the studies of density, apparent molar volume, and viscosity of bovine serum albumin, egg albumin,...

16
The Studies of Density, Apparent Molar Volume, and Viscosityof Bovine Serum Albumin, Egg Albumin, and Lysozyme in Aqueous and RbI, CsI, and DTAB Aqueous Solutions at 303.15 K by Man Singh* a ), Hema Chand b ), and K. C. Gupta b ) a ) Chemistry Research Laboratory, Deshbandhu College, University of Delhi, New Delhi-110019, India (phone: 91-011-26217579; e-mail: [email protected]) b ) Department of Chemistry, BSA College, Mathura, Dr B. R. Ambedkar University, Agra, India Density (1), apparent molar volume ( V f ), and viscosity (h) of 0.0010 to 0.0018% (w/v) of bovine serum albumin (BSA), egg albumin, and lysozyme in 0.0002, 0.0004, and 0.0008m aqueous RbI and CsI, and (dodecyl)(trimethyl)ammonium bromide (DTAB) solutions were obtained. The experimental data were regressed against composition, and constants are used to elucidate the conformational changes in protein molecules. With salt concentration, the density of proteins is found to decrease, and the order of the effect of additives on density is observed as CsI > RbI > DTAB. The trend of apparent molar volume of proteins is found as BSA > egg-albumin > lysozyme for three additives. In general, h values of BSA remain higher for all compositions of RbI than that of egg-albumin for CsI and DTAB. These orders of the data indicate the strength of intermolecular forces between proteins and salts, and are helpful for understanding the denaturation of proteins. Introduction. ± Generally, spectroscopic and calorimetric techniques are applied to study protein interactions [1 ± 3] , and, as a result, there have been limited investigations on density, molar volumes, and viscosity in mixed solvent system. The techniques that work under external forces may not reveal the real dimensions of molecular behavior. Bovine serum albumin (BSA), egg albumin, and lysozyme are a few of many proteins which are important in several biochemical and biophysical processes. Their better understanding renders useful information about action and mechanism of proteins. Thermodynamic and transport functions such as 1 and V f , and h focus on the structural interaction of biomolecules and significantly resolve the hydrophilic and hydrophobic interactions. Unfortunately, such studies have not been taken into account for investigations on proteins. However, recently several workers have conjectured about the role of solvents in causing certain molecular forces between two or more hydrophilic groups on protein backbone [4 ± 8]. Salts like NaCl, KCl, and CaCl 2 along with surfactants like SDS have been subjected for hydrophilic and hydrophobic interactions [9]. The usual techniques do not focus on the size of solvent ± protein complexes and torsional force generated on Newtonian flow of solution [10 ± 12]. It should be mentioned that electrostatic, covalent, and Van der Waals forces of proteins play a key role in monitoring the conformational states of proteins [13 ± 17]. The present studies seem to be relevant because the residual forces of molecules are reoriented during solute ± solvent and solute ± cosolute ± solvent interactions. The 1, V 0 , and B represent an internal state of protein molecules elucidating an influence of concentration of the interacting molecules ± protein molecules and ions. Proteins, in CHEMISTRY & BIODIVERSITY ± Vol. 2 (2005) 809 2005 Verlag Helvetica Chimica Acta AG, Zürich

Upload: man-singh

Post on 06-Jun-2016

212 views

Category:

Documents


0 download

TRANSCRIPT

��� ������ � �� ���� ������ � ���� ������ � � ������ � ��� ������ ������ � ��� ������ � � � ������ � � ��� � � !�"� #"� � �

���� � ��� ����� �� $%$&'( )

�� �� �� ��*��� +��� #�� ���� ��� )& #& ,������

�� ��� ��� � ��� ����������� � ����� ������ ����� ��� �� ���� �� ��������� � !����"#��$ � ������%&%�'(' ) ����� $ ��*����*%��%+����,��,���

�� �#������ �� ��� ���� -./ ������ 0������ �� -, �, /���1�� ����� ���� /���� !����

�� ��� "��� �##���� ����� ����� "���� ��� �� �� ��� "�� �� �,���� �� �,���23 "�4�� �� ����� ���������� "-./�� �� �������� ��� �� �5�� �� �,���%� �,���6� ��� �,���2� �7��� ��! ��� � !� ���"�������"���������������� ������ "�8/-� ������� �� �������, 8 9#������� ���� ����� � ����� � ���#� ������ ��� ��� ���� �� � � �� ������� � �������������� ���� �� #����������� , :�� ��� ������������� � �� ��� �� #����� � ����� �� ���� � ��� � ���� �� � ���� ��������� �� �� ��� � �� ��� � � !���!��8/-, 8 ���� �� �##���� ����� ����� �� #����� � ������ -./� ����������� �� �5�� ��� �� ������� , !� ������ � ���� �� -./ ����� ��� ��� ������#� ����� �� ��! ��� ��� �� ���������� ��� � ! ��� �8/-, 8 ���� �� � ���� ������� � ������� ������������ ���� ���� #����� ��� ��� � ��� �� �#��� ��� ���� ������� � ����������� ��#����� ,

" ������� & ; <������� #���� ��#�� ��� ����������� ����7� �� �##��� �� ���� #����� ���������� =� ; >?� ���� � � � ���� �� �� �� ������ ��� �������� �� �� ���� ����� ����� � ��� �� �� ��� �� ��9� ����� � ��, 8 ����7� ������1 ���� 9����� ���� ��� ��� ���� � ��� ���� ��� �� �������� ������,-���� ��� ������� "-./�� �� �������� ��� �� �5�� �� � �� �� ���� #����� ��� �� ��#������ �� ���� ��������� ��� ���#� ���� #��� , 8�� �������� ������� ���� � ��� ����������� ����� ������ ��� ����� � �� #����� ,8���������� ��� ���� #��� �������� �� � � ��� ��� ��� � ���� �� � ������������������� �� ��������� ��� ������������ � ��� � ����#���� ��� ����#�������������� , ������������� �� ���� �� ��� �� ��1� ���� ������� ������ �������� �� #����� , @����� ������ ���� ���1� �� ���A����� ������ ��� �� ����� �� ��� ��� ������ �������� ���� ���� ��� �� �������#���� ����# �� #����� ���1��� =6 ; 2?, .��� ��1 ����� B��� ��� ����% �������� ��������� ��1 .�. �� �� ��A��� ��� ����#���� ��� ����#�������������� = ?, 8 � ��� ����7� �� ��� ���� �� � �5 �� ����� ; #��������#�9 ��� ��� ����� ���� ������ �� �������� ���� �� ������� =�� ; �%?, !� ���� � ������� ��� ����� ������ �������� ��� ��� ��� ��� ���� �� #����� #��� � 1� ��� �� ���������� � �������������� ��� �� #����� =�> ; �'?, 8#� �� ���� � �� � ������ ���� � � ����� ���� �� ������ ��������� ������ ���� ; ����� ��� ���� ; �� ���� ; ����� ���������� , 8 �� ��

����� � �#� �� �� ������� ��� �� #����� ������ ���������� �� ������� �������������� �� � ���������� ������ ; #����� ������ ��� ��� , C����� � ��

�@D0!.8�E F -!G�!HD�.!8E ; H��, % "%��(� 2�

I %��( H���� @������ ������ /��� /<� JK���

������ �� 1���� �� �� ����� ��� �������� ���� ������, 8����� ���������������� ��� ��� � �#����5� ��� �#� ����� � ������ ��� �� #����� �� �������, .�� �� � ��#������ �� ���� ���� � #� ���� �� � �� ���������� ��� ����=�2? =� ? � ������ � ���������� ��#������ =%� ; %%?, 8 � ���#���� �� ���������� ����# �� #����� ��� �� � �������� ������� � ���������� �� �7��� ������� � ���#���� =%> ; %(?, 8 #����� ������ �� �7��� ������� �� ��� ����� ����� � �������� �� �� ����� ���� #� � � ����� �� � ����� ������ ���� =%&?�9� �� ��� ���� �� ���� �##� �� �� � �� ���� �� � #����� ������, .����������� �� � #�� �� ��� �� ��� ����� ����� ���� ����� �� �������#� �� �� #����� ������ ������ �� � ���1�� �� � �5 �� ������,@����� � ���� �� �##��� �� ������� �� ����� �� #����� ���������� ��� ��� ���� � �� ��� !�� ��� "�������"���������������� ������ "�8/-� �� ����#����� ���� �������� ������������ ���������� ������ �� ��� �� �� ������ ��� �� ������ � �� � ��� � � �� ��� ���� � �� !�� ��� -�� ��� =%' ;>�?,

