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Libro de resúmenes: Sesiones orales Farmadrid XX

Comité Organizador: Emilio Ambrosio Flores, Alejandro Higuera Matas, Javier Ibias Martín, Nuria del Olmo Izquierdo, Miguel Miguéns Vázquez, Santiago Morales Coria, Mª Amparo Assis Duart, David Roura Martínez, Gonzalo López Montoya, Departamento de Psicobiología. Facultad de Psicología. UNED

Departamento de Psicobiología. Facultad de Psicología. UNED

LugarFacultad de Psicología Salón de ActosC/ Juan del Rosal, 10Ciudad Universitaria28040 - MADRID

Fecha: 4 de Julio de 2011

Página web: http://www.farmadrid.org.es

Sesión de Apertura

Veinte años de Farmadrid

Antonio G. García y Luis GandíaInstituto Teófilo Hernando, Universidad Autónoma de Madrid

En octubre de 1991, un puñado de farmacólogos decidimos iniciar reuniones perió-dicas para intercambiar puntos de vista sobre las distintas líneas de investigación farmacológica que se desarrollaban en las universidades, hospitales y laboratorios farmacéuticos de la Comunidad de Madrid. La primera tuvo lugar en octubre de 1991, y adoptó el nombre de Reunión de Farmacólogos de la Comunidad de Madrid; en los últimos años, su nombre se cambió a Farmadrid. Las primeras reuniones se basaron en ponencias. Cuando aumentó el número de comunicaciones, la jornada incluyó comunicaciones orales y paneles, cuyo número se refleja en la siguiente figura:


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Las sedes y organizadores de las sucesivas jornadas se resumen en la siguiente tabla:

1. Fac. Medicina, Univ. Complutense de Madrid (Santos Barrigón, 1992)

2. Fac. Medicina, Univ. Autónoma de Madrid (Antonio R. Artalejo, 1993)

3. Fac. Medicina, Univ. Alcalá de Henares (Federico Gago Bádenas, 1994)

4. Laboratorios Glaxo (Federico Gómez de las Heras, 1995) 5. Fac. Farmacia, Univ. Complutense de Madrid (José Angel Fuen-

tes Cubero, 1996) 6. Fac. Medicina, Univ. San Pablo-CEU (Luis Fernando Alguacil

Merino, 1997) 7. Instituto Cajal, CSIC (María López de Ceballos, 1998) 8. Fac. Medicina, Univ. Autónoma de Madrid (Luis Gandía Juan,

1999) 9. Fac. Farmacia, Univ. Alcalá de Henares (Enrique Gálvez Ruano,

2000) 10. Escuela de Optica, Univ. Complutense de Madrid (Jesús Pintor

Just, 2001) 11. Hospital Univ. La Princesa, Univ. Autónoma de Madrid (Francisco

Abad, 2002) 12. Laboratorios Lilly (Luis Emilio García Pérez, 2003) 13. Fac. Medicina. Univ. Alcalá de Henares (Teresa Martín-Lucinda

Villaescusa, 2004) 14. Fac. Veterinaria, Univ. Complutense de Madrid (Antonio R. Ar-

talejo, 2005) 15 -Fac. Ciencias de la Salud, Univ. Rey Juan Carlos (Carlos Goicoe-

chea- M. Jesús Alonso, 2006) 16. Fac. Medicina. Univ. Complutense de Madrid (Angela Alsasua-

Francisco Pérez Vizcaino, 2007) 17. Instituto de Química Médica, CSIC (José Luis Marco, 2008) 18. Instituto de Investigaciones Biomédicas, CSIC (Carmen Valenzu-

ela, 2009) 19. Facultad de Farmacia, UCM (Marisol Fernández, 2010) 20. Facultad de Psicología, UNED (Emilio Ambrosio, 2011)

En conclusión, durante sus 20 años de vida Farmadrid ha tenido altibajos. Sin embargo, gracias al entusiasmo de los organiza-dores y al apoyo continuado de la Fundación Teófilo Hernando (FTH, UAM), Farmadrid parece haberse consolidado como un foro de debate de ideas farmacológicas, favoreciendo el es-tablecimiento de colaboraciones científicas entre los distintos grupos de farmacólogos de la Comunidad de Madrid. Además, contribuye también a la formación de los jóvenes investigado-res que presentan sus primeras comunicaciones en Farmadrid.

Sesión Oral I: Sistema Nervioso Central

O.1. La expresión endógena de pleiotrofina modu-la los efectos reforzadores de la anfetamina y el déficit cognitivo transitorio causado por el tratamiento crónico con anfetamina durante la adolescencia.

Esther Gramage, Nuria del Olmo, Alberto Fole, Yasmina B. Mar-tín, Gonzalo Herradón. Universidad San Pablo-CEU. Boadilla del Monte, Madrid.

La Pleiotrofina (PTN) es un factor neurotrófico que ejerce im-portantes funciones en la supervivencia y diferenciación de neuronas dopaminérgicas, así como en la modulación de la potenciación a largo plazo (LTP) hipocampal. La PTN se sobre-expresa en distintas áreas cerebrales en respuesta a distintas drogas de abuso como la anfetamina, lo que sugiere que la PTN podría modular los efectos neuroadaptativos y farmaco-lógicos inducidos por esta droga. Para probar esta hipótesis, estudiamos los efectos de la anfetamina en ratones knockout de PTN (PTN-/-) y en ratones wyld type (PTN+/+). En estos estu-dios, observamos que una dosis intermedia de anfetamina (3 mg/Kg) induce un condicionamiento preferencial al sitio (CPP) similar en ratones PTN-/- y PTN+/+. Además, los ratones PTN-/- mostraron un significativo aumento en el comportamiento de búsqueda de la droga comparado con los PTN+/+ después de 5 días de la última administración de anfetamina. Una dosis menor de esta droga (1 mg/Kg) causó un mayor CPP en ratones PTN-/- y, de nuevo, los ratones PTN-/- continuaron mostrando un llamativo comportamiento de búsqueda de la droga com-parado con los ratones PTN+/+ 5 días después de la última administración de anfetamina.

Por otra parte, se conoce que la administración de anfetamina durante la adolescencia en ratas provoca deficiencias cogniti-vas en el animal adulto. En este sentido, tratamos de averiguar si la PTN puede ser uno de los factores implicados en los dé-ficits cognitivos observados en el adulto después de la admi-nistración de anfetamina durante la adolescencia (3 mg/Kg i.p./día, durante 10 días). Veinticuatro horas después de la última administración de la droga, los ratones PTN+/+ mostraron una retención de memoria significativa en el ensayo de evitación pasiva independientemente del tratamiento recibido. Por el contrario, en los ratones PTN-/- encontramos un déficit signi-ficativo en la fase de retención inducido por anfetamina en el test de la evitación pasiva, así como 6 días después de la última administración de la droga en el test del laberinto en Y. Sin embargo, 13 y 26 días después de la última administración de anfetamina, no se encontraron diferencias significativas en el laberinto en Y entre los ratones PTN-/- pretratados con anfeta-mina y con salino (control). Además, observamos un aumento significativo de la LTP hipocampal en rodajas de ratones PTN-/- pretratados con salino comparados con PTN+/+. Curiosa-mente, el tratamiento con anfetamina durante la adolescencia aumentó significativamente la LTP en ratones PTN+/+ adultos, pero no produjo ningún efecto en ratones PTN-/-, lo que sugie-re mecanismos de saturación de LTP en ratones PTN-/-. Estos datos sugieren que el tratamiento con anfetamina durante la adolescencia provoca un déficit cognitivo transitorio depen-diendo de la expresión endógena de PTN, así como una au-mento a largo plazo de la LTP en ratones normales (PTN+/+).

O.2. Efecto de la metanfetamina en la activación de las metaloproteinasas: Implicación en la neurotoxicidad.

A. Urrutia, A. Rubio-Araiz, MD Gutierrez-López; A El Ali, DM Her-mann, E. O’Shea, MI Colado. Departamento de Farmacología. Facultad de Medicina. UCM


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(+)-Metanfetamina (METH) induce, inmediatamente después de su administración, una respuesta hipertérmica y un proce-so de estrés oxidativo/nitrosativo que están implicados en la neurotoxicidad dopaminérgica inducida por la droga (Krasno-va and Cadet, 2009). En diversos modelos experimentales am-bos factores aumentan la actividad de las metaloproteinasas (MMPs) (Alam et al, 2011; Rosenberg, 2009). El objetivo es eva-luar el efecto de METH sobre la expresión y actividad de MMPs y su relación con la neurodegeneración dopaminérgica produ-cida por la droga. Ratones C57BL/6J recibieron METH (4mg/kg, i.p cada 3 horas, 3 veces consecutivas) a 22ºC y a 4ºC y se sacri-ficaron 1h, 3h, 24h y 7 días después. Un grupo de animales fue inyectado con el inhibidor de la actividad de MMPs Batimastat (50mg/kg, i.p. 30 min antes de la primera y última inyección de METH). En estriado se cuantificó la expresión de MMP-9, su ac-tividad (zimografía en gel) y localización (zimografia in situ) así como la fosforilación de JNK1/2. Se cuantificó la concentración de dopamina (HPLC) y la densidad de su transportador (DAT) ([3H]-WIN 35,428). METH aumentó la expresión y actividad estriatal de MMP-9 1h después del tratamiento únicamente. Simultáneamente se observó un aumento en la fosforilación de JNK1/2. Cuando METH se administró a animales manteni-dos a 4ºC, el aumento en la actividad de MMPs fue sustancial-mente menor. Una semana después de la administración de METH se observó una reducción en la concentración estriatal de dopamina y en la densidad de DAT, efectos que no fueron modificados por la administración de Batimastat. METH induce un incremento en la actividad y expresión de MMP-9 que es parcialmente dependiente de la respuesta hipertérmica que induce la droga pero que parece no estar implicado en la neu-rotoxicidad dopaminérgica.

Referencias:

1. Krasnova I and Cadet J. 2009. Methamphetamine toxicity and messengers of death. Brain Res Rev, 60, 379-407.

2. Alam M, Mohammad A, Rahman S, Todd K, Shuaib A. 2011. Hyperthermia up-regulates matrix metalloproteinases and accelerates basement degradation in experimental stroke. Neurosci Lett, 495, 135-139.

3. Rosemberg GA. 2009. Matrix metalloproteinases and their multiple roles in neurodegenerative diseases. Lancet Neur, 8, 205-216.

Agradecimientos:

MICINN (SAF2010-21529; RD06/0001/006), PNSD (PR47/10-17826), UCM (910258), FEDER y RTA

O.3. Posible participación del factor de transcrip-ción Nrf2 en la depresión.

María Dolores Martín-de-Saavedra, Josiane Budni, Mauricio P. Cunha, Silvia Lorrio, Isabel Lastres, Laura del Barrio, Vanessa Gó-mez, Ignacio Melgar, Adriana Morgado, Laura G. Curull, Izaskun Buendía, Esther Parada, Ana Lùcia S. Rodrigues, Antonio Cua-drado/ Manuela G. López. Instituto Teófilo Hernando de I+D del Medicamento y Departamento de Farmacología y Terapéutica. Facultad de Medicina. Universidad Autónoma de Madrid.

