa, y Proteínas de la Coagulación)

2) Pruebas basadas en sustancias metabolizadas por el hígado. (Fármacos, Xenobióticos,

Bilirrubina, Colesterol)

3) Pruebas basadas en sustancias liberadas por el hígado a partir de tejido dañado.

Compuestos endógenos: Liberados por el hepatocito dañado (ALT, AST)

Compuestos exógenos: Sintetizados a mayor velocidad o liberados por la membrana canalicular, epitelio del conducto biliar, endotelio de la vena central y periportal (FAS, GGT, 5-nucleotidasa)

PROTEINAS PLASMÁTICAS. Todos líquidos corporales contienen una concentración de proteínas las cuales interactúan en todas las actividades celulares; las proteínas del plasma sanguíneo pueden ser específicas de él, si allí ejercen su función, o no específicas si se encuentran en el plasma para ser transportadas, o llegan a él por pérdida de algún órgano o tejido lesionado. Las proteínas específicas del plasma realizan las siguientes funciones:

- Mantener una presión osmótica adecuada en la sangre. -Trasportar sustancias insolubles en Agua, lípidos, metales y hormonas. - Participar en el mantenimiento del equilibrio Ácido – Base. - Servir de reserva nitrogenada. - Participar en los mecanismos de defensa no celulares. - Interferir en los procesos de coagulación.

La concentración total de proteínas plasmáticas depende de los procesos de síntesis, el volumen del líquido en el que se distribuyen, y la degradación de las mismas, estos tres factores deben tenerse en cuenta para la interpretación de los valores de la concentración de proteínas y su correlación clínica. Síntesis: La mayoría de las proteínas se sintetizan en el Hígado, y un pequeño porcentaje en tejidos específicos como las inmunoglobulinas. Durante los procesos inflamatorios se pueden aumentar la síntesis hepática de diversas proteínas como las de fase aguda en respuesta a las citotoxinas. La síntesis de proteínas esta directamente relacionada con la cantidad y calidad de los nutrientes proporcionados al individuo y con la capacidad de absorberlos y metabolizarlos. Distribución. Las proteínas se encuentran en el líquido intra vascular y en el espacio extra vascular, se intercambian normalmente entre ambos compartimientos por procesos de pinocitosis de las células endoteliales, a través de las uniones interendoteliales en las paredes capilares. Degradación.





La destrucción de las proteínas se realiza en mayor o menor medida en todas las células del organismo para proporcionar aminoácidos para la síntesis de nuevas proteínas con funciones especificas dentro de cada célula. Igualmente la perdida en el espacio extravascular, por sangrado o por lesiones en el Tracto Gastro Intestinal favorece la disminución de la concentración plasmática de proteínas. En la practica la determinación de la concentración de Proteínas Plasmáticas es una medida que refleja únicamente, cambios de las proteínas más abundantes como Albúmina, Globulinas y Fibrinógeno.

I. PROTEINAS PLASMÁTICAS TOTALES.

La alteración de la concentración no es específica de alguna condición, sin embargo la determinación es importante para el diagnóstico, seguimiento y pronóstico en varias entidades patológicas.

- Puede ser indicadora del Equilibro Hídrico del animal, la concentración de Proteínas aumenta a medida que se aumenta el déficit de líquidos en el caso de Deshidratación.

- Se relaciona con el estatus nutricional de animal, teniendo en cuenta la cantidad y calidad del

alimento suministrado, el consumo y la capacidad de absorción y metabolismo de los nutrientes. - Indirectamente puede ser un indicador de problemas en el funcionamiento hepático (Síntesis

de Proteínas) y Renal (perdida de Proteínas), tanto para el diagnóstico como para el pronóstico. - La concentración de Proteínas Totales puede variar dependiendo del aumento o disminución

de alguna de sus fracciones (Albúmina, Globulinas, y Fibrinógeno principalmente)

- la medición posterior a Shock, hemorragia, deshidratación es útil en el pronóstico y seguimiento del proceso de recuperación del equilibrio Hídrico y para la determinación de terapias de fluidos.

II. ALBÚMINA.

Constituye el 40 – 60 % del total de las Proteínas Plasmáticas en los animales, las principales funciones son el mantenimiento de la presión oncótica, la reserva de aminoácidos y el transporte de diversas sustancias como Hormonas, Ácidos Grasos y Bilirrubinas. La hiperalbuminemia es una situación poco frecuente que se presenta principalmente por deshidratación y Shock. La hipoalbuminemia puede ser atribuida a varias situaciones:

- Baja calidad del alimento, disminución en el consumo o problemas de absorción intestinal. La albúmina se disminuye en individuos con problemas de malnutrición, o que presenten enfermedades inflamatorias crónicas del intestino, lo cual interfiere con la digestión y absorción de proteínas, igualmente en animales con insuficiencias pancreáticas o con aumento del requerimiento proteico, como el caso de gestación y lactancia.

- Disminución en la síntesis de Albúmina a nivel hepático, especialmente por enfermedades difusas y de tipo crónico en el hígado.

- Aumento del catabolismo proteico; por trauma, fiebre, y ocasionalmente diabetes mellitus o

en procesos inflamatorios crónicos principalmente. - Incremento en la perdida de Albúmina, por vía renal, lo cual es una de las principales

causas de hipoalbuminemia en los animales domésticos asociado principalmente a nefritis





y enfermedades glomerular aguda, aunque en procesos inflamatorios crónicos (Quemaduras) también pueden presentarse leves estados de proteinuria. La perdida de proteína por vía entérica genera disminución en la concentración de albúmina, en entidades inflamatorias del intestino, igualmente por la presencia de altas cargas parasitarias a nivel intestinal (Haemonchus sp. en ovinos y Ostertagiasis tipo II en Bovinos)

III. GLOBULINAS.

Son un grupo de proteínas insolubles en agua, subdivididas en grupos α (alfa), β (beta) y σ (gamma) Los subgrupos α y β varían de concentración dependiendo de la especie animal y una de sus principales funciones es la de ligar lípidos, hormonas y vitaminas liposolubles también llamadas lipoproteínas. Dentro de las α globulinas se encuentra la α ceruloplasmina importante para el transporte de Cu y en la fase aguda de la respuesta inflamatoria para inactivar los radicales libres y la α haptoglobina que se combina con la hemoglobina libre producto de la hemólisis intra vascular. Dentro de las β globulinas una de las más importantes es la β transferrina para el transporte de Fe+ de los tejidos a la médula ósea para producir hemoglobina. Las σ globulinas se asocian principalmente con anticuerpos, como cada molécula de anticuerpo esta dirigida a una fracción específica del antígeno existe un gran número de Inmunoglobulinas: Ig G: Es la clase principal de Ig. Aproximadamente el 70 – 75 % de las presentes en el plasma, se producen durante la respuesta inmune secundaria, se difunde a los espacios extra vasculares y atraviesa la barrera placentaria. Ig M: Se segregan en la fase temprana de la respuesta inmune primaria, se encuentra especialmente en el espacio vascular, son aglutinantes y citolíticos. Ig A: Son el 10 – 15 % del total de Ig. Del plasma, son los principales anticuerpos de las secreciones (sudor, saliva, lagrimas, leche, calostro, secreción bronquial y del Tracto Gastro Intestinal) Ig E: Se encuentra en baja cantidades en el plasma, la mayor concentración esta en la superficie de los mastocitos. Ig D: En el plasma se encuentran en bajas cantidades, son los principales receptores de superficie para el antígeno en los Linfocitos B. La disminución de una de las fracciones α (alfa), β (beta) o σ (gamma) puede influir en la concentración total de las globulinas. α (alfa): Puede aumentar por reacciones inflamatorias y daño tisular, especialmente en la fase aguda. β (beta): Aumenta en hiperlipemia y puede ser evaluada su concentración para estimar las reservas férricas a nivel orgánico. σ (gamma): Esta relacionada con la respuesta inmune a procesos inflamatorios y dependiendo de la etiología de los mismos ( bacterias, virus, parásitos) En Medicina Veterinaria la relación albúmina globulina respecto a un proceso inflamatorio de origen infeccioso pude ser el origen de un aumento en la concentración de Proteínas Plasmáticas Totales por aumento de las globulinas como respuesta inmune al proceso inflamatorio, en la mayoría de las especies excepto los bovinos, porcinos y los felinos la proporción de albúmina es mayor que la globulina, en estas tres especies la proporción es similar.





La determinación de la concentración de inmunoglobulinas es importante en los neonatos de las especies equina y bovina, en los cuales el tipo de placentación epitelio corial no permite que la madre transfiera in útero al hijo las inmunoglobulinas necesarias, el paso de estas se realiza a través del calostro que contiene una cantidad elevada de anticuerpos, por lo cual la disponibilidad y la cantidad consumida de este, es importante en las primeras horas posparto para que el neonato alcance la concentración plasmática adecuada de inmunoglobulinas, de lo contrario una baja cantidad de inmunoglobulinas se convierte en un factor de riesgo para adquirir enfermedades. La cantidad de inmunoglobulinas asimiladas por el neonato depende de la concentración de las mismas en el calostro, de la cantidad consumida y del tiempo del consumo teniendo en cuenta que el epitelio del tracto gastrointestinal es apto para asimilar estas macromoléculas por un periodo de tiempo limitado máximo de 48 Hrs.

IV. FIBRINOGENO

Es una de las principales proteínas plasmáticas relacionada directamente con la formación del coagulo sanguíneo, es producida por microsomas en el hepatocito y se almacena en las cedulas del parénquima hepático, siendo disponible para salir a circulación cuando los requerimientos orgánicos así los exigen, especialmente en la fase aguda del proceso inflamatorio, en general en las especies domesticas los valores normales se encuentran entre 100 – 400 mg/dl y en el bovino pueden ser normales hasta de 600 mg/dl. El aumento en la concentración de fibrinógeno es importante para correlacionar los hallazgos clínicos con el inicio de un proceso inflamatorio agudo. Métodos de Medición. La concentración de proteínas plasmáticas totales (PPT) se determina frecuentemente por refractometría, el uso de un refractómetro manual es un método de fácil realización, rápido y de bajo costo; disponible en la mayoría de laboratorios clínicos. Este método permite relacionar directamente el índice de refracción de un fluido con la concentración de sólidos presentes en él mismo, mas específicamente con la concentración de proteínas en el caso del plasma y de los líquidos corporales, la cual es expresada en gramos por decilitros. (gr/dl) Otro método utilizado frecuentemente para determinar la concentración de las Proteínas Plasmáticas y la concentración de Albúmina, es el colorimétrico, en el cual la muestra interactúa con reactivo químico (Método de Biuret para las Proteínas Totales o Verde de Bromocresol para Albúmina) para producir una solución de color, cuya intensidad es evaluada de acuerdo a la absorbancia por espectrofotometría en una reacción de punto final y comparada con la absorbancia de un blanco de reactivo y un estándar de concentración definida, para finalmente estimar la concentración de la muestra expresada en gr/dl. El fibrinógeno puede ser determinado por espectrofotometría, sin embargo, este método es altamente costoso y en la practica veterinaria es poco frecuente; el método mas utilizado es la precipitación por calor, la muestra de plasma es ultra centrifugada a 12.000 r. p. m. por 4 minutos en dos tubos capilares, luego a uno de ellos se le determina la concentración de Proteínas Totales por refractometría, el otro capilar es colocado en un baño serológico a 56º C por un periodo de 3 minutos, tiempo durante el cual el fibrinógeno es desnaturalizado. Posteriormente el mismo capilar es nuevamente ultra centrifugado a la misma velocidad y lapso de tiempo y se realiza nuevamente la lectura de las proteínas por refractometría, la concentración de Fibrinógeno es el resultado de restar a la concentración inicial de Proteínas obtenida del primer capilar, la concentración final posterior al paso por calor obtenida del segundo capilar y expresado en mg/dl. En cuanto a las globulinas, la determinación de la absorción de Ig. por parte de un neonato puede hacerse de dos maneras distintas:





1. La concentración de Proteínas Plasmáticas Totales puede ser indicadora de la cantidad de Ig absorbidas, una disminución de la concentración de las proteínas puede indicar una baja absorción; igualmente y de manera más específica la relación Albúmina – Globulinas puede estar alterada, encontrándose baja la concentración de Globulinas como reflejo de una pobre absorción de Ig.

2. La otra forma de determinar la absorción de Ig implica la realización de dos pruebas, una la

Prueba de turbidez con Sulfato de Zn y la Prueba de turbidez con Sulfito de Na. Las dos Pruebas se basan en la capacidad que tiene una solución de Sulfato de Zn o de Sulfito de Na para precipitar las inmunoglobulinas:

Prueba de Turbidez de Zn: Se utilizan una solución con 205 mg de Sulfato de Zinc para 1000 ml de agua destilada, esta solución se almacena al vacío y filtrada con Soda Lime para extraer el CO2. la prueba se realiza adicionando 6 ml de la solución en un tubo al vacío y 0.1 ml del suero libre de hemólisis, se monta igualmente un tubo control con 6 ml de la solución únicamente. Luego de agitar se dejan reposar a temperatura ambiente por 1 hora y se evalúa la turbidez frente al blanco. Si hay turbidez marcada se asume que hay una correcta absorción de inmunoglobulinas por encima de 400 mg/dl, si hay deficiencia de calostro o de absorción, la turbidez es muy leve o ausente y es equivalente a valores inferiores a 400 mg/dl. La turbidez puede evaluarse por espectrofotometría a 485 nm, frente al blanco, si la absorbancia es mayor o igual a 0,45 se asume que hay suficiente cantidad de inmunoglobulinas en el suero, de la misma manera un valor menor a 0,45 es indicador de mala absorción de IG. Prueba de Sulfito de Na: Se preparan tres soluciones al 14, 16 y 18% de Sulfito de Na en agua destilada, se adiciona 1,9 ml de cada solución en tres tubos estériles sin aditivos (uno para cada solución), se agrega 0,1 ml del suero libre de hemólisis a cada uno de los tubos, se agitan y se dejan reposar por una hora a temperatura ambiente para permitir la precipitación. La interpretación de la prueba se realiza de acuerdo a al Tabla 2.

Las dos pruebas anteriores se constituyen en una invaluable ayuda en campo, teniendo en cuenta la facilidad para su realización, el corto tempo tiempo de duración y los bajos costos del Sulfito de Na y del Sulfato de Zinc.

Concentración del Sulfito de Na. (%)

Ig Rango de Concentración 14 16 18

< 500 mg/dl -- -- +

500-100 mg/dl -- + +

>1500 mg/dl + + +

Tomado de Coles 1986.

Tabla 4. Interpretación del grado de turbidez para la Prueba de Sulfito de Na.





Interferencias en la Determinación. Para el caso de las Proteínas Totales determinadas por refractometría, la presencia de otros componentes como células, algunos macro elementos o detritus inflamatorios pueden interferir en la lectura. Las sales de Na y K presentes en algunos anticoagulantes como el EDTA puede incrementar el índice de refracción de la muestra, aumentando la concentración de Proteínas Totales por lo tanto es importante que la muestra no contenga cantidades excesivas de anticoagulante. Cuando la determinación se realiza por el método colorimétrico y evaluado por espectrofotometría las muestras hemolizadas o lipémicas pueden alterar la medición.

PIGMENTOS BILIARES.

I. Bilirrubina. El principal pigmento biliar encontrado en el suero de los animales domésticos es la Bilirrubina. Metabolismo: Es un producto no tóxico de una ruta metabólica menor, sin embargo el aumento en su concentración produce ictericia, la cual es un signo clínico muy importante que sugiere la presencia de alteraciones en la síntesis de hemoglobina, en el hígado o en el sistema biliar. La bilirrubina proviene de la degradación del grupo hemo de los glóbulos rojos senescentes en el sistema retículo endotelial (80%), de otras hemoproteínas hepáticas (15%) y la restante de eritropoyesis no efectiva (5%) Inicialmente se oxida a biliverdina por acción de la hemoxigenasa microsomal, posteriormente se reduce a bilirrubina por acción de la biliverdina reductasa citosólica produciendo Fe + y Monóxido de Carbono; esta bilirrubina es llamada no conjugada o indirecta, luego se asocia a albúmina y es llevado al hígado en donde se conjuga con el Ácido Glucurónico en los hepatocitos y se excreta en la bilis, a esta última se le lama bilirrubina conjugada o directa; en plasma la bilirrubina total es la suma de la directa y la conjugada. En el intestino delgado por el pH alcalino se hidroliza al pigmento no conjugado formando 3 grupos denominados urobilinógenos, los cuales en su mayoría se reabsorben y entra a la circulación entero hepática, pasando algunos a la circulación general para excretarse en la orina, los restantes en el tracto gastrointestinal se oxidan y forman estercobilina, mesobilina y urobilina. (Figura 2) La medición de la concentración de bilirrubina es poco sensible para la evaluación de la función hepática, teniendo en cuenta que el hígado pose una gran reserva funcional para la conjugación de bilirrubina, sin embargo la cuantificación es importante para el seguimiento del proceso de enfermedad. El aumento en la concentración de bilirrubina puede ser originado de tres formas:

Pre-Hepática: En entidades que aumenten el proceso de hemólisis intra vascular, en este caso el 60 – 70% de la bilirrubina en sangre es no conjugada; uno ejemplo es la hemólisis intra vascular generada en los bovinos por hemoparásitos del género Babesia sp.





FIGURA 5. Ciclo Metabólico de la Bilirrubina.

Hepática: En condiciones de enfermedad o daño hepatocelular en el cual el proceso de conjugación se realiza parcialmente y la excreción de bilirrubina conjugada también se disminuye, por lo tanto las concentraciones aumentadas en sangre se atribuyen a la bilirrubina no conjugada hasta en un 50 %. Normalmente esta situación se presenta en enfermedades hepáticas difusas y de tipo agudo.

Post Hepática: la concentración de bilirrubina total aumenta inicialmente por incremento en

la cantidad de bilirrubina conjugada, ocasionada por obstrucción del conducto biliar, sin embargo si el estasis hepático continua, se satura el parénquima y la bilirrubina no conjugada puede aumentar igualmente al disminuir la capacidad de conjugación en los hepatocitos. Otra causa común de ictericia post- hepática es el ayuno prolongado, en el cual el vaciamiento de la vesícula biliar se retarda.

El equino merece consideraciones especiales en la interpretación de los valores séricos de las bilirrubinas, normalmente en la mayoría de las especies la bilirrubina total no sobrepasa valores de 0,5 mg/dl (Kaneko et al, 1986) sin embargo en esta especie los valores de 1.0 – 2.0 mg/dl pueden

Glóbulo Rojo HEMÓLISIS

IV

HEMO

BILIRRUBINA

+ Ac.

HIGADO

LIGANDINA

PROTEINA

+ ALBÚMINA

REDUCCION

BILIRRUBINA

BILIVERDINA

OXIDACIÓFe +

(Transferrina) CO (Pulmón)

TGI

BILIRRUBINA

CONDUCTO

BILIAR

VENA

PORTA

UROBILINÓGENpH Alcalino

ESTERCOBILINA UROBILINA MESOBILIA

(Heces)

CIRCULACIÓN GENERAL

(Orina)





ser normales, debido a la ausencia d la vesícula biliar por lo que constantemente se evacua al intestino delgado el contenido de la vesícula biliar generando el aumento fisiológico en estas concentraciones. Métodos de Medición. Uno de los métodos básicos para la medición de bilirrubinas en plasma, esta basado en la reacción de van deen Bergh, en la cual la bilirrubina es capaz de acoplarse con el Ácido Sulfanílico Diatizado (DSA), para formar un compuesto de color rosa- violeta, actualmente los métodos de medición utilizan la espectrofotometría para correlacionar la intensidad de color y la absorbancia del compuesto, la cual es directamente proporcional a la concentración de bilirrubina, comparado con un blanco de muestra Interferencias en la Determinación Los sueros hemolizados, lipémicos o de animales tratados con fármacos que aumentan la concentración de la bilirrubina total:

Aumento de concentración: Allopuridol, esteroides anabólicos, antibióticos, ácido ascórbico y diuréticos.

Baja de la concentración: Penicilina, salicilatos y barbitúricos.

II. Ácidos Biliares (AB): Estos compuestos son esteroides anfipáticos los cuales contienen varios grupos hidroxilos que varían de posición dependiendo de la especie, estas moléculas tiene la particularidad de tener una porción hidrofílica y otra hidrofóbica lo que les permite agruparse en micelas. Actúan a nivel orgánico como detergentes biológicos para solubilizar lípidos en la bilis y facilitar la absorción de las grasas en el intestino. Metabolismo: Los ácidos biliares primarios son sintetizados a partir del colesterol en los hepatocitos, su producción esta regulada por un estimulo negativo dependiente de la concentración del ácido quenodesoxicólico (AQDC) en la circulación portal, este último es el principal ácido biliar en los equinos y los humanos, el ácido cólico (AC) es el principal de los caninos, felinos y bovinos. Posterior a su síntesis a partir del colesterol, los AB primarios son conjugados con taurina o glicina antes de ser excretados en la bilis, en los felinos la conjugación es exclusivamente con taurina, en los caninos y equinos predomina la conjugación con taurina y en los bovinos y humanos predomina la glicina; una vez conjugados son secretados por la membrana canalicular hacia el canalículo, el cual es un proceso dependiente de energía que suministra un estímulo adicional al flujo de bilis. En ayuno una porción de la bilis formada es secretada constantemente hacia el duodeno, en el equino la secreción de bilis es completa; reciclando los ácidos biliares, por lo que se produce una concentración definida de AB en ayuno. En la luz intestinal los AB primarios (AC) y (AQDC)se desdoblan por las acción de las bacterias en ácido desoxicólico y litocólico respectivamente, que se conocen como ácidos biliares secundarios. Aproximadamente el 90-95% de los AB secundarios son reabsorbidos por un sistema de transporte activo dependiente de ATP en el íleon terminal; las perdidas son recuperadas por la síntesis hepática. Posterior a su reabsorción son llevados al hígado y extraídos eficientemente por los hepatocitos y excretados nuevamente al sistema biliar, este sistema se favorece por el gradiente de concentración de los AB, ya que en la sangre portal su concentración es alta, en la bilis es menor y





se favorece el paso a la misma facilitando de igual manera el flujo biliar. Solo un pequeño porcentaje de los AB se escapa a la circulación general posterior a la ingesta de comida; la medición de las dos concentraciones en ayuno y posprandial se denomina la concentración sérica total de ácidos biliares. La concentración de AB en sangre es un indicador de la eficiencia e integridad de la circulación entero hepática y es útil para diferenciar las siguientes entidades:

Anastomosis Porto Sistémicas congénitas. Identificación de Hepatitis crónicas y cirrosis en ausencia de ictericia. Seguimiento de le enfermedad hepática y respuesta a la terapia.

En los equinos solo es necesaria una muestra para determinar la concentración de los ácidos biliares, en los bovinos su determinación es poco sensible teniendo en cuenta que el rango normal es muy amplio y las concentraciones varían dependiendo del tipo de dieta, consideración importante entre ganaderías con razas de carne y leche. La determinación de la concentración de Ácidos Biliares es una prueba que ha demostrado ser poco sensible teniendo en cuenta las variaciones propias por especie y por individuo, así como la influencia de la dieta y hábitos alimenticios, igualmente los resultados se alteran por las variaciones en la flora intestinal y entidades que limiten la absorción intestinal especialmente de la porción terminal. 4.3 ACTIVIDAD ENZIMATICA. Las enzimas utilizadas para evaluar la función hepática vienen poca o ninguna función fisiológica en el plasma. Las alteraciones en la concentración de estas enzimas pueden deberse a tres procesos:

1. Elevación de la enzima liberándose al plasma por daño celular o alteraciones de la permeabilidad de la membrana (Alanino Amino Transferasa ALT, Aspartato Amino Tranferasa AST, Lactato Deshidrogenasa LDH, Ornitin Carbamil Transferasa OTC)

2. Baja de la concentración por disminución de la síntesis en el hígado (Acetil

Colinesterasa Ach)

3. Aumento de concentración por colestasis o daño en los conductos biliares. (Fosfatasa Alcalina FAS, Gamma Glutamil Transferasa σGT)

Aminotransferasas: Estas enzimas catalizan la trasferencia de un grupo amino desde un α aminoácido a un α cetoacido, para producir glutamato mas el cetoacido correspondiente al aminoácido de partida, oxalacetato o piruvato partiendo de aspartato y alanina respectivamente, utilizando el piridoxal fosfato como cofactor.

I. ALT:





Esta enzima se encuentra en altas concentraciones en el citoplasma del hepatocito, aumenta en suero cuando ocurre degeneración celular o destrucción en el hígado. Es de gran utilidad en los caninos, felinos y primates, pero de bajo valor diagnóstico en otras especies por su amplia distribución tisular como en el caso de los equinos, bovinos y pequeños rumiantes. Esta enzima por ser de alta concentración intracelular se libera al plasma por alteraciones de la membrana celular o por daño celular, las concentraciones aumentadas en plasma son proporcionales al grado de injuria tisular o celular, su vida media es de 2-5 días aproximadamente en todas las especies, por lo tanto retorna rápidamente a las concentraciones normales, sin embargo en procesos crónicos pude mantenerse elevada o disminuir si el hígado ha sido afectado de manera difusa y una gran cantidad de enzima ya ha sido liberada al plasma.

II. AST: Esta enzima se encuentra distribuida en varios tejidos como el músculo esquelético, riñón, cerebro, glóbulos rojos y pulmón, por lo tanto es inespecífica para evaluar la función de uno de estos órganos, sin embargo en algunos animales se encuentra en altas concentraciones en el parénquima hepático como el caso de los bovinos y los pequeños rumiantes; tiene valor diagnóstico en la evaluación de daño o disfunción hepática en estas especies en ausencia de daño muscular, igualmente tiene una alta sensibilidad para la evaluación y seguimiento de las alteraciones del músculo esquelético especialmente en los equinos. En general las concentraciones de Aminotransferasas ALT y AST son útiles si se relacionan directamente con las concentraciones de otras enzimas como la Creatinina Kinasa (CK) y la Fosfatasa Alcalina (FAS) Métodos de Medición. Actualmente la determinación de la concentración en suero o plasma de una de estas enzimas se realiza por métodos cinéticos evaluados por espectrofotometría, la concentración catalítica se determina empleando la reacción acoplada de la Malato Deshidrogenasa para la enzima AST y de la Lactato Deshidrogenasa para la enzima ALT, a partir de la velocidad de desaparición del NADH. Interferencias en la Determinación. ALT: Puede aumentarse la concentración plasmática por el uso de acetaminofén, aspirina, fenotiacinas, fenilbutazona y tetraciclinas entre otros. AST: Las concentraciones pueden aumentar post ejercicio o por el uso de agentes hipotensores, colinérgicos, digitalicos y eritromicina. Esta reportado una leve disminución en los valores plasmáticos de la enzima en el ultimo tercio de la gestación, igualmente los sueros hemolizados y con bilirrubinas totales mayores a 20 mg/dl.

III. FAS. Describen un grupo de enzimas que hidrolizan esteres fosfato en un pH alcalino. Generalmente se localizan en la membrana celular, facilita el transporte de glucosa y fosfatos, es una enzima poco especifica por encontrarse en varios tejidos, sin embargo sus mayores concentraciones se encuentran en los huesos (osteoblastos y condroblastos) seguido por el hígado, epitelio del tracto biliar, la mucosa intestinal, células de los túbulos renales, placenta y el bazo.





Las altas concentraciones en sangre aparecen principalmente cuando se presentan obstrucciones del tracto biliar tanto mecánicas como de otro tipo intra o extra hepáticas, teniendo en cuenta que se encuentra en altas cantidades en las células de Kupffer que tapizan el sistema colector biliar. El aumento de la concentración no se da por falla en la eliminación de la enzima por el hígado, estas elevaciones se generan por aumento de la síntesis de Novo de la FAS, sin embargo las concentraciones de la enzima a nivel sérico también están muy relacionadas con la actividad ósea, por lo tanto es normal encontrar valores superiores en pacientes jóvenes con crecimiento óseo activo o por actividad osteoblastica aumentada. Los valores de la FAS se deben valorar en relación con las concentraciones de otras enzimas como la σ GT para el diagnóstico de enfermedad hepática referente al flujo biliar. Métodos de Medición. La evaluación de la concentración de FAS se realiza por un método cinético-enzimático, evaluado por espectrofotometría, teniendo en cuenta que cataliza en medio alcalino la transferencia de un grupo fosfato del 4-nitrofenilfosfato al 2-amino-2-metil-1-propanol (AMP), liberando 4- nitrofenol, la concentración catalítica se determina a partir de la velocidad de formación del 4- nitrofenol. Interferencias en la Determinación. Pueden influir en la determinación los anticoagulantes como Fluorados, oxalatos, citratos y EDTA, la hemólisis interfiere considerablemente por las altas concentraciones en los eritrocitos y el uso de antibióticos como las tetraciclinas.

IV. σGT: ES una enzima microsomal, que regula el transporte de aminoácidos a través de la membrana celular, catalizando la transferencia de un grupo glutamilo desde el glutation a aminoácidos libres, se encuentra en la mayoría de órganos y tejidos corporales, pero la actividad plasmática se le atribuye principalmente a la isoenzima hepática. La σGT tiene baja especificidad en enfermedades hepáticas, sin embargo su relación con la concentración de la FAS puede indicar que hay alteraciones hepáticas de tipo obstructivo o estasis del flujo biliar. En rumiantes la actividad de la enzima se aumenta en casos de Fasciola hepática o abscesos hepáticos y en general es un indicador de colestasis. Métodos de Medición. La σGT cataliza la transferencia de un grupo gamma glutamilo de la gamma glutamil (3-carboxi-4-nitroanilida) a la glicilglicina, en esta reacción se libera la fracción 4-nitroanilida, la concentración de la enzima se determina a partir de la velocidad de la liberación de esta fracción por lo tanto es una reacción cinética que se evalúa y cuantifica por espectrofotometría. Interferencias en la Determinación. Puede influir los sueros hemolizados y el uso de fenobarbital, en el ultimo tercio de la gestación pueden elevarse los valores plasmáticos ligeramente.

V. LDH.





Esta enzima esta distribuida en diferentes órganos y tejidos de forma intracelular, cataliza la oxidación reversible del L-Lactato a piruvato con el cofactor NAD, la mayor actividad esta indirectamente en sangre por la gran concentración que tienen los glóbulos rojos, por lo tanto la hemólisis leve causa grandes alteraciones en la determinación así como los anticoagulantes como el EDTA y los Oxalatos, la muestra indicada es plasma heparinizado. Esta enzima es un tetrapéptido con dos tipos de péptido (H) corazón y (M) músculo, y sus combinaciones generan las 5 isoenzimas LDH 1 hasta LDH 5, las cuales varían de concentración dependiendo del tejido (Ver Tabla 4) y pueden ser evaluadas por electroforesis. Se liberan básicamente por daño celular en órganos como el hígado, pulmón, músculo, riño, corazón y tejido linforeticular. El aumento en la concentración sérica puede asociarse con enfermedad hepática especialmente de la isoenzima LDH-5, o por aumento de cualquiera de sus fracciones por necrosis celular de alguno de los órganos que la contienen, sin embargo actualmente ya no se utiliza en Medicina Veterinaria por su alto costo de realización y su baja sensibilidad.

ORGANO LDH 1 LDH 2 Corazón, Eritrocitos, Riñón y Cerebro

LDH 3 Pulmón, Páncreas, Glándulas Suprarrenales, Bazo, Timo,

Tiroides, Ganglios Linfáticos y Leucocitos. LDH 4 LDH 5

Miocardio, Músculo Esquelético y Cerebro.

Tabla 5. Distribución Tisular de las Isoenzimas de LDH.

VI. Acetil Colinesterasa (AchE): La enzima colinesterasa sérica esta compuesta de dos fracciones, la principal es la acetilcolinesterasa seguida de la butirilcolinesterasa, la primera se encuentra principalmente en la unión mio - neuronal y la segunda en el cerebro, páncreas, intestino e hígado. La enzima acetil colinesterasa hidroliza la acetilcolina en la unión neuro muscular, permitiendo que la señal nerviosa quede interrumpida y preparando nuevamente la unios para que sea sensible al neurotransmisor. Su actividad sérica es muy reducida, y se evalúa para detectar la presencia de inhibidores de la colinesterasa, principalmente compuestos Órgano fosforados, los cuales se adhieren a la acetil colinesterasa impidiendo la hidrólisis y perpetuando el estimulo nerviosos a las fibras musculares.

4.4 METABOLITOS.

I. Colesterol: La determinación de la concentración de este compuesto útil para evaluar varios órganos y vías metabólicas, la función tiroidea deficiente normalmente cursa con aumento de la concentración plasmática de colesterol, así como enfermedades que afectan la vía de excreción biliar y de funcionamiento hepático, su valor en sangre esta relacionado directamente con la concentración de Ácidos Biliares teniendo en cuenta que son la vía de eliminación del colesterol. Una disminución de la concentración se puede generar como consecuencia de una deficiencia pancreática exocrina, anastomosis porto sistémicas y síndrome de mala absorción. La prueba para la determinación es colorimétrica de punto final, evaluada por espectrofotometría, interfieren la hemólisis y las concentraciones elevadas de bilirrubina. ALTERACIONES DEL SISTEMA PANCREATICO.





