LES TECHNIQUES DU DÉPISTAGE ET DU DIAGNOSTIC VIROLOGIQUE

DES INFECTIONS PAR VIH EN 2013

François Simon CHU St Louis Paris

“Testing is the essential entry point to timely treatment”

Kevin DeCock, HIV/AIDS Director, WHO

Pour cette présentation, cet intervenant a déclaré

n’avoir aucun lien d’intérêt

Déclaration lien d’Intérêt

Sérum ou plasma : congelés conservés -20°

Sang total : pas de conservation possibleDBS papier filtre (sérologie , biologie moléculaire)

Liquide craviculaire :

FDA approvedhome test (Internet)

MATRICE UTILISEE pour le dépistage (USA)

UrineCalypte HIV-1 Urine EIA Test

1ere Lysat viral abandonné (sauf USA) 2eme protéines recombinante peptides de synthèse3eme ELISA Ac « sandwich » Ig G /Ig M

4eme Tests combinés Ag p24 +Ac anti-VIHUE 5eme Tests combinés dépistage et différenciation entre anticorps et

Ag p24 et infection par VIH- 1 ou 2

Amélioration progressive des performances en séroconversion : Sensibilités des 4 et 5eme génération quasi similaire à la biologie

moléculaire

LES GÉNÉRATION DE TESTS DE DÉPISTAGE VIH

GÉNÉRATION

LES LIMITES DU DÉPISTAGE VIH EN 2013

La primo infection : risques de faux négatif , majoré

- avec les tests de qualité limitée - par la dilution du sang total en TROD - en situation de forte incidence - en cas de souches VIH-1 non sous -type B

Grande variabilité des réponses anticorps selon les sujets

Eclipse period

ECLIPSE & PRIMO INFECTION VIH

RNA 20 copies HIV-M

D 7- 10

P24 Ag : 2 UI = 10 pg/mL50 000 copies/mL ˜

˜

4 gen3 gen EIA tests

Adapted form Cohen et al

Seuil de détection

TECHNOLOGIE LUMINEX® ET DEPISTAGE VIH

Bioplex® 2200 Ag-Ab Kit, bioRad

BIOPLEX® 2200 HIV AG-AB KIT:TECHNOLOGIE LUMINEX : EXEMPLE DE REACTIVITE

Bioplex® 2200

(index)

Ag p24 Ab Anti HIV -2

Ab Anti HIV-1 group M

Ac Anti HIV-1

group O

BioPlexStatus

HIV -1 group M

0.20 0.08 >200 0.56 Reactive(>1)

HIV -1 primary infection

13 0.09 0.08 0.05 Reactive(>1)

HIV -1 group O

0.19 0.09 0.27 134 Reactive(>1)

HIV-2 0.33 >200 0.57 0.20 Reactive(>1)

HIV-1 + HIV-2 dual infection

0.23 164 153 0.06 Reactive(>1)

Architect BioPlex Western Blot VIH-1 Plasma RNA

Index HIV-1 HIV-1 GP GP P

68 P 55GP

P 40 P 34 P25 Copies/ mL

Ag Ab 160 120 41

1 435 12,58 0,08 > 10 000 000

2 46,5 9,84 0,24 6 340 194

3 46,68 8,73 4,13 6 555 440

4 38,7 1,97 47,23 2 716 540

5 5,18 1,24 5,79 1 082 830

6 9,31 3,63 4,23 1 465 329

7 25,26 10,17 6,2 1 082 830

8 9,65 0,33 30,23 162 020

9 47,82 0,25 113,7 25 456

10 6,2 0,14 13,56 56 178

PROFIL DE 10 PRIMO INFECTION EN TECHNOLOGIE LUMINEXBIOPLEX® 2200 HIV AG-AB KIT

la confirmation des infections VIH par Immunoblot ou Western Blot (?)

