tmd175 slide laboratory diagnostic hiv and aids
TRANSCRIPT
7/26/2019 Tmd175 Slide Laboratory Diagnostic Hiv and Aids
http://slidepdf.com/reader/full/tmd175-slide-laboratory-diagnostic-hiv-and-aids 1/38
LABORATORYLABORATORYDIAGNOSTIC HIV ANDDIAGNOSTIC HIV AND
AIDSAIDS
Prof. DR. Dr.Prof. DR. Dr. RatnaRatna AkbariAkbari GanieGanie,,
SpPKSpPK, FISH, FISH
CLINICAL PATHOLOGY DEPARTMENT MEDICALFACULTY USU / RSUP H.ADAM MALIK
MEDAN
7/26/2019 Tmd175 Slide Laboratory Diagnostic Hiv and Aids
http://slidepdf.com/reader/full/tmd175-slide-laboratory-diagnostic-hiv-and-aids 2/38
7/26/2019 Tmd175 Slide Laboratory Diagnostic Hiv and Aids
http://slidepdf.com/reader/full/tmd175-slide-laboratory-diagnostic-hiv-and-aids 3/38
WHOWHO menentukanmenentukan diagnosis HIVdiagnosis HIV dandanAIDSAIDS berdasarkanberdasarkan gejalagejala klinisklinis dandan jenis jenis
testes pemeriksaanpemeriksaanGejalaGejala klinisklinis HIVHIV dandan AIDSAIDS menurutmenuruttaha antaha an daridari WHOWHO dimulaidimulai adaada tahuntahun
19901990 kemudiankemudian diperbaharuidiperbaharui bulanbulanSeptember 2005September 2005
KondisiKondisi iniini eraterat kaitannyakaitannya dengandengan infeksiinfeksioportunistikoportunistik..
7/26/2019 Tmd175 Slide Laboratory Diagnostic Hiv and Aids
http://slidepdf.com/reader/full/tmd175-slide-laboratory-diagnostic-hiv-and-aids 4/38
Perkembangan HIV menurut WHO,Perkembangan HIV menurut WHO,dibagi dalam 4 stadium:dibagi dalam 4 stadium:
Stadium IStadium IInfeksiInfeksi HIVHIV asimtomatikasimtomatik dandan tidaktidakdikategorikandikategorikan sebagaisebagai AIDS,AIDS, padapada tahaptahapiniini en idaen ida HIVHIV tidaktidak men adarimen adari bahwabahwa
merekamereka telahtelah terinfeksiterinfeksi ((serokonversiserokonversi))Stadium IIStadium II
TermasukTermasuk manifestasimanifestasi membranmembran mukosamukosa
kecilkecil dandan radangradang saluransaluran pernafasanpernafasan atasatasyangyang berulangberulang,, padapada fasefase iniini belumbelumnampaknampak gejalagejala tetapitetapi virusvirus tetaptetap aktifaktif
7/26/2019 Tmd175 Slide Laboratory Diagnostic Hiv and Aids
http://slidepdf.com/reader/full/tmd175-slide-laboratory-diagnostic-hiv-and-aids 5/38
Stadium IIIStadium IIIFaseFase simptomatiksimptomatik,, termasuktermasuk diarediare kronikkronikyangyang tidaktidak dapatdapat dijelaskandijelaskan selamaselama lebihlebihdaridari sebulansebulan,, infeksiinfeksi bakteribakteri parahparah,, dandantuberkulosistuberkulosis
AIDS, yangAIDS, yang berartiberarti kumpulankumpulan penyakitpenyakityangyang disebabkandisebabkan oleholeh virus HIV,virus HIV, adalahadalah
fasefase akhirakhir dandan biasanyabiasanya bercirikanbercirikan suatusuatu jumlah jumlah CD4CD4 kurangkurang 200200
7/26/2019 Tmd175 Slide Laboratory Diagnostic Hiv and Aids
http://slidepdf.com/reader/full/tmd175-slide-laboratory-diagnostic-hiv-and-aids 6/38
StrukturStruktur HIVHIV
g . , u u me ca m cro o ogy ag . , u u me ca m cro o ogy a
7/26/2019 Tmd175 Slide Laboratory Diagnostic Hiv and Aids
http://slidepdf.com/reader/full/tmd175-slide-laboratory-diagnostic-hiv-and-aids 7/38