Existe cada vez mayor evidencia de una relación entre depre-sión e inflamación. Además, el hecho de que existan entre un 30 – 40 % de pacientes que no responden a los tratamientos con antidepresivos hace necesario encontrar una nueva diana terapéutica o un tratamiento farmacológico alternativo. Nrf2 es un factor de transcripción que juega un papel fundamen-tal en defensa celular frente a daño oxidativo y electrofílico. Además se ha descrito que está implicado en la atenuación de procesos patológicos relacionados con inflamación. Con estos antecedentes nos planteamos la hipótesis de si Nrf2 podría estar relacionado con la fisiopatología de la depresión y por lo tanto constituir una diana terapéutica frente a dicha enfer-medad. Así, realizamos distintos test predictivos de compor-tamiento depresivo en ratones salvajes y ratones knock out para Nrf2. Los tres tests realizados mostraron que los ratones Nrf2 (-/-) presentan un fenotipo depresivo por observarse un aumento del tiempo de inmovilidad en el test de natación for-zada, en el test de suspensión de la cola y una disminución del tiempo de lamido en el test de sacarosa. No se observaron alteraciones en la actividad motora. Las alteraciones a nivel de comportamiento se vieron acompañadas de alteraciones a ni-vel de plasticidad sináptica (BDNF, VEGF y sinaptofisina) y otros parámetros alterados en pacientes de depresión mayor como son la fosforilación de GSK3β en la Ser9 o los niveles de recep-tor glucocorticoide (medidos mediante western blot). Además se observó mediante qrt-PCR que la microglía se encuentra activada en los ratones Nrf2 (-/-). Al administrar rofecoxib, un antiinflamatorio no esteroideo, durante 7 días el fenotipo depresivo de los ratones Nrf2 (-/-) se vio revertido. Con estos resultados podemos concluir que Nrf2 podría estar implicado en la fisiopatología de la depresión por un mecanismo rela-cionado con la inflamación ya que al eliminar esta proteína los ratones muestran un comportamiento depresivo acompañado de alteraciones a nivel molecular de distintos parámetros rela-cionados con neuroplasticidad y resistencia a glucocorticoides.

O.4. Estimulacion del núcleo medial del rafe (NMR) modula el status epilepticus (se) in-ducido por pentilentetrazol (PTZ) en ratas jóvenes.

Julián. Javela1, Pablo Bascuñana1, Eduardo D. Martín2, Miguel A. Pozo1 1. Unidad de Cartografía Cerebral, Instituto Pluridisci-plinar, Universidad Complutense de Madrid; 2. Grupo de Neu-rofisiología y Plasticidad Sináptica, Centro Regional de Investi-gaciones Biomédicas, Universidad Castilla-La Mancha.

En los últimos años se ha incrementado la evidencia que vin-cula la neurotransmisión serotonérgica con la modulación de una gran variedad de modelos experimentales de epilepsia. Si bien esta modulación se ha relacionado con la activación de receptores postsinápticos serotonérgicos tipo 5-HT1A, los mecanismos circuitales que subyacen a este control no han sido claramente determinados. El objetivo del presente tra-bajo ha sido investigar los circuitos serotonérgicos implicados en la modulación de las crisis epilépticas del lóbulo temporal, en particular la vía Rafe-Hipocampo, utilizando un modelo de status epilepticus (SE) inducido por pentilentetrazol (PTZ). Ratas

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Sprague Dawley macho (170±30 g) fueron anestesiadas con isoflorano (al 5% para inducción y al 2% para mantenimiento) y el cráneo trepanado para introducir un electrodo bipolar de estimulación en el Núcleo Medial del Rafe (NMR), un electrodo monopolar de estimulación en las colaterales de Schaeffer y un electrodo de registro en la capa piramidal de CA1 de hipocam-po de acuerdo con las coordenadas estereotáxicas. Todos los experimentos se llevaron a cabo en animales despiertos. Para la inducción del SE se utilizó PTZ, un antagonista de receptores GABAA, aplicado intraperitonealmente a dosis repetidas de 40, 20, 10 mg/kg cada diez minutos hasta desencadenar el SE. Se registraron los cambios electrofisiológicos y conductuales y fi-nalmente se evaluó la muerte neuronal en cortes histológicos con la tinción de Nissl. Los datos fueron analizados mediante un análisis de varianza de un factor (ANOVA) seguido de un una prueba post-hoc Dunnett. La aplicación de PTZ, según el pro-tocolo establecido, provoca crisis tónico-clónicas (70-80 mg/kg) que posteriormente desencadena un SE (100 mg/kg). La estimulación repetida del NMR (1 tren de 20Hz, 150 μA durante 1s), en el momento de inicio de los espasmos (estadio 2), fue capaz de disminuir significativamente tanto el número como la duración de las crisis, aumentando el intervalo de tiempo entre crisis. Igualmente, la estimulación del NMR impidió el es-tablecimiento del SE inducido PTZ en el 100% de los animales tratados. Los estudios histológicos mostraron que los animales estimulados no presentaron muerte neuronal. Estos resultados indican La estimulación eléctrica del NMR sincronizada con el inicio de las crisis es capaz de abolir el SE inducido por PTZ en animales jóvenes y de esta manera demostrando la parti-cipación del circuito rafe-hipocampo en la modulación del SE. Financiado por SAF2009-09020.

O.5. La adquisición de nuevas estrategias de aprendizaje espacial en el laberinto radial de ocho brazos depende de la carga genética de los individuos: efectos de la administración crónica de cocaína.

Fole A.1,2, Miguéns M.1, Higuera-Matas A.1, Ambrosio E.1, Del Olmo N.2. 1. Departamento de Psicobiología. Facultad de Psi-cología. UNED; 2. Departamento de Ciencias Farmacéuticas y de la Alimentación, Facultad de Farmacia. Universidad San Pa-blo CEU, Boadilla del Monte, Madrid.

Experimentos previos realizados en nuestro laboratorio de-mostraron la existencia de importantes diferencias en la plas-ticidad sináptica hipocampal entre las razas de ratas Lewis y Fischer344 razas tras la administración crónica de cocaína. Debido a que los mecanismos fisiológicos que subyacen a los procesos de aprendizaje y memoria parecen estar íntimamen-te relacionados con los implicados en la adicción a las drogas, nos planteamos conocer si las diferencias encontradas en la plasticidad sináptica en ambas razas se correlacionaban con cambios en los procesos de aprendizaje y memoria espacial. Para ello, hemos realizado experimentos conductuales en el laberinto radial de ocho brazos (RAM) con el fin de evaluar si la administración crónica de cocaína afecta a la adquisición

de nuevas estrategias de aprendizaje. Se administró cocaína (15mg/kg) o salino a ratas macho y adultas de las razas Lewis (LEW) y Fischer-344 (F344) desde siete días antes de iniciar los ensayos conductuales hasta la finalización de los mismos. Se utilizó un protocolo del entrenamiento de los animales en la tarea de búsqueda y localización de refuerzos de comida que se dispusieron en cuatro de los ocho brazos del laberinto y una vez que los animales hubieron consolidado esta conducta, se cambió la localización del alimento a cuatro brazos distintos. Los animales F344 presentaron una menor capacidad para la adquisición de nuevas tareas de aprendizaje espacial que pue-den relacionarse con su menor plasticidad sináptica hipocam-pal. Además, la administración crónica de cocaína empeoró la capacidad de los animales para la adquisición de nuevas estra-tegias espaciales siendo este efecto más significativo en la raza F344. Estos datos revelan que la cocaína influye en el aprendi-zaje espacial en función de la carga genética de los individuos.Investigación financiada por el Instituto de Salud Carlos III (Red de Trastornos Adictivos, RTA, Proyecto número RD06/001/0029), el Plan Nacional sobre Drogas (Proyecto número 2008-I-070 de 2008-2010) y el Ministerio de Ciencia e Innovación (Proyectos número SAF2007-064890 y SAF2008-02902).

O.6. Efectos a largo plazo de la administración de cocaína durante la edad adolescente sobre receptores cannabinoides cb1 y cb2 en un modelo animal de separación materna tem-prana. dimorfismos sexuales.

A. Llorente-Berzala, M.A. Assisb, T. Rubinoc, E. Zamberlettic, E. M. Marcoa, D. Parolaroc, E. Ambrosiob and M. P. Viverosa. aDepartamento de Fisiología (Fisiología Animal II), Facultad de Ciencias Biológicas, Universidad Complutense de Madrid, Instituto de Investigación Sanitaria del Hospital Clínico San Car-los (IdISSC), Madrid; bDepartamento de Psicobiología, Facultad de Psicología, UNED, Madrid; cDBSF y Centro de Neurociencia, Universidad de Insubria (Italia).

La cocaína es una de las drogas ilícitas más consumidas en Eu-ropa, principalmente en edad juvenil. La exposición a situacio-nes de estrés en edades tempranas del desarrollo parece con-tribuir al desarrollo de diversas enfermedades neuropsiquiá-tricas, que frecuentemente aparecen en la edad adolescente. De hecho, en estudios recientes, hemos descrito importantes alteraciones conductuales, neuroendocrinas, y bioquímicas como consecuencia de la exposición a un episodio prolonga-do de separación materna temprana (SM, 24h el día 9 de vida postnatal, PN) en ratas. Además, se han observado importan-tes alteraciones a nivel del sistema cannabinoide endógeno (SCE), que continúa su desarrollo y maduración en la edad adolescente, y que juega un papel crucial en los procesos de adicción y dependencia. Por ello, en el presente estudio inves-tigamos los efectos a largo plazo de la administración crónica de cocaína durante la edad adolescente en nuestro modelo de SM. Analizamos la expresión y funcionalidad de receptores cannabinoides cerebrales de tipo 1 (CB1), así como las varia-ciones en la expresión de receptores cannabinoides de tipo 2



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(CB2) en la periferia, bazo y médula ósea, dado el importante papel del SCE en la respuesta inmunitaria y como consecuen-cia de la comorbilidad observada entre el consumo de drogas de abuso y la aparición de enfermedades infecciosas. Ratas Wistar de ambos sexos sometidas al protocolo de SM o man-tenidas en condiciones estándar (control) fueron administra-das con cocaína (8 mg/kg/día, i.p.) o salino durante el periodo adolescente (15 días, desde el día 28 al 42 de vida PN). En edad adulta (PN 85), se evaluó la expresión y la funcionalidad de los receptores CB1 en diversas áreas cerebrales mediante técnicas de autorradiografía con [3H]-CP55,940 y [35S]-GTP�S estimula-�S estimula-da con WIN55,212-2, respectivamente. Tanto la administración de cocaína en edad adolescente como la SM provocaron no-tables cambios sexo-dimórficos a nivel de los receptores CB1, principalmente en relación a la funcionalidad del mismo. Entre los resultados más interesantes cabe destacar que la cocaína produjo, exclusivamente en animales macho control, una dis-minución significativa en los niveles de expresión de CB1 en la corteza prefrontal, así como un aumento en la actividad del re-ceptor en el caudado-putamen y el área tegmental ventral, no observándose dichos efectos ni en machos SM ni en hembras. Por otro lado, la expresión de receptores CB2, medidos por Western blot, se vio afectada por ambos tratamientos. Tanto en machos como en hembras, la SM aumentó significativamente los niveles de CB2 en bazo, mientras que la administración de cocaína pareció contrarrestar tal efecto. En médula ósea, la expresión de CB2 pareció disminuir como consecuencia de la administración de cocaína en edad adolescente. El consumo de cocaína entre los jóvenes es un grave problema de salud pública que puede ir acompañado de importantes complica-ciones neuroinmunológicas y cuya gravedad podría depender de la exposición previa a situaciones de estrés, siendo particu-larmente relevantes los episodios de estrés sufridos en etapas tempranas del desarrollo. El empleo del presente modelo ani-mal permite analizar en profundidad las consecuencias a largo plazo de estos dos fenómenos (estrés neonatal y consumo adolescente de cocaína), y apunta al SCE como posible diana en la mediación de algunos de sus efectos.Financiado por el Instituto de Salud Carlos III, Redes temáti-cas de Investigación Cooperativa en salud (ISCIII y FEDER): RD06/0001/1013 y RD06/0001/0029. GRUPOS UCM-BSCH (951579) y Plan Nacional sobre Drogas del Ministerio de Sani-dad y Política Social (SAS/125/2009 y 2008-I-070).

