기기분석 박층크로마토그래피 tlc(2) [호환...

TLC 전개 전 준비

• 건조한 상태 유지

• 선 적심 (선 세척; prewashing)

• 활성화 (Activation : 10 – 30 min, 120oC)

기기분석기기분석__박층크로마토그래피박층크로마토그래피(TLC)(TLC)

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• 컨디셔닝 (일정한 습도 유지)

TLC 전개 전 준비


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시료 점적 하기• 극성도가 시료 분포에 중요함

• 용매선 지키기도 중요함 끌림 현상 발생


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용매 조건 (Solvent system)

• 시료를 완전히 용해 시킬 것

• 지지체를 통해 시료를 적당히 운반할 것

• 가능한 중간 혹은 적당한 hRf 값을 가질 것

• 시료들에 대한 적정한 분리도를 가질 것


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• 시료들에 대한 적정한 분리도를 가질 것

• 안정하고 순도가 높을 것

• 점도가 낮을 것

• 적당한 증기압을 가질 것

• 가능한 무독성

극 성 도

• 용질의 극성도 ; 극성/비극성

• 극성 용질: 알콜 (ROH), 산 (RCOOH), 아민류(RNH2)


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• 극성 용매: 메탄올, 에탄올, 아세트산

• 비극성 용질 : 탄화수소, 케톤류 (메탄올대비임)

• 비극성 용매 : 헥산, 톨루엔 (메탄올대비임)

Solvent Eluotropic Series (용매 용리 세기)

Solvent E-value– Toluene 0.29– Chloroform 0.40


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– Acetone 0.56– Ethyl Acetate 0.58– Ethanol 0.88– Methanol 0.95– Acetic Acid/Ammonia High– Water High

용매 극성도 계산법

• Efinal = xE1 + xE2 + ……..xEn

• x = 용매의 부피분율

• E = 용매의 E 값– 예제


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– 예제– 25 mL CHCl3 + 75 mL EtOH – 0.25 x 0.40 + 0.75 x 0.88 = 0.76

Flow constant (κ)κ = ZF2/tκ = flow constant [mm2/s]ZF = distance between the solvent front and the solvent level [mm]t = development time [s]


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챔버 증기 포화에 대한 영향


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2차원 전개법• 1 차원 전개 : 일반적

• 2 차원 전개 : 많은 시료를 빠른 시간에 분석할 경우 적용


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정상/역상 용매 비교


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역상(지지체) TLC


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TLC vs HPLC


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일반적인 TLC 문제 해결법• Over migration Developer too polar Reduce polarity• Under migration Developer too non-polar Increase polarity• Distorted solvent front Developer not equilibratedEquilibrate• Distorted spots Wrong adsorbent Change plates• Distorted spots Spotted too much Change concentration


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• Distorted spots Spotted too much Change concentration• No separation Wrong developer Change developer• No separation Wrong adsorbent Change plate type• Tailing Spot overloading Reduce concentration• Tailing Component is basic Increase acidity• Tailing Component is acidic Increase basicity• Tailing/no separation Decomposition Developer/plate

HPTLC


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HPTLC


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Sample application


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254 nm

366 nm


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White light

Phosphomolybdic acid derivatization

Radio-TLC


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Principle of Radio-TLC

P10 Gas(90% Ar/10% Methane)


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Collimator

Sample

Radio-labelled compound

OOH

18F

HO

HOHO

OOAc

18F

AcO

AcOAcO

OOAc

AcO

AcOAcO

OTf

MeCN

18F-,PTC 1N HCl

(19F) (19F)


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ZS

Solvent level

Start line

ZSt

Z0

ZF

TLC Radio-TLC

Sample chromatogram


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