Tutorial Zeiss 21 1

Tutorial de Uso BásicoTutorial de Uso Básico

Zeiss 21Zeiss 21

Tutorial Zeiss 21 2

Características Zeiss 21…………………....pag.3-4Características Zeiss 21…………………....pag.3-4

Pasos iniciales Uso Zeiss 21……………….pag. 5Pasos iniciales Uso Zeiss 21……………….pag. 5

Luz TransmitidaLuz Transmitida

Trabajo con luz transmitida Campo Trabajo con luz transmitida Campo Claro………………………………………….…pag. 6Claro………………………………………….…pag. 6

Trabajo con luz transmitida Contraste de Trabajo con luz transmitida Contraste de Fases……………………………………….…pag.7Fases……………………………………….…pag.7

Trabajo con luz transmitida Contraste Trabajo con luz transmitida Contraste Interdiferencial DIC……………….……….…pag.8-9Interdiferencial DIC……………….……….…pag.8-9

FluorescenciaFluorescencia

Trabajo con luz reflejada (fluorescencia)Trabajo con luz reflejada (fluorescencia)………………………….…pag.10-11………………………….…pag.10-11

Utilidades de interés…………………...….pag.12-13Utilidades de interés…………………...….pag.12-13

Zeiss 21Zeiss 21 “ “Tutorial de Uso”Tutorial de Uso”

Tutorial Zeiss 21 3

Zeiss 21 Zeiss 21 APLICACIONESAPLICACIONES

Microscopio de FluorescenciaMicroscopio de Fluorescencia

Filtros :Filtros :

1-DAPI/azul1-DAPI/azul

9-Verde9-Verde

15-Rojo15-Rojo

Microscopio de Luz TransmitidaMicroscopio de Luz Transmitida

-Contraste Interdiferencial (DIC)-Contraste Interdiferencial (DIC)

-Contraste de Fases (PH)-Contraste de Fases (PH)

-Campo Claro-Campo Claro

Localización : Microscopía Planta – 2Localización : Microscopía Planta – 2

4Tutorial Zeiss 21

Zeiss 21 Zeiss 21 CARACTERISTICASCARACTERISTICAS . .

Filtros Fluorescencia:Filtros Fluorescencia:

1-Azul/Dapi:1-Azul/Dapi:BP 365 FT 395 LP397BP 365 FT 395 LP397

9-Verde:9-Verde:(450-490) FT 510 BP525/50(450-490) FT 510 BP525/50

15-Rojo:15-Rojo:BP 546 FT 580 LP 590BP 546 FT 580 LP 590

Condensador : 0,55Condensador : 0,55

Filtros/Anillos DICFiltros/Anillos DIC-DIC I (0´3-0´4)-DIC I (0´3-0´4)-DIC II (5-14)-DIC II (5-14)

Filtros/Anillos FasesFiltros/Anillos Fases-Ph1 -Ph1 -Ph 2 -Ph 2 -Ph3-Ph3

Objetivos :Objetivos :

x 2,5 x 2,5 (Sin Fase ni DIC)(Sin Fase ni DIC)

x10 x10 (Fase 1)(Fase 1) x20 x20 (Fase 2) (DIC 1)(Fase 2) (DIC 1)x40 x40 (Fase 2) (DIC 3)(Fase 2) (DIC 3)

DIC 1=DIC 0´3-0´4DIC 1=DIC 0´3-0´4DIC 3= DIC 5-14DIC 3= DIC 5-14

Equipo conectado :Equipo conectado :

-Cámara Hamamatsu (c4742-95)-Cámara Hamamatsu (c4742-95)

-AttoArc HBO 100 W-AttoArc HBO 100 W

-Mac Power G4-Mac Power G4

Programa OPENLAB asociadoPrograma OPENLAB asociado

5Tutorial Zeiss 21

1-Encendemos el microscopio 1-Encendemos el microscopio Zeiss 21 (botón lateral derecho).Zeiss 21 (botón lateral derecho).

2-Encendemos el Ordenador 2-Encendemos el Ordenador asociado ( MAC) para acceder asociado ( MAC) para acceder al programa de captura de al programa de captura de imágenes “Openlab”.imágenes “Openlab”.

3-Encendemos la cámara 3-Encendemos la cámara asociada al equipo para la asociada al equipo para la captura de imágenes captura de imágenes (cámara Hamamatsu).(cámara Hamamatsu).

Pasos Iniciales Uso Zeiss 21Pasos Iniciales Uso Zeiss 21

6Tutorial Zeiss 21

Trabajar en Luz Transmitida (Campo Claro)(BF)Trabajar en Luz Transmitida (Campo Claro)(BF)

1-Retiramos de la vía 1-Retiramos de la vía de la luz los 3 filtros:de la luz los 3 filtros:

-obturador tansmitida.-obturador tansmitida.

