td milieu de culture

7/23/2019 TD Milieu de Culture

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TD1 : Milieu de cultureComposition du milieu de culture

lments indispensables(milieu de base)

! ! Eau! Source de carbone = saccharose

- Rle pour contrer la dficience de la photosynthse (20 30g/l)- Rle osmotique, il est indispensable pour la culture d'embryon immature (100 120 g/l). Il

permet de mettre en vidence la contamination par un pathogne

! lments minraux- Macrolments(besoin en grande quantit g/l)

Azote : 1 3% de la matire sche. On le retrouve dans les protines, les acides nucliques,hormones... On le donne sous forme de sel KNO3, sous forme d'ammonium NH4+ . On peutmettre des acides amins aussi qui contiennent de l'azotePotassium : 2 4 % de la matire sche, il intervient dans les changes osmotiques.Ncessaire la synthse des hormones, de la chlorophylle, ncessaire la division cellulairePhosphate (phosphore) : 0,1 0,5% de la matire sche, on en retrouve dans l'ATP et en grandequantit dans les cellules mristmatiquesSouffre : 0,6 0,6% de la matire sche. Il est absorb sous forme de sulfate. On en retrouvebeaucoup dans la cystineCalcium : 1 2% de la matire sche. Il augmente la rigidit des parois (lment de la pectine)et a un rle dans la permabilit cellulaire au niveau des membranesMagnsium : 0,1 0,7% de la matire sche. Cest un activateur enzymatique et un lmentcentral dans la chlorophylle

- Microlments(besoin en petite quantit mg/l)

Cobalt : sous forme de CoCl2 (vitamine B12)

Molybdne : cofacteur de la nitrate rductaseManganse : lment de la membrane des chloroplastesZinc : interviens dans la fabrication de l'auxineCuivre : rle de transporteur dans la photosynthseBorr : dans le mouvement des sucres

Le fer est entre les 2 (micro et macrolment) : il n'est pas fourni sous forme de sel, car ilprcipite. On le fixe l'EDTA sous forme chlate, mais il est indispensable pour les milieux deculture

! Vitamines : gnralement du groupe B (mg/l) sauf pour l'inositol (B7 en 100mg/l)

Biotechnologies animales et vgtales

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lmentsfacultatifs(que dans certains milieux)

! Hormones vgtales(rgulateurs de croissance)On utilise en milieu de culture l'auxine et la cytokinineAuxine de synthse (ANA) cytokinine de synthse (BAP)La gibbrelline (AG3) pour lallongement des tiges

Acide jasmonique pour le mcanisme de dfense des plantes

! AgarLAgar permet la culture en milieu solide, mais il n'est pas trs purifi donc si a ne marche pas,on utilise la gelrite qui est plus pure, mais beaucoup plus chre

! Acides amins : glutamine, glycocolle, cystine! Mlanges complexes(utilis pour les cultures dlicates)

Le lait de coco 2% riche en rgulateurs de croissance (division cellulaire)Lhydrolysat de casine (lait)Lextrait de levure (vitamines, mais en plus grande quantit)

! Charbon actifLe charbon la capacit d'absorber les molcules inactives. Il est utilis pour la phased'enracinement en capturant les cytokinines qui empchent l'enracinement. Il permet decapturer la libration de composs toxiques lors dun stress (composs phnoliques quis'oxydent la lumire et la plante devient marron)

Composition des lments minraux

6 macrolments principaux en quantit idale pour le dveloppement pour la plante. On partde milieu existant. Milieu trs utilis (Murashige et Skoog mis au point sur le tabac, car c'est uneespce modle). On peut lutiliser soit en concentration x1 ou dans dautres concentrationsselon l'espce vgtale considre. Il est riche en azote et lments minraux. Il est prconisdans la culture d'explants sans mristmes

Culture de fragments nodaux Murashige et Skoog, mais une concentration 1/2Les plantes carnivores Murashige et Skoog une concentration 1/4

On peut cultiver avec MS, mais en enlevant un lment toxique pour la plante considre (MSsans KNO3, mais il faut compens l'azote perdu)

Parfois les milieux ne sont pas comparables, car la forme des lments qui sont fournis estdiffrente parfois. Il faut alors comparer en quivalent-gramme d'ion

Exercice : comparaison de 2 milieux de culture (Murashige et Skoog et Heller) en fonction deleur contenue en ion NO3-


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Si dans le milieu Murashige et Skoog, on enlve NO3 parce quil est toxique pour une plante, onpeut remplacer le K (KNO3) et le NH4 (NH4NO3) par du KCl et du NH4Cl par exemple, car le Clest un ion daccompagnement et nest pas toxique

Les milieux de culture ont un pH (5,5 - 5,6), mais d'autres plantes poussent sur d'autres pHcomme les plantes carnivores (4,5) ou les fougres (5,2). Pour ajuster ce pH, on utilise dessolutions acidifiantes (HCl) ou alcalinisantes (KOH). Les solutions sont donnes en normalit


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Exercice :Biotechnologies animales et vgtales

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