Nota Científica

PROGRAMA DE MEJORAMIENTO CITRICO: DIEZ AÑOS DE SUIMPLEMENTACION EN LA FACULTAD DE CIENCIAS AGRARIAS 1

Luis R. González Segnana 2

Nancy V. Villalba Hornero"

ABSTRACTThe Program Improvement of Varieties of Citric in Para-guay (CVIP) began in 1990 with the following objectives:1) to recover the cultivares selected through themicrografting of apexes caulinares in vitro, 2) to providevirus free buds to nursery growers and producers and 3)to establish a germoplasm bank with cleaned up plants.In 1993 those objectives were enlarged with theintroduction of buds from other countries with similarprograms of improvement. Thirty eight species andvarieties were introduced through the (CVIP). At themoment from the 84 existent varieties, 28 have beencleaned up from virus and similar patogens and they areavailable to producers. Great number of plants has beentaken to the field and multiplied in commercial orchards.

Key Words: Citric, improvement, micrografting.

RESUMENEl Programa de Mejoramiento, de Variedades de Cítricosen Paraguay, comenzó en 1990 con los siguientes obje-tivos: 1) recuperar los cultivares seleccionados a travésdel Microinjerto de Apices Caulinares in vitro, 2) entregaryemas libres de virus a los viveristas y productores decítricos y 3) establecimiento de un banco de germoplasmade las plantas saneadas. En 1993 esos objetivos fueronampliados con la introducción de yemas de otros paísescon similares programas de mejoramiento. Fueron intro-ducidas 38 especies y variedades a través de este Pro-grama. Actualmente se tienen 84 variedades de las que28 han sido limpiadas de virus y patógenos similares yestan disponibles para los productores. Gran número deplantas han sido llevadas al campo y multiplicadas enhuertos comerciales.

Palabras Clave: Cítricos, mejoramiento, microinjerto.

I Trabajo de Investigación desarrollado por el Departamento de Biología financiado parcialmente con fondos del Departamento de Investiga-ciones de la UNA.

2 Ingenieros Agrónomos, Docentes Investigadores a Tiempo Completo del Departamento de Biología de la FCA-UNA.

sometidas al Test de ELlSA doble sándwich, utilizandoanticuerpos monoclonales específicos (Cambra etal., 1991), e) Microinjerto de ápices caulinares in vitro: latécnica aplicada es el procedimiento standard demicroinjerto de apices caulinares in vitro (Navarro et al.,1981). Las variedades infectadas fueron propagadas enportainjertos vigorosos de Limón rugoso en la casa demallas antiáfidos. Cuando las plantas resultantes fuerondestinadas al Microinjerto éstas eran totalmentedefoliadas manualmente y colocadas en una cámara decrecimiento a temperatura de 32°C. Los brotes obteni-dos después de 10 a 15 días fueron utilizados como fuentede ápices. El portainjerto utilizado fue el híbrido CitrangeTroyer cuyas semillas sembradas in vitro y mantenidas aoscuras proporcionaron los portainjertos al cabo de 15días aproximadamante, d) Estudios agronómicos de lasplantas libres de virus: la evaluación agronómica de lasplantas libres de virus comprenden características decrecimiento y de producción. Las observaciones realiza-das comprenden los siguientes aspectos: 1) caracterís-ticas morfológicas de las hojas y frutos de las plantasen invernadero y casa de mallas, 2) características delos frutos en las plantas libre de virus y los árboles adul-tos, 3) comparación de las características de crecimien-to y fructificación entre las plantas libres de virus y lasplantas originalmente seleccionadas e infectadas conalguno de los virus.

INTRODUCCiÓN

1I

Los virus y patógenos similares se encuentranampliamante distribuídos en las viejas plantaciones decítricos del Paraguay, produciendo importantes pérdidaseconómicas en la producción citrícola: la Tristeza de loscítricos, la Exocortis y Psorosis son enfermedades de-tectadas en las zonas productivas del país (González S.et al., 1997). Estas enfermedades causaban importan-tes limitaciones a las nuevas plantaciones puesto queen Paraguay no se disponían de yemas libres de virus ylas enfermedades virósicas y semejantes restringían eluso de determinados portainjertos. Para resolver estosinconvenientes, en el año 1990 fue establecido el Progra-ma de Mejoramiento Cítrico en la Facultad de CienciasAgrarias, con el objetivo general de producir plantas li-bres de virus con características agronómicas adecua-das y una amplia gama de especies y variedades parasu propagación comercial y experimental. El Programaactualmente tiene las siguientes finalidades: 1) obten-ción de plantas libre de virus a partir de plantas seleccio-nadas en Paraguay, 2) introducción de especies y varie-dades inexistentes en el pais de reconocidas institucio-nes a nivel internacional que trabajan en programas demejoramiento cítrico, 3) proveer de yemas saneadas aproductores y viveristas y 4) establecimiento de un ban-co de germoplasma de cítricos.

