213734281 lap res anfar spektro uv antalgin b ii 4

8/17/2019 213734281 Lap Res Anfar Spektro Uv Antalgin B II 4

1/24

LAPORAN RESMI PRAKTIKUM ANALISIS FARMASI

VALIDASI METODE ANALISIS SPEKTOFOMETER UV

DAN PENETAPAN KADAR TABLET ANTALGIN

SECARA SPEKTROFOMETER UV

FAKULTAS FARMASI

UNIVERSITAS MUHAMMADIYAH SURAKARTA

2009

PRAKTIKUM I

VALIDASI METODE ANALISIS PENETAPAN

KADAR ANTALGIN DENGAN SPEKTROFOTOMETRI UV

I. TUJUAN


2/24

Mampu memvalidasi suatu senyawa dalam hal ini penetapan kadar

antalgin dengan metode spektrofotometri ultraviolet dan mampu

mengujinya secara akurasi nipitabilitas dan linearitas.

II. RUANG LINGKUP

Dalam praktikum ini digunakan tablet antalgin produk kimia farma,

yang memiliki kandungan zat aktif 500 mg dan berat ratarata 5!",!# mg

III. TANGGUNG JAWAB

$. %raktikum & 'asinta Mila (hani )* $00 0+0 0+0 -ur ayati )* $00 0+0 0+$

%andu /l osyid )* $00 0+0 05!

". %embimbing & 1ka 2risharyanti D*,(.(i., /pt

IV. ALAT DAN BAHAN

/lat

3abu takar $0 mℓ, $00mℓ pipet tetes

4elas ukur eacker glass

6rlemeyer $00mℓ (pektrofotometri 78

Mortir *uvet

(temper Mikropipet "0 "00 93

%ipet volume

ahan

/ntalgin:metampyronum

Digunakan tablet antalgin : metampiron produksi kimia farma

memiliki kandungan zat aktif 500 mg dan berat rata 5!",!# dengan

menggunakan ;3 0,$- dengan pemberian serbuk hablur putih

atau putih kekuningan.

-as0< = ;

" -

-

;#

5

- ->

;<

;<

;<

">

;$0

$# -

< -

a>

?(.

"> 1M @


3/24

)A1. 111 hal


4/24

$5$ mg sampai dengan $


5/24

Dalam persamaan & 6 @ hv @ hc:λ maka kita akan dapat mengetahui

bahwa perbedaan tingkat energi perpindahan dari ground state dan excited state sangat menentukan panjang gelombang dari senyawa tersebut.

(emakin besar selisih tingkat energinya maka akan semakin kecil panjang

gelombang maksimalnya.

(pektrofotometer 788is dapat digunakan analisis kuantitatif dari

suatu senyawa. /nalisis ini dilakukan dengan menggunakan tetapan

absorpritivitas molar dan panjang gelombang maksimal yang dapat

ditentukan dari penelitian.

)(koog, $!C5

(enyawa kimia biasanya dianalisis melalui unsur, ion, radikal atau

gugusnya. /da analisis senyawa anorganik secara volumetric biasanya

dibagi berdasarkan reaksi yang terjadi selama titrasi seperti asidi

alkalimetri, pengendapan, oksidasireduksi, dan lainlain. %embagian

tersebut kurang tepat untuk analisis senyawa organik. eaksi ini juga tidak

spesifik, karena reaksi ini tidak hanya untuk satu senyawa saja, tetapi dapat

juga untuk senyawa lain yang mengandung unsur, ion, radikal, atau gugus

yang sama. /da analisis metode modern, pembagian berdasarkan metode

seperti spektrofotometri 788is, spektroflourometri dan kromatografi, juga

kurang cocok. >leh karena itu pembagian berdasarkan struktur kimia

merupakan cara pengelompokkan yang cocok untuk nyawa obat.

)(udjadi dan /bdul ahman, "00?

V$-!$# M)o! A'$-##

Definisi validasi menurut (* Menkes 1. -o. ? adalah tindakan pembuktian dengan cara yang sesuai bahwa

bahan, prosedur, sistem, perlengkapan atau mekanisme dalam produksi dan

pengawasan senantiasa mencapai hasil yang diinginkan.

