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Bol. R. Soc. Esp. Hist. Nat. Sec. Biol., 103 (1-4), 2009, 37-47. ISSN 0366-3272

Descripción y primera mención en España de cuatro especies de ciliados endo-biontes de Eisenia fetida (Savigny, 1826) (Annelida, Oligochaeta, Lumbricidae)

Description and first mention in Spain of four species of endobiont ciliates of Eisenia fetida (Savigny,1826) (Annelida, Oligochaeta, Lumbricidae)

Laura Espino Paisán, Pablo Quintela Alonso, Ramón Anadón y Soledad Ruiz AlvarezFacultad de Biología, Universidad de Santiago de Compostela, Campus Sur 15782. [email protected]

PALABRAS CLAVE: Endobiosis, Oligoquetos, Eisenia fetida, Ciliados astomátidos, Anoplophrya, Metaradiophrya, España.

KEY WORDS: Endobionts, Oligochaetes, Eisenia fetida, Astomatous ciliates, Anoplophrya, Metaradiophrya, Spain.

RESUMEN

Se han estudiado los protozoos ciliados endobiontes de la lombriz Eisenia fetida, de un criadero natural cerca de Santiago deCompostela (España), identificándose cuatro especies de los géneros Anoplophrya y Metaradiophrya (orden Astomatida). Este tra-bajo constituye la primera mención de dichas especies en España.

Anoplophrya lumbrici es ovoide con extremo anterior apuntado y posterior redondeado (longitud: 70-135 μm; anchura: 35-77), con unas 51 cinetias a cada lado, y 2-5 grandes vacuolas contráctiles. Se observó en la molleja e intestino anterior y medio dela lombriz.

Anoplophrya vulgaris es la especie mas abundante, con cuerpo cilíndrico (longitud: 75-150 μm; anchura: 34-75), unas 55cinetias en cada cara, y vacuolas contráctiles más pequeñas y numerosas que en A. lumbrici. Mostró la misma distribución en E.fetida que A. lumbrici.

Metaradiophrya lumbrici tiene un cuerpo rectangular (longitud 103-204 μm; anchura 69-93 μm), con un aparato de fijaciónconstituido por un gancho externo y una rama interna situado en su extremo anterior, 83 cinetias dorsales y 54 ventrales, y 5-12vacuolas dispuestas en dos hileras. Se encontró en la parte anterior e intermedia del intestino.

Metaradiophrya varians (longitud 98-203 μm; anchura 60-115 μm) es similar a M. lumbrici pero su aparato de fijación tienedos ramas internas, una derecha gruesa y una izquierda en forma de aguja. Muestra 80 cinetias dorsales y 46 ventrales, y 6-15vacuolas contráctiles. Su distribución en el hospedador es similar a la de M. lumbrici.

ABSTRACT

We studied the endobiont ciliate community of the earthworm Eisenia fetida collected from a natural hatchery of OCastiñeiriño, near Santiago de Compostela (Spain). Four endobiont species of ciliates belonging to the order Astomatida werefound: Anoplophrya lumbrici (Fig. 1-1), A. vulgaris (Fig.1-2), Metaradiophrya lumbrici (Fig.1-3) and M. varians (Fig. 1-4). Themorphological and biometrical characteristics of these endobiont species are provided (Table I), as well as their distribution inthe host gut. This is the first description of these species in Spain.

Anoplophrya lumbrici (Plate I, fig.1-5) showed ovoid shape with pointed anterior end, rounded posterior end and curvedlateral edges (length: 70-135 μm; width: 35-77). About 51 kineties were counted on each side (Table I). The macronucleus wasribbon-shaped and the small micronucleus was located opposite to a longitudinal row of 2-5 big contractile vacuoles. An opaquematerial was found in the cytoplasm of A. lumbrici (Plate I, fig 5), and some specimens contained huge accumulations of bacte-ria. A. lumbrici was observed in the gizzard, anterior and medium intestine of the earthworm.

Anoplophrya vulgaris (Plate II, fig. 1-4) was the most abundant species. The body was cylindrical, with rounded anterior andposterior ends and parallel lateral edges (length 75-150 μm and width 34-75 μm). About 55 kineties were counted on each side(Table I). The macronucleus and micronucleus are similar to A. lumbrici. Contractile vacuoles were smaller than those of A. lum-brici, and formed generally a longitudinal row of 4-7 elements or showed different arrangements (Plate II, fig. 2-4). A. vulgarisshowed the same distribution as A. lumbrici in the digestive tract of E. fetida.