Sesión Oral II: Mecanismos de señalización

0.7. La mutación P86L-CALHM1, ligada a la enfer-medad de Alzheimer, altera la señalización de calcio nuclear.

Ana J. Moreno Ortega1,2,3,4, Javier Egea1,2, Elba Alonso1,3,4, An-tonio G. García1,2,3,4, Manuela G. López1,2, Ana Ruiz Nuño1,3,4 y María F. Cano Abad1,2,3,4. 1 Instituto Teófilo Hernando de I+D del Medicamento y 2 Departamento de Farmacología y Tera-péutica, Universidad Autónoma de Madrid 3 Instituto de Inves-tigaciones Sanitarias La Princesa y 4 Servicio de Farmacología Clínica, Hospital Universitario La Princesa.

La mutación P86L del nuevo canal de calcio (Ca2+) CALHM1 (acrónimo inglés CALcium Homeostasis Modulator 1) parece es-tar implicada en la progresión de la EA esporádica (Lambert y col., 2010). Se ha visto que este polimorfismo (P86L-CALHM1), además de alterar la homestasia del Ca2+ citosólico, incremen-ta la producción del péptido beta-amiloide (βA) (Dreses-We-rringloer y col., 2008). Datos de nuestro laboratorio demues-tran que P86L-CALHM1 no solo altera la homeostasia de Ca2+ en el citosol, sino que también lo hace en la mitocondria, lo que podría originar una sobrecarga de Ca2+ mitocondrial y muer-te celular (Moreno-Ortega y col., 2010). Sin embargo poco se sabe de la homeostasia de Ca2+ en el núcleo, ya que CALHM1 se expresa en el retículo endoplásmico (RE) (y por ende en la envuelta nuclear) y podría influir en la homeostasia del Ca2+ en este compartimento, clave en el control de la transcripción de genes regulados por Ca2+. El objetivo de nuestro trabajo fue estudiar la influencia de CALHM1 sobre la concentración de Ca2+ nuclear ([Ca2+]nu). Para ello, cotransfectamos en cé-lulas HeLa: i) un vector vacío (control), ii) el canal nativo (WT-CALHM1), iii) P86L-CALHM1, junto con ecuorina nuclear (una sonda bioluminiscente sensible a Ca2+, dirigida genéticamente a núcleo). La expresión de CALHM1 y P86L-CALHM1 aumentó la [Ca2+]nu basal y alteró la [Ca2+]nu inducida por un pulso de histamina (100 μM). Estos experimentos sugieren que CALHM1 y P86L-CALHM1 están influyendo en la [Ca2+]nu per se o a tra-vés de los receptores de inositol 1,4,5-trisfosfato (InsP3Rs). Para confirmar nuestra hipótesis, empleamos el bloqueante de los InsP3Rs, 2-aminoetoxidifenil borato (2-APB). Observamos que en presencia de 2-APB no hay una reducción significativa de la [Ca2+]nu basal; sin embargo, se ve parcialmente reducida la [Ca2+]nu mediada por pulsos de histamina. Estos resultados su-gieren que CALHM1 podría actuar como una canal tipo goteo (leaky-channel) y que alteraría la [Ca2+]nu con consecuencias en la transcripción de genes regulados por Ca2+.

Referencias:

1. Dreses-Werringloer, y col.., 2008. Cell. 133:1149-1161. 2. Lambert y col., 2010. J Alzheimers Dis., 22: 247-55. 3. Moreno-Ortega, y col., 2010. Biochem. Biophys. Res. Commun, 391:

722-726.

O.8. Concentraciones nanomolares de ouabaína activan la vía intrínseca de la apoptosis en las células HeLa.

Elba Alonso, 1,3 María F. Cano-Abad, 1,3 Ana J. Moreno-Ortega, 1,3 Jesús Novalbos, 1,3 Juan Milla, 1,2,3 Antonio G. García y 1,3

Ana Ruíz-Nuño. 1Instituto Teófilo Hernando, 2Departamento de Farmacología y Terapéutica, Facultad de Medicina, Univer-sidad Autónoma de Madrid. 3Servicio de Farmacología Clínica, Instituto de Investigaciones Sanitarias, Hospital Universitario de la Princesa, Universidad Autónoma de Madrid.

Concentraciones nanomolares de ouabaína (OUB), no inhibito-rias de la Na+K+ ATPasa (NKA) de la membrana celular, activan diversas señales intracelulares. Nosotros hemos estudiado al-gunas de estas señales tras la incubación con concentracio-



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nes nanomolares de OUB durante 24h en células HeLa. Tras la estimulación con histamina, hemos observado una rápida elevación del calcio citosólico ([Ca2+]c) en células cargadas con fura-2 que se reduce a la mitad tras incubar con 300 nM del digitálico. Además se produce daño y redistribución de las mi-tocondrias y una disminución de los niveles de ATP del 40% y un 30% de la viabilidad celular. Las caspasas 3/7 y 9 quintupli-can su actividad mientras que la caspasa 8 no se ve afectada. Z-LEHD-FMK evita la activación de la caspasa 9 y disminuye a la mitad la apoptosis ouabaínica. Esto podría explicarse del siguiente modo: (i) la unión de la OUB a la NKA produce un daño mitocondrial; (ii) este daño conduce a la despolarización de la mitocondria y a una disminución del ATP; (iii) se produce la activación de la caspasa 9 seguida de la activación de las cas-pasas 3/7; (iiii) la caspasa 3 daña el receptor de 1, 4, 5-inositol-trifosfato del RE provocando un goteo constante de calcio ha-cia el citosol. Ya que hay una concentración nanomolar de OUB endógena en mamíferos, nuestros resultados podrían apuntar a un posible papel regulador de la apoptosis de los esteroides cardiotónicos en los procesos fisiológicos.

O.9. La liberación de óxido nítrico neuronal dis-minuye en arteria mesentérica de hembras adultas en periodo de lactancia.

Esther Sastre, Javier Blanco-Rivero, Miriam Granado, Gloria Balfagón. Departamento de Fisiología, Facultad de Medicina. Universidad Autónoma de Madrid.

Ha sido sugerido que la lactancia puede estar contraindi-cada en algunas mujeres con presión arterial límite, o franca hipertensión, puesto que aumenta la resistencia vascular. El tono vascular de la arteria mesentérica está regulado, entre otros factores, por los distintos tipos de inervación, entre otras, adrenérgica y nitrérgica. Por lo tanto, el objetivo del presente estudio fue analizar si la lactancia afecta la respuesta vasomo-tora inducida por estimulación eléctrica (EE) en arteria me-sentérica de rata, así como la participación de las inervaciones adrenérgica, y nitrérgica en estas posibles modificaciones. Se utilizaron ratas hembra adultas Sprague-Dawley divididas en dos grupos experimentales: 1) en fase estro, y 2) madres tras un periodo de lactancia de 21 días. Se analizaron las variaciones de la respuesta vasoconstrictora a EE (200 mA, 0.3 ms, 1–16 Hz, 30 s) en presencia/ausencia de 1 mmol/L del antagonista de los receptores a-adrenérgicos fentolamina, o de 0.1 mmol/L del inhibidor inespecífico de la óxido nítrico sintasa (NOS) L-NAME. Se analizó la respuesta vasoconstrictora a noradrenalina (NA) y vasodilatadora al donante de óxido nítrico (NO) DEA-NO. Asi-mismo, se midió la liberación de NA y de NO, y la expresión proteica de la NOS neuronal fosforilada (P-nNOS).

La respuesta contráctil inducida por EE fue significativamente mayor en madres lactantes. La fentolamina redujo la respues-ta a EE en igual medida en ambos grupos. Tanto la liberación cómo la respuesta vasoconstrictora a NA fueron similares en ambos grupos. L-NAME incrementó la contracción inducida por EE en ambos grupos, pero en mayor medida en hembras en estro. La respuesta a DEA-NO fue similar en ambos grupos

experimentales. Tanto la liberación de NO como la expresión de P-nNOS se vieron disminuídas en arterias de madres lactan-tes. El incremento en la respuesta vasoconstrictora inducida por EE en madres lactantes ha podido ser debido a una dismi-nución en la liberación deNO de origen neuronal, lo cual puede contribuir a un aumento en la resistencia vascular periférica.Subvencionado por el Ministerio de Ciencia e Innovación (SAF2009-10374)

O.10. Función de la mitocondria en la regulación de la homeostasia intracelular del calcio y su papel en la secreción de catecolaminas en las células cromafines bovinas.

Juan-Fernando Padín(1,2); Afonso Caricati-Neto(4), Edilson-Dan-tas Silva-Junior(4), Antonio M. G. de Diego(1,2), Aron Jurkiewi-cz(4), Antonio G. García(1,2,3). 1Instituto Teófilo Hernando (ITH); 2Departamento de Farmacología y Terapéutica; 3Servicio de Farmacología Clínica, Hospital Universitario de la Princesa. Fa-cultad de Medicina, Universidad Autónoma de Madrid. 4Depar-tamento de Farmacología, Universidad Federal de São Paulo (Brasil).

Estudios previos realizados en nuestro laboratorio con células cromafines bovinas (CCBs) han demostrado que la liberación de catecolaminas inducida por acetilcolina (ACh), altas concen-traciones de K+ o con cafeína, se potencia cuando se bloquea con protonóforos la captación del Ca2+ mitocondrial (Montero et al, Nature Cell Biology 2000; Cuchillo-Ibáñéz et al., J. Physiol., 2004). Sin embargo, todavía se desconoce si los bloqueantes más selectivos del uniportador mitocondrial (MUP) como el RU360 (RU), o los inhibidores del intercambiador de Na+/Ca2+ (MNCx) como el CGP37157 (CGP), afectan a estas respuestas secretoras. En el presente estudio mostramos los efectos de los compuestos: RU, CGP, el protonóforo FCCP, y la combinación de oligomicina y rotenona (O/R) (para bloquear la respiración mitocondrial), sobre la respuesta secretora, y también sobre los cambios en la concentración de Ca2+ citosólico ([Ca2+]c) inducidos por ACh, en las CCBs. Los resultados que hemos ob-tenido son que RU aumentó tanto el pico de secreción (PS) (95%) como el tiempo de la constante de aclaramiento de la [Ca2+]c (tiCa) (49%). En contraste, el CGP redujo el PS (19%) pero aumentó tiCa (64%). La combinación de RU/CGP aumentó am-bos, el PS (71%) y tiCa2+ (47%). Por otra parte, el FCCP (110% y 248%) y O/R (148% and 58%) incrementaron tanto el PS como la tiCa, respectivamente. Por lo tanto, parece que todas las manipulaciones farmacológicas de los movimientos de calcio mitocondrial producen un incremento en la tiCa, mostrando un enlentecimiento en el aclaramiento del calcio cuando se altera la función mitocondrial. Como consecuencia de esta ma-yor disponibilidad de Ca2+ en el citosol, el transporte vesicular, el acoplamiento de las vesículas en la membrana, y la exocitosis también aumentan. Estos resultados confirman y amplían el conocimiento de la gran importancia que tiene la mitocondria en la fina regulación de la homeostasia celular del calcio, y su función en la respuesta secretora de catecolaminas, tras la ac-tivación por el neurotransmisor endógeno ACh.

http://www.sciencedirect.com/science?_ob=ArticleURL&_udi=B6T1J-4YRHCXB-8&_user=885410&_coverDate=03%2F31%2F2010&_rdoc=1&_fmt=high&_orig=search&_sort=d&_docanchor=&view=c&_acct=C000047353&_version=1&_urlVersion=0&_userid=885410&md5=5bc3af6e05fc274329dfb59d5713ef97#aff1









2011Vol. 1 No. 1:2

doi: 10:3823/601

O.11. Los antagonistas de los canales calcio de bajo umbral de activación también bloquean los canales de calcio de alto umbral.

