CRYPTOCOCCUS

TÜRLERĠNĠN

ĠDENTĠFĠKASYONU

Süleyha HĠLMĠOĞLU POLAT

Ege Üniversitesi Tıp Fakültesi

Tıbbi Mikrobiyoloji Anabilim Dalı

Cryptococcus türleri

• ≈ 38 – 40 tür

• İnsanda infeksiyon etkeni:

- C. neoformans

- C. laurentii

- C. albidus

- C. uniguttulatus

- C. adeliensis

- ……………..

Cryptococcus neoformans

• 4 serotip ?

- C. neoformans var. neoformans

Serotip A, D, AD

- C. neoformans var. gattii

Serotip B, C

- C. neoformans var. grubii - Serotip A??

Mikrobiyolojik inceleme için

gelen örnekler

• Beyin Omurilik Sıvısı (BOS)

• Balgam

• Kan

• İdrar

• Prostat sıvısı

• Doku

BOS’ta Cryptococcus

• Her BOS örneğinden mutlaka:

- Mikroskobik inceleme yapılmalı

* Direkt

* Çini mürekkebi

- Kriptokok antijeni aranmalı

BOS’ta Cryptococcus

Çini mürekkebi Kalkoflor beyazı

BOS’ta Cryptococcus

antijeni

Olumlu Olumsuz

• Deri kazıntı örneğinde çini mürekkebi

ile kapsüllü maya blastosporları

Kan kültürü şişesinden hazırlanan

Gram preparasyonda

Cryptococcus

KültürMutlaka:

Ġki Sabouraud-dekstroz agar (SDA),

siklohekzimitsiz

(26 ve 35 oC)

Bir Staib agar

(26 oC)

Bir Kanlı agar’a ekim

(35 oC)

*** Örnek miktarı yeterli ise olabildiğince fazla SDA

plağa ekim yapılması üretilme şansını artırır

Kültür• Sabouraud-dekstroz agar (SDA)

- 30-35ºC (≥ 37 oC’de daha yavaş)

* C neoformans 37 oC’de ürer – patojenite

faktörü!!

- 24-48 saat

- Krem renkli - Mükoid koloni → Ġlk kuşku !!!

Kuşkulu maya kolonisi identifikasyonu

Kuşkulu koloni

Germ tüp testi

Pozitif: Candida albicans Üre hidrolizi testi

Olumsuz Olumlu

Kuşkulu maya kolonisi identifikasyonu

Üre hidrolizi testi olumsuz

Pirinç unu Tween 80 agar

Klamidospor

Var Yok

Candida albicans Psödohif

Kuşkulu maya kolonisi identifikasyonu

Psödohif

Var Yok

Gerçek hif

Var Yok

Blastospor Candida spp. Artrokonidyum

Annelides

Blastoschizomyces spp.

Kuşkulu maya kolonisi identifikasyonu

Artrokonidyum

Var Yok

Gerçek hif Candida veya

Geotrichum spp. Cryptococcus

dışı maya

Kuşkulu maya kolonisi identifikasyonu

Üre hidrolizi testi olumlu

Pirinç unu Tween 80 agar

Psödohif

Var Yok

Artrokonidyum Renk

Kuşkulu maya kolonisi identifikasyonu

Üre hidrolizi olumlu, pödohif var

Artrokonidyum

Var Yok

Blastosporlar Candida krusei,

Trichosporon spp. Candida lipolytica

ve diğerleri

Kuşkulu maya kolonisi identifikasyonu

Üre hidrolizi testi olumlu, pödohif yok

Renk

Pembe Beyaz

Rhodotorula spp. Cryptococcus spp.

Nitrat +, İnozitol –

Kuşkulu maya kolonisi identifikasyonu

Üre hidrolizi testi olumlu, pödohif yok, beyaz koloni

Cryptococcus spp.

SDA’da (37ºC) ve Staib agarda (26ºC) üreme

Staib agarda beyaz koloni Staib agarda kaverengi koloni

Cryptococcus spp. Cryptococcus neoformans

Nitrat -, İnozitol +

Kuşkulu maya kolonisi identifikasyonu

Cryptococcus neoformans

Karbonhidrat asimilasyon Canavanine-glycine-bromthymol agar

testleri

(API 20C vaya AUX,

RapID, YeastID, Üreme yok Üreme var

Vitek, ..)

C neoformans C neoformans

var. neoformans var. gattii

Serotiplendirme

Kültürden direkt preparasyon

• Tomurcuklanan maya hücreleri 5-15 μm

Çini mürekkebi preparasyon

• Kapsül

• Tomurcuklanan maya hücresi

Kapsül – doğada ince –

dokuda çapı artıyor

Kent L. Buchanan and Juneann W. Murphy

Kültür

• Staib agar (Bird Seed Agar veya Caffeic Acid

Agar)

- Beşinci gün

- Kahverengi

Staib agar

(Fenol oksidaz testi)

Kreatininli Kreatinsiz

Kültür

• Staib agarda doğadan izolasyon

Üre hidrolizi

• Christensen urea agar - 4 saat

• Sıvı by. – 15 dk

Pirinç unu Tween 80 agar

• Yuvarlak, köşegenimsi blastosporlar

• Hif yok

• Nadiren psödohif

Karbonhidrat asimilasyon testi

C. neoformans - C. gattii ayrımı

• Canavanine-glycine-bromthymol blue

(CGB) agar

• (C. gattii = ürer ve besiyerini 24 saat – 5

günde maviye dönüştürür)

• (C. neoformans = üremez, besiyeri sarı)

C. neoformans - C. Gattii ayrımı

• Crypto-check serotiplendirme kiti

C. neoformans - C. gattii ayrımı

• C. neoformans

• Yuvarlak blastospor

• Mükoit veya mat koloni

• Kanattlı dışkısı içeren

toprakta

• Staib agarda açık kahve

(sütlü çikolata) rengi

koloniler

• CGB agarda üreyemez

• C. gattii

• Eliptik blastospor

• Koloniler daha mükoit

• Ökaliptus ağaçlarının

bulunduğu toprakta

• Staib agarda koyu kahve

(bitter çikolata) rengi

koloniler

• CGB agarda ürer

Güvercinli çocuk

(Picasso)