disjunct sea of cortez–pacific ocean gillichthys mirabilis populations and the evolutionary origin...

8
David Huang á Giacomo Bernardi Disjunct Sea of Cortez±Paci®c Ocean Gillichthys mirabilis populations and the evolutionary origin of their Sea of Cortez endemic relative, Gillichthys seta Received: 30 March 2000 / Accepted: 4 September 2000 Abstract The shortjaw mudsucker, Gillichthys seta, an intertidal goby endemic to the Sea of Cortez, has been proposed to be the paedomorphic derivative of the longjaw mudsucker, Gillichthys mirabilis. G. mirabilis is a disjunct species, with populations found along the Paci®c coast of central California to central Baja California, and with isolated populations found in the northern Sea of Cortez. Previous studies have suggested that the endemic paedomorph form speciated in sympa- try with the Sea of Cortez population of G. mirabilis. Alternatively, this speciation event could have occurred before the separation of G. mirabilis populations into two disjunct entities. To test these alternative hypotheses, we collected adult individuals from both species throughout their ranges from December 1997 to November 1998. We ampli®ed and sequenced 142 partial [527 base pairs bp)] mitochondrial cytochrome b regions and 18 nuclear creatine kinase introns 140 bp). We found that Paci®c populations of G. mirabilis separated into two distinct clades, possibly re¯ecting a phylogeographic break found in other ®sh species along the Baja California coast at Punta Eugenia. These two Paci®c populations were well separated from Sea of Cortez populations. Furthermore, our results indicate that the split between Sea of Cortez and Paci®c populations of G. mirabilis occurred well after the speciation event that separated G. mirabilis from its paedomorphic counterpart, G. seta. Introduction The origins of endemic species provide a unique op- portunity to understand evolutionary processes involved in speciation. These processes, however, are often ob- scured by several factors, including the extinction of ancestral species and the often long evolutionary time between derived endemic species and non-endemic pa- rental species. The Sea of Cortez, also known as the Gulf of California, is an ideal model system for studying mechanisms of speciation in marine species because of the combination of a relatively large number of endemic ®sh species approximately 100 species, Thomson et al. 2000) and a recent geologic history. The ®sh species from the Sea of Cortez are a mixture of assemblages that comprise representatives from the southern Panamic province and the northern Californian province Walker 1960; Thomson et al. 2000). Endemic species, which represent 17% of all ®sh species in the Gulf, have origins relating to one or the other of these faunal provinces Walker 1960). Several species of ®shes with Californian province anities are present in the Gulf of California as disjunct populations. The term ``disjunct'' describes species that are found on the Paci®c coast of southern California and Baja California and as isolated populations in the upper and central Gulf of California, yet absent from the lower Gulf regions. The disjunct species represent a highly variable assemblage of taxonomic and ecological groups and encompass approximately 28 families and 12 orders Present 1987). These populations are thought to have been established either by migration, via extinct water- ways connecting the Gulf of California to the Paci®c Ocean Durham and Allison 1960; Upton and Murphy 1997), or by migration around the southern tip of Baja California during periods of oceanic cooling associated with glaciating events Brusca 1973). Presently, gene ¯ow between Paci®c and Gulf populations may be lim- ited by physical and physiological barriers Hubbs 1948, 1960; Present 1987). Marine Biology 2001) 138: 421±428 Ó Springer-Verlag 2001 Communicated by M. H. Horn, Fullerton D. Huang á G. Bernardi &) Department of Ecology and Evolutionary Biology, University of California Santa Cruz, Santa Cruz, CA 95064, USA e-mail: [email protected] Tel: +1-831-4595124; Fax: +1-831-4594882 Present address: D. Huang University of California Santa Barbara, 2270 Camino Vida Roble, Suite L, Carlsbad, CA 92009, USA

Upload: david-huang

Post on 10-Jul-2016

216 views

Category:

Documents


4 download

TRANSCRIPT

����� ���� � ���� � ��������

�������� � � ������������ ���� ����������� �������������������� ��� �� ����������� ������ � ����� � ����� ����� ������� ����������� ���

��������� � ��� � � ��������� � ��������� �

�������� � � � ������ ���������� ����������� ��� ����������� !��" ������� �� � � ��� �# $����%� �� ������������ �� �� � � ��������� �� ���������� �# � � ��!��� ���������� ����������� ��� ����� �� ��� ������ � �������� �������� ��� ���� ������ #���� � ��!� � &���'� ����� �# ������ $� �#����� �� ������ (���$� �#������ ��� ��� ��� ���� ���� ������ #���� �� � ����� ��� ��� �# $����%) &������� ������� ��� ��!!������ �� � � ������� ��������� #��� ��������� �� �"���*��" ��� � � ��� �# $����% ���� ����� �# �� ��� ������ ��������� "� � �� ���������� ����� ��� � ��� ����������#��� � � ���������� �#�� ��� ���� ���� ������ ���� ����������� ��������) �� ���� � ��� � ��������� "��� ����� ���� ����� ��� � ��������� � #��� ��� ������� � ���! ���� ��� ���!�� #��� +������� ,--. �� /������� ,--0) 1���� �'�� ��� ��2������ ,�� ������ 34�. ���� ����� 5��67����� ������ �"��� ���� ��!���� ��� ,0 ��� ����������� ������ ������� 5,� ��6) 1� #���� � �� &���'����� ������ �# �� ��� ���� ��������� ���� ��� ��������� ����� ������ " ��8�����! � � " �!��!��� �� ����� #������ �� �� '� ������� � ��! � � (��� $� �#����� ����� ��&���� 9�!����) � ��� ��� &���'� ���� ������ ���� �� ��������� #��� ��� �# $����% ���� ������) :��� ���������� ���� �� �������� � �� � � �� �� ������� ��� �# $����%��� &���'� ���� ������ �#�� ��� ���� �������� �� �#���� � ���������� ����� � �� ��������� �� ��� ���� #��� ������������ �� ������������ �� ���

�����������

� � ���!��� �# ������� ������� ������� � ���2�� ��*��������" �� ���������� ��� �������" ��������� ���� ����� ����������) � ��� ���������� ������� ��� �#��� ��*������ �" ������ #������� ��� ����! � � �;�������� �#�������� ������� ��� � � �#��� ��! ��� �������" ����������� ������� ������� ������� ��� ���*������� ��*����� �������) � � ��� �# $����%� � �� ����� �� � � <� #�# $� �#������ �� �� ���� ���� �"���� #�� ����"��!��� ������ �# ���������� �� ������ ������� ������� �#� � ����������� �# � �� ����� " ��!� ������ �# �������'� ������� 5�����;����� " , �������� � ����� �� � )�6 ��� � ������ !�� �!�� �����") � � '� �������#��� � � ��� �# $����% ��� � ��;���� �# ������ �!�� � ���������� ��������������� #��� � � ���� ��� &�������������� ��� � � ���� ��� $� �#������ �������� 51� ���,-=> � ����� �� � ) �6) 9������ �������� � �� ��������� ,.? �# � '� ������� �� � � <� #� ��� ���!����� ����! �� ��� �� � � �� �� �# � ��� #���� ���������51� ��� ,-=6)

������ ������� �# '� �� ��� $� �#������ ���������@������ ��� ������� �� � � <� # �# $� �#����� �� ������������ ������) � � ���� AA��������BB ��������� ������� � ����� #���� �� � � &���'� ����� �# ���� ��� $� �#����� ���(��� $� �#����� ��� �� ��� ���� ���� ������ �� � � �������� ������ <� # �# $� �#������ "�� ������ #��� � � ����<� # ��!����) � � �������� ������� ��������� � �! "������ � ������ �!� �# ��;������ ��� ��� �!��� !�������� ��������� �����;����� " �0 #��� ��� ��� ,� ������5&������ ,-0.6) � ��� ���� ������ ��� � ��! � �� ������� ����� �� �� ��� �� �" ��!������� ��� �;����� �����*��"� ���������! � � <� # �# $� �#����� �� � � &���'�C���� 5+�� �� ��� � ���� ,-=> D���� ��� ��� ",--.6� �� �" ��!������ ������ � � ���� ��� ��� �# (���$� �#����� �����! ������� �# ������� ��� ��! ������������� ! �������! ������ 5(����� ,-.�6) &������ "� !���8�� ������� &���'� ��� <� # ���� ������ ��" �� ��*���� �" � "���� ��� � "��� �!��� �������� 5E���� ,-�0�,-=> &������ ,-0.6)

����� (�� �!" 5�,6 ,�0� ��,F��0 � �����!��*G�� �! �,

$����������� �" ) E) E���� :� �����

+) E���! � <) (������� 5�6+��������� �# 9�� �!" ��� 9�� �������" (�� �!"�D��������" �# $� �#����� ����� $��%� ����� $��%�$� -4=�� D��

�*��� � ��������H��� �!")����)����� � I,*0�,*�4-4,��> :�;� I,*0�,*�4-�00�

����� ������+) E���!D��������" �# $� �#����� ����� (���������. $����� G��� ��� �� ����� J�$�� ����� $� -�-� D��

� � ��!��� ���������� ����������� ��� ���� 5<�*������6� �� � �������� ������� ������ " #���� �� � � ��*������� %��� � ��! � � &���'� ����� �� � ��! �� �!�������� ��������� ������� #��� ��� :��������� $� �#�������� (� �� �!�� ���� (��� $� �#����� 5� �� ��� J��,-.�6) �� ��� ���� ������ #��� ��������� �� K� "> �!!���� ����� �� �� � � �� � �# � ����� � ����� ���!������ �" � � �� � 51����� ,--=6) �#��� ��� ��!��� �!�� ����� ���#� �� � � ����� �� ��� ���� � �"���� �����;����� " ,, �� 51����� ,--=6) L� � � <� #�# $� �#������ ��� ������������ ���!�� #��� � �!��(��� $� �#������ �� (� �� �!�������� ������� �;���5:�!) ,6) 1� ��� 5,-=6 �������� � �� � � �������" �#�������� ������� �; ���� ���� � �!��� ��M������� ��*����� <� # ��� &���'� ����� ���� ������) +�M���������� ���� " ��� ��� �#��� ������ �� �� �� ����������)���� �������� ���� ������� ������� �; ���� ���� ���*������� ��M������� 5&������ ,-0.6� �� �� <� # �# $� �*#����� ��� &���'� ���� ������ �# �� ��� ���� 5(�� ��,-=,�� �� ,-=�6) <� # ������� �# � �� ������� � ����*��������� " ��� ��!�� ����� �! �� '��� � ����� '������� ��� � ���� ��������� ��� � �� � ��� &���'�������������) � �" � �� ���� �� �� ���� ���� ��� "��� �� ������ " ��� ��� � �! � " ��!�� ��� ��)

� � !���� ����������� ��������� �� " ��� ���������� ��� ���� ��� ��� ������ �������� � � � ������ ���*������� �� ��) � � � ������ ��������� �� ������� ��� � <� # �# $� �#����� ��� �� �������� �� � � �! � ����"��������� %��� #��� &����� (��������� �� <��"���)� �� ������ ���������� ��� �# � � ������ %���� ���������" � '� � �� �� ������� " ���� �� ������������ ������� �$ 5+���% ��� ������ ,--�6) � � ���� � �!" �#��� � �� �� �� ���� �� �� � �� �# ���*��� � �� ��� ���� ���������� � ��!� �) �� �� ��M��� #��� &���'� �����

�� ��� ���� �" ����! � � � ���� ���� �������� 8�� "����������� � ��!�� ������ ��� �! �� ��� '�) � � ��! � ��� ��M������� � �� �;��� ������� �� �� ��� <� #�� ��� ����� � ��� ��!������ �� ��� �;�����)

(�� �� 5,-=,�� �6 ����� ���� � �� �� �� ���!�������� � ��������� �� #��� �# � � ��!�� �� ��� ���� �� ���� ����* ��� �������� �" �������! �� �#� �� � � �! ��������� %��� �# � � ����� <� #) � � ��!����� ������!��� ������ ��������� �" � ��� � ���� ��" ����� ����� #�� ���� ������� " �������� �� � ���� !�����!�����������) (" �� ������ " � �����! � � ���� ������� ����� #�� ������� ���" ����� 5 ������ ���"6� � ��� '� ��" ��� ������� " ����� �� �M ���� � � ������� �� ��5(�� �� ,-=,�� �6) � �� ���� �� ���� #��� �� ����������" � �������� ��� "��� 5$ �� ��� 9�� ��! ,-.,6)

