No.L421LAAN-A-LC127

高速高分離分析の応用（その38）“Nexera”による合成着色料の分析

High Speed with High Resolution Analysis (Part 38)Analysis of Artificial Colorings by “Nexera”

■合成着色料12成分の分析Analysis of 12 Artificial Colorings

合成着色料の高速分析については，アプリケーション

ニュースNo. L349でご紹介しましたが，今回はいっそうの

高速化を目指し，超高速LCシステム“Nexera”および高速

高分離分析用カラム“Phenomenex Kinetex C18”を用いた

超高速分析例をご紹介します。

K. Yamabe

12種類のタール系合成着色料について一斉分析を行いま

した。カラムには，粒子径2.6 µmの“Phenomenex Kinetex

C18”（1.9 µmのソリッドコアに極微粒子の多孔質シリカゲ

ルを多層で結合（層厚0.35 µm）させたCore-Shellカラム）

を用い，フォトダイオードアレイ検出器“SPD-M20A”によ

り波長400 nm～700 nmの最大吸光度（MAXプロット）でモ

ニタを行いました。

Fig. 1に合成着色料12成分標準混合液（各50 mg/L水溶

液）のクロマトグラムと等高線プロットを，Table 1にその分

析条件を示します。

本分析条件により，12成分を1分以内に分離することがで

きました。また，6回の繰り返し注入における各ピークの保

持時間およびピーク面積再現性（1 µL注入）は，Table 2に

示すように良好でした。

0.00 0.25 0.50 0.75 1.00 min

0.0

250

500

750mAU

Table 1　分析条件Analytical Conditions

Column : Phenomenex Kinetex 2.6 µm C18 100 Å(50 mm L. × 3.0 mm I.D., 2.6 µm)

Mobile Phase : A; 10 mmol/L Ammonium acetateB; 10 mmol/L Ammonium acetate / Acetonitrile = 1/1 (v/v)

Flow Rate : 2.5 mL/minTime Program : B Conc. 5 % (0.0 min) → 100 % (1.1-1.6 min)

→ 5 % (1.61-2.4 min)• Mixer : 20 µL

Column Temp. : 40 °CInjection Volume : 1 µLDetection : SPD-M20A Max Plot 400-700 nmFlow Cell : Semi-micro Cell

Table 2　合成着色料12成分の再現性（n=6）Repeatability of 12 Artificial Colorings (n=6)

Peak No.

Retention Time %RSD

Peak Area %RSD

1 0.103 0.1172 0.069 0.1613 0.047 0.2894 0.068 0.2195 0.091 0.1166 0.057 0.2037 0.066 0.1708 0.056 0.2069 0.021 0.07310 0.034 0.11711 0.032 0.14012 0.037 0.148

Fig. 1　合成着色料12成分のクロマトグラムおよび等高線プロット（各50 mg/L）Chromatogram and Contour Plot of a Standard Mixture of 12 Artificial Colorings (50 mg/L each)

■Peaks1. Y4 (Tartrazine), 2. R2 (Amaranth), 3. B2 (Indigo Carmine), 4. R102 (New Coccine), 5. Y5 (Sunset Yellow FCF),6. R40 (Allura Red AC), 7. G3 (Fast Green FCF),8. B1 (Brilliant Blue FCF), 9. R3 (Erythrosine), 10. R106 (Acid Red),11. R104 (Phloxine), 12. R105 (Rose Bengale)

min

1 23 45 6

78

9

1011

12

0.00 0.25 0.50 0.75 1.00

0.0

100

200

300

mAU

0.0 0.1 0.2 0.3 0.4 0.5 0.6 0.7 0.8 0.9 1.0 min

300

400

500

600

700

nm

島津コールセンター  0120-131691TEL:075-813-1691

No.L421

Table 1の分析条件により，漬汁と飴の抽出液を測定しま

した。標準品と保持時間が一致する検出ピークは，それぞ

れスペクトルパターンも一致しました。

■合成着色料21成分の分析Analysis of 21 Artificial Colorings

■食品中合成着色料の分析Analysis of Artificial Colorings in Food

Fig. 2　食品中合成着色料のクロマトグラムおよびスペクトル（左 ： 漬汁，右 ： 飴）Chromatograms and Spectra of Artificial Colorings in Food (Left : Pickle, Right : Candy)

500300 nm 500300 nm 500300 nm

0.0

0.5

1.0mAU

0

10

20

30 mAU

4

10

■Peak3. B2

Peak10

0

10

20

30 mAU

3

Peak3Peak4 ■Peaks 4. R10210. R106

0.00 0.25 0.50 0.75 1.00 min0

10

20

30

40mAU

0.00 0.25 0.50 0.75 1.00 min

0

10

20

30

40mAU

前ページの合成着色料12成分に，さらに9成分を加えた

合計21成分について，グラジエント溶離条件を検討するこ

とにより（Table 3），2分以内に一斉分析することができま

した。

Fig. 3に，MAXプロットおよび3波長のクロマトグラムを

示します。黄色 系着 色料を450 nm，赤 色 系着 色料は

520 nm，青緑系着色料は620 nmのクロマトグラムでピーク

を同定しました。このように，フォトダイオードアレイ検出器

では，各成分に適した検出波長を選択して定量を行なうこ

とができます。MAXプロットでは，ピーク20（OrangeⅡ）と

ピーク21（Patent Blue V）が重なりますが，Fig. 4に示すよ

うに450 nmと620 nmではそれぞれ他方の成分がほとんど検

出されず，別々に定量することが可能です。

Time Program : B Conc. 5 % (0.0 min) → 100 % (2.5-2.7 min) → 5 % (2.71-3.5 min)

Detection : SPD-M20AMax Plot 400-700 nm, 450 nm, 520 nm, 620 nm

Table 3　分析条件*Analytical Conditions

Fig. 4　ピーク20およびピーク21のスペクトルSpectra of Peak 20 and Peak 21

Fig. 3　合成着色料21成分のマルチクロマトグラム（各25 mg/L）Multi-Chromatogram of a Standard Mixture of 21 Artificial Colorings (25 mg/L each)300 400 500 600 nm

0100200300400500

mAU

ピーク20 ピーク21

0.00 0.25 0.50 0.75 1.00 1.25 1.50 1.75 min0

50100150

mAU

1 315

5

13 789

1011

2 4 6 1214 1617

1819

20+21

Max.Plot

0.00 0.25 0.50 0.75 1.00 1.25 1.50 1.75 min0

102030

mAU51

2019

13 450 nm

0.00 0.25 0.50 0.75 1.00 1.25 1.50 1.75 min0

25

50mAU

121110

9642

1716

1514

520 nm

0.00 0.25 0.50 0.75 1.00 1.25 1.50 1.75 min0

50

100mAU

87

3

2118

620 nm

■Peaks1. Y4 (Tartrazine), 2. R2 (Amaranth), 3. B2 (Indigo Carmine), 4. R102 (New Coccine), 5. Y5 (Sunset Yellow FCF),6. R40 (Allura Red AC), 7. G3 (Fast Green FCF),8. B1 (Brilliant Blue FCF), 9. R3 (Erythrosine), 10. R106 (Acid Red),11. R104 (Phloxine), 12. R105 (Rose Bengale)13. Orange G, 14. Black PN, 15. Red 2G, 16. Fast Red E,17. Azo Rubine, 18. Green S, 19. Quinoline Yellow S,20. OrangeⅡ, 21. Patent Blue V

*その他条件はTable 1と同じ

3100-04101-570-IK2011.4

2011年4月