biologia ppt - dna genoma

8/14/2019 Biologia PPT - DNA Genoma

1/25

DNA FINGER PRINT

PROF. ALEXANDRE S. OSRIO


2/25

GENOMA NUCLEAR


3/25

MICROSSATLITES

Seqncias hipervariveis (tambm chamadaspolimrficas) repetitivas de 1 a 4 pb com distribuio aolongo do genoma.

O polimorfismo destas seqncias resultado de

diferentes rearranjos envolvendo segmentos de DNA detamanhos diferentes. Herana Mendeliana (os filhos sempre recebem metade

dos alelos de origem materna e metade de origempaterna).


4/25

MICROSSATLITES

Exemplos de seqncias de microssatlites: Repetio de 1 base:GTAAAAAAAAAAAAAAAGGAT Repetio de 2 bases:GTCACACACACACACACAGGAT (dinucleotdeo)

Repetio de 3 bases:GTCACCACCACCACCACCACGGAT (trinucleotdeo) Repetio de 4 bases:GTCAGACAGACAGACAGAGGAT (tetranucleotdeo)

- Polimorfismos so devidos s diferenas no nmero de repeties- So tambm conhecidos como short tandem repeat(STR).- O nmero de repeties em seqncia pode variar, sendo chamadas

de VNTRs (Variable Number of Tandem Repeats = nmero varivelde repeties em seqncia) .


5/25

IMPRESSES DIGITAIS DO DNA(DNA FINGERPRINTS)

O QUE SIGNIFICA?

Com base no estudo de uma bateria de 12-20 microssatlites, possvel obter perfis genticos praticamente indivduo-especficos,

muito teis na investigao de paternidade, identificao de vtimase criminosos.

TCNICAS

RFLP (Restriction Fragment Lenght Polymorphism). PCR (Polymerase Chain Reaction).


6/25

Polimorfismo de Comprimento deFragmento de Restrio

1) Coleta de amostras biolgicas que podem sersaliva, sangue, esperma e cabelo com raiz, entreoutros.

2) Extrao e purificao do DNA.

3) Corte com enzimas de restrio (tesourasmoleculares que reconhecem e cortam seqnciasespecficas do DNA).4) Eletroforese: onde, atravs de uma correnteeltrica, so separados os fragmentos de DNA por

tamanho.A partir da, formada uma espcie de cdigo debarras que a identificao individual eintransfervel de cada indivduo.


7/25

As enzimas de restrioFazem parte de um sistema da clula bacteriana denominado

sistema de modificao-restrio. Este sistema consiste numaendonuclease de restrio.

O nome dado a enzimarefere-se ao organismo deonde foi isolado. A primeiraletra representa o gnero eas outras duas a espcie,seguido de um algarismo

romano (ou outra letra) queindica a ordem dadescoberta ou a linhagemda qual foi isolado.

Stios de reconhecimento, modificao e clivagem poralguns enzimas de restrio

Enzima Local de restrio Organismo de origem

EcoRIEscherichia coli

HindIIIHaemophilus influenza

SmalSerratia marcescens


8/25

Enzimas de restrioUma enzima de restrio ou endonuclease derestrio um tipo de nuclease que cliva uma

cadeia dupla de DNA sempre que identificar umasequncia especfica de 4 a 8 pares de bases queseja o local de restrio da enzima (Smith &Wilcox, 1970).

As seqnciasreconhecidasapresentam nasduas cadeiascomplementaresseqncias idnticasmas invertidas

palndromo.


9/25


10/25

PCR REAO EM CADEIA DEPOLIMERASE

Aquecimento do DNA a ser amplificado a temperatura de 94C por1 minuto, o que provoca separao da dupla hlice. Depois, com atemperatura mais baixa, so empregadas as polimerases, queatuam em cada uma das cadeias do DNA, complementando ospares de bases.

A cada ciclo, a quantidade de DNA-alvo duplicada, de modo que

em 10 ciclos obtm-se 1024 vezes mais DNA-alvo; em 20 ciclos,cerca de 1 milho de vezes mais DNA-alvo. Propicia um aumento na eficincia da anlise de material gentico Polimerases so enzimas que ocorrem nas clulas e catalisam

reaes de polimerizao (formao de molculas de cadeiaslongas)

Pela tcnica PCR promove-se a duplicao de trechos do DNA invitro.


11/25

PCR


12/25


13/25

SLP (single-locus probe)


14/25

VISUALIZAO DO DNA

MLP: detecta vrios segmentos deDNA repetitivo localizados emmuitos cromossomos. O padroobtido consiste emaproximadamente 20 a 30 bandas.Por isso, a probabilidade de duas

pessoas tomadas ao acasoapresentarem todas as bandasexatamente com a mesma posio extremamente baixa (1:10trilhes).


15/25

MLP (multi-locus-probe)


16/25


17/25


18/25


19/25


20/25


21/25


22/25

RESULTADOS DE TESTES

Mary Higgins foi violentada no Central Park em Nova York. Trssuspeitos foram presos. O DNA revelou o verdadeiro agressor.


23/25

RESULTADOS DE TESTESO assassinato de Jon Bennet Ramsey: um crime sem soluo?

Tristeza ou remorso ?


24/25

RESULTADOS DE TESTESEm 1987: casal de noivos Matthew Brock e Kelly Lynn Perry(tambm estuprada) achado baleado na cabea (bala de riflecalibre 30) em Rodman Dam, rea de recreao na Flrida.Principais suspeitos: os adolescentes Randall Scott Jones e ChrisReesh.


25/25

biologia ppt - dna genoma

Documents