konelab™ / t series test procedure alt/gpt (ifcc).pdf · 2013-08-23 · pyridoxal-5’-phosphate...

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Konelab™ / T Series ALT/GPT (IFCC) 981361 7 x 50 ml 981769 8 x 20 ml

THIS PACKAGE INSERT IS APPLICABLE FOR USE OUTSIDE THE US. ANY REFERENCE TO THE KONELAB SYSTEMS ALSO REFERS TO THE T SERIES.

INTENDED USE For the in vitro quantitative determination of alanine aminotransferase (L-Alanine: 2-Oxoglutarate Aminotransferase (ALT), EC 2.6.1.2) activity in human serum or plasma on Konelab analyzers. All test results must be interpreted with regard to the clinical context.

SUMMARY(1) Alanine aminotransferase (ALAT/ALT), formerly called glutamic pyruvic transaminase (GPT), and Aspartate aminotransferase (ASAT/AST), formerly called glutamic oxalacetic transaminase (GOT), belong to a group of enzymes, the aminotransferases or transaminases, which catalyze the reversible transformation of α-keto acids into amino acids by transfer of amino groups. Both AST and ALT are normally present in human plasma, bile, cerebrospinal fluid and saliva, but they are not found in urine unless a kidney lesion is present. In viral hepatitis and other forms of liver disease associated with hepatic necrosis, serum AST and ALT level are elevated even before the clinical signs and symptoms of disease appear. Levels of both enzymes may reach values as high as 100 times the upper reference limit, although 20- to 50- fold elevations are most frequently encountered Although serum levels of both AST and ALT become elevated whenever processes affect liver cell integrity, ALT is the more liver-specific enzyme. Increased AST levels can occur in connection with damages of heart or skeletal muscle as well as of liver parenchyma. Serum elevation of ALT activity is rarely observed in other conditions than parenchymal liver disease.

PRINCIPLE OF THE PROCEDURE ALT catalyzes the transfer of the amino group from alanine to oxoglutarate with the formation of glutamate and pyruvate. Pyruvate is reduced to lactate by lactate dehydrogenase (LDH). ALT L-Alanine + 2-Oxoglutarate <⎯⎯> L-Glutamate + Pyruvate LDH Pyruvate + NADH + H+ <⎯⎯> D-Lactate + NAD+ In this same reaction an equivalent amount NADH is oxidized to NAD. The resulting decrease in absorbance at 340 nm is followed and is directly proportional to the activity of ALT in serum. The IFCC reference method includes pyridoxal –5’-phosphate (P-5´-P) at a level of 0.1 mmol/l, which has been shown to be sufficient to activate apo ALT in 5 minutes (2).

REAGENT INFORMATION Reagent A: Enzyme reagent Code: 981361 7 x 40 ml Code: 981769 8 x 16 ml Reagent B: Substrate Code: 981361 7 x 10 ml Code: 981769 8 x 4 ml

Concentrations Reagent A: Enzyme reagent Tris buffer, pH 7.15 137.5 mmol/l L-Alanine 700 mmol/l LDH > 1650 U/l NaN3 < 0.1 % Reagent B: Substrate 2-oxoglutarate 82.5 mmol/l NADH 1.0 mmol/l NaN3 < 0.1 % Note: Liquid pyridoxal-5’-phosphate is not included in the kit. It can be ordered separately by code number 981839.

Precautions For in vitro diagnostic use only. Exercise the normal precautions required for handling all laboratory reagents. The reagents contain sodium azide as preservative. Do not swallow. Avoid contact with skin and mucous membranes.

Preparation Code: 981361, 981769 1-reagent method (without P-5´-P): Add the contents of Reagent B to the bottle of Reagent A. Cap vial and mix. The monoreagent must be protected from light! 3-reagent method (with P-5´-P): Reagents are ready for use. Note: Check that there are no bubbles in the bottleneck or on the surface of the reagent when you insert the reagent vials or vessels in the Konelab analyzer.

Storage and Stability Reagents in unopened vials are stable at 2…8 °C until the expiration date printed on the label when protected from light. Refer to the Application Notes of your Konelab analyzer for the on board stability of reagents.

SPECIMEN COLLECTION

Sample Type Clear serum or heparin plasma can be used.

Precautions Human samples should be handled and disposed of as if they were potentially infectious.

Storage (3) The sample can be stored for 3 days at 20…25 °C, for 7 days at 4…8 °C or for 2 days at –20 °C.

TEST PROCEDURE Refer to the Reference Manual and Application Notes for an automated procedure on your Konelab analyzer. Any application which has not been validated by Thermo Fisher Scientific Oy cannot be performance guaranteed and therefore must be evaluated by the user.

Materials provided Reagents as described above.

Materials required but not provided Pyridoxal-5’-phosphate (code 981839) for 3-reagent method. Controls as indicated below.

Calibration The response dA/min is converted to result units by a calculation factor. Or use eCal (981830) as a calibrator according to the instructions given in the package insert of eCal (981830).

Quality Control Use quality control samples at least once a day and every time a new bottle of reagent is used. Available controls: Nortrol, code 981043 Abtrol, code 981044 The Control intervals and limits must be adapted to the individual laboratory requirements. The results of the quality control samples should fall within the limits pre-set by the laboratory.

CALCULATION OF RESULTS The results are calculated automatically by the Konelab analyzer as follows: Activity in U/l = dA/min x Factor TV x 1000 Theoretical factor = - ⎯⎯⎯⎯⎯- 6.3 x SV x P where: TV= Total reaction volume in ml SV= Sample volume in ml 6.3= Extinction coefficient of NADH at 340 nm P= Cuvette pathlength = 1 Conversion factor μkat/l = (U/l)/60 If eCal (981830) is used as a calibrator, the results are calculated automatically by the Konelab analyzer using a calibration curve.

LIMITATIONS OF THE PROCEDURE Interference Criterion: Recovery within ± 10% of initial values. 1-reagent method: Conjugated bilirubin: No interference found up to 420 μmol/l (24.6 mg/dl). Unconjugated bilirubin: No interference found up to 600 μmol/l (35.1 mg/dl). Hemolysate: No interference found up to 10 g/l of hemoglobin. Lipemia: No interference found up to 2 g/l of Intralipid® (trademark of Fresenius Kabi AB). There is a poor correlation between turbidity and triglycerides concentration. 3-reagent method: Conjugated bilirubin: No interference found up to 420 μmol/l (24.6 mg/dl). Unconjugated bilirubin: No interference found up to 600 μmol/l (35.1 mg/dl). Hemolysate: No interference found up to 8 g/l of hemoglobin. Lipemia: No interference found up to 2 g/l of Intralipid®. For other interfering substances, please refer to the reference 4.

EXPECTED VALUES (2) Male: < 45 U/l (< 0.74 μkat/l) at 37 °C Female: < 34 U/l (< 0.56 μkat/l) at 37 °C The quoted values should serve as a guide only. It is recommended that each laboratory verify this range or derives a reference interval for the population that it serves.

MEASURING RANGE 1-reagent method: 4 - 300 U/l (0.07 – 5.00 μkat/l) Extended measuring range after secondary dilution: 4 – 1800 U/l (0.07 – 30.00 μkat/l) 3-reagent method: 5 - 250 U/l (0.08 – 4.17 μkat/l) Extended measuring range after secondary dilution: 5 – 1500 U/l (0.08 – 25.00 μkat/l)

PERFORMANCE CHARACTERISTICS Detection limit 1-reagent method: 2 U/l (0.03 μkat/l) 3-reagent method: 2 U/l (0.03 μkat/l) The detection limit represents the lowest measurable concentration/activity that can be distinguished from zero. It is calculated as the concentration of zero sample + 3 SD (within run, n=24).

Imprecision (result unit U/l) 1-reagent method: Mean

33 U/l Mean 90 U/l

Mean 108 U/l

SD CV% SD CV% SD CV% Within run 0.6 1.8 0.6 0.6 0.9 0.8 Between run 0.5 1.5 0.9 1.0 1.0 0.9 Total 1.0 3.0 1.8 2.0 2.7 2.4

3-reagent method: Mean

31 U/l Mean 89 U/l

Mean 109 U/l

SD CV% SD CV% SD CV% Within run 0.6 1.8 0.6 0.7 1.0 0.9 Between run 0.2 0.7 0.8 0.9 0.8 0.8 Total 0.8 2.6 1.5 1.7 2.2 2.0

A precision study was performed according to guidelines in the NCCLS Document EP5-A using Konelab 60 during 20 days, with the number of measurements being n = 80.


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Method comparison 1-reagent method: A comparison study was performed using the NCCLS Document EP9-A as a guideline and Konelab two-reagent method as a reference. Linear regression (result unit U/l): y = 0.75 x + 2.8 r = 0.988 n = 60 The sample concentrations were between 7 and 190 U/l. 3-reagent method: A comparison study was performed using the NCCLS Document EP9-A as a guideline and Konelab two-reagent method as a reference. Linear regression (result unit U/l): y = 1.00 x + 0.2 r = 1.00 n = 65 The sample concentrations were between 10 and 155 U/l. The results obtained in individual laboratories may differ from the given performance data.

BIBLIOGRAPHY 1. Burtis, CA and Ashwood, E R (ed.), Tietz Fundamentals of Clinical Chemistry, 5th

edition, W B Saunders Company, Philadelphia, 2001, pp. 354 - 355. 2. IFCC 2002/5: IFCC Primary Reference Procedures for the Measurement of Catalytic

Activity Concentrations of Enzymes at 37 °C, Part. 4 Reference Procedure for the Measurement of Catalytic Concentrations of Alanine Aminotransferase, Clin.Chem.Lab.Med. 2002, 40(7): 718-724.

3. Guder WG, Narayanan S, Wisser H, Zawta B. List of Analytes; Preanalytical variables. Brochure in: Samples: From Patient to the Laboratory. GIT Verlag GmbH, Darmstadt, 1996.

4. Young, D.S., Effects of Drugs on Clinical Laboratory Tests, Fifth Edition, AACC Press, Washington, D.C., 3-8 – 3-23, 2000.

MANUFACTURER Thermo Fisher Scientific Oy Clinical Diagnostics Finland Ratastie 2, P.O. Box 100, FI-01621 Vantaa Tel. +358 9 329 100, Fax +358 9 3291 0300 www.thermo.com/konelab

Date of revision (yyyy-mm-dd) 2007-08-14

Changes from previous version Company name updated.

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Konelab™ / T Serie ALT/GPT (IFCC) 981361 7 x 50 ml 981769 8 x 20 ml

DIESE PACKUNGSBEILAGE IST ZUR VERWENDUNG AUSSERHALB DER USA VORGESEHEN. JEDER VERWEIS AUF KONELAB-SYSTEME BEINHALTET AUCH DIE T SERIE.

ANWENDUNGSBEREICH Zur quantitativen In-vitro-Bestimmung der Aktivität der Alaninaminotransferase (L-Alanin: 2-Oxoglutarataminotransferase (ALT), EC 2.6.1.2) in Humanserum oder –plasma mit Konelab-Analysengeräten. Alle Testergebnisse müssen mit Bezug zum klinischen Zusammenhang interpretiert werden.

ZUSAMMENFASSUNG (1) Die Alaninamino-transferase (ALAT/ALT) - ältere Bezeichnung Glutamat-Pyruvat-Transaminase (GPT) - und Aspartataminotransferase (ASAT/AST) - ältere Bezeichnung Glutamat-Oxalazetat-Transaminase (GOT) - gehören zu einer Gruppe von Enzymen, den Aminotransferasen bzw. Transaminasen, welche die reversible Umwandlung von α-Ketosäuren in Aminosäuren durch den Transfer von Aminogruppen katalysieren. Sowohl AST als auch ALT sind in der Regel im Humanplasma, in der Gallenflüssigkeit, im Liquor cerebrospinalis und in der Speichelflüssigkeit enthalten, aber nicht im Urin, sofern keine Nierenläsion vorliegt. Bei der viralen Hepatitis und anderen Formen von Lebererkrankungen, die mit einer Lebernekrose verbunden sind, sind die AST- und ALT-Konzentrationen im Serum bereits vor dem Auftreten von klinischen Anzeichen und Symptomen der Erkrankung erhöht. Die Konzentrationen beider Enzyme können Werte erreichen, die 100fach über der oberen Bezugsgrenze liegen, auch wenn 20- bis 50fache Erhöhungen häufiger auftreten. Zwar erhöhen sich die Serumkonzentrationen beider Enzyme, AST und ALT, bei allen Vorgängen, die die Integrität der Leberzellen beeinflussen, ALT weist jedoch eine höhere Leberspezifität auf. Erhöhte AST-Werte können neben dem Leberparenchym auch im Zusammenhang mit Schädigungen des Herzmuskels oder Skelettmuskels auftreten. Eine erhöhte ALT-Aktivität im Serum tritt mit Ausnahme von parenchymatösen Lebererkrankungen nur sehr selten auf.

