Ruth Bishop y col.

1973

Royal Children`s Hospital

en Melbourne, Australia

1974

Thomas Henry

Flewett

Cápside Interna

Cápside Interna

80 nm.

Cápside Externa

Estructura del ROTAVIRUS

ROTAVIRUS

Segmentos de ARN

VP1/ VP3

VP2

VP6

VP7

VP4

VP8 / VP5

ESPECIES DE RV.

Grupo A – (SGI-SGII)

Grupo B - China

Grupo C – Australia, Brasil

Grupo D

Grupo E

Grupo F

Grupo G

Clivada por tripsina pancreática

Proteínas virales No estructurales (NS)

NSP1

Replicación ARN viral

Codificada por el segmento 11 del genoma vírico del RV A y en las células infectadas se acumula en el viroplasma

Unida al ARNm en células infectadas y es responsable de la finalización de la síntesis proteica celular.

NSP2

NSP3

NSP5

NSP4

Transcrita por el gen 5 y es una proteína de unión al ARN.

Proteína de unión de ARN, que se acumula en inclusiones citoplasmáticas.

Enterotoxina viral que induce Diarrea (primera enterotoxina que se descubrió)

Grupo A La clasificación de rotavirus de acuerdo con el serotipo

20 Genotipos diferentes de VP4 (P)10 Serotipos

Vp7(G (Glicoproteínas)).

Serotipos que infectan a Humanos

(G1, G2, G3, G4, G5, G6, G8, G9, G10 y G12)

Vp4(P(Prot. sensible a la Proteasa))

Serotipos en Humanos (P1A, P1B, P2A, P3, P3B, P4, P5 y P8)

VP7. Se divide en 14 serotipos de RV del grupo A de origen animal y humano siendo:

COMBINACIONES DE LOS SEROTIPOS/GENOTIPOS (G Y P)

G1P(8), G4P(8), G2P(4) y G3P(8)

Mayoría de las infecciones son atribuibles a la G1P(8).

Replicación Viral

ENDOCITOSIS PENETRACIÓN DIRECTA

NÚCLEO

Replicación viral (Penetración directa)

Hemaglutinina viral

Transcriptasa viral.

Célula Epitelial

Nuevos virus deja a las células infectadas para invadir a las sanas

Las células epiteliales mueren y los fluidos salen del cuerpo

4

1

2

3 El virus se multiplica y produce la toxina

ROTAVIRUS

VP4

5

Patogenia

Disminución en la superficie de absorción

Alteración de la integridad epitelial

Deficiencia de disacáridos

11 H. a 3 días

(Incubación)

Respuesta

Inmune

Cuadro Clínico

7 a 10 Días

14 o más días

Intolerancia disacáridos

2-3 Días 2-3 Días

5-8 Días

Diagnóstico de Laboratorio

Serología

Inmunofluorescencia

Aglutinación en Latex

ELISA

Reacción de fijación del complemento

Contrainmunoelectroforesis

Inmunoelectromicroscopía.

Hibridación para detección de heces.

Sondas de oligonucleótidos acopladas a radioactividad.

Estudio de reaccion de polimerasa en cadena.

Diagnóstico de Laboratorio

Cultivo celular

Identificación de ARN segmentado

Otros recursos

Control

Control inicial

Control Específico

2 Meses de Edad

4 Meses de Edad

2006

4 Meses de Edad

6 Meses de Edad

2008

Epidemiología

Templados: EE.UU, México, Finlandia, Gran Bretaña (Fríos o Secos)

Tropicales:Brasil, Venezuela varios países de África (todo el año)

65-67% ---1año de edad

35% entre 2 y 3 años de edad

Caracas: En todo el año.

85% -- 1 año 14% -- 2 años

1% 3 años

Valencia – Edo. Carabobo Estacionaria.

67% -- 1 año 26% -- 2 años

7% 3 años

ELECTROFORESIS

ElectroforesisVocablos griegos

 “êlektron”  (“ámbar”) y hace referencia a la electricidad

“phoros” (“llevar o trasladar”)

Un transporte o traslado bajo la acción de la electricidad. Más propiamente, la electroforesis se define como un método analítico para la separación de moléculas según la movilidad de éstas en un campo eléctrico a través de una matriz porosa, la cual finalmente las separa por tamaños moleculares y carga eléctrica, dependiendo de la técnica que se use.