7/26/2019 Tmd175 Slide Laboratory Diagnostic Hiv and Aids
http://slidepdf.com/reader/full/tmd175-slide-laboratory-diagnostic-hiv-and-aids 8/38
HIV replication cycleHIV replication cycle
7/26/2019 Tmd175 Slide Laboratory Diagnostic Hiv and Aids
http://slidepdf.com/reader/full/tmd175-slide-laboratory-diagnostic-hiv-and-aids 9/38
PatogenesisPatogenesisHIV/AIDSHIV/AIDS
Fig 19.33, hal 245,Fig 19.33, hal 245,medical microbiologymedical microbiology
7/26/2019 Tmd175 Slide Laboratory Diagnostic Hiv and Aids
http://slidepdf.com/reader/full/tmd175-slide-laboratory-diagnostic-hiv-and-aids 10/38
Clinical features andClinical features andprogression of HIVprogression of HIVinfectioninfection
7/26/2019 Tmd175 Slide Laboratory Diagnostic Hiv and Aids
http://slidepdf.com/reader/full/tmd175-slide-laboratory-diagnostic-hiv-and-aids 11/38
Beberapa tes HIVBeberapa tes HIV
PemeriksaanPemeriksaan dasardasar::
– – FBC (full blood count)FBC (full blood count)
– – PemPem.. fungsifungsi hatihati
– – PemPem.. fungsifungsi ginjalginjal:: ureumureum dandan kreatininkreatinin – – AnalisaAnalisa urinurin
– – PemPem.. fesesfeses lengkaplengkap
7/26/2019 Tmd175 Slide Laboratory Diagnostic Hiv and Aids
http://slidepdf.com/reader/full/tmd175-slide-laboratory-diagnostic-hiv-and-aids 12/38
PemeriksaanPemeriksaan penunjangpenunjang
– – TesTes antibodiantibodi terhadapterhadap HIVHIV
– – Viral load Viral load
– – CD4/CD8CD4/CD8
7/26/2019 Tmd175 Slide Laboratory Diagnostic Hiv and Aids
http://slidepdf.com/reader/full/tmd175-slide-laboratory-diagnostic-hiv-and-aids 13/38
FULL BLOOD COUNT (FBC)FULL BLOOD COUNT (FBC)HbHbEritrositEritrositHematokritHematokritLeukositLeukositTrombositTrombosit
– – NeutrofilNeutrofil – – LimfositLimfosit – – MonositMonosit
– – EosinofilEosinofil – – BasofilBasofilLEDLED
Ini Ini sangat sangat tergantung tergantung pada pada stadium HIVstadium HIV dan dan AIDS,AIDS,sehingga sehingga diperlukan diperlukan
pemeriksaan pemeriksaan yang lain yang lain sebagai sebagai pemeriksaan pemeriksaan dasar dasar
7/26/2019 Tmd175 Slide Laboratory Diagnostic Hiv and Aids
http://slidepdf.com/reader/full/tmd175-slide-laboratory-diagnostic-hiv-and-aids 14/38
Tes antibodi terhadap HIVTes antibodi terhadap HIV
TesTes menggunakanmenggunakan bahanbahan whole blood whole blood
AntibodiAntibodi dihasilkandihasilkan setelahsetelah seorangseorangterinfeksiterinfeksi HIVHIV lebihlebih kurangkurang 33--88 mingguminggu
Window perio Window perio ((tahaptahap jendela jendela),), dimanadimanapadapada saatsaat iniini antibodiantibodi belumbelum terdeteksiterdeteksi
PadaPada tahaptahap window period window period kemungkinankemungkinan
bisabisa dilakukandilakukan pemeriksaanpemeriksaan antigenantigenataupunataupun pemeriksaanpemeriksaan viral load viral load
7/26/2019 Tmd175 Slide Laboratory Diagnostic Hiv and Aids
http://slidepdf.com/reader/full/tmd175-slide-laboratory-diagnostic-hiv-and-aids 15/38
7/26/2019 Tmd175 Slide Laboratory Diagnostic Hiv and Aids
http://slidepdf.com/reader/full/tmd175-slide-laboratory-diagnostic-hiv-and-aids 16/38
Beberapa jenis tes antibodi HIVBeberapa jenis tes antibodi HIVRapid testRapid test
