Tutorial Zeiss 26 1

Tutorial de Uso BásicoTutorial de Uso Básico

Zeiss 26Zeiss 26

Tutorial Zeiss 26 2

Características Zeiss 26………………………….......pag.3-4Características Zeiss 26………………………….......pag.3-4

Pasos iniciales Uso Zeiss 26……………………….….pag. 5Pasos iniciales Uso Zeiss 26……………………….….pag. 5

Luz TransmitidaLuz Transmitida

Trabajo con luz transmitida Campo Trabajo con luz transmitida Campo Claro………………………………………………..….…pag.6Claro………………………………………………..….…pag.6

Trabajo con luz transmitida Contraste de Trabajo con luz transmitida Contraste de Fases…………………………………………..…….…pag.7-8Fases…………………………………………..…….…pag.7-8

Trabajo con luz transmitida Contraste Interdiferencial Trabajo con luz transmitida Contraste Interdiferencial DIC……………….…………………………………..pag.9-10DIC……………….…………………………………..pag.9-10

FluorescenciaFluorescencia

Trabajo con luz reflejada (fluorescencia)Trabajo con luz reflejada (fluorescencia)………………………..…………..…pag.11-12………………………..…………..…pag.11-12

Zeiss 26Zeiss 26 “ “ Tutorial de Uso”Tutorial de Uso”

Tutorial Zeiss 26 3

Zeiss 26Zeiss 26 APLICACIONES.APLICACIONES. Microscopio de FluorescenciaMicroscopio de Fluorescencia

Filtros :Filtros :

1-DAPI1-DAPI

9-VERDE9-VERDE

15-ROJO15-ROJO

25-TRIPLE25-TRIPLE

Microscopio de Luz TransmitidaMicroscopio de Luz Transmitida

-Contraste Interdiferencial (DIC)-Contraste Interdiferencial (DIC)

-Contraste de Fases (PH)-Contraste de Fases (PH)

-Campo Claro-Campo Claro

Localización : Microscopía Planta – 2Localización : Microscopía Planta – 2

4Tutorial Zeiss 26

Zeiss 26 Zeiss 26 CARACTERISTICASCARACTERISTICAS

Filtros Fluorescencia:Filtros Fluorescencia:

1-Azul :1-Azul :BP 365 FT 395 LP397BP 365 FT 395 LP397

9-Verde:9-Verde:(450-490) FT510 LP 520(450-490) FT510 LP 520

15-Rojo:15-Rojo:BP 546 FT 580 LP 590BP 546 FT 580 LP 590

24- Triple:24- Triple:TBP(400/495/570) FT (410/505/585 )TBP(400/495/570) FT (410/505/585 ) TBP (460/530/610)TBP (460/530/610)

Condensador : 0,9Condensador : 0,9

Filtros/Anillos DICFiltros/Anillos DIC-DIC I -DIC I -DIC II -DIC II -DIC III-DIC III

Filtros/Anillos FasesFiltros/Anillos Fases-Ph1 -Ph1 -Ph 2 -Ph 2 -Ph3-Ph3

Objetivos :Objetivos :

x1,25 x1,25 (Sin Fase ni DIC)(Sin Fase ni DIC)x5 x5 (Sin Fase ni DIC)(Sin Fase ni DIC)x10 x10 (Fase 1)(Fase 1)x20 x20 (Fase 2)(DIC 1)(Fase 2)(DIC 1)x40 oil x40 oil (Sin Fase)(DIC)(Sin Fase)(DIC)x63 oil x63 oil (Fase 3)(DIC 3)(Fase 3)(DIC 3)

Equipo conectado :Equipo conectado :

-Cámara color baja resolución MTI-Cámara color baja resolución MTI

- Monitor tiempo real SONY - Monitor tiempo real SONY

-Iluminador NAG f HBO 50 -Iluminador NAG f HBO 50

-PC-PC

5Tutorial Zeiss 26

1-Encendemos el microscopio 1-Encendemos el microscopio Zeiss 26 Zeiss 26

(botón lateral derecho).(botón lateral derecho).

