Tutorial Zeiss 15 1

Tutorial de Uso BásicoTutorial de Uso Básico

Zeiss 15Zeiss 15

Tutorial Zeiss 15 2

Características Zeiss 15………………….....pag.3-4Características Zeiss 15………………….....pag.3-4

Pasos iniciales Uso Zeiss 15………………..pag. 5Pasos iniciales Uso Zeiss 15………………..pag. 5

Luz TransmitidaLuz Transmitida

Trabajo con luz transmitida Campo Trabajo con luz transmitida Campo Claro………………………………………….…pag. 6Claro………………………………………….…pag. 6

Trabajo con luz transmitida Contraste de Trabajo con luz transmitida Contraste de Fases……………………………………….…pag.7-8Fases……………………………………….…pag.7-8

Trabajo con luz transmitida Contraste Trabajo con luz transmitida Contraste Interdiferencial DIC……………….…………pag.9-10Interdiferencial DIC……………….…………pag.9-10

FluorescenciaFluorescencia

Trabajo con luz reflejada (fluorescencia)Trabajo con luz reflejada (fluorescencia)……………………………pag.11-14……………………………pag.11-14

Zeiss 15Zeiss 15 “ “ Tutorial de Uso”Tutorial de Uso”

Tutorial Zeiss 15 3

Zeiss 15 Zeiss 15 APLICACIONES.APLICACIONES.Microscopio de FluorescenciaMicroscopio de Fluorescencia

Filtros :Filtros :

1-DAPI1-DAPI

9-VERDE9-VERDE

15-ROJO15-ROJO

25-TRIPLE25-TRIPLE

Microscopio de Luz TransmitidaMicroscopio de Luz Transmitida

-Campo Claro-Campo Claro

-Contraste Interdiferencial (DIC)-Contraste Interdiferencial (DIC)

-Contraste de Fases (PH)-Contraste de Fases (PH)

Localización : Microscopía Planta – 1Localización : Microscopía Planta – 1

4Tutorial Zeiss 15

Zeiss 15 Zeiss 15 CARACTERISTICAS.CARACTERISTICAS.

Filtros Fluorescencia:Filtros Fluorescencia:

1-Azul :1-Azul :(360/40x) FT 395 LP397(360/40x) FT 395 LP397

9-Verde:9-Verde:(450-490) FT510 BP 525/50(450-490) FT510 BP 525/50

15-Rojo:15-Rojo:BP 546 FT 580 LP 590BP 546 FT 580 LP 590

25- Triple:25- Triple:BP(400/495/570) FT (410/505/585 )BP(400/495/570) FT (410/505/585 ) TBP (460/530/610)TBP (460/530/610)

Condensador : 0,9Condensador : 0,9

Filtros/Anillos DICFiltros/Anillos DIC-DIC I -DIC I -DIC II -DIC II -DIC III-DIC III

Filtros/Anillos FasesFiltros/Anillos Fases-Ph 2 -Ph 2 -Ph3-Ph3

Objetivos :Objetivos :

x10 (Sin Fase) (DIC)x10 (Sin Fase) (DIC)

x20 (Fase 2) (DIC)x20 (Fase 2) (DIC)

x40 oil (Sin Fase) (DIC)x40 oil (Sin Fase) (DIC)

x63 oil (Fase 3) (DIC)x63 oil (Fase 3) (DIC)

x100 oil (Fase 3) (DIC)x100 oil (Fase 3) (DIC)

Equipo conectado :Equipo conectado :

-Cámara Hamamatsu (c4742-95).-Cámara Hamamatsu (c4742-95).

-AttoArc HBO 100 W .-AttoArc HBO 100 W .

-Mac Power G4.-Mac Power G4.

-Motorización ORBIT.-Motorización ORBIT.

Programa OPENLAB asociadoPrograma OPENLAB asociado

5Tutorial Zeiss 15

1-Encendemos el microscopio 1-Encendemos el microscopio Zeiss 15 (botón lateral Zeiss 15 (botón lateral derecho).derecho).