MATERIALES y MÉTODOSObtención de plantas libres de virus a partir de plan-tas seleccionadas en el Paraguay:Esta parte del Programa está basado en la utilizacióndel Microinjerto de Apices Caulinares in vitro (Navarro,1976,1981; Navarro et al., 1975; Roistacher et al., 1976)que incluye las siguientes etapas: a) Selección de plan-tas madres: la selección de plantas madres de cada va-riedad se basa en sus características agronómicas inde-pendientemente de la presencia de virus. Las varieda-des cultivadas comercialmente fueron seleccionadas enla finca de productores, mientras que las otras varieda-des fueron seleccionadas en propiedades privadas. Es-tas variedades incluyeron especies actualmente cultiva-das, viejas variedades que dejaron de cultivarse, nuevasvariedades introducidas por productores (sin el adecua-do control sanitario) y variedades resultantes de muta-ciones o cultivadas sin identificación. b) Indexing de lasplantas madres: el indexing fue realizado mediante ino-culación por injerto en las siguientes plantas indicadoras:Lima de Méjico para el virus de la Tristeza (CTV), la CidraEtrog Arizona 861 S-1 para la detección del viroide de laExocortis (CEV), la Mandarina Parson's Special para elviroide de la Xiloporosis (CCaV), la Naranja Dulce y elTangor Dweet para la Psorosis. Las plantas indicadoraspara la detección de la Exocortis y Xiloporosis fueronmantenidas a temperaturas de 27 a 32ºC, mientras quepara las otras enfermedades fueron incubadas a tempe-raturas entre 18 y 25°C. En el caso de la Tristeza ade-más del test biológico, las plantas seleccionadas fueron

Introducción de especies y variedades del extranjero:Muchas variedades ya se encontraban cultivadas en Pa-raguay, sin embargo algunas nuevas especies y varieda-des cultivadas en otras áreas eran necesarias principal-mente para expandir el período de producción. Ademásmuchas de estas especies y variedades de cítricos yafines eran necesarias para incrementar el banco degermoplasma con fines de investigación. De todas for-mas la introducción de material vegetativo trae consigonuevas enfermedades y plagas. Para salvar este proble-ma desde 1993 se ha establecido una técnica de cultivode tejidos aplicada a estas introducciones basándose enla experiencia de otros países.

Distribución de yemas libres de virus:Una vez que las especies y variedades seleccionadas eintroducidas de otros países pasaron por el proceso demicroinjerto y corroborada su sanidad por los test res-pectivos, las yemas de las plantas resultantes fueron mul-tiplicadas en condiciones de campo y en invernaderosde cobertura plástica para ser distribuidas a los produc-tores.

Banco de Germoplasma Cítrico:Los materiales seleccionados una vez liberados de lospatógenos así como las variedades introducidas desdeel extranjero permanecen en una colección degermoplasma cítrico bajo condiciones controladas en laFacultad de Ciencias Agrarias.