TESTPRINZIP Die ALT katalysiert den Transfer der Aminogruppe von Alanin zu Oxoglutarat, wobei Glutamat und Pyruvat gebildet werden. Das Pyruvat wird durch die Lactatdehydrogenase (LDH) zu Lactat reduziert. ALT L-Alanin + 2-Oxoglutarat <⎯⎯> L-Glutamat + Pyruvat LDH Pyruvat + NADH + H+ <⎯⎯> D-Lactat + NAD+

Bei der gleichen Reaktion wird eine äquivalente Menge NADH zu NAD oxidiert. Daraus resultiert eine Abnahme der Extinktion bei 340 nm, die direkt proportional zur Aktivität der ALT im Serum ist. Die IFCC-Referenzmethode enthält Pyridoxal–5’-phosphat (P-5´-P) in einer Konzentration von 0.1 mmol/l, die nachgewiesenermaßen ausreicht, um die Apo-ALT innerhalb von 5 Minuten zu aktivieren (2).

REAGENZDATEN REAGENZ A: Enzymreagenz Bestellnr.: 981361 7 x 40 ml Bestellnr.: 981769 8 x 16 ml REAGENZ B: Substrat Bestellnr.: 981361 7 x 10 ml Bestellnr.: 981769 8 x 4 ml

Konzentrationen REAGENZ A: Enzymreagenz Tris-Puffer, pH 7.15 137.5 mmol/l L-Alanin 700 mmol/l LDH > 1650 U/l NaN3 < 0.1 % REAGENZ B: Substrat 2-Oxoglutarat 82.5 mmol/l NADH 1.0 mmol/l NaN3 < 0.1 %

Hinweis: Flüssiges Pyridoxal-5’-phosphat ist nicht im Kit enthalten. Es kann getrennt unter der Bestellnummer 981839 bestellt werden.

Sicherheitsmaßnahmen Nur zur In-vitro-Diagnose. Befolgen Sie die üblichen Sicherheitsmaßnahmen beim Umgang mit Laborreagenzien. Die Reagenzien enthalten Natriumazid als Konservierungsmittel. Nicht verschlucken. Kontakt mit Haut und Schleimhäuten vermeiden.

Vorbereitung Bestellnr.: 981361, 981769 System mit 1 Reagenz (ohne P-5´-P): Geben Sie den Inhalt von Reagenz B in die Flasche von Reagenz A. Verschließen Sie die Flasche und mischen Sie diese. Das Reagenzgemisch muss vor Lichteinwirkung geschützt werden. System mit 3 Reagenzien (mit P-5´-P): Die Reagenzien sind gebrauchsfertig. HINWEIS: Darauf achten, dass sich im Flaschenhals oder an der Reagenzoberfläche keine Luftblasen befinden, wenn Sie die Reagenzgefäße in das Konelab-Analysengerät einsetzen.

Lagerung und Haltbarkeit Die ungeöffneten Reagenzien sind bei 2...8 °C bis zum Ablauf des Verfallsdatums auf dem Etikett haltbar, wenn sie vor Lichteinwirkung geschützt werden. Die Haltbarkeit der Reagenzien nach Einsetzen in das Konelab-Analysengerät ist in den entsprechenden Anwendungshinweisen enthalten.

UNTERSUCHUNGSMATERIAL Probenart Es kann klares Serum oder Heparinplasma verwendet werden.

Sicherheitsmaßnahmen Proben, die Humanserum enthalten, sind als potenziell infektiös zu betrachten und dementsprechend zu behandeln und zu entsorgen.

Lagerung (3) Die Probe kann 3 Tage lang bei 20…25 °C, 7 Tage lang bei 4…8 °C oder 2 Tage lang bei –20 °C gelagert werden.

TESTDURCHFÜHRUNG Angaben zur automatischen Testdurchführung mit dem Konelab-Analysengerät entnehmen Sie bitte dem Bedienungshandbuch und den Applikationshinweisen. Bei Verwendung von Applikationen, die nicht durch Thermo Fisher Scientific Oy validiert wurden, kann keine Garantie für die angegebenen Leistungsdaten übernommen werden. Für die Validation derartiger Applikationen ist daher der Anwender selbst verantwortlich.

Lieferumfang Reagenzien, wie oben beschrieben. Erforderliches, jedoch nicht im Lieferumfang enthaltenes Material Pyridoxal-5’-phosphat (Bestellnr. 981839) für die Methode mit 3 Reagenzien. Kontrollen, wie nachstehend angegeben.

Kalibrierung Die Reaktion (dE/min) wird durch einen Berechnungsfaktor in Ergebniseinheiten umgerechnet. Oder verwenden Sie eCal (981830) als Kalibrator gemäß den Anweisungen in der Packungsbeilage von eCal (981830).

Qualitätskontrolle Mindestens einmal täglich und bei jeder Verwendung eines neuen Reagenzfläschchens eine Qualitätskontrolle durchführen. Lieferbare Kontrollen:

Nortrol, Bestellnr. 981043 Abtrol, Bestellnr. 981044

Die Intervalle und Grenzen der Kontrolle müssen an die Anforderungen der einzelnen Laboratorien angepasst werden. Die Ergebnisse der Qualitätskontrollen sollten innerhalb der vom Labor vorgegebenen Grenzwerte liegen.

BERECHNUNG DER ERGEBNISSE Die Ergebnisse werden vom Konelab-Analysengerät automatisch wie folgt errechnet: Aktivität in U/l = dE/min x Faktor TV x 1000 Theoretischer Faktor = - ⎯⎯⎯⎯⎯ 6.3 x SV x P wobei: V = Gesamtes Reaktionsvolumen in ml V = Probenvolumen in ml 6.3 = Extinktionskoeffizient von NADH bei 340 nm P= Pfadlänge der Küvette = 1 Konversionsfaktor μkat/l = (U/l)/60 Wenn eCal (981830) als Kalibrator verwendet wird, werden die Ergebnisse vom Konelab-Analysengerät automatisch mit einer Bezugskurve berechnet.

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GRENZEN DES VERFAHRENS Störfaktoren Kriterium: Wiederfindung von + 10% der Ausgangswerte. System mit 1 Reagenz: Konjugiertes Bilirubin: Keine Interferenzen bei bis zu 420 μmol/l (24.6 mg/dl). Nicht-konjugiertes Bilirubin: Keine Interferenzen bei bis zu 600 μmol/l (35.1 mg/dl). Hämolysat: Keine Interferenzen bei Zugabe von Hämoglobin von bis zu 10 g/l. Lipämie: Keine Interferenzen bei Zugabe von Intralipid® von bis zu 2 g/l. (Warenzeichen der Fresenius Kabi AB). Es besteht eine schwache Korrelation zwischen der Trübung und der Konzentration der Triglyceride. System mit 3 Reagenzien: Konjugiertes Bilirubin: Keine Interferenzen bei bis zu 420 μmol/l (24.6 mg/dl). Nicht-konjugiertes Bilirubin: Keine Interferenzen bei bis zu 600 μmol/l (35.1 mg/dl). Hämolysat: Keine Interferenzen bei Zugabe von Hämoglobin von bis zu 8 g/l. Lipämie: Keine Interferenzen bei Zugabe von Intralipid® von bis zu 2 g/l. Siehe Literaturhinweis 4 für weitere Substanzen, die Störfaktoren darstellen können.

REFERENZBEREICHE (2) Männer: < 45 U/l (< 0.74 μkat/l) bei 37 °C Frauen: < 34 U/l (< 0.56 μkat/l) bei 37 °C Die angegebenen Werte gelten nur als Richtlinie. Es wird empfohlen, dass jedes Labor diesen Bereich überprüft oder ein Referenzintervall für die betroffene Population ableitet.

MESSBEREICH System mit 1 Reagenz: 4 - 300 U/l (0.07 – 5.00 μkat/l) Erweiterter Messbereich nach automatischer Verdünnung: 4 – 1800 U/l (0.07 – 30.00 μkat/l) System mit 3 Reagenzien: 5 - 250 U/l (0.08 – 4.17 μkat/l) Erweiterter Messbereich nach automatischer Verdünnung: 5 – 1500 U/l (0.08 – 25.00 μkat/l)

LEISTUNGSEIGENSCHAFTEN Nachweisgrenze System mit 1 Reagenz: 2 U/l (0.03 μkat/l) System mit 3 Reagenzien: 2 U/l (0.03 μkat/l) Die Nachweisgrenze stellt die unterste messbare Konzentration/Aktivität dar, die von null unterschieden werden kann. Sie wird als Konzentration der Nullprobe + 3 SD (in der Serie, n=24) berechnet.

Impräzision (Ergebnisse in U/l) System mit 1 Reagenz: Mittelwert

33 U/l Mittelwert

90 U/l Mittelwert 108 U/l

SD CV % SD CV % SD CV % In der Serie 0.6 1.8 0.6 0.6 0.9 0.8 Von Serie zu Serie 0.5 1.5 0.9 1.0 1.0 0.9 Gesamt 1.0 3.0 1.8 2.0 2.7 2.4

System mit 3 Reagenzien: Mittelwert

31 U/l Mittelwert

89 U/l Mittelwert 109 U/l

SD CV % SD CV % SD CV % In der Serie 0.6 1.8 0.6 0.7 1.0 0.9 Von Serie zu Serie 0.2 0.7 0.8 0.9 0.8 0.8 Gesamt 0.8 2.6 1.5 1.7 2.2 2.0

Es wurde 20 Tage lang eine Präzisionsstudie gemäß NCCLS-Richtlinie EP5-A mit dem Konelab 60 durchgeführt, wobei die Anzahl der Messungen n=80 betrug.

Vergleich der Methoden System mit 1 Reagenz: Es wurde eine Vergleichsstudie gemäß NCCLS-Richtlinie EP9-A mit der 2 Reagenz Methode von Thermo Fisher Scientific Oy als Referenz durchgeführt. Lineare Regression (Ergebnisse in U/l):

y = 0.75 x + 2.8 r = 0.988 n = 60

Die in den Proben enthaltenen Konzentrationen lagen zwischen 7 und 190 U/l. System mit 3 Reagenzien: Es wurde eine Vergleichsstudie gemäß NCCLS-Richtlinie EP9-A mit der 2-Reagenz-Methode (Konelab) als Referenz durchgeführt. Lineare Regression (Ergebnisse in U/l):

y = 1.00 x + 0.2 r = 1.00 n = 65

Die in den Proben enthaltenen Konzentrationen lagen zwischen 10 und 155 U/l. Die Ergebnisse einzelner Laboratorien können von den angegebenen Leistungsdaten abweichen.

LITERATURHINWEISE 1. Burtis, CA and Ashwood, E R (ed.), Tietz Fundamentals of Clinical Chemistry, 5th





HERSTELLER Thermo Fisher Scientific Oy Clinical Diagnostics Finland Ratastie 2, P.O. Box 100, FI-01621 Vantaa Tel.: +358 9 329 100, Fax: +358 9 3291 0300 www.thermo.com/konelab

Datum der Überarbeitung (JJJJ-MM-TT) 2007-08-14

Änderungen gegenüber der vorherigen Fassung: Name des Unternehmens aktualisiert.

FR

Konelab™ / Gamme T ALT/GPT (IFCC) 981361 7 x 50 ml 981769 8 x 20 ml

CETTE NOTICE EST VALABLE POUR UTILISATION EN DEHORS DES ÉTATS-UNIS. TOUTE RÉFÉRENCE AUX SYSTÈMES KONELAB FAIT ÉGALEMENT RÉFÉRENCE À LA GAMME T.