Metaradiophrya lumbrici (Plate II. Fig. 5-6, Plate III, fig. 1) was rectangular in shape, with a pointed anterior end that lodgedthe typical genus attachment apparatus: an external hook and one or two internal branches. M. lumbrici showed only one internalbranch oriented towards the right side.. Length was 103-204 μm and width 69-93 μm. Specimens showed 83 dorsal and 54 ven-tral kineties (Table I). The macronucleus was ribbon-shaped and the micronucleus was close to it. Contractile vacuoles (5-12) weredisposed in two longitudinal rows on each side of the macronucleus. M. lumbrici was found in the anterior and intermediate partsof the intestine.

Metaradiophrya varians (Plate III, fig. 2-5) was similar to M. lumbrici in shape and size but showed an attachment appara-tus with external hook and two internal branches, a main right branch and a very thin needle-shaped branch oriented towards theleft side. Length was 98-203 μm and width 60-115 μm. Specimens showed 80 dorsal and 46 ventral kineties (Table I). Contractilevacuoles had the same distribution as in M. lumbrici but were more numerous (6-15). The distribution in the host was the same asthat of M. lumbrici. We have found no evidence of encystment in each of the four species.

Bol. R. Soc. Esp. Hist. Nat. Sec. Biol., 103 (1-4), 2009.

1. INTRODUCCIÓN

El estudio de los ciliados asociados a los Ané-lidos oligoquetos ha sido un tema recurrente a lolargo de la historia de la Protozoología. Las prime-ras descripciones de géneros datan de finales delsiglo XVIII y principios del XIX (PUYTORAC,1954) pero a pesar de lo dilatado de su estudio enel tiempo, el conocimiento de los endobiontes deOligoquetos, sus características, ciclos de vida,taxonomía, etc. sigue siendo incompleto y portanto constituye un amplio campo de investigación.

Dentro de los endobiontes de Oligoquetosdestaca por su importancia el orden Astomatida.Los astomados son ciliados endobiontes estrictosy únicamente un grupo, la familia ArchiastomidaeFOISSNER 1976, integrada por la especie Archias-tomata adami FOISSNER 1976, es de vida libre.Aunque sus principales hospedadores son Anéli-dos (Oligoquetos, Poliquetos e Hirudíneos), hayastomados asociados a turbelarios, crustáceos,equinodermos, lamelibranquios y anfibios.

La característica más llamativa de estos cilia-dos es la ausencia de un aparato bucal. La formadel cuerpo suele ser sencilla, alargada u ovalada, ymuchas veces tienen aplanamiento dorsoventralcomo consecuencia de la adaptación al medio enel que viven, que generalmente es el aparatodigestivo del hospedador. Todo el ciliado está den-samente cubierto de cilios y en varios grupos exis-ten estructuras esqueléticas con función de apara-to de sujeción. En general, el orden Astomatida esun grupo de difícil estudio ya que no se ha encon-trado una forma de cultivar a estos ciliados y sedepende para su análisis de los ejemplares vivosrecién extraídos del hospedador.

En este estudio se ha escogido como hospe-dador a la lombriz de tierra Eisenia fetida. Estaespecie pertenece a la familia Lumbricidae, untaxón tradicionalmente estudiado en busca deendobiontes y que tiene una amplia distribuciónen zonas templadas.

2. MATERIAL Y MÉTODOS

A lo largo de un año se estudiaron 295 ejem-plares de la lombriz de tierra Eisenia fetida proce-dentes de una población natural situada en O Cas-tiñeiriño (42º 51’48’’ N, 8º 32’18’’ O), en losalrededores de Santiago de Compostela. Cadamuestra con su propio sustrato (una mezcla de tie-rra y estiércol de conejo y gallina) se conservó encajas de plástico perforadas en una cámara frigo-rífica a una temperatura de 4ºC. Para mantener lahumedad se agregó agua cuando el sustrato lo

requería. Las lombrices se anestesiaron con vapo-res de cloroformo (Panreac) empapado en unatorunda, extrayéndose el tubo digestivo y diso-ciándolo por partes en una gota de agua. La gotase observó en un microscopio óptico con cámarade video acoplada, lo que permitió grabar algunosejemplares en vivo.