2-Encendemos el Ordenador 2-Encendemos el Ordenador asociado ( MAC) para acceder asociado ( MAC) para acceder al programa de captura de al programa de captura de imágenes “Openlab”.imágenes “Openlab”.

3-Encendemos la cámara 3-Encendemos la cámara asociada al equipo para la asociada al equipo para la captura de imágenes captura de imágenes (cámara Hamamatsu).(cámara Hamamatsu).

Pasos Iniciales Uso Zeiss 15Pasos Iniciales Uso Zeiss 15

6Tutorial Zeiss 15

Trabajar en Luz Transmitida (Campo Claro)(BF)Trabajar en Luz Transmitida (Campo Claro)(BF)

2-Colocamos la Rueda en posición D 2-Colocamos la Rueda en posición D (Campo Claro, luz transmitida Normal).(Campo Claro, luz transmitida Normal).

3-Retiramos de la vía de luz (desplazar a 3-Retiramos de la vía de luz (desplazar a la izquierda):la izquierda):

-el polarizador DIC y-el polarizador DIC y

-el obturador de luz transmitida.-el obturador de luz transmitida.

4- Con esta configuración ya es posible observar 4- Con esta configuración ya es posible observar y capturar imágenes en condiciones de luz y capturar imágenes en condiciones de luz transmitida normal.transmitida normal.

1

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1-Colocamos la Rueda superior de filtros en 1-Colocamos la Rueda superior de filtros en posición D/Vacío .posición D/Vacío .

NOTA: Para trabajar en luz transmitida es NOTA: Para trabajar en luz transmitida es necesario encender el ORBIT para permitir la necesario encender el ORBIT para permitir la llegada de luz sobre la preparación AUNQUE llegada de luz sobre la preparación AUNQUE SE TRABAJE EN MODO MANUALSE TRABAJE EN MODO MANUAL

1

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7Tutorial Zeiss 15

Trabajar en Luz Transmitida (Contraste de Fases)(Ph)Trabajar en Luz Transmitida (Contraste de Fases)(Ph)

1-Observamos las características de Fases 1-Observamos las características de Fases que posee el objetivo con el que estamos que posee el objetivo con el que estamos trabajando (no todos los objetivos presentan trabajando (no todos los objetivos presentan Fases/Ph) .Fases/Ph) .

Las características de Fase del Objetivo vienen Las características de Fase del Objetivo vienen marcadas en el mismo Objetivo (Ph1=fase 1; Ph2=Fase marcadas en el mismo Objetivo (Ph1=fase 1; Ph2=Fase 2; Ph3=Fase 3) ó se pueden consultar en la guía del 2; Ph3=Fase 3) ó se pueden consultar en la guía del equipo disponible en la web.equipo disponible en la web.

2-Colocamos la rueda en la misma posición 2-Colocamos la rueda en la misma posición de Fases/Ph que el anillo de Fases marcado de Fases/Ph que el anillo de Fases marcado en el Objetivo con el que se está trabajando.en el Objetivo con el que se está trabajando.

3-Retiramos de la vía de luz: 3-Retiramos de la vía de luz:

-el polarizador DIC. -el polarizador DIC.

-el obturador de transmitida.-el obturador de transmitida.

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Tutorial Zeiss 15 8

Trabajar en Luz Transmitida (Contraste de Fases)(Ph)Trabajar en Luz Transmitida (Contraste de Fases)(Ph)

4-Sacamos la Barra DIC/Fases hasta su posición 4-Sacamos la Barra DIC/Fases hasta su posición más externa . más externa .

La barra tiene 2 posicionesLa barra tiene 2 posiciones

-Interna (para ver en DIC).-Interna (para ver en DIC).

-Externa (para ver en Contraste de -Externa (para ver en Contraste de Fases).Fases).

5-El equipo queda configurado para capturar 5-El equipo queda configurado para capturar imágenes en Contraste de Fases.imágenes en Contraste de Fases.

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9Tutorial Zeiss 15

Trabajar en Luz Transmitida (Contraste Interdiferencial )(DIC)Trabajar en Luz Transmitida (Contraste Interdiferencial )(DIC)

1-Observamos las características DIC que 1-Observamos las características DIC que posee el objetivo con el que estamos posee el objetivo con el que estamos trabajando (no todos los objetivos presentan trabajando (no todos los objetivos presentan DIC) .DIC) .

