la buena me

7/27/2019 la buena ME

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OBJETIVOS:

Realizar diferentes preparaciones microbiolgicas a partir de muestras naturales ycultivos puros.

Describir las caractersticas morfolgicas y de locomocin de microorganismosque se encuentran en muestras naturales.

Realizar frotis fijos y tinciones simples. Identificar y describir las caractersticas morfolgicas y de agrupacin de bacterias y hongos

levaduriformes.

Identificar y describir las caractersticas microscpicas y tintoriales de lasbacterias.

Localizar y describir endosporas y cpsulas bacterianas Organizar e interpretar correctamente los resultados del estudio microscpico de los

microorganismos.

RESULTADOS:

Microscopio 6Fecha; 15/08/2013Muestra; Pulque

Preparacin; HmedaTincin; Simple (Rojo Neutro)Aumento; 400 vecesDescripcin; Observamos bacilos de color rojo, y algunos valos an msgrandes (levaduras) con hilos.

Microscopio 6Fecha; 15/08/2013Muestra; Pulque

Preparacin; HmedaTincin; Sin tincinAumento; 400 vecesDescripcin; Observamos valos grandes como una sombra borrosa, yalgunas manchas de agua.


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Microscopio 6Fecha; 15/08/2013Muestra; PulquePreparacin; FijaTincin; Sin tincinAumento;1000 vecesDescripcin; No logramos observar nada

Microscopio 6Fecha; 15/08/2013Muestra; PulquePreparacin; FijaTincin; Simple (Rojo neutro)

Aumento;1000 vecesDescripcin; Observamos esferas valos grandes (levaduras) teidos derojos.

Microscopio 6Fecha; 15/08/2013Muestra; Alimento enmohecido (tortilla)Preparacin; ImprontaTincin; Simple (Azul de metileno)

Aumento; 400 vecesDescripcin; Observamos estructuras ramificadas de Penicillum sp yalgunas conidias, estericmas, fialides primarias y secundarias

Microscopio 6Fecha; 15/08/2013Muestra; Alimento enmohecido (tortilla)Preparacin; Impronta

Tincin; Sin coloranteAumento; 400 vecesDescripcin; Observamos estructuras ramificadas solo que traslucidas,casi no se ven, como una sombra borrosa.


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Microscopio 6Fecha; 15/08/2013Muestra; Alimento enmohecido (tortilla)Preparacin; fijaTincin; Simple (Azul de metileno)Aumento;1000 vecesDescripcin; Observamos ramificaciones con algunas bolitas pegadas yalgunas sueltas en el medio, quizs sean cocos, o sea estructura del

hongo.

Microscopio 6Fecha; 15/08/2013Muestra; Alimento enmohecido (tortilla)Preparacin; Fija

Tincin; Sin coloranteAumento;1000 vecesDescripcin; No logramos ver nada

Microscopio 10Fecha; 15/08/2013Muestra; Agua de floreroPreparacin; HmedaTincin; SimpleAumento;400 vecesDescripcin; Observamos una ovalo grande como una mancha sin uncontorno bien delimitado, deforme con puntos negros dentro de ella

Microscopio 10Fecha; 15/08/2013Muestra; Agua de florero

Preparacin; HmedaTincin; Sin coloranteAumento;400 vecesDescripcin; No logramos observar nada


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Microscopio 10Fecha; 19/08/2013Muestra; Agua de floreroPreparacin; fijaTincin; SimpleAumento;1000 vecesDescripcin; Observamos estructuras ovoides pero algo deformes en suorilla, como si no tuvieran un contorno bien definido

Microscopio 10Fecha; 19/08/2013Muestra; Agua de floreroPreparacin; fija

Tincin; Sin coloranteAumento;1000 vecesDescripcin; No logramos observar nada

Microscopio 9Fecha; 19/08/2013Muestra; Cultivo Bacillus SubtilisPreparacin; fijaTincin; Selectiva de endoespora (Verde de malaquita y safranina)

Aumento;1000 vecesDescripcin; Observamos bacilos morados por completo y algunosbacilos con contorno morado y al centro un circulo verde (endoespora)

en algunas en distintos lados del bacilo.

Microscopio 9Fecha; 19/08/2013Muestra; PulquePreparacin;

Tincin; Negativa con tinta chinaAumento;1000 vecesDescripcin; Observamos cuatro esferas traslucidas (capsulas) en unfondo oscuro.


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Microscopio 9Fecha; 22/08/2013Muestra; pulquePreparacin;Tincin; Negativa con tinta chinaAumento;1000 vecesDescripcin; Observamos 6 esferas traslucidas y dos valos (bateras) que

estaban rodeadas estas ltimas por un contorn incoloro.