2-Encendemos el Ordenador 2-Encendemos el Ordenador asociado ( PC) para acceder al asociado ( PC) para acceder al programa de captura de programa de captura de imágenes. imágenes.

3-Encendemos la cámara 3-Encendemos la cámara asociada al equipo para la asociada al equipo para la captura de imágenes (cámara captura de imágenes (cámara MTI).MTI).

Pasos Iniciales Uso Zeiss 26Pasos Iniciales Uso Zeiss 26

6Tutorial Zeiss 26

Trabajar en Luz Transmitida (Campo Claro)(BF)Trabajar en Luz Transmitida (Campo Claro)(BF)

2-Colocamos la Rueda en posición D( Campo 2-Colocamos la Rueda en posición D( Campo Claro , luz transmitida Normal).Claro , luz transmitida Normal).

3-Retiramos de la vía de luz (desplazar a 3-Retiramos de la vía de luz (desplazar a la izquierda):la izquierda):

-el polarizador DIC y-el polarizador DIC y

-el obturador de luz transmitida.-el obturador de luz transmitida.

4- Con esta configuración ya es posible observar y 4- Con esta configuración ya es posible observar y capturar imágenes en condiciones de luz transmitida capturar imágenes en condiciones de luz transmitida normal.normal.

1

2

1-Colocamos la Rueda superior de filtros en 1-Colocamos la Rueda superior de filtros en posición D/Vacío .posición D/Vacío .

1

3

7Tutorial Zeiss 26

Trabajar en Luz Transmitida (Contraste de Fases)(Ph)Trabajar en Luz Transmitida (Contraste de Fases)(Ph)

1-Observamos las características de 1-Observamos las características de Fases que posee el objetivo con el que Fases que posee el objetivo con el que estamos trabajando (no todos los estamos trabajando (no todos los objetivos presentan Fases/Ph) .objetivos presentan Fases/Ph) .

Las características de Fase del Objetivo vienen Las características de Fase del Objetivo vienen marcadas en el mismo Objetivo (Ph1=fase 1; Ph2=Fase marcadas en el mismo Objetivo (Ph1=fase 1; Ph2=Fase 2; Ph3=Fase 3) ó se pueden consultar en la guía del 2; Ph3=Fase 3) ó se pueden consultar en la guía del equipo disponible en la web. equipo disponible en la web.

2-Colocamos la rueda en la misma posición de 2-Colocamos la rueda en la misma posición de Fases/Ph que el anillo de Fases marcado en el Fases/Ph que el anillo de Fases marcado en el Objetivo con el que se está trabajando.Objetivo con el que se está trabajando.

3-Retiramos de la vía de luz: 3-Retiramos de la vía de luz:

-el polarizador DIC .-el polarizador DIC .

-el obturador de transmitida.-el obturador de transmitida.

33

22

11

Tutorial Zeiss 26 8

Trabajar en Luz Transmitida (Contraste de Fases)(Ph)Trabajar en Luz Transmitida (Contraste de Fases)(Ph)

4-Sacamos la Barra DIC/Fases hasta su posición 4-Sacamos la Barra DIC/Fases hasta su posición más externa . más externa .

La barra tiene 2 posiciones:La barra tiene 2 posiciones:

-Interna (para ver en DIC).-Interna (para ver en DIC).

-Externa (para ver en Contraste de -Externa (para ver en Contraste de Fases). Fases).

5-El equipo queda configurado para capturar 5-El equipo queda configurado para capturar imágenes en Contraste de Fasesimágenes en Contraste de Fases

5

9Tutorial Zeiss 26

Trabajar en Luz Transmitida (Contraste Interdiferencial )(DIC)Trabajar en Luz Transmitida (Contraste Interdiferencial )(DIC)

1-Observamos las características DIC que posee el objetivo con el que estamos trabajando (no todos los objetivos presentan DIC) .

Las características de DIC del Objetivo (I= DIC I; II=DIC II; III=DIC III) ó se pueden consultar en la guía del equipo disponible en la web.