Las características de DIC del Objetivo vienen marcadas Las características de DIC del Objetivo vienen marcadas en la cuña DIC integrada sobre cada Objetivo (I= DIC I; en la cuña DIC integrada sobre cada Objetivo (I= DIC I; II=DIC II; III=DIC III) ó se pueden consultar en la guía II=DIC II; III=DIC III) ó se pueden consultar en la guía del equipo disponible en la web. del equipo disponible en la web.

2-Para consultar el DIC del objetivo se 2-Para consultar el DIC del objetivo se puede retirar con CUIDADO la cuña y puede retirar con CUIDADO la cuña y observar el número del DIC grabada en la observar el número del DIC grabada en la misma.misma.

1

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Tutorial Zeiss 15 10

Trabajar en Luz Transmitida (Contraste Interdiferencial )(DIC)Trabajar en Luz Transmitida (Contraste Interdiferencial )(DIC)

3-Colocamos la rueda en el nº DIC 3-Colocamos la rueda en el nº DIC marcado en el objetivo con que marcado en el objetivo con que trabajamos.trabajamos.

4-Introducimos en la vía de luz el Polarizador 4-Introducimos en la vía de luz el Polarizador ( hacia la derecha) y retiramos el Obturador ( hacia la derecha) y retiramos el Obturador de transmitida.de transmitida.

4-Insertamos la Barra DIC/Fases hasta su 4-Insertamos la Barra DIC/Fases hasta su posición interna . posición interna . La barra tiene 2 posicionesLa barra tiene 2 posiciones-Interna (para ver en DIC)-Interna (para ver en DIC)-Externa (para ver en Contraste de Fases)-Externa (para ver en Contraste de Fases)

5-El equipo queda configurado para ver y 5-El equipo queda configurado para ver y capturar en DIC.capturar en DIC.

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11Tutorial Zeiss 15

Trabajar en Luz Reflejada (Fluorescencia)Trabajar en Luz Reflejada (Fluorescencia)

1-Encender la lámpara de 1-Encender la lámpara de Fluorescencia .Fluorescencia .

Antes de encender la Antes de encender la lámpara de fluorescencia es lámpara de fluorescencia es necesario verificar en el necesario verificar en el Registro de Uso del equipoRegistro de Uso del equipo que han transcurrido un que han transcurrido un mínimo de 30 minutos mínimo de 30 minutos desde la sesión previadesde la sesión previa

( recordar que existe riesgo ( recordar que existe riesgo de explosión de la lámpara de explosión de la lámpara de mercurio (vapores de mercurio (vapores tóxicos) si se enciende en tóxicos) si se enciende en caliente).caliente).

Para evitar la pérdida/quemado de la fluorescencia Para evitar la pérdida/quemado de la fluorescencia de nuestra muestra cada vez que no estemos de nuestra muestra cada vez que no estemos capturando la imagen es recomendable USAR la capturando la imagen es recomendable USAR la “barra/obturador de Fluorescencia”: “barra/obturador de Fluorescencia”:

Introducimos la barra hacia el interior para cerrar la Introducimos la barra hacia el interior para cerrar la fluorescencia de forma temporal.fluorescencia de forma temporal.

Todos los microscopios de Todos los microscopios de fluorescencia Zeiss presentan fluorescencia Zeiss presentan asociado un protector móvil de asociado un protector móvil de fluorescencia para el usuario que fluorescencia para el usuario que puede aplicarse/bajarse para evitar puede aplicarse/bajarse para evitar la visión directa de la fluorescencia la visión directa de la fluorescencia (perjudicial)(perjudicial)

NORMAS BÁSICAS

Tutorial Zeiss 15 12

Trabajar en Luz Reflejada (Fluorescencia)Trabajar en Luz Reflejada (Fluorescencia)

1-Modo automatizado de la Fluorescencia.1-Modo automatizado de la Fluorescencia.