El páncreas realiza dos tipos de funciones, la hormonal o endocrina y la digestiva o exocrina. En la función exocrina se liberan al interior del intestino enzimas como la amilasa, la lipasa y la tripsina encargadas principalmente de procesamiento de fuentes de energía como los carbohidratos y algunos lípidos; algunas de estas enzimas son almacenadas en el páncreas como cimógenos o formas inactivas; la función endocrina permite que circule en el plasma la insulina y el glucagon importantes para la regulación de la principal fuente de energía para el organismo, la glucosa. En el intestino delgado, en las porciones anteriores principalmente, se lleva a cabo la degradación y posterior absorción de los carbohidratos, gracias a la presencia complejos enzimáticos como las oligosacaridasas y las disacaridasas, las cuales permiten la degradación de los respectivos oligosacáridos, disacáridos y monosacáridos, este concepto es importante para la evaluación de la intolerancia del organismo a algunos disacáridos como la lactosa y la fructosa, que generan diarreas hídricas por aumento la osmolaridad en el lumen intestinal. PÁNCREAS EXOCRINO. Como se mencionó, la función exocrina del páncreas (producir y secretar las enzimas digestivas lipasa, tripsina y amilasa) es la que se afecta en el caso de enfermedad pancreática a excepción de la diabetes mellitus. Las afecciones del páncreas exocrino se pueden dividir en inflamatorias (agudas o crónicas) y en insuficiencias (Posterior a las entidades inflamatorias y por atrofias del parénquima) Existen varias formas de evaluar la función exocrina del páncreas:

Examen microscópico de las heces, para detectar la presencia de partículas de grasa en grandes cantidades, material proteico no digerido y compuestos almidonados.

Examen de las heces para evaluar la actividad de la tripsina. Determinación de la concentración plasmática de Amilasa Determinación de la concentración plasmática de Lipasa

Aunque la presencia normal de estas enzimas en sangre no es exclusivamente de origen pancreático, sin embargo el aumento marcado de las concentraciones si es atribuido a pancreatitis experimentales en caninos, e inclusive relacionada con procesos renales agudos en cuales se incrementa la actividad plasmática de esta enzima. La actividad plasmática de la amilasa y lipasa debe también correlacionarse con estudios enzimáticos del hígado, teniendo en cuenta que una obstrucción del colédoco puede generarse por la inflamación del tejido pancreático adyacente, igualmente la liberación directa de proteasas a la circulación portal afecta directamente la integridad del parénquima hepático aumentando la actividad plasmática de enzimas como la ALT y AST principalmente. La evaluación clínica completa, las ayudas de ultrasonografía y una reseña completa del paciente son la principal justificación para evaluar en plasma la actividad de la amilasa y la lipasa con el fin de descartar una enfermedad inflamatoria del páncreas. Otra forma de evaluar la actividad pancreática exocrina es el análisis de la materia fecal, para lo cual hay varias técnicas descritas, con el inconveniente de ser muy poco sensibles como las tinciones de Sudán para grasa fecal, pruebas de digestión de película radiográfica o tubos con gel para tripsina fecal y tinciones con yodo para detectar almidones. En la práctica Veterinaria las entidades inflamatorias y atrofias con posterior insuficiencia del páncreas se tienen son muy poco consideradas dentro de los diagnósticos diferenciales mas probables, por la variabilidad del cuadro clínico y su baja presentación; lo anterior sumado a la poca disposición de las pruebas en los laboratorios veterinarios y sus altos costos hacen que la





evaluación de la función exocrina del páncreas por la actividad de la amilasa, lipasa sean poco frecuentes. sin embargo la prueba mas utilizada en los laboratorios es la que permite evaluar de forma poco sensible la actividad de la tripsina con la digestión de la gelatina en las placas radiográficas, para esta prueba se utiliza materia fecal fresca del individuo a la cual se le introduce una porción de una película radiográfica sin exponer por un periodo de una hora, posteriormente se evalúa a contraluz si la capa de gelatina fue digerida total o parcialmente; este resultado permite considerar baja actividad de la tripsina en los casos en los que la película permanezca intacta al final de la prueba PÁNCREAS ENDOCRINO. Una de las principales funciones endocrinas del páncreas es la producción y liberación de la insulina en las células pancreáticas, siendo dependiente de la concentración plasmática de glucosa, igualmente el páncreas produce el glucagón por las células del parénquima y tiene acción contraria a la insulina, es decir que en condiciones de hipoglucemia el glucagón responde junto con la adrenalina y los glucocorticoides para incrementar las concentraciones plasmáticas de glucosa, mientras que la insulina produce una disminución de su concentración.

I. Glucosa: A nivel plasmático existen tres fuentes de Glucosa, la que proviene de la degradación de los carbohidratos y que es absorbida desde el intestino, la gluconeogénesis que permite a partir de precursores diferentes a los carbohidratos producir glucosa y la glucogenólisis por medio de la cual el glucógeno almacenado en el hígado se hidroliza. Cualquier alteración en uno de los tres principales sistemas de producción o en los sistemas de regulación como la insulina y su opuesto el glucagón, pueden generar un aumento o disminución fisiológica o patológica de las concentraciones plasmáticas de Glucosa. (Figura 6) FIGURA 6. Esquema de funcionamiento del Páncreas endocrino.

GLUCAGON

INSULIN

HIGADO

GLUCOGENÓLISIS

GLUCONEOGÉNES

GLUCOSA MÚSCULO Y

OTROS TEJIDOS

Tejido Adiposo

SANGRE

( + )

( -- )

UTILIZACION





Teniendo en cuenta los anteriores mecanismos de regulación, es claro que la concentración de Glucosa puede estar influenciada igualmente por el tipo de dieta y su contenido calórico, la integridad del intestino delgado para realizar la degradación y absorción de los carbohidratos, la integridad del parénquima pancreático así como del hígado como reserva energética y el adecuado funcionamiento del sistema renal que permita reabsorber adecuadamente la glucosa dentro del umbral normal y el impedimento para la eliminación en orina. Normalmente el glucagón y la insulina tienen acciones opuestas para la regulación de disponibilidad de glucosa sérica, otras moléculas orgánicas participan igualmente en esta regulación como el caso de la adrenalina y los glucocorticoides, ambos favorecen la hiperglucemia a nivel plasmático, únicamente la insulina favorece la hipoglucemia permitiendo la utilización de glucosa en la mayoría de tejidos corporales. El glucagón es producido en las células del páncreas como respuesta a la hipoglucemia, este se une a receptores específicos en el hígado estimulando la degradación del glucógeno y la gluconeogénesis y en el tejido adiposo se producen ácidos grasos libres y glicerol, los cuales son retirados por el hígado, el glicerol es un sustrato directo para la gluconeogénesis y los ácidos grasos libres se oxidan originando ATP. La adrenalina se une en el tejido adiposo a los receptores - adrenérgicos con acción semejante a la del glucagón; los glucocorticoides igualmente inducen la hiperglucemia al estimular la proteólisis muscular suministrando al hígado sustratos gluconeogénicos e inducen algunas enzimas gluconeogénicas como la fosfoenolpiruvato. La insulina actúa acelerando la oxidación de la glucosa, acelerando al conversión de la glucosa en grasa, inhibiendo la gluconeogénesis en el hígado, incrementando la formación de glicógeno en el hígado, inhibiendo la gliconenólisis hepática inducida por otras hormonas e inhibiendo la cetogenesis excesiva y la lipólisis. Una de las entidades más frecuentes en pequeños animales, relacionadas con los desordenes del páncreas endocrino es la Diabetes mellitus, en la cual una deficiencia de insulina a nivel plasmático por alteraciones de la síntesis, secreción o función de la misma, acompañada de un estímulo constante del glucagón en el hígado generan un estado de hiperglucemia en el organismo, el cual en algunas ocasiones aumenta progresivamente por la utilización tisular de la glucosa que estimula aun más el glucagón y la disminución en la producción y liberación de insulina. Esta entidad es de importancia no solo por los efectos metabólicos temporales de la hiperglucemia, a largo plazo una serie de complicaciones sistémicas pueden surgir y afectar principalmente los ojos, el sistema nerviosos central, los vasos sanguíneos y el sistema renal, generando problemas como la hipertensión, hiperlipemia, obesidad en algunos casos desencadenando una alta morbilidad y mortalidad. Uno de los signos clínicos mas comunes para la diabetes es la poliuria, polidipsia, aumento del apetito y perdida de peso, en casos mas crónicos el vomito, anorexia, letargia y aumento de la frecuencia respiratoria aparecen progresivamente en la mayoría de los casos. A nivel sanguíneo uno de los hallazgos mas sobresalientes es el aumento de las concentraciones de glucosa por encima de los valores normales, generalmente mayores a 200 mg/dl sin embargo en estadios iniciales los valores pueden ser de 125 a 180 mg/dl. Otro hallazgo importante es la presencia de sueros lipémicos, teniendo en cuenta que la vía energética a la cual recurre el organismo es la utilización de las reservas de grasa, esta movilización de las reservas hasta el hígado produce este fenómeno, igualmente las concentraciones de cuerpos cetónicos de esta vía metabólica incrementan en sangre y por lo tanto es común la cetosis y cetonuria.





Métodos de Medición Actualmente existen comercialmente equipos portátiles de medición de glucosa, los cuales trabajan con tiras reactivas que permiten establecer las concentraciones de glucosa con base en la conductividad eléctrica, estos métodos son altamente sensibles y específicos y de costo moderado, sin embargo en el Laboratorio Clínico es utilizada una prueba colorimétrica de punto final evaluada por espectrofotometría. La Glucosa es determinada después de la oxidación enzimática en presencia de la Glucosa Oxidasa. El peróxido de Hidrógeno formado reacciona con fenol y 4- aminofenazona bajo la catálisis de la peroxidasa para producir un complejo de color rosa-violeta como indicador. La determinación de glucosa puede realizarse a partir de suero o plasma, el cual debe ser separado de la parte celular lo mas pronto posible a la extracción de la muestra, para evitar el consumo de glucosa por las células, el suero o plasma puede ser conservado máximo por 24 horas a 2-8 º C. Interferencias en la Determinación No presenta interferencia en la medición excepto con sueros extremadamente lipémicos. FUNCION RENAL CONSIDERACIONES ANATOMICAS Y FISIOLÓGICAS. RIÑON: Es el órgano encargado de la regulación del equilibrio hídrico de los líquidos corporales, del equilibrio ácido – base, del equilibrio electrolítico y de la excreción de los productos de desecho del organismo. Igualmente participa en el mantenimiento de la presión arterial y es el encargado de producir la eritropoyetina, la cual estimula la eritropoyesis. La función renal varia dependiendo del volumen sanguíneo, la presión arterial y la composición de la sangre, así como también de las glándulas suprarrenales e hipófisis. Microscópicamente la unidad funcional de riñón es el nefron (Figura 1), el cual depura principalmente productos terminales del metabolismo como la urea, la creatinina, el Ácido úrico y los uratos, además de otras que se acumulan en el cuerpo en altas concentraciones como los iones Na, Cl e H + Al nefron llega aproximadamente el 20 –25 % del volumen circulatorio de manera constante, independiente de la presión arterial. La sangre va al glomérulo en donde se filtra el agua y sustancias de bajo peso molecular, hasta 50- 70.000 dalton, gracias a que la presión que se mantiene dentro de glomérulo es alta y posteriormente la red peri tubular mantiene una presión baja lo cual favorece la absorción continua hacia el interior de los capilares. El resto de la sangre incluyendo las células sanguíneas, las proteínas plasmáticas y otras moléculas de gran tamaño abandonan el glomérulo por la arteria eferente. El ultra filtrado inicial esta tiene una composición similar al plasma pero normalmente sin proteínas, otros productos de desecho orgánico que se filtran normalmente son glucosa, aminoácidos, electrolitos, urea, creatinina y amoniaco. Todo el filtrado inicial pasa por una serie de estructuras como los túbulos contorneados distal y proximal, las ramas descendente y ascendente del asa de Hendle para llegar finalmente a los túbulos colectores que llevan la orina a la pelvis renal.





Figura 1. Estructura microscópica y funcional del nefron.

Las sustancia umbrales son aquellas que se reabsorben completamente por los túbulos renales cuando su concentración en plasma se encuentra en los límites normales, si su concentración aumenta en plasma no se reabsorben totalmente y aparece en la orina. Hay dos mecanismos básicos de transporte a través de la membrana tubular:

Transporte Activo: Los mas importantes son de Na + y Ca2+, glucosa, aminoácidos, bicarbonato, fosfatos, uratos y además los casos de secreción activa de H+ y K+.

Transporte Pasivo: Se destaca la osmosis del agua a través del endotelio tubular y como

consecuencia de esto la absorción pasiva parcial de urea, la cual se pierde por orina en cerca del 50% del filtrado glomerular, ya que mas adelante su reabsorción es mínima.

En el Túbulo Contorneado Proximal se reabsorbe el 99% del agua que se ha filtrado, otras sustancias son reabsorbidas en proporciones variables como proteínas, glucosa y cloruro de Na, la creatinina es uno de los compuestos que no se reabsorbe; igualmente se secretan sulfatos, glucurónidos, hipuratos, los iones hidrógeno y ciertos fármacos como la penicilina. Tanto en el Túbulo proximal como en el distal los iones de H+ se intercambian por Na proveniente del

GLOMERULO

CAPSULA DE

BOWMAN ARTERIA

AFERENTE

ARTERIA

EFERENTE RAMA

DESCENDEN RAMA ASCENDENT

ASA DE HENDLE

TC

TC

TUBULO

COLECTOR

VENA VASOS

VENULA





bicarbonato de Na. Los iones H+ se combinan luego con el bicarbonato en el filtrado para formar ácido carbónico, que en presencia de la anhidrasa carbónica se desdobla en H2O y CO2, este último se difunde fuera del túbulo y así el Na y el bicarbonato son reabsorbidos. La disposición de las ramas ascendente y descendente del asa de Hendle y de los vasos sanguíneos peri tubulares que discurren paralelos a estas estructuras (Figura 2), permiten inicialmente reabsorber agua en la rama descendente, la cual no es permeable a otros solutos, en la rama ascendente la absorción de agua es casi nula pero se reabsorben solutos como el Na, Cl, Ca y Mg.

Flujo Sanguíneo. Flujo de Orina. Figura 2. Disposición normal del asa de Hendle y los vasos peri tubulares.

En el túbulo contorneado distal se ajustan el pH y la osmolaridad y el contenido electrolítico de la orina; en el se secretan K, amoniaco y H+ y se reabsorbe el Na y el Bicarbonato. Igualmente se intercambian los iones de K por los de Na. El amoniaco secretado se combina con los iones H+ y se forma el amonio, ayudando a regular la concentración de los iones hidrógeno, así mismo se reabsorbe una pequeña fracción de urea. La absorción de agua en la porción distal del nefrón esta regulada por la ADH secretada por la hipófisis; cuando el organismo necesita conservar agua, se secreta la hormona haciendo que las paredes de los túbulos distales y colectores se tornen permeables, con lo que se reabsorbe mayor cantidad de agua, logrando la disminución del volumen de orina. ANALISIS DE ORINA La evaluación microscópica, microscópica y bioquímica de la orina permite apreciar y evaluar la integridad del sistema renal, desde el riñón hasta los conductos de transporte de orina como la uretra interna, externa y la vejiga; incluso suministrar información pertinente a los órganos genitales internos. dependiendo de la especie animal.

VENA

TC TCARTERIA

VASOS RECTOS ASA DE HENDLE

TUBULO





La capacidad de filtración del riñón o función renal puede ser un indicador de alteraciones de otros sistemas orgánicos, al encontrar o estar ausentes en la orina productos metabólicos específicos..

I. Recolección de la Muestra. El procesamiento adecuado de la muestra, la emisión de resultados confiables por parte del laboratorio y la interpretación del clínico, parten de una muestra de excelente calidad la cual debe cumplir con algunas consideraciones mínimas de toma y conservación para el análisis. La muestra debe ser recogida preferiblemente en las horas de la mañana, desechando la primera porción de la misma y colectándola en un contenedor estéril y desechable y los órganos genitales externos deben ser lavados en lo posible. La orina de micción natural permite realizar el análisis macroscópico, microscópico y bioquímico, sin embargo para otros estudios específicos puede ser necesario el uso de sonda uretral o cistocentesis, como es el caso de los cultivos microbiológicos, excreción fraccional en los cuales la muestra debe ser lo mas aséptica posible o en pacientes que presenten dificultad en la micción o no permita colectarla fácilmente. El análisis debe realizarse en las dos horas siguientes a la obtención de la muestra, de lo contrario debe refrigerarse a 4 º C y/o adicionarle conservantes o inhibidores, de los cuales los mas usados son:

Tolueno: (2 ml /100 ml de orina), es ideal para los constituyentes químicos únicamente. Formalina: (1 gota/30 ml de orina), conserva muy bien el sedimento pero puede precipitar

las proteínas. Timol: (1 Cristal pequeño para una muestra) Puede interferir igualmente en la

determinación de las proteínas. Cloroformo: Se utiliza para inhibir el crecimiento bacteriano, sin embargo modifica las

características del sedimento. Tabletas comerciales: (1 Tab./30 ml de orina), estas actúan liberando formaldehído en la

orina, conservan muy bien el sedimento y la mayoría de los constituyentes químicos, sin embargo pueden aumentar levemente la gravedad específica de la muestra.

II. Cambios en los constituyentes por el Tiempo y la Temperatura: La muestra de orina se descompone fácilmente por la presencia de bacterias, alterando su las características físicas como el color y el olor.

Las bacterias desdobladoras de urea producen amoniaco que combinado con los H+ produce amonio, el cual aumenta considerablemente el pH de la muestra.

El aumento de pH descompone los cilindros y el material celular. La Glucosa puede ser utilizada por las bacterias y presentar Falsos negativos. La acetona puede disminuir por el desdoblamiento del aceto acetato. La bilirrubina puede disminuir por accion de la luz solar. Los componentes celulares se deterioran con el tiempo y se altera la morfología.

ANÁLISIS MACROSCOPICO.

I. Color:





En la mayoría de las especies animales, la orina es de un color amarillento claro, excepto en el equino, en el cual la intensidad de color es mayor. En el bovino la orina tiene un color mas claro que el resto de las especies. El color normal de la orina esta influenciado por la concentración y la presencia de pigmentos como los urocromos, provenientes de la degradación de la bilirrubina en el intestino delgado y que por circulación portal se reabsorbe al torrente circulatorio y se excretan por vía renal. Los cambios en el color son atribuidos a condiciones específicas como:

Amarillo Claro: falla en la capacidad del riñón para concentrar la orina, posterior a tratamientos con fluidos o por la accion de diuréticos. Igualmente cuando el hígado no secreta cantidades suficientes de bilirrubina conjugada al intestino delgado.

Amarillo Oscuro: Cuando aumenta la gravedad especifica de la orina, en casos de disuria, deshidratación o por la presencia de pigmentos biliares como la bilirrubina conjugada.

Blanquecino: Presencia de grasa, grandes cantidades de leucocitos o cristales. Rosa – Rojo: Por la presencia anormal de grandes cantidades de glóbulos rojos o altas

concentraciones de hemoglobina o mioglobina. Algunas veces se puede presentar este color al excretarse en la orina algunos pigmentos vegetales como las antocianinas (Bauer et al, 1968)

Azul o verde: Por la presencia de biliverdina o pseudomonas. II. Apariencia:

Normalmente la orina es clara o ligeramente turbia, excepto en los equinos en la que es turbia por la presencia de cristales de carbonato de Ca y moco. La turbidez de la orina puede ser de origen fisiológico o patológico y dependerá de la concentración de elementos celulares como espermatozoides, leucocitos, células epiteliales, moco y cristales como fosfatos, carbonatos (pH alcalino) y uratos (pH ácido)

III. Olor: El olor es importante en la evaluación de algunos procesos patológicos como el caso de cetosis en los rumiantes especialmente, la presencia de cuerpo cetónicos dan un olor dulce o de frutas, igualmente dependiendo de algunos compuestos exógenos ingeridos por el individuo el olor cambiara dependiendo de las características del agente y su concentración.

IV. Gravedad Específica (G. E.) Constituye el índice de la concentración de material disuelto en la orina, depende no solo del número de partículas disueltas sino del peso de las mismas. La gravedad específica se utiliza para medir la capacidad de concentración del riñón, para mantener el equilibrio hídrico, esta capacidad se pierde como consecuencia del daño tubular. Los valores de Gravedad Especifica reportados para las diferentes especies se observan en la tabla 3:

Gravedad Específica

Bovino 1025 -1045

Ovino 1010-1045

Caprino 1015-1045





Equino 1020-1050

Porcino 1010-1030

Canino 1015-1045

Felino 1020-1040

Tabla 3. Valores Normales de Gravedad Especifica. La gravedad especifica es útil para diferenciar enfermedades como diabetes mellitus y diabetes insípida, en ambas el volumen urinario es alto pero en la diabetes mellitus por la disminución en la insulina la concentración de glucosa aumenta y sobrepasa el umbral de reabsorción tubular, se excreta en la orina y aumenta la G. E., en la diabetes insípida se produce disminución de la G. E. Por que hay deficiencias de ADH. La hipostenuria, es el termino que define la baja gravedad especifica de la orina, es un indicador de procesos en los cuales en el riñón se reduce la capacidad de concentración de la orina principalmente por disminuir la reabsorción de agua a nivel tubular. La hiperstenuria hace referencia a una concentración de solutos elevada en la orina, se relaciona principalmente con procesos de deshidratación, glucosuria, proteinuria y la presencia de otros elementos que aumentan su concentración en orina, igualmente en la mayoría de los procesos inflamatorios del glomérulo la capacidad de filtración se disminuye y la proporción de líquido es menor `por lo tanto aumenta la G. E. La isostenuria se refiere a la perdida de la capacidad de diluir o concentrar la orina y la G. E. Que se observa en general es de 1010 +/- 0,002 por periodos de tiempo prolongados. La técnica mas utilizada para determinar la G. E. es el refractómetro manual o medidor de líquidos totales, el cual proporciona el índice de refracción, que es la relación entre la velocidad de la luz en el aire y en una solución, siendo proporciona la desviación del haz de luz por refracción y la G. E. de la solución, el refractómetro esta diseñado para funcionar sin correcciones de temperatura entre 15, 5 – 37,7 º C aproximadamente. Es un método fácil y rápido y solo se requiere una gota de la muestra. Otro sistema para determinar la gravedad especifica de al orina es el urinometro, que es un hidrómetro calibrado para medir la G. E. de la orina a una temperatura constante, normalmente de20 º C, este sistema requiere de grandes volúmenes de orina ( 15 – 20 ml) y una temperatura constante, en la practica es poco usado actualmente. Un tercer sistema proporciona información de los sólidos presentes en la orina, son las tiras reactivas que se basan en las variaciones del pK de ciertos polielectrolitos tratados en solución, en si relacionan la concentración iónica con la G. E. ANÁLISIS MICROSCOPICO. Para esta fase del análisis la orina debe ser fresca y eliminada la primera porción de la micción, debe examinárselo mas pronto posible posterior a la toma de la muestra, ya que la mayoría de las estructuras se descomponen o pierden su morfología con el tiempo, principalmente por las





variaciones de pH, para lo cual la muestra puede ser refrigerada a 4 º C hasta por 2 horas antes de realizar el examen. Para la evaluación microscópica o del sedimento urinario, cada laboratorio debe determinar un volumen estándar de muestra a centrifugar así como el tiempo y velocidad de la centrífuga, esto permitirá que todos los datos sean emitidos bajo las mismas condiciones. Cuando la muestra es muy pequeña en volumen se puede diluir con una pequeña cantidad de solución salina fisiológica previa a la centrifugación, y leerla inmediatamente, sin embargo este procedimiento no permite cuantificar las estructuras presentes, únicamente es descriptivo de las estructuras predominantes ene l sedimento. Normalmente un volumen de 5- 10 ml de orina es centrifugado por 10 minutos a 2.500 – 3000 r. p. m. Posteriormente se descarta el sobrenadante y de coloca una o dos gotas del sedimento homogenizado con golpes suaves al tubo, sobre una lámina cubreobjetos, y cubriéndola con una laminilla; procurando que el extendido se realice por capilaridad y que no sea demasiado grueso. Otro punto importante es la intensidad de luz necesaria para la lectura, normalmente este análisis se realiza en microscopio de luz convencional, e el cual debe cerrarse el diafragma y alejar el condensador hasta que sean visible las estructuras, además constantemente se realizan movimientos suaves con el tornillo micrométrico para darle profundidad el examen y evitar omitir algunas estructuras. La primer revisión se realiza en poco aumento, con el objetivo de 4x a 10x lo que permite determinar la uniformidad en la distribución del sedimento a evaluar, y elegir los sitios para la evaluación con mayor aumento dependiendo de que tan homogéneo sea el sedimento. En el objetivo de 40x donde normalmente se realiza la evaluación detallada y la identificación de estructuras deben evaluarse 10 a 20 campos, en los cuales se va a cuantificar y cualificar los elementos presentes, haciendo un promedio por campo el cual será reportado en número de estructuras por campo o con cruces o categorías de leve, moderada y severa presencia dependiendo del tipo de elemento a reportar, estos se dividen en celulares y no celulares. ELEMENTOS CELULARES: Existen dos tipos de componentes en el sedimento urinario, los elementos figurados o celulares y los no figurados o no celulares, los primeros están compuestos por todas las células que puedan encontrarse en la orina, como son leucocitos, glóbulos rojos, células epiteliales provenientes de cualquier punto del tracto urinario.

I. LEUCOCITOS: Los glóbulos blancos pueden llegar a la orina desde el glomérulo a la uretra externa, normalmente en la orina de cualquier especie se encuentran de 0-5 leucocitos por campo de 40x, los cuales son muy refringentes, el tamaño puede variar dependiendo de la osmolaridad y pH del medio en el que se encuentren, en promedio miden de 10 – 12 micras y se hacen más pequeños en orinas hipertónicas o aumentar de tamaño en orinas hipotónicas o alcalinas, en las cuales la vida media se reduce considerablemente y el examen debe realizarse rápidamente. La mayoría de los leucocitos presentes en la orina son neutrófilos, los cuales se observan de color verdoso y con una aparente zona pelucida hacia el exterior de la membrana celular, se pueden observar solos o en acúmulos. El aumento en el numero de leucocitos se atribuye a procesos inflamatorios en el tracto urinario desde el riñón hasta la uretra externa, incluyendo los órganos genitales externos, por lo tanto la evidencia de aumento de su concentración en orina debe ser evaluada con otros parámetros del sedimento urinario, la historia y los signos clínicos del paciente. Se pueden observar leucocitos





aumentados aun en procesos inflamatorios no infecciosos; eventualmente se puede realizar una tinción con colorante de Wright para visualizar otro tipo de leucocitos como eosinófilos o linfocitos y así hacer un diagnóstico mas especifico del tipo de respuesta inflamatoria.

II. CLOBULOS ROJOS: Al igual que los leucocitos, la presencia de eritrocitos en la orina puede ser originada en cualquier punto del tracto urinario, y en las hembras es importante descartar su presencia por contaminación dependiente del ciclo estral. Los glóbulos rojos pueden observarse como pequeñas estructuras ovaladas, muy refringentes, fácilmente apreciable su estructura bicóncava y de 7 micras aproximadamente, igualmente su tamaño y apariencia dependerá de la osmolaridad, en orinas hipotónicas pueden lisarse, liberar su contenido a la orina y aparecer como óvalos muy tenues y poco refringentes, en orinas hipertónicas también se pueden crenar pero aparecen como pequeños gránulos refringentes. El color varia desde verde azul hasta anaranjados o rojizos. Su presencia en sangre en pequeñas cantidades se considera normal de 0-3 eritrocitos por campo de 40x, el aumento de esta concentración es indicador de hemorragia en algún punto del tracto urinario y puede asociarse a trauma, procesos inflamatorios y neoplasias dependiendo de la severidad de su presentación, igualmente algunas sustancias como anticoagulantes pueden favorecer su presencia así como tratamientos con antibióticos como penicilinas o cefalosporinas que generan nefritis intersticial aguda o cistitis que se manifiestan con hematuria. Los glóbulos rojos se confunden fácilmente en la orina con otras estructuras, como grasa, levaduras e inclusive leucocitos de menor tamaño por lo tanto el examen debe ser cuidadoso, en algunos casos se puede utilizar ácido acético el cual se agrega al sedimento y solo se lisan los eritrocitos. Es importante tener en cuenta que en la mayoría de animales la muestra de orina se toma en el momento de la consulta con una sonda uretral, este procedimiento puede generar pequeños traumatismo en el tracto urinario produciendo pequeñas hemorragias que se manifiestan como hematuria, por lo que esta contaminación iatrogénica debe ser considerada en la evaluación del sedimento.

III. CÉLULAS EPITELIALES: En la orina se encuentran normalmente pequeñas cantidades de células epiteliales que sufren un proceso de descamación natural por reemplazo del epitelio. Pueden distinguirse tres tipos de células epiteliales presentes en la orina dependiendo del sitio de descamación: Células del Epitelio Tubular (Altas): este tipo de células proviene principalmente de los túbulos

renales, son ligeramente más grandes que los leucocitos y su núcleo es proporcionalmente de mayor tamaño, pueden ser planas, cúbicas o cilíndricas.

Células de Transición: son mucho más grandes que los leucocitos, de dos a cuatro meces mayor, en su mayoría son redondeadas o de forma ligeramente irregular. Provienen principalmente de la pelvis renal hasta la uretra interna.

Células Pavimentosas o Escamosas (Bajas): estas células provienen del epitelio de la uretra externa y la vejiga, son de gran tamaño, planas y de forma irregular, su núcleo es proporcionalmente más pequeño que el de las células en transición.

La presencia de cualquiera de estas células en bajas cantidades es normal, 0-2 células por campo en 40x, el aumento de su presentación es un signo importante de inflamación, y la correcta





identificación de las mismas puede indicar el sitio anatómico del proceso inflamatorio asociado a la presencia de leucocitos y glóbulos rojos, igualmente en algunas especies como los caninos debe tenerse en cuenta l variación de la celularidad dependiendo del ciclo estral. ELEMENTOS NO CELULARES:

IV. CILINDROS: Son un elemento de análisis muy importante para el diagnóstico, los cilindros se forman en la luz de los túbulos renales, por esta razón reciben este nombre, al ser moldeados en este sitio. Normalmente los cilindros se clasifican de acuerdo a las características físicas y químicas de su composición: cilindros hialinos, cilindro granuloso fino, cilindro granuloso grueso y cilindro céreo, siendo este el proceso que refleja la continuidad de su formación, igualmente pueden secuestrar otros elementos en su conformación como leucocitos, eritrocitos y células epiteliales, siendo representativos en el caso de un proceso patológico al interior del túbulo renal. Todos los cilindros tienen una matriz proteica constituida por la proteína de Tamn-Horsfall (Mc Queen, 1966 Ruteci et al, 1971), esta glucoproteína es secretada por los túbulos renales especialmente la parte distal del nefrón y compuesta principalmente por residuos medios de cisteína, y encargada de modificar en gran parte la reabsorción de agua. Los factores que intervienen en la formación de los cilindros son el éxtasis urinario, incremento en la acidez de la orina, aumento de la concentración de solutos y presencia anormal de constituyentes iónicos o proteicos. Normalmente los cilindros tienen forma alargada, con sus lados paralelos y de diferente calibre dependiendo de el sitio anatómico de su formación. Con base en las estructuras predominantes en el cilindro se han clasificado así:

Cilindros Hialinos: Son observados con mayor frecuencia en la orina, están constituidos principalmente por la proteína de Tamn-Horsfall gelificada, como están conformados únicamente por proteína su índice de refracción es muy bajo, son incoloros, homogéneos y transparentes. No se asocian con ninguna entidad particular.

Cilindros Eritrocitarios: Corresponden a episodios de hematuria de origen renal, son

considerados patológicos y revelan procesos inflamatorios agudos. Los glóbulos rojos que los conforman pueden ser abundantes o escasos y estar intactos o degenerados.

Cilindros Leucocitarios: Se observan frecuentemente en procesos inflamatorios de

origen infeccioso y no infecciosos, como pielonefritis, nefritis intersticial y glomerulonefritis. La mayoría de los leucocitos presentes son neutrófilos maduros.

Cilindros Granulosos: Se forman en su mayoría a partir de la degeneración de los

cilindros celulares o en pocas ocasiones se originan por precipitación y aglomeración de proteínas séricas sobre una matriz de proteína de Tamn-Horsfall. Dependiendo del tiempo de permanencia en la orina los gránulos pueden ser de aspecto burdo o degradarse y tener aspecto mas fino, de ahí que en algunos casos se reportan cilindros granulosos finos o gruesos, sin embargo esta distinción tiene poco significado clínico.

Cilindros de Células Epiteliales: Se forman principalmente por éxtasis urinario asociado

a la descamación en algunos casos aumentada del epitelio tubular. Su presencia es rara teniendo en cuenta que muy pocas entidades afectan únicamente a los túbulos renales, como el caso de necrosis túbulo intersticial o la exposición a agentes nefrotóxicos.

Cilindros Céreos: Normalmente no se observan en la orina, por tener un índice de

refracción muy bajo, se asocia a procesos de degeneración de los cilindros granulosos.





Cilindros Grasos: Se presentan comúnmente cuando hay procesos de degeneración

de la grasa del epitelio tubular. Se reconocen fácilmente por que la grasa tiene un índice de refracción muy alto y el tamaño de cada partícula es diferente.

V. CRISTALES. En la orina se encuentran normalmente algunos cristales, los cuales varían en conformación dependiendo de el pH, la solubilidad y la concentración de un compuesto cristalino en particular. En la orina recién formada no aparecen cristales, estos se forman posteriormente en el riñón y el tracto urinario, llegando incluso a la formación de cálculos urinarios, dependiendo de la dieta que influye en el pH de la orina y por lo tanto predispone la presencia o no de mas cristales, así como de la gravedad específica y alteraciones en la frecuencia de la micción. Muchos de los cristales presentes en la orina carecen de importancia clínica, excepto algunos como los cristales compuestos de cistina, tilosina, leucina y sulfonamidas entre otros.

Cristales en Orinas Ácidas: Los mas comunes encontrados en las especies domésticas son los Cristales de Oxalato de Calcio, Uratos Amorfos y Sulfato de calcio.

Cristales en Orinas Alcalinas: Se encuentran con frecuencia los cristales de Fosfato triple, fosfato Amorfo, carbonato de calcio y Fosfato de calcio.

VI. ESTRUCTURAS DIVERSAS. Existen otras estructuras que pueden aparecer en el sedimento urinario y se consideran patológicas dependiendo de las características morfológicas y del número.