Microscopio 12Fecha; 22/08/2013Muestra; pulquePreparacin;Tincin; Diferencial (Tincin de Gram)

Aumento;1000 vecesDescripcin; Observamos una cadena larga de diplococos, similar a unacadena, tambin observamos bolitas oscuras que tenan a su alrededor

como hilos (levaduras).

Microscopio Z-16Fecha; 22/08/2013Muestra; Cultivo de E.coliPreparacin; FijaTincin; De GramAumento; 1000 vecesDescripcin; Observamos Bacilos de color rosa (Gram negativos)desordenados.

Microscopio Z-16Fecha; 22/08/2013Muestra; Cultivo de B.cereus spPreparacin; fijaTincin; De Gram

Aumento; 1000 vecesDescripcin; Observamos bacilos de color entre azul fuerte ymorado(Gram positivo), en algunas se observaba un ovalo dentro

incoloro (endoespora)


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Microscopio Z-16Fecha; 22/08/2013Muestra; Cultivo de Neisseria spPreparacin; FijaTincin; De GramAumento; 1000 vecesDescripcin; Se observaban esferas (cocos) y esferas unidas (diplococos)de color rosa (Gram negativos) esparcidos por la preparacion

Microscopio Z-16Fecha; 22/08/2013Muestra; Cultivo de S. viridansPreparacin; FijaTincin; De GramAumento; 1000 veces

Descripcin; Se observaban esferas (cocos) y esferas unidas (diplococos)de color rosa (Gram negativos) esparcidos por la preparacion

Realizamos las dos preparaciones para ver las bacterias alcohol cido resistente pero por

desorganizacin no logramos verlas al microscopio.

Pero para poder reportarlos utilizamos los datos de nuestros compaeros de gaveta.

Microscopio Z-16Fecha; 22/08/2013Muestra; Cultivo de Mycbacterium sp.Preparacin; Fija

Tincin; BAARAumento; 1000 vecesDescripcin; Se observaban valos ms curvos de lo normal (cocobacilar)de color rosa, pero no de una manera homognea (dishomogeneidad en

la coloracin)

Microscopio Z-16Fecha; 22/08/2013Muestra; Cultivo de Staphylococcus aureus

Preparacin; FijaTincin; BAARAumento; 1000 vecesDescripcin; Observamos cocos de color agrupados en racimos deuvas (estafilococo) de color azul


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INTERPRETACIN DE RESULTADOS:

Tincin simple

Las tinciones simples solo nos permitieron ver la morfologa de las bacterias en la muestra de alimento

enmohecido y agua de pulque fijas en las que usamos colorante, las fijas sin colorante no se observ

nada lo cual es lgico ya que las clulas no tienen color.

Preparaciones hmedasDebido a no colocar de manera pareja el cubreobjetos fue que vimos algunos huecos dispersos y

traslucidos. Tardamos demasiado en ver la preparacin hmeda del agua de florero, por eso observamos

materia orgnica en descomposicin, pedazos de celulosa de las flores que hidratada, en la preparacin

del alimento enmohecido, observamos Penicillum sp y algunas conidias, estericmas, fialides primarias y

secundarias (Manual de microbioliologia UNAM 2006 pp102)

Preparaciones fijasObservamos materia orgnica en descomposicin en el gua de florero, no observamos nada en el

alimento enmohecido.

No logramos ver la capsula en las preparaciones fijas porque al fijar destruimos la estructura de lacapsula, los valos grandes antes mencionados eran levaduras.

En la mayora de las preparaciones, de ambas preparaciones, que no tenan colorante no observamos

bacterias, pero si hongos (en el alimento enmohecido) y materia orgnica en descomposicin (en el agua

de florero) y levaduras (en el pulque) pero las vimos como una sombra borrosa y no definida.

Tincin Negativa

Se observaron clulas en forma de cocos con un fondo negro y siendo la parte incolora la que evidencio

la capsula, utilizamos pulque que es una bebida fermentadora alcohlica tradicional que se produce a

partir de la fermentacin de aguamiel (smbb.com.mx).

Tincion de endospora

Utilizamos Bacillus subtilis observamos clulas bacterianas en forma de bacilos agrupados en diplococos

observando en algunas clulas la endospora en color verde, la literartura nos indica que efectivamente

B. subtilis tiene la capacidad de formar endosporas resistentes permitiendo al organismo tolerarcondiciones ambientalmente extremas.