Las observaciones microscópicas sobre indi-viduos fijados se realizaron utilizando una fijacióncon formol 10%, y coloración con verde de meti-lo (Merck; 0,5% en ácido acético al 1%), azul detoluidina (Analema; 0,01% en agua) o tinciónHemacolor® (Merck) para observar los núcleos, yel método del nitrato de plata en seco de KLEIN

(1927) para estudiar la infraciliación somática.Las observaciones y fotografías se han reali-

zado en un fotomicroscopio Olympus BX51,dotado de contraste diferencial de interferencia(DIC) y contraste de fases, conectado a una cáma-ra fotográfica digital Olympus DP12 U-TV1X-2.

3. RESULTADOS

En la población en estudio se ha encontradouna comunidad endobionte formada por especiesde dos géneros de astomados: el género Ano-plophrya y el género Metaradiophrya.

Género Anoplophrya (Filo Ciliophora; SubfiloIntramacronucleata LYNN, 1996; Clase Oligohyme-nophorea PUYTORAC ET AL. 1974; Subclase Asto-matia SCHEWIAKOFF, 1896; Orden AstomatidaSCHEWIAKOFF, 1896; Familia AnoplophryidaeCEPÉDÈ, 1910; Género Anoplophrya STEIN, 1860)

Se han encontrado dos especies: Anoplophryalumbrici (Fig. 1-1) y Anoplophrya vulgaris (Fig.1-2). Ambas presentan las características del género:ciliados carentes de estructura bucal y de aparatode sujeción apical, superficie cubierta de cilios delongitud uniforme, forma general ovalada yvacuolas contráctiles distribuidas a lo largo delciliado. El macronúcleo tiene aspecto de una cintaalargada que recorre el ciliado del extremo ante-rior al posterior. El micronúcleo es pequeño (2-3μm de diámetro) y se encuentra a mitad de la lon-gitud del ciliado cercano a la membrana plasmáti-ca y en el lado opuesto a aquel que ocupan lasvacuolas contráctiles. La división es por fisióntransversal binaria y nunca se forman cadenas demás de dos individuos. La Tabla I resume los valo-res encontrados para esas especies.

Anoplophrya lumbrici SCHRANK, 1803 es unaespecie descrita en numerosos hospedadores de lafamilia Lumbricidae: Lumbricus herculeus (PUYTO-RAC, 1954), Lumbricus terrestris (LOM, 1961),Lumbricus festivus (DIXON, 1975), Lumbricus

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rubellus (MÉNDEZ-FRANCO & LÓPEZ-OCHOTERENA,1977), Allolobophora terrestris (PUYTORAC, 1954),Dendrobaena subrubicunda (LOM, 1961), Dendro-baena rubida (DIXON, 1975), Nicodrilus terrestris(PUYTORAC, 1972) y Eisenia fetida (DIXON, 1975).Tiene, aparentemente, una baja especificidad por elhospedador. Se ha estudiado una población forma-da por treinta y seis ejemplares.

La forma del cuerpo es ovalada, con los bor-des laterales curvos, el extremo anterior ligera-mente apuntado y el extremo posterior redondea-do (Fig. 1-1, Lám. I, fig. 1). El cuerpo tiene unalongitud de 70-135 μm (media=95 μm) y unaanchura de 35-77 μm (media=56 μm). La anchuramáxima se encuentra aproximadamente en lamitad del cuerpo o ligeramente desplazada haciael extremo posterior. La media de la relaciónanchura/longitud es de 0,57. En muchos casos estevalor es superior a 0,60 y en ninguno de ellosmenor de 0,50. Presentan 51 cinetias en cada carapor término medio que recorren el cuerpo desde el

polo anterior al posterior sin interrupción, conflu-yendo en los polos (Lám. I, fig. 2). Las vacuolascontráctiles se disponen en una fila longitudinal aun lado del macronúcleo, que siempre es el opues-to al lado que ocupa el micronúcleo. El número devacuolas oscila entre 2 y 5, y suelen ser grandes ybien visibles, con un diámetro en muchos casossuperior a 10 μm (Lám. I, fig, 3). En algunos casosse han encontrado bacterias en el citoplasma,puestas de manifiesto con facilidad mediante tin-ciones con Hemacolor (Lám. I, fig. 4).

Una particularidad no descrita en la biblio-grafía es la presencia en algunos ejemplares de unmaterial opaco muy abundante en el citoplasma,que se dispone generalmente rodeando el macro-núcleo e irradia desde él hacia el ectoplasma(Lám. I, fig. 5). Apareció en pocos ejemplares enla población y siempre en casos de elevada infes-tación del tubo digestivo.

