E.M.B. AgarEOSINA Y AZUL DE METILENOSelectivo para gramnegativos-escasas exigencias nutricionalesDsllo de todas las especies de la flia EnterobacteriaceaDiferencial para fermentadores de lactosa.

resultados Tipo de colonia

E. coli Verdosas, con brillo metálico y centro negro azulado

K. pneumoniae Mucosas, rosa purpuraP. mirabilis Incoloras

E. faecalis incoloras., pequeñas, puntiformes

Shigella flexneri incoloras Características del medio:

Placas preparadas: color púrpura

Mac Conkey Agarútil aislamiento de bacilos Gram negativas. De fácil desarrollo, aerobios y anaerobios facultativosdiferencia bacterias que utilizan o no, lactosa en muestras clínicas, de agua y alimentosCrece todas las especies de la flia EnterobacteriaceaeLos microorganismos no fermentadores de lactosa producen colonias incolorasCaracterísticas del medioMedio preparado: rojo púrpura

Mueller-Hinton agarUSO Medio de cultivo recomendado universalmente para la realización de la prueba de sensibilidad a los antimicrobianos. FUNDAMENTO Medio de cultivo nutritivo no selectivo que promueve el desarrollo microbiano. Por su composición, ha sido recomendado por el Clinical and Laboratory Standards Institute (CLSI) antiguamente llamado National Committee for Clinical Laboratory Standards (NCCLS), para ser utilizado en forma rutinaria en la realización del antibiograma en medio sólido, debido a que presenta buena reproducibilidad lote a lote en las pruebas de sensibilidad, su contenido en inhibidores de sulfonamidas, trimetoprima y tetraciclina es bajo, la mayoría de los patógenos microbianos crece satisfactoriamente y una gran cantidad de datos adicionales que han sido evaluados y avalados usando este medio de cultivo. Cuando se suplementa con sangre de carnero al 5%, permite realizar las pruebas de sensibilidad a los antimicrobianos en especies de estreptococos. También, con el agregado de sangre puede utilizarse para el cultivo y aislamiento de microorganismos nutricionalmente exigentes.

FÓRMULAcaene 300 g/l

caseina 17.5 g/lalmidon 1.5 g/l

agar 15 g/lpH final 7.3 +/- 0.1

Simmons Citrato AgarusoMedio utilizado para la diferenciación de enterobacterias, en base a la capacidad de usar citrato como única fuente de carbono y energía. 

FundamentoEn el medio de cultivo, el fosfato monoamónico es la única fuente de nitrógeno y el citrato de sodio es la única fuente de carbono. Ambos componentes son necesarios para el desarrollo bacteriano. Las sales de fosfato forman un sistema buffer, el magnesio es cofactor enzimático. El cloruro de sodio mantiene el balance osmótico, y el azul de bromotimol es el indicador de pH, que vira al color azul en medio alcalino. El medio de cultivo es diferencial en base a que los microorganismos capaces de utilizar citrato como única fuente de carbono, usan sales de amonio como única fuente de nitrógeno, con la consiguiente producción de alcalinidad.El metabolismo del citrato se realiza, en aquellas bacterias poseedoras de citrato permeasa, a través del ciclo del ácido tricarboxílico. El desdoblamiento del citrato da progresivamente, oxalacetato y piruvato. Este último, en presencia de un medio alcalino, da origen a ácidos orgánicos que, al ser utilizados como fuente de carbono, producen carbonatos y bicarbonatos alcalinos. El medio entonces vira al azul y esto es indicativo de la producción de citrato permeasa.

Fórmula (en gramos por litro) Instrucciones

Citrato de sodio 2Suspender 24,2 g del medio deshidratado por litro de agua destilada. Dejar reposar 5 minutos y mezclar calentando a ebullición durante 1 o 2 minutos. Distribuir en tubos y esterilizar en autoclave a 121°C durante 15 minutos. Enfriar en posición inclinada.