)/nonim, "00+

/dapun urutan kerja validasi diawali dengan penyusunan dan

persetujuan protokol yang berisi rancangan tertulis validasi, kriteria


6/24

penerimaan untuk proses. Fumlah validasi, peralatan, proses kritis, range

parameter proses, sampling data uji, dan hasil yang diterima.

2ahap pelaksanaan meliputi kegiatan verifikasi, pengumpulan data

dan pengujian selanjutnya diikuti evaluasi data, baik secara analisis statistik

maupun grafik, dan tahap terakhir dilakukan penyusunan laporan validasi.

)/nonim, "00?

validasi metode analisis ialah proses yang ditetapkan melalui studi

laboratorium karakteristik kinerja metode analisis memenuhi persyaratan

sesuai tujuan susunannya. *arakteristik kinerja metode analisis dinyatakan

sebagai parameter yang harus dipertimbangkan dalam validasi metode

analisis dapat dilihat dalam tabel dibawah ini

parameter analisis&

%resisi atas kuantitasi

/kurasi 3inieritas

spesifitas:spesifitas entang

Deteksi *etegaran :uggedness

uggednes

Devinis akurasi adalah suatu metode analisis yang tingkat

kedekatannya dari metode analisis yang divalidasi sedang dengan nilai

sebenarnya atau nilai yang dianggap benar. /kurasi dinyatakan sebagai

persen perolehan kembali dengan cara melakukan analisis terhadap analit

yang ditambahkan ke dalam sampel zat dalam jumlah yang diketahui.

%enetapan akurasi dilakukan dengan menggunakan pengujian

menggunakan metode yang sedang divalidasi terhadap sample zat yang

ditambah analit dalam kadar yang diketahui lebih tinggi maupun lebih

rendah dari kadar normal yang diharapkan terkandung dalam sampel zat.

%resentasi analit yang diperoleh kembali dalam sampel zat.

Pr##

Definisi presisi dalam metode analisis ialah tingkat kedekatan

diantara hasil uji individu bila prosedur digunakan berulang kali terhadap


7/24

sampling ganda atas sampel yang homogen. %resisi metode analisis

biasanya dinyatakan sebagai simpangan baku relatif )*oefisien varias.

%resisi dapat berupa ukuran derajat reprodusibilitas atau ripitabilitas metode

analisis dalam kondisi kerja normal. Dalam konteks ini reprodusibitas

mengacu pada penggunaan metode analisis di laboratorium yang berbeda.

%resisi antara menyatakan variasi dalam laboratorium, pengujian

dilakukan pada hari yang berbeda atau analis yang berbeda atau peralatan

yang berbeda dalam laboratorium yang sama. ipitabilitas mengacu pada

penggunaan metode analisis dalam laboratorium yang sama dalam waktu

singkat, menggunakan analisis dan instrument yang sama.

%enetapan presisi ialah metode analisis penetapan dengan

menentukan kadar larutan sampel homogen beberapa kali )dengan n kali

pengujian sehingga hasil uji dapat dihitung secara statistika perkiraan yang

valid dari simpangan baku atau simpangan baku relative )koefisien variasi.

%enetapan kadar dalam konteks ini adalah analisis mandiri )independent

terhadap sampel yang dilakukan melalui analisis lengkap mulai dari

penyiapan hingga diperoleh hasil akhir.

S*#,)$# $)$" S-+)/)$#

Definisi selektivitas atau spesifitas metode analisis adalah

kemampuan metode analisis untuk mengukur secara tepat dan spesifik

analit yang tercampur dengan komponen lain dan diperkirakan ada dalam

matriks sampel. (pesifitas dinyatakan sebagai derajat bisa hasil uji, yang

diperoleh dari analisis sampel mengandung cemaran yang ditambahkan.

(pesifitas ialah ukuran derjat gangguan )atau tanpa gangguan dalam

analisis campuran sampel yang kompleks.

%enetapan spesifitas metode analisis ditentukan dengan

membandingkan uji sampel yang mengandung cemaran, hasil urai atau

senyawa sejenis. ila terjadi bias hasil maka bias ini ialah perbedaan hasil

uji antara kedua kelompok sampel tadi.

ila cemaran atau produk urai tidak atau produk urai tidak

teridentifikasi atau tidak tersedia, spesifitas dapat ditunjukkan dengan


8/24

melakukan analisis menggunakan metode yang sedang validasi terhadap

sampel yang mengandung cemaran atau produk urai dan membandingkan

hasil yang diperoleh dengan metode penetapan kadar tambahan misalnya

penetapan kadar dengan kromatografi. Derajat kesesuaian hasil uji kedua

metode ini adalah ukuran spesifitas.