Esta especie se ha encontrado en el buche, elintestino anterior y el intestino medio, siendo másfrecuente en el intestino anterior.

Anoplophrya vulgaris PUYTORAC, 1954 esuna especie que solo se ha descrito en Eisenia feti-da. Se ha estudiado una población de sesentaejemplares ( Fig.1-2; Lám. II, fig. 1-2).

La forma del cuerpo es alargada, de bordeslaterales paralelos y bordes anterior y posteriorredondeados, lo que le confiere un aspecto cilín-drico mucho más acusado que en Anoplophryalumbrici. El cuerpo tiene una longitud de 75-150μm (media=103 μm) y una anchura de 34-75 μm(media=51 μm). La media de la relación anchu-ra/longitud se sitúa en 0,49. Los valores por enci-ma de 0,55 son raros y suelen corresponder a indi-viduos recién divididos. Presentan un númeroparecido de cinetias en las caras dorsal y ventral,55 por término medio, con una disposición longi-tudinal. Las vacuolas contráctiles oscilan entre 4-7 y se disponen generalmente en una fila longitu-dinal que recorre el ciliado del extremo anterior alposterior (Lám. II, fig. 2). Ésta es la disposiciónmás frecuente, aunque hemos encontrado unaserie de disposiciones no descritas en la bibliogra-fía que incluyen la sustitución de una vacuolaprincipal por dos o más de pequeño tamaño (Lám.II, fig. 3), la sustitución de una fila longitudinalpor una disposición de las vacuolas en zigzag(Lám. II, fig. 4), y la presencia de una fila de 3 a5 vacuolas grandes rodeada de una serie de vacuo-las más pequeñas.

Al igual que A. lumbrici, A. vulgaris se haencontrado en el buche, el intestino anterior ymedio, y es más frecuente en el intestino anterior.

Género Metaradiophrya (Filo Ciliophora;Subfilo Intramacronucleata LYNN, 1996; Clase

CUATRO ESPECIES DE CILIADOS ENDOBIONTES DE EISENIA FETIDA, ESPAÑA 39


Figura 1.–1) Anoplophrya lumbrici. Barra 25 mm. 2) Ano-plophrya vulgaris. Barra 25 mm. 3) Metaradiophrya lumbri-ci. Barra 70 mm. 4) Metaradiophrya varians. Barra 70 mm.Mn: macronúcleo. Mn: micronúcleo. Vc: vacuola contráctil.a: aparato de sujeción.

–Mn: macronucleus. mn: micronucleus. Vc: con-tractile vacuole. a: attachment apparatus.

Oligohymenophorea PUYTORAC ET AL. 1974; Sub-clase Astomatia SCHEWIAKOFF, 1896; Orden Asto-matida SCHEWIAKOFF, 1896; Familia Radiophryi-dae PUYTORAC, 1972; Género MetaradiophryaHEIDENREICH, 1935).

Se han encontrado dos especies del géneroMetaradiophrya en el tubo digestivo de Eiseniafetida. Al igual que el género Anoplophrya, care-cen de aparato bucal pero tienen un aparato desujeción en la parte apical. Son ciliados de forma


N Media/ Máximo/ Mínimo/ Desviación estándar/Mean Maximum Minimum Standard Deviation

Anoplophrya lumbriciLongitud/length 36 95 135 70 ± 15Anchura/width 36 56 77 35 ± 10

Anchura/longitud/ 36 0.57 0.72 0.50 ± 0.06Width/length

Nº Cinetias por cara/ 16 51 56 48 ± 3.3kineties by side

Nº Vacuolas/vacuoles 36 3 5 2 ± 0.9

Anoplophrya vulgarisLongitud/length 60 103 150 75 ± 14Anchura/width 60 51 75 34 ± 9

Anchura/longitud/ 60 0.49 0,63 0.38 ± 0.06Width/length



Metaradiophryalumbrici

Longitud/length 22 142 204 103 ± 24Anchura/width 22 80 93 69 ± 6



Metaradiophrya variansLongitud/length 19 141 203 98 ± 30Anchura/width 19 88 115 60 ± 15


Nº Vacuolas/vacuoles 19 10 15 6 ± 2

N: Nº de ejemplares (Nº of individuals). Longitud y anchura en µm (Length and width in µm


LÁMINA I/PLATE IFigura 1.–Forma general de Anoplophrya lumbrici. Pueden observarse tres vacuolas en fila. Ejemplar fijado con formol. Barra, 30