�-������ ���& ; -./ "- 6%2'�� �� ������� "/ (%(>�� ��� �� �5�� "� &2'&�� ��� ��! "� %(�%�� � ! "�2&6>�� ��� �8/- "� (�6'� �� � ��� �� ���� ��� ���� �� C%G( ������ � ������, 8 �� ��1� �� "�4����� ���, #�#������� �� ������5�� ���#�� �� ����� ���� ��� B0�G6 ��� BG@, 8 @%G �� ��� � "���������� ���� � , �� ��� ��� ���� ��� �� �� ��� ��� ���������� #������� ��� ���� ���������� �� ����� ��� >�>,�(� �,�� B ������� �� ��#, �� � ��� #� ��, /� ����9 ��� ��� � ��������������� ���� ��� �,�� ���% �� ��� ���� �� #�������� �#��� ��� ��� ������� ��� ����� � ��������� ��� �,����� ����� ������ ���� ����� ���� ������ ��� �� � #�#�, 8 ��� , �� ����� ����� ��� >� ��� ���� ������,

����������& ; 8 � �� ��������� �

�� ""���4"���� L ��� �,���% L "�� " ��4����

�� � � ������� ��� �� ����� �� ���� ��� �,���% L "� � "��4���� � �������� ��������� �� �� ����� ����������� � ��� �� ���� �� �#��� ������ ��� ���,������ #�1����� � #, 8 #������ ���� �� � ���� �� ��������� ���� 7������ ���� ����,

���������������������������������������������

��

��(

� �%

��(

� �%�

� ���

�����������������������������������������������

� �

��(

� �%

��(

� �%�

� ���

������������������������������������������������

��� �

� �%

� ����#��

� �%�

� ��

8 �#�� � ����� �� #������� ��������� � "���4�� ��� �� ���� �� ���#��� ���� � ��� ���������� 7������$

��� �4� " �� "���4�� L ""�� ���4"���� " ����� 7�������

8 � � ����� �� �� ����� � � � �#���� �� ��3 �� #����� , /� ���������� �� �� � ���#��� ����7������$

��� "���4�� L��

�@D0!.8�E F -!G�!HD�.!8E ; H��, % "%��(�2��

!� ��� �� �� � � �� � ����� �� ���, 8 �� �� ��� � � ��������� ���� �������$

�� "� L !�4"�� L !�� L ��

8 ! ��� !� �� ���� ��� � ��� � ��� �� �� �� �� ��� �� ������� ��� ������ � #,� ��� � ��� "������ �� �� ����� ��������� ���� �4��, 8 ���� �� � ���� �� ������� �� � ������ ��� �� �� ��� � ���� ,

!����& ; 8 �� ��� ��� � �������� �� �� � 7��� ����� ����� � ��������� ����������� ���� � $

�� ��� �� �

8 �� � �������� �� ��� �� �� � ��� �� � ��# ��� ���� � ��� �� � ����� ��

������� �� �

��1�� � ��� � �������� ���� ����� ��� �� ��# ��� ���� , 8��

� ���� ��� ; �������� �� ��� ; ��� ���������� , 8 ��� � ����� �� "��� ���� 7������$

"���� ��4������

8 � =� �����? �� �� ��� ���������� ���� =� �����?%� � ��# ��� ���� ��� �� ������������ , 8 #������ ���� �� #����� �� �7��� ��� ��� �7��� � �� ������ �� #���� � ��� $, #���� % ; & ������� � ��� ��� ��� ���� ��� ��

�� ��� � ��#����� �� �7��� ��� � �� � ����� �� #��������� �������� ��� #��� '�#� �� ��� ��� ��� ���� ��� ��

�� ��� � �� �7��� #����� � �� ,

����� & ; 8 �� ��� ��� �� �� ��� �� #����� �� ��� � �� �� ����� �� ����� ��� �� �7��� #����� ������� "#���� � ��� $�, 8 ���� �� �� ��� �� �#����� ��� ��� � ������� � �� �5���-./� �� �������, 8� � � ���� �� � �� ��� �� -./ ���� �,���� �� �,���23, 8 ���� ������� ��� -./ ��1� � ��� ��� ��� ���� =>% ; >6? �� @%G �� ����#��� ���������� ��� ���1� @%G������, 8 ���� ���� �� �� ��� #����� ��� ��1� ������������ ���� ���� #����� ��� @%G ������ �� ����#�� ��� �� ��1� ��� ����� ��� ������������ �� -./, !� � ��� ��1� -./;-./ ���������� �� ��� �, !������ � ��������� �� � ��1 ����� ����� ���� �� ##��� ���� �� -./ ��������� � ��������� �� -./ �� ����# ������ @�������� ��� @%G � ���#��� �� �������#� ���� @%G ������ , 8 #������ ����� �� � #� �� ���1 �������� �� � ������������ ���� �� #����� ��� � #�� �� �����, 8 #��� � 1���� �� ������ ����������� ��� ����#��� �� �������������� ��� �� #����� ,8� � �� ����� ��� ���� ���� � ����������� ��� ���� #��� ������ �� #����� ���� �� �##�������� �� ���� ������ ��� ��� ��������� #��� ,

8 �� ��� �� ��� � �� #����� �� ����� ��� �� � ! ��� �� ��!� ������ � �� �8/- "#��� ��, 8 ���� �� �� ��� �� ������ �� ����� ��� ���� �5�� ��� � �� ������� � ���������� ��� �� �5�� ����# � ������������������ ���� ��� @%G, @����� ������ ��� �� ��� ���� �� �� �5����� -./ #����� ��� ��� ����� � ��� ��#���� ����� ����� ���� � � ���

�@D0!.8�E F -!G�!HD�.!8E ; H��, % "%��(� 2��

�@D0!.8�E F -!G�!HD�.!8E ; H��, % "%��(�2�%

8��� �, ���� !� "�� ( � ���� !� "�� ( ��� )**����! ��� ��+�� "��� �, -��!� �� � ).+��+� ��! ���!��� � !������!� �!� � /��� ��!� 0 ��� �,!�� � � ��

=��3? �� ���( =� ���>? �� ���( =�� � ���� ��? �� =��> �����?

-./

=��!? �,���2��,���2 �, (2�� &,%%&2 �,& 6�'� &,&6'& &(>>�,6>� >,6&�,���& �, (2�� &,%%&& �,&2 (�� &,&(%' &(>>&,�&� >,2 �,���6 �, (' � &,%%&6 �,&2&&%� &,&((2 &(>> , %� 6,6(�,���� �, (' � &,%%&( �,&2> >� &,&(2 &(>&',>>� &,%>

=��!? �,���6��,���2 �, (''� &,%%&% �,&226&� &,&(>& &(>%�,2 � >,6&�,���& �, (' � &,%%&6 �,&2 >2� &,&(%' &(>>%,�&� >,2 �,���6 �, ( �� &,%%2> �,& ��%� &,&(>� &(>2(,%2� 6,6(�,���� �, (2>� &,%%'% �,&2 >� &,&(%( &(> %,%%� &,%>

=��!? �,���%��,���2 �, (2(� &,%%'( �,&2(>2� &,&(' &(>66,%6� >,6&�,���& �, (22� &,%%2� �,& '�'� &,&6(� &(>&>,>'� >,2 �,���6 �, ( (� &,%% � �,'��� � &,&6%6 &(6��,%%� 6,6(�,���� �, ( �� &,%%2> �,& 22 � &,&6>6 &(6>%,%%� &,%>