UTILISATION Pour la détermination quantitative in vitro de l’activité de l’alanine aminotransférase (L-alanine : 2-oxoglutarate aminotransférase (ALT), EC 2.6.1.2) dans le sérum ou le plasma humains au moyen des analyseurs Konelab. Tous les résultats obtenus doivent être interprétés en tenant compte du contexte clinique.

RÉSUMÉ (1) L’alanine aminotransférase (ALAT/ALT), précédemment désignée sous le nom de transaminase glutamique pyruvique (GPT), et l’aspartate aminotransférase (ASAT/AST), précédemment désignée sous le nom de transaminase glutamique oxalacétique (GOT), font partie d’un groupe d’enzymes, les aminotransférases ou transaminases, qui catalysent la transformation réversible des acides α-cétoniques en acides aminés par transfert de groupes amine. L’AST et l’ALT sont toutes deux normalement présentes dans le plasma, la bile, le liquide céphalo-rachidien et la salive humains, mais sont absents dans l’urine, sauf en présence d’une lésion rénale. Lors d’hépatite virale et d’autres formes de pathologies hépatiques associées à une nécrose hépatique, les concentrations sériques en AST et en ALT s’élèvent avant même l’apparition des signes cliniques et des symptômes de la maladie. Les taux de ces deux enzymes peut atteindre des valeurs de jusqu’à 100 fois la limite de référence, bien que les élévations les plus fréquentes sont de l’ordre d’un facteur 20 à 50 fois. Bien que les concentrations sériques en AST et en ALT augmentent toutes deux lors de tout processus affectant l’intégrité des cellules hépatiques, l’ALT est l’enzyme la plus spécifique du foie. Une élévation du taux d’AST peut survenir en association avec des lésions du cœur ou des muscles squelettiques au même titre qu’avec des lésions du parenchyme hépatique. Une élévation de l’activité de l’ALT sérique n’est que rarement observée lors de maladies autres que des pathologies du parenchyme hépatique.

PRINCIPE DE LA PROCÉDURE L’ALT catalyse le transfert du groupe amine de l’alanine vers l’oxoglutarate avec formation de glutamate et de pyruvate. Le pyruvate est réduit en lactate par la lactate déhydrogénase (LDH). ALT L-alanine + 2-oxoglutarate <⎯⎯> L-glutamate + pyruvate LDH Pyruvate + NADH + H+ <⎯⎯> D-lactate + NAD+

Au cours de cette même réaction, une quantité équivalente de NADH est oxydée en NAD. La diminution de l’absorbance à 340 nm qui en résulte est suivie et est directement proportionnelle à l’activité de l’ALT dans le sérum. La méthode de référence IFCC inclut du pyridoxa-5’-phosphate (P-5´-P) à la concentration de 0.1 mmol/l et il a été démontré que cette concentration est suffisante pour activer l’apo ALT en 5 minutes (2).

INFORMATIONS SUR LE RÉACTIF Réactif A : Réactif enzymatique Code : 981361 7 x 40 ml Code : 981769 8 x 16 ml Réactif B : Substrat Code : 981361 7 x 10 ml Code : 981769 8 x 4 ml

Concentrations Réactif A : Réactif enzymatique Tampon tris, pH 7.15 137.5 mmol/l L-alanine 700 mmol/l LDH > 1650 U/l NaN3 < 0.1 % Réactif B : Substrat 2-oxoglutarate 82.5 mmol/l NADH 1.0 mmol/l NaN3 < 0.1 % Remarque : Le pyridoxal-5’-phosphate liquide n’est pas inclus dans le kit. Il est disponible séparément sous la référence 981839.

Précautions Usage diagnostique in vitro uniquement. Respecter les précautions habituelles requises lors de la manipulation de tout réactif de laboratoire. Les réactifs contiennent de l’azide de sodium en tant que conservateur. Ne pas avaler. Eviter tout contact avec la peau et les muqueuses.

Préparation Codes : 981361, 981769 Système utilisant un seul réactif (sans P-5´-P) : Ajouter le contenu du réactif B dans le flacon de réactif A. Boucher le flacon et mélanger. Le monoréactif doit être protégé de la lumière! Système utilisant trois réactifs (avec P-5´-P) : Les réactifs sont prêts à l’emploi. Remarque : S’assurer de l’absence de bulles au niveau du goulot du flacon ou à la surface du réactif lors de la mise en place des flacons de réactifs dans l’analyseur Konelab.

Conservation et stabilité Les réactifs contenus dans les flacons scellés sont stables à 2…8 °C jusqu’à la date de péremption figurant sur l’étiquette à condition d’être protégés de la lumière. Se référer à la fiche d’application de l’analyseur Konelab en ce qui concerne la stabilité des réactifs dans l’appareil.



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PRÉLÈVEMENT DES ÉCHANTILLONS

Nature de l’échantillon On peut utiliser des échantillons de sérum ou de plasma hépariné limpides.

Précautions Les échantillons d’origine humaine doivent être manipulés et éliminés comme des matériaux potentiellement infectieux.

Conservation (3) Les échantillon peuvent être conservés pendant 3 jours à 20…25 °C, pendant 7 jours à 4…8 °C ou pendant 2 mois à -20 °C.

PROCÉDURE DE TEST Se référer au manuel de référence et à la fiche d’application pour une description de la procédure automatisée sur l’analyseur Konelab. Toute application n’ayant pas été validée par Thermo Fisher Scientific Oy, ne peut pas être garantie en ce qui concerne ses performances et doit par conséquent être évaluée par l’utilisateur.

Matériel fourni Réactifs comme décrits ci-dessus.

Matériel requis mais non fourni Pyridoxal-5’-phosphate (code 981839) pour la méthode utilisant trois réactifs. Contrôles comme indiqué ci-dessous.

Calibrage La réponse (dA/min) est convertie en unités de résultat à l’aide d’un facteur de calcul. Ou utiliser eCal (981830) comme calibrateur conformément aux instructions figurant dans la notice de eCal (981830).

Contrôle de qualité Utiliser les échantillons de contrôle de qualité au moins une fois par jour et chaque fois que l’on entame un nouveau flacon de réactif. Contrôles disponibles : Nortrol, code 981043 Abtrol, code 981044 Les intervalles et les limites de contrôle doivent être adaptés aux besoins de chaque laboratoire. Les résultats des échantillons de contrôle de qualité doivent se situer dans la fourchette de tolérance prédéfinie par le laboratoire.

CALCUL DES RÉSULTATS Les résultats sont calculés automatiquement par l’analyseur Konelab de la manière suivante : Activité en U/l = dA/min x facteur VT x 1000 Facteur théorique = - ⎯⎯⎯⎯⎯ 6.3 x VE x L où: VT = Volume réactionnel total en ml VE = Volume d’échantillon en ml 6.3 = Coefficient d’extinction moléculaire du NADH à 340 nm L = Longueur du trajet optique dans la cuve de lecture = 1 Facteur de conversion : µkat/l = (U/l)/60 Si l’on utilise eCal (981830) comme calibrateur, les résultats sont calculés automatiquement par l’analyseur Konelab à l’aide d’une courbe de calibrage.

LIMITES DE LA PROCÉDURE Interférence Critère : Acceptation dans les limites de ± 10 % des valeurs initiales. En monoréactif : Bilirubine conjuguée : Aucune interférence observée jusqu’à 420 µmol/l (24.6 mg/dl). Bilirubine non conjuguée : Aucune interférence observée jusqu’à 600 µmol/l (35.1 mg/dl). Hémolysat : Aucune interférence observée jusqu’à 10 g/l d’hémoglobine. Lipémie : Aucune interférence observée jusqu’à 2 g/l d’Intralipid® (marque de Fresenius Kabi AB). Il existe une faible corrélation entre turbidité et concentration en triglycérides. En triréactif : Bilirubine conjuguée : Aucune interférence observée jusqu’à 420 μmol/l (24.6 mg/dl). Bilirubine non conjuguée : Aucune interférence observée jusqu’à 600 μmol/l (35.1 mg/dl). Hémolysat: : Aucune interférence observée jusqu’à 8 g/l d’hémoglobine. Lipémie : Aucune interférence observée jusqu’à 2 g/l d’Intralipid®. Pour les autres substances interférentes, se reporter à la référence 4.

VALEURS ATTENDUES (2) Hommes : < 45 U/l (< 0.74 µkat/l) à 37 °C Femmes : < 34 U/l (< 0.56 µkat/l) à 37 °C Les valeurs citées sont données à titre indicatif uniquement. Il est recommandé que chaque laboratoire établisse les valeurs physiologiques pour la population qui constitue sa clientèle.

DOMAINE DE MESURE En monoréactif : 4 – 300 U/l (0.07 – 5.00 µkat/l) Domaine de mesure étendu après dilution secondaire: 4 – 1800 U/l (0.07 – 30.00 µkat/l) En triréactif : 5 - 250 U/l (0.08 – 4.17 μkat/l) Domaine de mesure étendu après dilution secondaire: 5 – 1500 U/l (0.08 – 25.00 μkat/l)

CARACTÉRISTIQUES EN MATIÈRE DE PERFORMANCES Limite de détection En monoréactif : 2 U/l (0.03 µkat/l) En triréactif : 2 U/l (0.03 μkat/l) La limite de détection représente la plus faible concentration/activité mesurable qu’il est possible de distinguer de zéro. Elle est calculée comme la concentration d’un échantillon zéro + 3 ET (répétabilité, n=24).

Imprécision (unité du résultat: U/l) En monoréactif : Moyenne

33 U/l Moyenne

90 U/l Moyenne 108 U/l

ET CV% ET CV% ET CV% Répétabilité 0.6 1.8 0.6 0.6 0.9 0.8 Reproductibilité 0.5 1.5 0.9 1.0 1.0 0.9 Total 1.0 3.0 1.8 2.0 2.7 2.4

En triréactif : Moyenne

31 U/l Moyenne

89 U/l Moyenne 109 U/l

ET CV% ET CV% ET CV% Répétabilité 0.6 1.8 0.6 0.7 1.0 0.9 Reproductibilité 0.2 0.7 0.8 0.9 0.8 0.8 Total 0.8 2.6 1.5 1.7 2.2 2.0

L’étude de précision a été menée conformément aux directives du document NCCLS EP5-A sur un analyseur Konelab 60 pendant 20 jours, le nombre de mesures étant de n = 80.

Comparaison de méthodes En monoréactif : Une étude de comparaison a été réalisée conformément aux directives du document NCCLS EP9-A en utilisant comme référence la méthode utilisant deux réactifs de Konelab. Régression linéaire (unités du résultat: U/l) : y = 0.75 x + 2.8 r = 0.988 n = 60 Les concentrations des échantillons se situaient entre 7 et y 190 U/l. En triréactif : Une étude de comparaison a été réalisée conformément aux directives du document NCCLS EP9-A en utilisant comme référence la méthode utilisant deux réactifs de Konelab. Régression linéaire (unités du résultat: U/l) : y = 1.00 x + 0.2 r = 1.00 n = 65 Les concentrations des échantillons se situaient entre 10 et 155 U/l. Les résultats obtenus dans chaque laboratoire peuvent différer de l’imprécision indiquée et des données de la comparaison de méthodes.

BIBLIOGRAPHIE 1. Burtis, CA and Ashwood, E R (ed.), Tietz Fundamentals of Clinical Chemistry, 5th





FABRICANT Thermo Fisher Scientific Oy Clinical Diagnostics Finland Ratastie 2, P.O. Box 100, FI-01621 Vantaa Tél. +358 9 329 100, télécopie +358 9 3291 0300 www.thermo.com/konelab

Date de révision (aaaa-mm-jj) 2007-08-14

Modifications par rapport à la version précédente : Mise à jour du nom de la société.



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Konelab™/Série T ALT/GPT (IFCC) 981361 7 x 50 ml 981769 8 x 20 ml

TATO PŘÍBALOVÁ INFORMACE JE URČENA PRO POUŽITÍ MIMO ÚZEMÍ USA. KAŽDÁ ZMÍNKA O SYSTÉMECH KONELAB SE ROVNĚŽ TÝKÁ SÉRIE T.