µm.Figura 5.–Morphology of Anoplophrya lumbrici. Note a row of three vacuoles. Specimen fixed with formol. Bar, 30 µm.Figura 2.–Cinetias en un ejemplar de Anoplophrya lumbrici. Tinción de Klein. Barra 20 µm.Figura 5.–Kineties from a specimen of A. lumbrici. Klein’s dry silver nitrate method. Bar, 20 µm.Figura 3.–Ejemplar de A. lumbrici observado in vivo. Puede verse claramente una fila longitudinal de tres vacuolas. Barra, 80 µm.Figura 5.–Specimen of A. lumbrici observed in vivo. Note a longitudinal row of three vacuoles. Bar, 80 µm.Figura 4.–Tinción Hemacolor de un ejemplar con bacterias en el citoplasma (asteriscos). Puede observarse el macronúcleo. Barra,

10 µm.Figura 5.–Hemacolor staining of a specimen showing bacteria in the cytoplasm (asterisks). Note the macronucleus. Bar, 10 µm.Figura 5.–Ejemplar in vivo mostrando material opaco (posibles acumulaciones de bacterias) en el citoplasma (flecha) rodeando el

macronúcleo. Barra, 50 µm.Figura 5.–Live specimen showing opaque material (possible accumulations of bacteria) in the cytoplasm (arrow) surrounding the

macronucleus. Bar, 50 µm

Tabla-I.–Características biométricas de cada especie endobionte–Biometric characteristics of the different endobiont species



LÁM. I / PL. I

rectangular con los bordes laterales paralelos y elextremo anterior apuntado, siendo el posteriorredondeado o rectangular, y tienen un fuerte apla-namiento dorsoventral. En una depresión ventraldel extremo anterior tienen un aparato de sujeciónformado por un gancho saliente y una o dos ramasinternas según la especie. El macronúcleo tieneforma de cinta alargada de 7 μm de diámetro yposición central, recorriendo prácticamente todala longitud del cuerpo del ciliado cerca de la partedorsal. El micronúcleo está situado en el ladoderecho del macronúcleo. La división se producemediante fisión binaria transversal y no se obser-va formación de cadenas de más de dos indivi-duos. El plano de división es subecuatorial. LaTabla I resume los valores encontrados para esasespecies.

Metaradiophrya lumbrici DUJARDIN, 1841(Fig.1-3; Lám. II, fig. 5) se ha citado como endo-bionte en Lumbricus rubellus, Lumbricus hercu-leus (ambas en PUYTORAC, 1954), Lumbricus cas-taneus (DIXON, 1975), Nicodrilus terrestris(PUYTORAC, 1972) y Eisenia fetida (HEIDENREICH,1935; WILLIAMS, 1942; MCMAHAN, 1975). Se haanalizado una población formada por veintidósejemplares.

El cuerpo tiene una longitud de 103-204 μm(media=142 μm) y una anchura de 69-93 μm(media=80 μm). Está densamente cubierto decilios de longitud uniforme, lo cual es característi-co de todos los astomados. Presenta por términomedio 83 cinetias dorsales y 54 cinetias ventrales.El aparato de sujeción está constituido por un gan-cho externo y una rama interna. El gancho tieneforma curvada, aspecto de garra y sobresale por laparte ventral (Lám. II, fig. 6). Su longitud mediaes de 12 μm. Es grueso, fácilmente visible y lesirve al ciliado para aferrarse a las paredes del

intestino del hospedador, donde habitualmentevive. Este gancho se une a una rama interna,orientada hacia el lado derecho del cuerpo delciliado (Lám. I, fig. 1). Dicha rama es gruesa, afi-nándose hacia el extremo, tiene una forma ligera-mente curvada y su longitud media es de 33 μm.Esta estructura recorre la parte superior derechade la depresión que se forma en la parte ventralanterior del cuerpo del astomado. Las vacuolascontráctiles son numerosas (entre 5 y 12) y se dis-ponen en dos filas irregulares a ambos lados delmacronúcleo. En cada fila suele verse una agrupa-ción anterior y otra posterior de vacuolas y en oca-siones se ven vacuolas grandes rodeadas de otrasmás pequeñas.

M. lumbrici se ha encontrado en el intestinoanterior y el intestino medio, siendo más frecuen-te en este último. En algún caso particular se hanencontrado ejemplares en la parte del intestinoposterior más próxima al intestino medio. Suelenser casos de gran infección.