D�� �������

=��!? �,���2��,���2 �, ( �� &,%%2% �,&2�6�� &,&&% 6�%(>,'&� >,6&�,���& �, (2 � &,%%2� �,&2(>6� &,&(2> 6�%&�,'%� >,2 �,���6 �, (2 � &,%%2� �,&2(6�� &,&(2% 6�%'(,& � 6,6(�,���� �, (2&� &,%%'& �,&2 >�� &,&(>( 6�>�&,�'� &,%>

=��!? �,���6��,���2 �, (2(� &,%%'( �,&2% '� &,&&�' 6�%6�,�(� >,6&�,���& �, (26� &,%%'% �,&2%'�� &,&&�2 6�%66,'>� >,2 �,���6 �, ('>� &,%%(( �,&2%�'� &,&&�( 6�%�%,62� 6,6(�,���� �, (2 � &,%%2� �,&2�6(� &,&&%2 6�>%%,�&� &,%>

=��!? �,���%��,���2 �, ( %� &,%%2( �,&2%'�� &,&&�& 6�%&�,%%� >,6&�,���& �, ( >� &,%%22 �,&266'� &,&( ' 6�%'2,>2� >,2 �,���6 �, ( � &,%% ' �,&2'>�� &,&('� 6�>� ,(2� 6,6(�,���� �, ( %� &,%%2( �,&22'&� &,&(6' 6�>>&,(>� &,%>

�� �5��

=��!? �,���2��,���2 �, (2>� &,%%'� �,'��6�� &,&6�� % �2&,%%� >,6&�,���& �, ( �� &,%%2% �,&2(2(� &,&('2 % %%�,�'� >,2 �,���6 �, ( �� &,%%2% �,&2(2'� &,&('2 % %>(,��� 6,6(�,���� �, ( �� &,%%2> �,&22�'� &,&((6 % %2&,&�� &,%>

=��!? �,���6��,���2 �, (2 � &,%%2� �,&2>26� &,&&�� % %�&,&�� >,6&�,���& �, (2 � &,%%2� �,&2>'(� &,&&�� % %�','6� >,2 �,���6 �, &>>� &,%>(� �,&2%2>� &,&&(& % 6�&,('� 6,6(�,���� �, ( �� &,%%2> �,&2((�� &,&(2> % %2&,''� &,%>

�@D0!.8�E F -!G�!HD�.!8E ; H��, % "%��(� 2�>

#��� � "����,�

=��3? �� ���( =� ���>? �� ���( =�� � ���� ��? �� =��> �����?

=��!? �,���%��,���2 �, ( &� &,%% � �,&2�&&� &,&&66 % %%2,�%� >,6&�,���& �, ( (� &,%% � �,&2� '� &,&&> % %>2, >� >,2 �,���6 �, ( 6� &,%%2 �,&2�% � &,&&>( % %(6,(� 6,6(�,���� �, ( �� &,%%2� �,& '>&� &,&66 % %' ,&�� &,%>

-./

=� !? �,���2��,���2 �, ( &� &,%% % �,&2( '� &,&(2> &(>'(,�>� >,6&�,���& �, ( &� &,%% % �,&2( � &,&(2> &(>2 , '� >,2 �,���6 �, ( %� &,%%2( �,&2'(6� &,&(&� &(> �,'� 6,6(�,���� �, (2 � &,%%2� �,&2>%&� &,&&�' &(6%>,%(� &,%>

=� !? �,���6��,���2 �, (2 � &,%%2� �,&2�&>� &,&&%( &(>(>,'>� >,6&�,���& �, (2 � &,%%2� �,&2�('� &,&&%& &(>&6,'%� >,2 �,���6 �, ( %� &,%%2& �,&22�>� &,&((& &(> %,2'� 6,6(�,���� �, (2&� &,%%'& �,&2%�%� &,&&� &(6��,>�� &,%>

=� !? �,���%��,���2 �, ( �� &,%%2� �,&2�6>� &,&&6� &(>(&,(&� >,6&�,���& �, ( �� &,%%2� �,&2�6�� &,&&6� &(>&',2�� >,2 �,���6 �, ( �� &,%%2% �,&2'6%� &,&(&� &(>26,��� 6,6(�,���� �, ( %� &,%%2( �,&2%�&� &,&&%6 &(66%,�&� &,%>

D�� �������

=� !? �,���2��,���2 �, (2'� &,%%'' �,&2(�6� &,&(2> 6�%6(,�(� >,6&�,���& �, (2'� &,%%'' �,&2>��� &,&&�& 6�%(6,&� >,2 �,���6 �, (2 � &,%%2� �,'�>(&� &,&>2% 6�%'6,''� 6,6(�,���� �, (2 � &,%%2� �,&262�� &,&(2 6�>� ,(2� &,%>

=� !? �,���6��,���2 �, ( 6� &,%%2 �,& �(�� &,&(� 6�%&2,62� >,6&�,���& �, (2&� &,%%'& �,&22��� &,&(6 6�%(%,>�� >,2 �,���6 �, (2&� &,%%'& �,&2' � &,&((� 6�%&6,('� 6,6(�,���� �, (2 � &,%%2� �,&2&>2� &,&('� 6�>%%,&>� &,%>

=� !? �,���%��,���2 �, (2 � &,%%2� �,& �%&� &,&(%' 6�%(%,�6� >,6&�,���& �, ( �� &,%%2� �,& �� � &,&(% 6�%&6, (� >,2 �,���6 �, (2 � &,%%2� �,& %'�� &,&(�� 6�%'',�(� 6,6(�,���� �, ( '� &,%% 6 �,& �� � &,&(%& 6�>'�,�%� &,%>

�� �5��

=� !? �,���2��,���2 �, (2&� &,%%'& �,&2�&>� &,&&%> % � 2,% � >,6&�,���& �, (22� &,%%' �,&22&2� &,&(66 % %�6,26� >,2 �,���6 �, (22� &,%%' �,&22'%� &,&(66 % %%',&6� 6,6(�,���� �, ( 6� &,%%2 �,&2% �� &,&&�& % >�&,&&� &,%>

�@D0!.8�E F -!G�!HD�.!8E ; H��, % "%��(�2�6

#��� � "����,�

=��3? �� ���( =� ���>? �� ���( =�� � ���� ��? �� =��> �����?

=� !? �,���6��,���2 �, (2(� &,%%'6 �,&2'�(� &,&((2 % � >,&�� >,6&�,���& �, (26� &,%%'> �,&2'%6� &,&((' % � ,2>� >,2 �,���6 �, (22� &,%%' �,& '%'� &,&66 % %%',( � 6,6(�,���� �, &��� &,%>�( �,&2626� &,&&�� % 6�(,26�=� !? �,���%��,���2 �, ( �� &,%%2� �,&22& � &,&(6& % %�2,62� >,6&�,���& �, ( �� &,%%26 �,&2 %6� &,&(6� % %%6,6(� >,2 �,���6 �, ( '� &,%% 6 �,& ��'� &,&(%( % %&&,(>� 6,6(�,���� �, &�'� &,%>� �,&2'>�� &,&('2 % >2�,(2� &,%>

-./

=�8/-? �,���2��,���2 �, (' � &,%%&6 �,& ��6� &,&(�2 &(>%(,�6� >,6&�,���& �, (2�� &,%%&& �,& %&>� &,&6 % &(>>&,�2� >,2 �,���6 �, (2�� &,%%&& �,& %& � &,&6 � &(>6(,��� 6,6(�,���� �, (2�� &,%%&' �,&2 %&� &,&(>� &(>'(,&%� &,%>

=�8/-? �,���6��,���2 �, (2�� &,%%&& �,&2(> � &,&('> &(>%2,6 � >,6&�,���& �, (2%� &,%%&2 �,&' 2�� &,&&6� &(>6�,%(� >,2 �,���6 �, (2>� &,%%'� �,&'2>&� &,&&(2 &(>(&,&'� 6,6(�,���� �, (2%� &,%%& �,&2'&�� &,&((� &(>26,&� &,%>