IJIn ve8tigación Agraria, vol 5 n Q 1

• '. ;l. ~', .RESULTADOS y DISCUSiÓNObtención de plantas libre de virus a partir de plan-tas seleccionadas en el Paraguay:El proceso de recuperación incluyó: a) Selección de plan-tas madres: en nuestro país fueron seleccionadas 46variedades que se encuentran detalladas en la Tabla 1.De ellas 23 corresponden a naranjas de diferentes épo-cas de producción, 8 variedades de pomelo incluyendoaquellas de pulpa blanca con semilla (Duncan),blancasin semilla (Marsh Seedless), pomelos rojos (Red Blushy Texas Ruby Red). También se hallaron 6 variedades demandarinas, de las cuales dos son utilizadas comoportainjertos (Cleopatra y Sunki). Las selecciones de li-mones y limas totalizaron 9 variedades; b) Indexing delas plantas madres: la Tabla 2 muestra un resumen delos resultados en relación al virus de la Tristeza de loscítricos. Este resultó ser el patógeno más común, pre-sentándose dos situaciones muy diferentes según el ori-gen del material indexado. El Test de ELlSA mostró ensus resultados que el 100 % de limones y limas tantoinjertadas como de pie franco estaban infectadas con elvirus, al igual que las naranjas, el 94,7 % de las mandarinassin injertar y el 100 % de las injertadas. En el caso delpomelo e191,4 % de las plantas sin injertar y el1 00% delas injertadas de la Región Oriental se encontraban in-fectadas con el virus, sin embargo, solamente el 1,6 %de las plantas del Chaco. Así los cítricos seleccionadosen la Región Oriental resultaron infectados en el 100 %de los casos de las plantas injertadas, mientras que enla Región Occidental fueron encontradas plantas libresde este virus. En esta region se localizaron viejas plan-tas injertadas sobre naranjo agrio, que demostrabam sermuy productivas y permanecian libres del CTV, proba-blemente y de acuerdo a informaciones de extencionistaslocales estas variedades provenian de una introduccióndades de Texas (USA) entre los años 60 y 70 antes deque el virus del CTV ingresara a Estados Unidos. Lasenfermedades del grupo Psorosis (Psorosis A, B YConcave Gum) resultaron comunes en Mandarinas yNaranjas dulces. Los síntomas de Exocortis fueron en-contrados solamente en plantas injertadas sobreportainjertos susceptibles como el Citrange Troyer oPoncirus trifoliata. La presencia de Exocortis fue confir-mada por el indexing en la Cidra Etrog. La enfermedadXiloporosis no fue observada en condiciones de campoya que no fueron encontradas plantas injertadas sobreLima dulce (González et al., 1997), e) Microinjerto deApices Caulinares in vitro: los brotes obtenidos luego de10 a 15 días en las plantas mantenidas a 32°C fueronutilizadas como fuente de apices. Los apices consistie-ron en el meristema apical y 2 a 3 primordios foliares,midiendo 0,1 a 0,2 mm. El porcentaje de prendimientofue entre 30 a 40 %. Los test realizados a las plantasresultantes de la utilización del Microinjerto de ApicesCaulinares in vitro, mostraron en la mayoría de los ca-sos, que el virus de la Tristeza así como el viroide de laExocortis fueron eliminados exitosamente. El virus de laPsorosis en algunos casos no fue eliminado en el primer

intento, por lo que se hizo necesario repetir el procesoincluyendo siempre la termoterapia a fin de asegurar laeliminación del patógeno; d) Estudios Agronómicos delas plantas libres de virus: la evaluación agronómica delas plantas resultantes del saneamiento mostraron quelas plantas liberadas de patógenos presentaban caracte-rísticas típicas de la variedad, con la ventaja de que alhallarse libre de enfermedades expresaban toda la po-tencialidad de la variedad referida a su producción y pro-ductividad.

Introducción de especies y variedades del extranjero:En todos los casos las introducciones de variedades enforma de varetas y de los portainjertos en forma de semi-llas, se han realizado desde Centros de Certificación osimilares en sus países de origen a fin de salvaguardarlos materiales presentes en nuestro país. El procedimientode introducción consistió basicamente en el cultivo invitro de las varetas introducidas in vitro a 32°C para indu-cir su brotación y su utilización como fuente de ápicesdel Microinjerto in vitro. Un total de 18 especies y varie-dades de portainjertos fueron introducidas del CitrusResearch and Education Center- Universidad de Florida,USA. Del Centro Nacional de Pesquisa en Fruticultura yMandioca de Bahia, Brasil 10 especies y variedades decítricos. Del Instituto Valenciano de Investigaciones Agra-rias, Valencia, España 12 especies y variedades y delInstituto Nacional de Tecnología Agropecuaria de Con-cordia, Entrerrios, Argentina, 7 especies y variedades.