��� "��� ���� ��� ���� �������� �� �;� ��� � ���� �������" ���!�� �# � � ������� �� ��) �� �� ��" ��� ������� #��� <� # ���� ������ �# �� ��� ���� �#���� � !�� �!��� #�������� �# � � ��� �# $����%) � �� ��" ��� �������� ��� �� � � ��� �# $����% ��� �� �� �"��*���" �� �� ��������") &�������" ��� � ��� �������� �#� � ��� ������� �� �����!�� �� ��� ��M����� ��!���� �#� � <� #� �� �# � �" �� �����!�� �� ��M����� �������5����� ��) ���� ��������� %���6 ��� �� � � ���� ��!���)� ��������� "� � � ��� �������" ���!�� �# �� �� ��" ��� �������� � � ���������� �# �� ��� ���� ������������ ���� ������� ��#��� � � ���� ��� #�������� �#� � <� #)

C�� '��� !�� ��� �� ��������� � �� �# � ��� ��� "��� ���� ��� ��������� �" �� ��� �� ����) � � ��! ���� � �!��� ��� � �������� ��� "��� ��������������� �# !������ ��M������������ � �" �� ��� �������� ������ �������� �# �����!���� ������� � � ��� �������)� ��� �� ������� �� ��� ����� ������ 5�"��� ���� 6��� ��� ��� 3�������� ������ 5$�*6 ������ .7 +/�������� �� ������� !������ ��#�������� ���������� ���� ���� � �!��� �� � �������� ��� "���) � � ���*��� !�� �# ��� ����" ��� �� ��������� � � ��� � �# !���8�� ������� �������� ���� ������ �# �� ��� ����� ��� �� � � �"������ �# � ��� ���� ������ ��" ��� �� ���M��� �� ���������� ��������� �� �� ���

!������� ��� ������

+/� ���� ��

���� �� ���� �� � �� ����" ���� �� ����� ��� ������ ����� �� ��"���� ���������) ���� ��! ����� ���� ������ �� #� ���� &���'������ 5�� ��� ����6� 9 � ��� � ��! 59JN6� <� ��� � ��! 5<CJ6�$���������� � ��! 5$��6� 9����� $�"��� 59$C6> ��� �# $����%5�� ��� ����6� 9����� J� $ � � 59J$6� 9����� ���� 59C6�9����� J� &���� 59J&6> ��� �# $����% 5�� ��6� 9������� ( ����59(J6� (� �� $ � � 5���� ������� 9����� J� $ � �� ($E6� 9�����J� &���� 59J&6� �� ��������� �� :�!) ,) G��� �� ��������� ������������� �� � � $� �#����� ������" �# ��������� ��� :��������)1� ���� ��� � ��� " �� ���� !��" ������� �� ���*!����� #� ����!/� ���B� �������� ��;����" �# � � #��� " 5/� ��� ,--�6) ������������ � �� �� ��!� �� � � ���� ���#��� " �� �����������5<������ ����6� ��� �� ����� �� <��"���� ������� �;���� ��������������� ��������� � �� �� ��!� �� � ��M����� !��" ���#��� "�

��� � ���� ��! ��� ����� �# ����������� ��� ���� ��� �� �� �� � �&���'� ����� �# $� �#����� ��� (��� $� �#����� ��� �� � � <� # �#$� �#����� 5��� �# $����%6) $� �#������ 9 � ��� � ��! 5���6� <� ���� ��! 5���6� $���������� � ��! 5���6) (��� $� �#������ &���'������ � 9����� $�"��� 5���6) ��� �# $����%� 9����� J� $ � � 5���6�9����� ���� 5���6� 9����� J� &���� 5���6� 9������� ( ����5� �6� (� �� $ � �� ���� ������� 9����� J� $ � � 5 �!6� 9����� J�&���� 5���6

���

<�������� ��� �� ����� �� ������" (�"� $� �#�����) �#��� �� ��*����� ���� �� ���� � ���� ��������� " �� -4? �� ��� ��� ������ ��������� ����������� �� � � '� �� ��� � �� �� � �$ �� � � ��������")��� � �� ���� ������ ���� ���� ��������� #��� � ��� ���� ��)

���� !������ +/� ��� �������� #��� .4F,4 �! �# ���� ��� ���� ������ �" ���������� N ��!������ �� "��� ��M�� 5, �� ������ �� /�$ � � �� 9+��� ,? �+�6 ������! � �� 44 �$)� �� ��������� ��� #� ���� �" ����'������ ����! � ���#����;��������� ��� � �� � ������������� 5�������� �� � ) ,-0-6)

&$� ��� �'������ ��� ��2������!

� � ������ �� "������ � ��� �������� 5&$�6 ��� �'������ �# � ������ ������ �"��� ���� ��!��� ��� ������ �� �� ����! � ��������� ������� <JD+<*J ��� $(�*E 5�"�� ,--�6) C��� �#�� ��������� � �# ��� ������� �� ���� ��2������� � �����'� ��*����� ������ 5$(,<*J� 4�*<$$$$�$���O���1$1<$*��<��<*��6 ��� ����!��� �� ����� �� � � �! � ������ #�� � ���������! ��� �'�������) ��� �'������ �# $� ������ . #� ����� ������ ����!�) :�� � � ������" ��������� � � ������� $N*:,��� $N*�, ���� ����� ��� #�� � � ��������" ��������� � � �������$N*:� ��� $N*�� 5P������ ��� K���� ,---6)