Bacterias: En la orina colectada por cistocentesis no deben aparecer bacterias, si aparecen indican procesos infecciosos desde el nefrón, pasando por el tracto urinario alto hasta la vejiga. En la orina colectada por micción natural aparecen cantidades aceptables de bacterias las cuales provienen en del tracto urinario inferior y de los órganos genitales externos. La presencia aumentada de bacterias debe asociarse con el aumento de leucocitos y la evidencia clínica de un proceso inflamatorio de origen infeccioso.

Espermatozoides: En la mayoría de las muestras de orina provenientes machos y

colectadas por micción natural, se encuentran cantidades variables de espermatozoides, que dependen principalmente de la actividad sexual del individuo y de alteraciones del comportamiento que incluyen la masturbación frecuente. No son de importancia clínica, pero si interfieren en el análisis microscópico.

Cristales de Almidón: Se encuentran muy frecuentemente en las muestras de orina

colectadas en el consultorio cuando se recolectan con guantes de látex, los cuales están recubiertos de talco.

Grasa: Es común encontrar partículas de grasa de diferentes tamaños filtrada desde el

glomérulo o por adición en los túbulos renales. C. ANÁLISIS BIOQUIMICO Actualmente en los laboratorios el análisis bioquímica de la orina incluye pruebas para la determinación del pH, glucosa, proteínas, cetonas, bilirrubina, urobilinógeno y nitritos. Cada una de





estas determinaciones se realizaba anteriormente de forma individual con métodos desarrollados para cada una de ellas, los cuales eran en su mayoría complejos y limitaban el volumen de la muestra, sin embargo existen en la actualidad tiras reactivas, que son bandas compuestas por almohadillas en las cuales se encuentran compuestos químicos que reaccionan con cada uno de los elementos a evaluar produciendo un cambio de color en cada una de las almohadillas. Estas tiras contienen incluso espacios reservados para el análisis de elementos como sangre, leucocitos y gravedad específica. El uso de esta metodología a permitido obtener resultados mas confiables, rápidos y a menor costo que la realización de pruebas individuales y deben tenerse en cuenta algunas consideraciones para su realización: la orina debe evaluarse lo mas rápido posible, homogenizarla muy bien y permitir el tiempo de reacción indicado para cada elemento, el cual debe ser leído igualmente en el tiempo indicado por el fabricante. Se debe impedir el exceso de orina entre cada almohadilla, para lo cual las tiras actuales poseen una superficie hidrofóbica entre cada una evitando el paso de orina y de reactivos de una porcion a otra.

I. pH: El pH es un indicador del estado ácido- base del organismo y esta directamente influenciado por la dieta. El riñón como se menciono esta encargado de la regulación del equilibrio del ion H+ y regula el pH de la orina para compensar los cambios en la dieta y los productos finales del metabolismo; esta regulación se produce en la porción distal de nefrón con la excreción o reabsorción de H+ y bicarbonato. Las orinas ácidas se presentan especialmente en los animales carnívoros y omnívoros, así como en estados de inanición, fiebre, acidosis metabólica, respiratoria o ejercicio muscular prolongado. La orina alcalina es común en animales herbívoros, alcalosis metabólica, respiratoria e infecciones bacterianas en el tracto urinario bajo. Las tiras para la determinación de pH utilizan el rojo de metilo y el azul de bromotimol para la determinación y cubren una escalad e 5-8.

II. PROTEINAS: Solo una pequeña fracción de proteínas debajo peso molecular es capaz de filtrase a la orina por lo tanto la orina normal no presenta reacciones positivas a la proteína. Algunos estados transitorios de proteinuria se pueden generar por fiebre, ejercicio muscular, pH alcalino y alteraciones de la Tasa de Filtración Glomerular por compromisos de la volemia. La presencia de proteína en la orina puede tener dos orígenes: daño en la permeabilidad del glomérulo que permite la filtración como el caso de glomerulonefritis y amiloidosis; las fallas en la reabsorción se presentan en los túbulos renales e impiden recuperar las proteínas de bajo peso molecular filtradas inicialmente, esto ocurre en procesos como pielonefritis especialmente. Las tiras reactivas utilizan el azul de tetrabromofenol con un buffer de pH para la reacción, por lo tanto las orinas con un pH alcalino pueden alterar este sistema de regulación y generar falsas proteinurias. La proteína de Bence-Jones (Bradley et al, 1979) es una fracción de bajo peso molecular de las inmunoglobulinas que normalmente no reaccionan en las tiras y puede generar falsos negativos. Para ambos casos la prueba con el ácido sulfosalicilico permite descartar la falsa proteinuria por aumento del pH y el falso negativo con presencia de proteína de bajo peso





molecular.; esta prueba permite precipitar las proteínas presentes en la orina. La prueba es fácil de implementar ya que no requiere grande volúmenes de orina ni condiciones de temperatura específicas, se utilizan volúmenes iguales de orina y Ácido Sulfosalicilico (50 ml de H2O destilada mas 50 ml de metanol absoluto, se adicionan 10 gr. de ácido sulfosalicilico al 10%) y se evalúa el grado de turbidez relacionándolo directamente con la concentración de proteína.

III. GLUCOSA: la presencia de glucosa en la orina denominada glucosuria depende directamente de las concentraciones plasmáticas, de la velocidad de filtración tubular y del grado de reabsorción tubular. Como se menciono anteriormente la glucosa es un elemento con umbral de reabsorción, cuando las concentraciones en plasma superan los 160-180 mg/dl los túbulos no pueden reabsorberla totalmente y aparece en la orina, aunque pueden eventualmente existir concentraciones muy bajas de glucosa en la orina en ayuno y que no son detectables en las tiras comerciales ya que no exceden los 15 mg/dl. Sin embargo aunque los niveles de glucosa plasmática sean altos la presencia en orina dependerá del índice de filtración glomerular, relacionado directamente con el estado de hidratación; por lo tanto no necesariamente se presenta glucosuria en hiperglucemias. La presencia de glucosa en la orina debe evaluarse en conjunto con otras pruebas especialmente las concentraciones plasmáticas, la proteinuria, cetonuria y gravedad específica. Las tiras comerciales permiten detectar la glucosa en orina con base en la reacción de la glucosa oxidasa y un cromógeno que permite evaluarla. Los falsos positivos pueden presentarse por la contaminación con hipoclorito; los falsos negativos pueden resultar por altas concentraciones de ácido ascórbico, importante en los caninos que sintetizan cantidades variables de ácido ascórbico, igualmente una alta densidad superior a los 1020 acompañada de un pH alcalino puede inhibir la reacción en la tira y favorecer los falsos negativos.

IV. CETONAS: Los cuerpos cetónicos se forman durante el catabolismo de los ácidos grasos, en condiciones en que el individuo recurre a ellos como principal fuente energética. Uno de los productos intermedios de este proceso es el acetil CoA, el cual entra normalmente al ciclo de Krebs, reaccionando con oxalacetato para formar citrato, cuando no existen carbohidratos disponibles o hay fallas en su aprovechamiento, el oxalacetato se utiliza para formar glucosa y el acetil CoA se desvía para formar cuerpos cetónicos, que son el ácido aceto acético (diacético), el -hidroxibutírico y la acetona; cuando la capacidad de los tejidos para utilizar los cuerpos cetónicos es superada estos se excretan en la orina. Normalmente los cuerpos cetónicos aparecen en procesos de inanición, desordenes del metabolismo de los carbohidratos y alteraciones hepáticas. Su determinación con tiras reactivas permite identificar la presencia de el ácido diacético únicamente, con base en la reacción con nitro prusiato de Na y un buffer alcalino formando un compuesto de color.

V. BILIRRUBINA Y UROBILINÓGENO: En el capítulo de alteraciones del sistema hepático se menciono el ciclo metabólico de la bilirrubina, para el caso del análisis de orina es importante aclara que la bilirrubina no conjugada es insoluble en agua y no se filtra por el glomérulo, la conjugada es hidrosoluble y puede ser filtrada, dependiendo de las concentraciones plasmáticas, que por lo general son muy bajas y la excretada en la orina es poco detectable. Dependiendo del tipo e ictericia (pre – hepática, hepática o post – hepática) variaran los niveles plasmáticos de bilirrubina no conjugada y conjugada y así mismo se reflejara en la orina, igualmente las concentraciones de urobilinógeno varían dependiendo de la





concentración de bilirrubina conjugada en el intestino, teniendo en cuenta la tasa de hemólisis, la capacidad de conjugación del hígado y el flujo adecuado a la luz intestinal. En una ictericia pre hepática, la bilirrubina no conjugada aumenta considerablemente, esta no se excreta por vía renal, sin embargo el hígado aumenta la tasa de conjugación y excreción de bilirrubina conjugada al intestino, se produce mas urobilinógeno que se elimina en la orina, así en una ictericia de tipo hemolítico en la orina la bilirrubina es negativa o levemente aumentada y el urobilinógeno esta aumentado. Para el caso de una ictericia hepática la capacidad de conjugación puede no afectarse, sin embargo la captación del urobilinógeno en sangre por parte del hígado disminuye, aumenta su concentración plasmática y se excreta en niveles aumentados. En una ictericia de tipo post hepática, la obstrucción del conducto biliar impide que llegue bilirrubina conjugada al intestino esta se devuelve a la circulación general y se excreta en orina en niveles aumentados; como no se forma el urobilinógeno, este disminuye en la orina. Las tiras reactivas utilizan la reacción de acoplamiento de la bilirrubina con una sal de diazonio en un medio ácido produciendo un compuesto de color. El urobilinógeno reacciona con el dimetilaminobenzaldehído para formar un compuesto de color en un medio fuertemente ácido.

VI. NITRITOS: La presencia de nitritos en la orina se atribuye a la capacidad que tiene las bacterias que causan comúnmente infecciones del tracto urinario de transformar el nitrato de la orina en nitrito. La ausencia de nitritos se traduce en ausencia de bacterias, ya que pueden existir algunas que no son forman nitritos, no se dio el tiempo necesario a la orina para que se diera esta reacción, la orina no contenía nitrato o que el nitrito se transformo en nitrógeno el cual no es detectable el la tira. 7.3 ENZIMURIA. Una forma de evaluar el daño renal especialmente de los túbulos renales, se basa en la determinación de la concentración de algunas enzimas en la orina; la -GT y la FAS son enzimas que presentan actividad relativamente alta en las células epiteliales tubulares, las cuales al sufrir daño especialmente en procesos inflamatorios no infecciosos como los originados por sustancias nefrotoxicas, vierten el contenido enzimático de la membrana celular a la luz del túbulo renal, lo que permite evaluar su actividad en la orina; posterior a la centrifugación, e inferir la magnitud del daño renal, así como la duración y proceso de recuperación del proceso inflamatorio. La concentración normal de -GT en la orina del equino no debe ser mayor a 15 U/L.

EXCRECIÓN FRACCIONAL. La excreción de algunos electrolitos en la orina esta influenciada por la dieta, la terapia de fluidos y el funcionamiento renal. La medición de los valores de los electrolitos en la orina deberían ser un buen indicador de los excesos o deficiencias en la dieta, sin embargo debido las variaciones propias en el volumen urinario como mecanismo de regulación hídrica no es confiable la interpretación de estos resultados. Actualmente se utiliza la depuración fraccional o excreción fraccional, este concepto hace referencia a la relación matemática que se establece entre las concentraciones séricas y en orina del electrolito y de creatinina. Esta metabolito es utilizado como referencia, teniendo en cuenta que su excreción en orina es constante y permite establecer el volumen de filtración glomerular. La ecuación que integra estos valores es la siguiente:

Electrolito en Orina / Creatinina Orina





EF =

El valor calculado se multiplica por 100 para expresarlo como el porcentaje del electrolito filtrado que es excretado. En la tabla 4 se muestran los rangos normales de referencia para la Excreción Fraccional.

Canino Felino Equino Bovino Ovino

Sodio 0-0,7 0,24-0,1 0,02-1 0,2-1,43 0-0,071

Potasio 0-20 6,7-23,9 15.65 15-63 80-180

Cloro 0-0,8 0,41-1,3 0,04-1,6 0,4-2,3 0-4,7

Fósforo 3-39 17-73 0-0,2 ------- 0-0,53

Tomado de Meyer y Harvey, 2000

Tabla 4. Rangos de referencia para la Excreción Fraccional PRUEBAS DE FUNCIONAMIENTO RENAL.

I. CREATININA: Es un producto de la condensación de la creatina que mediante la creatina quinasa muscular se convierte en fosfocreatina y finalmente se convierte en creatinina. Esta formación tiene un ritmo constante y es un reflejo indirecto de la masa muscular, su eliminación es exclusivamente renal y se constituye así en un excelente marcador de la función renal, teniendo en cuenta que no es reabsorbida en los túbulos renales. Igualmente la creatinina se convierte en un buen indicador en conjunto con la concentración del Nitrógeno Ureico Sanguíneo (NUS) del equilibrio hídrico del individuo y de las alteraciones en la tasa de filtración glomerular. Métodos de Medición. La creatinina reacciona con el pricato en un medio alcalino originando un compuesto de color, se mide en una reacción cinética de varios puntos la velocidad de formación del color y es evaluada por espectrofotometría. Interferencias en la Determinación.

Electrolito en Suero / Creatinina en Suero





Los sueros lipemicos, hemolizados y con bilirrubinas mayores a 10 mg/dl.

II. NITRÓGENO UREICO SANGUÍNEO (NUS) La urea es formada por el hígado y representa el principal producto del catabolismo proteico en los carnívoras y omnívoras. La urea atraviesa el filtro glomerular y es reabsorbida en un 40% por lo túbulos renales. Este metabolito se constituye al igual que la creatinina en un excelente indicador del funcionamiento renal y de el estado de perfusión del riñón asociado al estatus hídrico del individuo. Métodos de Medición. La urea presente en la muestra origina un indofenol coloreado que se cuantifica espectrofotometricamente. Interferencias en la Determinación. Hemólisis marcadas y Bilirrubina superior a los 20 gr/dl. Azotemia: La Azotemia es el termino que defina el aumento en plasma de las concentraciones del NUS y de la Creatinina, este evento puede ser originado de tres formas:

Azotemia Pre renal: Cuando se compromete el estatus hídrico y el volumen de filtración renal disminuye, especialmente en casos de deshidratación.

Azotemia Renal: En los procesos inflamatorios del riñón, se disminuye la capacidad de

filtración. Azotemia Post renal: En casos de obstrucciones del tracto urinario, la creatinina y el NUS

presentes en la orina son reabsorbidos a la circulación general por una diferencia en el gradiente d concentración.

ALTERACIONES DEL SISTEMA MUSCULAR.

El músculo consta de fibras multinucleadas, que aunque similares estructuralmente, varían de acuerdo a criterios funcionales y metabólicos. En la practica veterinaria existen dos enzimas que permiten evaluar la integridad de las células musculares y hacer el seguimiento de la enfermedad con fines terapéuticos y de pronóstico. CREATININA KINASA (CK) Dentro del conjunto de actividades enzimáticas que pueden valorarse en la enfermedad muscular, el indicador más sensible es la Creatinina Kinasa, esta enzima se encuentra en varios tejidos y órganos, su actividad es mínima en el hígado, riñón e intestino, y se encuentra en altas concentraciones en el músculo cardiaco, el cerebro y especialmente en el músculo estriado. Los niveles séricos de CK varían dependiendo de la integridad tisular de estos tejidos, la lesión celular y el derrame enzimático es la causa mas frecuente del aumento de su actividad en el plasma.





La CK cataliza la reacción reversible de Creatinina Fosfato en presencia de ADP para formar Creatina + ATP, como mecanismo de almacenamiento energético para el metabolismo celular, de esta reacción la Creatinina se deriva de forma irreversible a partir de la creatina por la deshidratación no enzimática, esta pasa rápidamente al plasma en un ritmo constante que es proporcional a la masa muscular y se filtra libremente y de manera constante en el riñón para ser excretada en la orina, por lo tanto la concentración de creatinina en plasma se determina para evaluar directamente la funcionalidad renal. La CK presenta especificidad celular, no esta presente en el Hígado y tiene tres isoenzimas, la CK-MM perteneciente a la musculatura estriada, la CK-MB del miocardio y la CK-BB del encéfalo. En Medicina Veterinaria la determinación de la CK se realiza sin diferenciar cada una de la s isoenzimas y un aumento de la concentración plasmática de la CK total se atribuye principalmente a elevaciones de la fracción de músculo estriado. La medición de CK total en el Líquido Cefalorraquídeo es útil como marcador de enfermedad en el Sistema Nervioso Central. En los felinos domésticos las concentraciones de CK total son menores que en el resto de especies, esta situación relacionada con una masa muscular relativamente menor implica que una variación mínima de las concentraciones plasmáticas sea de importancia clínica. La CK puede aumentar en caninos y felinos por deficiencias de la enzima Fosfato Fructoquinasa, hipotiroidismo, hiperadrenocorticismo y distrofia muscular entre otras causas. En equinos es excelente indicador de las lesiones del músculo estriado en entidades como rabdomiolisis y necrosis muscular post ejercicio. Métodos de Medición. La concentración de CK se determina con base en las reacciones acopladas de la hexoquinasa y glucosa 6 fosfato deshidronegasa a partir de la formación de NADPH, es una reacción cinética cuantificada por espectrofotometría. Interferencias en la Determinación. La inyección intramuscular de grandes volúmenes puede dar lugar a incrementos de la concentración así como el uso de y el uso de Anfotericina B, ampicilina, agentes anestésicos inhalados, anticoagulantes, aspirina, dexametasona, furosemida y después de actividad física excesiva. AST. Se encuentra en las mitocondrias de las células musculares, la AST puede aumentar en paralelo o posterior a la CK después de la injuria celular, pero en mucho menor magnitud y con una disminución en plasma mas lenta. MIOGLOBINA.

Aunque no se trata de una enzima, es una molécula análoga de la hemoglobina plasmática pero con funciones específicas de las células musculares. La concentración de mioglobina plasmática puede elevarse cuando hay destrucción masiva de las fibras musculares, auque es un buen indicador de alteraciones de la musculatura es poco sensible frente a la medición de enzimas como la CK o la AST. La presencia de mioglobina en sangre se evidencia luego de centrifugar la muestra con o sin anticoagulante, y el suero o plasma aparecerán con un tinte rojizo que puede ser mas o menos intenso dependiendo de la concentración, igualmente la orina de animales con altas concentraciones de mioglobina plasmática aparece con el mismo color, y debe diferenciarse de otras causas de orinas colúricas como hematuria y hemoglobinuria





EQUILIBRIO ACIDO-BASE DISTRIBUCIÓN DEL FLUIDO CORPORAL. La proporción de agua en el cuerpo de un animal varia entre 45 y 70% del peso corporal, y el porcentaje es dependiente de la cantidad de grasa en el cuerpo. Como la grasa contiene poca agua, un animal delgado tiene un porcentaje mas alto de agua corporal que un individuo gordo. Del fluido corporal, el 40-45% corresponde al fluido intracelular ( FIC ) y el 20-25% corresponde al fluido extracelular ( FEC ), que a su vez esta en tres compartimientos: intravascular (plasma, aproximadamente 5 %), intersticial (incluyendo la linfa ) y transcelular ( que es la porcion mas pequeña e incluye el líquido cerebro espinal, el liquído articular, el contenido intestinal y los líquidos de las cavidades abdominal y torácica entre otros). Aunque no es posible realizar una medición directa de la composición del FIC, se reconoce que posee una alta concentración de K + y fosfatos, y una baja concentración de Na + y Cl- con respecto al FEC. La estimación de la composición del FIC se basa en el conocimiento del intercambio de fluido entre ambos compartimentos. En el FEC los iones predominantes son el Na + y el Cl -; existe una libre circulación de agua y electrolitos entre las diferentes localizaciones, siendo la alta concentración de proteínas en el plasma la diferencia fundamental con respecto a los fluidos intersticial y transcelular. Los electrolitos y el agua se mueven libremente entre los compartimentos de FEC y FIC. El agua se mueve rápida y constantemente, su movimiento es dependiente parcialmente de los efectos físicos de la presión hidrostática mas los efectos osmóticos de las proteínas plasmáticas del FEC. Estas proteínas contrarrestan la tendencia de los fluidos a moverse desde las áreas de alta presión intra vascular hacia las áreas de baja presión extravascular. El escape de agua y electrolitos depende mas de las diferencias de osmolaridad entre los fluidos intracelular e intersticial que de la presión hidrostática. Los mecanismos homeostáticos del cuerpo están diseñados para mantener la presión osmótica del fluido extracelular en un constante equilibrio con los demás compartimentos. Una comparación entre las concentraciones de aniones y cationes en el suero muestra que hay una proporción exacta entre el total de aniones y el total de cationes, en una neutralidad eléctrica que se mantiene todo el tiempo. Cualquier incremento en un catión, es acompañado de la salida de una carga equivalente, bien sea mediante la eliminación de otros cationes, el ingreso de aniones compensatorios, o ambos. De la misma forma se equilibraría el ingreso de cualquier carga negativa. En algunas situaciones, especialmente en los procesos de excreción y reabsorción tubular renal, los cambios en la electro neutralidad, actúan como un mecanismo importante para el arrastre de determinados solutos de acuerdo con su carga eléctrica. La neutralidad eléctrica definida como la equivalencia entre aniones y cationes, no debe confundirse con la neutralidad ácido-base ( pH 7.0) que depende de la distribución de varios compuestos y su grado de disociación. La presión osmótica de cualquier fluido esta directamente relacionada con el numero de partículas disueltas en una unidad de solvente. El efecto osmótico se mide en osmoles (osm.) o miliosmoles (mosm.). Un osmol de una sustancia ionizada se define como el peso molecular en gramos de la sustancia multiplicado por el numero de iones en los cuales se disocia. La osmolaridad del plasma en los animales domésticos es de 300 mOsm/Kg de agua plasmática. El sodio(Na +) es el principal catión en el FEC y cloro( Cl-) y bicarbonato(HCO3-) los principales aniones. En el FIC los principales aniones son el potasio(K +) y el magnesio(Mg +) y los principales aniones los fosfatos orgánicos y las proteínas. Debido a su alta concentración, el Na + y el K + son los principales responsables del mantenimiento de la presión osmótica en sus respectivos compartimentos. ELECTROLITOS Los valores séricos de los electrolitos no son un reflejo exacto de la concentración corporal total. Por tanto las desviaciones con respecto a los niveles normales deben interpretarse teniendo en





cuenta las diferentes opciones de compensación y desplazamiento del agua y los electrolitos entre los diferentes compartimentos.

I. SODIO: Hasta un 50% del contenido total de Na + en el cuerpo se mantiene en el FEC donde cumple su función primordial de mantenimiento de la presión osmótica y regulación del volumen sanguíneo en forma indirecta. La cantidad de Na + esta controlada por el consumo en la dieta (ocasionalmente los herbívoros pueden sufrir deficiencias dietarias que se compensan con la suplementación habitual de sal) y las perdidas a trabes de orina, sudor y heces. El Na + es filtrado en el glomérulo, pero la mayor parte es reabsorbida a nivel tubular, bajo estrecha regulación de la aldosterona; si hay un exceso de Na + en el cuerpo se reduce la secreción de aldosterona, con la consecuente inhibición de su reabsorción, permitiendo la eliminación a través de la orina. La reabsorción de Na + requiere que haya un paso equivalente de otro catión ( K + o H +) en la dirección opuesta. La excreción a través de las otras vías es comparativamente reducida, pero la eliminación fecal puede ser importante en las especies con heces de consistencia mas fluida.

Hiponatremia: De forma poco frecuente ocurre por un efecto de dilución cuando hay un ingreso o mantenimiento excesivo de agua que sobrepasa la capacidad de excreción, como en la polidipsia primaria o los trastornos de eliminación del agua. Es mucho más común que ocurra por aumento en las perdidas de Na + como en la depleción gastrointestinal por vomito o diarrea. En el caso de la Diabetes mellitus, la glucosa como soluto en el plasma, crea un gradiente osmótico para la salida de agua desde el interior de las células, que al no acompañarse de electrolitos, provoca dilución del Na + plasmático; posteriormente se produce diuresis osmótica, cuando el riñón aumenta la excreción de Na + para eliminar el exceso de volumen circulante y normalizar la osmolaridad del FEC, elevada por el exceso de glucosa. Otras causas incluyen la Insuficiencia adrenocortical (con ausencia de aldosterona), las perdidas en el tercer espacio (incluyendo uroperitoneo, peritonitis y otras efusiones) y las iatrogénicas (administración de diuréticos, soluciones endovenosas hipotónicas). Finalmente puede ocurrir una perdida importante a través de quemaduras o heridas de gran extensión, pero en estos casos la perdida simultanea de líquidos enmascara el déficit de Na+.

Hipernatremia: En estos casos hay una disminución del agua corporal en relación con los solutos. Todos los estados hipernatremicos, son hipertónicos. Generalmente no son evidentes mientras el paciente tenga libre acceso al agua. Las situaciones clínicas más comunes son Diabetes insípida (deficiencia de hormona antidiurética), insuficiencia renal crónica y aguda, hiperadrenocorticismo (con hiperaldosteronismo) y aumento no compensado de las perdidas insensibles (sudoración, respiración en situaciones en las que la perdida de agua sea proporcionalmente mayor a la de Na +). De forma iatrogénica puede producirse por aumento en la ingestión de sal o suministro de soluciones endovenosas hipertónicas. En el laboratorio, de forma artificial por inadecuado manejo de la muestra que permita la evaporación del suero.

II. POTASIO La mayoría de los animales consumen un exceso de K+ en su dieta, por lo que los mecanismos de regulación tienden a favorecer su eliminación. En el riñón ocurre filtración glomerular manteniendo





una concentración similar a la del plasma; a su paso por el túbulo contorneado proximal y el asa de Hendle ocurre una reabsorción casi completa. Los segmentos finales del nefrón, el túbulo contorneado distal y los túbulos colectores, son los que finalmente determinan la concentración final de K + en la orina, mediante secreción (por escape pasivo) cuando se requiere eliminación de exceso, o absorción neta (mediante ATP-asa Na – K ) ubicada en las membranas de las células tubulares) en los estados de deficiencia. Para su reabsorción el K + debe competir con el H+, y además debe contrarrestar el efecto de la aldosterona provoca su excreción para facilitar la reabsorción de Na +. Nuevamente puede haber una perdida fecal importante en las especies cuyas heces poseen mayor cantidad de agua. Dado que el 98% del K + es intracelular, la regulación de su concentración sérica depende no solo del balance externo, sino también del intercambio entre las células y FEC, que se regula por mecanismos de transporte activo como la actividad de la enzima ATP-asa Na - K presente en la membrana celular estimulando el ingreso de K y la salida de Na + o el ingreso de K + asociado al ingreso de glucosa por efecto de la insulina, y mecanismos de transporte pasivo relacionados con las alteraciones en el pH y la osmolaridad del FEC (ingreso de H + en intercambio por K + como mecanismo de amortiguación en casos de acidosis, el ingreso de K + a la célula por efecto de la elevación de la concentración de bicarbonato, o los aumentos repentinos de la osmolaridad en el FEC que provocan salida de agua desde las células con una posterior salida pasiva de K +) A diferencia de los disturbios del sodio en los que la alteración no tiene una manifestación clínica evidente, los disturbios del potasio se reflejan en alteraciones de la excitabilidad celular que provocan principalmente tendencia a la bradicardia y a la presentación de arritmias por su efecto en el músculo cardiaco, íleo a nivel del músculo liso gastrointestinal y parálisis generalizada en las deficiencias mas graves que afectan al músculo esquelético. En estados de acidosis metabólica, el K + intracelular es utilizado para mantener el balance ácido base mediante su intercambio por el H+ extracelular que se encuentra en exceso. El efecto se ve amortiguado por un aumento en la excreción renal de K +, a menos que exista una disfunción concomitante que facilite el desarrollo de hiperkalemia. Este es un ejemplo de la dificultad en la interpretación de los resultados, ya que a veces se obtiene un valor serico elevado, cuando en realidad existe una deficiencia neta de K+, al ocurrir depleción de los niveles en el FIC por efecto del intercambio con H+. Así si un animal acidotico tiene niveles de K+ serico normales, debe considerarse hipokalemico y establecer la terapia apropiada.

Hipokalemia: Las causas más comunes son el aumento en las perdidas( por enfermedad gastrointestinal con vomito, diarrea y disminución de la absorción, o las asociadas con aumento en la eliminación renal por insuficiencia renal crónica e hiperaldosteronismo) o la tras locación hacia el FIC que puede ocurrir por los mecanismos mencionados previamente. Entre las causas iatrogénicas se incluyen el suministro de soluciones endovenosas deficientes en K + o suplementadas con bicarbonato, la terapia insulínica o la administración de diuréticos.

Hiperkalemia: Puede ocurrir durante el periodo anurico o oligurico de la falla renal, cuando el ingreso es constante, sin que ocurra una eliminación apropiada. La destrucción celular masiva o la alteración en la permeabilidad de la membrana plasmática (traumatismos, quemaduras, hemólisis, rabdomiolisis e inclusive en shock y daño tisular por anoxia) permite la salida del K + hacia el FEC.





De forma iatrogénica por suplementación con cloruro de potasio o utilización de fármacos inhibidores de la ATP-asa Na -K. En el laboratorio puede ser frecuente la elevación artificial de los niveles de K+ por hemólisis de las muestras.

III. CLORO: La excreción, absorción y distribución del Cl- ocurren de forma pasiva, de acuerdo con los gradientes establecidos por el transporte de Na+. Su medición es de escaso valor diagnostico, pero se utiliza para el calculo de la brecha aniónica.

Hipocloremia: Ocurre principalmente por perdida o secuestro a nivel gastrointestinal (vomito prolongado, obstrucción del flujo a través del píloro), falla renal avanzada, insuficiencia adrenal o exudación a partir de quemaduras o heridas abiertas.

Hipercloremia: Puede ocurrir por deshidratación, acidosis tubular renal o por efecto iatrogénico. ECUACIÓN DE HENDERSON HASSELBALCH Como resultado de la disociación del ácido carbónico la concentración de hidrogeniones está controlada por la interrelación de todos los ácidos, las bases y los buffer de la sangre. La ecuación de Henderson - Hasselbalch, expresa toda la relación ácido-base biológica, evaluando la relación del ácido carbónico (HCO) con el bicarbonato (HCO¯).

(1) HCO H + + HCO¯ La ley de acción de las masas dicta que en la ecuación anterior (1) el producto de concentraciones de la derecha, dividido por la concentración de la izquierda es igual a una constante KА:

[H+][HCO¯] (2) KА = ----------------------- [HCO]

Se debe tomar el logaritmo de ambos lados de esta ecuación (2) para expresar la concentración de hidrogeniones en forma de pH.

[H+][HCO¯] (3) log KА = log ----------------------- [HCO] [H+]+ log[HCO¯]





(4) log KА = log ----------------------------- [HCO]

Como resultado de la transposición del log de la concentración de hidrogeniones (log[H+]) al lado izquierdo de la ecuación (4) y del log KА al lado derecho de la ecuación se obtiene:

[HCO¯] (5) -log [H+ ] = -log KА + log ---------------- [HCO]

Se ha definido el término para el log. negativo de la concentración de hidrogeniones (-log [H+]) como pH. El término para el log negativo de KА (-log KА ) es pK. Por lo tanto la ecuación (5) puede ser enunciada:

[HCO¯] (6) pH = pK + log ---------------- [HCO]

El pK representa el valor de pH en el cual el soluto está disociado en un 50%. En la ecuación (6) (una expresión común de la ecuación de Henderson Hasselbalch), si el pK es igual al pH, existe una concentración igual de ion bicarbonato y ácido carbónico. La importancia del pK reside en que este representa el pH en el que se puede alcanzar una mayor capacidad buffer para esa reacción en particular. En la ecuación (6) la concentración de ácido carbónico es dependiente de la cantidad de dióxido de carbono disuelto. Esta depende a su vez se su solubilidad, expresada como coeficiente (s) de solubilidad y la presión parcial de dióxido de carbono (PC0). En la práctica clínica, la concentración de ácido carbónico de la ecuación (6) es reemplazada por la presión parcial de solubilidad, multiplicado por la presión parcial de dióxido de carbono (s x PCO):

[HCO¯] (7) pH = pK + log ---------------- s x PCO

MECANISMOS BUFFER RENALES Los riñones constituyen la principal vía de excreción para la carga ácida metabólica normal y los metabolitos ácidos patológicos. El proceso consiste básicamente en excretar hidrogeniones hacia la orina y reabsorber iones bicarbonato hacia la sangre. Existen dos factores específicos de las células tubulares renales que posibilitan la excreción de hidrogeniones: 1. Hay un intercambio activo de iones sodio (Na +) por hidrogeniones entre las células tubulares y

el filtrado glomerular (líquido tubular). 2. Las células epiteliales renales contienen anhidrasa carbónica, enzima que acelera la

hidratación y la deshidratación del dióxido de carbono, asegurando una alta tasa de formación intracelular de ácido carbónico.

HO + CO HCO HCO¯ + H+.





Las células epiteliales renales obtienen CO de la sangre o del líquido tubular. El total de hidrogeniones excretados es la que resulta significativa para el equilibrio ácido-base metabólico. Debido a que los riñones no pueden excretar orina con un pH inferior de 4,4, menos del 1% de la excreción urinaria de ácidos se presenta como H+ libres. La excreción adecuada de ácidos no volátiles depende del buffer urinario fosfato y amonio. Los mecanismos buffer que facilitan la excreción de H+ hacia la orina y el agregado de HCO¯ filtrado para formar HCO son:

Reabsorción del ion bicarbonato filtrado. La absorción tubular renal de Na + determina la excreción de H+ hacia el líquido tubular, donde reacciona con el HCO¯ filtrado para formar HCO. La anhidrasa carbónica asociada con el ribete en cepillo luminal cataliza la disociación de HCO en CO y HO. El CO puede difundir nuevamente hacia la célula y reemplazar al CO consumido originalmente. Los iones sodio y HCO¯ ingresan en la sangre.