2-Para consultar el DIC del objetivo se puede retirar con CUIDADO la cuña y observar el número del DIC grabada en la misma.

1

2

Tutorial Zeiss 26 10

Trabajar en Luz Transmitida (Contraste Interdiferencial )(DIC)Trabajar en Luz Transmitida (Contraste Interdiferencial )(DIC)

3-Colocamos la rueda en el nº DIC marcado 3-Colocamos la rueda en el nº DIC marcado en el objetivo con que trabajamos.en el objetivo con que trabajamos.

4-Introducimos en la vía de luz el Polarizador( 4-Introducimos en la vía de luz el Polarizador( hacia la derecha) y retiramos el Obturador de hacia la derecha) y retiramos el Obturador de transmitida.transmitida.

5-Insertamos la Barra DIC/Fases hasta su 5-Insertamos la Barra DIC/Fases hasta su posición interna .posición interna .La barra tiene 2 posicionesLa barra tiene 2 posiciones

-Interna (para ver en DIC)-Interna (para ver en DIC)-Externa (para ver en Contraste -Externa (para ver en Contraste Fases) Fases)

6-El equipo queda configurado para ver y 6-El equipo queda configurado para ver y capturar en DICcapturar en DIC

3

4

5

11Tutorial Zeiss 26

Trabajar en Luz Reflejada (Fluorescencia)Trabajar en Luz Reflejada (Fluorescencia)

1-Encender la lámpara de 1-Encender la lámpara de Fluorescencia .Fluorescencia .

Antes de encender la Antes de encender la lámpara de fluorescencia es lámpara de fluorescencia es necesario verificar en el necesario verificar en el Registro de Uso del equipoRegistro de Uso del equipo que han transcurrido un que han transcurrido un mínimo de 30 minutos mínimo de 30 minutos desde la sesión previa desde la sesión previa ( recordar que existe riesgo ( recordar que existe riesgo de explosión de la lámpara de explosión de la lámpara de mercurio (vapores de mercurio (vapores tóxicos) si se enciende en tóxicos) si se enciende en caliente).caliente).

Para evitar la pérdida/quemado de la fluorescencia Para evitar la pérdida/quemado de la fluorescencia de nuestra muestra cada vez que no estemos de nuestra muestra cada vez que no estemos capturando la imagen es recomendable USAR la capturando la imagen es recomendable USAR la “barra/obturador de Fluorescencia”: “barra/obturador de Fluorescencia”:

Introducimos la barra hacia el interior para cerrar la Introducimos la barra hacia el interior para cerrar la fluorescencia de forma temporal.fluorescencia de forma temporal.

Todos los microscopios de Todos los microscopios de fluorescencia Zeiss presentan fluorescencia Zeiss presentan asociado un protector móvil de asociado un protector móvil de fluorescencia para el usuario que fluorescencia para el usuario que puede aplicarse/bajarse para evitar puede aplicarse/bajarse para evitar la visión directa de la fluorescencia la visión directa de la fluorescencia (perjudicial)(perjudicial)

NORMAS BÁSICAS

Tutorial Zeiss 26 12

Trabajar en Luz Reflejada (Fluorescencia)Trabajar en Luz Reflejada (Fluorescencia)

Modo manual de la Fluorescencia.

Para trabajar en el modo manual de fluorescencia NO Para trabajar en el modo manual de fluorescencia NO es necesario encender el “Orbit” , es suficiente con es necesario encender el “Orbit” , es suficiente con girar la rueda de Filtros a la posición deseada en girar la rueda de Filtros a la posición deseada en función del marcaje de nuestra muestra :función del marcaje de nuestra muestra :

1-Azul/dapi.1-Azul/dapi.

9-Verde.9-Verde.

15-Rojo.15-Rojo.

25-Triple.25-Triple.

13Tutorial Zeiss 26

Unidad de MicroscopíaUnidad de Microscopía

Centro de Investigación del Cáncer Centro de Investigación del Cáncer

Campus Miguel de Unamuno 37007 Salamanca (Spain).Campus Miguel de Unamuno 37007 Salamanca (Spain).