ELISAELISA
Western BlottingWestern Blotting
7/26/2019 Tmd175 Slide Laboratory Diagnostic Hiv and Aids
http://slidepdf.com/reader/full/tmd175-slide-laboratory-diagnostic-hiv-and-aids 17/38
Rapid testRapid testMaterial provided:Material provided:
– – SD BIOLINE HIVSD BIOLINE HIV--1/2 test device/ Multi1/2 test device/ Multi--device/strip/POCTdevice/strip/POCT
– – ,,
pipette (20pipette (20 µµl/drop)l/drop)
– – Assay diluentAssay diluent
7/26/2019 Tmd175 Slide Laboratory Diagnostic Hiv and Aids
http://slidepdf.com/reader/full/tmd175-slide-laboratory-diagnostic-hiv-and-aids 18/38
Test procedureTest procedureI. Blood specimen (with a lancet):I. Blood specimen (with a lancet):
1.1. Pierce with sterile lancet providedPierce with sterile lancet provided
2.2. Take a 20Take a 20 µµl capillary pipette provided, drawl capillary pipette provided, drawblood into the capillary pipette to black lineblood into the capillary pipette to black line
.. µµ o rawn oo n o e samp eo rawn oo n o e samp ewell (s)well (s)
4.4. Add 4 drops of assay diluent into the sampleAdd 4 drops of assay diluent into the sample
well (s)well (s)
7/26/2019 Tmd175 Slide Laboratory Diagnostic Hiv and Aids
http://slidepdf.com/reader/full/tmd175-slide-laboratory-diagnostic-hiv-and-aids 19/38
II. Blood (by venipucture), plasma or serumII. Blood (by venipucture), plasma or serum
specimenspecimen1.1. Add 10Add 10 µµl of plasma or serum (l of plasma or serum (2020 µµl ofl of
2.2. Add 4 drops of assay diluent into theAdd 4 drops of assay diluent into thesample well (s)sample well (s)
7/26/2019 Tmd175 Slide Laboratory Diagnostic Hiv and Aids
http://slidepdf.com/reader/full/tmd175-slide-laboratory-diagnostic-hiv-and-aids 20/38
7/26/2019 Tmd175 Slide Laboratory Diagnostic Hiv and Aids
http://slidepdf.com/reader/full/tmd175-slide-laboratory-diagnostic-hiv-and-aids 21/38
ELISAELISA
7/26/2019 Tmd175 Slide Laboratory Diagnostic Hiv and Aids
http://slidepdf.com/reader/full/tmd175-slide-laboratory-diagnostic-hiv-and-aids 22/38
PEMERIKSAAN ELISAPEMERIKSAAN ELISAPEMERIKSAAN ELISAPEMERIKSAAN ELISA
HumoralHumoral componentcomponent ::
PenderitaPenderita HIV ( + )HIV ( + ) membentukmembentuk antibodiantibodi antianti--envelopeenvelope antibodiantibodi gp120, antigp120, anti--p24p24 antibodiantibodi
MetodeMetode pemeriksaanpemeriksaan ::-- ELISA (KUANTITASI)ELISA (KUANTITASI)-- Rapid test (KUALITASI)Rapid test (KUALITASI)
HIV Antigen ELISAHIV Antigen ELISA mendeteksimendeteksi HIV core AntigenHIV core Antigen(p24)(p24) merupakanmerupakan mayor antigen .mayor antigen .
HIVHIV antibodiantibodi terhadapterhadap protein gp120protein gp120 dandan p24p24
7/26/2019 Tmd175 Slide Laboratory Diagnostic Hiv and Aids
http://slidepdf.com/reader/full/tmd175-slide-laboratory-diagnostic-hiv-and-aids 23/38
Pemeriksaan antibodi → Induplo ( cekPemeriksaan antibodi → Induplo ( cek
ulang denganulang dengan duplikasi )duplikasi )duplikasi )duplikasi )duplikasi )duplikasi )duplikasi )duplikasi ) untukuntukmenghindari teknikal error dan falsemenghindari teknikal error dan false
positif.positif.