=�8/-? �,���%��,���2 �, (''� &,%%&% �,& �%%� &,&(�( &(>%�, '� >,6&�,���& �, ('>� &,%%(( �,&2 ('� &,&(� &(>�%,&�� >,2 �,���6 �, ('>� &,%%(( �,&2 &>� &,&(�2 &(>�',&�� 6,6(�,����� �, (6�� &,%%�6 �,& >(�� &,&666 &(�(6,%>� &,%%

D�� �������

=�8/-? �,���2��,���2 �, (2(� &,%%'> �,& 66(� &,&6'& 6(%(2,'&� >,6&�,���& �, (2�� &,%%&& �,& 6 &� &,&6&& 6(%(%,6&� >,2 �,���6 �, (2�� &,%%&& �,& (�6� &,&6&( 6(%( ,>%� 6,6(�,���� �, ('6� &,%%(& �,& �>�� &,&(�% 6(%(%,6(� &,%>

=�8/-? �,���6��,���2 �, (& � &,%%6 �,& &� � &,&66> 6(%�%,&�� >,6&�,���& �, (&2� &,%%62 �,& &�(� &,&66% 6(%��,(>� >,2 �,���6 �, (6%� &,%%�( �,& ' (� &,&> ( 6(��&,� � 6,66�,���� �, (' � &,%%&6 �,'�>�6� &,&>'& 6(%2�, 2� &,%>

=�8/-? �,���%��,���2 �, (6 � &,%%�& �,& �&>� &,&62> 6(�(�� >,6&�,���& �, (' � &,%%&( �,& &2(� &,&66( 6(%62,'2� >,2 �,���6 �, (' � &,%%&( �,& '�>� &,&66� 6(%(&,&(� 6,6(�,���� �, (' � &,%%&6 �,&2&6%� &,&(&� 6(%2�, 2� &,%>

��� � ����� ������� �� � ���� �� �� �5��� -./� ��� �� ������� � ����������� � ��1� ���������� ��� � �� �� �������, C��# � �� �5��� �� �� �� ���# ����� �������� ��� ������ ������������ ���� ��� �� ���, .� �������� ����� �� �������� ��� � #�� �� ��� ��� � � �,

8�� ���� ��������� ���� � �� ��� ��� #����� ������������ ��1� �� ��3 �� � ���� � -./� �� �������� �� �5�� "#��� ��, D9�#��������� � ������� �� -./ �#��� ��� �� ������ � ���#�������� � #��1� ��� ��� , 8#��1��� ������ ���� � � ������ ��� � ����� ��� ����� �� ����� ���� #� ���� � #����� ������, 8 �� ��� �� #����� �� ��� � �� � �� ������ � �����

�@D0!.8�E F -!G�!HD�.!8E ; H��, % "%��(� 2�(

#��� � "����,�

=��3? �� ���( =� ���>? �� ���( =�� � ���� ��? �� =��> �����?

�� �5��=�8/-? �,���2��,���2 �, (''� &,%%&% �,&2>('� &,&( % % �&2,('� >,6&�,���& �, (2�� &,%%&' �,&' &%� &,&&6� % �2(,(&� >,2 �,���6 �, (2�� &,%%&' �,&' (%� &,&&6% % � (,'6� 6,6(�,���� �, (2'� &,%%'2 �,&2�(%� &,&&%( % %&>,�� &,%>

=�8/-? �,���6��,���2 �, (26� &,%%'% �,&'2�%� &,&&&> % �2 ,�6� >,6&�,���& �, (26� &,%%'> �,&'''&� &,&&&' % � , 2� >,2 �,���6 �, (2&� &,%%'( �,&'''6� &,&&&2 % %�&,2%� 6,6(�,���� �, (6 � &,%%�' �,&2%%�� &,&(' % �>(,>2� &,%%

=�8/-? �,���%��,���2 �, (6'� &,%%�6 �,&2(2(� &,&(>& % �'%,�'� >,6&�,���& �, (2�� &,%%&2 �,& & � &,&66( % �22,6 � >,2 �,���6 �, (2�� &,%%&2 �,& & &� &,&66( % � 2,�%� 6,6(�,���� �, (62� &,%%�& �,'�62�� &,&>% % �>%,>'� &,%%

8��� %, #�� ���� !� "�� ( � ���� !� "�� ( ��� )**����! ��� ��+�� "��� �, ).+��+� -��!� � ���!��� �!%��1�& 2 � !� �!������ /�����

=��3? � � ���( =� ���>? � � ���( =�� � ���� ��? �� =��> �����?

-./�,���� �, &6�� &,%%26 �,'2 (� &,&6>( &6 �',> � &,%%�,���6 �, &%%� &,%% � �,' %� &,&6%( &(�'�,%�� 6,6>�,���2 �, &� � &,%%'& �,2�2(� &,&('& &(��&,%'� >,6(

D�� ��������,���� �, &%(� &,%%2& �,'&�6� &,&(62 > 2 �,�2� &,%%�,���6 �, &%>� &,%% 2 �,''& � &,&('% > '�,�&� 6,6>�,���2 �, &%>� &,%%2& �,' �'� &,&&�> 6����,(6� >,6(

�� �5���,���� �, &>6� &,%%2% �,2�> � &,&662 > 2(�, '� &,%%�,���6 �, &%�� &,%% � �,2�6�� &,&&>' > '',&(� 6,6>�,���2 �, &�'� &,%% % �,2�&(� &,&&6( 6��(6,��� >,6(

��� ��� �� � �7��� #����� � ��� ��� � �� �� � ������� �� ��� ��#����� ;@%G ���������� , !� � ����� ��� ��� ���� � ������� �� #����� ���@%G ��� ����� �� ������� #� �� �� ������ , 8 ���� �� � ���� �� #����� ��� ��! ����� � �� �5��� �� ��������-./ "#��� ��, !� � ����� �� ����������� ��� ����� �� ��! ������������� ����� � �� ���������� ��� � #����� ����� �������, @����� � ����� �� ���������� � ������ ��� �� �5��� ���� ���� �� �� ��� #����� ��� �� ������� �� ������ ���������� ��� ��� "#��� ��, @����� ��� ����� �� � ������������ �� ���� �� �������� ���� ������ � 9�����,

:�� ����� ��� ������������ �� ��� � � �� ��� �� #����� ���� � �� �����,8� �#��� ��� � ��� ��� ������������ � �� ������5 � #����� ��������������� ��� �� ��������� � ������� �� #����� ������������ � ��� ��! ���� �������� � ������� �� #����� ������������, !� �##�� ��� ������ @%G; ��� ;#����� ���������� 9� �� ��� � ��� ���� � ���1��� ���� � @%G �������������� �� � �������� �� #������ ���� ����#��� ��� ���������� ��� ������@%G, .�� � �������� �� @%G;��! ; #����� #��# �� � ������ ���������������� � � ������ �� ��� �� ��� ��� ���������� ��� ������ ��� ����� �� ��� �� ��������������� �������� #������ ��� ������� ��� ������ @%G, !� �##�� ��� ��������������� ��� ��� � �� � � ��� ����� ��� �� ����#� ��� ������ �� ���������� �� #����� ������ ,

M�� -./� �� ����� �� ��� ������������ � �� ��1� � ���������������� ���� #����� ��� @%G� ��� � ��������� �� � ���� ��� ��� ���� ������� �������� �� @%G �� ����� ��� ��� ;@%G ���������� , 8� ����� ��1� #����� ;@%G ������������ ���� ) #��# � ��� ��� ��� ���� �� #����� ���� �� ��1��, !� #��� ��� ��� ;@%G� ��� ;-./� ��� ��� ;@%G;-./���������� ����� ��� ����#���� ���������� ������ � ���1 @%G ��� ����# � ����#���� ���������� , !� ����� � � ��� ��� ������ � ����������

�@D0!.8�E F -!G�!HD�.!8E ; H��, % "%��(�2�&

8��� >, #�� 3������ �� 4���!��!� �, � � ).+��+� -��!� � ���!��� � !�� -������� �, ��!�, �������� �� ��� ��

�� � ���>� ��# ��� ���� �� �� ��> �% ���> ������ ��� �N� �� ��& �> ���> ����%,

=.���? =�? -./ D�� ������� �� �5��

�� �� �N� �� �� �N� �� �� �N�

��!�,���2 �, (22 � �,�6% � &�,�%>'> �, ('' �,�%& & � >�,2>�%� �, ((% �,&(%&� � %&(,>%& �,���6 �, (�% �,�'&& � 6(&,(>> �, '�( � �, (&6( & %, &(' �, %(& (,>%(6' � � (%,%(%%�,���% �, (>& �,2 &(& � >6',6%>( �, (%6 �,�&>2 � >2>,> %> �, (&6 �,>(&2( � ���, 2>'2

� !�,���2 �, ('> �,� �62 � >%,%2�'� �, (22 �,�>%6� � %�,>'�&6 �, &%� � �,>&&�% 2,('(2%�,���6 �, (6> �,&'6(2 � %>(,(%2� �, &&� � �,�%> 6 6%�, 6�>( �, '(% � %,���>& &�6,�%�62�,���% �, &�6 � �,�&(6& 6',&>%66 �, &62 � �,'%(�� %%>,&> %� �, &6' � �,6 2&> ,>%2>�

�8/-�,���2 �, ('6 �,���( � 6&,2' ( �, (&6 �,�2 �> �6,�'�(� �, &�2 � �,%( �( (�,(6(>'�,���6 �, (&% �,>%'>6 � �%',>%�26 �, 2&� � 6,>&(&' �(6(,�('%6 �, >�� >,6'2&& � �� >,2 �&&�,���% �, >'� %,66�'2 � '�',� ((& �, > % >,�2��> � �%�2, (6�> �, �>( &,6%>(% � %%22,'&(��

����������� ������� � ����#���� ���������� �� #�����, 8 ������ �� �������� ������ ��� �� ������� ��� �� �5�� "#��� ��,

M�� � !� �� ������ ��� ����� ��� ��� ������������� � ���� �� �� ��� ��#����� �� ���� ��� � � �� �� ��� �� � �� �� � ��! ;-./ � ��"#��� ��, !� ���� ���� ��� ��� #����� ������������� � � �� ����� ������� ���#���� ��� ������������� ������� � ����� ��� � �� � � #�� ��� ���� ���� �� ���,

M�� � �8/-;-./;@%G � �� ��� �,���2 ��� �,���6�� � �� ��� ���� ���� ��� #����� ������������� ���� ��� �,���%�� ��� ���� � �� ���, M���� �������� ��� �,���2� �8/-� � ���� �� �� ��� ����� ��� #����������������� � ���� ��� �,���6 ��� �,���%�� � ���� � ��� "#��� ��, 8� �#��� ���� �� ��� ������������� ��� ���������� �� ������������ ���� �� ��1���#���, M�� �� �5�� �� �,���2�� � �� ��� ���� ��� ����� �� �,���6 ����,���%�, �8/- � �� ��� ����#���� ; ����#���� ��� ����#���� ; �����#���� ���������� , �8/- � ��� ��� � ��� ���� �� ��� , /##������� � ���������������� �� �8/- ��� � ��9� ���#� ����� �� #����� �##�� �� ��1� �

�@D0!.8�E F -!G�!HD�.!8E ; H��, % "%��(� 2�'

8��� 6, #�� 3������ �� 4���!��!� �, H� �, ).+��+� -��!� � ��+! ��� � !�� -������� �, ��!�

C����� .��� =.���? =�? ��� =��> �����? �� =��> � ��> ����%? �N� =��& �% ��> ����>?

-./ ��! �,���2 &(6� � 6,(>� ��6

�,���6 &(6 & � ,(�� ��6

�,���% &((6 � �,�>� ��(

D�� ������� ��! �,���2 6�>'� � &,& ' �,���6 6��6% 6,��� ��2 � �,�� ���&

�,���% 6�66� � '2��

�� �5�� ��! �,���2 % 6�2 � �%��%��,���6 %2� > � 2,��� ��2 %,��� ��&

�,���% % >6( � &(6>&

-./ � ! �,���2 &(6' � ('2'>�,���6 &(62' � '>&>��,���% &((6& � �� �(

D�� ������� � ! �,���2 6�6�> � (2'2�,���6 6�'&2 %,��� ��2 � &(>6�(�,���% %6%>> � ,��� �� >,��� ��'

�� �5�� � ! �,���2 % 6>( � �>&6>%�,���6 >�6(� 6,��� ��2 � �,��� ��&

�,���% % ( ( � %%6���

-./ �8/- �,���2 &(6>' � &>�2��,���6 &(6(( � '�& &�,���% &6�'> � 6,��� ��2 �,��� ��&

D�� ������� �8/- �,���2 6(%>' � &,��� ��& %%>(��,���6 6&((6 ',��� ��2 � %,��� ��&

�,���% 662%% � >,��� ��2 ' >�>&

�� �5�� �8/- �,���2 % >'( � ��2�6'�,���6 %'' 2 � &,��� ��2 %,��� ��&

�,���% %'%&( � ,��� ��2 >,��� ��&

������������ ���� ���� @%G ��� #����� , �� ��� ���� ��� ��9� �8/-������������ ��� ������� #����� ������������ ����� ������, 8�� ��� ���#����� ������������ �� ��� ������� � �8/-;@%G ���������� , @����� ��� ���� �� ���� �� ��� ������� ����� ��� ������� ��� � ����#���� ; �����#���� ���������� ���� �8/- ��� #����� � � � � ���� �� � ������ ������� ������� #����� ������������ , C�������� �8/- ������� #����� ; #����� ����������� ����� �, !� � ��� � ����#���� ��1�� ���� �� �8/- ����#� �����#���� ���1��� �� � #������ ��� #��� � ������� ��� �� ��������� ������� �� �������� ��������� �7��� ������� , :�� ����� �� �8/- �������������� � �� ��� ���� ������ � #��������� ������� �#� ��� � ���� ����� �� ���� ��1 #��� ��� �,���6� ���� �� � ��� � ��#, 8� ������� ���� ����� �� ���� ���8/- ������������� ����� ��������� � ��1�� ��� � ��� �� ��������������� ���� � �#���� �� � ���� ��1�� ���� ��� �� 0 ����# ��� 7�������� ������, !� �������� �� �� � � ����� �5� ����� -�� ��� �����#���� ���������� , 8 ������ �� � ���������� ���� ���� ��� � �8/-����� ����� � ���� ���� �� � ������������ ���� ��� � #�� �� �� ��� ���� #����� ������������, !� ����� � ������� ���� � ������������ ��#����� ��� � ����#���� ; ����#���� ���������� �� �8/-, !� �##�� ��� �8/-

�@D0!.8�E F -!G�!HD�.!8E ; H��, % "%��(�2�2

8��� (, #�� 3������ �� 4���!��!� �, 5��� �67� �, ).+��+� -��!� � ���!��� � !�� -������� �, ��!�

=.���? =�? -./ D�� ������� �� �5��

� =��> � �����? � =��> � �����?% � =��> � �����? � =��> � �����?% � =��> � �����? � =��> � �����?%

��!�,���2 � %% ,2%�(> 2 66�,22('� � %�6,%�%�� '�&((,>6%2& � %%>,>� �& 2( 2(,>�����,���6 � > �,��6�% %%22�'>, 6%2& � %%&, >��2 2> (�,'6%2& � %�&,2'>&> '2%(6, �6% �,���% � �' ,(�&'2 &��>(,'6%2& � %�(,'��%> '� ��,'%2(' � �2%,&6&(� (&%�&,�%2('

� !�,���2 � %%>,>62�2 2>(�(,(('�6 � %��,�(&(2 ''6%2,�('�6 � %%�, &�&> 2�2� ,('�6>�,���6 � %%�,(���' 2� 6%,%'�6> � %%�,�6�(2 2>���,6���� � %�&,(>2 & 2� '6, ('�6�,���% � %%�,>�2�� ' '>�,'2('� � %�>,2%%>� '6�2�,26%2& � %�6,>'26& ' (% ,&6%2&