II Excreción de ácidos titulables.

Cuando se intenta recuperar la mayor parte del HCO¯ del líquido tubular, la absorción tubular de Na + determina la excreción de H+ hacia el líquido tubular, en el que la relación del HPO4= respecto del HPO4¯ es 4:1. El H + se combina con el HPO4= para formar HPO4¯, que no es reabsorbido con facilidad y es eliminado por la orina. Los iones sodio y HCO¯ ingresan en la sangre.

Formación de amoníaco.

Cuando se ha consumido el buffer fosfato, la absorción tubular renal de Na + determina la excreción de H + hacia el líquido tubular , donde hay amoníaco (NH) siempre que exista una carga ácida significativa en el organismo. El NH se forma por la desaminación de glutamina dentro de las células tubulares e ingresa pasivamente en el líquido tubular. El H + se combina con el NH para formar NH4+, que no puede atravesar la membrana de la célula tubular y por lo tanto, es eliminado con la orina. Los iones sodio y HCO¯ ingresan en la sangre.

RESPUESTA RENAL AL DESEQUILIBRIO ACIDO-BASE. La respuesta renal al desequilibrio ácido-base, es un factor esencial que debe ser bien comprendido para evaluar el estado ácido-base correspondiente.

Acidosis metabólica La disminución de la concentración de bicarbonato plasmático determina una menor disponibilidad de bicarbonato en el líquido tubular para la excreción de hidrogeniones. Los buffer amonio y fosfato son utilizados para optimizar la excreción de hidrogeniones. Estos mecanismos requieren niveles plasmáticos adecuados de fosfato y sodio.

Acidosis respiratoria El aumento de los niveles de la PCO en sangre (mayor contenido de CO), aumenta el nivel de la PCO de las células tubulares, aumentando la concentración intracelular de hidrogeniones y estimula los mecanismos de excreción. Como resultado se presenta una mayor excreción de H + y mayor adición de HCO¯ a la sangre. Estos mecanismos requieren niveles plasmáticos adecuados de fosfato y sodio.

Alcalosis metabólica





El riñón posee una capacidad efectiva para disminuir la recuperación o ganancia de iones bicarbonato de la orina y a su vez de reducir la excreción de hidrogeniones, como mecanismo de protección contra la alcalosis metabólica mientras no requiera de una mayor absorción de sodio o potasio de la normal. La hiponatremia provoca aumento de la reabsorción renal de sodio, exigiendo una mayor excreción de H + y retención de HCO¯. Altos niveles de aldosterona aumentan la reabsorción de sodio en los túbulos distales. La hipopotasemia aumenta la reabsorción de K+ y utiliza los mismos mecanismos involucrados en la reabsorción de sodio.

Alcalosis respiratoria Bajos niveles del PCO2 en los túbulos renales, disminuyen la producción de H+ por el sistema de la anhidrasa carbónica, lo que reduce la recuperación d e HCO¯ y le excreción de ion H+ DIAGNOSTICO DE LOS DESEQUILIBRIOS ÁCIDO BASE METABÓLICOS. La existencia de niveles anormales de HCO¯ plasmático de cómo resultado la presentación de desequilibrios ácido –base metabólicos. La ecuación (7) permite calcular la concentración plasmática de HCO¯ cuando se conocen los valores de pH y PCO. Como el pH y PCO son medidas como parte del ejercicio clínico en el análisis de Gases Sanguíneos, esto constituye la clave de la evaluación del equilibrio ácido – base metabólico .

Bicarbonato Estándar: En la actualidad el HCO¯ plasmático se calcula a partir de la determinación de pH y PCO de la muestra de plasma. La tabla 8 muestra los valores de referencia para el pH, PCO2 y (HCO3

-), sin embargo estos valores varían dependiendo de las especie y solo constituyen una guía rápida de consulta general.

[HCO¯] p pH = ----------------

PCO2

PH PCO2 (mm Hg) (HCO3-) (mmol/L)

Normal 7,35-7,45 35-45 22-26 Acidosis <7,35 >45 <22 Alcalosis >7,45 <35 >26

Tomado de Shapiro, Peruzzi y Templin, 1996 Tabla 8. Parámetros de Henderson – Hasselbalch.

Exceso – Déficit de base. La sangre en condiciones normales tiene una gran capacidad buffer permitiendo cambio significativos del contenido ácido con escasa modificación de la concentración de H+ libres (pH). Existe un mayor potencial de modificación del pH secundario a cualquier cambio dado del contenido de H+, debido a que la capacidad buffer esta disminuida ( Acidemia – Alcalemia) La capacidad buffer no solo depende de la concentración de HCO¯ sino también de la masa eritrocitaria y otros factores.





Nomenclatura pH PCO2 [HCO¯] p EB

Acidosis Metabólica Descompensada (Aguda) N (-)

Parcialmente Compensada (Sub. Aguda)

(-)

Compensada (Crónica) N (-) Alcalosis Metabólica

Descompensada (Aguda) N (+)

Parcialmente Compensada (Sub. Aguda)

(+)

Compensada (Crónica) N (+) Tomado de Shapiro, Peruzzi y Templin, 1996

Tabla 9. Nomenclatura Ácido – Base metabólica. o degeneración articular en la cual la presencia de macrófagos activados y la ausencia o bajo número de neutrófilos es característica.

I. ANÁLISIS BIOUIMICO: La concentración de Proteínas Totales es un valor que no se utiliza como en la mayoría de los casos para diferenciar líquidos inflamatorios o no inflamatorios, para esto se utiliza el recuento celular. En el líquido articular se puede determinar la concentración de glucosa para establecer una relación y diferencia con la concentración plasmática para la detección de artritis séptica, igualmente se han realizado otros estudios con la actividad de enzimas como LDH y FAS para determinar procesos en los cuales hay injuria al cartílago articular.

ANALISIS DE LÌQUIDO CEFALORRAQUIDEO (LCR): El LCR es una importante ayuda para el diagnostico de enfermedades del SNC, este líquido se produce en el plexo coroideo en los ventrículos cerebrales y se difunde por el espacio sub. Aracnoideo en los hemisferios cerebrales y la medula espinal. Es un ultrafiltrado del plasma sanguíneo, a través de una barrera unidireccional selectiva desde el plasma. Las concentraciones de la mayoría de los solutos dependen de los niveles plasmáticos, teniendo en cuenta que el LCR esta en equilibrio osmótico con el plasma, la función del LCR es la de proteger mecánicamente y proveer lubricación a los diferentes segmentos del SNC dentro de la cavidad craneal y la médula espinal; proporcionar los mecanismos celulares y no celulares de defensa medular y cerebral; y servir de medio de transporte para algunos nutrientes. En cuanto a la técnica de obtención de una muestra de LCR, el sitio anatómico de punción y el calibre y longitud de la aguja a utilizar dependerán de la especie animal y la edad del individuo. La punción del espacio atlanto -occipital, previa tranquilización e inclinación de la cabeza es la forma mas utilizada el la mayoría de especies para obtener la muestra, sin embargo en los bovinos y





pequeños rumiantes la punción del espacio lumbosacro permite obtener mas fácilmente la muestra y disminuir los riesgos de contaminación con sangre.

I. ANÁLISIS MACROSCOPICO. Las características del líquido cefalorraquídeo que se evalúan son el color, la apariencia y la coagulación

Color: El LCR normalmente es incoloro, sin embargo debido a la dificultad para la obtención de la muestra es altamente probable que se contamine con sangre y presente coloraciones rosadas hasta francamente rojizas, este tipo de muestras no son indicadas para el análisis, ya que los elementos celulares y bioquímicos tienen concentraciones muy definidas en el LCR que se alteran fácilmente por la contaminación con sangre. Eventualmente se presentan coloraciones amarillentas que pueden ser atribuidas a las altas concentraciones de hemoglobina, leucocitos en cantidad moderada, ictericia o un alto contenido proteico.

Apariencia: El LCR es claro y traslucido, y no presenta turbidez; una muestra con ligera turbidez es considerada anormal, y esta dependerá del tipo de solutos presentes y su concentración, cuando el recuento celular es mayor a 500 cel/ul se evidencia turbidez en la muestra.

Coagulación: La muestra no debe coagular posterior a la extracción, si se forman pequeños coágulos dentro de la muestra, es indicador de una concentración de proteicas o fibrinógeno alta como reflejo de un proceso inflamatorio.

II. ANÁLISIS MICROSCOPICO.

Recuento de Glóbulo Blancos: Normalmente el LCR contiene un bajo número de leucocitos los cuales deben ser evaluados en el menor tiempo posible ya que se degeneran con el tiempo, puede conservarse la muestra para el recuento hasta por 10 horas a 2-8º C. El recuento se realiza en la cámara de Neubauer, sin la adición de diluyentes, teniendo en cuenta que el numero es muy bajo una dilución aumenta considerablemente el error en el valor reportado. El LCR se monta puro en la cámara y se realiza el recuento en los 9 cuadrantes grandes de la misma, en objetivo de 40x con el condensador completamente cerrado; el numero de células observadas se multiplica luego por 0,9 para expresar en cel/ul.





Recuento Diferencial:

Las células que predominan en el LCR son mononucleares linfocitos y eventualmente células monocitoides. No se observan ninguna línea celular polimorfonuclear, su presencia es la base para diferenciar en muchos casos un proceso inflamatorio de origen bacteriano y uno de origen viral, asociado a la concentración de proteínas totales. No es práctico realizar un extendido de la muestra para su evaluación microscópica teniendo en cuenta la baja cantidad de células presentes, por lo tanto se utiliza el método de sedimentación que permite agrupar las células para su tinción. Este método consiste en fijar a la lámina cubreobjetos con parafina un cilindro de vidrio de un diámetro aproximado de 1-2 cms., en el cual se deposita una pequeña cantidad del LCR homogenizado y se deja secar a temperatura ambiente, posteriormente se retira el cilindro de vidrio y quedan un área de sedimento seco fijado a la lamina el cual se tiñe con colorante de Wright, por un periodo de tiempo de 2 - 2 ½ minutos para el colorante y para el buffer de agua destilada. Figura 9 Precipitación del LCR para evaluación microscópica.

III. ANÁLISIS BIOQUIMICO:

Proteínas Totales: La concentración de proteínas ene l LCR es muy baja 12- 40 mg/dl, de las cuales la mayoría es Albúmina. Esta concentración aumenta en procesos inflamatorios especialmente de origen traumático y bacteriano, su medición se realiza de manera convencional por espectrofotometría, el refractómetro no tiene aplicación ya que no es capaz de diferenciar rangos de solutos tan bajos.

Glucosa: La concentración de Glucosa es aproximadamente el 60 al 70% de la concentración plasmática, Los valores en el LCR dependen de esta concentración, de la permeabilidad de la barrera hemática y de la presencia de microorganismos glicolíticos. Su determinación se realiza por técnicas colorimétricas como en plasma.

Creatinina Kinasa (CK):

Lámina Cubreobjetos.

Cilindro de Vidrio. Muestra de LCR.

Lámina para Tinción

SECADO





La medición de Ck total en el LCR refleja la actividad de la fracción CK-MB perteneciente al cerebro, la cual aumenta fácilmente en procesos de daño tisular en el SNC, como los procesos inflamatorios de origen infecciosos y no infeccioso (Trauma). ANALISIS DE LIQUÍDO PERITONEAL: El peritoneo es una membrana altamente permeable, que actúa como una barrera bidireccional y semipermeable para mantener el equilibrio de agua y solutos de bajo peso molecular entre la sangre y el fluido peritoneal

Histológicamente se compone de dos capas, la serosa en la cual se encuentra una delgada capa de células mesoteliales y la subserosa, a través de la cual pasan nervios y capilares sanguíneos. Macroscópicamente se divide en tres partes: el peritoneo parietal que cubre las paredes internas de la cavidad, el visceral que recubre la superficie de los órganos abdominales y las membranas serosas que contactan el peritoneo parietal y el visceral.

El Líquido peritoneal es un dializado del plasma sanguíneo, normalmente de bajo volumen, bajo recuento celular y baja concentración de proteínas, que provee lubricación a los órganos abdominales para su libre movimiento en la cavidad y alberga los mecanismos celulares y no celulares de defensa peritoneal.

La dinámica del LP y la transferencia pasiva de fluidos desde el plasma, esta regulada por la presión capilar, la presión del fluido intersticial, las presiones coloidosmóticas del plasma y del fluido Intersticial. Las alteraciones de estas presiones sumadas al estatus fisiopatológico de las superficies peritoneales, las alteraciones en la permeabilidad vascular y el flujo linfático determinan las características del Líquido Peritoneal

Se definen principalmente tres clases de efusiones: trasudados, trasudados modificados y exudados. Los trasudados son efusiones que se caracterizan normalmente por ser claros y no presentar color pero pueden variar hasta ser ligeramente amarillentos, no presentan olor, la concentración de proteína es menor a 3.0 gr/dl y con recuentos celulares bajos (menores de 5.000 cel/ul), las células presentes incluyen neutrófilos no degenerados, linfocitos, células mesoteliales, macrófagos y eventualmente eritrocitos

El trasudado modificado comprende aquellas efusiones que no presentan características definidas de trasudado o exudado, en líquido peritoneal se presenta usualmente por incremento del volumen del líquido en la cavidad sin aumento necesario de la celularidad o de las proteínas, aunque pueden elevarse sin alcanzar los valores que presentan los exudados, normalmente se asocian a





condiciones congestivas por aumento de la presión en los sistemas venoso o linfático, sin embargo esta clasificación es muy puntual, de uso limitado y no establece una correlación clínica definida.

Los exudados son el fluido proveniente de un proceso inflamatorio, se pueden clasificar como séptico y no séptico y los tipos de células encontradas dependerán de la causa y/o la duración de la inflamación usualmente son turbios con coloraciones que van desde blanco amarillentas hasta rojizas, con proteínas totales mayor a 3.0 gr/dl y recuentos celulares mayores a 10.000 cel/ul. En general el LP esta compuesto por células mesoteliales, leucocitos, macrófagos y ocasionalmente eritrocitos.

Las células mesoteliales forman la cobertura de las superficies peritoneales parietal y visceral, son capaces de fagocitar y transformarse dentro del tejido en macrófagos peritoneales, y que morfológicamente pueden ser no reactivas, reactivas y degeneradas dependiendo de la intensidad y duración del proceso inflamatorio que se presente. Dentro de los leucocitos hay células polimorfonucleares (PMN) y células mononucleares (MN), la línea PMN incluye los neutrófilos, eosinófilos y basófilos, y dentro de los MN se incluyen a linfocitos y monocitos. Los neutrófilos morfológicamente son idénticos a los que circulan en sangre, en el L. P.,. su presencia y predominio es normal y se aumentan cuando se presentan los exudados; los cambios tóxicos, degeneraciones del citoplasma o la presencia predominante de formas inmaduras se considera anormal e indica la presencia de un proceso inflamatorio activo en la cavidad; Los linfocitos se encuentran normalmente en bajas cantidades en el líquido peritoneal y tienen la capacidad de retornar a la circulación a través de las lagunas linfáticas diafragmáticas.

Los macrófagos peritoneales tienen como precursores a las células mesoteliales y los monocitos sanguíneos, su presencia es normal en la cavidad y se constituyen como una de las primeras líneas de defensa celular, el aumento de linfocitos y macrófagos peritoneales se asocia principalmente a procesos inflamatorios crónicos.

En cuanto al recuento diferencial, la proporción entre los porcentajes de neutrófilos y de mononucleares es aproximadamente de 1:1 en los bovinos y en los caninos, equinos y felinos las líneas PMN presentan predominio sobre las células mononucleares. El porcentaje de eosinófilos es variable y depende entre otros de condiciones de injuria tisular y diferentes cargas parasitarias dependiendo de su migración.

Los líquidos corporales de individuos sanos, incluida la sangre, tienen un número bajo de eosinófilos respecto a las concentraciones que se mantienen en órganos y tejidos especialmente aquellos con grandes cantidades de células de mast, como la piel, los pulmones, el tracto gastrointestinal y los órganos genitales femeninos. La presencia de altos porcentajes de eosinófilos se asocia a entidades patológicas que se presentan en estos tejidos, con base en la gran capacidad que tienen estas células de responder a la liberación de histamina, a su capacidad de regulación de reacciones inflamatorias y alérgicas y a su actividad bactericida y parasiticida.





La eosinofilia como respuesta al parasitismo se genera cuando el organismo ha desarrollado sensibilidad al antígeno específico del parásito, teniendo en cuenta que los antígenos de los helmintos son potentes inductores de respuestas mediadas por IgE, la eosinofilia en sangre y en los tejidos para estos casos es proporcional al grado de estimulación por el antígeno y a la carga parasitaria.

Normalmente no se encuentran eritrocitos en el líquido, su presencia se atribuye a contaminación con sangre la cual no es significativa en el análisis de la muestra si el volumen de sangre no es mayor al 17% de la muestra de Líquido Peritoneal.

En el L. P. es normal encontrar sustancias hidrosolubles de bajo peso molecular como Glucosa y Lactato, los cuales pasan fácilmente de la sangre a la cavidad abdominal. En equinos la concentración de glucosa peritoneal es muy similar o ligeramente mas alta que la concentración de glucosa en sangre.

La disminución en la concentración de la glucosa peritoneal en equinos se asocia al incremento de la glicólisis anaeróbica por células metabólicamente activas como leucocitos o células neoplásicas y por microorganismos. Una concentración de glucosa en líquido peritoneal menor a 40 mg/dl o una diferencia mayor a 50 mg/dl con respecto a la concentración sérica puede ser indicadora de un proceso séptico en equinos, este valor tiene una especificidad del 95% y una sensibilidad del 80% para la detección de peritonitis séptica. La determinación del pH, glucosa y de la enzima Lactato Deshidrogenasa (LDH) en líquido peritoneal y líquido sinovial en equinos son reportadas para detectar procesos sépticos teniendo la ventaja de ser pruebas rápidas, de fácil realización y de costo más bajo que los cultivos microbiológicos

En cuanto a la técnica de obtención, en los equinos la punción se realiza en la porción mas baja del abdomen que corresponde a una distancia de 8 a 10 cms. caudal al xifoides, en los caninos se realiza frecuentemente en el punto medio entre el ombligo y la pelvis renal; en los bovinos y pequeños rumiantes esta recomendado realizar la punción en cuatro puntos distintos de la cavidad para hacer una valoración más precisa dada la baja capacidad del peritoneo bovino de realizar fibrinólisis y que predispone a la localización de procesos inflamatorios. Los cuatro sitos de evaluación se ilustran en la figura 10. El primer sitio evaluado se ubica en la parte craneal del abdomen a 5 cms. craneal al ombligo y a 6-8 cms. hacia la derecha de la línea media, las otras tres punciones se realizaron en la parte caudal del abdomen, dos de las cuales se hacen inmediatamente craneal a la glándula mamaria, 2 cms. a la derecha e izquierda respectivamente de la línea media; el último sitio se ubica 4 cms hacia medial y 5-7 cms. craneal del punto donde la vena mamaria sobresale en la pared abdominal.





Figura 10. Sitios de punción para la obtención de la muestra de Líquido Peritoneal en Bovinos Adultos y pequeños rumiantes..

El procedimiento se puede realizar bajo tranquilización o con los animales despiertos y en pie para el caso de los equinos y rumiantes, debe depilarse el área adyacente y realizar la punción de forma aséptica

El líquido puede ser colectado en un contenedor con EDTA y teniendo en cuenta el anticoagulante debe ser parcialmente extraído si la muestra es muy pequeña en volumen para evitar diluciones con el líquido peritoneal y generar alteraciones en el valor de las proteínas totales al ser medidas por refractometría.

En cuanto al análisis macroscópico se evalúan el color, la apariencia y el volumen.; para el análisis microscópico se realiza el recuento de células blancas (RCB) manualmente en un hematocitómetro, utilizando el diluyente hemolizante de Turk en dilución 1:50 en pipeta de blancos, se cuenta únicamente en los cuadrantes de las esquinas (Glóbulos Blancos) y el resultado se

OMBLIGO XIFOIDES

CAD

CAI

CRANEAL CAUDAL

VISTA VENTRAL ABDOMEN BOVINO

2

3

1 4

VENA MAMARIA

DERECHA

CPD

CPI





multiplica por 50 para expresar en cel/ul. Posteriormente la muestra debe ser centrifugada a 500 rpm por 5 minutos,, separar sobrenadante, extraer el sedimento y realizar dos extendidos delgados que se tiñen con colorante de Wright por un periodo de tiempo de 2 ½ minutos con el colorante y con el buffer de agua destilada respectivamente.

El recuento diferencial se realizó en 100 o 200 células observadas dependiendo del numero de células blancas presentes y se reportan los distintos tipos de células nucleadas en porcentaje sobre el numero de células observadas.

El número de células mesoteliales no se incluye en el recuento diferencial y debe reportarse como el número de estas células observadas por cada 100 leucocitos teniendo en cuenta que es mas importante clínicamente determinar las características morfológicas de estas células que su porcentaje en el recuento diferencial. Una parte del líquido peritoneal puede ser centrifugada en capilares sin anticoagulante a 12.000 rpm por 5 minutos y utilizar sobrenadante se utilizó para la medición de glucosa o la determinación de actividad enzimática.

ANALISIS DE LIQUÍDO SINOVIAL (L.S.): Las articulaciones que existen entre las uniones óseas se componen de un cartílago hialino y de una cápsula fibrosa delimitada por una membrana interna. El líquido sinovial llena completamente la cavidad y provee lubricación a la superficie articular y los nutrientes requeridos por el cartílago. este líquido se produce por ultra filtración de la red vascular en el tejido sinovial, y el ácido hialurónico se segrega en el dializado por las células sinoviales. El volumen normal de líquido depende del tamaño de la articulación y de la actividad que esta realiza, la artrocentesis esta indicada en casos de articulaciones distendidas, tumefactas y calientes; el análisis de permite evaluar la calidad del líquido articular y descartar procesos inflamatorios de origen infeccioso, traumático y degenerativo. La punción se realiza dependiendo de la especie y la articulación afectada, teniendo en cuenta que en algunos casos la muestra no es reflejo de toda la articulación por tener divisiones en la cápsula articular, sin importar el sitio debe realizarse preferiblemente previa desinfección quirúrgica de la zona de punción, no es necesaria la inmovilización química del individuo.

II. ANÁLISIS MACROSCOPICO:

Color: Generalmente el L. S. es de color amarillo claro, por el alto contenido proteico especialmente de Ácido hialurónico que constituye el 99% de las muco proteínas presentes. Una coloración rojiza puede indicar contaminación con sangre o un proceso hemorrágico al interior de la articulación. La presencia de grandes cantidades de leucocitos genera un aspecto blanquecino.

Apariencia: El líquido articular es ligeramente turbio, sin embargo la turbidez franca es asociada a procesos inflamatorios agudos por la presencia solutos en grandes cantidades, como proteínas y células de respuesta inflamatoria.





Calidad: Es muy importante evaluar la calidad del líquido, en cuanto a viscosidad y volumen obtenido, el líquido normalmente no coagula por estar ausente el fibrinógeno, si se genera coagulación indica un proceso inflamatorio en el cual las proteínas de elevado peso molecular pasa al interior de la articulación. La perdida de viscosidad de debe a la destrucción del ácido hialurónico por la hialuronidasa de los neutrófilos. La calidad puede ser evaluada indirectamente con la adición de líquido hemolizante de Turk, usado para los recuentos de Glóbulos Blancos en sangre, el cual precipita las proteínas del liquido articular y permite determinar la calidad de la muscina.

III. ANÁLISIS MICROSCOPICO: El líquido es evaluado de manera similar a los otros fluidos corporales, determinando el recuento celular, los valores normales de Glóbulos Blancos también varían dependiendo de la articulación examinada y se relaciona directamente con la actividad física y el tamaño de la articulación. Un recuento de 3000 cel/ul se considera normal, si se aumenta esta cantidad se asocia con una respuesta celular a procesos inflamatorios, los mas comunes de origen infecciosos por bacterias y no inflamatorios de origen traumático. El recuento diferencial se realiza en una lámina tenida con colorante de Wrigh por 3 minutos para el colorante y el buffer respectivamente, se realiza en 100 célula de las cuales normalmente predominan los polimorfonucleares neutrófilos sobre las células mononucleares. Es muy importante como en todas los análisis, evaluar la morfología de los neutrófilos y de la línea mononuclear, que puede indicar la presencia de bacterias o degeneración articular en la cual la presencia de macrófagos activados y la ausencia o bajo número de neutrófilos es característica.

IV. ANÁLISIS BIOUIMICO: La concentración de Proteínas Totales es un valor que no se utiliza como en la mayoría de los casos para diferenciar líquidos inflamatorios o no inflamatorios, para esto se utiliza el recuento celular. En el líquido articular se puede determinar la concentración de glucosa para establecer una relación y diferencia con la concentración plasmática para la detección de artritis séptica, igualmente se han realizado otros estudios con la actividad de enzimas como LDH y FAS para determinar procesos en los cuales hay injuria al cartílago articular





MICROBIOLOGIA

CONCEPTOS BÁSICOS:

BIOLOGÍA

SISTEMÁTICA ECOLOGÍA

MICROBIOLOGIA PARASITOLOGIA

PROCARIOTAS - EUCARIOTAS - SUBCELULAR EUCARIOTAS

BACTERIAS HONGOS VIRUS PROTOZOARIOS METAZOARIOS

HELMINTOS ARTROPODOS

MICROBIOLOGIA = Ciencia que se encarga del estudio de los microbios (Hongos, Bacterias y Virus).

MICROBIO O MICROORGANISMO = Son organismos muy pequeños, de tamaño microscópico, dotados de individualidad, con una organización biológica elemental. Pueden ser unicelulares multicelulares (los conformados por células indiferenciadas, que al asociarse no forman tej. , pues cada una de ellas constituye un organismo completo, independiente y dotado de la capacidad de reproducción).

MICROBIOLOGIA CLÍNICA = Es una disciplina aplicada de la medicina que estudia los microorganismos capaces de provocar enfermedades en los seres vivos.





TEORIA MICROBIANA DE LAS INFECCIONES = la misma resulta de la semejanzas existentes entre los procesos fermentativos y las enfermedades infecciosas (por ej. Ambos se producen por causa de microorganismos)

POSTULADO DE KOCH = Por el se establecen las condiciones que debe reunir un microorganismo para ser considerado como agente causal de una determinada enfermedad infecciosa. Tales condiciones son :

1. Demostrar la presencia del microorganismo en todas las personas enfermas y su ausencia en las personas sanas.

2. Que el microorganismo pueda ser aislado en un cultivo sólido a partir de las lesiones producidas en el enfermo.

3. Que el microorganismo pueda reproducir la enfermedad, al ser inoculado en un animal de experimentación susceptible.

4. Que el microorganismo pueda ser aislado nuevamente a partir de las lesiones producidas en dicho animal.

5. Que el microorganismo induzca una respuesta inmune especifica en el huésped detectada por serología (por la aparición de anticuerpos específicos).

INOCULO = Es la Cantidad o Número de Gérmenes infectantes que son introducidos accidental o voluntariamente en los tejidos vivos o en medios de cultivos especiales.

PROFILAXIS =Conjunto de medidas, medios yo terapéutica que se emplean para preservar al individuo y/o la comunidad de determinada enfermedad.

ORGANIZACION ESTRUCTURAL DE LOS MICROORGANISMOS :

ESTRUCTURA REINO MICROORGANISMO SUSCEPTIBILIDAD A :

CELULAR ANIMAL

CELULAR VEGETAL

CELULAR FUNGI HONGOS ANTIMICÓTICOS

CELULAR PROTISTA

CELULAR PROCARIOTAS BACTERIAS ANTIBIÓTICOS

SUBCELULAR ----------- VIRUS ANTIVIRALES

CELULAS EUCARIOTAS = Este tipo de célula está dividida en compartimientos limitados por membranas internas. Sus principales características son :

a) Membrana Citoplasmática = Es una bicapa lipídica, compuesta por proteínas, fosfolípidos y esteroles. Actúa como membrana limitante (ayuda a mantener la forma) y como barrera osmótica. En cierto tipo de células podemos visulizar Cilios y Flagelos. En los Hongos además de esta membrana pueden presentar Pared o Cubierta Celular, la cual está compuesta de polisacáridos.

b) Citoplasma =Presenta organelas (compartimientos internos rodeados por una membrana propia); entre estas encontramos Retículo endoplasmático, Aparato de Golgi, Vacuolas, Lisosomas; Mitocondrias, Cloroplastos (realizan la fotosíntesis en las plantas), Centríolos,





Ribosomas (80 s). Además el citoplasma cuenta con una estructura reticular denominada citoesqueleto, compuesto por microtúbulos y microfilamentos.

c) Núcleo = Contiene el material hereditario. Este decimos que es verdadero puesto que el compartimiento nuclear se halla verdaderamente separado del citoplasma por la membrana nuclear. El ADN está organizado en 2 o más cromosomas que codifican el material hereditario; cada cromosoma está compuesto por filamentos en doble hélice de ADN, donde cada cadena presenta uniones protéicas y de histonas.

d) División = La división celular puede ocurrir ya sea por mitosis o por meiosis , según el tipo celular.

e) Motilidad = La movilidad por parte algunos tipos celulares puede llevarse a cabo mediante Flagelos, Pseudópodos, Fagocitosis, Endocitosis,y Pinocitosis

CELULAS PROCARIOTAS = Este tipo de células no están divididas en compartimientos ni poseen núcleo verdadero. Sus principales características son :

a) Pared Celular = Es una estructura gruesa y rígida (a excepción de los micoplasmas) que sirve para dar forma a la célula procariota, evitar la lisis osmótica y la acción de agentes externos nocivos. En su estructura se halla un polímero específico, la mureína o Péptidoglicano.

b) Membrana Citoplasmática = Esta no presenta esteroles en su composición. Asociada a ella hay mesosomas (repliegues internos) y enzimas generadoras de ATP.

c) Citoplasma = No presenta organelas . Es de aspecto granular, donde se distinguen granulaciones mayores (sustancias de reserva) y granulaciones submicroscópicas (ribosomas – 70 s). Inmersos en el citoplasma encontramos ADN extracromosómico (Plásmido) enrollado en forma circular, los cuales contienen información genética para la síntesis de sustancias no indispensables.

d) Nucleoide = Contiene el material hereditario y de especificidad (ADN cromosómico), conformando 1 solo cromosoma dispuesto como 1 filamento en doble hélice, apelotonado en algún sitio del citoplasma. .En las cadenas hay ausencia de Histonas. Decimos que no es un núcleo verdadero porque no posee una membrana que lo separe netamente del citoplasma

e) División = La división celular ocurre por división o fisión binaria , la cual puede ser por fisión , conjugación o por medio de un bacteriófago (virus que infecta a una bacteria , y por lo que el genoma viral se recombina con el genoma de la bacteria)

f) Motilidad = Por Flagelos g) Pilis o Fimbrias = Permiten la Adherencia a receptores de las Células huéspedes y la

transferencia de material genético entre algunas bacterias

BACTERIAS Son Microorganismos procariotas, unicelulares, de tamaño microscópico (del orden de los micrones).

CARACTERÍSTICAS PRINCIPALES :

Están contenidas en una Pared Celular Poseen ambos tipos de ácidos nucleicos (ADN y ARN) Se multiplican por fisión binaria (tipo de reproducción asexual, donde la replicación es

lineal, comenzando en un extremo de la cadena de ADN y terminando en el otro, decimos que es semiconservadora ya que c/u de las cadenas complementarias sirven de molde para la síntesis de otra).

Pueden ser : a) Aerobias o Anaerobias b) Móviles o Inmóviles





c) Patógenas (causan enfermedades en el organismo al que invaden) o Saprofitas (es decir, viven libres en la naturaleza, se nutren de materia inorgánica u orgánica, siendo responsables de la transformación de la materia orgánica en mineral y de los ciclos del N y del C en la naturaleza).

ESTRUCTURA BACTERIANA : los diferentes componentes bacterianos se dividen en :

1. PARED CELULAR

2. MEMBR. CITOPLASMÁTICA

ELEMENTOS OBLIGADOS 3. CITOPLASMA

(Constantes) 4. RIBOSOMAS

5. NUCLEOIDE

A. GLUCOCALIX

B. FLAGELO

ELEMENTOS C. FIMBRIAS

FACULTATIVOS D. CAPSULA

(Inconstantes) E. ESPORAS

F. PLASMIDOS

1.- PARED CELULAR : Es una estructura gruesa y rígida presente en casi todas las especies bacterianas dando forma a la bacteria; se halla separada de la Memb. Citoplasmática por el Espacio Periplasmático (este espacio virtual es más manifiesto en las bacterias Gram – , y, allí encontramos proteínas y enzimas como la fosfatasa alcalina y ácida, desoxiribonucleasas, ribonucleasas y penicilinazas). Se pone en evidencia utilizando la Tinción de Gram (la que permite distinguir bacterias Gram - , bacterias Gram + y bacterias sin pared (género Micoplasma y formas L – Bacterianas) o bien utilizando tinción de Ziehl Neelsen podemos observarla en el caso de los bacilos Acido Alcohol Resistentes (BAAR).

Composición : Su principal componente es el Péptidoglicano o Mureína (en el caso de las Gram : N- Acetilglucosamina + N – Acetilmurámico; y en el caso de las BAAR : N – Acetilglucosamina + N – Glicosil murámico)

Propiedades y Funciones: 1= Brinda protección y resistencia a la bacteria frente a los posibles cambios de presión osmótica del medio en el que se encuentra y a la acción de ciertos agentes externos.





2= Presenta Poros que actúan como filtros, permitiendo el pasaje de agua y metabolitos esenciales.

3= Presenta antígenos de tipo y grupo específicos.

4= Participa en la división (multiplicación) bacteriana (se invagina junto con la membrana plasmática)

5= En las bacterias Gram – tiene poder patógeno debido a que presenta endotoxinas (Lípido A).