1-Encendemos el Controlador que 1-Encendemos el Controlador que habilita el funcionamiento del Sistema habilita el funcionamiento del Sistema automatizado de cambio de Filtros de automatizado de cambio de Filtros de Fluorescencia (“Orbit”).Fluorescencia (“Orbit”).

2-Colocamos la rueda de filtros de 2-Colocamos la rueda de filtros de fluorescencia en posición “MOTORIZADA “ fluorescencia en posición “MOTORIZADA “ para permitir el funcionamiento del Orbit.para permitir el funcionamiento del Orbit.

Zeiss presenta asociada una rueda de filtros motorizada (ORBIT) que permite trabajar Zeiss presenta asociada una rueda de filtros motorizada (ORBIT) que permite trabajar con la fluorescencia en 2 modos:con la fluorescencia en 2 modos:

1-Automático (uso del ORBIT).1-Automático (uso del ORBIT).2-Manual.2-Manual.

3-El controlador ORBIT queda 3-El controlador ORBIT queda habilitado para el funcionamiento habilitado para el funcionamiento automatizado del cambio de automatizado del cambio de fuorescencia.fuorescencia.

1

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13Tutorial Zeiss 15

No activoNo activo Permite pasar a modo Permite pasar a modo control manualcontrol manual de los filtros ,con el cual los filtros se cambiande los filtros ,con el cual los filtros se cambian moviendo la rueda de filtros del Zeiss 15moviendo la rueda de filtros del Zeiss 15

Movimiento filtros: Movimiento filtros: permite el movimientopermite el movimiento de los filtros haciade los filtros hacia posiciones anterior posiciones anterior y/o posteriory/o posterior

FluorescenciaFluorescencia : Abre o corta la fluorescencia : Abre o corta la fluorescencia Luz TransmitidaLuz Transmitida: pasa a modo de luz transmitida: pasa a modo de luz transmitida

No activo

Botonera Filtros de fluorescencia:Botonera Filtros de fluorescencia:Dapi/ verde /rojo /tripleDapi/ verde /rojo /triple

NOTA : Zeiss15 incluye filtros de fluorescencia NOTA : Zeiss15 incluye filtros de fluorescencia que se pueden usar de que se pueden usar de 2 modos2 modos::

1-Modo manual1-Modo manual

2-Modo automatizado2-Modo automatizado

1-Para usar los 1-Para usar los filtros manualmentefiltros manualmente se debe se debe colocar en la rueda de filtro del microscopio el colocar en la rueda de filtro del microscopio el

filtro deseado de forma manual filtro deseado de forma manual

2- Para usar el 2- Para usar el sistema automatizadosistema automatizado de filtros , de filtros , se debe colocar la rueda de filtros en la posición se debe colocar la rueda de filtros en la posición “arcoiris/automatizado” , los filtros se introduciran “arcoiris/automatizado” , los filtros se introduciran

de forma automatica usando los botones del de forma automatica usando los botones del “Orbit”“Orbit”

Funcionamiento del controlador ORBIT automatizado de filtros de Funcionamiento del controlador ORBIT automatizado de filtros de fluorescencia “ORBIT”fluorescencia “ORBIT”

Tutorial Zeiss 15 14

Trabajar en Luz Reflejada (Fluorescencia)Trabajar en Luz Reflejada (Fluorescencia)1-Modo manual de la Fluorescencia.

Para trabajar en el modo manual de fluorescencia Para trabajar en el modo manual de fluorescencia NO es necesario encender el “Orbit” , es suficiente NO es necesario encender el “Orbit” , es suficiente con girar la rueda de Filtros a la posición deseada con girar la rueda de Filtros a la posición deseada en función del marcaje de nuestra muestra :en función del marcaje de nuestra muestra :

1-Azul/dapi.1-Azul/dapi.

9-Verde.9-Verde.

15-Rojo.15-Rojo.

25-Triple.25-Triple.

15Tutorial Zeiss 15

Unidad de MicroscopíaUnidad de Microscopía

Centro de Investigación del Cáncer Centro de Investigación del Cáncer

Campus Miguel de Unamuno 37007 Salamanca (Spain).Campus Miguel de Unamuno 37007 Salamanca (Spain).