URČENÉ POUŽITÍ Pro kvantitativní stanovení aktivity alaninaminotransferázy (L-alanin: 2-oxoglutarát aminotransferázy (ALT), EC 2.6.1.2) in vitro v lidském séru nebo plazmě na analyzátorech Konelab. Všechny výsledky testů musejí být interpretovány s ohledem na klinický kontext.

SHRNUTÍ (1) Alaninaminotransferáza (ALAT/ALT), dříve nazývaná glutamát-pyruvát transamináza (GPT), a asparátaminotransferáza (ASAT/AST), dříve nazývaná glutamát-oxalacetát transamináza (GOT), patří do skupiny enzymů aminotransferáz nebo transamináz, které katalyzují reverzibilní transformaci α-keto kyselin na aminokyseliny pomocí přenosu aminoskupin. AST a ALT jsou běžně přítomné v lidské plazmě, žluči, mozkomíšní tekutině a slinách, nevyskytují se však v moči, pokud pacient není postižen lézí ledvin. U virové hepatitidy a dalších forem jaterních onemocnění, při nichž dochází k nekróze jater, je hladina AST a ALT zvýšená ještě před tím, než se projeví klinické příznaky a symptomy onemocnění. Hladiny obou enzymů mohou dosáhnout hodnot až stonásobně vyšších než horní referenční limit, i když nejčastěji se vyskytuje dvaceti až padesátinásobné zvýšení. I když se hladiny AST a ALT v séru zvyšují vždy, když procesy postihnou integritu jaterních buněk, ALT je enzym, který je charakterističtější pro játra. Zvýšené hladiny AST se mohou projevit v souvislosti s poškozením srdce nebo kosterních svalů a jaterního parenchymu. Zvýšení aktivity ALT v séru se vyskytuje v jiných případech než u onemocnění jaterního parenchymu jen vzácně.

PRINCIP POSTUPU ALT katalyzuje přenos aminoskupin z alaninu na oxoglutarát, při němž se vytváří glutamát a pyruvát. Pyruvát je redukován na laktát pomocí laktát dehydrogenázy (LDH). ALT L-Alanin + 2-Oxoglutarát <⎯⎯> L-Glutamát + Pyruvát LDH Pyruvát + NADH + H+ <⎯⎯> D-Laktát + NAD+ V téže reakci je ekvivalentní množství NADH oxidováno na NAD. Je sledováno výsledné snížení absorbance při 340 nm, které je přímo úměrné aktivitě ALT v séru. Součástí referenční metody IFCC je pyridoxal–5’-fosfát (P-5´-P) v množství 0.1 mmol/l, o němž bylo dokázáno, že je dostatečné pro aktivaci apo ALT během 5 minut (2).

INFORMACE O REGENCIÍCH Reagens A: Enzymatické reagens Kód: 981361 7 x 40 ml Kód: 981769 8 x 16 ml Reagens B: Substrát Kód: 981361 7 x 10 ml Kód: 981769 8 x 4 ml

Koncentrace Reagens A: Enzymatické reagens Pufr TRIS, pH 7.15 137.5 mmol/l L-Alanin 700 mmol/l LDH > 1 650 U/l NaN3 < 0.1 % Reagens B: Substrát 2-Oxoglutarát 82.5 mmol/l NADH 1.0 mmol/l NaN3 < 0.1 % Poznámka: Tekutý pyridoxal-5’-fosfát není součástí soupravy. Je možné jej objednat samostatně, číselný kód 981839.

Zvláštní opatření Určeno pouze pro diagnostické použití in vitro. Používejte běžná bezpečnostní opatření vyžadovaná pro manipulaci se všemi laboratorními reagencii. Reagens obsahuje jako konzervační látku azid sodný. Nepolykejte. Zabraňte kontaktu s kůží a sliznicemi.

Příprava Kód: 981361, 981769 Metoda s jedním reagens (bez P-5´-P): Obsah reagens B přidejte do lahvičky s reagens A. Lahvičku uzavřete a její obsah promíchejte. Monoreagens je nutné chránit před světlem! Metoda se třemi reagencii (s P-5´-P): Reagencia jsou připravena k použití. Poznámka: Překontrolujte, zda při vkládání lahviček nebo nádob s reagencii do analyzátoru Konelab nejsou v hrdle lahvičky nebo na povrchu reagens bubliny.

Uchovávání a stabilita Reagencie v neotevřených lahvičkách jsou stabilní při teplotě 2…8 °C, jsou-li uchovávány ve tmě, a to do data ukončení použitelnosti vytištěného na štítku. Údaje o stabilitě reagencií „on-board“ naleznete v aplikačních poznámkách svého analyzátoru Konelab.

ODBĚR VZORKŮ

Typ vzorků Lze použít čisté sérum nebo heparinizovanou plazmu.

Zvláštní opatření S lidskými vzorky je nutné nakládat a likvidovat je, jako by byly potenciálně infekční.

Uchovávání (3) Vzorek lze uchovávat po dobu 3 dnů při teplotě 20…25 °C, po dobu 7 dnů při teplotě 4…8 °C nebo 2 dny při teplotě –20 °C.

POSTUP TESTU Údaje o automatizovaném postupu práce na analyzátoru Konelab naleznete v Referenčním manuálu a aplikačních poznámkách. Nelze zaručit provedení žádné aplikace, která nebyla validována společnosti Thermo Fisher Scientific Oy. Taková aplikace proto musí být hodnocena uživatelem.

Dodané materiály Reagencia uvedená výše.

Potřebné materiály, které se dodávají zvlášť Pyridoxal–5’-fosfát (kód 981839) pro metodu se třemi reagencii. Kontrolní materiály uvedené dále.

Kalibrace Reakce dA/min je přepočtena pomocí faktoru výpočtu na výsledné jednotky. Nebo použijte jako kalibrátor eCal (981830), a to v souladu s návodem uvedeným na příbalovém letáku eCal (981830).

Řízení jakosti Používejte vzorky pro řízení jakosti alespoň jednou denně a pokaždé, když použijete novou lahvičku reagens. Dostupné kontrolní materiály: Nortrol, kód 981043 Abtrol, kód 981044 Intervaly a limity kontrolních materiálů musejí být upraveny podle požadavků jednotlivých laboratoří. Výsledky vzorků pro řízení jakosti by měly vyhovovat limitním hodnotám přednastaveným laboratoří.

VÝPOČET VÝSLEDKŮ Výsledky jsou automaticky vypočteny analyzátorem Konelab, a to dále uvedeným způsobem: Aktivita v U/l = dA/min x Faktor TV x 1000 Teoretický faktor = - ⎯⎯⎯⎯⎯- 6.3 x SV x P kde: TV = Celkový reakční objem v ml SV = Objem vzorku v ml 6.3= Extinkční koeficient NADPH při 340 nm P = Optická tloušťka kyvety = 1 Faktor přepočtu μkat/l = (U/l)/60 Je-li použit jako kalibrátor eCal (981830), jsou výsledky vypočteny analyzátorem Konelab automaticky pomocí kalibrační křivky.

OMEZENÍ POSTUPU

Interference Kritérium: Recovery v rozpětí ± 10% počátečních hodnot. Metoda s jedním reagens: Konjugovaný bilirubin: Až do 420 μmol/l (24.6 mg/dl) nebyla zjištěna interference. Nekonjugovaný bilirubin: Až do 600 μmol/l (35.1 mg/dl) nebyla zjištěna interference. Hemolyzát: Až do 10 g/l hemoglobinu nebyla zjištěna interference. Lipémie: Až do 2 g/l přípravku Intralipid® (ochranná známka společnosti Fresenius Kabi AB) nebyla zjištěna interference. Mezi turbiditou a koncentrací triglyceridů existuje nízká korelace. Metoda se třemi reagencii: Konjugovaný bilirubin: Až do 420 μmol/l (24.6 mg/dl) nebyla zjištěna interference. Nekonjugovaný bilirubin: Až do 600 μmol/l (35.1 mg/dl) nebyla zjištěna interference. Hemolyzát: Až do 8 g/l hemoglobinu nebyla zjištěna interference. Lipémie: Až do 2 g/l přípravku Intralipid® nebyla zjištěna interference. Údaje o dalších interferujících látkách naleznete v odkazu č. 4.

PŘEDPOKLÁDANÉ HODNOTY (2) Muži: < 45 U/l (< 0.74 μkat/l) při 37 °C Ženy: < 34 U/l (< 0.56 μkat/l) při 37 °C Uvedené hodnoty by měly sloužit pouze jako vodítko. Doporučuje se, aby každá laboratoř toto rozpětí ověřila nebo odvodila referenční interval pro populaci, jíž poskytuje služby.

ROZPĚTÍ MĚŘENÍ Metoda s jedním reagens: 4 - 300 U/l (0.07 – 5.00 μkat/l) Rozšířené rozpětí měření po sekundárním ředění: 4 – 1 800 U/l (0.07 – 30.00 μkat/l) Metoda se třemi reagencii: 5 - 250 U/l (0.08 – 4.17 μkat/l) Rozšířené rozpětí měření po sekundárním ředění: 5 – 1 500 U/l (0.08 – 25.00 μkat/l)

CHARAKTERISTIKY ÚČINNOSTI

Limitní hodnota detekce Metoda s jedním reagens: 2 U/l (0.03 μkat/l) Metoda se třemi reagencii: 3 U/l (0.03 μkat/l) Limitní hodnota detekce představuje nejnižší měřitelnou koncentraci/aktivitu, kterou lze odlišit od nulové hodnoty. Vypočítává se jako koncentrace nulového vzorku + 3 SD (v rámci série, n = 24).

Nepřesnost (výsledky v jednotkách U/l) Metoda s jedním reagens: Střední hodnota

33 U/l Střední hodnota


108 U/l SD % CV SD % CV SD % CV V rámci série 0.6 1.8 0.6 0.6 0.9 0.8 Mezi sériemi 0.5 1.5 0.9 1.0 1.0 0.9 Celkem 1.0 3.0 1.8 2.0 2.7 2.4

Metoda se třemi reagencii: Střední hodnota



109 U/l SD % CV SD % CV SD % CV V rámci série 0.6 1.8 0.6 0.7 1.0 0.9 Mezi sériemi 0.2 0.7 0.8 0.9 0.8 0.8 Celkem 0.8 2.6 1.5 1.7 2.2 2.0

Byla provedena studie přesnosti podle směrnic v dokumentu NCCLS EP5-A pomocí Konelabu 60 trvající 20 dní, v níž byl počet měřených vzorků n = 80.


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Srovnání metod Metoda s jedním reagens: Byla provedena srovnávací studie, při níž byl jako směrnice použit dokument NCCLS EP9-A a metoda se dvěma reagens pomocí analyzátoru Konelab jako metoda referenční. Lineární regrese (jednotky výsledku U/l): y = 0.75 x + 2.8 r = 0.988 n = 60 Koncentrace vzorků se pohybovaly v rozmezí 7 až 190 U/l. Metoda se třemi reagencii: Byla provedena srovnávací studie, při níž byl jako směrnice použit dokument NCCLS EP9-A a metoda Konelab se dvěma reagencii jako metoda referenční. Lineární regrese (jednotky výsledku U/l): y = 1.00 x + 0.2 r = 1.00 n = 65 Koncentrace vzorků se pohybovaly v rozmezí 10 až 155 U/l. Výsledky získané v jednotlivých laboratořích se mohou od uvedených dat účinnosti lišit.

SEZNAM LITERATURY 1. Burtis, CA and Ashwood, E R (ed.), Tietz Fundamentals of Clinical Chemistry, 5th





VÝROBCE Thermo Fisher Scientific Oy Clinical Diagnostics Finland Ratastie 2, P.O. Box 100, FI-01621 Vantaa Tel.: +358 9 329 100, Fax: +358 9 3291 0300 www.thermo.com/konelab

Datum revize (rrrr-mm-dd) 2007-08-14

Změny oproti předchozí verz: Název společnosti byl aktualizován.