B$)$# D)+#

Definisi batas deteksi adalah parameter uji batas. atas deteksi

adalah konsentrasi rendah analit dalam sampel yang dapat dideteksi, tetapi

tidak perlu secara kuantitatif. 7ji batas hanya sematamata menunjang

bahwa konsentrasi analit adalah di bawah atau di atas kadar tertentu. atas

deteksi dinyatakan sebagai konsentrasi analit )misalnya persen, bagian per

semilyar dalam sampel.

%enetapan penentuan batas deteksi suatu metode analisis bervariasi

tergantung ada apakah metode analisis merupakan prosedur instrumental

atau non instrumental. 7ntuk prosedur instrumental dapat digunakan

beberapa teknik. /da peneliti yang mengukur signal terhadap noise dengan

membandingkan hasil uji sampel yang mengandung analit dalam

konsentrasi yang diketahui dengan blangko sampel dan menetapkan

konsentrasi analit terendah yang dapat dideteksi dengan baik. (ecara umum

rasio signal terhadap noise "&$ atau


9/24

yang diketahui dan menentukan kadar terendah analit yang dapat dideteksi

dengan baik.

B$)$# K"$'))$#

Definisi batas kuantitasi adalah parameter penetapan kuantitatif

senyawa dengan kadar rendah dalam matrik sampel zat seperti cemaran atau

hasil urai dalam bahan tambahan pangan atau bahan penolong. atas

kuantitas dinatakan sebagai konsentrasi analit )misal persen, bagian

persemiliyar dalam sampel zat.

%enentuan batas kuantitas suatu metode analisis bervariasi

tergantung pada apakah metode analisis merupakan prosedur instrumental

atau non instrumental.

7ntuk prosedur instrumental, pendekatan umum adalah dengan

mengukur besarnya respon latar belakang analisis dengan cara melakukan

analis sejumlah blangko sampel dan menghitung simpangan baku relatif

respon tersebut. (impangan baku yang diperoleh dikalikan dengan suatu

faktor, biasanya $0, memberikan perkiraan batas kuantitas. (elanjutnya

batas kuantitas ini divalidasi dengan cara melakukan analisis terhadap

sejumlah sampel yang mengandung analit dalam jumlah yang diketahui

mendekati batas kuantitasi atau sampel yang dibuat mengandung analit

pada batas kuantitas atau sampel yang dibuat mengandung analit pada batas

kuantitas.

7ntuk metode non instrumental, batas kuantitas umumnya

ditetapkan dengan melakukan analisis sampel yang mengandung analit

dalam kadar yang diketahui dan menentukan kadar terendah analit yang

dapat dideteksi dengan presisi dan akurasi yang dapat diterima.

L'$r)$# !$' R')$'%

Definisi linearitas ialah metode analisis adalah kemampuan )dalam

rentang penggunaan untuk menyebabkan hasil uji yang secara langsung

atau melalui transformasi matematis yang umum dikenal proporsional


10/24

terhadap konsentrasi analit dalam sampel dalam rentang penggunaan

metode analisis. 3inearitas dinyatakan dengan varians disekitar slope garis

regresi )koefisien korelasi dihitung berdasarkan hubungan matematis yang

pasti dari hasil uji yang diperoleh dengan melakukan analisis terhadap

sampel yang mengandung analit dalam jumlah yang berbeda.

Definisi rentang, rentang metode analisis adalah interval antara dan

termasuk batas terendah dan termasuk batas terendah dan batas tertinggi

kadar analit yang telah terbukti dapat ditetapkan dengan metode analisis

dengan presisi, akurasi dan linieritas yang dapat diterima sesuai dengan

tertulis dalam unit yang sama dengan hasil uji )misalnya persen, bagian

persejuta yang diperoleh dengan metode analisis.