Tincion diferencial de Gram

Esta tcnica bsicamente nos permite diferenciar el tipo de bacteria es si gram(+) o gram(-), gracias a la

composicin de la pared celular de la bacteria, donde las gram (+) al tener un gran contenido de

peptidoglucano el colorante primario forma complejos muy fuertes que difcilmente se decolroraran con

el alcohol acetona por el contrario de las gram (-) que al contener poco peptidoglucano y una membrana

externa de lipopolisacaridos, estos lpidos de disuelven con el alcohol acetona abriendo los poros y

facilitando el complejo cristal violeta-yodo y decolorando la celula y de esta manera al agregar safranina

adoptan ese color rosado. Basado en esto pudimos clasificar los siguientes microorganismos:

Escherichia coli.En la prctica observamos cocos y diplococos de color rosa lo cual indica que se trata de una bacteria

gram negativa. En la literatura encontramos que Escherichia coli. Pertenece a los enterobacteriace, queson bacilos gram negativos pequeos (0.5, por 0.3m) que no forman esporas (Zinsser pp 737).


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B. cereus spEn la prctica observamos bacilos de color morado (Gram positivo), en algunas se observaba un ovalo

dentro incoloro (endoespora), los resultados concuerdan con la literatura B. cereus es un gram positivo

esporulado. El gnero Bacillus segn la literatura se caracteriza por formar endosporas, son gram

positivos, tienen forma de bacilo y no forman ninguna agrupacin. Esto es concordante con lo

observado para Bacillus cereusyBacillus subtilistanto en la tincin de Gram y selectiva de endospora.

Neisseria spSe observaban esferas (cocos) y esferas unidas (diplococos) de color rosa (Gram negativos) esparcidos

por la preparacin.

El gnero Neisseria incluye varias comensales pero dos de gran importancia patgena N. meningitidis y

N. gonorrhoeae debido a las enfermedades clnicas que ocasionan en el ser humano.

Streptococcus viridansSe observaron cocos morados lo que indica que es una bacteria gram positiva su agrupacin es en

cadena la cual se denomina estreptococos.

Son un grupo de estreptococos sin especificidad serolgica. Se incluyen las especies: mutans, mitis,

salivarius, oralis, sanguis y las recientemente propuestas vestibularis, gordonii, crista y sobrinus.

PulqueDebido a que se fij la preparacin no observamos capsulas, pero si tio de morado (como si fueran

Gram positivas) las levaduras y lactobacilos que contiene el pulque.

En la literatura encontramos que Se han aislado cerca de quince microorganismos (bacterias y

levaduras) que intervienen en la fermentacin; entre los ms importantes se encuentran; Leuconostocmesenteroides y L. dextranicum, bacterias productoras de dextranas que le confieren la consistenciaviscosa; diversas especies de Lactobacillus que intervienen en la parte inicial del desdoblamiento de losazucares en cido lctico as como la levadura Saccharomyces cerevicea y la bacteria Zimomonas mobilis,

responsables principales del contenido alcohlico que oscila entre 4 y 6 % (Biblioteca Digital de la

medicino tradicional mexicana)

Quizs sea por la tcnica que empleamos que no pudimos ver a todos estos microorganismos, pero no

fue nuestro objeto de estudio, no obstante es de inters conocerlos, en la tincin simple logramos ver

algunas de estas bacterias y algunas levaduras.

Tincion Diferencial de Ziehl-Neelsen

Como ya sabemos esta tincin nos ayuda a distinguir entre las bacterias acido alcohol resistentes y lasbacterias no acido alcohol resistentes, esta tcnica se basa en el contenido alto de lpidos tales como

ceras A, B, C y D, unidos a polisacridos tales como glucanas, mananas, arabinogalactanas y

arinobananas , adems presenta glicolipidos, acidos micolicos etc, lo cual nos determina que la pared se

comporta de manera hidrofobica y por tanto impermeable, se les denomina acido alcohol resistente por

la naturaleza acida del decolorante, de este modo al combinarse el colorante con las ceras , estn

resisten la decoloracin con alcohol acido ya que ni los fenoles ni las ceras son solubles a este, los dems

microorganismos si se decoloran y al teirlos con azul de metileno de lffler toman el color azul.


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Micobacterium sp.En la prctica observamos bacilos teidos de manera irregular, parecan un rosario de color rosa, por lo

que interpretamos que es una bacteria cido resistente.

En la literatura encontramos que efectivamente Mycobacterium sp es un bacilo delgado recto o

ligeramente curvo (Zinsser pp 685), tambin encontramos que son bacilos cido resistentes no

formadores de esporas y capsulados (Zinsser pp 685)

Todo el gnero de las Mycobacterias presentan gran dificultad mediante la tcnica de Gram porque

poseen una gruesa cpsula protectora, de composicin lipdica fundamentalmente, que impide la

penetracin del colorante. Por ello se lleva acabo una tincion BAAR donde las bacterias alcohol

resistentes quedan de color rosa y las no resistentes quedan de color azul.