Hasil : Reaktif → pemeriksaanHasil : Reaktif → pemeriksaankonfirmasi menggunakan metodekonfirmasi menggunakan metode
Western BlottingWestern BlottingWestern BlottingWestern BlottingWestern BlottingWestern BlottingWestern BlottingWestern Blotting (Immunoblotting)(Immunoblotting) ........
False positif jarang terjadi.False positif jarang terjadi.Kekurangan :Kekurangan :Kekurangan :Kekurangan :Kekurangan :Kekurangan :Kekurangan :Kekurangan :
-- Memerlukan waktu yang lamaMemerlukan waktu yang lama
-- Membutuhkan Staff yang terlatihMembutuhkan Staff yang terlatih
-- Memerlukan biaya yang relatif mahalMemerlukan biaya yang relatif mahal
7/26/2019 Tmd175 Slide Laboratory Diagnostic Hiv and Aids
http://slidepdf.com/reader/full/tmd175-slide-laboratory-diagnostic-hiv-and-aids 24/38
Western BlottingWestern Blotting(Confirmation Test)(Confirmation Test)
7/26/2019 Tmd175 Slide Laboratory Diagnostic Hiv and Aids
http://slidepdf.com/reader/full/tmd175-slide-laboratory-diagnostic-hiv-and-aids 25/38
••Untuk Untuk tujuantujuan surveilanssurveilans,, reagenreagen yangyangdipilihdipilih harusharus memilikimemiliki sensitivitassensitivitas >>99%,99%, dandan
spesifisitasspesifisitas reagenreagen berikutnyaberikutnya >98%,>98%, dandanuntuk untuk reagenreagen ketigaketiga spesifisitasspesifisitas >95%>95%
asymptomatic asymptomatic
••SemuaSemua regensiaregensia yangyang dipakaidipakai harusharusterdaftarterdaftar didi DepKesDepKes RI.RI.
7/26/2019 Tmd175 Slide Laboratory Diagnostic Hiv and Aids
http://slidepdf.com/reader/full/tmd175-slide-laboratory-diagnostic-hiv-and-aids 26/38
Tes HIV Viral Load PCRTes HIV Viral Load PCRMetode PCR menyediakan suatuMetode PCR menyediakan suatu
mekanisme untuk mendeteksi targetmekanisme untuk mendeteksi targetorganisme dengan konsentrasi yangorganisme dengan konsentrasi yang
tinggi dan dibuat tiruannya berlipat gandatinggi dan dibuat tiruannya berlipat gandasehingga ada tidaknya virus dan bakterisehingga ada tidaknya virus dan bakterispesifik serta mutasi materi genetik dapatspesifik serta mutasi materi genetik dapatdideteksidideteksi
7/26/2019 Tmd175 Slide Laboratory Diagnostic Hiv and Aids
http://slidepdf.com/reader/full/tmd175-slide-laboratory-diagnostic-hiv-and-aids 27/38
TahapanTahapan ProsesProses PCRPCRPrePre – – PCR :PCR :
PreparasiPreparasi reagensiareagensia
PreparasiPreparasi spesimenspesimen :: isolasiisolasi/ / purifikasipurifikasi DNA/DNA/RNARNA
PCR :PCR : prosesproses amplifikasiamplifikasiDenaturasiDenaturasi ((pemisahanpemisahan rantairantai DNA)DNA)
Annealing (Annealing (penempelanpenempelan primer)primer)
Extension (Extension (pemanjanganpemanjangan oleholeh enzimenzim))PostPost – – PCR :PCR :
DeteksiDeteksi/ / AnalisaAnalisa HasilHasil PCRPCR
7/26/2019 Tmd175 Slide Laboratory Diagnostic Hiv and Aids
http://slidepdf.com/reader/full/tmd175-slide-laboratory-diagnostic-hiv-and-aids 28/38
Viral load HIV adalah jumlah partikel virusViral load HIV adalah jumlah partikel virusHIV yang ditemukan dalam setiap mililiterHIV yang ditemukan dalam setiap mililiterdarahdarah
Semakin ban ak umlah artikel virus HIVSemakin ban ak umlah artikel virus HIV
di dalam darah, semakin cepat seldi dalam darah, semakin cepat sel--selselCD4 dihancurkan dan semakin cepatCD4 dihancurkan dan semakin cepatpasien menuju ke arah AIDSpasien menuju ke arah AIDS