%enetapan linearitas dan rentang. 3inearitas metode analisis

ditetapkan dalam perlakuan matematis perlakuan matematis hasil uji yang

diperoleh dengan melakukan analisis terhadap sampelsampel yang

mengandung analit sepanjang tentang pengujian yang dinyatakan pada

metode analisis. %erlakuan matematis pada umumnya meliputi perhitungan

analisis regresi dengan hitungan kuadrat terkecil hasil terhadap konsentrasi

analit. Dalam beberapa analisis untuk memperoleh linearitas hasil uji dari

konsentrasi analit dalam sampel, data hasil uji lalu ditransformasikan secara

matematis sebelum dilakukan analisi regresi.

entang metode analisis divalidasi dengan melakukan verifikasi

bahwa metode analisis menghasilkan presisi, akurasi dan linearitas yang

dapat diterima bila digunakan untuk menguji sampel yang mengandung

analit, baik pada konsentrasi tertinggi dan terendah maupun pada

konsentrasi lain dalam rentang pengujian sesuai dengan penggunaan metode

analisis.

R"%%!'#

Definisi Ruggedness metode analisis adalah derajat reproduksibiltas

metode analisis yang dilakukan dengan melakukan analisis sampel yang

sama dalam variasi kondisi pengujian normal seperti laboratorium, analis,


11/24

instrumen, lot pereaksi, atau pelaksanaan pengujian, suhu selama pengujian

dan hari yang berbeda. eproduksibilitas biasanya dinyatakan sebagai

kurangnya pengaruh tabel operasional dan lingkungan penggunaan metode

analisis terhadap hasil uji.

uggednes adalah ukuran reproduksibilitas hasil analisis dalam

kondisi normal, kondisi yang diterapkan dari laboratorium ke laboratorium

yang lain dan dari analisis ke analisis.

%enetapan ruggedness adalah analisis ditentukan dengan melakukan

analisis terhadap larutan zat dari sampel yang homogen dalam laboratorium

yang berbeda, analis yang berbeda, menggunakan kondisi operasional dan

lingkungan yang mungkin bervariasi tapi masih dalam batas parameter yang

ditetapkan untuk penetapan kadar.

K)%$r$' Ro("#)'##1

Definisi ketegaran metode analisis adalah ukuran kemampuan

metode untuk tetap bertahan terhadap pengaruh kecil tetapi dilakukan

dengan sengaja dengan membuat variasi dalam parameter metode analisis

dan memberikan indikasi kehandalan metode selama penggunaan normal.

U'#"r D$)$ $'% !*r-"+$' "')"+ /$-!$#

%rosedur penetapan kadar dalam monografi *M1 sangat bervariasi

dari penetapan analisis yang sangat pasti sampai evaluasi subjektif dari

atribut pengujian. Mempertimbangkan variasi penetapan seperti ini, sangat

logis bila metode pengujian yang berbeda memerlukan bagan validasi yang

berbeda pula.

Kategori I Metode analisis untuk kuantitasi komponen utama bahan baku,

tambahan pangan atau bahan penolong )termasuk pengawet

Kategori II Metode analisis untuk menentukan cemaran dalam bahan baku,

penetapan karakteristik pangan atau bahan penolong. Dalam kategori

tercakup uji batas dan penetapan secara kuantitatif

Kategori III Metode analisis untuk penentuan karakteristik performan

)misalnya pelarutan, titik lebur.


12/24

7ntuk masingmasing kategori penetapan, dibutuhkan informasi analisis

yang berbeda. Daftar dari tabel " adalah unsur data yang umumnya

diperlukan untuk tiap kategori penetapan.

2abel ". unsur data yang diperlukan untuk validasi metode analisis

%arameter Metode

/nalisis

*ategori

*ategori 1 *uantitatif 7ji atas *ategori 111

/kurasi G G H H

%resisi G G G

(pesifitas G H

atas Deteksi G H

atas *uantitasi G G H

3inieritas G G Hentang G G H H

uggednes G G G G

*eterangan& G Diperlukan

2idak diperlukan

H Mungkin diperlukan, tergantung pada sifat pengujian

Metode dan penetapan dan pengujian umum yang sudah dikenal

baik seperti de titrasi untuk penetapan kadar air, uji identifikasi harus

divalidasi pula untuk dibuktikan akurasinya dan tidak ada gangguan yang

mungkin bila digunakan untuk baru atau bahan baku.