-filtro neutro. -filtro neutro.

-polarizador DIC.-polarizador DIC.

2-Retiramos el 2-Retiramos el Analizador DIC Analizador DIC inferiorinferior

(tirando de la barra (tirando de la barra hacia fuera)hacia fuera)

3-Colocamos la 3-Colocamos la posición de posición de transmitida en la transmitida en la rueda : rueda :

Posición D/vacío.Posición D/vacío.

4-Sacamos el 4-Sacamos el cubo de filtros cubo de filtros fluorescenciafluorescencia

(se desplaza por un (se desplaza por un sistema de sistema de corredera)corredera)

2

1

3

4

7Tutorial Zeiss 21

Trabajar en Luz Transmitida (Contraste de Fases)(Ph)Trabajar en Luz Transmitida (Contraste de Fases)(Ph)

1-Retiramos de la vía de 1-Retiramos de la vía de la luz los 3 filtros:la luz los 3 filtros:

-obturador tansmitida-obturador tansmitida

-filtro neutro -filtro neutro

-polarizador DIC-polarizador DIC

2-Retiramos el 2-Retiramos el Analizador DIC inferior Analizador DIC inferior

(tirando de la barra (tirando de la barra hacia fuera)hacia fuera)

3- Retiramos la barra 3- Retiramos la barra de filtros de de filtros de fluorescenciafluorescencia

5-Colocamos la 5-Colocamos la posición de la rueda posición de la rueda en la Fase que marca en la Fase que marca el objetivo con el que el objetivo con el que estamos trabajando : estamos trabajando :

Ph 1/ Ph 2 /Ph 3Ph 1/ Ph 2 /Ph 3

4-Observamos las 4-Observamos las características de características de Fases/Ph que posee el Fases/Ph que posee el objetivo con el que objetivo con el que estamos trabajando (no estamos trabajando (no todos los objetivos todos los objetivos presentan Fases/Ph) .presentan Fases/Ph) .

Las características Las características vienen marcadas en vienen marcadas en cada Objetivo ó se cada Objetivo ó se pueden consultar en la pueden consultar en la guía del equipo guía del equipo disponible en la web.disponible en la web.

2

3

1 4

5

8Tutorial Zeiss 21

Trabajar en Luz Transmitida (Contraste Interdiferencial )(DIC)Trabajar en Luz Transmitida (Contraste Interdiferencial )(DIC)

1-Observamos las características DIC que 1-Observamos las características DIC que posee el objetivo con el que estamos posee el objetivo con el que estamos trabajando (no todos los objetivos presentan trabajando (no todos los objetivos presentan DIC) .DIC) .

Las características de DIC del Objetivo vienen Las características de DIC del Objetivo vienen marcadas en la cuña asociada a cada marcadas en la cuña asociada a cada Objetivo ,se puede retirar la cuña DIC con Objetivo ,se puede retirar la cuña DIC con cuidado para verlo (I= DIC I; II=DIC II; III=DIC III) cuidado para verlo (I= DIC I; II=DIC II; III=DIC III) ó se pueden consultar en la guía del equipo ó se pueden consultar en la guía del equipo

disponible en la web.disponible en la web.

2-Colocamos la rueda DIC/fases en la 2-Colocamos la rueda DIC/fases en la misma posición que la del objetivo misma posición que la del objetivo que estamos usando para ver nuestra que estamos usando para ver nuestra muestra.muestra.

DIC 0´3-0´4 = DIC IDIC 0´3-0´4 = DIC I

DIC 5-14 = DIC IIDIC 5-14 = DIC II

1

2

9Tutorial Zeiss 21

Trabajar en Luz Transmitida (Contraste Interdiferencial )(DIC)Trabajar en Luz Transmitida (Contraste Interdiferencial )(DIC)

3-Introducimos en la vía superior el 3-Introducimos en la vía superior el polarizador DIC y retiramos los otros 2 polarizador DIC y retiramos los otros 2 filtros (obturador transmitida y filtro filtros (obturador transmitida y filtro neutro) .neutro) .

4-Aplicamos el analizador DIC 4-Aplicamos el analizador DIC insertándolo hacia dentro insertándolo hacia dentro (este analizador se sitúa bajo el cubo de (este analizador se sitúa bajo el cubo de filtros de fluorescencia que se haya bajo el filtros de fluorescencia que se haya bajo el revolver de objetivos invertidos del Zeiss 21).revolver de objetivos invertidos del Zeiss 21).