José C. Fernández-Morales1 , Juan Fernando Padín1, Marcos Maroto1, Enrique Calvo1, Antonio G. García1,2 , Antonio M.G. De Diego1. 1Instituto Teófilo Hernando, Departamento de Farmacología y Terapéutica, Facultad de Medicina. Universi-dad Autónoma de Madrid. 2Servicio de Farmacología Clínica, Hospital Universitario de la Princesa. Universidad Autónoma de Madrid.

El Ni2+, mibefradilo y el NNC 55-0396 (NNC) son ligandos am-pliamente utilizados para la caracterización farmacológica de los canales de calcio voltaje-dependientes (CCVD) de bajo um-bral de activación (tipo T). Sin embargo, a las concentraciones empleadas habitualmente en la literatura, hemos observado que estos ligandos carecen de la selectividad para bloquear las corrientes de tipo T. Con el objetivo de conocer en profun-didad sus propiedades farmacológicas, hemos estudiado sus efectos sobre las corrientes de Ba2+ (IBa), la respuesta secre-tora y las variaciones en la concentración de Ca2+ citosólico ([Ca2+]c) en cultivos primarios de células adrenales cromafines (CC) de tres especies animales distintas. Hemos empleado la rata adulta (CCRA), el ratón (CCRT) y la vaca (CCB), por estar descrito que sólo expresan los CCDV de alto umbral N, L y P/Q, y carecer de los de tipo T, y hemos realizado un estudio comparativo con las CC de rata embrionaria (CCRE), ya que expresan tanto canales de tipo T como de alto umbral. Estos estudios se realizaron mediante las técnicas de patch-clamp, amperometría y microscopía de fluorescencia con la sonda fluorescente Fura-2. En las CCB, el Ni2+ bloqueó de forma concentración-dependiente la IBa (5 mM extracelular) pro-ducida por despolarizaciones de 50 ms a intervalos de 15 s desde -80 mV a diferentes potenciales (de -60 a +60). Su IC50 en la máxima corriente (-10 mV) fue de 50 µM en CCRE y de 70 µM en CCB (+0 mV). Además, también bloqueó en CCB de forma concentración-dependiente los incrementos de [Ca2+]

c, producidos por tres despolarizaciones de K+ (5 s, 45 mM) aplicadas a intervalos de 3 min. La IC50 fue de (4,27 x 10-5 ± 0,04) M, (3,59 x 10-5 ± 0,07) M y de (6,91 x 10-6 ± 0,37) M tras 1, 4 y 7 min de perfusión del Ni2+. El bloqueo máximo se produjo de forma independiente del tiempo, y fue del 70 %. Además, en las CCRT observamos una inhibición de la secreción cuantal de catecolaminas evocada por K+ (75 mM) del 30% y del 70% a 25 µM y 50 µM de Ni2+, respectivamente. En cuanto al mibefra-dilo, en CCB bloquea el aumento de la [Ca2+]c con una IC50 de (1,10 x 10-7 ± 0,21) M, (4,87 x 10-8 ± 0,44) M, y (8,77 x 10-8 ± 0,13) M tras 1, 4, y 7 min de perfusión, respectivamente. Además, a concentraciones máximas de mibefradilo, este bloqueo es tiempo-dependiente, siendo del (42,17 ± 0,19) %, (68,75 ± 7,57) % y (82,58 ± 4,58) % tras 1, 4 y 7 min de perfusión, respecti-vamente. De manera similar, el mibefradilo (10 µM) bloqueó la IBa en un 55 %, tanto en CCRE como en CCB. Por último, el NNC, un nuevo antagonista derivado del mibefradilo, redujo en CCB la IBa un 30 % a 1 µM y prácticamente la abole a 50 µM. El bloqueo del transiente de [Ca2+]c tras 7 min de perfusión fue de (89,21 ± 10,79) % a 0.1 µM y de (90,13 ± 1,24) % a 1 µM.

En conclusión, mostramos en este trabajo que la farmacología existente para el aislamiento y estudio de los CCVD de bajo umbral es deficiente, como demuestra el que 2 de los antago-nistas más empleados (Ni2+ y mibefradilo) y uno desarrollado recientemente (el NNC) bloqueen de manera importante la IBa, los incrementos de de [Ca2+]c y la secreción cuantal de catecolaminas en tipos celulares que no expresan CCVD de bajo umbral. Por lo tanto, se debe de proceder con extrema cautela cuando se pretende disecar la función de los distintos subtipos de CCVD en células que expresan CCVD tanto de alto como de bajo umbral de activación.

Sesión Oral III: Inflamación/estrés oxidativo

O.12. Propiedades antiamiloidogénicas in vitro de 1,4-naftoquinonas.

Ortega A2, Rincón A1, Roscales S1, Jiménez-Aliaga KL2, Berme-jo-Bescós P2, Martín-Aragón S2, Buxaderas E1, Csákÿ AG1 1. De-partamento de Química Orgánica, Facultad de Ciencias Quími-cas. Universidad Complutense de Madrid. 2. Departamento de Farmacología. Facultad de Farmacia. Universidad Complutense de Madrid.

Se han estudiado las propiedades antiamiloidogénicas de una serie de 1,4-naftoquinonas (1,4-NQ) en cuanto a su interacción con el procesamiento de la proteína precursora del β-amiloide (APP) por la vía amiloidogénica. Particularmente se ha en-sayado: la inhibición de β-secretasa (BACE), la inhibición de la agregación del péptido β-amiloide, y la desagregación del mismo una vez agregado. Los compuestos con grupos hidro-xilos en el anillo quinónico (2) o bencénico (5, 6), así como 2- y 3-aril derivados (11-15) han mostrado actividad inhibitoria de BACE sin efecto en la agregación o desagregación del péptido β-amiloide. Los compuestos halogenados 8 y 10 fueron selec-tivos en la inhibición de la agregación del péptido β-amiloide. Por otro lado, 1,4-naftoquinona (1), 6-hidroxi-1,4-naftoquinona (4) y 2-(3,4-diclorofenil)-1,4-naftoquinona (26) no mostraron actividad inhibitoria de BACE, sin embargo fueron activos fren-te a la agregación y desagregación del péptido β-amiloide. La yuglona (5-hidroxi-1,4-naftoquinona) (3) y la 3-(p-hidroxifenil)-5-metoxi-1,4-naftoquinona (19) fueron activas en las tres dia-nas estudiadas. Por tanto, los derivados de 1,4-NQ estudiados, especialmente 3 y 19, pueden ser potenciales candidatos para el desarrollo de fármacos que prevengan la agregación del péptido β-amiloide y la neurotoxicidad de la enfermedad de Alzheimer.

O.13. Nuevo método de síntesis de cannabinol y análogos. Usos potenciales en el tratamien-to de enfermedades neurodegenerativas.

David M. Solano1, Maria Fernandez1,A. Agis2,Wilma Villaro2, J.V. Sinisterra y J.M. Sánchez Montero1. 1. Departmento de Química y Farmacéutica. Facultad de Farmacia. Universidad Compluten-se de Madrid. 2. Departamento de Fisiología. Facultad de Far-macia. Universidad Complutense de Madrid.

http://www.ncbi.nlm.nih.gov/sites/entrez?Db=pubmed&Cmd=Search&Term=%22Fernandez-Morales JC%22%5BAuthor%5D&itool=EntrezSystem2.PEntrez.Pubmed.Pubmed_ResultsPanel.Pubmed_DiscoveryPanel.Pubmed_RVAbstractPlus

http://www.ncbi.nlm.nih.gov/sites/entrez?Db=pubmed&Cmd=Search&Term=%22G Garcia A%22%5BAuthor%5D&itool=EntrezSystem2.PEntrez.Pubmed.Pubmed_ResultsPanel.Pubmed_DiscoveryPanel.Pubmed_RVAbstractPlus

http://www.ncbi.nlm.nih.gov/sites/entrez?Db=pubmed&Cmd=Search&Term=%22G de Diego AM%22%5BAuthor%5D&itool=EntrezSystem2.PEntrez.Pubmed.Pubmed_ResultsPanel.Pubmed_DiscoveryPanel.Pubmed_RVAbstractPlus

http://www.ncbi.nlm.nih.gov/sites/entrez?Db=pubmed&Cmd=Search&Term=%22G de Diego AM%22%5BAuthor%5D&itool=EntrezSystem2.PEntrez.Pubmed.Pubmed_ResultsPanel.Pubmed_DiscoveryPanel.Pubmed_RVAbstractPlus



2011Vol. 1 No. 1:2

doi: 10:3823/601

El uso terapéutico de los cannabinoides ha sido ampliamen-te demostrado a lo largo de la historia, como analgésicos, antiinflamatorios, antieméticos y actualmente como agentes neuroprotectores para el tratamiento de enfermedades neu-rodegenerativas como el Alzheimer. En la actualidad el uso de estos fármacos está limitado por sus efectos psicotrópicos. Existen más de 84 cannabinoides en Cannabis sativa algunos de los cuales carecen de efectos psicoactivos, entre ellos está el cannabinol (CBN). Se trata del producto primario de la de-gradación del THC y no se suele encontrar demasiado en la planta. Es un psicoactivo muy leve cuya afinidad es superior en el caso del receptor CB2 y baja en el CB1. En base a esto y a los nuevos descubrimientos en la actividad neuroprotecto-ra de los cannabinoides, hemos diseñado una nueva ruta de síntesis de CBN y estructuras análogas diseñadas mediantes técnicas de docking molecular con el objetivo de inhibir a la acetil colinesterasa y desarrollar un potencial fármaco para el tratamiento de la enfermedad de Alzheimer.La nueva ruta de síntesis que hemos desarrollado consigue la síntesis total del CBN y otras estructuras análogas en 5 pasos. Se basa en una primera condensación de 2 ciclos mediante una adición aro-mática a un carbonilo, seguida de la isomerización del corres-pondiente alcohol bencílico y posterior ciclación obteniendo el sistema de cromeno característico de los cannabinoides. Se ha realizado un estudio de las propiedades QSAR de los com-puestos sintetizados mediante técnicas computacionales así como las Ki teóricas para cada análogo con el fin de encontrar un cabeza de serie y correlacionar los resultados con los ensa-yos de inhibición in vitro.

O.14. Derivados de hispanolona suprimen la vía de señalización inflamatoria JAK-STAT en células de microglia estimuladas con inter-feron-g.