6= Es el sustrato donde actúan los - Lactámicos y otros antimicrobianos.

7= Resulta ser el fundamento del método de Gram

Síntesis de la Pared : Los precursores son sintetizados en el citoplasma bacteriano, luego son transportados a través de la MP, se forma y elonga un polímero lineal y finalmente se establecen puentes de unión entre los polímeros constitutivos. La síntesis de la pared es inhibida por los - Lactámicos.

Esquema de los diferentes tipos de pared celular :

2.- MEMBRANA CITOPLASMÁTICA (MP): Es una bicapa lipídica sin esteroles, que presenta inclusiones de proteínas y glicolípidos que forman poros. También presenta enzimas , bajo control cromosómico, como Fosfatasa alcalina, Hidrolasas, Penicilinasas. Su cara externa presenta la proteína fijadora de penicilina (dicha proteína interviene en la formación del peptidoglicano o mureína y funciona como sitio diana para la acción de los - Lactámicos); su cara interna se relaciona con el ARNm, Ribosomas y el Nucleoide.

Propiedades y Funciones : 1 – Actúa como una activa y selectiva barrera osmótica

2 – Participa en la síntesis de la pared celular y la cápsula

3 – Realiza síntesis de ATP

4 – Es el sustrato donde actúan ATB como la Polimixina B (que alteran su permeabilidad)

En las bacterias Gram + podemos distinguir repliegues de la MP, denominados Mesosomas.

Mesosomas : - Mesosomas Septales = Estos repliegues participan en la división celular.

- Mesosomas Laterales = participan en funciones de secreción (Ej. Secreción de - Lactamasa)

3.- CITOPLOASMA : Es una masa coloidal constituida por agua (85 %), minerales y fermentos. No contiene sistemas membranosos (organelas). Presenta un aspecto granuloso, distinguiéndose :

a.- Granulaciones mayores o microscópicas : Son vacuolas que almacenan sustancias de reserva, glucógeno, líquidos o gases.

b. Granulaciones Submicroscópicas : Son ribosomas.

4.- RIBOSOMAS : Son gránulos de unos200 de diámetro, ricos en ARN y proteínas. Poseen un coeficiente de sedimentación de 70s (30s – 50s). Su función es realizar la síntesis de proteínas.





Son el sitio diana donde actúan varios antimicrobianos como loa Aminoglucósidos, tetraciclinas, Cloramfenicol, Macrólidos y Lincosaminas (inhiben la síntesis protéica de la bacteria).

5.- NUCLEOIDE : (ADN CROMOSÓMICO) Consiste en un único cromosoma (filamento de ADN) que se encuentra apelotonado (en su estructura en doble hélice no presenta puentes de histonas). En algunos puntos entra en relación con la MP o con sus Mesosomas.

Propiedades y Funciones : 1) Confiere a la bacteria sus peculiaridades genéticas. 2) Interviene en el mecanismo de transferencia hereditaria. 3) Regula la Síntesis Protéica. 4) Induce los cambios que llevan a la división celular 5) Es el sitio de acción donde actúan antibióticos como las Quinolonas (Ac.

Nalidixico, Norfloxacina,etc) , la Rifampicina y el Metroidazol. Tipo de Replicación : La replicación es lineal, comenzando en un extremo y terminando en

el otro. El ADN Cromosómico se autoreproduce por un mecanismo semiconservador , donde la cadena complementaria se separa y sirve de molde para la síntesis de otra cadena.

A.- GLUCOCÁLIX =Es una delgada capa externa compuesta por Polisacáridos (Levano o Dextrano) que facilitan la adherencia de la bacteria.

B.- FLAGELO = Se trata de una estructura helicoidal que se comporta como órgano locomotor de la bacteria, además presenta el Ag H (específico de tipo) que es el responsable de la aglutinación flagelar..

C.- FIMBRIAS O PILIS = Se trata de estructuras filamentosas carentes de movilidad, constituidas por una proteína llamada Pilina. Por lo general están presentes en las bacterias Gram – , mientras que en las bacterias Gram + sólo se describen en el Corinebacterium Renale y algunos Streptococos.

Propiedades y Funciones : 1) Propiedad Antigénica 2) Brindan Adherencia : ya sea a superficies de látex , hematíes y/o al glucocálix de

las células epiteliales. Algunos tipos de Pilis (F e I) intervienen en la transferencia de material

genético por conjugación Pili F = Filamento Sexual, largo , responsable de transmisión hereditaria

Pili I = Filamento corto, responsable de la transmisión del factor Col (productor de bacteriocinas)

D.- CAPSULA = Estructura compleja, de grosor variable que rodea a una o más bacterias. Puede estar presente tanto en bacterias Gram – como Gram +.

Composición : Agua (90%) y polímeros orgánicos (en el género Bacillus : polisacáridos y polipéptidos)

Propiedades y Funciones : 1) Propiedad Antifagocitaria : Dificulta o impide la fagocitosis, lo cual potencia su

virulencia ya que favorece la multiplicación y facilita la invasión 2) Brinda Protección frente a Fagos y ATB : Dificulta la fijación de bacteriófagos e

impide el pasaje de ATB que puedan afectar a la bacteria. 3) Propiedades Antigénicas :

Induce la producción de anticuerpos protectores (esto es útil en la producción de algunas vacunas)

Permite la diferenciación de tipos serológicos dentro de la misma especie ya sea por aglutinación con sueros tipo o por el fenómeno de vitrifacción o de Quellung (hinchazón de la cápsula)





4) Orienta a la clasificación mediante : Pruebas bioquímicas o inmunológicas. Microscopía de contraste de fase (donde se la observa como un halo claro

y refringente) Tinción negativa con Tinta China.

Síntesis de Cápsula : Se realiza a partir de la MP. E.- ESPOROS = Son elementos de reproducción y/o de resistencia a un medio adverso que presentan algunas bacterias , especialmente del género bacilar. Su forma, tamaño y ubicación varía según la especie.

Tipos :

Endosporas : espora presente en el interior de la bacteria. Destinada a germinar originando la forma vegetativa de la que deriva

Exosporas : esporo que permanece libre en el ambiente, constituyendo la forma de resistencia bacteriana ante condiciones adversas o desfavorables (nutrición, desecación, temperatura, presencia de agentes químicos, presiones, etc.)

Propiedades y Funciones :

Son resistentes al calor, a la desecación, a las presiones, a los agentes químicos, a los rayos U.V. y radiaciones ionizantes.

Mantienen la virulencia de la forma vegetativa de la que derivan. Tiene un muy bajo metabolismo, que les permite permanecer viables por períodos

tiempo indefinidos. Tiene propiedades inmunogénicas.

Germinación

ESPORO Condiciones del Medio FORMA VEGETATIVA

Esporulación

F.- PLASMIDOS = (ADN EXTRACROMOSOMICO) Se trata de una estructura esférica, que codifica independiente del nucleoide y que contiene información genética para sintetizar sustancias que no son indispensables para la bacteria.

El ADN extracromosómico se transmite por Herencia a las bacterias hijas

Conjugación a otras bacterias (no hijas)

Tipos y Funciones : Los Plásmidos se clasifican por los caracteres que expresan y se designan según esas propiedades Plásmido “Ent” : Codifica la síntesis de enterotoxinas. Plásmido “Inv” : Da a las bacterias enteroinvasivas la capacidad de penetración a las

células epiteliales del intestino. Plásmido “K” : Codifica la Producción de los Ag de superficie de la Escherichia Coli. Plásmido “Hly” : Codifica la producción de - Hemolisina, responsable de la lisis de

hematíes





Factor F (sexual) : Son plásmidos autotransferibles, responsables de la transferencia de genes por conjugación que codifican la producción de pilis sexuales o F.

Factor Col : codifican la producción de bacteriocinas (compuestos similares a los ATB) que resultan letales para otras bacterias .

Factor R (de resistencia) : Es un plásmido, presente en ciertas bacterias Gram – , que codifica los mecanismos de resistencia a uno o más ATB.

MECANISMOS DE LA ACCION PATÓGENA :

COLONIZACIÓN = Es la capacidad de llegar a la superficie del huésped por una puerta de entrada (piel o mucosas), formar o establecer una colonia en el epitelio y resistir la acción de los sistemas locales de defensa .

Se entiende por colonia bacteriana a la agrupación de bacterias originadas a partir de una bacteria madre que se establecen y extienden por determinado medio.

Las bacterias patógenas pueden proceder :

Del Exterior = llegan al organismo por una puerta de entrada causando infecciones exógenas.

Del Propio Organismo = son bacterias oportunistas, que integraban la población de la flora normal, y que por determinados factores alcanzaron la capacidad de producir infecciones endógenas.

En cualquier caso , para iniciar la infección, los microorganismos deben fijarse o adherirse a las células y colonizar el epitelio.

PENETRACIÓN = Se denomina así a la capacidad de las bacterias para atravesar la barrera cutáneo – mucosa, alcanzar los tejidos subyacentes y ponerse en contacto con el medio interno del huésped, manifestando su acción patógena.

Respecto a este punto, podemos decir que existen :

A. Bacterias Sin poder de Penetración : Estas bacterias No Precisan atravesar el epitelio para Expresar su Acción Patógena. Estas se adhieren, se multiplican, colonizan el epitelio donde liberan una exotoxina soluble que al ser absorbida en la mucosa puede ejercer o una acción local o general. Ejemplos (Bordetella Pertusi, Vibrio Cholerae; Corinebacterium Diphtheriae)

B. Bacterias con capacidad de Penetración Pasiva : Estas bacterias atraviesan pasivamente el epitelio, ya sea mediante : 1.- un vector de transmisión (artrópodos y otros insectos) : las bacterias son inoculadas

a través del epitelio intacto.

2.- heridas, quemaduras, catéteres, etc.: las bacterias atraviesan un epitelio que presente

alteraciones anatómicas y funcionales

C. Bacterias con Capacidad de Penetración Activa : Estas bacterias penetran activamente el epitelio, mediante endocitosis realizada por la célula huésped. Ej. Escherichia Coli, Shigella, etc.

MULTIPLICACIÓN E INVACION =





MULTIPLICACIÓN : Hace referencia a la capacidad de reproducirse y alcanzar un Nº crítico que les permita para invadir y desarrollar su acción patógena, sorteando los mecanismos defensivos del huésped. Para ello necesitan obtener del organismo los elementos nutritivos, necesarios para su crecimiento y reproducción; cuando no los encuentran, no pueden multiplicarse y por ende no pueden desarrollar la infección o ésta es controlada con mayor facilidad en un lapso de tiempo breve.

INVASIÓN : Es la Capacidad de favorecer la difusión de la infección bacteriana en el organismo (ésta se debe a la producción de algunos metabolitos, enzimas y otras sustancias) ya sea interfiriendo los mecanismos defensivos del huésped o facilitando la penetración del microorganismo.

Factores que favorecen la Invasión : En su mayoría son enzimas hidrolíticas que actúan sobre : a.- Células y tejidos : Colagenazas

Hialuronidasa (Staphylococo Aureus, Streptococo Pyogenes, etc.)

b.- Desdoblamiento de : Proteínas (por parte de proteasas)

Mucina (Mucinasas)

Lípidos (lipasas)

Ac. Nucléicos (Nucleassa)

c.- Proceso de Coagulación Coagulasa (transforma fibrinógeno en fibrina)

Ej. : Staphylococo Aureus

Quinasa (Transforma plasminógeno en plasmina)

Ej. : Streptococo Pyogenes, Staphylococo Aureus.

CAPACIDAD LESIONAL = Es aquella capaz de producir alteraciones y/o lesiones en las células y tejidos del huésped, responsables del cuadro patológico. Estas alteraciones pueden ser producidas por acción directa (presencia de Antígenos capsulares, somáticos o flagelares) o por mecanismos de acción Indirectos (producción de Sust. Tóxicas para las células huéspedes), lo cuales producen un proceso inflamatorio y ponen en marcha mecanismos inmunológicos responsables del cuadro clínico.

Factores Intervinientes:

1. ACCION TOXICA : Determinada por la producción de Exotoxinas y/o Endotoxinas Exotoxinas = Son sustancias de naturaleza proteica que se liberan de

forma directa o a través de vesículas, sin que se produzca lisis bacteriana. Frecuentemente están codificadas por plásmidos o fagos; a veces consisten en 2 o más subunidades (una de las cuales sirve para adherirse y entrar a la cél. huésped , mientras que otra activa o inhibe determinada función celular). Tiene una acción Específica y las podemos





clasificar en Neurotoxinas (toxina : diftérica, tetánica, botulínica, etc) y Enterotoxinas.(toxina de : Bordetella Pertusis, Clostridium Perfringes, Clostridium Difficile, Shigella Dysenteriae, etc.). Algunas toxinas al ser inactivadas (con formaldehído)no alteran su antigenicidad, y los toxoides resultantes proporcionan algunas de las vacunas más eficaces (Ej. Toxoide tetánico y toxoide diftérico)

Endotoxinas = Son sustancia de naturaleza lipopolisacárida, localizadas en la superficie celular del microorganismo y que son liberadas por lisis bacteriana. Son producidas principalmente por las bacterias Gram – de los géneros Escherichia, Salmonella, Shigella y Klebsiella. Los lipopolisacáridos (LPS)estimulan una gran variedad de respuestas por parte del huésped. Desde el punto de vista clínico, los efectos más importantes de los LPS son la fiebre y el colapso vascular o shock. La fiebre, actualmente se atribuye a la acción de citoquinas sobre el hipotálamo (principalmente la IL-1 y el factor tumoral o TNF) y puede beneficiar al huésped, al microorganismo o a ambos . En respuesta a los LPS, los macrófagos son quienes producen estsas2 citoquinas. El shock por Endotoxinas (shock séptico) se suele asociar con la diseminación sistémica del microorganismo y, el ejemplo más común es las septicemia por bacterias Gram - como Escherichia Coli, Nesisseria meningitidis, etc.

2. MECANISMOS INFLAMATORIOS : Ya sea por mecanismos de acción directa o indirecta, las bacterias ponen en marcha el proceso inflamatorio; permitiendo que lleguen al foco inflamatorio los Fagocitos. Si el microorganismo fuere capaz de producir la destrucción de los Fagocitos, la liberación de enzimas lisosómicas desde estos últimos, ampliarán aún más la reacción inflamatoria y llevando a alteraciones patológicas como la formación de granulomas.

3. MECANISMOS INMUNOLÓGICOS : Las alteraciones patológicas también pueden deberse a fenómenos de hipersensibilidad. La simple Rta. Inmune ya representa la producción de una serie de reacciones como vasodilatación, edema, hiperplasia ganglionar, infiltración celular, etc.; estas en condiciones normales apenas influyen en el cuadro clínico , pero si se produce un fenómeno de hipersensibilidad (respuesta inmune exagerada) el mismo puede ser el responsable de procesos patológicos graves o incluso causales de muerte.

FACTORES DETERMINANTES DE LA ACCIÓN PATÓGENA :

Son la Adherencia, la Acción Tóxica y otros componentes bacterianos :

ADHERENCIA = Es el factor más importante en el momento de la colonización. Se lleva a cabo mediante la utilización de adhesinas que interactúan con los receptores superficiales de la célula huésped.

ACCION TOXICA = Como vimos ésta se debe a la producción de Exotoxinas y/o Endotoxinas, por ejemplo :

Toxinas de Amplia Acción BACTERIA TOXINA

ELAB. ESTRUCTURA Mec. de Acción Enfermedad (Órganos

más afectados)

Corinebacterium Diphtheriae

Toxina Diftérica

Subunidad A

+

Inhibe la síntesis protéica a nivel ribosomal

Difteria (Faringe y/o piel, corazón, Nervios periféricos). Las alteraciones cardíacas, la parálisis muscular y





Subunidad B nerviosa conducen a la muerte por falla cardiaca y paro respiratorio.

Bacillus Anthracis

Citotoxina de B. Antthracis

Factor Letal

+

Fac. Edematógeno

+

Ag Protector

- Produce aumento del AMPc, lo que aumenta la permeabilidad ocasionando edema pulmonar

Carbunco o ántrax (Pulmón)

Las alteraciones causadas (edema, Hemorragias) llevan a la formación de trombos y a una falla circulatoria.

Pseudomona Aeruginosa

Toxina - de la P. Aeruginosa

Subunidad A

+

Subunidad B

Produce lisis celular

Produce alteraciones necróticas en el hígado y otros órganos, por lo que es responsable de diversas infecciones

Neurotoxinas BACTERIA TOXINA ELAB. ESTRUCTURA Mec. de Acción Enfermedad (órganos más

Afectados)

Clostridium Tetani

Toxina Tetánica o Tetanospasmina (Regulada por plasmidos)

Subunidad A

+

Subunidad B

Bloqueo de la inhibi-ción Simpática a nivel del SNC

Tétanos (neuronas). Las alteraciones que se producen llevan a parálisis espástica, espasmos musculares y convulsiones

Clostridium Botulinum

Toxina Botulínica (Regulada por Fagos)

Subunidad A

+

Subunidad B

Bloque la liberación de Acetilcolina en el SNP

Botulismo (uniones neuro – musculares).

Las alteraciones causadas provocan una parálisis flácida

Clostridium Perfringens

- Toxina

Subunidad A

+

Subunidad B

Lisis celular de hema-tíes, leucocitos plaque-tas y cél. endoteliales

Gangrena Gaseosa

Enterotoxinas (citotónica y citotóxica)

BACTERIA TOXINA ELAB. ESTRUCTURA Mec. de Acción Enfermedad (el aparato digestivo es el más afectado)





Vibrio Cholerae

Toxina Colérica

2 A + 5 B

Inhibe las Síntesis protéica y Aumenta niveles de AMPc

Colera .

Escherichia Coli

-Tox. Citotónica termolábil

-Tox. Citotónica termosestable

-Verotoxina (Citotóxica)

2 A + 5 B

2 A + 5 B

Subunidad A y B

Idem a toxina colérica

Aumenta el GMPc

Actúa sobre el endotelio de los vasos sanguíneos intestinales

Gastroenteritis

Diarrea del viajero

Disentería (diarrea hemorrágica)

OTROS COMPONENTES BACTERIANOS = Como por ejemplo los antígenos flagelares, capsulares, de pared o somáticos; que son capaces de favorecer la Respuesta Inmune.

FACTORES DE VIRULENCIA :

FERMENTOS = Son enzimas como Mucinasas, Glicosidasas o Neuraminidasas que descomponen las proteínas del moco, facilitando l penetración.

FACTORES DE SUPERFICIE = Como la Cápsula y/o los Antígenos de Pared que inhiben la fagocitosis y la acción de sustancias bactericidas de la mucosa.

PROTEASAS Ig A =Es una Enzima proteolítica que descompone la Ig A (subclase 1) desactivando el sistema local de defensa de la mucosa. La sintetizan microorganismos como Neisseria Meningitidis, Neisseria Gonorrhoeae, Streptococo Pneumaoniae y Haempophylus Influenzae, etc.

BACTERIOCINAS = Son sustancias que actúan como antibióticos frente a otras bacterias , lo que les permite competir con bacterias integrantes de la flora normal microbiana del huésped.

CLASIFICACION DE LAS BACTERIAS Se basa en la afinidad o no por la tinción de Gram, su morfología y en la utilización o no de O2 en su metabolismo, las bacterias son divididas en 3 grandes grupos : Gram - , Gram + y aquellas que no se tiñen con Gram (ej. Las BAAR); a su vez estos grupos pueden estar conformados por bacterias Aerobias o Anaerobias facultativas y bacterias Anaerobias Estrictas.

Ver a continuación un Esquema de Clasificación de las bacterias :





BACTERIAS AEROBIAS O ANAEROBIAS FACULTATIVAS Bacterias Gram + Forma y Distribución Bacterias Gram – Forma y Distribución

Streptococos

Cocos dispuestos de a pares o en cadena

Neisserias

Acinetobacter

Moraxella

Cocos

Cocos

Cocos

Sataphylococos

Cocos en racimo Enterobacterias sp.

Pseudomonas sp.

Bacilos

Bacilo

Bacillus

Bacilo Esporulado Vibrio Coma

Corinebacterium

Bacilo Helicobaceter

Campilobacer

Espiral

Espiral

BACTERIAS ANAEROBIAS ESTRICTAS Bacterias Gram + Forma y Distribución Bacterias Gram – Forma y Distribución

Peptoesteptococos Cocos en cadena Veillonela Coco

Peptococos Cocos en racimo Bacteroides Bacilo

Clostridium Bacilo Esporulado Fusobacterium Ahusada

Actnomyces Bacilo

--- ---

BACTERIAS QUE NO SE TIÑEN CON GRAM A. MYCOPLASMAS : No tienen Pared B. MICOBACTERIUM (TUBERCULOSO Y LEPRAE) : Son BAAR (bacilos ácido alcohol

resistentes), se tiñen con Ziehl Neelsen. No pedir Cultivo





C. ESPIRILOS (TREPONEMA PALIDUM) : es una espiroqueta, que se tiñe con Giemsa o impregnación Argéntica; visibles a la microscopía de campo oscuro o de contraste de fase. No pedir Cultivo

D. CHLAMIDEAS (PNEUMONIAE Y TRACHOMATIS) : Son de Parásitos Intracelular Obligados

RELACION HUÉSPED – BACTERIA :

CONCEPTO DE :

INFECCIÓN BACTERIANA= Es la entrada, establecimiento y multiplicación de bacterias en la superficie o interior del huésped que va asociada a una Respuesta específica ; pudiendo o no ser acompañada de manifestaciones clínicas.

COLONIZACIÓN BACTERIANA= Capacidad de las bacterias para establecerse y multiplicarse en la piel y/o mucosas del huésped en cantidades suficientes que permitan mantener un cierto número poblacional; sin que su presencia establezca o determine Respuestas clínicas ni inmunológicas.

INFECCIÓN INAPARENTE o SUBCLÍNICA (ASINTOMÁTICA) : Es aquel establecimiento de bacterias , que si bien induce una respuesta orgánica específica, no va seguida de manifestaciones clínicas. Esto se debe a que hay un escaso Nº de Bacterias, a que éstas son poco virulentas o a que el huésped presenta un normal funcionamiento de sus defensas.

ENFERMEDAD INFECCIOSA : Son aquellas enfermedades causadas por múltiples agentes patógenos(bacterias, virus, hongos y parásitos). Dichos agentes interactúan con el organismo humano de diferentes maneras, resultando así una relación que está dada por :

Presencia del Agente, Toxinas o Enzimas

Enfermedad Infecciosa

Respuesta Inmune del Huésped

Las enfermedades infecciosas se produce cuando tras el establecimiento de las bacterias surgen alteraciones y/o manifestaciones clínicas. Esto se debe a que hay un gran Nº de Bacterias, a que estas son muy virulentas o a que determinadas circunstancias produjeron una depresión de los mecanismos defensivos del huésped, lo que interfiere con la Respuesta Inmunitaria.

PATOGENICIDAD O PODER PATÓGENO = Es la capacidad de producir daño o enfermedad por parte de una determinada especie de microorganismo. Hace referencia a la especie.

El poder patógeno no solo depende de la especie de microorganismo sino también de las características del huésped:

Nº de Bacterias + Virulencia (Mecanismos de Acción Patógena y factores de virulencia)

Enfermedad





Grado de Resistencia Organica (Grado de Resist. Específica e Inespecífica del Huésped)

VIRULENCIA = Es el mayor o menor grado de Patogenicidad que posee un microorganismo. Hace referencia a la cepa de determinado microorganismo.

CONCEPTO DE FLORA BACTERIANA NORMAL :Es la población de microorganismos que residen en piel y/o mucosas de las personas sanas. Tales microorganismos en su mayoría son bacterias, hongos, virus y parásitos.

La composición de la FN es variable y depende de factores como las características zonales del organismo, la edad, el sexo, su alimentación, la higiene personal, el clima, las condiciones socioeconómicas de la población y el grado de saneamiento ambiental.

Respecto a las características zonales del organismo, diremos que estas difieren según :

Condiciones físico – químicas (humedad Temperatura y pH) Potencial de oxidoreducción Condiciones nutritivas (cantidad y calidad de nutrientes) Presencia de receptores específicos en la MP de las células huéspedes. Presencia de Sust. Inhibidoras (Lisozimas, Bacteriocinas, Ac. Grasos no saturados, Ig A

secretoria) Cabe destacar que los microorganismos están ampliamente distribuidos en la naturaleza, por ello el hombre se encuentra expuesto constantemente a los mismos desde su nacimiento (en el pasaje por el canal vaginal) y luego por contacto y exposición. El hombre presenta zonas potenciales de colonización que reúnen las condiciones fisico- químicas, nutricionales, etc. que pueden resultar adecuadas o no para la supervivencia y multiplicación de diversas especies de microorganismos.

IMPORTANCIA DE LA FLORA NORMAL =

1. Sirve como Barrera frente a microorganismos patógenos u oportunistas 2. En el tubo digestivo es beneficiosa para la digestión de productos no atacables

por los fermentos digestivos del sujeto, así como también contribuyen a la síntesis de algunas vitaminas como la vit. K

CONCEPTO DE BACTERIOFAGO o FAGO : Virus cuyo huésped natural son las bacterias, en las que se reproducen. En algunas especies bacterianas los Fagos juegan un papel importante en la trasmisión de información genética de una bacteria a otra, pudiendo (mediante trasducción) ser los encargados de trasmitir factores de resistencia a los antibióticos, como ocurre con los Staphylococos. En otros casos el ingreso de un fago a una bacteria determina que el genoma viral se integre al de la bacteria, de tal forma que los genes parasitados por el fago pueden determinar que se expresen nuevos caracteres en el fenotipo (Lisogenia por fagoconversión); así el Corinebacterium Diphtheriae sólo será patógeno ( por lo tanto toxigénico) cuando se halle parasitado por un fago.

AGENTES ANTIMICROBIANOS (ANTIBIÓTICOS O ATB)

.- TIPOS : Pueden ser Bactericidas o Bacteriostáticos

1. Bactericidas : ATB con capacidad para destruir microorganismos sensibles o susceptibles, sin que medie la participación de las defensas humorales o celulares del huésped.





2. Bacteriostáticos : ATBG que inhiben de forma reversible los procesos metabólicos esenciales de cierta bacteria.

Origen de Agentes Microbianos :

ATB Verdaderos : Son sustancias de origen biológico como por ej. las penicilinas, quienes derivan de un hongo del género penicillium.

Quimioterápicos verdaderos : Son sustancias que derivan de síntesis química, como por ej. las sulfamidas, las cuales surgieron de los estudios realizados sobre las anilinas.

Agentes Antimicrobianos Nuevos : Son Sustancias obtenidas por manipulación molecular de ATB verdaderos y/o Quimioterápicos verdaderos, con el fin de ampliar sus espectros de acción sobre microorganismos o bien para mejorar sus características farmacológicas.

.- CLASIFICACIÓN SEGÚN SU SITIO DE ACCIÓN :

Acción del ATB Familia Droga En General tienen eficacia frente a

Inhibidor de la Síntesis de Pared

- LACTÁMICOS

PEPTÍDICOS

Otros

Penicilinas

Cefalosporinas

Monobactámicos

Carbapenemas

VANCOMICINA

TEICOPLANINA

BACITRACINA

Fosfomicina

Cicloserina

Streptococos, Staphylococo y Treponema Pallidum (no resistente a la penicilina), Neisseria Gonorrhoeae, Clostridium, Bacillus, Pseudomona, Enterobacterias, etc. No actúa frente a bacterias Gram –

Bacterias Gram + y Staphylococos resistentes a la penicilina. No actúan sobre las bacterias Gram –

Alterar la Permeabilidad de

la Memb. Plasmática

POLIPEPTIDICOS POLIMIXINA B

POLIMIXINA E (colistina)

Sólo actúan frente a bacterias Gram –

Actuar por Competencia Metabólica

SULFONAMIDAS

DIAMINOPIRIMIDINAS

Sulfamida

Trimetroprima

Bacterias Gram + sintetizadoras de Ac Fólico como Chalamydeas

Infecciones : Urinarias y respiratorias (no estrepto-cósicas) y gastrointestinales por





Shigella

Alterar la Información

Genética

QUINOLONAS

ANSAMICINAS

METRONIDAZOL

Ac. Nalidixico

Norfloxacina

Ciprofloxacina

Rifampicina

Bacterias Gram + como Gram – utilizándose en I.U., I.de Tej Blandos, I. R. No Neumocósicas.

Bacterias Gram + como Gram – (Mycobacterium Tuberculoso, Haemophylus Infleuenzae, Chalmydeas)

Inhibidores de la Síntesis Protéica

MACROLIDOS

LINCOSAMIDAS

ANFENICOLES

AMINOGLUCÓSIDOS

TETRACICLILNAS

Eritromicina

Roxitromicina

Azitromicina

Claritromicina

LINCOSAMIDA

CLINDAMICINA

CLORAMFENICOL

Estreptomicina

Gentamicina

Amikacina

Kanamicina

Neomicina

Tobramicina

Netilmicina

VIBRAMICINA

Streptococo Pneumoniae, Corinebacterium, Micoplasma, Chlamydeas, Clostridium Tetani, Campylobacter. Se utiliza también como reemplazo de las penicilinas en personas alérgicas

Bacteroides y otros Anaerobios. No son útiles en meningitis ni para Clostridium Dificcile

Salmonella Tiphy, Bacteroides

Bacterias Gram + y Gram – .

No actúan sobre bacterias Anaeróbias

Enterobacterias, Micoplasma, Rickettsias, Chlamydea





ESPECTINOMICINA

MINOCICLINAS

(bacterias Gram + y Gram – )

.- RESISTENCIA BACTERIANA A LOS ATB :

Debido al uso excesivo, inadecuado, frecuente e irracional de los ATB, las bacterias las bacterias se volvieron más resistentes a ellos; esto contribuyó a la selección de especies resistentes y a la aparición de microorganismos multiresistentes, que ante el vacío ecológico creado por el mal uso de ATB, encuentran condiciones favorables para la multiplicación y proliferación Los diferentes tipos de resistencia son :

a) Resistencia Natural b) Resistencia Secundaria c) Resistencia Mutacional d) Resistencia Transferible

.- SUSCEPTIBILIDAD DE LAS BACTERIAS A LOS ATB : Cuando la resistencia bacteriana comenzó a ser un fenómeno frecuente (debido al mal uso de los ATB) adquirió gran importancia el empleo de pruebas de sensibilidad antimicrobianas, ya que estas nos permiten determinar la respuesta a ellos por parte de cepas individuales dentro de cada especie. El empleo de ATB para cada antibiograma se debe decidir en función de : la especie aislada, de los ATB disponibles en la institución y del foco de la infección.

CONCEPTO DE ANTIBIOGRAMA : Conjunto de procedimientos que permiten determinar la sensibilidad in vitro de un microorganismo ante un determinado ATB.

Las pruebas de sensibilidad o susceptibilidad antimicrobianas que se utilizan para determinar la actividad de un ATB frente a una cepa en particular, son principalmente de 2 tipos :

DILUCIÓN EN CALDO = Puede realizarse en medios de cultivos líquidos o sólidos. Es un método cuantitativo que sirve para determinar la sensibilidad y resistencia de las bacterias.

Consiste en determinar el crecimiento de una bacteria en presencia de concentraciones decrecientes de ATB.

Este método permite determinar la CIM (concentración Inhibitoria mínima) y la CBM (concentración bactericida mínima). Para determinar la CIM se utilizan una serie de tubos de ensayo en los cuales se va colocando sucesivamente el ATB a doble dilución; luego se siembra el microorganismo. La CIM corresponderá al primer tubo de ensayo donde no se observe turbidez (la turbidez indica que existe crecimiento bacteriano). Para determinar la CBM seleccionamos los tubos donde no observemos turbidez y sembramos su contenido sobre un medio de cultivo sólido, luego observaremos si hay o no desarrollo de colonias. LA CBM corresponderá a aquella dilución donde no ha crecimiento bacteriano alguno.

DIFUSIÓN EN DISCOS DE AGAR = Se realiza en medios sólidos y es la prueba más usada (de rutina) en los laboratorios. Permite probar la eficacia de varios ATB al mismo tiempo.

Con este método determinamos la CIM . Para ello se siembra, en un medio de cultivo sólido (Agar), una suspensión de microorganismos (108 UFC/ml ) y sobre esto se colocan discos o monodiscos de papel embebidos en concentraciones arbitrarias y conocidas de





ATB. En el Agar húmedo , el ATB difunde desde los discos, con lo cual su concentración va decreciendo a partir del disco. Luego se incuba adecuadamente (EJ. 24 – 48 HS) y a continuación observaremos los Halos de Inhibición del Crecimiento Bacteriano; inmediatamente medimos (en mm) el diámetro que poseen los halos de inhibición. El Punto de corte de los halos , corresponde a un valor de CIM equivalente a la concentración de ATB que se alcanza en suero. Finalmente se compara la lectura realizada con tablas internacionales y se determina la sensibilidad o resistencia del microorganismo, clasificando a la cepa como Sensible (S) o Resistente y/o Intermedia (R) para ese ATB.

CIM : (CONCENTRACION INHIBITORIA MINIMA) Es la concentración más baja de un ATB capaz de inhibir el crecimiento de un microorganismo en condiciones estandarizadas.

CIM por E–Test : Consiste en aplicar sobre un medio de cultivo, donde se encuentra el microorganismo a ensayar, tiras plásticas que llevan incluidas un gradiente de concentración de un determinado ATB. Luego se incuba adecuadamente y se observa la formación de una elipse de inhibición de crecimiento.