9�� , � �������� ��������� ,F, �! +/�� , �� ����E$J 5�E 0)�6� 4 ��N$ � ,)4 ��!$ �� �)4 ����� �# "# +/��� "������ 5&�����*9 ���� /���� �� $���)6� ,4 �� �# ��� �/�&� ��� )� �� �# ��� ������ ��� ��� ��� �'�� ��� � �"*� ��! ���' � �# �4 � �� -� �$� �4 � �� �0 �$� , ��� �� .� �$� #�� �4�"� ��) ��������" ��� �'������� ���� ���#����� ��� � � ����������� ��� ��� ����� ��! ������������ �# 4� �$) �#��� ����'*������ #� ����! � � ������� �# � � ����#������� 5�(L� &�����*9 ���6� ��2������! ��� ���#����� �� ��� ���������� ��� � �������� ���� �� � � &$� ��� �'������ �� �� �(L �.� �����������2������ 5��� ��� (���"������ :����� $��"� $� �#)6)

& " �!������ ��� "��� ��� ���� ����� ���������

1� ���� � � �������� ���!��� $JD���J G ��� ������� �"��2����� /���!���� 5��� ��� (���"�����6 �� � �!� � � ����� ��*���� �"��� ���� ��!��� ��2������) & " �!������ �� ������ ������� �������� ����! � � ���! ���*������! ��� �� 5/�� ,-0.6 ��*� ������� �" � � ��#����� �����!� &�D& 5& " �!������ ��� "���D���! &�������"� ������� �)> ���M��� ,--06) �;���� �����*���" ����! ������ � !���� �� ��� � ��� �� ���� ��� �� ���* ������� �������� ����) � ��� ���� �!��� ���'����� ��� ��� �������� , ��������� ��� ������ 5:� �������� ,-046 #�� ���! ���������! ��� � �� ��� , ��� ������ ����! � � #���*���� ��� �� #����;���� ��������" 5�� " ��� ���� ���� �� ��� ��� �����6) L� ��� ���! ��� ������! ��� ��;���� ��������"� ������������! ��� "������ ���#����� ��� �2�� ���! ���! �# ����������� 5��6 ���������������� 5�G6� �� �� �� ��� ������������� ���! ��� � �������� �� ��� �� �����������) �����!� �������� ��2����� �����!������� �� �� ���� ����! &�D&) <��� 8�� 5$��6 ��� �� ��"�� �����*���" ���� �� �� ���� ����! � � ��#����� �����!� +/��� 5��%�� �����%�� ,--.6 #� ����! E����� �� � ) 5,--�6) ���������� ��!��'������# $�� �� ��� ��� �������� ����! � � ��#����� �����!� �� �2���5������� ,),� �� ������ �� � ) ,--.6)

"�����

� � ��! �� ��� ���� ��� �� �� ��� �� � ��� ���;����"5�� ���� ������ ��� �� � #�� ������ ������6� � � ���������� ���� ����� ���! � ��!�� �� �� � � ���� ��������������! � � ���� � �� � �" �� ��� ��� �� � � �;������� �������) L� !����� � �� �� �� #���� �� � � ��*������� ��������� ��!���� � ����� �� ��� ���� �� #������ � � ���� � �� �� ��������� %���) � ���� �# --�� ��� ���� ��� �� �� �� �"��� ���� ��2������ ����

�������� 5<��(��� �O�00,*�O4��6) C# � � 4�.����� ��2������� ,,0 ���� ������ � ��� 0� ���� � "* �!������� " ��#��������) �� �;������� � � � ��� ������������� ��������� ���� �# � � � ��!�� 5.�?6 ���������� '��� 5,4?6 ��� ������ 5,�?6 ����� ���������) � ������� �# ����������� ��� !������ � �� � � �������# ������������� 5����G � �)�6) �����!� ����������2����� �����!������ ��������" �������� ��� �� ��"����������" ��� � ��� �� ��� � ,) ��������� "� ��� ���$�* ������� �# = �� �� ��� ,� �� ��� ���� 5= #��� � �<� # ��� = #��� � � &���'�6 ���� ��2������ 5<��(����:�00,40*�:�00,4-6) C�� �# ,� ��2������ ��� ��*������ .� ������������ �� �������� ���������) C�� �# � ���.� ������ ��� ��M������� ���� ';�� ������� �� ��� ������� ����) /� ��M������� ���� �������� ��� �� �������)

&��� ����� ��������� ��� !��� 8��

���%� ���� �� ��� ���� ����������

/� ��M������� ��� �� ��� ������� �� ��� ���� ���� �*����� ���� #���� � �� ����! � � ��� ��� $�* ������)� ��� � � #� ����! ��������� ���� �� �������� ��� � ������ ������ �"��� ���� ������) �� ��� ���� ���*� �� !������ ���� � ��� �������� � ���� 5:�!) �6) � � '������ � ���� ��� ���� ��������� � �� ����� � ��! � � &�*��'� ����� 5,? ��������� �������6) C�� � ��� 5<,6��������� � � � �� ��� ���� ��������� � ����� �� � ����� ��� ��� �# � � ���!� 5�)�) 9JN� <CJ� $�(� :�!) ,6)� �� � ��� ��������� �, ��������� � �����������! ,. �� ��"���) � � ������ � ��� 5<�6 ��� ���� � � ���������� � ����� �� 9����� $�"���� �� ������" �����;*����� " � �� ���� �# &���� 9�!���� 59$C� :�!) ,6���� ��� ��� �# $����% �� ��� ���� 5��,, 9J$� ��,9J&6) � �� � ��� ��������� ,. ��������� � �����������!,� �� ��"���) � ��� ���� �� ���� ��8����� �" �! !���8�� ��� � ��� �� ��!���� 5���� ��� ���� � &� � =)-��$�� � )=.6� ��� ���" �� !��� 8�� ��� � ������� � �����!���� 5&� � )�� $�� � )�,0> ��� ��� � �6)