7/26/2019 Tmd175 Slide Laboratory Diagnostic Hiv and Aids
http://slidepdf.com/reader/full/tmd175-slide-laboratory-diagnostic-hiv-and-aids 29/38
Viral load HIV dapat diukur dengan PCR,Viral load HIV dapat diukur dengan PCR,salah satu metode PCR yang digunakansalah satu metode PCR yang digunakansaat ini adalah dengan COBASsaat ini adalah dengan COBAS
AMPLICORTMAMPLICORTM Analyzer Process Steps Analyzer Process Steps Dalam proses amplifikasi target sekuenDalam proses amplifikasi target sekuendi andakan b rulandi andakan b rulan --ulan hin aulan hin a
didapat jutaan kopi yang dinamakandidapat jutaan kopi yang dinamakanamplikon. Hasil pemeriksaan dilaporkanamplikon. Hasil pemeriksaan dilaporkansebagai copies/mL atau dalamsebagai copies/mL atau dalam
perhitungan matematik logaritma atau ‘log’perhitungan matematik logaritma atau ‘log’
7/26/2019 Tmd175 Slide Laboratory Diagnostic Hiv and Aids
http://slidepdf.com/reader/full/tmd175-slide-laboratory-diagnostic-hiv-and-aids 30/38
Misalnya hasil pasien X adalah 173.000Misalnya hasil pasien X adalah 173.000copies/mL=log 5,24 atau pelaporan dalamcopies/mL=log 5,24 atau pelaporan dalam
satuan International Unit= 88.230satuan International Unit= 88.230IU/mL=log 4,946IU/mL=log 4,946
Viral loadViral load VL menun ukkan tin in aVL menun ukkan tin in a
replikasi HIV dan kecepatanreplikasi HIV dan kecepatanpenghancuran CD4 dan tinggi rendahnyapenghancuran CD4 dan tinggi rendahnyaVL menunjukkan cepatVL menunjukkan cepat--lambatnyalambatnya
perjalanan penyakit dan kematianperjalanan penyakit dan kematian
7/26/2019 Tmd175 Slide Laboratory Diagnostic Hiv and Aids
http://slidepdf.com/reader/full/tmd175-slide-laboratory-diagnostic-hiv-and-aids 31/38
PengukuranPengukuran CD4CD4++
PengukuranPengukuran cellular componentcellular component ::
Target cellTarget cell adalahadalah T.helperT.helper (CD4+)(CD4+)
Normal :CD4+ :65 %Normal :CD4+ :65 % dandan CD8+ : 35%CD8+ : 35% daridaritotal Ttotal T--cellcell
PadaPada penderitapenderita AIDSAIDS konsentrasikonsentrasi CD4+CD4+menurunmenurun secarasecara drastisdrastis..
KonsentrasiKonsentrasi CD4+CD4+ dihubungkandihubungkan dengandengan
konsentrasikonsentrasi CD8CD8MenyebabkanMenyebabkan rasiorasio CD4+ / CD8CD4+ / CD8 terbalikterbalik padapada
HIV / AIDSHIV / AIDS
7/26/2019 Tmd175 Slide Laboratory Diagnostic Hiv and Aids
http://slidepdf.com/reader/full/tmd175-slide-laboratory-diagnostic-hiv-and-aids 32/38
TEKNIK PEMERIKSAANTEKNIK PEMERIKSAAN CD4+CD4+
CaraCara ImmunophenotypingImmunophenotyping menggunakanmenggunakanFlowFlow CytometriCytometri dandan Cell sorterCell sorter
PrinsipPrinsip :: MenggabungkanMenggabungkan kemampuankemampuan alatalat--
masingmasing permukaanpermukaan cellcell dengandengan kemampuankemampuanmemisahkanmemisahkan cell yangcell yang beradaberada dalamdalam suatusuatususpensisuspensi menurutmenurut karakteristikkarakteristik masingmasing--
masingmasing dengandengan menggunakanmenggunakan satusatu atauatau lebihlebihProbe yangProbe yang sesuaisesuai secarasecara automatisautomatis melaluimelaluisuatusuatu celahcelah yangyang diteruskanditeruskan oleholeh seberkasseberkassinarsinar laser.laser.