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Konelab™ / ΣειράT ALT / GPT (IFCC) 981361 7 x 50 ml 981769 8 x 20 ml ΑΥΤΟ ΤΟ ΕΝΘΕΤΟ ΣΥΣΚΕΥΑΣΙΑΣ ΠΡΟΤΙΘΕΤΑΙ ΓΙΑ ΧΡΗΣΗ ΕΚΤΟΣ ΤΩΝ ΗΠΑ. ΟΠΟΙΑΔΗΠΟΤΕ ΑΝΑΦΟΡΑ ΣΤΑ ΣΥΣΤΗΜΑΤΑ KONELAB ΑΝΑΦΕΡΕΤΑΙ ΕΠΙΣΗΣ ΣΤΗ ΣΕΙΡΑ T.

ΠΡΟΟΡΙΖΟΜΕΝΗ ΧΡΗΣΗ Για τον in vitro ποσοτικό προσδιορισμό της αμινοστρανφεράνσης της αλανίνης (L- Αλανίνη: διοξογλουταρική αμινοστρανσφεράση (ALT), EC 2.6.1.2) ενεργότητα στον ανθρώπινο ορό ή το πλάσμα σε αναλυτές Konelab. Όλα τα αποτελέσματα της εξέτασης πρέπει να ερμηνεύονται σε σχέση με το κλινικό περιβάλλον.

ΠΕΡΙΛΗΠΤΙΚΑ (1) Η αμινοτρανσφεράση της ασπαρτάμης (ASAT/AST), που ονομαζόταν παλιότερα γλουταμική οξαλοξεική τρανσαμινάση (GOT) και η αμινοτρανσφεράση της αλανίνης (ALAT/ALT), που ονομαζόταν παλιότερα γλουταμική πυρουβική τρανσαμινάση (GPT) ανήκουν σε μια ομάδα ενζύμων, τις αμινοτρανσφεράσες ή τρανσαμινάσες που καταλύουν την αναστρέψιμη μετατροπή των α-κετο οξέων σε αμινοξέα με μεταφορά των αμινομάδων. Τόσο η AST όσο και η ALT βρίσκονται συνήθως στο ανθρώπινο πλάσμα, τη χολή, στο εγκεφαλονωτιαίο υγρό και στο σίελο, αλλά όχι και στα ούρα εκτός κι αν παρατηρείται κάποια νεφρική πάθηση. Στην ιογενή ηπατίτιδα και σε άλλες μορφές παθήσεων του ήπατος που σχετίζονται με ηπατική νέκρωση, το επίπεδο του ορού AST και ALT αυξάνεται πριν καν εμφανιστούν οι κλινικές ενδείξεις και τα συμπτώματα της πάθησης. Τα επίπεδα και των δύο ενζύμων μπορούν να φτάσουν σε επίπεδο ως και 100 φορές υψηλότερο από το ανώτατο όριο αναφοράς, αν και αυξήσεις ως και 20 ή 50 φορές προς τα πάνω είναι αρκετά συνηθισμένο φαινόμενο. Αν και τα επίπεδα ορού τόσο της AST όσο και της ALT αυξάνονται κατά τη διάρκεια διαδικασιών που επηρεάζουν την ακεραιότητα των ηπατικών κυττάρων, η ALT είναι το ένζυμο εκείνο που εξαρτάται κυρίως από το ήπαρ. Αυξημένα επίπεδα AST μπορούν να παρουσιαστούν σε σχέση με καρδιακές ή μυοσκελετικές βλάβες, καθώς και με ηπατικό παρέγχυμα. Η αύξηση της ενεργότητας της ALT στον ορό παρατηρείται σπάνια σε άλλες περιστάσεις, εκτός της παρεγχυματικής ηπατικής πάθησης.

ΑΡΧΗ ΤΗΣ ΜΕΘΟΔΟΥ Η ALT καταλύει την μεταφορά της αμινομάδας από αλανίνη σε οξογλουταρικό μέσα από το σχηματισμό γλουταμικού και πυροσταφυλικού. Το πυροσταφυλικό μειώνεται σε γαλακτικό άλας μέσω γαλακτικής υδρογονάσης (LDH). ALT L-Αλανίνη + 2-Οξογλουταρικό <⎯⎯> L-Γλουταμικό + Πυροσταφυλικό LDH Πυροσταφυλικό + NADH + H+ <⎯⎯> D-Γαλακτικό + NAD+

Στην ίδια αντίδραση, ένα ίσο ποσό NADH οξειδώνεται σε NAD. Η συνεπαγόμενη μείωση της απορρόφησης στα 340nm ακολουθείται και είναι ευθέως ανάλογη με την ενεργότητα της ALT στον ορό. Η μέθοδος αναφοράς IFCC περιλαμβάνει πυριδοξάλη 5'-φωσφορική (P-5΄-P) σε επίπεδο 0,1 mmol/l, το οποίο φαίνεται πως αρκεί για να ενεργοποιήσει απο-ALT σε πέντε λεπτά (2).

ΠΛΗΡΟΦΟΡΙΕΣ ΑΝΤΙΔΡΑΣΤΗΡΙΩΝ Αντιδραστήριο Α: Αντιδραστήριο ενζύμου Κωδικός: 981361 7 x 40 ml

Κωδικός: 981769 8 x 16 ml Αντιδραστήριο Β: Υπόστρωμα Κωδικός: 981361 7 x 10 ml Κωδικός: 981769 8 x 4 ml

Συγκεντρώσεις Αντιδραστήριο Α: Αντιδραστήριο ενζύμου Ρυθμιστικό διάλυμα Tris, pH 7.15 137.5 mmol/l L-Αλανίνη 700 mmol/l LDH > 1650 U/l. NaN3 < 0.1 % Αντιδραστήριο Β: Υπόστρωμα 2-Οξογλουταρικό 82.5 mmol/l NADH 1.0 mmol/l NaN3 < 0.1 % Σημείωση: Η υγρή πυριδοξάλη-5'-φωσφορική δεν περιλαμβάνεται στο κιτ. Μπορεί να γίνει ξεχωριστή παραγγελία με τον κωδικό αριθμό 981839.

Προφυλάξεις Για in vitro διαγνωστική χρήση μόνον. Εφαρμόζετε τις κανονικές προφυλάξεις που απαιτούνται για το χειρισμό όλων των εργαστηριακών αντιδραστηρίων. Τα αντιδραστήρια περιέχουν νατραζίδιο ως συντηρητικό. Μην καταπίνετε. Αποφύγετε την επαφή με το δέρμα και με τους βλεννογόνους.

Προετοιμασία Κωδικός: 981361, 981769 Σύστημα ενός αντιδραστηρίου (χωρίς την P-5΄-P): Προσθέστε το περιεχόμενο του Αντιδραστηρίου B, στη φιάλη του Αντιδραστηρίου A. Κλείστε το πώμα του φιαλιδίου και αναμίξτε. Το μονοαντιδραστήριο πρέπει να προστατευτεί από το φως! Σύστημα τριών αντιδραστηρίων (με την P-5΄-P): Τα αντιδραστήρια είναι έτοιμα προς χρήση. Σημείωση: Ελέγξτε ότι δεν υπάρχουν φυσαλίδες στο λαιμό ή στην επιφάνεια του φιαλιδίου αντιδραστηρίου όταν εισάγετε τα φιαλίδια ή τα δοχεία αντιδραστηρίων στην αναλυτή Konelab.

Αποθήκευση και Σταθερότητα Τα αντιδραστήρια σε φιαλίδια που δεν έχουν ανοιχτεί είναι σταθερά στους 2... 8 °C μέχρι την ημερομηνία λήξης που αναγράφεται στην ετικέτα και εφόσον διατηρούνται μακριά από το φως. Ανατρέξτε στις Σημειώσεις Εφαρμογών του αναλυτή Konelab για την σταθερότητα των αντιδραστηρίων όταν αυτά είναι φορτωμένα στο μηχάνημα.

ΔΕΙΓΜΑΤΟΛΗΨΙΑ Τύπος δείγματος Μπορεί να χρησιμοποιηθεί διαυγής ορός ή ηπαρινισμένο πλάσμα.

Προφυλάξεις Τα ανθρώπινα δείγματα πρέπει να χρησιμοποιούνται και να απορρίπτονται σαν να ήταν δυνητικά μολυσματικά.

Αποθήκευση (3) Τα δείγματα μπορούν να αποθηκευτούν για 3 ημέρες στους 20…25 °C, για 7 ημέρες στους 4…8 °C ή για 2 μέρες στους –20 °C.

ΔΙΑΔΙΚΑΣΙΑ ΕΚΤΕΛΕΣΗΣ ΕΞΕΤΑΣΗΣ Ανατρέξτε στα φυλλάδια του Εγχειριδίου Αναφοράς και των Σημειώσεων Εφαρμογών για μια αυτοματοποιημένη διαδικασία του αναλυτή σας Konelab. Η καλή λειτουργία οποιασδήποτε εφαρμογής που δεν έχει επικυρωθεί από την Thermo Fisher Scientific Oy της Φιλανδίας, δεν μπορεί να έχει εγγύηση απόδοσης και επομένως πρέπει να εκτιμηθεί από το χρήστη.

Παρεχόμενα Υλικά Αντιδραστήρια όπως περιγράφονται παραπάνω.

Υλικό που απαιτείται αλλά δεν παρέχεται Πυριδοξάλη-5'-φωσφορική (κωδικός 981839) για το σύστημα τριών αντιδραστηρίων. Δείγματα ποιοτικού ελέγχου όπως περιγράφεται παρακάτω.

Βαθμονόμηση Η απόκριση dA/min μετατρέπεται σε μονάδες αποτελέσματος από έναν παράγοντα υπολογισμού. Ή χρησιμοποιήστε το eCal (981830) ως βαθμονομητή σύμφωνα με τις οδηγίες που αναγράφονται στο ένθετο συσκευασίας του eCal (981830).

Ποιοτικός Έλεγχος Χρησιμοποιήστε δείγματα ποιοτικού ελέγχου τουλάχιστον μια φορά την ημέρα και κάθε φορά που χρησιμοποιείται καινούργια φιάλη αντιδραστηρίου. Διαθέσιμα δείγματα ποιοτικού ελέγχου: Nortrol, κωδικός 981043 Abtrol, κωδικός 981044 Τα διαστήματα και τα όρια των Υλικών ελέγχου πρέπει να προσαρμόζονται στις απαιτήσεις των ξεχωριστών εργαστηρίων. Τα αποτελέσματα των δειγμάτων ποιοτικού ελέγχου πρέπει να εμπίπτουν εντός των ορίων που έχει προκαθορίσει το εργαστήριο.

ΥΠΟΛΟΓΙΣΜΟΣ ΑΠΟΤΕΛΕΣΜΑΤΩΝ Τα αποτελέσματα υπολογίζονται αυτομάτως από τον αναλυτή Konelab ως εξής: Ενεργότητα σε U/l = Παράγων x (dA/min) TV x 1000 Θεωρητικός παράγοντας = - ⎯⎯⎯⎯⎯- 6.3 x SV x P

όπου: TV = Ολικός όγκος αντίδρασης σε ml SV = Όγκος δείγματος σε ml 6.3 = Συντελεστής εξασθένησης του NADH στα 340 nm P = Μήκος διαδρομής κυψελίδας = 1 Παράγων μετατροπής μkat/l = (U/l)/60 Αν το eCal (981830) χρησιμοποιείται ως βαθμονομητής, τα αποτελέσματα υπολογίζονται αυτομάτως από τον αναλυτή Konelab με χρήση καμπύλης βαθμονόμησης.

ΠΕΡΙΟΡΙΣΜΟΙ ΤΗΣ ΜΕΘΟΔΟΥ

Παρεμβολές Κριτήριο: Ανάκτηση εντός + 10% των αρχικών τιμών. Σύστημα ενός αντιδραστηρίου: Συζευγμένη χολερυθρίνη: Δε βρέθηκε παρεμβολή έως 420 μmol/l (24.6 mg/dl). Ασύζευκτη χολερυθρίνη: Δε βρέθηκε παρεμβολή έως 600 μmol/l (35.1 mg/dl).