' �( ����) �� ��� ���� ����������

� � �"��� ���� ������ ������ " ��������� ��������� ��� ����� � ��! � � &���'� ����� #��� ��������� � �� * ����� �� � � <� # ��!���) L�������� � �# �� ��� ���� #���� � ��� �# $����% #����� � � ��� 5<�� ,? ����������������6 � �� ��� ���� � �� ��� ���� ��������� � �����#��� � � <� # �# $� �#������ �;���� #�� ��� ��������� �5��,, 9J$ ��� ��, 9J&6) � �� � ��� ��������� ����������� � �����������! �0 �� ��"���) �� ��������������� ��� <� # ��������� � !������ ��� &���'� ����*����� �� � ����� �� &���'� ��������� � !������ ��� <� # ��������� �) � ��� � " �!������ ���� �� ���� � ���*#��� ����������� �" ���" �� ��� � �# !��� 8�� ������$��� ��� J���� ������� � � <� # �# $� �#����� ��� � �&���'� ����� ��!���� 5&� � )�,� $�� � )=,-6) <��� 8�������� $��� ��� J���� ��� ��� ���" ������ � �� � �

���

��!���� ���� �# &���� 9�!���� ��� ���� �# &����9�!���� ���� ���������� ����������� " 5&� � )���$�� � )=04> &� � ),-� $�� � ).0-> ���������� "6)

�� *�+ �� �� �� ����������

�� �� ���� ������ ��M�� #��� �� ��� ���� ���� �������" ����! ��� ���� �� � ���! � � ��� 5,? ����������������6) +������ � �� !������!� �� �� ��������� �� ���� � �������� " �! ��� �# ��������" 5�� ����*����� �� �- �� ��"���� ��������" � )--6) :��� �������!��� 8�� ������� ���� ������ ��� #���� �� �� ���"������� 5&� � �).� $�� � ),-6) :�� �;��� �� !��� 8��������� � � ���� ��� ���� ������ �# � � <� #� � ���������# �����;����� " , ��� ��� �� 5&� � ,)0� $�� Q)�,.6) C� �� ���� ��� �� ��� �� � � ���� ������ ��(� �� $ � � ��� 9����� J� &����� � �� ��� ����������" �� " �4 ��� � ���� �� ����� " �� ��� � �# !��� 8��5&� � �)0�� $�� � )-�6) � �� �� ������� " �������! � ���������� ��� � � ���" �! ��� � �# !��� 8�� ��������� ��� ���� #��� � � ���� ��������� 9����� J� $ � ������� 9����� J� &����� &� � .4)�.� $�� � ).5��,9J& ��� ��,, 9J$ ����! �;� ����6)

�� ��� ���� ��� �� �� � " �!������ �� ������ ���

& " �!������ ��������������� ����� �� � � �"��� ���� ��!��� ��������� �� ��� ���� ��� �� �� ���� ����������� � ���� ��������! �� � ��� ���������� �������

������ ����� 5:�!) �6) � �� ���������� ��� �����! "��������� �" ��������� ��� "��� 5,? �# � � ����*����� ��� ������6) �� � � ��� ��� +/� ��� � � 5����# ,� � �!��� ���� �����6 ';�� ��M������� ���� #����������� �� ��� ���� ��� <) ����) � � ���� ���! � " �*!������ �� ������ ��� ���� � ���#��� ���������� ��� � � ����� ������ ���� �������� ��� �"��� ���� ��2������)

����������

& " �!��!��� �� �������� ��� �� ��� ���� ���� ������

$��������� � " �!��!��� �� �������� ������� ���� ��*�� ������� ������� �����! �������� #�� � � ��8����� �#��������� ������ �� ���� ����� ��������� 5(�����! ����� ����� ,-0=> ����� ,--�� ,--�> (�����! �� �� � )

��� � & " �!������ �� ������ ��� �# ��������� � �# �� ��� ���� ����� �� ����! � � ���! ���*������! ��� ��) /������ ����� � � ���������� �������� ��������� ������� ����! � � ���! ���*������! ��� ����� �2�� ���! �� #�� ����������� ��� ������������� 5%��� %���6� ���� �� ������������� ��� ���! ��� � ��� ����� �� ��� �� �����������5����� %���6) /������ �� �� � � ����� ����� ���������� ����������� ������� ����! � � ��;���� ��������" ��� �� ��� �2�� ���! �� ��� ��, ���! �� #�� ������������� ��� �����������) C� " �� �������� 4? ��� � ���) L� � ������ , ��������� ��� ������ ��������) ������������ �������� ��� ������ ����� ���� ���� �����*!�����

����� � ����������� ��� ���� ��� �� ��� ������" �# ��2�������������� ��� �� ��� ����! ���� ������) /����� �# �� ��"���������� �# ������ � ������ ��� ���� ��2����� �����!���� ����

�� �� ���� ����! +/��� 5��%�� ��� ��%�� ,--.6) +�������" ����� �� ���� ��������! �� � � �2������ � � �, ��

��� ������ ,�

� ��� ,� �� � � #��2����" �# � � �� ��+/� �"�� 5/�� ,-0.6

��!��� ���� J��� ��" ���� � /����� �# �� ��"���

+�������" /����� �#������ � �����

��� ��2����������!���� 5?6

�� ��� �������� -- 40 )-. = ,)�

&���'� $���� 4= �. )0- �� ).0/��� �# &���� 9�!���� �, ,. )0, �� )�

9 � ��� � ��! 59JN6 ,4 = ).0 ,, )�-<� ��� � ��! 5<CJ6 ,4 . )0 = )�,$���������� � ��! 5$��6 ,, = ).� . )�-

���� �# &���� 9�!���� 9����� $�"��� 59$C6 ,4 , )-, , )�.