7/26/2019 Tmd175 Slide Laboratory Diagnostic Hiv and Aids
http://slidepdf.com/reader/full/tmd175-slide-laboratory-diagnostic-hiv-and-aids 33/38
CellCell SinyalSinyal elektronikelektronikdetectordetector
Sinar laser
cell
DetectorDetector →→ dicatatdicatat sebagaisebagai karakteristikkarakteristikcellcell yangyang bersangkutanbersangkutan
→→ IdentifikasiIdentifikasi jenis jenis cellcell
→→ aktivitasaktivitas cellcell→→ JumlahJumlah cellcell dalamdalam populasipopulasi
campurancampuran
7/26/2019 Tmd175 Slide Laboratory Diagnostic Hiv and Aids
http://slidepdf.com/reader/full/tmd175-slide-laboratory-diagnostic-hiv-and-aids 34/38
Diagnosis HIV pada bayiDiagnosis HIV pada bayi
InfeksiInfeksi HIVHIV dapatdapat terjaditerjadi padapada bayibayi selamaselama
kehamilankehamilan,, saatsaat melahirkanmelahirkan,, dandan waktuwaktumenyusuimenyusui
berusiaberusia 1818 bulanbulan keke atasatas berartiberarti anakanaktersebuttersebut terinfeksiterinfeksi HIVHIV
TesTes virus HIV (RNA virus)virus HIV (RNA virus) dengandengan alatalatPCRPCR dapatdapat dipakaidipakai untukuntuk diagnosadiagnosa HIVHIVpadapada bayibayi
7/26/2019 Tmd175 Slide Laboratory Diagnostic Hiv and Aids
http://slidepdf.com/reader/full/tmd175-slide-laboratory-diagnostic-hiv-and-aids 35/38
WHO mengusulkan Tes Viral Load untukWHO mengusulkan Tes Viral Load untukdiagnosa infeksi HIV pada bayi sebaiknyadiagnosa infeksi HIV pada bayi sebaiknyadilakukan pada usia 6 minggu ke atasdilakukan pada usia 6 minggu ke atas
Untuk menghindari negatif palsuUntuk menghindari negatif palsusebaiknya dilakukan dua tes virus untuksebaiknya dilakukan dua tes virus untuk
konfirmasi bahwa anak tidak terinfeksikonfirmasi bahwa anak tidak terinfeksiSebaiknya tes antibodi juga harusSebaiknya tes antibodi juga harusdilakukan setelah anak berusia 18 bulandilakukan setelah anak berusia 18 bulan
sebagai konfirmasi ulangsebagai konfirmasi ulang
7/26/2019 Tmd175 Slide Laboratory Diagnostic Hiv and Aids
http://slidepdf.com/reader/full/tmd175-slide-laboratory-diagnostic-hiv-and-aids 36/38
TesTes antibodiantibodi HIV yangHIV yang positifpositif padapada anakanak berusiaberusia1818 bulanbulan keke atasatas berartiberarti anakanak terinfeksiterinfeksi HIVHIV
TesTes PCR HIV yangPCR HIV yang negatifnegatif padapada anakanak belumbelum
berusiaberusia enamenam mingguminggu tidaktidak meyakinkanmeyakinkan bahwabahwaanakanak tidaktidak terinfeksiterinfeksi HIVHIV
AnakAnak dengandengan testes PCR HIVPCR HIV negatifnegatif yangyang
sebaiknyasebaiknya ditesdites PCR HIVPCR HIV ulangulang
((Antiretroviral therapy of HIV infection in infantsAntiretroviral therapy of HIV infection in infants
and children in resource and children in resource- -limited setting limited setting , WHO, WHO2006 )2006 )
7/26/2019 Tmd175 Slide Laboratory Diagnostic Hiv and Aids
http://slidepdf.com/reader/full/tmd175-slide-laboratory-diagnostic-hiv-and-aids 37/38
UntukUntuk parapara klinisiklinisi dalamdalam memantaumemantau
progresivitasprogresivitas penyakit,penyakit, diperlukandiperlukanpemeriksaanpemeriksaan ::
ViralViral LoadLoad (PCR)(PCR)
7/26/2019 Tmd175 Slide Laboratory Diagnostic Hiv and Aids
http://slidepdf.com/reader/full/tmd175-slide-laboratory-diagnostic-hiv-and-aids 38/38