Antigènes de synthèse

Inno LIA

Antigènes de lysat viralNew Lav blot

Recombinant and peptides

GEENIUS™ HIV 1/2 CONFIRMATION

•

• serum, plasma ou sang total•Datamatrix Barcode• interpretation automatisée < 30 minutes,

• Datamatrix Barcode- Positive identification of both

cartridge and patient ID- Link between patient ID and

cartridge ID: 1 cartridge for 1 patient

< 30 mn

Geenius™ HIV 1/2 Confirmatory

REACTIVITE DU GEENIUS

HIV-2 HIV-1

gp 36 gp 140 p 31 gp 160 P24 gp41

91 EIA - - 2 - - - -

7 HIV-1+ - - 7 7 5 7

2 Primary Infection*

- - 1 1 0 1

EVALUATION GEENIUS Hop. St LOUIS

30 HIV-2 30 30 18 14 22 14

10 HIV-O 0 0 7 7 6 10

26 echantillons 4th EIA + AVEC WESTERN BLOT INDETERMINE ARN PLASMA NEGATIF

GEENIUS

- IND +

13 13 0

HIV-2 HIV-1

gp 36 gp140 p31 gp160 p24 gp41

0 5 3 12 0 7

EVALUATION GEENIUS Hop. St LOUIS PARIS, SPECIFICITE

• - GRANDE DIVERSITE GENOMIQUE DES VIH : PRUDENCE• - TESTS SUR LA BASE DES SOUS TYPES B• - AMORCES ET SONDES VARIENT D’UN TEST A L’AUTRE• - SENSIBILITES DIFFERENTES• - SPÉCIFICITÉ :

• UNE CHARGE VIRALE + COMME TEST DE CONFIRMATION ?? • A PARTIR DE QUEL SEUIL ???

CHARGES VIRALES & CONFIRMATION VIH

Aptima HIV-1 RNA Qualitative Assay as an Alternative to Western Blot

CHARGES VIRALES & CONFIRMATION VIH

69 + /70 + 50/50 -

TESTS DE DIAGNOSTIC RAPIDE (TROD/TDR)

- Existe depuis 1990

- pour les urgences sur sérum

- largement utilisés dans les pays aux faibles structures sanitaires : PED & USA

- rebaptisés « TROD » (TR à orientation diagnostique)dans leur utilisation associative

- Marché anarchique ++ duquel les grands nomsdu diagnostic sont le + souvent absents ou ont revendu leurs produits

- Fabrication/assemblage en Asie

Un contrôle limité au niveau européen

Différent de celui des tests EIA

Rôle des organismes notifiés (structures privées) : le marquage CE peut être apposé par l’industriel après avoir obtenu un certificat de conformité émis par un organisme notifié de l’UE quelque soit le pays . Puis obscurité des rapports entre

- fabricants (Asie)- mandataires (Europe)- commerciaux (Locaux)

Une absence d’évaluation en situation réelle sur sang total et sur salive

Circulation des pires TDR sur Internet

LES TDR / TROD : UN MARCHÉ ANARCHIQUE

Résultat attendu

Résultat INSTI

Résultat VIKIA

-

--

+ (1/100 000)

+- -

++(1/10 000)

++

+++(1/1 000)

+++ ++++

++++(1/1 000)

pos pos

VIKIA & INSTI : GAMME DE DILUTIONS

Moindre sensibilité de INSTI dans les hautes dilutions

Prospective study 4 villes Africaines Kigali and Ndola, Kitwe and Lusaka Seul 1 echantillon de primo infection detecté + par Determine 4G [Ac + Ag] pour 34 patients en PIH Ag + Ac- Neg + Ac + Ag + Ac et Ag

William Kilembe, PlosOne 2012

ECHEC DU TEST RAPIDE HIV POUR DÉTECTION SIMULTANÉE AC VIH1 ET 2 ET AG P24

Nouveaux réactifs à l’étude mais « pêché originel » de sensibilité

ORAQUICK IN-HOME HIV TEST SYSTEM – KIT CONTENTS

Test stand

Test DevicePouched Device

Pouched Developer Vial

Stepwise Instructions

Pre & Post-Test Informational Booklet

Package Insert

AUTO TEST SALIVAIRE : EXEMPLE DE REALISATION

1 Achat pharmacie-drugstore (USA) ou INTERNET 2- Présentation du coffret ouvert avec tiroir 3- notices explicatives

4 - Tube de tampon mis en place 5 -dépôt de la salivette après recueil 6- évacuation des dechêts