��� �# $����% �� �- )-. �= ).�9����� J� $ � � 59J$6 ,4 , )-4 ,0 )=�9����� ���� 59C6 ,4 ,� )-. , )4.9����� J� &���� 59J&6 ,� - )-. �= )-

�� ������ �� �- )-- �. ,)

9������� ( ���� 59(J6 ,� ,� ,) �� ,)(� �� $ � � 5($E6 ,4 ,� )-0 ,, )=.9����� J� &���� 59J&6 ,� ,� ,) � )-=

�� ��� ���� ��) �� �� ,,)=�� ��� ���� &���'� ����� ��) <� # ���� ������ ,)-.�� ��� ���� ���� �# &���� 9�!���� ��) <� # ���� ������ ,)-�� ��� ���� ���� �# &���� 9�!���� ��) <� # ���� ������ �)��� ��� ���� ���� ��) ���� �# &���� 9�!���� ,)�=

���

��4

,--�6) L� � � ���� �# � � &���'� ����� �# � � (��� $� �*#����� ������� �� � � " �!��!��� �� ����� �� &����9�!����� � �� �� ���������� " ���� ���������� � ��*�!��!��� �� �������" 5(��!!� ,-.�6� �� ���� ���������#�� ������ ������� �# '� ��) � �� !������ ����� ���#���� �� � � ��� �"�� ����� �������� 5����" �� � )�6� � � � ��� ���#���� � �� ����� -�.���� 5(��������6� ��� � � $� �#����� �� �'� � $������� ��/�������5(������� ��� �� �" �6) �� ��� ���� ���� ������� �� ���������� !��� 8�� ��� ��!��'���� ��2����� ��*���!���� ������� ���� ��� ��� ���� ��� ���� ����������������! � �� &���� 9�!���� ��" � �� � �" � �� � �� �� " �!��!��� �� ������� �� � �� �������) :��� �� ���*� ��! ������ � �� ��!��� �� ��������� �# � �� �� � � ����)

���������� !��� 8�� ������ $��� ��� J���� ����������� #�� �������� ���� ������ �# �� ��� ����) �� " �!��!��� �� ����� �� $��� ��� J���� ��� � ��#���� ������� �������� ���� ������ �# ����� � ���"�!���� ������ -�.���� 5&������ ,-0.6� ��� ��� �"���� �������� 5����" �� � ) �6) � � ���������� �# � �<� # ��� &���'� ����� �������� ���� ������ �� � ��! � �� ��� �������� �" ��� �# ��� ���������) (����� 5,-.�6�������� � �� ����*! ���� ������! �# ������ ������� � ��� �# � � (��� $� �#����� ������� � ���������� ���*������ '� �� � � �� ��� ������ #���� �� � � ���� ������� �# � � <� #) � ��������! ������� �# ��������� �������������� �� � � ��� �# $����% ��" ��� #� ������������ �# ! ���� �������� ��� �������� �" � ����!'� �� ����� � � $��� ��� J���� ��!��� � �� ����������������� ���� ��� ��) L# � �� ���� � � ����� ��������� ����� ������� ���� ������ ��� � ��� ���� ���*� ��� �����;����� " ,� "���� �!� � �� � � ��������������� ����� �%�� �� � ��� ������� ����������) L�*�����! ��������� ������� ��� � ��� �������� �����!�������� ! ���� �������� �����! � � ��� , �� ��� "����)

� � !�� �!��� �����" �# � � ��� �# $����% �� ���*� �;) � � ��������� ��!��� �# � � <� # ��� #����� ����� " �� � � ������� �����;����� " �4 �� ��� "�����!�) � � (��� $� �#����� ������� � ��� � �� ������������ � ��� ���� �� � � ���� � ��� � � ���� ��� ��!��� �#� � ������� � ��� �������� �# ������ ��� ��� ��!��� ����� ������� � �� ������ ������ �����"� ���*������! � � &���'� C���� �� � � <� # �# $� �#����� ��"

��� �;�����) � �� ��������� ����� ���� �����;����� ", �� ��� "���� �!� 5+�� �� ��� � ���� ,-=6 � ��� � ���� ��� ������� � ��� � � ���� ��� �� ���� ���������� ��� �� �#��� �� ������ � � �������*��" (��� $� �*#����� ������� �) � � �����"� � �� ���� ���� ������� ��� � ������ ���� �# � � (��� $� �#����� ������� � ������������ �� �� ��������� � #�� � � !������ ��M������������������� ������� ���� ������ �# �%���� ������� " #�������� ��� ���� �# ��� �������� �����"� 5D���� ������ " ,--.6) � ��� ����� � ���� � ������ " � ������������� '� �� ���� #��� " �� ��� ��� �# � � ���� � ���� ��� � � <� # �# $� �#����� ��� ��� ����! �� ����� ���! � � ������ ������ �# � � $��� ��!���)

� � �! ��!��� �# ��2����� �����!���� �������� ���"��� ���� ������� � � ��� �# $����% ��� &���'����� ������ �# �� ��� ���� 5,)-F�)�?� ��� � ,6 ����� ��#���� � � ���*������� �� �����"� �������� ��� �������� � ��� � � ! ���� ������ "��� ����) L������ �# ����� � � !����� " �������� �� ��� �� � ��� #�� '� �"��� ���� � ��2������ 5�"�� ,--�> (�����! ���� � ) ,--.> ,?�" �� �)4?�"6� � � �����!���� ����������� ��� �# $����% ��� &���'� ����� '� �� ��� ����������� �� ������� ).= ��� �)� �� ��� "���� �!�) L#�� ������ � �� ��������� � ��������� � ���! � ���� �������� �����! �����*��� ��! ������� � �� ��� � ��� ������� �����! � � ��� " ! ���������� ��� ��� ��� �!��� 8�� �����! � � ���������� ! �������! ��������) L���������� � � ���*������� �� �����" �������� � ��� #���������� ������� &���'� C���� ��� ��� �# $����% ���� , �� ��� "���� �!�� � �� � �� ���������� ����� �����'������ " �������) � ��� � � ��! ��� ���� ��� ���*����� � ��� ��� ���� ��� ��� ���*������� �� �����"������� �# �������� � �� � ��� � �� � � ����� �� ���� ��� ")L# � �� ���� � � ����� ��� ���� ��� � ��!!��� � �� ����� ���� ���� ������ �� � � ��� �# $����% �����!�� ��� �����"� ���� � � �����"� ������ � � (��� $� �#������������ � ���� � ����) � � ��! � �� ���� ����� �������#��� � � !����� ���� �� �� ��� ���������� �� �� �����*���� �� ���� � �� � � ��� �� ��� ���� ��������� � #���� � <� # � �� � ����� ��� &���'� ��������� � ������ "���������� �� ���� ������ ������) � ��� �� ��"��� ��"�� � � ���� � �# ���� ���������� �� ����������� �� ������� " ���� ���� '� ) � ��������� "� ������ �������� �

($E 9J& 9(J 9JN <CJ $�� 9$C 9J$ 9C 9J&

($E F �)0,- ,)0�= F F F F F F F9J& )-� F ,)�� F F F F F F F9(J )�,4 )�4- F F F F F F F F9JN F F F F �)�00 �)0�� ),-� )�= ),=� )�4-<CJ F F F ),�� F �),== ),=- ),0� ),4� )��,$�� F F F )-� ),0. F ),0= )�,� ),=. )�.�9$C F F F ).�� ).�. ).�. F ),4 ),,= ),0=9J$ F F F ).0 ).�� ).� ).=- F �)=-, �=)�49C F F F ).4� ).== ).�- )0,, )-= F �)-0�9J& F F F )=4- )=0� )=�= ).�- ),0 ),,, F

����� � <��� 8�� ����! ����������� ���� ������) &������� ���*�������� �# !��!��� �� ��!���� ��� ����������� �" �� ��� �# $��

5�� �� ���!��� 6 ��� &� 5����� ���!��� 6) ��!��� ��� � ������������ �� :�!) ,) � � '��� � ��� ���� ��� �� ���� ���������� ��

�� �� ���� ������� � �� ��� �� �� ��� ���� ���� ������) G� ������� �� �� ���� ����! +/��� 5��%�� ��� ��%�� ,--.6> � �� ������� #���� �� �� ���������� " ��!��'���� ����! �� �2��� 5�� �������� � ) ,--.6

��=

������ " �����! � � ���� ������ ! ���� ������ �� ����;� ����)

9�� �������" ���!�� �# �� ��

C�� ���� �� ���'���� ��� �;������ �������� ������������ �� ���� �� ��� ��� ����� � � J������ +� "*���!�����*� 5J+E*�6 5:�� �� ��� ������ ,--.6) J��*���� �� "���!����� � �+/� ��2������ �������� #���&���'� ��� <� # ��������� � �# �� ��� ���� ���� ������*�� ) L� ��������� �� ��� ���� ��� �� �� ��������� ��; ������ � #���*��� ������ ��M������ 5� �"���"�����������������6) (������ �� " ��� ��������� �# ��� �� ��� ���� ���� ����� ��� ��� �� �� ��������� ������2������� ������� �� �� ��� ������ � �� ���� �# J+E*���M������� ��� ';��)

L� ��� ����� ��� ����� ������ ��� ��� ��� �������� �� � �! ��!��� �# !������ ���������� ������� �� ����� �� ��� ����) � � �"��� ���� �����!���� 5,,)=?6�� �������� � �� � ��� #���� �� ��� �! �� ��;������ ��� � 5K� �� ��� ����� ,--06) L� �;����� ���� �� ���������� �� ��� ������� ��;� �# ������ '� ��� �� � ����� !���� ��� �� ���� �� �� " �" � � ��!��� #��������! ������� �# ������� �� � � &���'� C����5�� �� ��� &� ���� ,--46)

D���! � � �������� " ��������� ����� ������ ���*��������� ������ �� ��������� � � �����!���� ���� ��������� ��� ���� ��� �� �� �� �)=F,,)= �� ��� "���� �!�)� ��� �� �� ��" ��� ������� #��� �� ��� ���� ��#���� � ���� ��� #�������� �# � � <� # �# $� �#�����)

� � ����� ��!��� �# � � <� # �# $� �#����� �� ��������� �� #�� ���� �� � � ������� �����;����� " �4 �� * ��� "���� �!� 5+�� �� ��� � ���� ,-=6) �� �� ��" ��� ��� ��� #��� �� ��� ���� �" �������! � � ��� �!�*�� " �������� ������ ��������� �" � � ��� " #����� ��*������� ��!��� �# � � ����� <� #) <��� 8�� ��" ������������ ������� ���� ������ �# �� ��� ���� �#��� � ������!���� ��� �� �� ���� � � � ����� �# � � �����"����������! � � ��� �# $����% �� � � &���'� ������� ������������ ������) ��" �# � � ��� �# $����% ������� ���������� � � ��*����� �� ����*����� �� �������� 51� ���,-=6) C�� ���� ��!!��� � �� �� ���� ���� �# � ��� �������������� ��� � ��� ���� ����� �� �� ��#��� � � & ���������� �� � � '�� #�������� �# � � <� # ��������)

���������� ���� 1� ��� � ��� �� � ��� 1) K�� K���� #��������� ��� ���������� �� � � ���� ������ �# � � �������� ������������ ��� �'�������) � �� ������� ��� ��������� �" D$9RD�#���� ��� D$�$ #��� �" ������� #���� !������ �� <)()� ��� ��/LE*L�� !���� �� +)E)

" ����

����� K$ 5,--�6 � ��� �� ���� ����� ��������� ��� ���!��!��� �� �����" �# � ��!���� #���� F � ���� �����" ��� ������ #�������������� ��� �!") C���� =�� =�F.=

����� K$ 5,--�6 � ��� �� �������� ������ �����" ��� ��� �����)$ ����� S E� � /�� O���

(�� �� <1 5,-=,�6 L����* ��� ����������'� ��M������� �� ���� �#�;"!�� ����������� �� � � <����� '� �� �# � � !���� �������0����) (�� (� 51���� E� �6 ,�,� �-F��-

(�� �� <1 5,-=,�6 <����� �# � � !���� ������������ ��� ���*����� �� � � ������" ���� � �� � ��;������ ��� ) $����� ,-=,����F��.

(�� �� <1 5,-=�6 ������� ��������� �# � � <����� '� �������������� ���� #��� ������ � ��! � �# � � ������� &���'�) &�� ��� ,.��.F.�

(�����! �� 9� ����� K$ 5,-0=6 � ��� �� %��!��!��� " �##��� ����� '� �� �� � � ���� ������� D����� ������) <�������,,�� -�-F-=4

(�����! �� 9� �� ��� �� 1��� $� :������ � 5,--�6 G������������!��!��� " �� � � & ��������� ��� ���������� �� /��� �������� ���� ���� ���� � ���� �# ��!� B� ��� ��) &��� /�� ���� ��� D�� 0-� ==��F==�0

(�����! �� 9� �$�M���" ��� ����� �& 5,--.6 :�� ���!��!*��� " ��� �� ��� �� � ����� &����������� #��� � � &���������� ���) L�� N�� �� �+� ������� $� 5���6 � ��� �� �"���*������ �# '� ��) �������� &����� ��� +��!�� $� �#)� �� ,,�F,�0

(������� < 5�6 (������� �� !��� 8�� �� �� ����� -�.����� ������� '� �����! � �� �!�� ���� ���!�) 9�� ����� 4�� ��=F��.