Metaradiophrya varians PUYTORAC, 1954(Fig.1-4; Lám. III, fig. 2) fue descrita exclusiva-mente como comensal del intestino de Eiseniafetida (PUYTORAC, 1954). Se ha analizado unapoblación de diecinueve individuos.

En M. varians el cuerpo tiene una longitud de98-203 μm (media=141 μm) y una anchura de 60-115 μm (media=89 μm). Está densamente cubier-to de cilios y presenta por término medio 80 cine-tias dorsales y 46 ventrales (Lám. III, fig. 3). Elaparato de sujeción está formado por el ganchoexterno, con idéntica forma y función que en laespecie anterior y una longitud media de 11 μm,una rama interna derecha denominada rama prin-cipal, de forma ligeramente curva y 34 μm de lon-gitud y una segunda rama llamada rama secunda-ria, orientada hacia el lado izquierdo (Lám. III,



LÁMINA II/PLATE IIFigura 1.–Forma general de Anoplophrya vulgaris. Se observa el macronúcleo (flecha) y una fila longitudinal de vacuolas. Ejem-

plar fijado con formol. Barra, 40 µm.Figura 5.–Morphology of Anoplophrya vulgaris showing the macronucleus (arrow) and a longitudinal row of vacuoles. Bar 40 µm.Figura 2.–Ejemplar de A. vulgaris grabado in vivo. Las vacuolas (5) están dispuestas en una fila longitudinal. Barra, 100 µm.Figura 5.–Specimen of A. vulgaris recorded in vivo. Five vacuoles are arranged in a longitudinal row. Bar, 100 µm.Figura 3.–Variación en la disposición de las vacuolas. Las tres vacuolas superiores se disponen formando un triángulo (flecha).

Ejemplar in vivo. Barra, 100 µm.Figura 5.–Variation in the arrangement of vacuoles. The three upper vacuoles are arranged in a triangle (arrow). In vivo specimen.

Bar, 100 µm.Figura 4.–Ejemplar de A. vulgaris grabado in vivo con una disposición de vacuolas (10) en zigzag. Barra, 50 µm.Figura 5.–Specimen of A. vulgaris recorded in vivo with its ten vacuoles arranged in zigzag. Bar, 50 µm.Figura 5.–Metaradiophrya lumbrici. Ejemplar in vivo mostrando la forma general y disposición de vacuolas. Barra, 100 µm.Figura 5.–Metaradiophrya lumbrici. In vivo recording showing the morphology and distribution of vacuoles. Bar, 100 µmFigura 6.–Visión de perfil de un ejemplar de M. lumbrici fijado con formol. Puede observarse el gancho de sujeción proyectándo-

se hacia el exterior y la depresión ventral en la que se aloja el aparato. Barra, 20 µmFigura 1.–Lateral view of an specimen of M. lumbrici fixed with formol showing the hook from the attachment apparatus project-

ing to the outside and the ventral depression in which this apparatus lays. Bar, 20 µm.



LÁM. II / PL. II

fig. 4-5). Esta rama secundaria tiene forma deaguja y es más fina y menos visible que la ramaprincipal. La sola presencia de esta rama indicaque se trata de una especie diferente a la anterior-mente descrita. La disposición de las vacuolascontráctiles (Lám. III, fig. 5) es idéntica a laobservada en M. lumbrici, pero en un númeromayor, entre 6 y 15.

Metaradiophrya varians aparece en el intesti-no anterior y con mayor frecuencia en el intestinomedio de Eisenia fetida.

4. DISCUSIÓN

En este estudio describimos cuatro especies deastomados encontradas en una población de Eise-nia fetida. Otras especies de astomados descritascomo endobiontes de E. fetida no han aparecido eneste estudio. Estas especies son: Maupasella cepe-dei, M. algeriana, M. multistrata, Anoplophryamarylandensis, A. oblonga, A. foetida y Metara-dioprhya gardneri.

Las características morfológicas de los ejem-plares de A. lumbrici encontrados en la poblaciónde O Castiñeiriño coinciden con las señaladaspara esta especie por PUYTORAC (1954). Existeúnicamente una referencia a la presencia de Ano-plophrya lumbrici en el intestino de Eisenia fetida(DIXON, 1975), en contraste con las múltiples refe-rencias de otras especies de ciliados (PUYTORAC,1954). Dado que la comunidad endobionte de esteoligoqueto ha sido muy estudiada, se puede dedu-cir que la asociación de Anoplophrya lumbrici conEisenia fetida es poco frecuente.