Las Ventajas de este método frente al de CIM por Dilución : a. Brinda un resultado de la CIM más exacto b. Es en método menos laborioso

Las Desventajas de CIM por E – Test frente al de CIM por Dilución : a) No se puede determinar CBM b) Es un método muy costoso

CBM : (CONCENTRACION BACTERICIDA MINIMA) Es la concentración más baja de un ATB capaz de destruir una porción predeterminada de un inóculo (en general el 99,9 %) en un tiempo determinado. Corresponde a la dilución donde no se observa crecimiento alguno de microorganismos. Es importante que la concentración de ATB en el foco de infección supere por lo menos 10 veces la CBM. Las situaciones clásicas que requieren realizar una CBM son :

Infecciones en pacientes neutropénicos severos. Meningitis Endocarditis Osteomielitis

Como guía para seleccionar la dosis adecuada a ser administrada, puede utilizarse la medición de la concentración de ATB en el suero del paciente; para lo cual se toma una muestra de suero del paciente (bajo tratamiento ATB) antes de la administración de una nueva dosis endovenosa (en el valle de la curva de concentración) y luego se toma otra muestra al terminar la infusión endovenosa (en el pico de la curva de concentración). Esto permite determinar el PIS y el PBS para monitorear y eventualmente corregir la dosificación del ATB empleado.

PIS : (PODER INHIBITORIO DEL SUERO) Es la mayor dilución de un ATB en el suero del paciente, capaz de inhibir el desarrollo visible de un microorganismo.

PBS : (PODER BACTERICIDA DEL SUERO) Es la mayor dilución de un ATB en el suero del paciente, capaz de matar al inóculo en un 99,9 %

VIRUS Son microorganismos subcelurares, que se comportan como parásitos intracelulares estrictos

CARACTERÍSTICAS GENERALES :

Poseen tamaño ultramicroscópico (invisibles al M.O., salvo el Poxvirus). Su estructura elemental está formada por 1 sólo tipo de ácido nucléico (ARN o ADN),

contenido en la capside, la que a su vez puede o no estar rodeada por una envoltura lipoprotéica o peplos.





Carecen de organelas y no poseen ribosomas (sólo algunos virus mayores contienen algunos fermentos).

En medios inanimados se comportan como partículas inhertes ya que en ellos son incapaces de crecer y multiplicarse.

En el medio intracelular el Ácido Nucleico viral utiliza los mecanismos de biosíntesis de la célula huésped para replicarse e inducir la síntesis específica de sus proteínas que al integrarse al genoma replicado originarán nuevos viriones.

No son sensibles a los ATB pero el Interferón inhibe su mecanismo de replicación. ESTRUCTURA y MORFOLOGIA :

ACIDO NUCLEICO : Como ya dijimos posee un solo tipo de Ac. Nucleico (ARN o ADN) que puede encontrarse en forma monocatenaria, bicatenaria, lineal o circular. La función del ácido nucleico es suministrar la información para programar, en la célula huésped, la síntesis de sus propios componentes.

}

CAPSIDE : Es una cubierta proteica que rodea al Ac. Nucleico viral, protegiéndolo y facilitándole la penetración en la célula susceptible.

Está compuesta por subunidades proteicas, llamadas CAPSÓMEROS, los cuales se acoplan siguiendo un orden simétrico que le confiere al virus su morfología particular :

1. Simetría Icosaédrica = Los capsómeros forman una figura geométrica compuesta por 20 caras, 30 aristas y 12 vértices.

2. Simetría Helicoidal = Lo capsómeros adoptan la forma de un espiral rígido o con aspecto de resorte o pelota.

3. Simetría Mixta = Los capsómeros dan una simetría combinada de las 2 anteriores; por ej. a los Bacteriófagos (virus que parasitan bacterias) quienes presentan una cabeza de simetría Icosaédrica y una cola de simetría helicoidal especializada en inyectar el Ácido Nucleico a la bacteria

4. Simetría Compleja = Como por ej. la del Poxvirus. ENVOLTURA O PEPLOS : Se trata de una membrana Lipoprotéica que envuelve la

nucleocapside viral (Ácido Nucleico + Capside) protegiéndola. En algunos virus, de la envoltura parten proyecciones o espículas de naturaleza glucoprotéica.

Según la presencia o no de envoltura, los virus pueden dividirse en : I. Virus Desnudos = Su nucleocapside no se encuentra rodeada de peplos; son

resistentes a las condiciones del medio ambiente, a la bilis y esto se debe a la estructura proteica de la capside.

II. Virus Envueltos = Su nucleocapside está rodeada por peplos; estos virus son sensibles a factores ambientales tales como : sequedad, al pH gástrico a la bilis, etc. debido a que el peplos por su estructura lipídica torna más vulnerable al virus.

CONCEPTO DE VIRION : Se denomina así a la partícula viral completa posea o no envoltura.

CONCEPTO DE VIROIDE : Partícula de ARN sin proteínas que infecta a vegetales

CONCEPTO DE PRION : Partícula proteica infectante, sin Ac. Nucleico que causa enfermedades en animales como la encefalitis espongiforme (mal de la vaca loca) CLASIFICACIÓN de los VIRUS :

Virus ADN :

Virus ADN

(Familia)

Virus de Importancia Médica

Estructura del ADN Simetría de la Capside

Con o sin Envoltura (Peplos)





ADENOVIRIDAE - Adenovirus Bicatenario, lineal, configurado en sentido + y –

Icosaédrico Desnudo

PAPOVIRIDAE - Papilomavirus Humano

- Poliomavirus (JC y BC)

Bicatenario, circular, configurado en sentido + y –


HERPESVIRIDAE

- Herpes Simples (VHS)

- Varicela Zoster (VVZ)

- Citomegalovirus (CMV)

- Epstein-Barr (VEB)

Bicatenario, lineal configurado en sentido + y –

Icosaédrico

Envuelto

HEPADNAVIRIDAE

- Virus de la Hepatitis B

(VHB)

Bicatenario, circular incompleto, configurado en sentido + y –

Icosaédrico

Envuelto

POXVIRIDAE - Virus de la Viruela (VV)

- Virus de la Vaccinia

Bicatenario, lineal, configurado en sentido + y –

Compleja Envuelto

PARVOVIRIDAE - Virus B19 Monocatenario, lineal configurado en sentido + o –


Virus ARN :

Virus ARN

(Família)

Virus de Importancia

Médica

Estructura del ARN Simetría de la Capside

Con o sin Envoltura (Peplos)

CALCIVIRIDAE - Virus Norwalk Monocatenario, Configurado en sentido +

Icosaédrica Desnudo

PICORNAVIRIDAE

- Virus de la Hepatitis A

(VHA)

- Enterovirus:

Virus ECHO

Virus Coxsackie A y B

Monocatenario, lineal, configurado en sentido +

Icosaédrica

Desnudo





- Rinovirus

- Poliovirus

REOVIRIDAE - Rotavirus

- Reovirus

Bicatenario, lineal Configurado en sentido + y –

Icosaédrica Desnudo

RETROVIRIDAE

- HIV

- HTLV

Monocatenario, lineal, segmentado en 2, configurado en sentido +

Icosaédrica

Envuelto

TOGAVIRIDAE

- Virus de la Rubéola

- Virus de la Fiebre Amarilla

Monocatenario, lineal, no segmentado, configurado en sentido +

Icosaédrica

Envuelto

CORONAVIRIDAE

- Coronavirus

Monocatenario, lineal, no segmentado, configurado en sentido +

Helicoidal

Envuelto

ORTHOMYXOVIRIDAE

- Virus Influenza (o virus de la gripe)

Monocatenario, lineal segmentado en 8, configurado en sentido –

Helicoidal

Envuelto

PARAMYXOVIRIDAE

- Virus ParaInfluenza

- Virus Sincitial Rspirat.

- Virus de la Parotiditis

- Virus del Sarampión

Monocatenario, lineal, no segmentado, Configurado en sentido –

Helicoidal

Envuelto

RHABDOVIRIDAE

- Virus de la Rabia

Monocatenario, lineal, no segmentado, Configurado en sentido –

Helicoidal

Envuelto

ARENOVIRIDAE

- Virus de la Coriomeni-ngitis Linfocítica (VCL)

Monocatenario, Circular, segmentado en 2 con extremos cohesivos, configurado en sentido –

Helicoidal

Envuelto

FILOVIRIDAE

- Virus del Ebola

- Virus de Marburg

Monocatenario, lineal, configurado en sentido –

Compleja Envuelto





REPLICACIÓN VIRAL : Los virus carecen de metabolismo y se comportan como partículas inhertes en medios inanimados, pero dentro de las células susceptibles, el Ac. Nucleico viral emplea los mecanismos de biosíntesis célula para replicarse e inducir la síntesis de proteínas específicas que posteriormente se integraran al genoma replicado para originar nuevos viriones, los cuales se liberaran de la célula huésped para luego infectar otras células.

1. ETAPA DE INICIACIÓN : Comprende los pasos de Adsorción (Adherencia), Penetración y Desnudamiento.

Adsorción o Adherencia a la Célula : Este hecho dependerá de la interacción entre las moléculas de la capside (virus desnudos) y/o del peplos (virus envueltos), con las moléculas superficiales de la MP (receptores) de la célula huésped .

Penetración : El virión puede entrar en la célula huésped por : Traslación directa a través de la MP Virus Desnudos Por captación del virión a través de fagosomas Por fusión del peplos a la MP Virus Envueltos

Desnudamiento o pérdida de la cubierta : El peplos y/o la capside se desprenden y el Ac. Nucleico viral es liberado hacia el citoplasma celular

2. ETAPA DE EXPRESIÓN Y REPLICACIÓN : La forma en que se da la replicación viral dependerá de la naturaleza de su Ácido Nucleico. Esta etapa comprende 3 pasos a saber : la Síntesis de ARNm viral, la Traducción del ARNm viral y la Replicación del Genoma viral (ácido nucleico viral) : a) Síntesis del ARNm Viral =

Los Virus cuyo Genoma es ADN : Utilizan la ARN polimerasa del huésped para transcribir directamente del ADN viral, la síntesis del ARNm viral.

Los virus cuyo genoma es ARN : Utilizan una ARN polimerasa viral, la cual puede estar contenida en la nucleocapside o ser sintetizada después de la infección a la célula.

Los Virus ARN Bicatenario = Utilizan una Polimerasa Viral para transcribir una cadena en ARNm viral.

Los Virus ARN Monocatenarios = Tienen 3 vías para distintas para formar ARNm viral. Es importante aclarar que esto dependerá del sentido (+ ó – ) de configuración de la cadena del ARN viral (es decir si tiene o no la secuencia necesaria de bases para la traducción) :

Los Virus ARN de Cadena configurada en Sentido + : Es decir que tiene la secuencia de bases necesarias para la traducción; por lo tanto utilizan directamente esta cadena de ARN como ARNm viral.

Los Virus de Cadena configurada en Sentido – : Es decir no tienen la secuencia de bases necesarias para la traducción; por lo tanto utilizan una polimerasa viral que transcriba dicha cadena de ARN en una cadena de ARN configurada en sentido +, que podrá actuar como ARNm viral.

Los Retrovirus : (ARN Monocatenarios de cadena configurada en sentido +) Primero utilizan una Transcriptasa Inversa Viral, contenida en su nucleocapside, que lo transcriba en una cadena de ADN Monocatenario configurada en sentido – , inmediatamente después se forma ADN Bicatenario que ingresa al núcleo celular integrándose al genoma del huésped. Luego ese





ADN viral (integrado al genoma celular), por obra de una polimerasa del huésped será transcrito en ARNm viral

VIRUS ADN VIRUS ARN Bicatenario VIRUS ARN Monocatenario RETROVIRUS

(ARN Monocatenario)

Cadena + Cadena – Cadena + Cadena +

Cadena –

Cadena de ADN

Monocatenario –

Cadena +

ADN Bicatenario

Transcribe directamente Utilizada como Utilizada Directamente como

desde el ADN el

Ingresa al Núcleo





Celular y se integra

al genoma del huésped

ARNm VIRAL

En los Ribosomas será traducido a Proteínas Virales necesarias para formar el nuevo virión

b) Traducción del ARNm Viral = Ocurre en los Ribosomas citoplasmáticos de la célula huésped; el ARNm viral los utiliza para sintetizar proteínas virales (enzimas y moléculas reparadoras) que le permitan replicar el genoma viral, así como también induce la síntesis de proteínas necesarias para la formación de la capside.

c) Replicación del Genoma Viral = Para ello utiliza las polimerasas virales y/o las del huésped para actuar sobre el Ac. Nucleico viral, transformándolo en una plantilla de transcripción configurada en sentido contrario al original, que servirá de molde para la producción de numerosas cadenas de Ac. Nucleicos virales (con la configuración original)

En los Virus ADN : la replicación del genoma ocurre en el núcleo de la célula huésped (excepto el Poxvirus, que se replica en el citoplasma), previa utilización de una polimerasa (viral o del huésped). Por ejemplo : en el Herpes Virus, el ARNm viral traducido en los ribosomas citoplasmáticos produce una ADN polimerasa indispensable para síntesis de nuevo ADN viral; mientras que el Adenovirus utiliza enzimas virales y del huésped para conseguir el mismo fin.

En los Virus ARN : la replicación del genoma ocurre en citoplasma de la célula huésped (excepto los virus de la gripe o Influenza y el virus del sarampión que se replican en el núcleo). El mecanismo de replicación dependerá del tipo de cadena y del sentido de su configuración:

Virus ARN Monocatenario configurado en sentido + : El ARN viral (de configuración +) es utilizado directamente como ARNm viral y en los ribosomas, al ser traducido, produce una ARN polimerasa viral que originará, a partir de la plantilla de ARN de configuración +, un ARN viral de configuración – , que luego es trascripto repetidamente en muchas cadenas positivas, formando la progenie. (Ej. Poliovirus)

Virus ARN Monocatenario configurado en sentido – : El ARN viral (de configuración –), primeramente por obra de una polimerasa viral es trascripto en ARNm viral de sentido +, éste será traducido en los ribosomas produciendo una ARN polimerasa viral, ésta polimerasa luego origina, a partir de la plantilla de ARN de configuración – , un ARN viral de configuración +, que será trascripto repetidamente en muchas cadenas negativas; es decir, se forma la progenie. (Ej. Virus de la Rabia)

Virus ARN Bicatenarios : En este tipo de virus la polimerasa viral actúa sobre la cadena de ARN de configuración – transcribiéndola en ARNm





viral de sentido +, luego ésta cadena actúa como plantilla para la síntesis de nuevas cadenas de sentido – a fin de reestablecer la condición bicatenaria de la progenie. (Ej. Rotavirus)

Retrovirus (ARN Monocatenarios de sentido +) : En este tipo de virus el ARN viral, por obra de una transcriptasa inversa, se transforma en ADN viral el cual se integrará al genoma del huésped en el núcleo celular; allí utiliza una ARN polimerasa del huésped para transcribir a partir del ADN viral la síntesis de ARN viral.

3. ETAPA DE ENSAMBLAJE Y LIBERACIÓN DE LA PROGENIE VIRAL : El Ensamblaje de viriones consiste en la formación de una nueva nucleocapside, puede darse en el núcleo o en el citoplasma de la célula huésped.

La Liberación de viriones consiste en el desprendimiento de los virios del medio intracelular, esto puede darse por:

1) Citólisis de la célula huésped : Los virus desnudos utilizan este mecanismo que consiste en la lisis celular cuando está repleta de nuevos viriones

2) Gemación : mecanismo utilizado por los virus envueltos (los que poseen peplos). Este tipo de virus originan su envoltura a partir de zonas específicas de la MP y/o de la Memb. Nuclear, donde previamente el ARNm viral insertó proteínas y glucoproteínas. Por este mecanismo no siempre se causa la muerte inmediata de la célula huésped (por destrucción de su MP); de tal forma que la célula infectada puede continuar liberando viriones durante largos períodos de tiempo.

ANTIVIRALES

CONCEPTO DE DROGAS ANTIVIRALES : Son drogas que interfieren con el ciclo intracelular de la replicación, impidiendo la formación de una progenie viral infecciosa. Su mecanismo de acción interfiere con los pasos bioquímicos esenciales de la replicación viral. CONCEPTO DE ACCION VIRUCIDA : Son soluciones formoladas, fenoladas, iodadas, Ac. Oxidantes, Hipocloritos, etc., que actúan directamente sobre la partícula viral infectante, antes de que ingrese al huésped susceptible. Son utilizadas en la desinfección de ambientes y equipamiento. CONCEPTO DE INMUNOMODULADORES : Son drogas que modifican la respuesta inmune del huésped, induciendo la destrucción de las células infectadas y/o evitando que la acción citotóxica del virus genere un daño que ponga en peligro la vida del individuo. Dentro de este grupo de drogas se incluyen los INTERFERONES

PRINCIPALES ANTIVIRALES :

AMANTADINA Y RIMANTADINA : Son útiles en la profilaxis contra infecciones por Virus Influenza Tipo A; actuando sobre la etapa de iniciación de la replicación viral. Sus efectos adversos más importantes son : el insomnio y el nerviosismo (los que desaparecen al suprimir el tratamiento). RIBAVIRINA : Actúa frente al Virus Sincitial Respiratorio (VSR), Virus Influenza Tipos A y B, Virus ParaInfluenza, Virus del Sarampión, Virus de la Hepatitis A y HIV Efectos Adversos

En Aerosol : No se observa una toxicidad significativa. Por Vía Oral y/o Intravenosa : Provoca Anemia transitoria y Aumento de la Bilirrubina.

GANCICLOVIR : Tiene acción frente a la replicación del Citomegalovirus; empleándose para el tratamiento de la colitis, esofagitis, retinitis y neumonías causadas por este virus en pacientes inmunodeprimidos. Entre sus Efectos Adversos destacamos: A largo plazo puede ser responsable de una mielosupresión.





ACICLOVIR : Es un antiviral eficaz en infecciones por Virus Herpes Simples y Herpes Zoster VIDARAVINA : Es activa contra las células mutadas por infección del Virus Herpes Simples (resistentes al Aciclovir), por lo que resulta efectivo en el tratamiento del Herpes Neonatal, la Encefalitis Herpética, la Queratitis Herpética. También tiene acción frente al Virus Varicela Zoster por lo que resulta muy útil actualmente para tratar la varicela de los inmunodeprimidos. Entre sus efectos adversos destacamos :

Trastornos Gastrointestinales (Náuseas, Vómitos y Diarreas) Trastornos Neurológicos (Parestesia, Ataxia, etc) A elevadas dosis : puede causar anemia megaloblástica, Leucopenia y trombocitopenia.

AZIDOTIMIDINA (AZT), DDI, DDC, 3TC, 4DT : Actúan como análogos de nucleósidos , inhibiendo la síntesis de ADN por bloqueo de la transcriptasa inversa de los retrovirus (HTLV, HIV 1 Y 2) Efectos Adversos : Mielosupresión, la cual no se prolonga más allá de los 6 meses. INDINAVIR, RITONAVIR Y NELFINAVIR : Son Activos contra el HIV

Procedimientos diagnósticos Los procedimientos básicos para el diagnóstico de laboratorio de virus, son el aislamiento del virus, la demostración del virus o algún producto viral en las muestras clínicas (método directo), y la detección y medición de los anticuerpos específicos contra un virus (método indirecto). Cada procedimiento tiene sus méritos, pero la demostración directa del virus y/o de los productos virales es el método más eficaz y útil en el diagnóstico de rutina. Procedimientos de demostración Los métodos directos incluyen la visualización de los viriones al microscopio electrónico, detectando el genoma viral empleando sondas de referencia de AADN y detectando antígenos virales por inmunofluorescencia. Este último método ha sido el más útil en el diagnóstico por laboratorio. Métodos de serología general Durante los estados tardíos de la enfermedad, la prueba del suero de los animales infectados, en busca de anticuerpos para virus específicos puede ser el único medio de diagnóstico. Esto puede lograrse mediante varias pruebas serológicas. Las pruebas serológicas más comúnmente empleadas en los laboratorios de diagnóstico veterinario para el diagnóstico de infecciones virales son: prueba de seroneutralización (SN); prueba de inhibición de la hemoaglutinación (IH); prueba de la inmunodifusión en gel de agar (AGID por sus siglas en ingles) y prueba de ensayo inmunoabsorbente ligado a enzimas (ELISA). Estas pruebas se basan en el hecho de que la actividad viral puede ser inhibida y/o las proteínas virales se ligan a un anticuerpo específico. Se prueban las diluciones del suero y se comunican los resultados como el reciproco de la dilución mas elevada en la cual se observa actividad antiviral. De manera ideal, se compararían los resultados del suero colectado durante la fase aguda de la enfermedad con los resultados del suero colectado durante la convalecencia (dos colecciones de suero 14 - 21 días aparte). El diagnóstico se confirma si se observa un incremento cuatro veces mayor de los títulos de anticuerpos entre estos dos pares de muestras. Los resultados de una sola muestra de suero (no pareada) son más difíciles de interpretar. Para los virus que causan una infección aguda y se limitan así mismos, los resultados positivos solamente indican que el animal ha estado expuesto, ya sea naturalmente o a través de una vacunación. La interpretación se hace más fácil al muestrear un porcentaje de aquellos animales que estuvieron enfermos versus aquellos que no lo estuvieron, pues los títulos más altos generalmente indican una infección reciente. Para los virus que causan una infección persistente o latente (ejemplo los herpesvirus o retrovirus), una serología positiva indica que el animal es un portador potencial del virus. Los resultados positivos de pruebas reguladoras son siempre significativos sin importar el título de anticuerpo. Por ésta razón, se han desarrollado otras pruebas serológicas más estandarizadas y en forma de estuche de muestreo (kit). Por ejemplo la prueba de





inmunodifusión en gel de agar (AGID), conocida también como prueba de Coggins, para la anemia equina infecciosa y la prueba de ELISA y aglutinación de látex (LA) para seudorrabia. Los resultados de estas pruebas son comunicados como positivos o negativos. A continuación una discusión sobre los diferentes procesos de diagnóstico empleados. Aislamiento del virus Empleo: aislamiento e identificación del virus. Durante la fase aguda de la enfermedad es el mejor momento para demostrar y aislar virus. A medida que la enfermedad avanza, se desarrollan los anticuerpos, se reduce la excreción de virus y el virus es despejado de los tejidos. Las manifestaciones clínicas de la enfermedad generalmente encausan la selección de la muestra clínica apropiada, tales como hisopos nasales y oculares en las infecciones de las vías respiratorias altas, heces de infecciones entéricas, sangre de infecciones sistémicas, etc. Los virus requieren de células vivas para poderse replicar. En el laboratorio, se proporcionan células vivas como cultivos celulares, cuyas células han sido obtenidas por digestión enzimática de tejidos animales. Las células son cultivadas en superficies de vidrio o plástico. Cuando las muestras clínicas que contienen virus son inoculadas en cultivos celulares susceptibles, el virus (si está viable) se replica y a menudo produce un comportamiento característico de patología celular, caracterizado por cambios en la apariencia celular, llamado efecto citopático (CPE por sus siglas en ingles). En algunos casos, el virus se replica sin ningún efecto apreciable sobre las células y debe ser demostrado mediante pruebas de tinciones especiales que revelan cuerpos de inclusión viral o anticuerpos fluorescentes (AF), para detectar antígenos virales. El tiempo requerido para el aislamiento del virus fluctúa entre menos de 24 horas y hasta varias semanas. Anticuerpo fluorescente Empleo: Para detectar antígeno viral en materiales clínicos o en cultivos celulares infectados. La prueba de anticuerpos fluorescentes (AF) detecta antígenos virales en células infectadas con anticuerpos antivirales específicos que han sido marcados con un colorante fluorescente (isotiocianato de fluoresceína). Las pruebas de AF se efectúan en secciones de tejidos congelados, frotis de sangre, impresiones tisulares, raspados o en cultivos celulares. Los resultados están disponibles en menos de una hora y son exactos a condición de que el anticuerpo sea específico y las muestras estén en condiciones moderadamente buenas. Hay dos tipos básicos de técnicas de AF: directa (DFA) e indirecta (IFA). En la prueba directa se marca el antígeno antiviral. Este antígeno marcado se emplea para detectar los antígenos virales en secciones congeladas de tejidos, raspados, frotis sanguíneos, etc. La técnica IFA es un procedimiento en dos pasos: La muestra a ser examinada se hace reaccionar con un anticuerpo antiviral no marcado. Después de proporcionar un período de incubación suficiente para que haya una interacción antígeno-anticuerpo (generalmente una hora o menos), se lava la muestra y se incuba con un anticuerpo marcado dirigido contra IgG de la muestra en la cual se preparó el anticuerpo antiviral no marcado. Este anti-anticuerpo marcado se anclará al anticuerpo no marcado anclado al virus, y si esto ocurre, se observa la fluorescencia y la prueba se considera positiva. Ambas pruebas FA tienen ventajas y desventajas. La técnica DFA se lleva a cabo más rápidamente y se emplea más a menudo debido a la disponibilidad de los conjugados DFA. La técnica IFA, por otra parte, generalmente es más sensible y específica (si se emplean anticuerpos monoclonales); se tarda más tiempo pero solo requiere un anticuerpo marcado si todos los anticuerpos antivirales son preparados en una sola especie. La prueba de inmunofluorescencia o anticuerpo fluorescente (FA) es la prueba más útil empleada rutinariamente en el diagnóstico viral. Comercialmente está disponible un buen número de conjugados AF para la detección de virus. Los conjugados que detectan virus en perros y gatos están disponibles comercialmente.





Se emplea un método indirecto llamado prueba de inmunofluorescencia para detectar y medir anticuerpos. Esto involucra el infectar un cultivo de células con un virus y después preparar“puntos” en láminas de microscopio con estas células infectadas. El suero puede entonces ser examinado para un anticuerpo específico haciéndolo reaccionar con las células infectadas seguido de una reacción con el conjugado antiespecie IgG. Los "puntos" que fluorescen (resultantes de la unión anticuerpo sérico más conjugado anti-especie IgG) indica que el suero es positivo para la presencia de anticuerpos específicos. Inmunoperoxidasa Empleo: para detectar antígeno viral en materiales clínicos y cultivos celulares. La técnica de inmunoperoxidasa es similar en principio al proceso de anticuerpo fluorescente. La diferencia está en que el anticuerpo es conjugado a una enzima (peroxidasa de rábano o fosfatasa alcalina), más que a un compuesto fluorescente. Aunque la enzima está ligada al anticuerpo, esta permanece activa y cuando se le suministra su substrato, reacciona y da una reacción en color. Esta técnica tiene la ventaja sobre la AF de que no requiere de microscopio fluorescente y es específicamente útil para localizar antígenos virales en lesiones histopatológicas. Prueba de ensayo inmunoabsorbente ligado a enzimas (ELISA) Empleo: Para detectar antígeno o anticuerpo. La sensibilidad de ELISA es comparable con el radioinmunoensayo (RIA), el cual es similar en principio a la prueba de ELISA. Se emplea un sistema de fase sólida para la mayoría de las pruebas ELISA. Para la detección de virus, primero se adsorbe un anticuerpo específico a la superficie de un tubo de poliestireno, placa de microtítulo, etc. y se añade la muestra que contiene el virus sospechoso. Si el virus está presente, este se une al anticuerpo adsorbido. Después de lavado, se adiciona un anticuerpo antiviral específico marcado con una enzima (generalmente fosfatasa alcalina o peroxidasa de rábano). El anticuerpo marcado reacciona con el complejo, creando un "efecto Sándwich". Luego del lavado, se adiciona el substrato para la enzima, produciéndose una reacción de coloración. Algunas pruebas se interpretan visualmente, pero se obtiene una mayor sensibilidad mediante el análisis espectrofotométrico. Un proceso indirecto de ELISA es empleado para la detección de anticuerpos. El antígeno es primero adsorbido a una fase sólida, seguido por la adición del suero a analizar. Después del lavado, se adiciona una anti-gamaglobulina marcada con una enzima, seguida de la adición de substrato enzimático. Las variaciones de la prueba corriente de ELISA incluye la competitividad de ELISA para detectar el anticuerpo, en el cual la anti-gamaglobulina marcada con una enzima es reemplazada con un anticuerpo antiviral marcado con una enzima. El desarrollo de la coloración posterior después de la adición del substrato enzimático es inversamente proporcional al nivel de anticuerpo presente en la muestra analizada. En otras palabras, si el anticuerpo específico ha sido ligado, el anticuerpo marcado con una enzima no se ligará. Así, las pruebas positivas son aquellas que no presentan una reacción de color o una reacción menor que aquella de los controles apropiados. Otra variación es la cinética por ELISA, la cual se emplea para detectar anticuerpos contra la borreliosis canina (enfermedad de Lyme), virus de la leucemia felina, peritonitis infecciosa felina, toxoplasmosis felina y herpes virus bovino 1. En la cinética por ELISA, la reacción se monitorea continuamente durante cierto período de tiempo, en lugar de pararla después de un tiempo predeterminado. La prueba de ensayo inmunoabsorbente ligado a enzimas (ELISA) y los sistemas de aglutinación de látex (LA) detectan antígenos virales mediante la "captura" de los mismos con anticuerpos específicos adsorbidos a un substrato apropiado. Estas técnicas proporcionan un diagnóstico rápido y están a menudo disponibles para su uso en "la oficina". Los estuches disponibles comercialmente incluyen los estuches de ELISA y LA para detectar rotavirus en heces de una gran variedad de especies animales, y estuches de ELISA rápidos para detectar parvovirus canino en las heces y antígeno de la leucemia viral felina en sangre.





Aglutinación de látex (LA) Empleo: Para detectar antígeno o anticuerpo. Las pruebas de LA son similares en principio a la aglutinación bacterial ya que las partículas de látex cubiertas con anticuerpo, se aglutinarán cuando se mezclen con el antígeno correspondiente y así lo identificarán. A la inversa, las partículas de látex pueden ser cubiertas con antígenos y emplearlas para detectar anticuerpos. Estas pruebas son fáciles de efectuar y producen resultados en pocos minutos. Los estuches comerciales empleados "en la oficina" están disponibles para detectar anticuerpos de algunas enfermedades y para detectar algunos virus. Microscopio electrónico (ME) Empleo: Para demostrar virus en muestras clínicas. En la técnica de microscopia electrónica con tinción negativa, las muestras clínicas lisadas con agua destilada, se "tiñen" con una solución de átomos pesados. Esta técnica se emplea principalmente para el examen de aquellas muestras clínicas en las que se espera contengan un gran número de partículas virales, tales como heces (coronavirus, rotavirus y parvovirus) y lesiones vesiculares y similares a la viruela (herpesvirus y virus de la viruela). La preparación de la muestra y el examen ME generalmente puede completarse en 30 minutos. Microscopio inmunoelectrónico Empleo: Demostración e identificación de virus. La técnica de tinción negativa del microscopio electrónico mencionada anteriormente para la demostración de virus, es también útil para la identificación. El virus se hace reaccionar con el suero inmune, produciendo una agrupación que puede ser vista cuando se observa bajo el microscopio electrónico. Neutralización del virus (NV) Empleo: para detectar y medir anticuerpos. La neutralización del virus es el método más ampliamente empleado para detectar y medir anticuerpos virales de importancia en veterinaria. Esta prueba es considerada como la más exacta de todos los procesos serológicos, siendo menos propensa a variaciones y menos subjetiva en su interpretación. El principio de ésta prueba se basa en el hecho de que la replicación y actividad del virus, ya sea el efecto citopático (EC) en el cultivo celular, signos clínicos, lesiones o muerte en huevos embrionados y en animales, que pueden ser inhibidos por un anticuerpo viral específico. Las pruebas De NV son casi siempre desarrolladas empleando cultivos celulares. La cepa de virus para utilizar en las pruebas se cultiva, se alícuota y se almacena a temperaturas ultra-bajas. Estos virus son dosificados varias veces para determinar la cantidad de virus presente. Las diluciones del suero de prueba se hacen en placas microtituladoras, seguido de la adición de un volumen igual de una suspensión viral diluida para contener aproximadamente 100 a 300 dosis infectantes (una dosis infectante es el número mínimo de partículas virales necesarias para establecer una infección). Después de incubar el suero + virus durante 1 - 2 horas a temperatura ambiente (algunos sistemas utilizan 37°C o aún 4°C), se adicionan indicadores de cultivos celulares. Las placas se sellan, se incuban a 37°C, y se observan diariamente para ver el desarrollo del efecto citopático viral. La presencia de anticuerpo específico en el suero a analizar inhibe la producción de este efecto citopático. La prueba de NV se emplea también para identificar un virus desconocido, aislado de la misma manera descrita anteriormente. La única diferencia es que el anticuerpo es conocido y el virus es desconocido. Si el anticuerpo específico inhibe el desarrollo de EC del virus desconocido, se realiza la identificación. Prueba de inhibición de la hemoaglutinación Empleo: Para detectar y medir anticuerpos. La prueba de inhibición de la hemoaglutinación (IH) es similar en principio a la prueba NV, excepto que la actividad viral inhibida es la hemoaglutinación. Las pruebas IH son muy sensibles y altamente específicas, y particularmente útiles para medir anticuerpos contra aquellos virus hemoaglutinantes que se replican mal en cultivos celulares o producen poco o ningún efecto citopático. Los ejemplo s de tales virus son el virus de la





influenza Tipo A en la mayoría de las especies, el virus de Newcastle de las aves y el parvovirus porcino. Las pruebas IH se efectúan en placas microtituladoras. Se hacen las diluciones del suero a analizar, seguido de la adición de un volumen igual de suspensión viral diluida que contenga aproximadamente 4 a 8 unidades HA (una unidad HA es la dilución más alta de la muestra viral que produce una hemoaglutinación completa). Se añade una suspensión apropiada de glóbulos rojos y las placas se mezclan suavemente y se dejan en incubación por 1 - 2 horas a 4°C (para la mayoría de los virus). Si esta presente el anticuerpo específico en el suero a analizar, se inhibirá la aglutinación de los glóbulos rojos y estos se posarán en un "botón" bien definido. Las células aglutinadas, en contraste, se posarán completamente en una capa delgada sobre todo el fondo del pozo de la placa o formarán un botón de borde desigual e irregular. El suero a analizar contiene frecuentemente inhibidores no específicos de la aglutinación y debe primero ser adsorbido con glóbulos rojos antes de hacer la prueba. Prueba de fijación de complemento Empleo: Detección y medición de anticuerpos. Las pruebas de fijación de complemento (FC) son más útiles como ayuda en el diagnóstico de una infección viral aguda o reciente, porque estas detectan primero IgM, la primera clase de inmunoglobulinas en responder a la infección. La prueba impone el empleo de antígenos virales, complemento de cobayo y un sistema indicador de CRS de oveja sensibilizadas. Al reaccionar directamente al anticuerpo dirigido contra los antígenos virales, sensibiliza los CRS de oveja. Este anticuerpo anti- CRS de oveja se refiere como hemolisina y se prepara en conejos. El antígeno y el complemento son dosificados y diluidos. Si no hay presencia de anticuerpos específicos en el suero problema, el complemento queda libre para reaccionar con los CRS sensibilizados produciendo lisis. Si están presentes suficientes anticuerpos, el complejo antígeno-anticuerpo específico habrá fijado al complemento y no se presentará lisis de los CRS. Inmunodifusión Empleo: Para detectar anticuerpos y antígenos específicos. Las dos técnicas más empleadas de inmunodifusión son el sistema de placa de dobledifusión y la imunoelectroforesis. Ambas pruebas se realizan en medio semisólido generalmente agar o agarosa. La diferencia esencial entre estos métodos es que en la imunoelectroforesis el antígeno es previamente fraccionado electroforéticamente antes de ser cubierto por el anticuerpo. En ambos métodos, el antígeno y el anticuerpo se funden uno contra otro formando una línea de precipitación en donde ellos reaccionan. El sistema de placa de doble-difusión es la prueba de diagnostico más comúnmente empleada. El ejemplo más conocido es la "Prueba de Coggins" para la anemia equina infecciosa. La prueba de inmunodifusión se puede hacer más sensible empleando un marcador radioactivo, el cual permitirá la detección de reacciones antígeno-anticuerpo no visibles al ojo humano. El marcador radioactivo generalmente es el yodo (125I),tanto el antígeno el anticuerpo pueden ser marcados. El marcaje ocurre por el acoplamiento de 125I al aminoácido tirosina. Las pruebas se leen cubriendo las placas o laminillas con una película de rayos x (radiografía) que registran las líneas radioactivas (precipitación

HONGOS Son microorganismos de estructura celular eucariota (pudiendo ser unicelulares o pluricelulares); son heterótopos, aclorófilos y de metabolismo adsortivo.