8alidasi suatu metode analisis hanya dapat dilakukan dengan studi

laboratorium& bila itu dokumentasi keberhasilan penyelesaiannya studi

seperti ini merupakan persyaratan dasar untuk menetapkan apakah metode

sesuai dengan tujuan penggunaanya. Dokumentasi yang memadai harus

menyertai setiap proposal metode analisis kompendial baru atau revisinya.

)*ovar/uterhoff, $!C+

VI. CARA KERJA

;ara kerja standar

/ntalgin

D$

$cm6 dalam etanol "#5 pada "


13/24


14/24

$00 ml. diambil 0,5 ml. dimasukkan dalam labu takar $0,0 ml.

ditambahkan pelarut hingga $0,0 ml. dimasukkan dalam kuvet 78.

Dibaca absorbansi pada λ maE yang dapat.

C$r$ Kr3$ S+&$)#

$. %embuatan larutan stock 0,$

Ditimbang seksama $00,0 mg bahan standar )murni : antalgin murni

↓

dimasukkan dalam labu takar $00,0 ml

↓

ditambahkan ;l 0,$- ad $00,0 ml

". %enentuan panjang gelombang maE )λ maE

Diambil $00µl larutan stock 0,$

↓

Dimasukkan dalam labu takar $0,0ml

↓

Ditambahkan ;3 ad $0,0 ml

↓

3arutan diambil dimasukkan dalam kuvet 78

↓

Diukur pada daerah panjang gelombang 78

↓Ditentukan λ maE


15/24

↓

Ditambahkan ;3 ad $0,0 ml↓

Diambil larutan tersebut dalam kuvet

↓

Diukur absorbansi pada λ maE @ "5Cnm

?. %enentuan kurva baku

Diambil larutan stock +5µl, $"5µl, $+5µl, ""5µl,


16/24

Dibaca /bsorbansi pada λ maE yang didapat @ "5C nm

7ntuk / @ kadar tanpa penambahan zat aktif

@ kadar dengan penambahan zat aktif

D$00l bobot tota

aktif zat bobotJ ×=

PERHITUNGAN AKURASI

$. *elompok dengan penambahan zat aktif C0

zat aktif yang ditambahkan C,0.rataKrata

KsampelaxWxZ ×=

". *elompok dengan penambahan zat aktif $00

zat aktif yang ditambahkan xl $00E.b

$00×=


17/24

Dihitung recovernya

2. S$&*- 5 607 8$) $+),

at murni antalgin ditimbang L $"0,0 mg dimasukkan dalam labu takar

$00,0 ml G sampel zat aktif atau dari larutan stock C0nya

↓

ditambahkan ;3 ad larut )bila tidak larut disaring

↓

Dimasukkan dalam labu takar $00 ml di ad ;3 ad $00 ml↓

diambil $00µl, ad ;3 ad $0 ml pada labu takar $0 ml

↓

Dibaca /bsorbansinya pada pada λ maE "5C nm

↓

Dicari kadarnya dari persamaan kurva baku yang didapat

↓

Dihitung recoverynya

. S$&*- 5 4007 8$) $+),


$00,0 ml G sampel zat aktif atau diambil dari larutan stok $00nya

↓

Ditambahkan ;3 ad larut )bila tidak larut disaring

↓

Dimasukkan dalam labu takar $00 ml di ad ;3 ad $00 ml

↓

Diambil $0093 ad ;3 ad $0 ml pada labu takar $0 ml

↓



18/24

↓

Dicari kadarnya dari persamaan kurva baku yang didapat↓

Dihitung recoverynya

:. S$&*- 54207 8$) $+),


$00,0 ml G sampel zat aktif atau dari larutan stock $"0nya

↓ditambahkan ;3 ad larut )bila tidak larut disaring

↓

Dimasukkan dalam labu takar $00 ml di ad ;3 ad $00 ml

↓

Diambil $00µl, ad ;3 ad $0 ml pada labu takar $0 ml

↓


↓

Dicari kadarnya dari persamaan kurva baku yang didapat

↓

Dihitung recoverinya

RIPITABILITAS

*eseragaman bobot dihitung, gerus ad halus

↓

(ampel /ntalgin ditimbang seksama L$"0 mg

↓

di replikasi +J

↓

Masingmasing dimasukkan dalam labu takar $00,0 ml


19/24

↓

Ditambahkan ;3 ad $00,0 ml ad larut )bila tidak larut disaring↓

Diambil $50µl, dimasukkan dalam labu takar $0 ml dan ditambahkan

;3 $0 ml

↓

Dibaca absorbansinya pada λ maE )"5C nm

↓

Dihitung (Dnya dengan kriteria keberterimaan (D N "