Florencia Cidre1, Sandra Herranz1, Beatriz de las Heras2, Eva Cano3, Sonsoles Hortelano1. 1.Unidad de Inflamación y Cáncer. Centro Nacional de Microbiología. Instituto de Salud Carlos III. Madrid. 2. Departamento de Farmacología. Facultad de Farma-cia. Universidad Complutense de Madrid. 3. Unidad de Neu-roinflamación. Centro Nacional de Microbiología. Instituto de Salud Carlos III. Madrid.

La búsqueda de nuevos agentes antiinflamatorios derivados de productos naturales se ha incrementado enormemente en los últimos años. Recientemente se ha descrito que deri-vados de la hispanolona como la dehidroisohispanolona (T4) o el 8,9-dehidrohispanolona-15,16-lactol (T11) ejercen efectos anti-inflamatorios en macrófagos peritoneales. Las acciones anti-inflamatorias de los derivados de la hispanolona parecen estar relacionados con la inhibición de la liberación de media-dores inflamatorios como el óxido nítrico (NO) y las prostag-landinas, así como de citoquinas como TNF-a e IL-6 a través de un mecanismo que implica la inhibición de la activación del factor de trancripción NF-kB. Sin embargo, no se conocen los efectos de estos compuestos en otros tipos celulares impli-cados en la inflamación como la microglía. Así, en este trabajo hemos evaluado los efectos anti-inflamatorios de los derivados

de hispanolona en células BV2 y en cultivos primarios de micro-glía tras estimulación con IFN-g. Nuestros datos muestran que ambos compuestos son capaces de inhibir la liberación de NO, a nivel transcripcional, siendo el compuesto T11 el más activo de los dos. Utilizando técnicas de microarray y análisis de PCR cuantitativa comprobamos que el compuesto T11 ejerce una clara inhibición de genes regulados por IFN-g tales como las quimioquinas CXCL-10 (IP-10) y CXCL-9 (MIG). Los efectos inhibi-torios del T11 parecen estar mediados por la inhibición de la vía de señalización JAK-STAT. En definitiva, nuestros resultados in-dican un nuevo mecanismo por el cual los derivados de hispa-nolona ejercen sus efectos anti-inflamatorios actuando como reguladores negativos de la vía JAK-STAT. Así, la inhibición de la activación de la microglia por parte de los derivados de hispa-nolona puede constituir una nueva estrategia terapéutica para numerosas enfermedades neuroinflamatorias. Este trabajo se ha llevado a cabo gracias a las ayudas del FIS PI08/0070 y eI ISCIII MPY1410/09 para S.H. y del FIS PI09/0218 y dele ISCIII MPY1415/09 para E.C.

O.15. Efectos neuroprotectores de la combinación de fitocannabinoides del Sativex® en mod-elos experimentales de la enfermedad de Huntington.

Sara Valdeolivas1,2,3, Valentina Satta1,4, M. Ruth Pazos1,2, Javier Fernández-Ruiz1,2,3 y Onintza Sagredo1,2,3. 1. Departamento de Bioquímica y Biología Molecular, Instituto Universitario de Investigación en Neuroquímica, Universidad Complutense, Madrid, España; 2. Centro de Investigación Biomédica en Red sobre Enfermedades Neurodegenerativas (CIBERNED); 3. In-stituto Ramón y Cajal de Investigación Sanitaria (IRYCIS); 4. Department of Neuroscience, University of Cagliari, Cagliari (Italia).

La manipulación farmacológica del sistema cannabinoide puede servir como estrategia neuroprotectora en diferentes trastornos neurodegenerativos, entre los cuales se encuentra la enfermedad de Huntington, una patología hereditaria de transmisión autosómica dominante causada por la expansión del triplete CAG localizado en el exón 1 del gen IT15 que codi-fica la proteína huntingtina. La enfermedad se caracteriza por la degeneración progresiva de las neuronas GABAérgicas de proyección estriatal y también de diferentes subpoblaciones de neuronas piramidales de la corteza cerebral, las cuales son altamente susceptibles a la toxicidad causada por la hunting-tina mutada. Múltiples evidencias han demostrado que entre los diferentes mecanismos citotóxicos implicados en esta en-fermedad se encontrarían el estrés oxidativo, la excitotoxicidad y la inflamación. Para estudiar estos mecanismos y el poten-cial de los cannabinoides frente a ellos, hemos trabajado con distintos modelos experimentales de la enfermedad de Hun-tington, generados tanto en ratas como en ratones, utilizando neurotoxinas tales como el malonato, el 3-nitropropionato o el quinolinato. Hemos observado que la administración de Sati-vex®, una mezcla de extractos botánicos ricos en Δ9-THC y CBD combinados en proporción 1:1, redujo el déficit de GABA que se produce en el estriado en el modelo de 3-nitropropionato



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y la pérdida neuronal identificada mediante tinción de Nissl en cualquiera de estos modelos. Los resultados obtenidos tam-bién demuestran que el Sativex® redujo el volumen de edema (medido mediante NMR in vivo) producido en el estriado por la lesión con malonato o quinolinato, así como se produjo una disminución de la astrogliosis (identificada mediante inmuno-tinción para GFAP) y de la microgliosis (identificada mediante inmunotinción para OX-42) en ambos modelos. La administra-ción de Sativex® también redujo la caída de la expresión del receptor CB1, de IGF-1 y de SOD-1, así como el incremento en la expresión de calpaína, en el modelo de ratas lesionadas con 3-nitropropionato. Por consiguiente, estos resultados permiten afirmar que hay datos claros a nivel preclínico en apoyo a un efecto beneficioso del Sativex® como posible agente neuro-protector en la enfermedad de Huntington, algo que deberá ser estudiado cuanto antes en pacientes dada la ausencia de tratamientos eficaces en esta patología.

Financiado por CIBERNED (PI2010/06), MICINN, España, y GW Pharmaceuticals Ltd., UK

Sesión Oral IV: Farmacología Clínica

O.16. Efecto de los polimorfismos de CYP2C9 y CYP2C8 sobre la farmacocinética de candes-artán y telmisartán.

Aneta Wojnicz, Manuel Román Martínez, María Talegón García, Dolores Ochoa Mazarro, Francisco Abad Santos, Teresa Caba-leiro Ocampo. Servicio de Farmacología Clínica. Hospital Uni-versitario de la Princesa. Madrid.

Los antagonistas de los receptores de angiotensina II (ARA-II) son fármacos utilizados en el tratamiento de la hipertensión, pero no todos los pacientes responden favorablemente al tra-tamiento. Por este motivo hemos estudiado los polimorfismos de los genes CYP2C8 y CYP2C9 para comprobar la posible aso-ciación con la farmacocinética de candesartán y telmisartán. De cada muestra de sangre de los voluntarios sanos se ha extraido el ADN en un extractor automático de ácidos nucleicos Magna-Pure (Roche®). Los análisis de mutaciones de los genes CYP2C8 y CYP2C9 se han realizado mediante PCR a tiempo real en Light Cycler (Roche®). El análisis estadístico se realizó con el progra-ma SPSS. En el ensayo clínico de candesartán (una única dosis de 32 mg) han participado 36 voluntarios sanos y se genotipa-ron 27 (14 hombres, 13 mujeres) y en el de telmisartán (una úni-ca dosis de 80 mg) han participado 48 voluntarios sanos y se genotiparon 43 (18 hombres, 25 mujeres). Se han identificado los polimorfismos de un solo nucleótido de CYP2C8: CYP2C8*2, CYP2C8*3, CYP2C8*4, y de CYP2C9: CYP2C9*2, CYP2C9*3. Los por-tadores del alelo CYP2C9*3 presentan una mayor vida media de candesartán que los metabolizadores normales (10,87 h vs 10,14 h; p≤0,05). La vida media de candesartán en los volun-tarios con el genotipo CYP2C8 *1/*4 es 1,56 veces mayor que en los sujetos con el genotipo *1/*1 (13,99 h vs 8,99 h; p≤0,05). Los voluntarios que son metabolizadores lentos para el CYP2C8 (*2/*3 y *3/*4) tienen un aclaramiento mayor del fármaco que

los metabolizadores intermedios (CYP2C8 *1/*2, *1/*3, *1/*4) (15,10 h vs 9,42 h; p≤0,05). Para telmisartán no se encuentra ninguna diferencia significativa. Estos resultados sugieren una asociación entre polimorfismos del CYP2C8 y CYP2C9 y la far-macocinética del candesartán, pero no del telmisartán.

O.17. ¿Pueden ser los receptores TLR-4 una dia-na interesante para el tratamiento del dolor neuropático? Resultados preliminares en un modelo de neuropatía por paclitaxel en rata.

David Pascual, Andrea Rincón, María Isabel Martín, Carlos Goi-coechea. Departamento de Farmacología y Nutrición. Facultad de Ciencias de la Salud. Universidad Rey Juan Carlos. Alcorcón. Madrid

Los receptores Toll-like (TLR) son unos receptores relacionados con la inmunidad innata y cuando son activados producen la liberación de citoquinas. Recientes evidencias sugieren que el TLR-4 aumenta la expresión de citoquinas en microglia y astro-citos, iniciando y propagando cuadros como el dolor crónico, lo que los convierte en dianas terapéuticas para el estudio de nuevos analgésicos. Por otro lado el paclitaxel en un agente antineoplásico efectivo en el tratamiento de muchos tipos de tumores. Uno de sus efectos secundarios más frecuentes es la neuropatía periférica que en muchas ocasiones obliga a sus-pender el tratamiento y que se suele manifestarse con alodinia e hiperalgesia. El objetivo de este estudio ha sido determinar la posible implicación de los receptores TLR-4 en la neuropatía inducida por paclitaxel en ratas. El paclitaxel (PTX) fue admi-nistrado por vía intraperitoneal (i.p.) (1 mg/kg) en cuatro días alternos (1, 3, 5 y 7). El inhibidor de la señalización de TLR-4, CLI-095 (0.5 mg/kg), se administró en los mismos días que el PTX. Se organizaron tres grupos de animales a los que se les aplicó PTX, PTX y vehículo y PTX + CLI095. Para comprobar el desarrollo de neuropatía periférica, se valoró la hiperalgesia térmica mediante el plantar test (Hugo Basile) y la alodinia me-cánica mediante un von Frey electrónico (Bioseb-Panlab) en los días 0, 7, 14, 21 y 28. El PTX produjo hiperalgesia térmica (um-bral térmico: 58.4 % ± 2.8 vs 100% respuesta basal)y alodinia mecánica (umbral a estímulos mecánicos: 46.9 % ± 1.5 vs 100% (respuesta basal) en ambas patas. El CLI095, impidió de manera estadísticamente significativa el desarrollo de la hiperalgesia térmica (117.2% ± 7) y de alodinia mecánica (96.5% ± 5.3), indu-cida por paclitaxel vs el día 0. El tratamiento con CLI095 previno tanto la alodinia mecánica como la hiperalgesia térmica en los animales tratados con paclitaxel. Estos resultados preliminares, sugieren que la modulación farmacológica de los receptores TLR-4 podría ser útil para el tratamiento del dolor neuropático.

O.18. Síntesis de nuevos bloqueantes del inter-cambiador Na+/Ca2+ mitocondrial con po-tencial neuroprotector: el caso del ITH505.