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Άλας αιμολυσίνης: Δεν βρέθηκε παρεμβολή μέχρι 10 g/l αιμοσφαιρίνης. Λιπαιμία: Δε βρέθηκε παρεμβολή μέχρι 2 g/l Intralipid® (εμπορικό σήμα της Fresenius Kabi AB). Υπάρχει μικρή συσχέτιση ανάμεσα στη θολερότητα και τη συγκέντρωση τριγλυκεριδίων. Σύστημα τριών αντιδραστηρίων Συζευγμένη χολερυθρίνη: Δε βρέθηκε παρεμβολή έως 420 μmol/l (24.6 mg/dl). Ασύζευκτη χολερυθρίνη: Δε βρέθηκε παρεμβολή έως 600 μmol/l (35.1 mg/dl). Άλας αιμολυσίνης: Δεν βρέθηκε παρεμβολή μέχρι 8 g/l αιμοσφαιρίνης. Λιπαιμία: Δε βρέθηκε παρεμβολή μέχρι 2g/l Intralipid®. Για άλλες παρεμβαλλόμενες ουσίες, παρακαλούμε να ανατρέξετε στην παραπομπή 4.

ΑΝΑΜΕΝΟΜΕΝΕΣ ΤΙΜΕΣ (2) Άρρεν: < 45 U/l (< 0.74 μkat/l) στους 37 °C Θήλυ: < 34 U/l (< 0.56 μkat/l) στους 37 °C Οι προαναφερθείσες τιμές πρέπει να εκλαμβάνονται ως οδηγός μόνον. Συνιστάται το κάθε εργαστήριο να διεξάγει την επαλήθευση αυτού του εύρους τιμών ή να παράγει ένα διάστημα αναφοράς για τον πληθυσμό με τον οποίο ασχολείται.

ΕΥΡΟΣ ΜΕΤΡΗΣΗΣ Σύστημα ενός αντιδραστηρίου: 4 - 300 U/l (0.07 – 5.00 μkat/l) Εκτεταμένο εύρος μέτρησης μετά από δευτερογενή αραίωση: 4 – 1800 U/l (0.07 – 30.00 μkat/l) Σύστημα τριών αντιδραστηρίων 5 -250 U/l (0,08 – 4,17 μkat/l) Εκτεταμένο εύρος μέτρησης μετά από δευτερογενή αραίωση: 5 – 1500 U/l (0.08 – 25.00 μkat/l)

ΧΑΡΑΚΤΗΡΙΣΤΙΚΑ ΕΚΤΕΛΕΣΗΣ

Όριο ανίχνευσης Σύστημα ενός αντιδραστηρίου: 2 U/l (0.03 μkat/l) Σύστημα τριών αντιδραστηρίων 2 U/l (0.03 μkat/l) Το όριο ανίχνευσης αντιπροσωπεύει τη χαμηλότερη συγκέντρωση/ενεργότητα που μπορεί να μετρηθεί και να διακριθεί από το μηδέν. Υπολογίζεται ως η συγκέντρωση του δείγματος μηδέν + 3 SD (εντός της εκτέλεσης, n=24).

Ανακρίβεια (μονάδα αποτελεσμάτων U/l) Σύστημα ενός αντιδραστηρίου: Μέση τιμή

33 U/l Μέση τιμή


108 U/l SD CV% SD CV% SD CV% Εντός κύκλου 0.6 1.8 0.6 0.6 0.9 0.8 Μεταξύ κύκλων 0.5 1.5 0.9 1.0 1.0 0.9 Συνολικό 1.0 3.0 1.8 2.0 2.7 2.4

Σύστημα τριών αντιδραστηρίων: Μέση τιμή



109 U/l SD CV% SD CV% SD CV% Εντός κύκλου 0.6 1.8 0.6 0.7 1.0 0.9 Μεταξύ κύκλων 0.2 0.7 0.8 0.9 0.8 0.8 Συνολικό 0.8 2.6 1.5 1.7 2.2 2.0

Διεξάχθηκε μελέτη ακριβείας σύμφωνα με τις οδηγίες στο Έγγραφο NCCLS EP5-A χρησιμοποιώντας το Konelab 60 σε διάρκεια 20 ημερών, με τον αριθμό των μετρήσεων να είναι n = 80.

Σύγκριση μεθόδου Σύστημα ενός αντιδραστηρίου: Διεξάχθηκε συγκριτική μελέτη χρησιμοποιώντας ως κατευθυντήρια γραμμή το Έγγραφο NCCLS EP9-A και τη μέθοδο δύο αντιδραστηρίων της Konelab ως αναφορά. Γραμμική παλινδρόμηση (μονάδα αποτελεσμάτων U/I): y = 0.75 x + 2.8 r = 0.988 n = 60 Οι συγκεντρώσεις δείγματος ήταν μεταξύ 7 και 190 U/l. Σύστημα τριών αντιδραστηρίων Διεξάχθηκε συγκριτική μελέτη χρησιμοποιώντας ως κατευθυντήρια γραμμή το Έγγραφο NCCLS EP9-A και το σύστημα δύο αντιδραστηρίων Konelab ως αναφορά. Γραμμική παλινδρόμηση (μονάδα αποτελεσμάτων U/I): y = 1,00 x +0,2 r = 1,00 n = 65 Οι συγκεντρώσεις δείγματος ήταν μεταξύ 10 και 155 U/l. Τα αποτελέσματα που λαμβάνονται σε ξεχωριστά εργαστήρια πιθανόν να διαφέρουν από την ανακρίβεια και τα δεδομένα μεθόδου σύγκρισης.

ΒΙΒΛΙΟΓΡΑΦΙΑ 1. Burtis, CA and Ashwood, E R (ed.), Tietz Fundamentals of Clinical Chemistry, 5th





ΚΑΤΑΣΚΕΥΑΣΤΗΣ Thermo Fisher Scientific Oy Clinical Diagnostics Finland Ratastie 2, P.O. Box 100, FI-01620 Vantaa Τηλ. +358 9 329 100, Fax +358 9 3291 0300 www.thermo.com/konelab

Ημερομηνία αναθεώρησης (εεεε-μμ-ηη) 2007-08-14

Αλλαγές από την προηγούμενη έκδοση: Ενημερωμένο όνομα εταιρίας.

ES

Konelab™ / Serie T ALT/GPT (IFCC) 981361 7 x 50 ml 981769 8 x 20 ml

ESTE PROSPECTO ES PARA USO FUERA DE EE.UU. TODAS LAS REFERENCIAS A LOS SISTEMAS KONELAB SE REFIEREN TAMBIÉN A LA SERIE T.

INDICACIONES Para la determinación cuantitativa in vitro en analizadores Konelab de la actividad de la alanina aminotransferasa (L-alanina: 2-oxoglutarato aminotransferasa (ALT), EC 2.6.1.2) en suero o plasma humanos. Todos los resultados del test deben interpretarse en función del contexto clínico.

RESUMEN (1) La alanina aminotransferasa (ALAT/ALT), antes denominada transaminasa glutámica pirúvica (GPT), y la aspartato aminotransferasa (ASAT/AST), antes denominada transaminasa glutámica oxalacética (GOT), pertenecen a un grupo de enzimas, las aminotransferasas o transaminasas, que catalizan la transformación reversible de α-cetoácidos en aminoácidos mediante la transferencia de grupos amino. La ALT y la AST están presentes normalmente en el plasma, la bilis, el líquido cefalorraquídeo y la saliva humanos, pero no se encuentran en la orina a menos que haya una lesión renal. En la hepatitis vírica y en otras enfermedades hepáticas asociadas a necrosis hepática, se observa un aumento del nivel de ALT y AST en suero incluso antes de la aparición de los signos y síntomas clínicos de la enfermedad. Los niveles de ambas enzimas pueden alcanzar valores de hasta 100 veces el límite máximo de referencia, aunque lo más frecuente es encontrar aumentos de 20 a 50 veces superiores. Aunque los niveles séricos de AST y ALT son elevados siempre que algún proceso afecta a la integridad de las células hepáticas, la ALT es la enzima hepática más específica. Pueden darse niveles elevados de AST en presencia de daños en el músculo cardiaco o esqueletal, así como de parenquima hepático. Rara vez se observa una elevación sérica de la actividad de ALT en trastornos distintos de la enfermedad parenquimática hepática.

PRINCIPIO DEL PROCEDIMIENTO La ALT cataliza la transferencia del grupo amino de la alanina al oxoglutarato con la formación de glutamato y piruvato. La lactato deshidrogenasa (LDH) reduce el piruvato a lactato. ALT L-alanina + 2-oxoglutarato <⎯⎯> L-glutamato + Piruvato LDH Piruvato + NADH + H+ <⎯⎯> D-lactato + NAD+

En esta misma reacción, una cantidad equivalente de NADH se oxida a NAD, lo que produce una disminución de la absorbencia a 340 nm directamente proporcional a la actividad de la ALT sérica. El método de referencia de la IFCC incluye piridoxal-5'-fosfato (P-5'-P) a un nivel de 0.1 mmol/l, que ha demostrado ser suficiente para activar la apo-ALT en 5 minutos (2).

INFORMACIÓN SOBRE LOS REACTIVOS Reactivo A: reactivo enzimático Código: 981361 7 x 40 ml Código: 981769 8 x 16 ml Reactivo B: sustrato Código: 981361 7 x 10 ml Código: 981769 8 x 4 ml

Concentraciones Reactivo A: reactivo enzimático Tampón Tris, pH 7.15 137.5 mmol/l L-alanina 700 mmol/l LDH > 1650 U/l NaN3 < 0.1 % Reactivo B: sustrato 2-oxoglutarato 82.5 mmol/l NADH 1.0 mmol/l NaN3 < 0.1 % Nota: El piridoxal-5'-fosfato líquido no se incluye en el kit. Puede encargarse por separado con el número de código 981839.

Precauciones Sólo para uso en diagnósticos in vitro. Adopte las medidas de precaución habituales para manipular reactivos de laboratorio. Los reactivos contienen azida sódica como agente de conservación. No lo ingiera. Evite el contacto con la piel y las membranas mucosas.

Preparación Código: 981361, 981769 Método con un reactivo (sin P-5'-P): Agregue el contenido del reactivo B a la botella del reactivo A. Tape el vial y agítelo. El monorreactivo debe protegerse de la luz. Método con tres reactivos (con P-5'-P): Los reactivos están listos para su uso. Nota: compruebe que no haya burbujas en el cuello de la botella ni en la superficie del reactivo cuando inserte los viales o recipientes de reactivos en el analizador Konelab.

Almacenamiento y estabilidad Si se protegen de la luz, los reactivos contenidos en viales sin abrir permanecen estables a 2...8 °C hasta la fecha de caducidad impresa en la etiqueta. Consulte las notas de aplicación del analizador Konelab para determinar la estabilidad de los reactivos una vez abiertos y puestos en el analizador.

RECOGIDA DE MUESTRAS Tipo de muestra Puede utilizarse suero limpio o plasma con heparina.

Precauciones Las muestras de origen humano deben manejarse y desecharse como si se tratase de material potencialmente infeccioso.

Almacenamiento (3) La muestra puede almacenarse durante 3 días a 20...25 °C, durante 7 días a 4...8 °C o durante 2 días a –20 °C.


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PROCEDIMIENTO DEL TEST Consulte el procedimiento automático en el analizador Konelab en el Manual del Analizador y las notas de la aplicación. No puede garantizarse la fiabilidad de ninguna aplicación no aprobada por Thermo Fisher Scientific Oy, por lo que deberá evaluarla el usuario.

Materiales suministrados Reactivos descritos anteriormente.

Materiales requeridos pero no suministrados Piridoxal-5'-fosfato (código 981839) para el método con tres reactivos. Controles descritos a continuación.

Calibración La respuesta (dA/min) se convierte en unidades de resultado con un factor de cálculo. O utilice eCal (981830) como calibrador según las instrucciones del prospecto del paquete.

Control de calidad Utilice muestras de control de calidad al menos una vez al día y cada vez que se utilice un nuevo recipiente de reactivo. Controles disponibles: Nortrol, código 981043 Abtrol, código 981044 Los intervalos y límites de control deben adaptarse a los requisitos de cada laboratorio. Los resultados de las muestras de control de calidad deben estar dentro de los límites establecidos por el laboratorio.