S. aureusEn la practica observamos cocos de color azul agrupados en racimos de uvas (estafilococo)

La literatura menciona sobre de S. aureus que es un coco inmvil, de 0.8 a 1 micrmetro de dimetro,

que se divide en tres planos para formar grupos de clulas irregulares semejantes a racimos de uvas. En

extendidos los cocos aparecen solos, en pares, en racimos o en cadenas cortas (a esto me refera en lasobservaciones como trozo de estambre). Esta descripcin es adecuada para las observaciones al

microscopio con los objetivos de 40x y 100x.

Comparando con la teoria podemos determinar que S. aureus no es acido alcohol resistente ya que

observamos cocos de color azul agrupados en racimos de uvas (estafilococo).

CONCLUSIONES:

En esta prctica aprendimos que dependiendo de lo que queramos observar tenemos que escoger la

tcnica adecuada, si solo queremos observar morfologa del microorganismo con una tincin simple

bastara, si quisiramos conocer la familia a la que pertenece una bacteria utilizaremos una tincin deGram, para detectar micobacterias usaramos Ziehl-Neelsen estas ltimas dos tcnicas basadas en la

pared celular del microorganismo a estudiar, en el caso de querer detectar algn orgnulo celular

podremos ayudarnos con la tincin negativa para evidenciar capsula o la tincin de endospora, la

diversidad microbiana es muy grande por lo que es de suma importancia saber que tcnica usar para

poder realizar una interpretacin correcta del estudio microscpico del microorganismo y de esta

manera tener la capacidad de elegir que tincin ser la adecuada si una simple, diferencial o selectiva.

Las diferentes tipos de tinciones nos dan informacin sobre las caractersticas estructurales, la

presencia o ausencia de determinadas partes de las clulas as como su agrupacin de la muestra.

La eleccin del colorante en las tinciones es de vital importancia dependiendo de que queramos

Observar, esto depende de la afinidad de los colorantes por ciertas estructuras y la tcnica de tincin

empleada los microorganismos no tienen color por lo que es necesario teirlos para poder observar su

estructura y diferenciar su composicin en base al fundamento de la tcnica de tincin.

Los tipos de preparacin preparaciones tienen ventajas y desventajas, y deben emplearse segn sea el

objetivo del estudio, las preparaciones hmedas nos permiten ver al microorganismo vivo, pero duran

poco tiempo, las preparaciones fijas duran mucho tiempo, nos permiten ver esttico al organismo, pero

no mata al microorganismo, adems de que algunas estructuras se ven alteradas por el calor, como la


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capsula, al fijar la preparacin el calor la destruye , por lo que para logar ver en una preparacin de

capsulas, no debemos fijar la preparacin, porqu el calor destruye la capsula.

Las tinciones simples nos dan informacin sobre la presencia, concentracin, morfologa y modo de

agrupacin bacteriana. Mientras que las tinciones diferenciales como la tincin de Gram o BAAR nos

permiten clasificar a las bacterias por su composicin en pared celular. Conociendo esto, podemos

relacionar si el microorganismo tiene propiedades como endotoxinas o resistencia a antibiticos, entre

otras ms.

Con las tinciones selectivas nos permiten observar estructuras de las clulas como capsula o endospora.

Conociendo esta, podemos saber si el organismo presenta funciones inmunognicas, inhibitorias,

estructuras de resistencia al calor, agentes fsicos y qumicos muy agresivos, para as poder contrarrestar

su crecimiento y su patogenicidad.

BIBLIOGRAFA:

Videos del blog de microbiologa experimental microexpfqunam,blogspot.mx*Preparaciones hmedas, Tincion simple, Tincion de Gram, Tincion de endospora, Tincion deZiehl Neelsen, Impronta.

http://aulavirtual.usal.es Manual de microbioliologia UNAM 2006 Zinsser: Microbiologa. Editorial: Medica Panamericana , Buenos Aires, ARGENTINA. 8Edicin Michael J. Pelczar, et al. Microbiologa. Ed. McGraw-Hill 1982, Mxico, D.F. Pg. 45 y 46. Michael J. Pelczar, et al. Microbiologa. Cuarta edicin. Ed. McGraw-Hill 1982, Mxico, D.F. Pg.58-61, 75, 77, 78, 83, 776, 778, 779, 7784. Presentacion Streptococcus viridans de la UAG :

http://kepler.uag.mx/uagwbt/microbiologia/ciencias/sesiones/tema3.2.2.pdf
http://aulavirtual.usal.es/http://aulavirtual.usal.es/http://kepler.uag.mx/uagwbt/microbiologia/ciencias/sesiones/tema3.2.2.pdfhttp://kepler.uag.mx/uagwbt/microbiologia/ciencias/sesiones/tema3.2.2.pdfhttp://kepler.uag.mx/uagwbt/microbiologia/ciencias/sesiones/tema3.2.2.pdfhttp://aulavirtual.usal.es/

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