Cloruro de sodio 5

Fosfato dipotásico 1

Fosfato monoamónico 1

Sulfato de magnesio 0.2

Azul de bromotimol 0.08

Agar 15

pH final: 6.9 ± 0.2

Microorganismo Citrato permeasa Color del medio

Klebsiella pneumoniae ATCC 700603 Positivo Azul

S. typhimurium ATCC 14028 Positivo Azul

E. coli ATCC 25922 Negativo VerdeS. flexneri ATCC 12022 Negativo Verde

T.S.I. Agar (Triple Sugar Iron Agar)USO Medio universalmente empleado para la diferenciación de enterobacterias, en base a la fermentación de los hidratos de carbono glucosa, lactosa y sacarosa y a la producción de ácido sulfhídrico. FUNDAMENTO En el medio de cultivo, el extracto de carne y la pluripeptona, aportan los nutrientes adecuados para el desarrollo bacteriano. La lactosa, sacarosa y glucosa son los hidratos de carbono fermentables. El tiosulfato de sodio es el sustrato necesario para la producción de ácido sulfhídrico, el sulfato de hierro y amonio, es la fuente de iones Fe3+ , los cuales se combinan con el ácido sulfhí- drico y producen sulfuro de hierro, de color negro. El rojo de fenol es el indicador de pH, y el cloruro de sodio mantiene el balance osmótico. El agar es el agente solidificante. Por fermentación de azúcares, se producen ácidos, que se detectan por medio del indicador rojo de fenol, el cual vira al color amarillo en medio ácido. El tiosulfato de sodio se reduce a sulfuro de hidró- geno que reacciona luego con una sal de hierro proporcionando el típico sulfuro de hierro de color negro.

formulaextracto de carne 30 g/l

pluripeptona 20 g/lcloruro de sodio 5 g/l

lactosa 10 g/lsacarosa 10 g/lglucosa 1 g/l

sulfato de hierro y amonio 0.2 g/ltiosulfato de sodio 0.2 g/l

rojo de fenol 0.025 g/l

agar 13 g/lpH FINAL: 7.3 ± 0.2

Lisina Hierro Agar.UsoMedio de cultivo utilizado para diferenciar microorganismos, especialmente Salmonella spp., basado en la decarboxilación / desaminación de la lisina y en la producción de ácido sulfhídrico.

FundamentoEn el medio de cultivo, la peptona y el extracto de levadura aportan los nutrientes para el desarrollo bacteriano. La glucosa es el hidrato de carbono fermentable, y la lisina es el sustrato utilizado para detectar la presencia de las enzimas decarboxilasa y deaminasa. El citrato de hierro y amonio, y el tiosulfato de sodio, son los indicadores de la producción de ácido sulfhídrico. El purpura de bromocresol, es el indicador de pH, el cual es de color amarillo a pH igual o menor a 5.2, y de color violeta a pH igual o mayor a 6.8.Por decarboxilación de la lisina, se produce la amina cadaverina, que alcaliniza el medio y esto produce el viraje del indicador al color violeta. La decarboxilación de la lisina, tiene lugar en medio ácido, por lo que es necesario que la glucosa sea previamente fermentada.Los microorganismos que no producen lisina decarboxilasa, pero que son fermentadores de la glucosa, producen un viraje de la totalidad del medio de cultivo al amarillo, pero a las 24 hs de incubación se observa el pico de color violeta debido al consumo de las peptonas, y el fondo amarillo.La producción de sulfuro de hidrógeno, se visualiza por el ennegrecimiento del medio debido a la formación de sulfuro de hierro.Las cepas de los géneros Proteus, Providencia y algunas cepas de Morganella, desaminan la lisina, esto produce un ácido alfa-ceto-carbónico, el cual, con la sal de hierro y bajo la influencia del oxígeno forma un color rojizo en la superficie del medio.

Fórmula (en gramos por litro) Instrucciones

Peptona de gelatina 5 Suspender 35 g del medio deshidratado en un litro de agua destilada. Dejar

embeber unos 15 minutos. Calentar cuidadosamente, agitando con frecuencia y hervir durante un minuto

hasta la disolución completa. Distribuir y

esterilizar a 121°C durante 15 minutos. Enfriar en pico

de flauta dejando un fondo vertical apto para la

punción.

Extracto de levadura 3 Glucosa 1

Lisina 10 Citrato de hierro y

amonio 0.5

Tiosulfato de sodio 0.04 Púrpura de bromocresol 0.02

Agar 15

pH final: 6.7 ± 0.2

Microorganismos Color en el pico de flauta Color en la base del tubo Ennegrecimiento del medio

Proteus mirabilis ATCC 43071 Rojo Amarillo Negativo

Salmonella typhimurium ATCC 14028 Púrpura Púrpura Positivo

Salmonella enteritidis ATCC 13076 Púrpura Púrpura Positivo

Providencia spp. Rojo Amarillo Negativo

Citrobacter freundii Púrpura Amarillo Positivo

Morganella spp.* Rojo Amarillo Negativo

Edwarsiella spp. Púrpura Púrpura Positivo

Klebsiella pneumoniae ATCC 700603 Púrpura Púrpura Negativo

Escherichia coli ATCC 25922 Púrpura Púrpura Negativo

MR-VP MediousoMedio utilizado para la realización del ensayo de Rojo de Metilo y Voges Proskauer. Es particularmente útil para la clasificación de enterobacterias.

