principles*of*pcr - ifm.liu.se€¦ · pcr primers are generally 15-30 nucleotides long. optimal gc...

24
Principles of PCR Principles Design of primers PCR for cloning Real 3me PCR Error frequency Tips and tricks

Upload: nguyencong

Post on 28-Aug-2018

214 views

Category:

Documents


0 download

TRANSCRIPT

Principles  of  PCR  

•  Principles  •  Design  of  primers  •  PCR  for  cloning  •  Real  3me  PCR    •  Error  frequency  •  Tips  and  tricks      

Fig  9.1  p  148  

Fig  9.2  p  149  

Fig  9.3,  9.4  p  149  

Fig  9.5  p  150  

Fig  9.6  p  150  

Fig  9.7  p  152  

Fig  9.8  p  153  

Fig  9.9  p  154  

Fig  9.10  p  155  

Fig  9.11  p  155  

Fig  9.12,  9.13  p  156  

Fig  9.14  p  157  

Fig  9.15  p  157  

Fig  9.16  p  158  

Fig  9.18,  p  160  

Fig  9.19  p  160  

Fig  9.20  p  161  

Tips  and  tricks  

•  Make  a  master  mix  solu3on  (i.e.  mix  buffers,  water,  dNTP:s)  enough  for  all  samples  plus  one  

•  Use  the  protocol  recommended  by  the  manufacturer  

•  Use  fresh  solu3ons  •  Avoid  contamina3on  •  Are  there  any  possible  inhibitors  in  your  sample?  Increase  volume  of  added  polymerase