En casos de alta infección, algunos ciliadosmostraban unas estructuras opacas dentro del cito-plasma que forman tabiques extendidos desde el

macronúcleo hasta las inmediaciones del ectoplas-ma, característica sobre la que no hay referenciaen la bibliografía. Muchos autores, entre ellosPUYTORAC (1954), han mencionado la presenciade bacterias en el citoplasma de algunos astoma-dos. En el caso concreto de Anoplophrya lumbriciel citado autor menciona que la presencia de bac-terias puede oscilar entre la ausencia de las mis-mas o el llenado total del citoplasma. HOVASSE(1945) también menciona la presencia de bacte-rias en el citoplasma de Anoplophrya lumbrici y loconsidera un fenómeno muy frecuente, aunque lacantidad de bacterias es variable. Las masasobservadas en este estudio en algunos ejemplaresde Anoplophrya lumbrici podrían ser agrupacio-nes de bacterias que corresponderían a un estadode llenado total. Estos casos de llenado sólo apa-recen en lombrices con un grado de infección alto(más de 30 protozoos por tramo de intestino).HOVASSE (1945) y PUYTORAC (1954) indican quela presencia de bacterias cumple un papel en laalimentación del ciliado y por tanto, un desarrollocomo el que se da en los ejemplares descritospodría ser un indicativo de abundancia de nutrien-tes que permitiría también el desarrollo de pobla-ciones grandes de estos ciliados.

Anoplophrya vulgaris es una especie que sólose ha encontrado infectando el tracto digestivo deEisenia fetida, por lo que muestra una alta especi-ficidad por este hospedador. FERNÁNDEZ-GALIANO& PÉREZ-UZ (1990) proponen que Anoplophryavulgaris, que no aparece en Eisenia fetida en suestudio, es propia de Eisenia andrei, mientras queAnoplophrya foetida, que ellos describen, es unaespecie nueva que infecta exclusivamente a E. feti-da. Sin embargo en el presente estudio se hanencontrado ejemplares con las características deAnoplophrya vulgaris en Eisenia fetida, siendo la



LÁMINA III/PLATE IIIFigura 1.–Visión en detalle del aparato de sujeción de M. lumbrici, mostrando el gancho externo y rama derecha interna. Tinción

de Klein. Barra, 30 µm.Figura 5.–Detailed view of the attachment apparatus from M. lumbrici, showing the external hook and the internal right branch.

Klein’s dry silver nitrate method. Bar, 30 µmFigura 2.–Visión in vivo de un ejemplar de Metaradiophrya varians. Se puede observar el macronúcleo longitudinal ligeramente

desplazado hacia un lado. Barra 80, µm.Figura 5.–In vivo view of an specimen of Metaradiophrya varians showing the longitudinal macronucleus slightly displaced to one

side of the ciliate. Bar, 80 µm.Figura 3.–Ejemplar de M. varians en visión ventral. Tinción de Klein y observación con DIC. Barra, 30 µmFigura 5.–Specimen of M. varians in a ventral view. Klein’s dry silver nitrate method and DIC. Bar, 30 µm.Figura 4.–Aparato de sujeción de M. varians en visión ventral. Se pueden observar el gancho de sujeción, la rama principal dere-

cha y la rama secundaria izquierda (flecha). Tinción de Klein. Barra, 30 µm.Figura 5.–Attachment apparatus of M. varians in ventral view showing the hook, the main branch and the secondary left branch

(arrow). Klein’s dry silver nitrate method. Bar, 30 µm.Figura 5.–Aparato de sujeción de M. varians en visión dorsal y vacuolas. Grabación in vivo con microscopía de contraste de fases.

Barra, 30 µm.Figura 5.–Attachment apparatus of M. varians in a dorsal view and vacuoles. In vivo recording with phase contrast microscopy.

Bar, 30 µm.



LÁM. III / PL. III

más abundante de las dos especies del géneroencontradas en esta lombriz. Por tanto, A. vulgarisaparece en Eisenia fetida y no es exclusiva de E.andrei.

Los datos morfológicos obtenidos de Metara-diophrya lumbrici (Tabla I) concuerdan en líneasgenerales con los mencionados en la bibliografía(HEIDENREICH, 1935; DALE BEERS, 1938; WILLIAMS,1942; PUYTORAC, 1954, 1972; MCMAHAN, 1975).La presencia de M. lumbrici en el intestino de Eise-nia fetida es relativamente frecuente (HEIDENREICH,1935; WILLIAMS, 1942; MCMAHAN, 1975). Portanto, nuestros datos añaden una mención a estaasociación en lombrices españolas.