J.Martínez-Sanz1 Laura González-Lafuente2 Antonio M.G. de Diego1 Rafael León1 Cristóbal de los Ríos2 Mercedes Villarroya1.1. Instituto Teófilo Hernando, Departamento de Farmacología y Terapéutica, Facultad de Medicina, Universidad Autónoma



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de Madrid. 2. Instituto Teófilo Hernando, Fundación de Inves-tigaciones Biomédicas, Hospital Universitario de la Princesa. Madrid.

En el Instituto Teófilo Hernando (ITH) nos hemos embarcado en la búsqueda de potenciales fármacos que prolongue la su-pervivencia de neuronas vulnerables en enfermedades neu-rodegenerativas e ictus. La alteración de los movimientos de Ca2+ en la neurona en general, y en la mitocondria en particu-lar, desencadena la apoptosis y la muerte de estas neuronas. Recientemente, hemos descubierto que el compuesto CGP 37157, una benzotiazepina que bloquea inespecíficamente el intercambiador Na+/Ca2+ mitocondrial (INCm), protege células cromafines y neuronas de hipocampo de rata frente a un es-tímulo de estrés por sobrecarga de Na+ y Ca2+(Nicolau y col, 2009 y 2010) . Estos datos sugieren que el INCm podría conver-tirse en una nueva diana para el desarrollo de fármacos neuro-protectores, mitigando la excesiva circulación neuronal y mito-condrial del Ca2+. Para ello hemos emprendido un proyecto de investigación para sintetizar nuevos derivados del CGP 37157, con estructura general como la que se muestra en la Figura 1.

con glutamato 1 mM, con una máxima protección de 52 % a 30 mM, como a la sobrecarga de calcio inducida por veratridina 30 mM, donde fue capaz de reducir la pérdida de viabilidad del tejido desde 3 mM, con un máximo de 35 % de protección a 30 mM. Estos resultados son comparables, y en algunos casos mejores, a los obtenidos en nuestro laboratorio para el cabeza de serie CGP 37157 lo que, unido al hecho de que ITH505 se puede considerar un isóster modificado para mejorar el per-fil farmacocinético de CGP 37157, nos lleva a pensar que este compuesto podría ser candidato a un estudio preclínico más exhaustivo, para el tratamiento de enfermedades neurodege-nerativas y/o ictus.

Referencias:

1. Nicolau y col. Biochem. Biophys. Res. Comm. 2010, 400, 140-144. 2. Nicolau y col. J. Pharmacol. Exp. Ther. 2009, 330, 844-854.

O.19. Efecto neuroprotector de la melatonina y nuevos derivados de la melatonina en mo-delos relacionados con la patología de la en-fermedad de Alzheimer.

Izaskun Buendia, Esther Parada, Javier Egea, Laura González, Laura González C, Adriana Morgado, MI Rodriguez Franco, S. Conde y Manuela G. López. Instituto Teófilo Hernando. Depar-tamento de Farmacología y Terapéutica. Facultad de Medicina. Universidad Autónoma de Madrid.

A pesar de la gran prevalencia de la enfermedad de Alzheimer (EA) en nuestra sociedad, aun no existen tratamientos eficaces para estos pacientes ni tampoco buenos modelos experimen-tales “in vitro” que nos ayuden a evaluar nuevos medicamentos en etapas preclínicas. El objetivo principal de este trabajo ha sido poner en marcha modelos “in vitro” en los que se com-bine la patología beta amiloide y la hiperfosforilación de tau para evaluar el potencial terapéutico de dos nuevos híbridos de melatonina en la EA. Hemos empleado cultivos organotípi-cos de rodajas de hipocampo de rata de 8-10 días ya que este modelo nos permite realizar un tratamiento más crónico con los tóxicos b y ácido okadaico. La viabilidad se ha evaluado mediante la tinción con ioduro de propidio/ Hoescht.También hemos empleado la línea celular de neuroblastoma humano SH-SY5Y y, en este caso, la viabilidad celular se midió mediante la reducción de la sal de tetrazolio MTT. En el caso de las cé-lulas SH-SY5Y, las concentraciones subefectivas seleccionadas para los tóxicos fueron las de 1 µM de Aβ y 3 nM de AO, cuya asociación causó un 40 % de muerte celular; un valor signifi-cativamente mayor al ocasionado por los estímulos por sí so-los. En estas condiciones experimentales, hemos evaluado el potencial efecto neuroprotector de los compuestos ITH12290 e ITH12291 en comparación con melatonina y donepezilo. La melatonina a la concentración de 10 nM y los compuestos ITH12290 e ITH12291 a la concentración de 0,1 µM ofrecieron una protección superior al 50% frente a la toxicidad inducida por la combinación de Ab + AO; el donepezilo no ofreció pro-tección significativa. Siendo así, analizamos los mecanismos de acción de los compuestos ITH12290 e ITH12291 utilizando

NH

S

O

Cl

Cl

Z X

Y

O

R2

R1

NH

S

O

Me

Cl

FIGURA 1. Posibles derivados basados en el CGP 37157

FIGURA 2. TH505

Presentamos aquí el perfil farmacológico inicial de uno de es-tos derivados, al que denominamos ITH505, cuya estructura química aparece representada en la Figura 2. El ITH505 produjo una protección significativa cuando se ensayó en un modelo de estrés oxidativo sobre células de neuroblastoma humano SH-SY5Y, sometidas al cóctel tóxico de rotenona 30 mM y oli-gomicina A 10 mM, a las concentraciones de 0.3, 1 y 3 mM. Adi-cionalmente, mostró perfil neuroprotector en un modelo de rodajas de hipocampo de rata sometidas tanto a la incubación



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los antagonistas luzindol (antagonista de los receptores de melatonina), queleritrina (inhibidor de PKC), LY 294002 (inhi-bidor selectivo de PI3K/AKt), PD 98059 (inhibidor de MEK/ERK) y mecamilamina (antagonista no selectivo de nAChR). Para la puesta en marcha del modelo citotóxico en cultivos organotí-picos, inicialmente realizamos curvas concentración-respuesta con Aβ (0,5, 1 y 5 µM) y AO (1, 3 y 10 nM). Las concentraciones seleccionadas fueron las de 0,5 µM de Aβ y 1 nM de AO; esta combinación ocasionó un incremento sinérgico de la toxicidad celular que alcanzó un 200 % respecto a la basal. En conclusión podemos decir que hemos puesto en marcha modelos in vitro que combinan la patología Ab y la hiperfosforilación de tau en cultivos organotípicos de hipocampo y en células SH-SY5Y con el objeto de poder remedar de una forma más fisiopatológica la EA y así poder evaluar nuevos compuestos con potencial terapéutico en esta enfermedad.

O.20. Propiedades neuroprotectoras de querceti-na y rutina en la línea transgénica SH-SY5Y APPswe.

K.L. Jiménez, P. Bermejo-Bescós, S. Martín-Aragón, J. Benedí.Departamento de Farmacología. Facultad de Farmacia. Univer-sidad Complutense de Madrid.

La doble mutación sueca (KM670/671NL) de la proteína pre-cursora de amiloide (APPswe) está asociada con la aparición temprana de un tipo de Alzheimer familiar que se transmite de forma autosómica dominante. Como resultado de esta muta-ción se incrementa la producción del péptido b-amiloide de 3 a 6 veces, ejerciendo un importante efecto neurotóxico. En el presente estudio se evaluó la actividad antioxidante y antiami-loidogénica de quercetina y rutina utilizando células SH-SY5Y transfectadas con el gen APPswe como modelo experimental. Se determinaron diferentes marcadores de estrés oxidativo y de procesamiento de la APP mediante técnicas de western blot y RT-PCR. El tratamiento de las células con quercetina o rutina, a las concentraciones de 25, 50 y 100 hM ejerce un importan-te efecto antioxidante y antiamiloidogénico, sugiriendo una potencial actividad neuroprotectora en el modelo celular en estudio.

O.21. Fluoxetina modula la epileptogénesis indu-cida por pentilentetrazol.

Tishwant Kanwarjit, Pablo Bascuñana, Héctor Plaza Díaz, Rubén Fernández de la Rosa José Julián Javela, James Kelly, Miguel A. Pozo, Mercedes Delgado, Luis García-García.CAI de Cartografía Cerebral, Instituto Pluridisciplinar. Universi-dad Complutense de Madrid. Instituto Teófilo Hernando. De-partamento de Farmacología y Terapéutica. Facultad de Medi-cina. Universidad Autónoma de Madrid.

El pentilentetrazol (PTZ) es un bloqueante GABAérgico que administrado repetidamente a dosis subconvulsivas induce la aparición de crisis epilépticas espontáneas (kindling). Aunque el desequilibrio Glutamato/GABA es la causa neuroquímica de la hiperexcitabilidad neuronal responsable de la epilepsia,

poco se conoce del papel de otros neurotransmisores, en espe-cial de la serotonina. El objetivo de nuestro trabajo consistió en estudiar el papel de la transmisión serotonérgica en la epilep-togénesis inducida por PTZ. Para ello, se administró de forma subcrónica fluoxetina (FLX), fármaco inhibidor del transporta-dor de serotonina. Se evaluó la eventual modulación que di-cho fármaco ejerce sobre los efectos comportamentales, elec-trofisiológicos, metabólicos y neuroquímicos inducidos por la administración repetida de PTZ. Se emplearon ratas macho Sprague-Dawley de 250 g. El paradigma empleado consistió en la administración diaria durante 16 días de FLX (10 mg/Kg i.p.), período durante el que se administró PTZ (40 mg/Kg i.p.) 6 veces, evaluándose el comportamiento (escala modificada de Racine) durante 20 minutos después de la inyección del PTZ, además de obtener el registro electrofisiológico en hipocam-po. Tres días después de la última administración, se midió la actividad metabólica cerebral in vivo mediante tomografía por emisión de positrones (PET), determinándose la captación de fluordesoxiglucosa (FDG) en distintas áreas cerebrales. Finaliza-do los estudios in vivo, los animales fueron sacrificados y los ce-rebros extraídos para la realización de estudios histológicos y autorradiográficos. En nuestras condiciones experimentales, la FLX fue capaz de modular la actividad convulsivante inducida por la administración PTZ, reduciendo la severidad de las crisis así como la actividad epileptiforme en el registro. Además, el tratamiento con FLX disminuyó significativamente la actividad metabólica, medida mediante el SUV (standard uptake value) en diversas áreas cerebrales.La FLX al contrarrestar diversos efectos inducidos por PTZ, revela un posible papel protector de la transmisión serotonérgica en la epileptogénesis.

Sesión Oral V - Diabetes/obesidad

O.22. Papel de la AMPK en la regulación de la fun-ción vascular en ratas sensibles y ratas re-sistentes al desarrollo de obesidad.

Danila Del Rio2, Concha F. García-Prieto1, Marisol Fernández-Alfonso2, Beatriz Somoza1, Mariano Ruiz-Gayo1. 1Departamen-to de Ciencias Farmacéuticas y de la Alimentación. Facultad de Farmacia Universidad San Pablo-CEU. 2Instituto Pluridisciplinar y Facultad de Farmacia. Universidad Complutense de Madrid.