(������� <� �� �" + 5�6 <������ �������� #�� ������ �������� �� � � ������ �� �'����� �� �'� � #���� �� �����������) K 9;��� (�� 9�� 5�� �����6

(��!!� K$ 5,-.�6 ����� %��!��!��� ") �<���*E� � /�� O���(����� �$ 5,-.�6 � ������� �� � � ������ ��������� �������*

������ �# � � <� # �# $� �#�����) D��������" ���%��� &�����������

$ �� ��� 9�� ��! �1 5,-.,6 $ ��������� �# � � !��" '� �� ��� � !���� �����������) $����� ,-.,� ,.,F,.�

+���% �K� ������ </ 5,--�6 � � � ��� � � ��������� ������������# � � -*�+� ��� � ��� ������� �� ������� �� ��� �����%����� �����"� ���� !��" '� �� 5!���� �����������6) &��� /�� ���� ���D�� 0-� ��0-F��-�

+�� �� K1� � ���� 9$ 5,-=6 �"�������� � � ���!��!��� "�# (��� $� �#����� ��� �������� ����) � � <�� �!�� E�����" �#(��� $� �#����� ��� ��� ����� :�����) �"�� T�� -� �.F-,

:� �������� K 5,-046 $��'����� ����� �� � " �!������ �� ������� ����! � � ���������) 9�� ����� �-� .0�F.-,

:�� �� &�� ������ </ 5,--.6 ����� ���� ��2����� ��M������������� #� " �;� ��� ����������'� ��������� �� � ���� ���������*���� �# !����� '� ��*J������ +� "���!������ 5��*J+E�6)K 9;� (�� �� ,0�-F,04

E���� $J 5,-�06 $ ��!�� �� '� #���� �# ������� /��� ������������ ���� ��� � ��!�� �� ����� �����������) K �� ��� .��4-F�0�

E���� $J 5,-=6 � � ���!��!��� " �# (��� $� �#����� ��� ����*���� ����� ���� LL) � � ������ ����������� �# � � ����� �����)�"�� T�� -� ,��F,�.

E����� ��� � ����� � ������� 1& 5,--�6 9��������� �# ��� ��# !��� 8�� #��� +/� ��2����� ����) <������� ,��� 40�F40-

K� �� <$� ����� K$ 5,--06 � ����������� ������" �# !��������������� �� � � ����������� #��� � � ����� ������ �"��� ����� !���) � (�� 9�� ,4� ,�0,F,�-

�� �� 1C� &� ���� �� 5,--46 $��������� ��� �������"�������� ����! L���*1��� &���'� ������8" '� ��) &��� � ���J��� ( �=� ��-F��=

�"�� � 5,--�6 9�� ����� �# ����� ������ +/� �� '� ��) (��*� �� � (�� :�� �� �� ,F�0

� �� +K� J�� �/ 5,-.�6 <���� �� ������ ������ '� �� �# $� �*#�����) 5:�� (� ���� /�) ,4.6 +��������� �# :�� ��� <����C�� ���� $� �#

/�� 5,-0.6 � ��� �� ��� �������" !�������) $� ����� D�����*���" &����� /�� O���

/� ��� K� 5,--�6 :�� �� �# � � ��� �) 1� �"� /�� O���&������ � 5,-0.6 <������ ��M����������� �# �������� <� # �# $� �*

#����� ��� &���'� ����� ����� ���� ������ �# !���� ������-�.����) $����� ,-0.� ,,F,��

P������ K� K���� 1K 5,---6 ��� �'������ ������� � �� ���!�� ����*�����'� ������� �� ����������"!��� '� ��) $����� ,---�,-,F,-=

��.

��%�� K� ��%�� � 5,--.6 +���& ������� �)� � ���� ��#����������!� #�� �;������� �� ��� �� ���� ����� !������� ��� "���)$�(LC� ,�� �.F�,,

�������� K� :����� 9:� ������� � 5,-0-6 � ��� �� � ����! � � ��������" ����� � ��� ���) $� � �����! E����� J��������"�$� � �����! E������ /O

�� ������ �� N��M�� K*� ����� � +� 9;��@�� J 5,--.6 �� �2���������� ,)� �� �;� ������" ���� ����� !������� ��#����� ����*�������) +��������� �# ��� ���� �!"� D��������" �# <����������%�� ���

���M��� +J 5,--06 &�D& � " �!������ ��� "��� ����! ��������")G������ �))�=�� ���� ������ L����������� 1�� ��!���� +$

����" �� (������� � <� (������� < 5�6 ���������� !��� 8�� ������������ ���������� �� �������� &���'� C���� ��� ��� �# $����%

���� ������ �# � ���# '� �������� ����� ��������) 9�� �����4�� =4�F=4-

� ����� +�� :��� �" J�� N������ �/ 5�6 ���# '� �� �# � ���� �# $����%) � � ����" � ��� '� �� �# � � <� # �# $� �#�����)D��������" �# ��;�� &����� ������

D���� +9� ��� " �1 5,--.6 & " �!��" �# � � ����*� ��� �� �%���� 5& �"������������ 1�6 ����� �� ��+/� ��2�������������� #�� � ���������� �� �����" �� (��� $� �#�����) � & " �!���� 9�� 0� ,�F,,�

1� ��� (1 5,-=6 � � ������������ ��� �@������ �# � � ������ '� #���� �# � � <� # �# $� �#�����) �"�� T�� -� ,��F,��

1����� 1 5,--=6 <�������) L�� ���� EK 5��6 � � ��� " ���!�� �#'� �� �� � � $� �#����� ������� ��!���) $�J$C:L 5$� �# $���C���� :�� L�����6� �� �� ��� �� ,�,�F,��4

��0