CÁLCULO DE RESULTADOS El analizador Konelab calcula los resultados automáticamente de la manera siguiente: Actividad en U/l = dA/mín x Factor TV x 1000 Factor teórico = - ⎯⎯⎯⎯⎯- 6.3 x SV x P

donde: TV = Total de volumen de reacción en ml SV = Volumen de muestra en ml 6.3 = Coeficiente de extinción de NADH a 340 nm P = Longitud de recorrido de cubeta = 1 Factor de conversión μkat/l = (U/l)/60 Si se utiliza eCal (981830) como calibrador, el analizador Konelab analiza automáticamente los resultados con una curva de calibración.

LIMITACIONES DEL PROCEDIMIENTO

Interferencias Criterio: recuperación entre ± 10% de los valores iniciales. Método con un reactivo: Bilirrubina conjugada: sin interferencias encontradas hasta 420 μmol/l (24.6 mg/dl). Bilirrubina no conjugada: sin interferencias encontradas hasta 600 μmol/l (35.1 mg/dl). Hemolizado: sin interferencias encontradas hasta 10 g/l de hemoglobina. Lipemia: sin interferencias encontradas hasta 2 g/l de Intralipid® (marca comercial de Fresenius Kabi AB). Existe una escasa correlación entre turbidez y concentración de triglicéridos. Método con tres reactivos: Bilirrubina conjugada: sin interferencias encontradas hasta 420 μmol/l (24.6 mg/dl). Bilirrubina no conjugada: sin interferencias encontradas hasta 600 μmol/l (35.1 mg/dl). Hemolizado: sin interferencias encontradas hasta 8 g/l de hemoglobina. Lipemia: sin interferencias encontradas hasta 2 g/l de Intralipid®. Si desea información sobre la interferencia de otras sustancias, consulte la referencia 4.

VALORES PREVISTOS (2) Varones: < 45 U/l (< 0.74 μkat/l) a 37 °C Mujeres: < 34 U/l (< 0.56 μkat/l) a 37 °C Los valores mencionados sirven sólo como guía. Se recomienda que cada laboratorio verifique este rango o derive un intervalo de referencia para la población a la que atiende.

RANGO DE MEDIDA Método con un reactivo: 4 - 300 U/l (0.07 - 5.00 μkat/l) Rango de medida aumentado después de la segunda dilución: 4 - 1800 U/l (0.07 - 30.00 μkat/l) Método con tres reactivos: 5 - 250 U/l (0.08 – 4.17 μkat/l) Rango de medida aumentado después de la segunda dilución: 5 – 1500 U/l (0.08 – 25.00 μkat/l)

CARACTERÍSTICAS DEL RESULTADO

Límite de detección Método con un reactivo: 2 U/l (0.03 μkat/l) Método con tres reactivos: 2 U/l (0.03 μkat/l) El límite de detección representa la concentración/actividad más baja mensurable que puede distinguirse de cero. Se calcula como la concentración de muestra cero + 3 DS (intraserie, n=24).

Imprecisión (unidad de resultado U/l) Método con un reactivo: Media

33 U/l Media 90 U/l

Media 108 U/l

SD CV% SD CV% SD CV% Intraserie 0.6 1.8 0.6 0.6 0.9 0.8 Interdiario 0.5 1.5 0.9 1.0 1.0 0.9 Total 1.0 3.0 1.8 2.0 2.7 2.4

Método con tres reactivos: Media

31 U/l Media 89 U/l

Media 109 U/l

SD CV% SD CV% SD CV% Intraserie 0.6 1.8 0.6 0.7 1.0 0.9 Interdiario 0.2 0.7 0.8 0.9 0.8 0.8 Total 0.8 2.6 1.5 1.7 2.2 2.0

En el estudio de precisión realizado según las directrices del Documento EP5-A del NCCLS se utilizó el analizador Konelab 60 durante 20 días, siendo el número de medidas n = 80.

Comparación de métodos Método con un reactivo: Se realizó un estudio comparativo utilizando el Documento EP9-A del NCCLS como guía y el método de dos reactivos de Konelab como referencia. Regresión lineal (unidad de resultado U/l): y = 0.75 x + 2.8 r = 0.988 n = 60 Las concentraciones de las muestras oscilaron entre 7 e 190 U/l. Método con tres reactivos: Se realizó un estudio comparativo utilizando el Documento EP9-A del NCCLS como guía y el método de dos reactivos de Konelab como referencia. Regresión lineal (unidad de resultado U/l): y = 1.00 x + 0.2 r = 1.00 n = 65 Las concentraciones de las muestras oscilaron entre 10 y 155 U/l. Los resultados obtenidos en cada laboratorio pueden diferir de los datos de imprecisión y de comparación de métodos ofrecidos.

BIBLIOGRAFÍA 1. Burtis, CA and Ashwood, E R (ed.), Tietz Fundamentals of Clinical Chemistry, 5th





FABRICANTE Thermo Fisher Scientific Oy Clinical Diagnostics Finland Ratastie 2, P.O. Box 100, FI-01621 Vantaa Tel. +358 9 329 100, Fax +358 9 3291 0300 www.thermo.com/konelab

Fecha de revisión (aaaa-mm-dd) 2007-08-14

Cambios desde la versión anterior: Nombre de empresa actualizado.

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Konelab™ / T seeria ALT/GPT (IFCC) 981361 7 x 50 ml 981769 8 x 20 ml

PAKENDI INFOLEHT ON KOOSTATUD KASUTAMISEKS VÄLJASPOOL USA-D. KONELAB SYSTEMSI VIITED KEHTIVAD ÜHTLASI T SEERIA KOHTA.

SIHTOTSTARVE Alaniin aminotransveraasi (L-Alaniin: 2-Oxoglutarate Aminotransferase (ALT) EC 2.6.1.2) aktiivsuse in vitro kvantitatiivseks määraimiseks inimese vereseerumis või -plasmas. Katsetulemuste tõlgendamisel tuleb alati arvesse võtta kliinilist tausta.

KOKKUVÕTE (1) Aspartaadi aminotransferaas (ASAT/AST), varasema nimetusega glutamaadi-oksaloatsetaadi transaminaas (GOT) ja alaniini aminotransferaas (ALAT/ALT), varasema nimetusega glutamaadi-püruvaadi transaminaas (GPT) kuuluvad aminotransferaasideks ehk transaminaasideks nimetatavate ensüümide rühma, mis katalüüsivad α-ketohapete pöörduvat muundumist aminohapeteks aminorühmade ülekandega. Normaalolukorras leidub nii AST-i kui ALT-i inimese plasmas, sapis, liikvoris ja süljes, kuid uriinis leidub neid ainult neerukahjustuse puhul. Viirushepatiidi ja muude maksa nekroosiga seonduvate maksahaiguste puhul kõrgenevad seerumi AST ja ALT juba enne haiguse kliiniliste tunnuste ja sümptomite ilmnemist. Mõlema ensüümi tase võib ülemise etalontaseme ületada kuni 100-kordselt, kuid kõige sagedamini täheldatakse 20–50-kordset tõusu Ehkki maksarakke kahjustavate protsessidega kaasneb nii AST- kui ALT-taseme tõus, on ALT neist rohkem maksaspetsiifiline. Kõrgenenud AST tase võib olla seotud südame või skeletilihaste, aga ka maksa parenhüümi kahjustustega. Muude seisundite puhul peale parenhümatoossete maksahaiguste täheldatakse seerumi ALT-aktiivsuse kõrgenemist harva.

MEETODI PÕHIMÕTE ALT katalüüsib aminorühma ülekannet alaniinilt oksoglutaraadile, tekivad glutamaat ja püruvaat. Püruvaat redutseeritakse laktaadiks ja laktaat dehüdrogenaasiks (LDH). ALT L-alaniiin + 2-oksoglütraat <⎯⎯> L-grutamaat + püruvaat LDH Püruvaat + NADH + H+ <⎯⎯> D-laktaat + NAD+ Samas reaktsioonis oksüdeeritakse ekvivalentne kogus NADH-d NAD-ks. Jälgitakse sellest tingitud neelduvuse langust lainepikkusel 340 nm, mis on võrdeline ALT aktiivsusega seerumis. IFCC standardmeetodis kasutatakse püridoksaal-5’-fosfaati (P-5´-P) kontsentratsioonis 0.1 mmol/l; on näidatud, et see on küllaldane apo-ALT aktiveerimiseks 5 minuti jooksul (2).

TEAVE REAKTIIVIDE KOHTA A-reaktiiv: ensüümreaktiiv kood: 981361 7 x 40 ml kood: 981769 8 x 16 ml B-reaktiiv: substraat kood: 981361 7 x 10 ml kood: 981769 8 x 4 ml


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Kontsentratsioonid A-reaktiiv: ensüümreaktiiv Tris-puhver, pH 7.15 137.5 mmol/l L-alaniin 700 mmol/l LDH > 1650 U/l NaN3 < 0.1 % B-reaktiiv: substraat 2-oksoglutaraat 82.5 mmol/l NADH 1.0 mmol/l NaN3 < 0.1 % Note: Liquid pyridoxal-5’-phosphate is not included in the kit. Seda on võimalik eraldi tellida koodi 981839 abil.

Hoiatused Kasutamiseks ainult in vitro diagnostikas. Kõigi laborireaktiivide käsitsemisel tuleb rakendada tavapäraseid ettevaatusabinõusid. Reagent sisaldavad säilitusainet naatriumasiidi. Mitte neelata. Vältida kokkupuudet naha ja limaskestadega.

Ettevalmistamine kood: 981363, 981769 Ühe reaktiivi meetod (ilma P-5´-P-ta): A-reaktiivi pudelile lisatakse B-reaktiiv. Viaal suletakse korgiga ja segatakse. Monoreagenti tuleb hoida valguse eest kaitstuna! Kolme reaktiivi meetod (P-5´-P-ga): Reaktiivid on kasutusvalmis. Märkus: Enne reaktiiviviaalide või -nõude viimist Konelab analüsaatorisse tuleb kontrollida, et pudelikaelas ega reaktiivi pinnal ei oleks mulle.

Säilitamine ja stabiilsus Avamata viaalides püsivad reaktiivid temperatuuril 2…8 °C valguse eest kaitstuna stabiilsena sildile trükitud aegumistähtajani. Teave laetud reaktiivide stabiilsuse kohta on esitatud Konelab analüsaatori tehnilistes märkustes.

PROOVIDE VÕTMINE

Proovi tüüp Kasutada võib läbipaistvaid seerumi- või hepariiniga plasmaproove.

Hoiatused Inimpäritolu proovid tuleb käsitsemisel ja kõrvaldamisel lugeda võimalikeks nakkusallikateks.

Säilitamine (3) Proovi võib temperatuuril 20…25 °C säilitada 3 kuni päeva, temperatuuril 4…8 °C kuni 7 päeva, temperatuuril –20 °C kuni 2 päeva.

KATSEPROTSEDUUR Teave automaatse katseprotseduuri kasutamise kohta Konelab analüsaatoril on esitatud juhendis ja tehnilistes märkustes. Thermo Fisher Scientific Oy poolt valideerimata rakendusviiside sooritusnäitajaid tagada ei saa, seetõttu peab neid hindama lõppkasutaja.

Kaasasolevad materjalid Eespool kirjeldatud reaktiivid.

Vajalikud materjalid, mida kaasas pole Püridoksaal –5’-fosfaat (kood 981839) kolme reaktiivi meetodile. Allpool kirjeldatud kontrollid.

Kaliibrimine Vastus dA/min teisendatakse ühikuliseks tulemuseks vastava arvutusteguri abil. Teine võimalus on kasutada eCal (981830) kalibraatorit, järgides eCal (981830) pakendi infolehes toodud juhiseid.

Kvaliteedikontroll Kvaliteedikontrolliproove kasutatakse vähemalt kord päevas ja iga kord, kui kasutatakse uut reaktiivipudelit. Saadaval on järgmised kontrollproovid: Nortrol, koodiga 981043 Abtrol, koodiga 981044 Kontrollide vahemikud ja piirid tuleb kohaldada individuaalsete laborite vajadustele. Kvaliteedikontrolliproovide tulemused peavad jääma labori poolt seatud piiridesse.