De Vida Libre = Estas especies digieren la materia orgánica mediante liberación de enzimas al medio externo (adsorción)





Hay Especies Oportunistas = Son especies de vida libre que se pueden adquirir por inhalación o a través de heridas, tras lo cual pueden integrarse la flora microbiana normal (como la Cándida), siendo inofensivos para el huésped a menos que este presente compromiso de sus defensas.

Patógenas = Son especies capaces de captar nutrientes directamente desde los tej. del huésped.

CARACTERISTICAS PRINCIPALES :

Poseen una pared celular rígida que contiene quitina, glucano, manano y otros polisacáridos.

La MP es rica en esteroles Su citoplasma presenta Organellas (mitocondrias, Ret. Endoplasmático, etc) y además

existe Flujo Citoplasmático. Poseen núcleo verdadero (Núcleo rodeado de Mem. Nuclear) y contiene varios pares de

cromososmas (los filamentos de ADN están unidos por puentes histonas y proteínas). Tipo de reproducción : Sexual (hongos perfectos) o Asexual (hongos Imperfectos) Se cultivan sólo en medios ácidos, donde se desarrollan lentamente ya sea en forma de

Levaduras o de filamentos (Hifas y/o Micelios). CLASIFICACIÓN de los HONGOS:

SEGÚN LA FORMA DE CRECIMIENTO Y ESTRUCTURA 1.- LEVADURAS

2.- FILAMENTOSOS

3.- DIMORFICOS

SEGÚN EL TIPO DE REPRODUCCIÓN a.- INPERFECTOS (realizan reproducción de tipo asexual)

b.- PERFECTOS (realizan reproducción de tipo sexual)

ESTRUCTURA Y MORFOLOGIA : (levaduriforme, filamentosa, dimórfica)

LEVADURIFORME = Son Hongos Unicelulares de forma oval, inmóviles que se reproducen por gemación, bipartición o un proceso intermedio entre ambas.

FILAMENTOSA = Son Hongos Pluricelulares, formados por estructuras tubulares denominadas Hifas; las que se desarrollan, ramifican y entrelazan conformando una estructura llamada Micelio.

HIFAS : Son túbulos cilíndricos ramificados, de diámetro variable, tabicados o no, constituidos por una pared celular rígida, delgada y transparente que contiene una masa citoplasmática multinucleada y móvil. Las hifas pueden tener una serie de elementos que cumplen diferentes funciones, como por ejemplo :

Rizoides = Penetran en el sustrato primitivo en busca de alimentos





Depredadores = para la captura

Órganos

Aspersorios = Para la fijación

Estolones = Para la búsqueda de nuevas zonas nutricionales

MICELIOS : Conjunto de hifas ramificadas, entrelazadas y de disposición variable. Los Micelios pueden ser :

1. Micelio Aéreo o Reproductor = Es la parte del micelio que se proyecta por encima del sustrato y que se encarga de función reproductora y de dispersión de la especie mediante esporas.

2. Micelio Vegetativo = Es la parte del micelio que penetra en el sustrato (superficie del suelo, plantas, alimento, etc.)para absorber sustancias nutricionales.

PSEUDOMICELIO : Es una estructura de transición entre la colonia ( talo) unicelular o pluricelular que presentan algunos hongos unicelulares como la Cándida.

DIMÓRFICA = Son Hongos que pueden existir tanto en forma de levadura o filamentosa, según el medio en el que se encuentren. Ej. Histoplasma Capsulatum, Coccidioides, Paracoccidioides, Blastomyces, Sporothrix, etc.

FORMAS DE CRECIMIENTO :

1. Por ESPORAS : Las esporas son elementos de reproducción y resistencia que se forman por condensación del citoplasma y contenido nuclear, de manera que de una célula madre se origina 4 o más elementos hijos (cada uno de los cuales contiene una parte del núcleo primitivo); las esporas están envueltas por una cubierta resistente (consistente en 2 membranas , una interna y otra externa) y pueden albergar una o más células divididas por septos. Poseen un esporo germinativo de donde surgirá una nueva hifa en el momento del desarrollo. Tipos :

Exosporas o Conidios : Esporas asexuales que nacen por brotación en el extremo de un filamento de micelio; según su tamaño se designarán como micro o macroconidios.

Endosporas o Gonidios : Son esporas que se forman en el interior del esporangio (vesícula que contiene esporas)

Clamidiosporas : Son esporas asexuales de pared gruesa y en reposo Cigosporas : Son esporas formadas por la conjugación entre los filamentos de

micelio 2. Por OIDIOS : Estadio imperfecto de los hongos de la familia Erysiphaceae que permite el

crecimiento por separación de un parte del micelio y posterior reproducción por gemación (reproducción asexual)

REPRODUCCIÓN : Puede ser de dos tipos :

1. ASEXUAL : La realizan los denominados hongos imperfectos. Se da a partir de un micelio, sin conjugación nuclear, ni reducción de cromosomas. Puede llevarse a cabo por :





Brotación o Gemación = Consiste en la formación de una yema en una determinada zona de la célula madre; a medida que la célula hija aumente de tamaño se irá separando de la célula madre.

Bipartición (Esporulación – Germinación) : Mediante este mecanismo se forman esporas que luego , en un medio adecuado, germinarán.

La Célula vegetativa (directamente): TALOSPORAS (astrosporas, blastosporas y clamidiosporas)

Estructuras Especiales: CONIDIOS (esporas asexuales que surgen de hifas

ESPORANGIOSPORAS (estas se forman dentro de

una estructura sacular , llamada esporan-gioforo, en los extremos de las hifas no tabicadas)

Fragmentación : Por este mecanismo las hifas se fragmentan y c/u de esos fragmentos crecerá y regenerará, dando origen a una nueva colonia.

2. SEXUAL : Este tipo de reproducción la realizan los denominados hongos perfectos. Consiste en fusión de 2 núcleos haploides sexualmente diferentes, de la unión surge una célula diploide (zigoto) que por división meiótica originará 4 células haploides , las cuales se rodean por una gruesa cubierta constituyendo las esporas (ej. zigosporas, ascosporas, oosporas).

CLASIFICACION DE LAS MICOSIS PROVOCADAS – ANTIMICÓTICOS EMPLEADOS : MICOSIS SUPERFICIALES : Se pueden tratar con Itraconazol

Tipo de Micosis

Superficial

Localización de la Lesión

Género y Forma de Crecimiento

Enfermedad Representativa

Antimicótico Empleado en el

Tratamiento

Cutánea

Pelo y Estrato Córneo de la piel

(muerta)

Malassezia (levadura) Microsporum (filamentoso) Trichophyton (filamentoso) Epidermophyton (filament.)

Tiña Versicolor Dermatofitósis (Tiñas)

Ketaconazol Griseofulvina Miconazol, Econazol, Fluconazol, Isoconazol, Ketaconazol y Clotrimazol

Subcutánea

Tej. Celular Subcutáneo

Sporothrix (dimórfico) Varios Géneros (filament.)

Esporotricosis Micetoma

Anfotericina B

MICOSIS PROFUNDAS : Se pueden tratar con Itraconazol (a criterio médico)

Tipo de Micosis

Superficial

Localización de la Lesión

Género y Forma de Crecimiento

Enfermedad Representativa

Antimicótico Empleado en el

Tratamiento





Sistémicas

Oraganos Internos

Histoplasma (Levadura) Coccidioides (levadura) Paracoccidioides (levadura) Blastomyces (Levadura)

Histoplasmósis Coccidioidomicosis Paracoccidioidmicosis Blastomicosis

Anfotericina B

Oportunistas

Organos Internos

Aspergillus (Filamentoso) Candida (levadura) Cryptococcus

Aspirgilosis Candidiasis Criptococosis

Miconazol, Econazol, Fluconazol, Isoconazol, Ketaconazol y Clotrimazol

1.- La Solicitud de Examen Microbiológico : El pedido para el examen microbiológico debe contener los siguientes datos :

Datos Filiatorios del Paciente Tipo de Muestra, Fecha de Obtención y Condiciones de la Toma de Muestra Datos Clínicos Estado Inmunitario Tratamiento Medicamentoso previo a la toma de muestra Determinación a Realizar por el laboratorio

Todos estos datos brindan información indispensable para el procesamiento y posterior interpretación de la muestra. 2.- La Muestra : (ejemplos)

Tipo de Muestra Procedencia Toma de Muestra mediante Exudado Faringeo TRS (Faringe, Amigdalas

palatinas, etc) Hisopado Faringeo

Esputo TRI Expectoración Material Mucupurulento

TRI

Lavado Bronquial Cepillado (Protegido) Bronquial Punción Pulmonar

Sangre Compartimiento Vascular (venas) Punción venosa Suero Compartimiento Vascular (venas) Punción venosa LCR Conducto Raquídeo (en segmento

Lumbar) Punción Lumbar (entre L4 y L5)

Orina Aparato Urinario Micción Espontánea, Micción al Asecho Punción Suprapúbica, Punción de Sonda

ExudadoUretral Uretra Hisopado Uretral Heces o Materia Fecal (con sangre, pus, moco)

Intestino Defecación Espontánea (una porción representativa)

Exudado Purulento o sospechoso

variable Hisopado o Frotis de lesión mucocutánea

Líquido de Lesiones variable Frotis de la lesión Colecciones purulentas y

variable Punción





Abscesos En cualquier diagnóstico microbiológico es muy importante realizar una adecuada toma de muestra (realizada en el sitio exacto y que sea representativa), no menos importante es la conservación y el transporte del material a analizar; ya que de todo esto dependerá que los resultados obtenidos sean correctos. Para garantizar esto se toman las medidas adecuadas para cada caso ; pero minimamente se ponen en práctica una serie de Medidas Generales que son las siguientes :

Evitar cualquier tipo de contaminación externa. Tomar la muestra, en lo posible, antes de la administración de ATB. Colocar una cantidad representativa (suficiente) del material a estudiar en recipiente estéril. Los recipientes deben ser cerrados (para mantener la muestra inalterable), luego

rotulados correctamente e ir acompañados de la solicitud que contengan los datos necesario para procesar la muestra.

Enviar la muestra lo más rápido posible al laboratorio bien conservar en un ambiente apropiado (heladera o a Temp. ambiente – según sea el caso).

Utilizar medios de transporte apropiados para mantener la viabilidad de los microorganismos, presentes en la muestra, durante un tiempo prolongado.

3.- TIPOS DE DIAGNÓSTICO MICROBIOLÓGICO :

POR METODOS DIRECTOS : Pueden ser Específicos o Inespecíficos. Estos métodos permiten demostrar : la presencia de un Microorganismo o agente etiológico, los componentes del mismo (sus antígenos), las sustancias producidas por su metabolismo (metabolitos) y/o su genoma. Comprende Examen Citológico al M.O. (visualización), Cultivos, Aislamiento e Identificación del germen, Antibiograma .

EXAMEN CITOLÓGICO AL MO : (Examen en Fresco y técnicas de campo oscuro). Mediante estas técnicas podemos detectar agentes etiológicos (como bacterias y hongos) y visualizar también otros elementos como hematíes, Leucocitos Polimorfo nucleares (PMN) y algunos parásitos. Cabe señalar que un recuento alto de PMN por campo indica que hay una reacción inflamatoria, pero no siempre indica infección bacteriana aguda, pues este recuento también puede ser indicativo de alergias, neoplasias, etc. Mediante la técnica de campo oscuro, aplicada en material patológico, podemos visualizar Treponemas y Leptospiras

EXAMEN CITOLOGICO COLOREADO : (coloración o tinción del preparado a observar en el MO) Tipos de Tinciones : A.- Tinción o Coloración Negativa = Sirve para visualizar algunas Bacterias y Hongos, por Ej. Cápsula del Criptococcus Neoformans (presente en el LCR en una meningitis micótica) B.-Tinción o Coloración Simple = (Giemsa) : Nos permiten la visualización de algunas Bacterias, Hongos y Parásitos C.- Tinción o Coloración Diferencial = (Gram, Ziehl – Neelsen, Kin Youn, Auramina – Rodamina, Gueguen, etc). La coloración más utilizada para la detección de bacterias sin duda es la de Gram y en casos de los acilos Ácido Alcohol Resistentes o BAAR la basiloscopía (ziehl – Neelsen y Kin Ypun) y Gueguen para los hongos.

1.- Coloración de Gram (Exámen bacteriológico): Es sencilla de realizar, rápida y de gran riqueza informativa, es por ello

que aún no se pudo reemplazar la utilidad de esta tinción. Gram permite clasificar las bacterias en Gram+ y Gram- en función de su estructura de pared; a demás nos informa su morfología y disposición en el espacio, lo cual nos orienta hacia un diagnóstico. Fundamento de la Tinción de Gram :





Técnica Elemento Bacterias Gram- Bacterias Gram+ 1- Colorante Violeta de Cristal Color Violeta Color Violeta 2- Mordiente Lugol (Yodo) Color Violeta Color Violeta 3- Decolorante

Acetona + Alcohol Se Decolora No se Decolora

4- Contraste Azul de Metileno Color Rosado Color Violeta 2.- Coloración de Ziehl – Neelsen (Basiloscopía) : Es útil para identificar

BAAR, se basa en la propiedad que presentan estas bacterias para resistir la decoloración con un alcohol y un ácido fuerte, tras haber sido previamente teñidas; ésta propiedad se debe a la presencia de ácidos micólicos en su pared. Fundamento de la Tinción de Ziehl – Neelsen :

Técnica Elemento BAAR NO BAAR 1- Colorante Fuscina Color Rojo Color Rojo 2- Mordiente Calor Color Rojo Color Rojo 3- Decolorante

Acido Fuerte + Alcohol

Color Rojo Decolora

4- Contraste Azul de Metileno Rojo sobre Azul Azul

CULTIVOS : Son ambientes artificiales que contienen los elementos nutritivos y las condiciones físico- químicas que permiten el desarrollo, crecimiento, conservación y estudio de los microorganismos. Existen diferentes medios de cultivo (tipos) : a.- Cultivos Comunes : Son los que contienen un medio base (Agar – Agar) para el desarrollo de microorganismos. b.- Cultivos Enriquecidos : Son aquellos medios destinados a lograr un crecimiento más rápido o a lograr el desarrollo de ciertos gérmenes; por Ej. Agar – Sangre; Agar – Chocolate; Agar – Cerebro – Corazón ; Caldo de Selenito; etc. c.- Cultivos Selectivos : Son aquellos medios que permiten el desarrollo de un determinado microorganismo, impidiendo el desarrollo de otros, por Ej. Lowestein – Jensen; TCBS; Medios SS; Levine; Tayer – Martín (con bilis o con taurocolato); etc. d.- Cultivos Diferenciales : Son aquellos medios, como la urea, el citrato, el indol, SIM, etc., que contienen una sustancia que al combinarse con algún producto del metabolismo bacteriano producen una reacción característica (por Ej. Un cambio de color) que permitirá su identificación. e.- Cultivo virológico : (evidencia indirecta de crecimiento en cultivos celulares). Los virus no tienen la capacidad de crecer en cultivos sólidos para bacterias u hongos; y como son considerados como parásitos intracelulares obligados, se necesitan para su desarrollo de células vivas. Para reralizar el aislamiento de virus podemos utilizar :

01- Cultivos Celulares 02- Hevos Embrionados 03- Animales de Experimentación

Debido al elevado costo, la necesidad de personal experimentado e infraestructura especial, no son utilizados en el diagnóstico clínico de los laboratorio. Por ello en la actualida han cobrado importancia los Métodos rápidos de Diagnóstico (microscopía Electrónica, Técnicas Inmunológicas y Moleculares (ver más a delante). Procedimiento para el cultivo : 1.- Realizar la siembra del microorganismo (contenido en la muestra) en un medio de cultivo apropiado. 2.- Incubar para generar un crecimiento visible. Es necesario que el médico solicitante conozca cuales son los períodos razonables para realizar las diversas





clases de cultivos y que el laboratorio establezca un sistema para informar resultados preliminares. En Bacteriología Clínica = se requiere de un período de incubación mínimo de entre 48 – 72 HS a una temperatura de entre 35º C y 37º C En Virología Clínica = se requiere aproximadamente entre 30 – 45 días de incubación En Micología clínica = se requiere aproximadamente de entre 7 – 15 días de incubación; empleándose universalmente como medio de cultivo el Agar – Saboureaud; al que se le puede adicionar ATB (para inhibir el desarrollo de bacterias contaminantes) o Cicloheximida (para inhibir el desarrollo de hongos contaminantes). 3.- Si se observa el crecimiento de colonias se realiza una nuevamente una coloración de Gram (ésta se diferencia de la primera tinción de Gram por que no visualizaremos ni hematíes ni Leucocitos, sólo observaremos lo que se desarrolló tras la incubación del cultivo). 4.- Realizar el Recuento de Colonias (expresando en UFC / ml) y observar las características de la colonia. El recuento de colonias generalmente es un recurso que se utiliza mayormente en muestras de orina (2da. Porción) en infecciones urinarias; lavado bronquial en infecciones del TRI y en muestras de catéteres.

IDENTIFICACIÓN DE GERMEN : Bacterias y hongos pueden ser identificados, tras su aislamiento en cultivos sólidos son identificados por : A.- Las características Macroscópicas de la Colonia. B.- Pruebas Bioquímicas Específicas para cada género microbiano; por Ej. Para los Hongos se pueden realizar : 1- Auxograma = Estudia el poder de Asimilación 2- Zimograma = Estudia el poder Fermentativo

ANTIBIOGRAMA : Sirve para registrar la susceptibilidad de un determinado germen a los ATB. Se define como el conjunto de procedimientos que permiten determinar la sensibilidad in vitro de un microorganismo frente a un determinado ATB.

METODOS DIRECTOS RAPIDOS : A.- TÉCNICAS DE INMUNOMARCADO : Conjunto de técnicas utilizadas para la detección de antígenos del germen. Puede realizarse a partir de las muestras donde se eliminan los antígenos como por Ej. las tomadas del foco de infección (es la muestra que ofrece mayor rendimiento), del suero, del LCR o de la orina (esta última es una muestra alternativa dada la facilidad de obtención y la posibilidad de su concentración). Las técnicas más utilizadas son : Inmunofluorescencia Directa (IFD) = Consiste en la unión de un Anticuerpo marcado

con Isotiocinato de fluoresceína a su Antígeno correspondiente, y la posterior detección mediante microscopía de fluorescencia. Las principales ventajas de esta técnica son su sencillez, rapidez y la posibilidad de efectuar un diagnóstico etiológico en pacientes previamente tratados con ATB. En el Diagnóstico. En líneas generales esta técnica se aplica en detección de : Streptococo Pyogenes, Haemophilus Influenzae, Chlamydia Trachomatis, Pneumocystis Carinii, Cryptosporidium, etc.

Enzimoinmunoanálisis (EIA) = Es ampliamente utilizadaen el Diagnóstico virológico(Ej. Antígeno p24 del HIV; Ag del VSR, Ag del Rotavirus,etc). También resulta útil en el diagnóstico de otras enfermedades infecciosas causadas por Chlamydia Trachomatis, Streptococo Pyogenes, Neisseria Gonorhoeae, Cryptococcus Neoformans, Cryptosporidium, etc.

Aglutinación en Látex (AL) = Algunas de estas Pruebas resultan útiles en el diagnóstico de Meningitis Bacteriana en niños parcialmente tratados o en aquellos donde la respuesta inflamatoria y diversos índices bioquímicos del LCR no permiten diferenciar claramente entre una Meningitis Bacteriana y una Viral. Sin embargo su uso cuantitativo es limitado en la identificación de Agentes Etiológicos. Actualmente la AL tiene un empleo importante en muestras como LCR y Suero, donde se la utiliza para la





detección de antígenos fúngicos del Cryptococcus Neoformans (hongo responsable de meningitis). Dicha Prueba tiene una sensibilidad mayor a la dela Tinta China en LCR; mientras que su especificidad se ve disminuida ante la presencia de factor reumatoideo u otras proteínas de interferencia que inducen resultados de falsos positivos, los cuales pueden eliminarse tratando las muestras con una proteasa. También hay pruebas de AL diseñadas para los Streptococos del Grupo A, las cuales, si bien son muy específicas son relativamente Sensibles, de manera que las pruebas que resultaren negativas deben ser respaldadas por un cultivo. Actualmente, en los inmunodeprimidos, tiene mucha importancia en la búsqueda de Antígenos Fúngicos la prueba de Aglutinación de Partículas de Látex (APL)

Coaglutinación = También estas Pruebas resultan útiles en el diagnóstico de Meningitis Bacteriana en niños parcialmente tratados o en aquellos donde la respuesta inflamatoria y diversos índices bioquímicos del LCR no permiten diferenciar claramente entre una Meningitis Bacteriana y una Viral.

Contrainmunoelectroforésis (CIE) = Inmunoperoxidasa =

B.- TÉCNICAS MOLECULARES : Son un conjunto de técnicas que hoy en día posibilitan la Detección del Genoma de un determinado microorganismo, aunque la cantidad de inóculo en la muestra sea muy bajo. Estas Técnicas Comprenden :

Hibridación con Sondas de Ac. Nucléico = Estas sondas genéticas consisten en una molécula de Ac Nucleico monocatenario y marcado con un isótopo radiactivo (Ej. 32 P) que, tras hibiridarse (unirse) a una secuencia complementaria de ADN, permite su detección . Empleando sondas específicas podemos detectar el agente etiológico presente en una muestra, sin necesidad de realizar un cultivo de la misma. También la construcción de sondas genéticas para ciertos factores de virulencia (toxinas), posibilita detectar a los microorganismos que transporten los genes que los codifican; por Ej. tanto la Hibridación con Sondas para la Enterotoxina de la Escherichia Coli como la Hibridación con Sondas para la Toxina Colérica del Vibrio Cholerae pueden ser aplicadas directamente en las heces para luego detectar el agente patógeno respectivo. Esta Técnica también se emplea para detectar el genoma de: Chlamydia Trachomatis, Neisseria Gonorrhoeae, Streptococo Pyogenes, Histoplasma Capsulatum, etc. Reacción en Cadena de la polimerasa (PCR) = Cuando conocemos la secuencia de nucleótidos, o parte de ella, de un determinado gen; podemos añadir secuencias de nucleótidos conocidos (cebadores) apropiados para la muestra lo que permitirá que una ADNpolimerasa genere gran cantidad de copias del gen estudiado, las cuales serán fácilmente identificables con una electroforésis.

La PCR tiene una gran sensibilidad por lo cual los laboratorios clínicos están accediendo cada vez más a su uso, tan es así que la PCR está reemplazando al cultivo para la detección rápida del HIV; y ya se anticipan muchas otras aplicaciones como la detección de microorganismos no cultivables, de crecimiento lento o de difícil cultivo. Sin embargo se trata de una técnica compleja que requiere de cuidados extremos para evitar contaminaciones que lleven a resultados de falsos positivos.

Dot Blot = Slot Blot = Southern Blot = Northern Blot =

POR METODOS INDIRECTOS : Son métodos que permiten detectar las huellas que el germen dejó tras su contacto con el sistema inmunológico del huésped (anticuerpos circulantes y/o células sensibilizadas contra determinado microorganismo). Comprende Pruebas Serológicas y Pruebas de Hipersensibilidad Retardada o Celular.





SEROLOGIA : Son método que permite determinar niveles de Anticuerpos en el suero del paciente. En el desarrollo de estas técnicas es conveniente extraer 2 muestras de suero (una en el período agudo de la enfermedad y otra en el período de convalecencia) para comparar los niveles de anticuerpos dosados en cada período; estos sueros obtenidos (muestras) en cada período y luego comparados se denominan como muestras pareadas. Los resultados se expresan cuantitativamente, denominándose Titulo a la mayor dilución del suero del paciente en la cual aún se puede detectar los anticuerpos contra un germen determinado. Se considera que hay infección reciente cuando se registra un aumento del Título de Anticuerpos en 2 o más diluciones de suero (Ej. de 1/16 a 1/64); entonces consideramos que hay una infección resiente Decimos que se produjo una seroconversión cuando los niveles de Anticuerpos superen 4 veces los valores del Título. Excepto en el caso de dosaje de IgM, en donde se recomienda extraer una sola muestra de suero en casos particulares de infección reciente (por Ej. Influenza tipo b, etc) . Si el agente infeccioso es poco frecuente (viris de la Rabia, HIV o Toxina Botulínica), la presencia de Anticuerpos específicos en una sola muestra permite establecer el diagnóstico. Dentro de las técnicas más utilizadas en la detección de Anticuerpos citamos : 1.- Inmunofluorescencia Indirecta (IFI) = 2.- Fijación del Complemento (FC) = 3.- ELISA = 4.- EIA = 5.- Contrainmunoelectroforesis (CIE) = 6.- Inmunodifusión en Gel de Agar (IDGA) = 7.- Inmunomicroscopía Electrónica Empleadas para virus 8.- Inhibición de la Hemaglutinación

REACCIONES DE HIPERSENSIBILIDAD RETARDADA : Son reacciones intradérmicas como la (PPD, tricofitina, candidina, histoplasmina, coccidioidina, paracoccidioidina, Aspergilina, etc.) donde se efectúa una inoculación intradérmica no letal con antígenos de cierto microorganismo para tras 24 – 48 Hs poner en evidencia la sensibilidad del huésped frente a ese microorganismo. Una prueba cutánea positiva en un individuo sano indica contacto previo con el microorganismo, y adquiere gran utilidad en los estudios epidemiológicos.

ENF. INFECCIOSAS (ANEXO 3)

ENFERMEDADES INFECCIOSAS = Son aquellas enfermedades causadas por múltiples agentes patógenos(bacterias, virus, hongos y parásitos). Dichos agentes interactúan con el organismo humano de diferentes maneras, resultando así una relación que está dada por :

Presencia del Agente, Toxinas o Enzimas


Respuesta Inmune del Huésped

Por otro lado debemos tener presente que la relación : Infección / Enfermedad .... también se halla condicionada por la evolución biológica y la adaptación al medio ambiente por parte del huésped y los microorganismos; lo cual explica la presencia de portadores sanos, Infectados y Enfermos.

Para Rich Las enfermedades infecciosas son el resultado de la siguiente relación :





Inóculo + Virulencia + Hipersensibilidad


Inmunidad Natural + Inmunidad Adquirida

A lo que dice Rich debemos agregar la presencia de Receptores de Superficie presentes en las células, que pueden ser utilizados por diferentes microorganismos; por Ej. El receptor CR2, presente en los Linfocitos B, permite la infección por VEB y HIV; algo similar ocurre con los Linfocitos T, Macrófagos alveolares y del tracto digestivo, quienes expresan el receptor ICAM que los vuelve susceptibles a infecciones por Rinovirus Micoplasmas y Poliovirus. Por esto decimos que no basta con estar expuesto al microorganismo para contraer una determinada enfermedad.

La fisiopatogenia de toda enfermedad infecciosa está ligada a 3 factores : el Medio Ambiente, el Microorganismo y el Huésped.

a. Medio Ambiente: es quien condiciona o favorece la aparición de determinada enfermedad infecciosa.

b. Microorganismo : se vale de sus factores de virulencia (Capacidad de : Colonizar, Penetrar, Multiplicarse, Invadir y Lesionar) para causar , en mayor o menor medida, la enfermedad.

c. Huésped : pone en marcha sus mecanismos de defensas (inmunidad natural e inmunidad adquirida) frente al agente y/o sustancia extraña.

Inmunidad Natural = Es aquella insensibilidad relativa que posee un sujeto frente a determinada enfermedad, permitiendo al mismo sobrevivir la primera etapa de la infección. Se halla condicionada por factores : genéticos, neurohumorales, edad, sexo, raza.

En un individuo sano los microorganismos son destruidos permanentemente por mecanismos defensivos de tipo general entre los que se destacan :

1) La Integridad de Piel y Mucosas : La integridad de las diferentes capas de la piel y de las mucosas actúan como una barrera o solución de continuidad (llamada barrera cutáneo – mucosa), que evita el ingreso de microorganismos; además las glándulas anexas a la piel liberan secreciones de tipo ácidas que actúan como bactericidas evitando la colonización de gérmenes patógenos. Cuando la piel sufre agresiones (quemaduras, abrasiones, cortes, pinchazos, etc) su función de barrera se altera y la lesión sirve como una puerta de entrada a microorganismo y permiten que los mismos colonicen y penetren a tejidos subyacentes. A nivel de las mucosas el primer elemento defensivo está dado por la secreción como lisozimas, espermina, arginina y leucina (factores antimicrobianos) que tienen actividad bactericida, lo que provoca la lisis de microorganismos. Otro elemento de defensa de las mucosas es el transporte mucociliar que permite eliminar constantemente a aquellos microorganismos que entran en contacto con la mucosas. Sin embargo hay factores como el aire frío y seco, la aplicación de fármacos tópicos, el uso de vasocontrictores, la cocaína, etc. que producen desequilibrios en la composición de las secreciones mucosas y cilioestásis de los epitelios ciliados. En el estómago la secreción de iones, por parte de su mucosa, permite que en la luz se forme ácido clorhídrico, que es el responsable de un pH altamente ácido que actúa como una barrera muy eficaz contra el ingreso de microorganismos.

2) Los Movimientos Peristálticos : Dichos movimientos adquieren gran importancia a nivel del intestino y vías urinarias en donde impiden la colonización de agentes patógenos ya que tienden a expulsar a los mismos.

3) El Lavado de Los Fluidos Orgánicos : La excreción de ciertos fluidos permite la expulsión de microorganismos, lo que contribuye a evitar su colonización e inclusive impiden que su proliferación alcance número críticos como para provocar una infección.

4) La Flora Normal : Son microorganismos que residen en piel y mucosas de personas sanas. La composición de la Flora varía de una localización a otra y depende de factores como edad, sexo, tipo de alimentación, grado de higiene personal, condiciones de saneamiento ambiental,





condiciones socioeconómicas, clima, etc. La flora microbiana normal resulta importante porque actúa como barrera defensiva frente a microorganismo total o potencialmente patógenos; ya sea creando pH ácidos en el medio para destruir a los agentes patógenos o bien compitiendo por nutrientes o receptores celulares, produciendo bacteriocinas y también estimulando constantemente al sistema inmulógico para que reaccione rápidamente frente a posibles gérmenes patógenos, a demás resulta beneficiosa para la digestión de productos no atacables por los fermentos digestivos y para la síntesis de algunas vitaminas como la vit. K (Lactobacillus del intestino).

5) Células Fijas : (Ej. Histiocitos, Macrófagos alveolares, Células de Kupffer, Microglias, etc). Estos tipos de células se hallan distribuidas estratégicamente en diversos sitios del organismo (Piel, Pulmón, Hígado, SNC, etc) donde actúan como filtro para algunos gérmenes patógenos.

6) Fagocitos : Constituyen la segunda barrera defensiva que deben franquear los microorganismos cuando logran traspasar las barreras anteriores por lo que ya han ingresado al torrente sanguíneo. Estas células mediante procesos oxidantes, leuquinas, monoquinas, linfoquinas y también mediante enzimas, que degradan fosfolípidos de membranas, destruyen a los gérmenes y/o a las células infectadas (esto no es aplicable a los BAAR ya que ellos deben ser eliminados por un mecanismo más complejo que va asociado a la Inmunidad Específica y al Sistema de Complemento).

a. Eosinófilos = Participan en la eliminación de inmunocomplejos y algunos parásitos, evitando el daño de vasos y tejidos. Además son los responsables de la magnitud de la Respuesta Inflamatoria.

b. Basófilos = Poseen gránulos de Histamina y Heparina, lo que les confiere efectos vasoactivos y anticoagulantes, esto explica su presencia en cuadros terminales de Shock.

c. Macrófagos = Estos engloban al microorganismo y activan la inmunidad específica d. Linfocitos y Monocitos : estos si bien son células relacionadas con la inmunidad

adquirida, durante la primoinfección codifican la información e inician una respuesta inmunológica celular y humoral.