3

4

10Tutorial Zeiss 21

Trabajar en Luz Reflejada (Fluorescencia)Trabajar en Luz Reflejada (Fluorescencia)

1-Encender la lámpara de 1-Encender la lámpara de Fluorescencia .Fluorescencia .

Antes de encender la Antes de encender la lámpara de fluorescencia es lámpara de fluorescencia es necesario verificar en el necesario verificar en el Registro de Uso del equipoRegistro de Uso del equipo que han transcurrido un que han transcurrido un mínimo de 30 minutos mínimo de 30 minutos desde la sesión previa desde la sesión previa ( recordar que existe riesgo ( recordar que existe riesgo de explosión de la lámpara de explosión de la lámpara de mercurio (vapores de mercurio (vapores tóxicos) si se enciende en tóxicos) si se enciende en caliente).caliente).

NORMAS BÁSICAS NORMAS BÁSICAS

Para evitar la pérdida/quemado Para evitar la pérdida/quemado de la fluorescencia de nuestra de la fluorescencia de nuestra muestra cada vez que no muestra cada vez que no estemos capturando la imagen estemos capturando la imagen es recomendable USAR la es recomendable USAR la “barra/obturador de “barra/obturador de Fluorescencia”: Fluorescencia”:

La barra tiene 2 posiciones: La barra tiene 2 posiciones:

1-Obturador de Fluorescencia (tal 1-Obturador de Fluorescencia (tal y como se muestra en la foto) y como se muestra en la foto) (hacia afuera).(hacia afuera).

2-Posición vacío para ver la 2-Posición vacío para ver la fluorescencia (introducimos la fluorescencia (introducimos la barra hacia adentro).barra hacia adentro).

Tutorial Zeiss 21 11

Trabajar en Luz Reflejada (Fluorescencia)Trabajar en Luz Reflejada (Fluorescencia)Uso de la Fluorescencia.

1-Colocamos el Obturador de 1-Colocamos el Obturador de luz transmitida en la vía luz transmitida en la vía superior y retiramos los otros superior y retiramos los otros 2 filtros:2 filtros:

-polarizador DIC y -polarizador DIC y

-filtro neutro.-filtro neutro.

2-El sistema de filtros de fluorescencia del Zeiss 21 se basa 2-El sistema de filtros de fluorescencia del Zeiss 21 se basa en una “ barra-cubo corredera” colocada bajo el revolver de en una “ barra-cubo corredera” colocada bajo el revolver de objetivos invertidos, este cubo de filtros se desplaza sobre un objetivos invertidos, este cubo de filtros se desplaza sobre un rail y se puede colocar en 3 posiciones : rail y se puede colocar en 3 posiciones :

Rojo / Verde / Azul Rojo / Verde / Azul

Para trabajar con luz transmitida (campo claro /DIC /Fases) es Para trabajar con luz transmitida (campo claro /DIC /Fases) es necesario retirar este cubo y para volver a colocarlo en su necesario retirar este cubo y para volver a colocarlo en su posición original se inserta (en la misma posición q la figura A , posición original se inserta (en la misma posición q la figura A , con las pegatinas de los filtros mirando hacia nosotros ).con las pegatinas de los filtros mirando hacia nosotros ).

Figura A

12Tutorial Zeiss 21

UTILIDADES DE INTERESUTILIDADES DE INTERES

1-La 1-La palancapalanca actúa como un obturador de la actúa como un obturador de la imagen a los binoculares , presenta 2 imagen a los binoculares , presenta 2 posiciones:posiciones:

1-hacia adentro corta la imagen, no se ve. 1-hacia adentro corta la imagen, no se ve.

2-hacia afuera permite ver la muestra .2-hacia afuera permite ver la muestra .

2-El 2-El botón botón regula la intensidad de luz q regula la intensidad de luz q llega a los binoculares , presenta 2 llega a los binoculares , presenta 2 posiciones con mayor y menor nivel de posiciones con mayor y menor nivel de luz que podemos observar al ver nuestra luz que podemos observar al ver nuestra preparación.preparación.

21

13Tutorial Zeiss 21

UTILIDADES DE INTERESUTILIDADES DE INTERES

La principal aplicación del Zeiss 21 es el uso para estudio de cultivos celulares por ello por defecto la platina carece de soporte para portaobjetos , esta se encuentra desmontada pero puede acoplarse si es necesaria.

14Tutorial Zeiss 21

Unidad de MicroscopíaUnidad de Microscopía

Centro de Investigación del Cáncer Centro de Investigación del Cáncer

Campus Miguel de Unamuno 37007 Salamanca (Spain).Campus Miguel de Unamuno 37007 Salamanca (Spain).