La quinasa dependiente de AMP (AMPK) se expresa a nivel ar-terial tanto en células endoteliales como en células musculares. Tiene un papel protector de la función vascular a través de la estimulación de la formación de óxido nítrico. El objetivo prin-cipal de este trabajo es determinar si la función de la AMPK vas-cular se ve alterada durante el desarrollo de obesidad. Para ello se han utilizado ratas macho de la cepa Sprague Dawley de12 semanas de edad, que se dividieron en dos grupos alimentados con una dieta control (n=5) que aporta un 10% de Kcal a partir de grasa animal y con una dieta grasa (n=10), que aporta un 45% de Kcal a partir de grasa animal (D12451; Research Diets, EEUU), durante 8 semanas. Tras la primera semana de dieta, las ratas sometidas a la dieta grasa se subdividieron en dos grupos en función de su peso corporal: ratas sensibles a la obesidad

http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/21261647

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(SO) y ratas resistentes a la obesidad (RO). Antes del sacrificio se determinó la resistencia a insulina mediante la realización de una sobrecarga de glucosa. Los animales RO mostraron un peso corporal similar al de las ratas control, mientras que el peso de las ratas SO fue significativamente superior (p<0.001). El diámetro de los adipocitos fue asimismo significativamente superior en el grupo SO (p<0.001). Ninguno de los grupos de-sarrolló resistencia a insulina. Los estudios de función vascular se realizaron en la aorta y en el lecho vascular mesentérico per-fundido. En la aorta se observó una disminución en la relaja-ción a acetilcolina (ACh, 10-9-10-4M) en ambos grupos de ratas obesas (Emax control= 88.87±1.53% vs Emax SO = 78.15 ± 2.46% vs Emax RO = 74.41 ± 1.7, p<0.001), siendo mayor en el grupo RO en comparación con el grupo SO (p<0.001), mientras que en el lecho mesentérico sólo se redujo la relajación a ACh en el gru-po RO (Emax control= 73.68 ± 5.47% vs Emáx SO = 79.97 ± 4.64% vs Emax RO = 51.88 ± 11.81, p<0.05). En presencia del inhibidor de la AMPK (compuesto C, 1 µM) la relajación a ACh (10-9-10-4M) disminuyó significativamente en todos los grupos, aunque fue menor en las ratas RO y SO (p<0.001). Estos datos sugieren que el consumo de dietas grasas favorece la disminución en la actividad de AMPK y la aparición de disfunción endotelial.Financiado por SAF-2008-02703; GR921641, FUSP-CEU y SESCA-MET. CF es becaria de FUSP-CEU.

O.23. Anakinra, un inhibidor de los receptores para Interleuquina-1 (IL-1) restaura la fun-cion endotelial alterada por la Diabetes Me-llitus Tipo I experimental.

E. Palacios, S. Vallejo, E. Cercas, F. Alvarez Sánchez, C. Peiró, C.F. Sánchez Ferrer. Departamento de Farmacología. Facultad de Medicina. Universidad Autónoma de Madrid.

Estudios de nuestro laboratorio indican que la interleuquina 1-b (IL-1b; 1, 2,5 y 10 ng/ml) induce disfunción endotelial en microvasos mesentéricos de rata, que se potencia cuando la concentración de D-glucosa extracelular asciende a 11 ó 22 mmol/L. Estos efectos son inhibidos mediante el bloqueo de los receptores para IL-1 con anakinra (AK, 10 á 100 µg/mL). En el presente trabajo se ha utilizado este agente para analizar el posible papel de estas citoquinas pro-inflamatorias en la dis-función endotelial asociada a la diabetes mellitus. Asimismo, se ha analizado el papel de la enzima NADPH oxidasa como pro-ductora de aniones superóxido, utilizando un inhibidor de la enzima (apocinina) y un barredor de aniones superóxido (tem-pol). Se estudió la relajación endotelio-dependiente inducida por acetilcolina (ACh, 0,1 nmol/L a 10 µmol/L) en microvasos aislados de la tercera rama de la arteria mesentérica, obtenidas de ratas Sprague-Dawley con diabetes inducida dos semanas antes, mediante la inyección i.p. de estreptozotocina (60 mg/kg). Algunos grupos de animales se trataron con AK durante los días previos al estudio (AK, 100 mg/kg cada 24 h durante 3 ó 7 días ; AK, 160 mg/kg cada 24 h durante 3 días). En algunos casos, antes de la curva a ACh, los vasos se preincubaron du-rante 30 min con 100 µmol/L de tempol o 10 µmol/L de apo-

cinina. El deterioro de la relajación inducida por ACh (P<0,003) a partir de la segunda semana de inducción de la diabetes se revirtió parcialmente (P<0,01) cuando los animales recibieron previamente 100 mg/kg de AK. Este efecto no se modificó por la duración del tratamiento (3 ó 7 días antes del estudio). El tratamiento de los animales diabéticos con 160 mg/kg de AK (3 días antes del estudio) restauró totalmente (P<0,001) la función endotelial de los microvasos de animales diabéticos, que fue entonces similar a la de los animales no diabéticos. Las relaja-ciones no dependientes de endotelio, inducidas con nitropru-siato sódico (1 nmol/L to 10 mmol/L), no se alteraron en los animales diabéticos con o sin tratamiento con AK. Cuando los microvasos mesentéricos obtenidos de ratas diabéticas (no tra-tadas con AK) fueron pre-incubados con 100 mmol/L de tempol o 10 µmol/L de apocinina, la disfunción endotelial se redujo de forma significativa (P<0,001), lo que sugiere la participación de estos mecanismos, posiblemente activados por las citoquinas pro-inflamatorias circulantes. La disfunción endotelial asociada a la diabetes mellitus, inducida experimentalmente en ratas, parece estar mediada por citoquinas inflamatorias del tipo de la IL-1b, ya que la función endotelial se restaura totalmente en animales tratados durante tres días con 160 mg/kg de anakinra, un bloqueante de los receptores para IL-1. Además, el mecanis-mo estimulado por estas citoquinas puede incluir la activación de la enzima NADPH oxidasa vascular y el consiguiente aumen-to en la producción de aniones superóxido.

O.24. Effects of omega-3 fatty acids on Kv7.1 chan-nels.

Cristina Moreno, Anna Oliveras, Álvaro Macías, Nùria Comes, Ángela Prieto, Alicia de la Cruz, Teresa González, Antonio Felipe, Carmen Valenzuela. Instituto de Investigaciones Bi-omédicas Alberto Sols (CSIC-UAM) Madrid.

Dietary polyunsaturated fatty acids (PUFAs) exhibit antia-rrhythmic properties that have been attributed to their abi-lity to modulate ion channels. In this work we analyzed the effects of EPA and DHA on the current, expression and traffic of KCNQ1+KCNE1 channels expressed in COS-7 cells by using patch-clamp, Western blot, and immunocytochemistry tech-niques. EPA and DHA (20 μM) increased IKs (23±6% vs. 93±24, P<0.05). This effect was not observed when KCNE1 was not transfected. The increasing effect was accompanied by an ac-celeration of the deactivation kinetics in the presence of both EPA and DHA. EPA slowed the activation kinetics, whereas DHA accelerated this process. Both PUFAs shift the activation curve of the IKs. When cells were incubated with EPA for 48h, IKs mag-nitude was smaller than under control conditions. Both fatty acids decreased the protein expression of KCNQ1 but not that of KCNE1, in a concentration-dependent manner when cells were incubated for 48h with either PUFA; which can explain the chronic effects produced by EPA incubation. This decrea-se in the KCNQ1 protein expression was not observed when cells were incubated with the proteasome inhibitor MG132 (2 μM), suggesting that these PUFAs activate the degradation of



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KCNQ1 via proteasome. Finally, we analyzed possible changes induced by PUFAs in channel traffic and in its localization in the membrane. Neither EPA nor DHA modified KCNQ1 traffic. Under control conditions, KCNQ1 were located in lipid rafts and EPA and DHA treatment impaired the localization of these chan-nels that can account with the increase in the current. Indeed, methyl-beta-cyclodextrin partially prevents the increase of IKs produced by PUFAs. Therefore, our results demonstrate that both EPA and DHA increase the IKs magnitude, induce KCNQ1 degradation via proteasome and modify the membrane locali-zation of this channel subunit. All these effects can account for the antiarrhythmic properties observed of these PUFAs.Granted by SAF2010-14916 (CV), BFU2008-00431 (AF), CSD2008-00005 (AF) and FIS (RD06/0014/0006, CV).

O.25. La diabetes tipo 1 y la hipoxia moderada in-ducen diferentes patrones de enfermedad vascular pulmonar en ratas.

Enrique Moreno, Javier Moral-Sanz, José G. Lopez-Lopez, Car-men Menéndez, Bianca Barreira, Lucia Escolano, Pilar Fernán-dez-Segoviano, Eduardo Villamor, Ángel Cogolludo, Francisco Pérez-Vizcaíno y Laura Moreno. Departamento de Farmacolo-gia, Facultad de Medicina, Universidad Complutense de Ma-drid. Instituto de Investigación Sanitaria del Hospital Clínico San Carlos (IdISSC) de Madrid. Ciber de Enfermedades Respiratorias (CIBERES). Instituto de Fisiologia, Benemérita Universidad Au-tonoma de Puebla, Mexico. Servicio de Anatomia Patologica, Hospital Universitario de Getafe, Madrid. Department of Pedi-Department of Pedi-atrics, Maastricht University Medical Center (MUMC+), School for Oncology and Developmental Biology (GROW), Maastricht, the Netherlands.

Aunque tanto la diabetes tipo 1 como la tipo 2 se han aso-ciado con una morbilidad sistémica cardiovascular, su relación con la enfermedad vascular pulmonar no ha sido analizada en profundidad. Datos epidemiológicos recientes sugieren que la diabetes es un factor de riesgo para el desarrollo de hiperten-sión pulmonar. El objetivo del presente estudio fue analizar en un modelo animal la relación entre la diabetes tipo 1 y en-fermedad vascular pulmonar. Se usaron ratas Wistar-Kyoto ma-cho que fueron aleatoriamente divididas en un grupo control (salino) y en uno diabético (inyección intraperitoneal de 70 mg/Kg de estreptozotocina) durante 4 semanas y expuestas bien a normoxia o a una hipoxia normobárica moderada (14%) du-rante otras 2 semanas. La diabetes unida a la hipoxia provocó un moderado aumento tanto en la presión pulmonar diastólica como en la presión arterial pulmonar media así como en el peso del ventrículo derecho, sin embargo los dos factores por sí solos no modificaron significativamente ninguno de estos parámetros. Ambos factores aumentaron de manera indepen-diente la muscularización de las arterias pulmonares y redu-jeron la expresión del receptor de la proteína morfogenética de hueso tipo 2 (BMPR2) a nivel pulmonar. La hipoxia, pero no la diabetes inhibió las corrientes generadas por los canales de

potasio dependientes de voltaje (Kv); mientras que la diabetes pero no la hipoxia indujo una disfunción endotelial y aumentó la actividad mieloperoxidasa en pulmón. La hipoxia moderada y la diabetes inducen un patrón de cambios diferente en los marcadores de hipertensión pulmonar y sólo la combinación de ambos factores es capaz de inducir un aumento moderado de la presión arterial pulmonar. Nuestros resultados fortalecen aún más la relación entre diabetes y enfermedad vascular pul-monar.

O.26. Alteración de la vía de la COX-1 en la res-puesta a la vasopresina en la aorta de ratas Zucker obesas.

Sara Benedito, Rosa Mª Pagán, Medardo Hernández, Albino García-Sacristán, Dolores Prieto y Ana Cristina Martínez.Sección Departamental de Fisiología Animal. Facultad de Far-macia. Universidad Complutense de Madrid.