7) Opsonización : Es el fenómeno de activación de la fagocitosis mediante opsoninas (son proteínas del suero o anticuerpos que cuando se combinan con un antígeno lo vuelve más fácil de fagocitar). Esta función es muy importante sobre todo en los sinusoides del bazo. En los pacientes esplenectomizados las alteraciones de la Opsonización determina infecciones por gérmenes capsulados y Gram – .

8) Sistema de Complemento : Es un conjunto de proteínas circulantes (C1 a la C9) que se activan secuencialmente en presencia del complejo antígeno – anticuerpo y otras sustancias, dicha activación puede realizarse por la vía clásica (desde C1) o por la vía alternativa (a partir de C3). Entre sus funciones destacamos la hemólisis, la bacteriólisis (en presencia de anticuerpos específicos) y otras reacciones relacionados con liberación de mediadores químicos por parte de Mastocitos y Basófilos (C3a – C5a), Quimiotáxis (C5), Opsonización (C3 – C4), activación de la Fagocitosis (C3b), Transporte de inmunocomplejos (C3b), Citólisis Inmune (C5), vasodilatación, coagulación intravascular, contracción de músculo liso, cambios de membrana, formación del complejo de taque a membrana o MAC, etc. Inmunidad Adquirida = Insensibilidad específica que obtiene un individuo después del nacimiento frente a determinada enfermedad; ésta puede ser activa o pasiva.

Su modulación está relacionada con interleuquinas (tipo I = activa a los linfocitos T; tipo II = induce el crecimiento. Maduración de Linfocitos T; tipo III activan a los mastocitos y las restantes tipos inducen el crecimiento, maduración y diferenciación de los Linfocitos B) e interferones (proteínas que se producen en las células animales como respuesta a inductores virales como el genoma viral; su función principal es inhibir la replicación viral. También ciertas bacterias inducen su producción).

I. Inmunidad Activa : Se produce tras padecer una enfermedad infecciosa o tras ser expuesto a un agente patógeno mediante vacunación (inoculación de





microorganismos atenuados o muertos y/o con sus productos). En este caso, las células inmunitarias reconocen al microorganismo y mantienen una memoria inmunológica del mismo, por lo que ante una nueva exposición se pone en marcha una respuesta inmediata contra él mediante la liberación de anticuerpos específicos. Por lo tanto, la duración de este tipo de inmunidad es muy prolongada (incluso en algunos casos de por vida).

II. Inmunidad Pasiva : Se produce tras inyectar a un individuo inmunoglobulinas (anticuerpos) provenientes de un animal o de otra persona inmunizada activamente contra determinada enfermedad. Mediante la inoculación de estos anticuerpos se consigue una protección inmediata del sujeto, pero como dichas Ig inoculadas son destruidas progresivamente, este tipo de inmunidad es de corta duración , es decir tienen una utilidad transitoria frente a determinada enfermedad.

Inmunidad Humoral Queda determinada por la capacidad de sintetizar anticuerpos y liberarlos hacia el torrente sanguíneo, es decir que los factores activos de la inmunidad humoral son los anticuerpos presentes en los humores orgánicos. La denominada Célula Plasmática (último estadio de diferenciación de los Linfocitos B) es capaz de sintetizar anticuerpos o inmunoglobulinas (Ig) con capacidad para combinarse con antígenos inactivándolos y/o destruyéndolos

Si la respuesta específica frente al agresor es favorable, al cabo de 1 – 2 semanas, se producen los distintos tipos de anticuerpos (Ig) los que interactúan para eliminar al patógeno y autolimitar la enfermedad. Pero si el microorganismo estaba registrado en la memoria inmunológica (ligada a la Ig G) la respuesta defensiva es mucho más rápida. Los anticuerpos (AC o Ig) frente al germen actúan de la siguiente forma : se fijan a receptores y sitios estratégicos, lo recubren y aglomeran, e interactúan con otros componentes del sistema inmune como las proteínas del sistema de complemento para provocar la lisis del microorganismo.

Podemos decir que las funciones comunes de las Inmunoglobulinas son :

- Control de la Respuesta Inflamatoria. - Neutralización de toxinas. - Fijación a sitios estratégicos de microorganismos y partículas extrañas - Interactuar con el Sistema de Complemento. Las Ig M = Tienen la propiedad de no poder atravesar la placenta, apareciendo precozmente en la respuesta inmunológica por lo que son indicadoras de infecciones agudas, fijan el complemento, son anticuerpos activos contra toxinas bacterianas, bacterias y virus.

Las Ig G = Tienen la propiedad de atravesar la placenta brindando protección al recién nacido, aparecen tardíamente (2da semana de iniciada la infección), fijan el complemento, son anticuerpos activos contra toxinas bacterianas, bacterias y virus.

Las Ig A = Presentes principalmente en las secreciones mucosas donde su acción local favorece la lisis de algunos microorganismo, lo que le otorga un importante papel en la inmunidad de pared. Pequeñas concentraciones pueden existir en sangre y en el calostro (lo que brinda cierta protección al lactante)

Las Ig E = Normalmente está presente en pequeñas concentraciones, tiene receptores en las membranas de los Basófilos. Al activarse inducen la secreción de sustancias vasoactivas y broncoconstrictoras que determinan Reacciones de hipersensibilidad de tipo anafiláctica. También son activas contra parásitos.

Las Ig D = Ya se encuentran presentes en la membrana de los linfocitos no activados. Probablemente tengan una función reguladora sobre la membrana de los Linfocitos B.





Inmunidad Celular :

Está determinada fundamentalmente por los Linfocitos T y otras células fagocitarias, es decir que los factores activos de la inmunidad celular son las células fagocíticas. Las reacciones de la inmunidad celular se producen contra agentes infecciosos, proteínas eterólogas, tejidos trasplantados ,etc

La acción fagocitaria de las células intervinientes en este tipo de respuesta inmune comprende diversas etapas :

1. Quimiotáxis (movilización de los elementos celulares hacia el foco extraño) 2. Vacuolización (formación de un fagosoma) 3. Degranulación (liberación del contenido enzimático de lisosomas dentro de la vacuola) 4. Lisis del cuerpo, proteína y/o agente extraño

Fenómeno de Hipersensibilidad : Es una respuesta inmune inadecuada y/o exagerada , responsable de las lesiones del organismo. Básicamente podemos clasificarlas en 4 tipos :

1) Hipersensibilidad Tipo I (Anafiláctica) = Intervienen : IgE +Cél. Cebadas o Mastocitos + Basófilos.

2) Hipersensibilidad tipo II (Citotóxica) = Intervien : Ig M + Ig G + Sist. De Complemento +. 3) Hipersensibilida Tipo III (por Inmunocomplejos) = Intervienen : Ig M + Ig G + 4) Hipersensibilidad Tipo IV (Retardada) = Intervienen : Macrófagos + Linfocitos T

BIOQUIMICA CLINICA Volver al inicio

Aunque la interpretación de los resultados en bioquímica plasmática es bastante específica para cada constituyente en particular, existen unos principios básicos generales que se pueden seguir. El plasma es básicamente un fluido extracelular en movimiento, que transporta un gran numero de sustancias desde sitios de absorción o producción a sitios de utilización o excreción. Una vez tenemos el resultado contrastado, el primer factor en el que debemos pensar, debe ser si existe alguna razón para que esta sustancia esté en el plasma, es decir si su presencia esta justificada o no. El paso siguiente debe ser saber de donde viene y a donde va esta sustancia, es decir, cuales son los mecanismos responsables de su incorporación y su eliminación del plasma, y el control de dichos mecanismos. A partir de aquí no nos será difícil empezar a diferenciar las causas de la existencia de concentraciones anormales de cualquier sustancia. Unas concentraciones anormalmente bajas, pueden ser debidas a, bien una incorporación al plasma disminuida ( un deterioro en la síntesis, deficiencia nutricional, pobre absorción, falta de precursores...) o bien a un aumento en su eliminación plasmática ( demanda excesiva, excreción excesiva, perdidas patológicas....). Al contrario, unas concentraciones anormalmente altas, pueden ser debidas bien a un aumento de su incorporación al plasma ( aumento de la producción o de la entrada, liberación patológica del compartimento intracelular...) o bien a una disminución de su eliminación plasmática (disminución de su utilización, excreción impedida...)

Acidos Biliares

Los ácidos biliares (ACB) son sintetizados en hígado a partir del colesterol y se conjugan con





taurina o glicina antes de su excreción como sales biliares en la bilis. La acción bacteriana en el intestino deconjuga algunos ácidos biliares. Estos productos entran a la circulación portal y son extraídos y reciclados por los hepatocitos. Si estos ACB no son extraídos son medidos en sangre periférica. La medición de los ACB es un test sensible de función hepática

Tests complementarios: Los niveles de ACB deben determinarse junto a los otros tests de daño hepatocelular o de función hepática como en el perfil hepático

Aumento

Disminución de la función hepática: Cirrosis, Shunt Portosistémico (congénito o adquirido)

Colestasis

Ictericia

ALT

Muy específica de hígado. Se encuentra en el citoplasma de los hepatocitos y se libera a circulación durante cambios en la membrana del hepatocito o necrosis. Su localización tan superficial implica que en daños hepáticos moderados (ej. Hipoxia) se puedan producir niveles moderadamente altos en plasma.

Tests complementarios: Los niveles de ALT deben determinarse junto a los otros tests de daño hepatocelular o de función hepática como en el perfil hepático

Aumento

Hepatopatías primarias - Enfermedad hepática aguda - Hepatitis activa crónica - Hepatitis tóxica - Complejo Colangio-hepatitis (f) - Pancreatitis aguda - Necrosis hepatocelular - Neoplasia - Hígado graso

Hepatopatías secundarias - Enfermedades metabólicas: Diabetes Mellitus, Hiperadrenocorticismo

Amilasa

Su principal origen es páncreas e intestino delgado. En animales sanos la mayor parte de la amilasa proviene de intestino delgado

Tests complementarios: Debe valorarse junto a la lipasa, un perfil de función renal y TLI

Aumento

Origen pancreático





- Inflamación, Neoplasia, Necrosis, Obstrucción conducto pancreático

Enfermedad intestinal (enteritis, íleos, peritonitis, colecistitis) Fallo renal (Disminución filtración)

Medicaciones: corticoides, glucantime

AST

Existe en varios tejidos, pero sus mayores concentraciones están en el músculo esquelético, cardiaco e hígado.

Tests complementarios: Debería determinarse junto a los otros tests de daño hepatocelular o de función hepática como en el perfil hepático

Aumento

Enfermedades hepáticas (véase ALT)

Daño en músculos esqueléticos Desórdenes en músculo cardiaco

Bilirrubina

Aproximadamente el 80-85 % de la bilirrubina viene de la hemoglobina. La Hemoglobina liberada de los eritrocitos viejos, es fagocitada por el Sistema Fagocítico Mononuclear y se forma Bilirrubina indirecta (BI). Esta BI es liberada a la circulación donde se une a la albúmina y es transportada al hepatocito. Una vez en el hepatocito la bilirrubina sufre la conjugación. Esta conjugación deja a la Bilirrubina susceptible de ser eliminada vía biliar ( Bilirrubina Directa o Conjugada). El proceso continúa a través del sistema biliar extrahepático y hacia intestino donde las bacterias reducen la bilirrubina a urobilinógeno

Tests complementarios: Los niveles de bilirrubina deben determinarse junto a los otros tests de daño hepatocelular o de función hepática como en el perfil hepático.

Aumento





Origen prehepático: Enfermedad hemolítica

Origen hepático - Colestasis Intrahepática: Cirrosis, Hiperplasia nodular, lipidosis felina, colangitis/colangiohepatitis, Sepsis

- Colestasis Extrahepática: Colangitis, Colecistitis, Colelitiasis, Neoplasia biliar, Pancreatitis Create PDF files without this message by purchasing novaPDF printer (http://www.novapdf.com)




Calcio

El 99 % del calcio corporal se encuentra en esqueleto y esta en una forma poco utilizable. La mayoría de calcio restante (tisular y no esquelético ) es intracelular en tejido subcutáneo, tendones, músculos…(0.9 %). El Fluido Extracelular, contiene el resto del calcio total, es el calcio sérico y representa el calcio sanguíneo (0.1 %). La medición laboratorial del calcio total debe interpretarse junto con los valores de albúmina y el conocimiento del status ácido-básico del paciente, ya que solo la fracción iónica es activa en procesos como la formación ósea, actividad neuromuscular.

Tests complementarios: Deben realizarse tets del metabolismo fosfocálcico (PTH, fósforo, albúmina) y de función renal (urea, creatinina)

Aumento Disminución

No Patológica - Lipemia, cachorros en crecimiento, deshidratación, Hiperproteinemia

Neoplasia (pseudohiperparatiodismo) - Linfosarcoma, adenocarcinomas sacos anales, Mieloma

Hiperparatiroidismo primario

Hiperparatiroidismo renal secundario

Hipervitamiosis D - Sobredosis, rodenticidas de calciferol

Hemoconcentración

Hiperadrenocorticismo

Fallo renal

Fenómenos de osteolisis - Osteomielitis, osteoporosis

Hipoalbuminemia

Fallo renal crónico con Hiperparatiroidismo renal secundarios

Eclampsia

Hipoparatiroidismo primario

Pancreatitis

Dietario - Hipovitaminosis D, exceso de fósforo Hiperparatiroidismo secundario nutricional

Fallo renal agudo

Malabasorción intestinal

Hipomagnesemia

Intoxicación con etilen glicol

Cloro





El cloro representa los 2/3 de los aniones existentes en el plasma. Los cambios en el cloro deben interpretarse siempre junto a los cambios en el agua corporal libre, la cual altera las concentraciones de sodio y cloro proporcionalmente y en paralelo. Los cambios observados en las concentraciones de cloro no relacionados con cambios ocurridos en el agua libre o las concentraciones de sodio, están asociados a anormalidades ácido-básicas.

Tests complementarios: Se recomienda medir el cloro junto a los otros electrolitos sodio y potasio y un perfil renal

Disminución Aumento

Vómito contenido gástrico

Alcalosis Metabólica

Deshidratación

Acidosis metabólica

Terapia con bromuros

Colesterol

El Colesterol es el esteroide más común. Es un componente esencial de las membranas celulares y de las vainas de mielina, y es un importante precursor de hormonas esteroideas y sales biliares. Su origen al igual que los triglicéridos puede ser externo o interno. La mayoría de colesterol es sintetizado in vivo en el hígado, y el resto proviene de la dieta.

Tests complementarios: Es importante incluir el colesterol junto a las otras pruebas destinadas a investigar el metabolismo lipídico y triglicéridos.


Disminución de la absorción - En problemas de Malaabsorción, Maladigestión (Enteropatía con pérdida proteínas, insuficiencia pancreática exocrina..)

Disminución de la producción: Shunts Portosistémicos, Fallo hepático

Colestasis

Enfermedad endocrina

Hipotiroidismo, Hiperadrenocorticismo, Diabetes mellitus

Dietario, Postpandrial

Medicaciones: corticoides

Síndrome nefrótico

Hiperlipidemia primaria: Hipercolesterolemia idiopática, Hiperquilomicronemia primaria (f), Deficiencia de lipoprotein lipasa (f)

Colinesterasa

Estas actividades enzimáticas se usan como test diagnóstico en las exposiciones y/o intoxicaciones por organosfosforados o carbamatos. Estos tóxicos son inhibidores de la colinesterasa y por lo tanto la exposición y/o intoxicación disminuye sus valores en sangre.

Disminución

Intoxicaciones por organofosforados o carbamatos

Creatinina





La creatinina se forma en el músculo esquelético, es filtrada por los glomérulos, y es excretada por la orina. No es reabsorbida por los túbulos renales. La concentración de creatinina en la sangre es inversamente proporcional a la Tasa de Filtración glomerular.

Tests complementarios: Valorar la urea en el conjunto de un perfil renal y/o muscular


Disminución de la masa muscular Azotemia - Pre-renal, renal o Post-renal

Creatinkinasa

La CK es una enzima. citosólico que existe en grandes cantidades en músculo esquelético y en menor cantidad en miocardio, músculo liso, y encéfalo. En otros órganos su actividad es muy baja e inferior al 5% de su actividad.

Tests complementarios: Valorar la CK junto a AST y creatinina

Aumento

Enfermedad muscular inflamatoria

Fibrinógeno

Se clasifica como Globulina en base a sus características solubles, y contribuye al 3-6 % de las proteínas plasmáticas. Sólo existe en el plasma y no en el suero.

Tests complementarios: Se debe interpretar junto a los valores de otras proteínas de fase aguda ( proteína C reactiva y haptoglobina)


Fallo hepático

Coagulopatías

Hipofibrinogenemia primaria

Inflamación

Gestación

Fosfatasa Alcalina

Los isoenzimas de la ALP se encuentran en una gran variedad de tejidos e incluyen intestino, hígado, hueso, placenta, riñón y leucocitos. Su elevación se debe a un aumento en su síntesis. El isoenzima hepático tiene una vida media de 3 días en perro y 6-8 horas en gato. Los aumentos suelen ser mayores en perro pero tienen mayor significación unos menores aumentos en gatos. Los isoenzimas de origen no hepático tienen poca significación diagnóstica. Los niveles de ALP permanecen elevados durante la reparación del daño hepático, por lo que su elevación nos siempre indica un mal pronóstico.

Tests complementarios: Los niveles de ALP deben determinarse junto a los otros tests de daño hepatocelular o de función hepática como en el perfil hepático.

Aumento





Fisiológico - Crecimiento © - Enfermedad hepática - Colestasis ( Intrahepática o Exrtrahepática) - Complejo cholangio- hepatitis (f) - Daño hepático (otras hepatopatías ver ALT) - Anoxia hepática (anemia)

No específico - Drogas ( Glucocorticoides, Fenobarbital..) - Causa endocrina ( Hiperadrenocorticismo(c), Hipertiroidismo(f), Diabetes Mellitus... ) - Pancreatitis

Tumores óseos

Fructosamina

La fructosamina mide la glicolización de las proteínas séricas (principalmente la albúmina) y es una medición fiable de la concentración de glucosa en las 1-2 semanas previas

Tests complementarios: Debe medirse junto a la glucosa y a la Insulina


Hipoproteinemia Anemia

Diabetes mellitus

Hiperglucemia prolongada (f)

GGT Se encuentra en altas concentraciones en hígado y túbulos renales y en menor grado en páncreas e intestino delgado

Tests complementarios: La actividad de la GGT debe determinarse junto a los otros tests de daño hepatocelular o de función hepática como en el perfil hepático.


Hemólisis Colestasis Intra o Extrahepática

Drogas: Glucocorticoides, Anticonvulsivos

Glucosa

La glucosa es la fuente de energía del cuerpo y se regula por la acción conjunta de insulina y glucagón. La glucosa pasa por el glomérulo renal y se reabsorve en su totalidad en los túbulos. Conforme la glucosa aumenta este mecanismo se satura y se pasa el umbral renal de la glucosa y ésta aparece en la orina.

Tests complementarios: Debe medirse junto a la fructosamina y a la Insulina






Fallo hepático

Enfermedad endocrina - Hipoadrencorticismo, Hipopituitarismo

Inanición

Neoplasia

Hiperinsulinismo: Insulinoma, iatrogénia

Idiopática: Perros toy, cachorros

Septicemia

Policitemia Leucemia

Fisiológica: Postpandrial

Medicamentos: Cortiocoides, Acetato de megestrol....

Diabetes mellitus


Acromegalia

Hipertiroidismo

Pancreatitis aguda

Hierro Aunque la mayoría del hierro corporal se encuentra en los eritrocitos en forma de hemoglobina, existe otra parte del hierro que es almacenada en tejidos, especialmente hígado y bazo. La medición del hierro sérico mide la disponibilidad del hierro en la circulación, pero por si solo no refleja los depósitos de hierro corporal.

Tests complentarios: Deben valorarse otros aspectos del metabolismo del hierro y eritrocitario


Pérdida crónica de sangre al exterior

Deficiencia dietaria

Hemólisis

Lipasa

Enzima secretada sólo por el páncreas y la mucosa gástrica solamente y degradada por los riñones. La lipasa hidroliza los triglicéridos.

Tests complementarios: Debe valorarse junto a la amilasa, un perfil de función renal y TLI

Aumento Enfermedad pancreática: Pancreatitis, necrosis

Neoplasia Enteritis Enfermedad renal (Azotemia)

Glucocorticoides

Fósforo





Aproximadamente el 80-85 % del fósforo total corporal, se encuentra en el hueso, mientras que el 15 -20 % esta en tejidos blandos como los músculos. La absorción neta del fósforo es aproximadamente 60-70 % de la carga ingerida. Esta absorción está disminuida por bajos niveles de Vitamina D y niveles altos de calcio y bajos de fósforo en la dieta, y aumentada por bajos niveles dietarios de calcio, aumento de la acidez de la dieta, la hormona de crecimiento y la Vitamina D. El fósforo se excreta en saliva, heces (30-40 %) y orina (60-90 %). El 80-90 % del fósforo filtrado sufre reabsorción tubular.

Tests complementarios: Deben realizarse tets del metabolismo fosfocálcico (PTH, fósforo, albúmina) y de función renal (urea, creatinina)






Hiperparatiroidismo: Primario, renal secundario

Neoplasia: Hormona PTH-like, tumores tiroides

Insulinoterapia

Cetoacidosis diabética

Deficiencia dietaria

Eclampsia


Fallo renal agudo o crónico

Azotemia Postrenal Hemólisis

Hipertiroidismo

Neonatos

Hipervitaminosis D

Hipoparatirodismo

Exceso dietario

Osteolisis

Potasio





El Potasio es el catión más abundante que existe en el organismo. Su concentración sérica no es un buen reflejo del contenido total ya que aproximadamente el 98 % del potasio corporal es intracelular, y solo el 1-2 % es extracelular. El Potasio sérico esta gobernado por un balance externo existente entre su toma diaria y su eliminación diaria vía renal ( Regulación Renal ), y por un balance interno de redistribución entre los diferentes sectores hídricos del organismo (Regulación Extrarenal ). Tests complementarios: Se recomienda medir el potasio junto a los otros electrolitos sodio y cloro y un perfil renal


Alcalosis

Deficiencia dietaria (gatos)

Pérdida Fluidos Gastrointestinales


Hiperaldosterenismo

Insulinoterapia

Trastorno renal: - Diuresis post-obstructiva, Acidosis tubular

renal, fallo renal poliúrico

Fallo renal oligúrico-anúrico

Obstrucciones y/o rotura tracto urinario

Hipoadrenocorticismo

Acidosis metabólica

Proteínas Totales

El Plasma, contiene muchas proteínas diferentes y cada una con funciones diferentes. Estas Proteínas, se clasifican en Albúminas, Alfa-Globulinas, Beta-Globulinas y Gamma-Globulinas. La mayoría de estas Proteínas Plasmáticas son sintetizadas en el hígado excepto las Inmunoglobulinas, que son sintetizadas en el Sistema Reticuloendotelial.

Tests complementarios: Parámetro imprescindible en todos los perfiles bioquímicos.






Hemorragias

Pérdida gastrointestinal: Enteropatía con pérdida proteica (albúmina y globulinas)

Hipoalbuminemia - Fallo hepático: Atrofia, Fibrosis, Cirrosis, Shunts PS

- Pérdida renal: Glomérulonefritis, Amiloidosis

Malasimilación: Malabsorción, Maladigestión,

Enfermedades exudativas cutáneas graves

Mala nutrición

Efusiones crónicas, Hipoglobulinemia - Neonatos - Inmunodeficiencias: Congénitas o adquiridas

Deshidratación (albúmina y globulinas)

Hiperglobulinemia

Inflamación

Gamapatía Policlonal - Enfermedad inflamatoria crónica, PIF, Dermatitis, Enfermedad inflamatoria intestinal, Enfermedades infecciosas/ parasitarias (leishmaniosis, ehrlichiosis), enfermedades inmunomediadas, neoplasias

Gamapatia Monoclonal - Mieloma., Ehrlichia, Diroflariosis

Error laboratroio - Hemólisis, Lipemia

Hiperalbuminemia (Error laboratorio)

Sodio

Existe principalmente en fluido extracelular y es el pricnipal contribuyente de su osmolaridad. La cantidad de sodio, y con él la cantidad de agua, es regulada por el riñón que mantiene sus concentraciones a pesar de la ingesta de agua.

Tests complementarios: Se recomienda medir el sodio junto a los otros electrolitos cloro y potasio y un perfil renal


Hipoadrenocorticismo

Diabetes mellitus

Pérdida fluidos gastrointestinales

Efusiones crónicas

Exceso de ADH

Diuréticos

Administración de fluidos hipotónicos

Polidipsia psicogénica

Fallo renal poliúrico

Hiperaldosterenismo

Pérdida de fluidos intestinales

Diabetes Insípeda Fallo renal

Deshidratación

Pérdida insensible de fluidos

Disminución ingesta de agua

Aumento en la ingesta de sal

Troponina I





Es una proteína del músculo cardiaco (cTnI). Muy útil para el diagnóstico precoz de la lesión del miocardio ya que es liberada a la circulación muy poco tiempo (4 a 5 horas) después de una lesión miocárdica y persiste en plasma durante, al menos, 7 a 9 días.

Tests complementraios: Es recomendable medio otros marcadores cardíacos como la ET1 y pro ANP.

Aumento Enfermedades de origen cardíaco que afecten al miocardio

Urea

La urea es una sustancia nitrogenada no proteica que se sintetiza en el hígado como mecanismo de excreción del amonio generado por el catabolismo de los compuestos que contienen nitrógeno (aminoácidos dietarios y endógenos). Es filtrada por el glomérulo y reabsorbida por los túbulos de forma que menos del 50 % de la urea filtrada por el glomérulo aparece en la orina final. La concentración de urea en la sangre es inversamente proporcional a la Tasa de Filtración Glomerular (TFG).

Tests complementarios: Valorar la urea en el conjunto de un perfil renal y/o hepático


Enfermedad hepática avanzada

Diuresis

Caquexia

Insuficiencia renal

Aumentos moderados en: - Hemorragia intestinal, bacterias entéricas

URIANALISIS

El Urianálisis completo, consiste en la evaluación de las propiedades físico-químicas de la orina, la estimación de la concentración de sus solutos, y el examen microscópico del sedimento. Indicado tanto en pacientes con sospecha de enfermedad del sistema urinario como en pacientes con desordenes no urinarios, ya que aporta información de varios sistemas corporales. Como casi todos los tests laboratoriales, los resultados del Urianálisis son validos pero no infalibles, y su valor diagnostico es directamente proporcional a la capacidad que se tenga para interpretarlos.

Volumen Volumen Normal: 25-30 ml/kg/día Color Color normal: amarillo o ámbar

El color normal de la orina es amarillo o ámbar y se debe fundamentalmente a la presencia de dos pigmentos: urocromos y urobilina. Un color amarillo oscuro, normalmente indica que la orina está concentrada, si la orina es diluida el color es amarillo muy claro, por ello el color debe ser interpretado junto a la DU. El color de la orina puede variar por diversas causas, y puede producirse tanto por pigmentos exógenos como endógenos.

Anomalías del color

Amarillo muy oscuro: Orina muy concentrada, Biliirubinuria

Rojo a pardo o marrón: Hematuria, Hemoglobinuria, Mioglobinuria





Verdoso: Bilirrubinuria

Blanco lechoso: Pus, cristales de fosfato

Turbidez Normal: Transparente

Cuando la orina está muy concentrada tiene más posibilidad de ser turbia que si la orina está diluida. Cambios en la temperatura y pH pueden producir pérdida de transparencia. Normalmente las causas que pueden producir turbidez en la orina pueden ser determinadas examinando el sedimento urinario

Causas de Turbidez

Cristales, células (glóbulos rojos, glóbulos blancos, Células epiteliales), Semen, Bacterias, Lípidos (tienden a situarse en la superficie), Moco,

Contaminación fecal

Densidad

Dependiendo de las necesidades de agua y/o solutos del organismo, cualquier valor comprendido entre 1.001 y 1.065 o más en perros y entre 1.001 y 1.080 en gatos, puede ser normal.

La DU se usa para determinar la capacidad de los túbulos renales para concentrar o diluir la orina. Dependiendo de las necesidades hídricas del animal, el riñón puede producir orina que será muy concentrada o muy diluida. Cuando el agua está en exceso, hay una mayor reabsorción de solutos que de agua, y se produce una orina diluida aumentando su volumen. Cuando hay carencia de agua ocurre el proceso contrario, hay una mayor reabsorción de agua que de solutos, y se produce una orina muy concentrada.

Isostenuria Hipostenuria





Fallo Renal

Algunos casos de polidipsia

PU/PD

Diabetes Insípeda

Fallo Renal

Piometra

Fallo Hepático


Glucosuria Renal

Diuresis post-osbstructiva

Hipercalcemia

Hipopotasemia

Hipertiroidismo

Drogas (Diuréticos, Glucocorticoides, Anticonvulsivos)

Glucosa Valor Normal: Negativo

La glucosa que se encuentra en plasma atraviesa libremente el capilar glomerular, aparece en el filtrado glomerular, y se reabsorbe casi en su totalidad de forma activa en túbulos proximales, de manera, que sólo una mínima cantidad (2-10 mg/dl) aparece en orina.

Positivo

Diabetes Mellitus Enfermedad túbular renal

Hiperglucemia stress


Bilirrubina Valor Normal: 0 – 2+

La bilirrubinuria se produce cuando aumenta la concentración de bilirrubina conjugada en el plasma.

Positivo

Orina muy concentrada

Anemia hemolítica

Enfermedad hepática

Cetonas Valor Normal: Negativo





Normalmente normal se forman pequeñas cantidades de cuerpos cetónicos que, en cantidad limitada, son metabolizados por los tejidos periféricos. En pequeña proporción son filtrados por los glomérulos y reabsorbidos completamente por los túbulos renales

Positivo

Aumento del catabolismo lipídico: inanición, dietas bajas en hidratos de carbono y altas en grasas

Hipoglucemia persistente (Insulinoma),

Cetoacidosis diabética.

Sangre Valor Normal: Negativo

El test se basa en la actividad de la seudoperoxidasa que contiene el grupo hemo, presente tanto en la hemoglobina como en la mioglobina. La reacción es más sensible cuando existe pigmento libre que cuando se localiza en el interior de los hematíes. Con este test es posible detectar la presencia de hematuria antes de que se manifieste de forma macroscópica.

Positivo

Ia trogénico

Hematuria

Hemoglobinuria

- Mioglobinuria

Ph Un pH de 7 se considera neutro

Es la medición de la concentración de H+. Un valor más alto de 7 (7.1-14) es alcalino, y un valor más bajo (0-6.9) es ácido


Acidosis sistémica

Infección urinaria (satfilocococs)

Postpandrial

Dietario

Acidosis tubular renal

Proteínas Normal: negativo ó 1+ (depende Densidad Urinaria)

Pequeñas cantidades de proteínas pasan a través del filtrado glomerular y después son reabsorbidas por los túbulos. Las proteínas que pueden aparecer en la orina (proteinuria) son una mezcla de cantidades variables de proteínas plasmáticas, proteínas originadas en el tracto urinario y, dependiendo del método de recogida de la orina, proteínas del tracto genital.

Positivo





Enfermedad glomerular - Glomerulonefritis, Amiloidosis

Enfermedad inflamatoria

Renal, Tracto urinario inferior

Leucocitos Normal: 0-2 (Si la orina es recogida mediante cistocentesis es normal encontrar hasta 5 leucocitos/campo (x40)).

En orinas frescas aparecen como células esféricas 1½ veces mayor que los eritrocitos y más pequeños que las células del epitelio de transición. Son difíciles de diferenciar de las células epiteliales de los túbulos renales. Los leucocitos se lisan si la orina es alcalina o hipostenúrica.

Presencia

Inflamación tracto urinario

Infección del tracto urinario (la ausencia de leucocitos no excluye infección)

Hematíes Los valores normales son de hasta 3 – 8 eritrocitos/campo (x40) dependiendo del método de recogida.

En orinas frescas se observan en forma de disco bicóncavo y coloración pálida, más pequeños que los leucocitos y sin núcleo. Si han estado tiempo en la orina se observan sin color ya que pierden la hemoglobina En orinas muy concentradas aparecen crenados y con formas anómalas, y en orinas diluidas se hinchan y se ven con formas redondeadas.

Presencia

Iatrogenia

Urolitiasis

Inflamación

Neoplasia

Bacterias Valor Normal : negativo

La presencia de bacterias en orina (bacteriuria) puede tener, o no, significado patológico, dependiendo del método de recogida de la orina y del tiempo transcurrido hasta que se realiza el análisis. Si la orina es recogida mediante cistocentesis no hay bacterias en una orina normal, pero si es recogida mediante micción o por cateterización, es posible hallar bacterias que contaminan la uretra distal o el tracto genital.

Presencia

Contaminación

Infección tracto urinario

Células epiteliales Valor Normal: escasas





En animales sanos es normal hallar algunas células epiteliales, tanto las del epitelio renal, del epitelio de transición de la pelvis renal, uréteres, vejiga y uretra, como células escamosas de la vagina y uretra distal.

Aumento

Iatrogemia (sondaje)

Neoplasia

Inflamación

Infección

Cilindros Ausencia o muy escasos granulosos

Los cilindros son estructuras constituidos por células o proteínas moldeadas en los túbulos renales. Básicamente, están compuestos por la mucoproteína de Tamm-Horsfall. Esta mucoproteína la secretan las células epiteliales de las asas de Henle, de los túbulos distales y de los túbulos colectores, lugares donde se forman los cilindros.

Aumento

Hemorragia (cilindros eritrocitarios)

Inflamación (cilindros celulares)

Proteinuria ( cilindros hialinos o céreos)




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