�8/-�,���2 � %��,6 ' � '2 6�,26%2& � %��,>%6&& 2��>%,6('�6 � %%',>&&� 2>(% ,>'�6>�,���6 � %�>,%'2'> '(� >,>2('� � �'',2%'�� &�&�%,26%2& � %%�,�%(&� '2�2�,%2('��,���% � %��,'2(�> '�&�&,>2('� � %�2,��2� 26� �,2'�6> � �&(,(�%(� (�%��,&%2('

8��� &, #�� 3������ �� 4���!��!� �, �( ��( ��� 5��� �67���!� �, ).+��+� -��!� � ���!��� �! %�%1�& 2 8 !!�� !�0� �� ��� O�� ;��� /.+�! ���( 3��*��! ���

C����� �� �� ��� �� � �

=� ���>? =��> �% ���> �����? =��> �����? =��> � ��> ����%? =��> � �����? =��> � �����?%

-./ �, &6� � �,%'&6 &6&&& %&���� � >%,(2� %%&�&,�D�� ������� �, &>� � �,�%%� > '6& �(�('� � &,��( (� 2',��� �5�� �, &'� � �,>>2> %2(& %(��6' 2,6(� � �& 2,�

� � ������� ��� �� � ������� �� � ������������ �� #�����, 8 ���� ���8/- ��� ��� ��� � � � � #��� ��� ����#���� ��� ����#���� ����������� ,

!� ������ � �� ���� ���� ��� � ����� �� ������������ �� #����� ����� ��� ������������ =>(? =>&?, !� ���� � #� ��� ���� ������ ��� ������������� � ������ ������ ������������� ���� �� ������� ��� ����#���� ���� �� #����� �� ������5� �� � � �������� �� ���������� �� ���� �� #����� ,@����� ��� ����� �� ��� ������������ ��� �� ������������ �� #����� � ����� �� �� �� ���� �� ���� "#��� ��� ���������� ��� ���� ������������ �� ��� �� ������� #����� �������� ���� ��� ��� � ��� �� , 8� � ������ �� ��� � �7��� #����� � �� �� ��! ��� � !, M�� �8/-� ��� ����� �� ������������ �� #����� ��� �� ��� ������������� � ���� � �� � �� ��! ���� !, @����� ��� ����� �� ��� ������������ ��� �� #����� ������������� ����9� ���� � �� ���, M�� � ��9� ��� ���#� ������ � ���� �� ����� ��� #��������#� ����� � ����, C����� ; #����� ���������� � �� � � #�� ��� ��� ����� �� � ���� � �� ����� ����� ##��� ���� ���� � �� �������� ��� ����� � ���� �� � �� ���� �� � #����� ������, ��1�� � ��� ���#� ����� ������ �� ���� � �� ���� �� � #����� ��� ������ ���� ���� �� ������ ���������������� �� ��� � #����� ; ��� ���������� �� ������, !� �##�� ��� ��� ������� ��� � ����� ����� ���� �� � ##��� ���� �� #����� ������ � ������ ����� ���� �,���% �� �,���2� �� ��! ���� � �� ����, !���� �������������� �� ��� ������ � ����� ����� ���� �#������ ���� ��� ���#�����, G#��������� ��� ��� �� ����� �� � ##��� ���� ��� ������� ��� @%G��� ����� ��� � ���� �� � ������ �����, 8 ����� ���� �� �� ��-./ ������� ��� ��� ; #����� ���������� �� ������ �� -./ ��� �� ��� ,��� �������� � �� ���� �� #����� �� �8/- ������� �� ����� �� � ���� ������ ������� ��� ��! ��� � ! � �� � ��� �� ������ ���� ��� � ���#� ����� ��#����� ��� � ��9� ������������ �� ��� ��� � �� ����� � ����, 8� ����� �� ����� �� � ����� ��������� �� ������� �� � ����� �5� -�� ��� ���� ��� ��#���� � ������5����� �� ����� , H��� �� �� �� ��������� ����� ������� ��� � ������������ �� #����� ��� ��� � ������� �� � ��7������� �� �������������� ������� �� #����� �� �8/- �������,

H� �� ��� �� #����� �� ����� �� � ���� �� �� �5���-./� �� �������"#��� ��, !� ���� ���� ��� -./ ��� �� ������� ������ ��1� � @%G ����������� �� �5�� ������ �� �� � ���� ���, 8 � ���� ��� �� ������� �� ������ ��� ��� �� @%G ��� ��� ��� -./ ��� �� �5��, 8� #��� ���� ���������������� -./ ��� �� �5�� ������ #����� ;@%G ���������� ������ ������ �� �������, !� ����� ����� ����� ��#�� �� @%G ����� ��������� ���� ���� ����� � @%G ���� �� �##����� ���������� ���� �� � ��A���� ���� �� @%G, 8� �������� � � #�� ��� ��� � ���� �� �� �� ���, C����� ���� ����� �������� ������� �� ����� �5 �� #������ � ��� ����� ���� �� �#������ �� #����� =>'? =>2?, M�� -./� ����� �� �� �� ��� ����� ��� � #����� ; #��������������� ���� � ������� ���� ��� �������� � ����� ���� �� ��� ��������� , ���������� � ���� �� #����� �� ��� ������� �� ���� ��� �� �� @%G"#���� � ��� $�, !� ��� � ������ ��� ��� ����# � ������ ��� ; #����� ������������� ����� � ������� #� �� �� � ������� � ������ �� � ������ ��������

�@D0!.8�E F -!G�!HD�.!8E ; H��, % "%��(� 2�

�� � �5 � � ����� �� � ���� � ���� "#��� &�, -�� ��������� �� �� �� ������� ��� -./ �� ���� ��� �,���% ��� �,���6� ��!, 8� #��� ��� ��� ; #��������������� �� ���1�� �� ��� ��� ���� � ��� ����� ���� , C�������� ��������� ������� �������� ���� ����� � � ����� �� �� 1��� �� ������,

�������� �� �� ������� �� ��� �� -./ � ��� � �� �� ��� ���� �� ���� ���� ��� �� �������, 8 ���� �� �,���2 ��� �,���%� ��! 1# ������ ��� ��� ����� �� ������������ �� �� �������� ��� ��� �,���6� � ���� ����� , 8� #��� ��� �� �,���6�� ��� ����� ���� �� ��� � � ��, @����� ��� ���9� ������������ �� #������ �� �� ��� ���� ���� ���� �,���% �� �,���6� ��!���� ����� ����� ��� �,���2�, 8� ���� ������� ���� �,���� �� �,���&3 ��������� 9�#� �� �,���23, C�������� �,���6� ��� ����� ��� ���� ���� ����� ������, 8 �,���2 ��� �,���%� ������������ �� ��! � �� � ������5 � #����� �������, /� �,���2 ��� �,���%�� ��! ; #����� ���������� �##�� �� ������� ��� ��� ����� ��� �,���6� �� ��� ��� �� �� ��1� ��� ����� ���� �� #����������� ,