LINIERITAS

Ditimbang antalgiin dengan range kadar +0$


20/24

%ercobaan kali ini bertujuan agar mahasiswa mampu mengetahui

dan menetapkan kadar antalgin dalam sediaan tablet dengan metode analisis

spektrofotometri 78 serta mampu melakukan validasi metode analisis

spektrofotometri 78 pada antalgin dalam sediaan tablet dengan menguji

secara akurasi, ripitabilitas dan linieritas.

%ada praktikum kali ini bahan obat yang digunakan adalah tablet

antalgin yang sering digunakan sebagai analgesik atau antipiretik. 2ablet

adalah sediaan padat mengandung bahan obat dengan atau tanpa bahan

pengisi. )A1 18. 2ablet metampiron atau antalgin mengandung metampiron,

;$


21/24

al pertama yang dilakukan adalah membuat larutan stock 0,$.

Dengan cara menimbang sampel antalgin L $00 mg dimasukkan dalam labu

takar $00 ml dan dilarutkan dengan ;3 ad $00 ml. (ebelum dimasukkan

dalam labu takar, labu takar terlebih dahulu dicuci dengan aBuadest dan

sedikit ;3, hal ini dimaksudkan agar pada penentuan λ maE

absorbansinya tepat sebab tidak ada zat lain yang tercampur. ;3 disini

berfungsi sebagai pelarut dari antalgin karena antalgin hanya dapat larut

dalam pelarut organik. 2etapi dalam percobaan antalgin tidak dapat larut

sempurna dalam ;3 sehingga perlu dilakukan penyaringan sebab adanya

antalgin yang tidak larut akan mempengaruhi pada pembacaan absorbansi.

(etelah itu ditentukan λ maEnya dengan mengambil "00µl dari

larutan stok 0.$ yang telah dibuat kemudian ditambahkan ;3 ad $0 ml

dalam labu takar $0 ml. dibaca /bsorbansinya pada spektrofotometri 78

pada berbagai panjang gelombang "00


22/24

larut disaring dengan kertas saring, kemudian dibaca absorbansinya pada λ

maE )"5Cnm. %embuatan seri kadar ini digunakan untuk membuat kurva baku yang nantinya digunakan untuk menghitung kadar sampel. *urva baku

dibuat dengan membuat persamaan regresi linier dari data konsentrasi

masingmasing seri kadar 8( absorbansinya dengan persaman kurva baku y

@


23/24

• ipitabilitas merupakan sejumlah pencaran hasil yang diperoleh dari

analisis berulangkali pada suatu sampel homogen• 3inieritas adalah kemampuan )dalam rentang penggunaan untuk

mendapatkan hasil uji yang secara langsaung proporsional dengan

konsentrasi )jumlah analit didalam sampel

• %resisi dinyatakan dengan koefisiensi variasi )Coefficient of Variation

@ ;8 atau simpangan baku relatif ) Relative Standard Deviation @

(D, ;8 atau (D N ".

• 3iniearitas yang didapat adalah @ 0,C#$ hal ini tidak sesuai dengannilai teoritis yaitu O 0,!C

• asil uji parameter

No P$r$&)r H$#- K)r$'%$'

$ /kurasi dan recovery

a.

%enambahan zat aktif C0

b.%enambahan zat aktif $00

c.

%enambahan zat aktif $"0

a.

(D @ +.0#

ecovery @ $.#<

b.

(D @ +0.+

2idak diterima

2idak diterima

2idak diterima

2idak diterima2idak diterima

2idak diterima

". ipitabilitas (D @ C.


24/24

(kog, D./. $!C5. rinciples #f Instrumental "nal%sis,

213734281 lap res anfar spektro uv antalgin b ii 4

Documents