Etimológicamente puede definirse como:

Arne Tiselius (1937)

“Electroforesis De Frentes En Movimiento” o “moving boundary electrophoresis” 

Desventajas Escaso poder de resoluciónExigir gran cantidad de muestra,  Muy laborioso En la práctica no permitir la separación total de los componentes de la mezcla

Dio paso a aquellos que usaban un soporte sólido

o gelatinosoEmbebido en la solución

amortiguadora de pH Sobre el que ocurría la

separación electroforética

de los componentes en bandas o zonas discretas

Fundamento

El movimiento de las moléculas está gobernado también por dos fuerzas adicionales; inicialmente la fricción con el solvente dificultará  este movimiento originando una fuerza que se opone, por otro lado  las moléculas poseen energía cinética propia por lo que tienden a moverse en forma aleatoria o movimiento browniano

Tipos de Electroforesis

Electroforesis Libre

Disoluciones o suspensiones.

Fue desarrollada por Arne Tiselius en 1937.

Desesuso, ya que al ser un fluido el medio en el que se desarrolla, tiene poco poder de resolución.

Electroforesis en Zona

Fuente de alimentación.Cubeta. Soporte electroforético.  

Tipos de Electroforesis de Zona

ELECTROFORESIS EN PAPEL 

El revelado se realiza empleando los mismos métodos que los utilizados en cromatografía sobre papel, mediante la acción de los colorantes adecuados

ELECTROFORESIS EN GEL

La separación no se produce sólo por las diferentes cargas de las moléculas, sino también por las diferencias de tamaño.

Tipos de Geles

Geles de agarosa

Este gel está constituido por una matriz o trama tridimensional de fibras poliméricas embebida en gran cantidad de medio líquido, que retarda el paso de las moléculas, se usa usualmente para separar moléculas grandes de alrededor 20.000 nucleótidos.

Geles de poliacrilamida

Se forman por  polimerización de la acrilamida por acción de un agente entrecruzador, es químicamente inerte, de propiedades uniformes, capaz de ser preparado de forma rápida y reproducible

La Electroforesis en Geles de Poliacrilamida

1. Electroforesis en gel en una dimensión (continuo o discontinuo)

a. PAGE-nativab. PAGE-desnaturalizante (SDS-PAGE)c. Isoelectroenfoque

2. Electroforesis en gel en dos dimensiones (bidimensional)

TIPOS

PAGE-nativa

SEPARAR ProteínasCarga intrínseca de las proteínas

EN FUNCIÓN

SEPARAR

PAGE-desnaturalizante (SDS-PAGE)

Proteínas

Detergentes (SDS, sodio dodecil sulfato) Caótropos (urea) agentes reductores (2- mercaptoetanol, DTT).

EN FUNCIÓN

Tamaño (MM)

D. PM de las proteínas

Isoelectroenfoque

DESPLAZAMIENTO Moléculas Gradiente de pH

Las moléculas anfotéricas, como los aminoácidos, se separan en un medio en el que existe una diferencia de potencial y un gradiente de

pH.

Entre ambos se establece un gradiente de pH  tal que las moléculas que se han de separar tenga su punto isoeléctrico

dentro del rango

La migración les conducirá a una región dónde el pH  coincidirá con su punto isoléctrico, tendrán una carga  neta nula y se detendrán.  De esta forma las

moléculas amfotéricas se sitúan en estrechas bandas donde coincide su punto isoeléctrico con el pH.

Electroforesis Bidimencional

SEPARAR Proteínas Según Punto isoeléctrico

Peso Molecular

Isoelectroenfoque

Electroforesis En Poliacrilamida

Punto isoeléctrico

Peso Molecular

La Electroforesis Capilar (CE)

SEPARAR BiomoléculasCompuestos de pequeña MM MIGRACIÓN

De las especies portadoras de una carga eléctrica global, bajo el efecto de un campo eléctrico y en contacto con un soporte (medio de desplazamiento) adecuado.

Solución Buffer

Detector

Electroferograma--- Muestra el registro de la composición de la muestra.

Solo las especies que se dirigen hacia el cátodo serán detectadas.

Métodos de Detección

UV-Vis se mide la intensidad de la luz que pasa a través del capilar en una pequeña zona en la que se ha eliminado el revestimiento opaco.

Detección por Fluorescencia resulta más sensible si se emplea una fuente láser muy intensa, asociada a menudo a un procedimiento de preformación de derivados de los analitos portadores de un fluoróforo.

Factores que Afectan la Electroforesis

CAMPO ELÉCTRICO MUESTRATAMPÓN

SOPORTE

Resultados

Muestras rotapositivas que mostraron el patrón típico de ARN de

GRACIAS POR SU

ATENCIÓN