�������� �� �� ������� ��� -./� � ���� �� �� �� ��� ��� �,����3 �� �5�� �������� �� ��� ������������ ���� � ���� ���� �,���6 �� �,���23� � ���� � ��� � ��� ��� -./ ��� �� ������� "#��� ��, 8 ���� �� �� �� ��� �������� �� ��� ������������ #��� ��� ��� ����� ���� ���� ��� ; #��������������� => ? =6�?, 8 ���� � ��� ���� ��� ����� ������� ��� �� � ��������� ����, @����� � �� �� ��� �� �� �5�� ��� �,���2 ��� �,���%� ��!���� ��� ����� ����������� ��� #����� ������������, 8� ���� ���� ������ ������������ �� ��� ����# ����� ��� ����� ���� �� �������� � ��� ;#����� ���������� ������ � ���� ���� ��� ���� ������������� �� � � �� �����, :��� ����� �� ������������ �� � !� �� �� ��� ���� ����� ��� -./� ����� ��� ���� ����� � �� ������ �� � ! � ��#�� ��� ��� �� ��!, 8 ���� �� ���� ��� ��������� ��� �� �5�� �� �##� ��� ��� ����� ���� ��� ���� ��� ������������, ��!��� �� ����� ���� �� �� �� ��� ��� � #����� � ���#��� �� �� #������ ��� !, -��� � ! #����� ����� ���� ��� ��� ������������, 8� #����� ���������� �� � �5 �� � ������ �#�� �� � ������������ �� #�����, M�� � ��! � ��� � ���� ; �5� ������ � ��9���� �������� �� ���� ������������ �� #���������� ��� � !� � ����� ������ � �� ������� �� ��� ������������ �� #�����, !���� � �������� ��� ��� � ���� �5� #����� ��1 -./� � -./;��! ���������� � #��#�������� �� � ��� ������������� ���� ��� �� ������� ��� �� �5��� �� � ���� �� #��#��������, 8 ���� �� ��� ������������� � ��� ������� ��� �� ������ � �� ���� ���� �� �� � �� ��� ������ �� � ������ ������ ������ ���� ��1 #�������� ��������� ��� ���� �������� ���� , 8 ������ ��� ����� � �5 �� � ������ � �� � ����� ���� ��� ����� � ������ ��� 9#������� ��������� �� ������,

M�� -./� � �� �� ��� �� �7��� �8/- ��� �,���� ��� �,���23 �� #����� � ���� ��� ��� � ����� �� � ������������ �� �8/-� ��� ��� �,���6 ����,���&3� �� � ��� , 8� ���� � ���� �� �� ���� , -��� ��� �� ������� ����� � ��� � ��� ��� �� �5�� � ���� ��� ������ ���� ��� �8/-������������ "#��� ��, 8� #����� ��� �� �5�� ;�8/- ���������� ������ ������ ��� ��� ��� #����� ������������, 8� ���� ��� �� �5�� � ��� ��������� � ��� ���� ��� ��� ����� ��� ����� ���� �� �� ��� ����� ��� -./ ��� ��

�@D0!.8�E F -!G�!HD�.!8E ; H��, % "%��(�2%�

������� �� ��� �������� � ���� ���1�� �� �� ��� ����� ��� � � ��������� ����� �� ��� ���� �� �#����, /� � ��� ��� � ���� �� ���� ��� � #�� ����#����� ��� �� � � ���,

# �� �& ; 8 ������� ���� ��� �� ���� ; ����� ���������� , 8 ���� ����

��� ��# ���� �� � #����� �� -./� �� �������� �� �5�� ��� -./��� �5��� �� �������� � #������ "#��� 9�, 8 ���� ���� ���� ����� �5�� �� � ������ ������ ��� ������������ ���� � ��� ���1 � �������� � ����� �5, 8 ��� ��# ���� "��� ��� -./ �� @%G #��� ��� -./;-./���������� ���� ������ ��� ��� �� �� �5�� ; �� �5�� ��� �� ������� ; ���������, 8 ��� ���� �� ��# ����� ��� �� ������ �� ������ #����� ����������,

8��� ���� �� � #����� �� �7��� ��� ������� ���� �� � �� ���� �

�� @%G "#���� 9 ��� '�� ���� ��� � !� �� ����� �� ��� ���� ��� ��� � #����� �

����, @����� �� ������� �� ��� ������� ����� ���� �� �8/-, 8� ����� ��� ��� ; �� ������� ���������� �� ������� ���� ��� �� �8/-; ���������� �� ����#���� ��� ����#���� ���������� �� �8/- � �� � �������� ������ ��� �8/-; �� ������� ����������, .��#�� ������ �� ���� ��� ������ � �� �� ����� ������, C�������� � ��� ���� @%G ������ � ��� #����� 9#���� � ���������� ���� �� � �������,

8 ���� �� � �� ���� ��� ������ � �� � ���� � �� �5���-./� ��������� ��� � ��# "��� � �� ��������-./� �� �5�5� "#��� %�, 8 ��

���� �� @%G �� ����� ��� ��� �� �� ��� ��� ��� � � ����� �� � ���� ��� ����� �� ������������ ���� ���� #����� ��� @%G ������ , /��������� �� �5��� ������ ��� �� ���� �� ������� �� ��� � �� ��� �� @%G� �� ������ �� ��� ����#���� ���������� �� ������ ��� �� �5�� ��� ��� -./ ����� �������, M���� � �� ��� �� � #����� �� ������ ��� � �� �� ���������� ��� �� ������ � �� 9�#� ��� �� �5�� �� � !, 8 ���� ��� -./ �� � ! ����� "#��� $�� ��� �� ������� � ���� � ������ ���� �� ���� ��� � �� �5��� ���� ���� �� � #� �� �� ��!, 8 �8/- #����� ��� ��� �� ���� ���� #����� , !� ��� � ��� ��� ����#���� ���������� ��� � ��������������������� � ������ �� ��9���� ����#� ��� ���� ��1� ���� ����#����� ��� �8/- ������ , !� � ���� ��� � � ��� ��� ��� ������ ��� ; #���������#���� ���������� � ��� ��� � ���� ���� ��� ��� #����� ������ ������� ��� � ������������ ���� �#������ ���� #����� ��� �8/-, 8��#������ �� � ���� ��� ��� � ��� �� ���� �� ��� �����, M�� ���� ����� ��#����� ������������� #����� ������ ��� � ������� ���1� ��� ��� ������ ������5� �� � #��������� ������������� ���� ��� ����� �� #������������������ � ����������1��� ������� �� @%G � �����,

:�� ����� �� #����� ������������ ��� � ��9� ������������ �� ��� ��� � �������� ������ �� ���� �� �������� ��� #��� ��� �� � � 1��� �� ��������������, ��1�� � � ��� � ���� ���� ���� � �� ���� ��� #����� ��� � ����� �� ������������ �� ������� � ���� ��� � ����� �� ������������ �� ��� � � ������ �� ���� ���� ��� -./ ��� �� �5�� "#��� &�, :�� �8/-� � ���� ����� ���� � ���� �� ��� ��! ��� � !� ��� �#��� ��� � ����#���� �������#���� ���� ����� ���������� ������ � ����,

�@D0!.8�E F -!G�!HD�.!8E ; H��, % "%��(� 2%�

!� �� �� �� �5��� � ���� �� ���� �� � � ��1 ��� �� -./� ���� ��� �8/-� ������ ������������� � ���� �� ��� ��� �� ��������� ��� -./ ��� ���������, !� ������� ��� ���� ������������ �� �8/- ���� �� ���� �� ����#�9 �� �� ����� ���������, 8 ���� �� ��� ������ "#��� &�� ��� ��� ��� ��� �� #������ ���� #� �� �� #����� , !� � � ���7� ������ �� �8/-������ ����� ��1�� ���� ��� -��� �� �� � ������ ���� �� #����� � ��� ��, !� � ��� � ��1���� �� ����#���� ���������� �� �8/- � ���#� ��� �� ����#�������������� � ��� � ������ ������� �� �8/- ����� ��1 ��� �� ��! ��� � !, 8������� ��� �� ������������ �� ��� �� � #����� ������������ � ������ ��� ����� �� � ���� � ���� ��� � ����� �� ������������ �� ��� � �� � �##� ��"#��� &�, !� � ��� ��� ; ��� #����� ���������� �� � ������� � ��� ; #��������������� , �N� � �N� � ��� � ���� �#��� � ������5��� ������� �� ���#� ����� ��#����� ��� ������� �� � ���������� �� ������ ��� ������ � �� "#���� % �� &�,8 ������ ���� ������� � #� ������� �� ����� ��������� �� ���� ���������������� �������� ��� #� ���� ���� �#��� � ������� �� ���������� ��� ������������, !� ��� � ������ ��� ������������ �� #����� �� ��� ��� ������ ��������� �� � ������������ ���� �� � � �� ,