Las concentraciones plasmáticas de vasopresina (AVP) se en-cuentran incrementadas en los individuos que padecen dia-betes mellitus (DM) tipo II. Este hallazgo no es sorprendente, puesto que la AVP es una hormona vasoactiva pero también presenta un importante carácter osmorregulador y durante la DM se produce una alteración de la osmorregulación. El objeti-vo del presente trabajo fue determinar la existencia de una rela-ción entre el comportamiento vascular de la AVP y el desarrollo de DM, es decir, en un estadío prediabético, representado por la ratas obesas Zucker. Si conocemos su efecto sobre la función vascular en una fase inicial de la enfermedad podremos hacer frente con una mayor eficacia a las serias complicaciones car-diovasculares que pueden sufrir los individuos diabéticos. Se aislaron segmentos de aorta torácica de ratas Zucker controles (RZC) y obesas (RZO) y se montaron en miógrafos vasculares para el registro de la tensión isométrica. Se realizaron curvas concentración-respuesta de AVP. La sensibilidad y la máxima contracción de la aorta a la vasopresina fueron significativa-mente menores en RZO que en RZC. La retirada mecánica del endotelio no modificó la respuesta inducida por AVP en nin-guno de los dos grupos estudiados. La inhibición de la síntesis de prostaglandinas con indometacina (3 µM) y con el inhibidor selectivo de la COX-2 (NS 398, 3 µM) provocó una reducción significativa de la respuesta de la AVP en ambos grupos de ratas. Sin embargo, la administración del inhibidor selectivo de la COX-1 (SC 560, 1 µM) solamente influyó en la respuesta vasopresinérgica de las RZC. Por tanto, podemos concluir que el efecto contráctil de la vasopresina en la aorta de RZC se en-cuentra mediado por prostanoides contráctiles sintetizados a través de la COX-1 y la COX-2, mientras que en las RZO la afec-tación de la vía de la COX-1 produce como consecuencia que la COX-2 se convierta en la única enzima de síntesis de prosta-noides que interviene en el efecto contráctil de la AVP incluso en condiciones de pre-diabetesEste estudio ha sido financiado por los proyectos nº SAF2006-09191 y SAF2009-10448 del Mi-nisterio de Ciencia e Innovación.



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Sesión Oral VI: Cardiovascular

O.27. Papel de la esfingomielinasa neutra en te-jidos vasculares sensibles a cambios en la presión parcial de oxígeno.

Lucía Escolano1, Laura Moreno1, Javier Moral1, Enrique More-no1, Carmen Menendez1, Bianca Barreira1, Eduardo Villamor2, Francisco Perez-Vizcaino1, Angel Cogolludo1. 1. Departamento de Farmacología. Facultad de Medicina. Universidad Complu-tense de Madrid. 2. Departamento de Pediatría, Grow School, Universidad de Maastricht (Holanda).

Recientemente hemos descrito que la ceramida generada a través de la esfingomielinasa neutra desempeña un papel cru-cial en la vasoconstricción pulmonar hipóxica (Cogolludo et al., 2009). En el presente estudio hemos analizado su papel en la sensibilidad de diversos territorios vasculares de pollo a cam-bios en la presión parcial de oxígeno. Para ello se estudiaron las respuestas inducidas por normoxia (21% O2) e hipoxia (0% O2) en los lados aórtico (aDA) y pulmonar (pDA) del ductus arterio-so y en las arterias pulmonares (AP) y corioalantoideas (AC) de embriones de pollo (20 días de gestación y 2 días tras eclosión). La exposición a normoxia produjo una contracción de los pDA, pero no de los aDA. Por el contrario, las AP y AC mostraron una respuesta vasoconstrictora en condiciones de hipoxia. Las res-puestas vasoconstrictoras inducidas por normoxia (en pDA) e hipoxia (en AP y AC) se inhibieron en presencia de un inhibidor de la esfingomielinasa neutra (GW-4869 10 mM) y de un anti-cuerpo frente a ceramida (xxx). En concordancia con estos re-sultados, los niveles intracelulares de ceramida aumentaron en pDA expuestos a normoxia y en AP y AC expuestas a hipoxia. La administración de esfingomielinasa de Bacillus cereus relajó los aDA y contrajo los demás vasos, mimetizando los efectos de la normoxia en pDA y aDA y de la hipoxia en AP y AC. Estu-dios de expresión por PCR cuantitativa revelaron la presencia de la esfingomielinasa neutra tipo 2 (gen SMPD3) en todos los tejidos, sin que existieran diferencias significativas entre ellos. Nuestros datos indican un papel central de la ceramida genera-da por la esfingomielinasa neutra en las respuestas vasocons-trictoras observadas en tejidos vasculares sensibles a cambios en la presión parcial de oxígeno.

Financiado por SAF2010-22066-C02-02.

O.28. La adipoquina visfatina deteriora la relaja-ción dependiente de endotelio en microva-sos humanos y de rata mediante su activi-dad nicotinamida fosforribosil transferasa.

Vallejo S, Tanya Romacho, Angulo J, Villalobos LA, Leivas A, Rodríguez-Gallego S, Bermejo E, Carraro R, Sánchez-Ferrer CF, Peiró C. Departamento de Farmacología. Facultad de Medicina. Universidad Autónoma de Madrid.La visfatina, también conocida como PBEF (pre-B cell colony-enhancing factor) o Nampt (nicotinamida fosforibosil transfe-rasa), es una nueva adipoquina secretada principalmente por el tejido adiposo, cuyos niveles se encuentran elevados en des-

órdenes metabólicos tales como obesidad y diabetes mellitus. Se ha comprobado que los niveles circulantes de visfatina se correlacionan positivamente con daño vascular y disfunción endotelial. Por ello, en este trabajo se ha investigado la capaci-dad de la visfatina para deteriorar la reactividad vascular en mi-crovasos mesentéricos de ratas Sprague-Dawley machos y en muestras de epiplon humano procedentes de pacientes some-tidos a cirugía abdominal no urgente y no séptica. La preincu-bación de los microvasos de rata con visfatina (50 y 100 ng/ml) no modificó la respuesta contráctil a noradrenalina (1pmol/L a 30 umol/L), analizada mediante un miógrafo para vasos de pequeño calibre. Sin embargo, la visfatina (10 a 100 pmol/ml) deterioró de manera concentración-dependiente la relajación producida por acetilcolina (ACh; 100 pmol/l a 3 µmol/l), sin interferir en la relajación endotelio-independiente producida por el nitroprusiato sódico (1 nmol/l a 3 umol/l). En cultivos de células endoteliales procedentes de vena de cordón umbi-lical humano (HUVEC), la visfatina (10 a 100 ng/ml) estimuló de manera concentración- dependiente la actividad nicotinamida adenina dinucleótido fosfato (NADPH) oxidasa, que fue deter-minada por quimioluminiscencia. La relajación producida por ACh, deteriorada por la visfatina (50 ng/ml), se recuperó con el inhibidor de la actividad NADPH oxidasa Apocinina (10 µmol/l). Asimismo, el inhibidor de Nampt APO886 (10 nmol/l) previno la estimulación de la NADPH oxidasa endotelial y el deterioro de la relajación producidos por la visfatina, mientras que un anticuerpo bloqueante del receptor de insulina no tuvo nin-gún efecto. En concordancia con estos resultados, el producto de la actividad Nampt, el mononucleótido de nicotinamida (100 nmol/l a 1 mmol/l) estimuló la actividad NADPH oxidasa endotelial y deterioró de manera concentración-dependiente la vasodilatación producida por ACh (10 nmol/l a 1 mmol/l). En microvasos humanos mesentéricos que fueron contraídos previamente con 35 mmol/l KCl, la vasodilatación endotelio-dependiente producida por bradiquinina (1 noml/ a 3 µmol/) se deterioró análogamente por visfatina y fue asimismo res-taurada por APO886. En conclusión, nuestros datos indican que la adipoquina visfatina deteriora la relajación endotelio-dependiente a través de un mecanismo que implica estimu-lación de la actividad NADPH oxidasa, y que está basado en su actividad enzimática Nampt. Asimismo, proponemos que la visfatina puede tener un papel potencial en el desarrollo de disfunción endotelial asociada a la obesidad o al síndrome metabólico.

O.29. La fibrilación auricular potencia los efectos de la estimulación b-adrenérgica sobre las corrientes de K+ auriculares humanas.

Ricardo Caballero, Marta G. de la Fuente, Ricardo Gómez, Ire-ne Amorós, Adriana Barana, Pablo Dolz, Lourdes Osuna, Juan Tamargo, Eva Delpón.Departamento de Farmacología. Facultad de Medicina. Univer-sidad Complutense de Madrid.

Dado que la estimulación b-adrenérgica favorece la génesis y el mantenimiento de la fibrilación auricular crónica (FAC), he-mos analizado los efectos producidos por isoproterenol (Iso,



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doi: 10:3823/601

1 nM), un agonista de receptores b-adrenérgicos sobre la co-rriente transitoria de salida (Ito), los componentes ultrarrápido (IKur) y lento (IKs) de la corriente rectificadora tardía, y sobre la corriente con rectificación interna (IK1). Las corrientes se regis-traron utilizando la técnica de patch-clamp en miocitos disocia-dos enzimáticamente a partir de muestras de las orejuelas de las aurículas derecha (AD) e izquierda (AI) de pacientes en ritmo sinusal (RS) y con FAC sometidos a cirugía cardiaca. En miocitos de pacientes en RS, el Iso apenas inhibía la Ito (14.7±3.3% a +30 mV). La inhibición de la Ito producida por Iso en miocitos procedentes de pacientes con FAC aumentaba significativa-mente alcanzando un 28.7±2.6% en la AD y un 41.1±6.4% en la AI (P<0.05 vs AD). El Iso no modificaba la IKur en los miocitos procedentes de pacientes en RS y con FAC. En miocitos de pa-cientes en RS la amplitud de la IKs era muy pequeña (25.0±4.5 pA a +30 mV) y el Iso la aumentaba en un 36.0±6.5% a +30 mV. Tal y como habíamos demostrado previamente, la amplitud de la IKs aumentaba marcadamente en miocitos de pacientes con FAC (59.7±8.3 pA a +30 mV, P<0.05) y en estos miocitos el Iso aumentaba la amplitud de la IKs significativamente más en los procedentes de la AI (87.8±6.8%) que en los de la AD

(52.1±5.4%) (P<0.05 vs RS). Por último, el Iso inhibía la IK1 en miocitos de pacientes en RS (18.4±5.1% a -100 mV), siendo este efecto significativamente más marcado en miocitos pro-cedentes de pacientes con FAC (28.1±3.6%). Experimentos de PCR cuantitativa en tiempo real demostraron que la expresión de ARNm del receptor b1-adrenérgico aumentaba significati-vamente en las muestras procedentes de pacientes con FAC, siendo este aumento mayor en la AI que en la AD (P<0.05). Por último, el Iso prolongaba significativamente la duración de los potenciales de acción (PA) registrados en los miocitos de pacientes en RS, mientras que la abreviaba significativamente en miocitos de pacientes con FAC. En conclusión, la FAC poten-cia los efectos b1-adrenérgicos sobre las corrientes de K+ que participan en la repolarización por producir un aumento en el número de receptores b1, que es mayor en la AI que en la AD. Como consecuencia, el estímulo b1 acorta la duración de los PA registrados en miocitos de pacientes con FAC, lo cual puede contribuir a la génesis y al mantenimiento de la arritmia.

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