SITUATION DU SUJET

• FDA juillet 2012 : vente libre des autotests salivaires aux USA

• - octobre 2012 : l’autotest salivaire OraQuick In-Home est disponible dans plus de 30.000 points de vente et en ligne aux Etats-Unis : – Conseillé tous les 3-6 mois si haut risque (USA) – Ne détecte pas les primo infections : > 3mois

après le risque (USA)

OraQuick® In-Home HIV Test- A Simple Test Using Oral Fluid

2. Insert device in Developer Vial. Read result between 20 and 40 minutes

1. Swab upper and lower gums once each with flat pad of test device

One line = Negative

Two lines = Positive

SENSIBILITE DES TEST SUR FLUIDE ORAL (LIQUIDE CRAVICULAIRE)

-

Oraquik Oral fluid

Oraquick blood

Vikiablood

Determineblood

INSTIblood

Determine Combo Ag +Ab blood

Overall sensitivity % of valid tests

86.5%

[81-90.5]

94.5%

[90.4-96.9]

98.5%

[95.6-99.5]

94.9%

[90.8-97.2]

99%

[96.3-99.7]

95.8%

[91.6-97.9]

200 HIV + Pts Hôpital Saint Louis, Paris 2009, Oral salive ou sang total

SensibilitéETUDE St Louis

86.5% [81-90.5]

HAARTMais

TROD sang +

USA : PRINCIPALES DONNÉES DE L’ÉTUDE CLINIQUE ORAQUICK EN 2012 (N= 5055)

• 99% ont réussi le test avec un résultat (positif ou négatif)

• 88/96 sujet auto identifiés HIV + sensibilité = 92%

• Spécificité observée specificity = >99.9%• NPV= 99.8% • PPV=98.9%

• Octobre 2013 : 4000 à 4500 tests vendus /mois

28

The OraQuick In Home HIV test octobre 2013

• July 3, 2012 FDA approval– Clinical trials conducted in 19 geographically

dispersed sites, selected largely to reach high prevalence areas

• Subjects represented diversity in age, ethnicity, sexual orientation, income and literacy levels

• Prevalence of HIV positives identified by self testing in OraQuick trials was 1.7%

– Study demonstrated device accuracy and high consumer comprehension of labeling

Confidential & Proprietary

88 PATIENTS AUTO IDENTIFIÉS VIH + PAR ORAQUICK® IN-HOME TEST (ORAQUICK CLINICAL TRIAL 2012)

2220 19

7

4 4 3 3 3 2 1

0

5

10

15

20

25

Black MSM

Black Male non-MSM

Black Female

White MSM

White Male non-MSM

Hispanic* Male non-MSM

Hispanic* MSM

Hispanic* Female

White Female

Other Race - MSM

Black Male - no sex pref ID

Prevalence VIH + par auto test USA = 1.7%

30

The OraQuick In Home HIV test USA Octobre 2013

– Over 200K units purchased by consumers launch to date (30 sept 13)– Demographic review of high volume sales regions and stores suggests

higher usage by MSM and African American populations– Sales skew toward urban, high prevalence markets – Estimated prevalence rate of OTC user population: 1-2%

• Consumer experience with full product offering has been positive– Overall consumer complaint rate low (<.1%)– On line product reviews extremely favorable

Confidential & Proprietary

• Difficulté de reconnaissance des primo infections • Sensibilité moindre (primo-infection et variant) risque

de faux-négatifs y compris dans le(s) semaines suivants la séroconverion en EIA

• Faux positifs• Lecture subjective• le problème d’élimination des déchets infectieux limité

avec le test oral• Manque de counseling • Pas d’archivage - traçabilité• Négligence des autres IST • coûts (33 $)

LIMITES DES AUTO TESTS

VIH ET AUTO TESTS

• - Liberté du sujet > à sa biologie - Alternatives en Afrique , limitée en France- Economique- Confidentialité – Prevention mère –enfant Risques de dérive - réels ou non - Perte du contrôle épidémiologique

NOUVEAU PARADIGME

AUTO TEST : QUIZ