8 �� ��� �� #����� � ��� � �� 5�� ������������ �� ��� � ��� � ��� ��� 8 �+�� ��� � ��� �� �#��� � ��� �� ��� ; #����� ���������� , 8 ��� ��� ��� ���� ���������� ���� ��� ��� #����� , �� �5�� �� ��9�������������� ��� ��! ��� �8/-� ��� -./ ��� � !, ����1 � ��� ���� �� ��� ���� � �������� ��� �� � � ���� �#� �� � �������� �� � ��������������, 8 ���� �� ���������� ���� � �� � �##� �� ��� -./;�8/- ��� ��������� ;�8/- "8 �1�� ��� ��, D�� ������� ��� ��! � �� �� � ��1� ���7�,

# ���� & ; 8 �� ��� �� #����� �� @%G �� ��� ��� �� �7��� ��� � ���� ���� �� �������� �� �� ��� �� ����� � � !���!��8/- ��� #����� , !����������5 � ������ ��� ��1� �����������1��� ����� ��� @%G ���������� � ������� �� � �5 �� ��� , �� �5�� � ����� �� �� ��������������� ���� �� ���������� ��� ��� ��� ��� @%G, 8 �������� �� ��

� � ��� ���� �� -./� �� �������� �� �5�� ��� � �� ������� � ��� � ������� ���� � ���� ������� #� �� �� � ������ , !� ��� � �������� ���#����� ; ��� ���������� �� 9�#�������� ������ ��� ����� �5� ������ � ��@%G ��� � ������ �� � #���� #� , 8� � ��� ������������ � �� ���� �� ����, 8 ���� ��� �������� �� � ���� ������ ���� ���� ��� � ����� � � �5 �� ������� � ��1� � � ������� #� �� �� ������� ��� � �� ������ ����,�� �!�� �� , 8 �� �� ��� � ����� ��� ��� �� �5�� ��� ���� ��� �� ���������#������ � ��� �� ��� ����� ���� � ��� � � ���� �� #����� �� ���� ����7��� ��� � ���#��� �� �� @%G� ��� ����� ������ � ������������ �� ��� ��� ��������� � ������������ ���� , 8 ������� �� ������������ ���� ��#����� ������ ��� ��� ��� �������� ��������� �� �7��� ����� ���� � ���������� �� ���� � #�������� ������� �� ��� ��� #����� ��� ����� ���� ����� ������� �� � ����� � �� �������� #��� � #����� ; �� ���� ���������� ���� ����������� � �� , .�� ���� ��� ��� �� �������� � ����������������� �# ���� � ���������� ���� ��� � ������������ �� #����� ���7��� ��� �7��� ��1��� ��� ������� � ��� �� � ���� � ���������� ���� ���

�@D0!.8�E F -!G�!HD�.!8E ; H��, % "%��(�2%%

��� ������������ , .�� ��� �������� �� ���� ������ ��� ��� ���� � �#���� ����� �����,

�DMD�D��D.

=�? ., -����� <, ������� <, -������� ��������+�� .%%%� %%� 2&&>,=%? /, �, ����� @, ����� -���1 3��1 :�!!1 '//0� ;�� 6& ,=>? 8, O, .�� O, �, ��� �, B, 8��� � J, M, ���� O, C������ :����+ � '//0� �9� 6>2,=6? <, ����� -���1 3�*1 '//1� $<$� %�(,=(? 0, ������ �, �������� "1 -���1 4���1 '/0'� ;&� '��,=&? �, C��55�� H, C��� H, ��������� -���1 3��1 / '//0� &;� �%'>>,='? O, B, <, ����� P/� !����������� �� ������� �� ������� Q� D� ���� /� ������ � &,=2? ., -����� <, ������� �, /�� ��� <, -������� "1 4���1 -���1 '//2� ��'� 26%',= ? ., �, ������ -, �, -���1 � /, -������� "1 -���1 4���1 '//3� =;� %� 2,

=��? �, C, .��� "1 4���1 -���1 '///� ���� 62��,=��? -, �, ���� �, / ������� G, �, H��� /, 0, ������ D, :, B���� "1 4���!1 0���!� '///� �='� >'',

�@D0!.8�E F -!G�!HD�.!8E ; H��, % "%��(� 2%>

M����, #�� ��� ����!� ��*�����! �� !�� ���� !� "�� ��� �!� �� � � ���� !� "�� �, *��!� �� � �.+��+� ��! ��+! ����>!��*��!�� !� ?��� ������!��! �� �, ��!�

=�%? �, �, C� �� C, <, H1����� -���1 3��1 :�!!1 .%%%� ;9� �>> ,=�>? :, E, D�� ���� E, <������ � :, .����� "1 4���!1 0���!� '//3� �9%� '�,=�6? /, @����� ��**�������@� A1 -��� �1 4���1 '/%2� &%� (%&,=�(? /, B� �� C������� ��� @� ��� � ������� F ��� ������� � %2,=�&? O, 0, C��1� -, -, 0������� C, �, ������ O, R�5� ��������+�� '//.� $&� % �,=�'? M, /#������� O, !���� /, ��A�� �, D ������ /, ������� 0, <����S�� "1 -���1 4���1 �� .%%$� ��<� �& %,=�2? ., B, -����� <, /, C� 1�� )��1 -��!� � 4���1 '//0� %=� �%(,=� ? C, /, B������� B, 0, 0�5 O�,� )��1 4���1 3��1 '//%� $%� %6&,=%�? @, 0������� �, B, @���� )�1 B��!1 4���1 /��1 "1 '//%� %'� �(�',=%�? 0, M������ �, M, J�1� 1�� � �*���1 "1 '///� <'� %'�&,=%%? C, /, B������� )��1 4���1 3��1 '/22� ��� >&(,=%>? M, @, .��������� �� ���� '/0%� $�=� 6(�,=%6? O, 0������� /, .������ O, .��� 1�� �, 0, .��� �, D, ������ B, M, <������ �, �, <����� D, O,

<��� ���� C�!+�� '//.� %&&� %'�,=%(? O, /, !##������ �, ., /�9����� �, :, ��� ���� ��� "1 �1 � �1 '//%� $�&� 6(',=%&? 8, D� ���� @, /, 0�1�5�� )��1 � �*���1 '/20� ��� �>',=%'? /, 0�C� ��� PC�#������� ��� /���� � �� C����� ��� ��� Q� O�� :��� F .�� � �� E��1� � %,=%2? 0, 0� ���� M, �� ������ "1 4���1 -���1 '//2� ��<� � (>,=% ? :, �, B, C���� -���1 3��1 / '//2� &&� >'&%,=>�? �, M, �� ������ C, �, J������ �, M, J�1� 1�� -���1 3��1 :�!!1 '//1� <'� �(�,=>�? 0, 0� ���� M, �� ������ "1 4���1 -���1 '//(� ��%� ��6%6,=>%? 0, .���� ., B����� "1 )**1 -���1 �� .%%$� ;<� ����,=>>? �, C�#�����#���� � /, ����� � -����� '//1� %<� ��(>,=>6? �, 8����� /, B, .���� ���� ��������+�� '//.� $&� ��(>,=>(? :, �, 0�� ���� "1 ��+! �� 4���1 '//$� $$� (> ,=>&? O, �, C����� B, 0� ��� /, .�1��� H, 0� ���� �, �, ���� #������� �1 )�!� '/02� ��<� %6(,=>'? B, �� ���� B, B�A�� 8, B������ �, M��A��� -����� .%%.� 9%� �% (,=>2? B, �� ���� B, B�A�� 8, B������ -����� .%%'� 9$� 2&(',=> ? @, E���� C, J�� <, ��� C, :�� M, ��� /+�1 -���1 "1 '///� %&� >6(,=6�? P�������Q D������#��� �� !��� ����� ��� ���Q� (� ��,� H��, /%�� D� , -, D��� � ., @��1�� � :,

�� �� <, .���5� H�@ C���� � � �� E��1� � >,

3��� ��� )*� $=( $��9

�@D0!.8�E F -!G�!HD�.!8E ; H��, % "%��(�2%6