FundamentoEn el medio de cultivo, la pluripeptona aporta los nutrientes necesarios para el desarrollo bacteriano y la glucosa es el hidrato de carbono fermentable.La glucosa puede ser metabolizada por los microorganismos, a través de distintas vías metabólicas. Según la vía utilizada, se originarán productos finales ácidos (ácido láctico, ácido acético, ácido fórmico), o productos finales neutros (acetil metil carbinol).Esta diferencia en el metabolismo bacteriano, podría ser reconocida por la adición de un indicador como rojo de metilo, para revelar la presencia de productos ácidos, y por la adición de alfa naftol e hidróxido de potasio para evidenciar la presencia de productos finales neutros. Voges y Proskauer, describieron una coloración rojiza que aparecía después de adicionar hidróxido de potasio a los cultivos de ciertos microorganismos en medio con glucosa. Esta coloración se debe a la oxidación del acetilmetil carbinol a diacetilo el cual reacciona con la peptona del medio para dar un color rojo.

Fórmula (en gramos por litro) InstruccionesPluripeptona 7 Suspender 17 g del polvo por litro de

agua destilada. Calentar suavemente agitando hasta disolver. Distribuir y esterilizar en autoclave a 118-121°C durante 15 minutos.

Glucosa 5

Fosfato dipotásico 5

pH final: 6.9 ± 0.2

Microorganismo Crecimiento RM VPE. coli ATCC 25922 Bueno + -K. pneumoniae ATCC 700603 Bueno - +

P. mirabilis ATCC 43071 Bueno + -

S. typhimurium ATCC 14028 Bueno + -

Citrobacter freundii Bueno + -

Enterobacter aerogenes Bueno - +

O.F. Medio Basal de Hugh & Leifson.UsoMedio de cultivo, que al ser suplementado con hidratos de carbono, se usa para determinar el metabolismo oxidativo-fermentativo de las bacterias Gram negativas. Esta prueba es útil para diferenciar especies bacterianas. También, permite determinar movilidad y producción de gas.

FundamentoEl medio basal O.F., fue desarrollado por Hugh y Leifson, para evidenciar la importancia del significado taxonómico del metabolismo oxidativo-fermentativo de los hidratos de carbono por las bacterias Gram negativas.Cuando un microorganismo es inoculado en 2 tubos del medio O.F. conteniendo el mismo hidrato de carbono, y uno de los 2 tubos es sellado con vaselina o parafina antes de la incubación, se puede diferenciar bien el metabolismo oxidativo o fermentativo, así como la no utilización de un hidrato de carbono por la bacteria en estudio. En el medio de cultivo, el agregado de una alta concentración de un determinado hidrato de carbono, hace que los microorganismos utilicen para su desarrollo dicha sustancia, evitando que bacterias aeróbicas utilicen la tripteína presente con la consecuente producción de reacción alcalina, la que se neutraliza por la ligera acidez producida por un microoganismo oxidativo.El fosfato dipotásico agrega capacidad reguladora, el cloruro de sodio mantiene el balance osmótico, y el azul de bromotimol es el indicador de pH que vira al color amarillo en medio ácido. El contenido de agar, da la propiedad de ser un medio semisólido, y permite determinar la movilidad y la distribución de los productos ácidos en el medio de cultivo. La glucosa es el hidrato de carbono más frecuente que se agrega al medio basal O.F., pero también pueden agregarse otros azúcares, como ser, lactosa, sacarosa, maltosa, manitol o xilosa, entre otros.Por oxidación o fermentación de un determinado hidrato de carbono, se acidifica el medio y el indicador de pH vira del color verde al amarillo.

Fórmula (en gramos por litro) Instrucciones

Tripteína 2Suspender 9.8 g del polvo por litro de

agua destilada. Mezclar. Calentar con agitación frecuente y hervir 1 minuto. Esterilizar a 121°C durante 15 minutos. A 100 ml de base estéril, agregar 10 ml de la solución estéril del hidrato

de carbono al 10% (alternativamente agregar el hidrato de carbono antes de esterilizar y autoclave a 118°C durante 10 minutos).

Cloruro de sodio 5

Fosfato dipotásico 0.3

Agar 2.5

Azul de bromotimol 0.03

pH final: 7.1 ± 0.1

reacción tubos con reacción tubos abiertos tubo cerradooxidación abierto amarillo (A) verde (-)

fermentación cerrado amarillo amarillo (AG) amarillo (A) amarillo (AG)sin oxidación o fermentación ninguna azul o verde (-) verde (-)