Distribución de yemas libres de virus:A finales de 1993 se ha iniciado el proceso de distribu-ción de las primeras yemas libre de virus, dos variedadesde naranja (Washington Navel y Calderón) y una Limaácida ( Tahiti) fueron las primeras en liberarse para suuso por viveristas asociados. Desde entonces, se haincrementado el número de variedades que se multipli-can año tras año.

Banco de Germoplasma Cítrico: las variedades cultiva-das en nuestro país que fueron recuperadas y las intro-ducidas través de este programa de mejoramiento sehallan disponibles para los viveristas y productores. Igual-mente se ha conseguido ampliar las variedades deportainjertos utilizados por medio de introducciones de18 portainjertos nuevos para nuestro pais que estan siendoevaluados en diferentes ensayos de comportamiento anivel local

Cuadro 1 Variedades seleccionadas e introducidas establecidas en el Banco de Germoplasma Cítricode la Facultad de Ciencias Agrarias (UNA).

ESPECIE VARIEDAD Seleccionadas Introducidas TOTALPomelos Duncan 3 3

Marsh Sedless 3 3Rojos 2 2 4

Naranjas Bahia 2 1 3Bahianinha 1 1 2Criolla 2 2Folha Murcha 1 1Lima 5 5M.Vinous 1 1Natal 1 1 2Parson Brown 1 1 1Pera 2 2Pinneapple 1 1 2Valencia 6 1 7W. Navel 2 3 5Westin 1 1

Mandarinas Clementinas 3 3Cleopatra 2 2Ellendale 1 1 2Mcal. Lopez 1 1Murcott 2 2Parson Special 1 1Satsuma 1 1 2Sunki 1 1

Limas de Persia 1 1Paraguay 1 1Rangpur 2 1 3Sutil 2 2 4Tahiti 1 1

Limones Eureka 1 1Rugoso 1 1 2

OtrosTangelo/Tangor Orlando/Dweet 2 2Naranjo Agrio 3 3Poncirus trifol. trifoliata 2 2Citranges Troyer/Carrizo

C 35/ C 32 5 5Citrumelo swingle 1 1Citrus volkameriano 1 1

TOTAL 46 40 86

n ve8ti8ación A81'af'ia, VD! 5 n Q 1

Cuadro 2 Incidencia del virus de la Tristeza de los cítricos en especies de cítricos en la region Occiden-tal y Oriental del Paraguay determinado por ELlSA.

Especie N°. Posi tiyo/total

R. Oriental R: Occidental

Pie Franco

Lima Sutil 76/76 0/60

Lima rangpur 16/16 0/6

Lima 2/2 ----

Pomelo 117/128 0/17

N. agrio 43/48 ---

N. dulce 63/63 1/12

Mandarina 36/38 ---

Liman rugoso 8/8 ---

Cidra 0/1 ---

Kunquat 1/1 ---

Plantas injertadas (Injerto/porta injerto)

Lima tahiti/lima rangpur 6/6 ---

Lima tahiti/limon rugoso 14/14 ---

Lima sutil/liman rugoso --- 0/3

Pomelo/liman rugoso 2/2 1/60

Pomelo/naranjo agrio --- 0/12

Pomelo/Citrange troyer --- 0/6

Naranja dulce/limon rugoso 58/58 1/1

Mandarina/liman rugoso 16/16 0/4

Liman/liman rugoso 2/2 ---

Pomelo/liman rugoso 2/2 ---

Tangor/limon rugoso 3/3 ---

CONCLlJSIONES' '.' LITERATURA· CITADA

Ilh''1't

El programa de mejoramiento al cabo de estos 10 añosha ampliado sus metas y alcanzado importantes resulta-dos cuyos frutos se encuentran .difundidos en el país.Sin embargo en el Paraguay no existe un programa decertificación obligatoria para los cítricos con lo que se.continuan multiplicando y dispersando enfermedades enlas nuevas plantaciones. La experiencia de programasde mejoramiento similares en otros países ha demostra-do que el control de la sanidad de las mudas con las quese inician las nuevas plantaciones asegura la mayor pro-ductividad de los cultivos y prolonga la vida de las plan-tas'. Una diversidad de variedades cultivadas en el país yotras tantas introducidas a través del Programa se en-cuentran disponibles para los productores, quienes po-drían elegir las más apropiadas variedades de acuerdocon las características de sus zonas productivas e inclu-. so pensando en las demandas del mercado internacio-nal.

,1

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