PUYTORAC (1954) menciona que el aparato defijación puede tener una rama interna izquierdacomplementaria, corta (15 μm), aplanada y pocovisible. Ésta no se considera una rama secundariaya que no se unen a ella elementos citoesqueléti-cos que sirven de sujeción al aparato. En los ejem-plares estudiados no se ha encontrado rastro deuna prolongación del aparato de sujeción haciauna rama izquierda, ni siquiera en aquéllos teñi-dos en los que resulta más fácil la observación deuna estructura semejante. En los demás aspectos,el aparato de sujeción en nuestros ejemplarescoincide con el descrito en la bibliografía paraesta especie.

HEIDENREICH (1935) describe movilidad en elgancho, aunque no incluye esquemas ni figuras decómo ésta es posible. DALE BEERS (1938), en sudescripción de Metaradiophrya asymmetrica,señala que no ha observado en ningún momentoevidencias de movilidad o de articulación entre elgancho y la rama portadora. PUYTORAC (1954)basándose en la observación de la estructura defibras que sostienen el gancho y en el esquema delaparato de sujeción completo propone que puedehaber pequeños movimientos de proyección yretirada del gancho, pero son movimientos de bajaamplitud. En los ejemplares observados no se hanhallado evidencias de una articulación del ganchoni de movimientos de ningún tipo entre el ganchoy la rama de sujeción.

PUYTORAC (1954) describe en 21 ejemplaresvarios estadios de formación de la rama secunda-ria en Metaradiophrya varians, desde un pequeñotrozo (encontrado en 3 ciliados de estos 21), hastauna media rama (6 ejemplares) o la rama comple-ta (12 ejemplares). En este estudio, incluso enejemplares pequeños (120 μm de largo), se haencontrado la rama en toda su longitud. El mismoautor ha encontrado en varios ejemplares una granvacuola semiesférica bajo el gancho, característi-ca que no se ha observado en ninguno de los cilia-dos de este estudio.

LOM (1961) encontró en la parte posterior delintestino de un oligoqueto, posiblemente del géne-ro Lumbricus, formas prequísticas correspondien-tes a Metaradiophrya lumbrici. Según la descrip-ción que hace, el cuerpo toma una forma esféricacon un diámetro de 80 μm y se forma una gruesamembrana quística. Sin embargo, aún se puedeapreciar la estriación de la película y el aparato desujeción. Estas características coinciden tambiéncon otros trabajos sobre enquistamiento en Ano-plophrya brasili (TSANG-TSO-RUN, 1931) en losque se encuentra que la célula adopta una formaesférica pero no pierde ni la estriación ni las vacuo-las contráctiles. Más recientemente, FERNÁNDEZ

GALIANO & PÉREZ UZ (1990), han encontradoquistes de una nueva especie del género Ano-plophrya (A. foetida) en muy bajo número y mues-tran fotografías del mismo, cuyas característicascoinciden con los patrones dados por TSANG-TSO-RUN y LOM: reducción del tamaño y adquisición deforma redondeada y de una cubierta gruesa, en estecaso mucosa. En nuestro estudio no se han encon-trado formas prequísticas ni quistes en ninguna delas cuatro especies de astomados.

Las descripciones de Metaradiophrya variansy Metaradiophrya lumbrici de este trabajo cons-tituyen la primera cita de especies del géneroMetaradiophrya en España. Las descripciones deAnoplophrya lumbrici y Anoplophrya vulgarisconstituyen, asimismo, la primera mención deestas especies en España. Aunque las característi-cas morfológicas observadas en esos ejemplares,especialmente el número de cinetias observadas(Tabla I), son consistentes con los datos publica-dos en otros trabajos, futuros estudios molecularesdeberían confirmar esas observaciones. En refe-rencia a especies como A. lumbrici o M. lumbrici,encontradas en una amplia variedad de hospeda-dores y en distintas áreas geográficas (Francia,República Checa, México, España), estudiosmoleculares sobre ejemplares procedentes de dis-tintas áreas y distintos hospedadores deberíantambién confirmar si se trata de una sola especie obien de morfotipos similares pertenecientes aespecies diferentes.

Recibido el día 19 de junio de 2007Aceptado el día 22 de junio de 2009

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