TULEMUSTE ARVUTAMINE Tulemused arvutab Konelab analüsaator automaatselt järgmisel viisil: Aktiivsus (U/l) = dA/min x tegur TV x 1000 Teoreetiline võrdetegur = - ⎯⎯⎯⎯⎯- 6.3 x SV x P kus: TV = reageerivate ainete kogumaht (ml) SV = proovi maht (ml) 6.3= NADH ekstinktsioonitegur 340 nm juures P= küveti optiline teepikkus = 1 Teisendustegur μkat/l = (U/l)/60 eCal (981830) kasutamisel kalibraatorina arvutab Konelab analüsaator tulemused kaliibrimiskõvera järgi automaatselt.

PROTSEDUURI PIIRANGUD

Segavad mõjud Tingimus: Saagis algväärtuse ± 10% suhtes. Ühe reaktiivi meetod: Konjugeeritud bilirubiin: kontsentratsioonini kuni 420 μmol/l (24.6 mg/dl) segavat mõju ei täheldatud. Konjugeerimata bilirubiin: kontsentratsioonini kuni 600 μmol/l (35.1 mg/dl) segavat mõju ei täheldatud. Hemolüsaat: hemoglobiini kontsentratsioonini kuni 10 g/l segavat mõju ei täheldatud. Lipeemia: Intralipid® (Fresenius Kabi AB kaubamärk) sisalduseni kuni 2 g/l segavat mõju ei täheldatud. Korrelatsioon hägususe ja triglütseriidide sisalduse vahel oli väike. Kolme reaktiivi meetod: Konjugeeritud bilirubiin: kontsentratsioonini kuni 420 μmol/l (24.6 mg/dl) segavat mõju ei täheldatud. Konjugeerimata bilirubiin: kontsentratsioonini kuni 600 μmol/l (35.1 mg/dl) segavat mõju ei täheldatud.

Hemolüsaat: hemoglobiini kontsentratsioonini kuni 8 g/l segavat mõju ei täheldatud. Lipeemia: Intralipid® kontsentratsioonini kuni 2g/l segavat mõju ei täheldatud. Muid segavaid aineid on käsitletud viites 4.

OODATAVAD TULEMUSED (2) Meespatsiendid: < 45 U/l (< 0.74 μkat/l) temperatuuril 37 °C Naispatsiendid: < 34 U/l (< 0,56 μkat/l) temperatuuril 37 °C Toodud väärtused on mõeldud suunitluslikena. Kõikidel laboritel on soovitatav seda vahemikku kontrollida, või tuletada ise etalonvahemik teenindatava populatsiooni seas.

MÕÕTEPIIRKOND Ühe reaktiivi meetod: 4 - 300 U/l (0.07 – 5.00 μkat/l) Pikendatud mõõtepiirkond pärast sekundaarset lahjendust: 4 – 1800 U/l (0.07 – 30.00 μkat/l) Kolme reaktiivi meetod: 5–250 U/l (0.08–4.17 μkat/l) Pikendatud mõõtepiirkond pärast sekundaarset lahjendust: 5–1500 U/l (0.08–25.00 μkat/l)

SOORITUSNÄITAJAD

Avastamispiir Ühe reaktiivi meetod: 2 U/l (0.03 µkat/l) Kolme reaktiivi meetod: 2 U/l (0.03 μkat/l) Avastamispiir on madalaim mõõdetav kontsentratsioon/aktiivsus, mis on nullist eristatav. See leitakse kui nullproovi kontsentratsioon + 3 SD (katseseeriasisene, n=24).

Ebatäpsus (tulemuse ühik U/l) Ühe reaktiivi meetod: Keskmine

33 U/l Keskmine

90 U/l Keskmine

108 U/l SD CV% SD CV% SD CV% Katseseeriasisene 0.6 1.8 0.6 0.6 0.9 0.8 Eri partiid 0.5 1.5 0.9 1.0 1.0 0.9 Summaarne 1.0 3.0 1.8 2.0 2.7 2.4

Kolme reaktiivi meetod: Keskmine

31 U/l Keskmine

89 U/l Keskmine

109 U/l SD CV% SD CV% SD CV% Katseseeriasisene 0.6 1.8 0.6 0.7 1.0 0.9 Eri partiid 0.2 0.7 0.8 0.9 0.8 0.8 Summaarne 0.8 2.6 1.5 1.7 2.2 2.0

Vastavalt NCCLS dokumendi EP5-A suunistele viidi Konelab 60 peal 20 päeva jooksul läbi täpsusuuring, mõõtmiste arv uuringus oli n = 80.

Meetodite võrdlus Ühe reaktiivi meetod: NCCLS dokumendi EP9-A suuniseid järgides viidi läbi võrdlev uuring, kasutades etalonina Konelab kahe reagendi meetodit. Lineaarne regressioon (tulemuse ühik U/l): y = 0.75 x + 2.8 r = 0.988 n = 60 Proovide kontsentratsioonid jäid vahemikku 7 ja 190 U/l. Kolme reaktiivi meetod: NCCLS dokumendi EP9-A suuniseid järgides viidi läbi võrdlev uuring, kasutades etalonina Konelab kahe reagendi meetodit. Lineaarne regressioon (tulemuse ühik U/l): y = 1.00 x + 0.2 r = 1.00 n = 65 Proovide kontsentratsioonid jäid vahemikku 10 – 155 U/l. Individuaalsetes laborites saadavad tulemused võivad erineda esitatud sooritusnäitajatest.

KIRJANDUS 1. Burtis, CA and Ashwood, E R (ed.), Tietz Fundamentals of Clinical Chemistry, 5th





TOOTJA Thermo Fisher Scientific Oy Clinical Diagnostics Finland Ratastie 2, P.O. Box 100, FI-01621 Vantaa Tel. +358 9 329 100, Faks +358 9 3291 0300 www.thermo.com/konelab

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Konelab™ / T Sorozat ALT/GPT (IFCC) 981361 7 x 50 ml 981769 8 x 20 ml

EZ A TÁJÉKOZTATÓ AZ EGYESÜLT ÁLLAMOKON KÍVÜLI HASZNÁLATRA VONATKOZIK. A KONELAB RENDSZEREKRE TETT MINDEN UTALÁS A T SOROZATRA IS VONATKOZIK.

RENDELTETÉS Emberi szérum, illetve plazma alanin-aminotranszferáz (L-alanin: 2-oxoglutarát aminotranszferáz (ALT), EC 2.6.1.2) aktivitásának in vitro kvantitatív meghatározásához Konelab analizátorokban. Minden vizsgálati eredményt a klinikai képpel összefüggésben kell értékelni.

ÖSSZEGZÉS (1) Az alanin-aminotranszferáz (ALAT/ALT) – korábbi nevén glutamát-piruvát-transzamináz (GPT) –, valamint az aszpartát-aminotranszferáz (ASAT/AST) – korábbi nevén glutamát-oxálacetát-transzamináz (GOT) – az aminotranszferáz/transzamináz enzimek csoportjába tartozik, ezen csoport enzimei amino csoportok átvitelével az α-ketosavak aminosavakká alakulásának reverzibilis reakcióját katalizálják. Mind az AST, mind az ALT élettanilag jelen van az emberi plazmában, epében, cerebrospinális folyadékban és nyálban, nem találhatók meg azonban a vizeletben, hacsak nincs jelen vesekárosodás. Vírusos májgyulladásban és más, hepatikus nekrózissal járó májbetegségben a szérum AST és ALT szintje megemelkedik még azelőtt, hogy a betegség klinikai jelei és tünetei megjelennének. Mindkét enzim szintje elérheti a referenciatartomány felső határának akár százszorosát is, azonban a leggyakrabban észlelt eltérés a felső határ 20-50-szerese. Habár mind az AST, mind az ALT szérumszintje a májsejtek épségét befolyásoló behatásokra emelkedik meg, a kettő közül az ALT a májra specifikusabb enzim. Az AST szintjének emelkedése a májparenchyma károsodása mellett létre jöhet szív-, illetve vázizomkárosodás kapcsán is. Az ALT aktivitás szérumszintjének emelkedése ritkán figyelhető meg a parenchymális májkárosodástól eltérő állapotokban.

AZ ELJÁRÁS ALAPELVE Az ALT amino csoport átvitelét katalizálja alaninról 2-oxoglutarátra, a reakció során glutamát és piruvát képződik. A piruvátot a laktát-dehidrogenáz (LDH) laktáttá redukálja. ALT L-alanin + 2-oxoglutarát <⎯⎯> L-glutamát + piruvát LDH piruvát + NADH + H+ <⎯⎯> D-laktát + NAD+ Ugyanebben a reakcióban ekvivalens mennyiségű NADH oxidálódik NAD-dá. A 340 nm-en mért abszorbancia-csökkenés mérhető és egyenesen arányos a szérum ALT aktivitásával. Az IFCC referenciamódszere 0.1 mmol/l koncentrációjú piridoxál-5’-foszfátot (P-5’-P) alkalmaz, amely elegendőnek bizonyult az apo-ALT 5 percen belüli aktiváláshoz (2).

REAGENSEK ADATAI A reagens: Enzim reagens Kód: 981361 7 x 40 ml Kód: 981769 8 x 16 ml B reagens: Szubsztrát Kód: 981361 7 x 10 ml Kód: 981769 8 x 4 ml

Koncentrációk A reagens: Enzim reagens Tris puffer, pH 7.15 137.5 mmol/l L-alanin 700 mmol/l LDH > 1650 U/l NaN3 < 0.1 % B reagens: Szubsztrát 2-oxoglutarát 82.5 mmol/l NADH 1.0 mmol/l NaN3 < 0.1 % Megjegyzés: A készlet nem tartalmazza a folyékony piridoxál-5’-foszfátot. Ez külön, kódszám (981839) alapján megrendelhető.

Óvintézkedések Kizárólag in vitro diagnosztikus használatra. Tartsa be a laboratóriumi reagensek kezelésére vonatkozó szokásos előírásokat. A reagens tartósítószerként nátrium-azidot tartalmaz. Ne nyelje le. Kerülje érintkezését a bőrrel és a nyálkahártyákkal.

Előkészítés Kód: 981361, 981769 Egyreagenses módszer (P-5’-P nélkül): Adja a B reagens üvegének tartalmát az A reagenshez. Zárja le az üveget és keverje össze. A reagenst fénytől óvni kell! 3-reagenses módszer (P-5’-P-tal): A reagensek használatra készek. Megjegyzés: Ellenőrizze, hogy nincs-e buborék az üveg nyakánál vagy a reagens felszínén, amikor reagenst tartalmazó üvegeket, illetve edényeket tesz a Konelab analizátorba.

Tárolás és stabilitás A felbontatlan üvegben, fénytől védett helyen tárolt reagensek 2...8 °C között a címkén feltüntetett lejárati időpontig stabilak. A reagensek elemzőkészüléken belüli stabilitásához olvassa el a Konelab analizátorhoz tartozó Alkalmazási tudnivalókat.

MINTAVÉTEL

A minta típusa Használjon tiszta szérumot vagy heparinos plazmát.

Óvintézkedések Az emberi mintákat úgy kell kezelni és kidobni, mintha azok fertőzőek lennének.

Tárolás (3) A minta 20...25 °C-on 3 napig, 4…8 °C-on 7 napig, –20 °C-on pedig 2 napig tárolható.

A VIZSGÁLATI ELJÁRÁS Automatizált eljárás kivitelezéséhez olvassa el a Konelab analizátorhoz tartozó Használati kézikönyvet és Alkalmazási tudnivalókat. Nem garantálható semmilyen olyan alkalmazás eredménye, amelyet a Thermo Fisher Scientific Oy nem hagyott jóvá, ezért ezeket a felhasználónak kell értékelnie.

Szolgáltatott anyagok A fent leírt reagensek.

Szükséges, de nem szolgáltatott anyagok Piridoxál-5’-foszfát (kód: 981839) a 3-reagenses módszerhez. Az alább leírt kontrollminták.

Kalibrálás A válasz (dA/min) egy számítási tényező segítségével eredményegységekre átszámítva jelenik meg. Ettől eltérően használhatja az eCal (981830) vegyületet kalibrálásra az eCal (981830) csomagjában található tájékoztató szerint.

Minőségellenőrzés Használjon minőségellenőrző mintákat naponta legalább egyszer, illetve minden új üveg reagens felnyitásakor. Rendelkezésre álló kontrollminták: Nortrol, kód 981043 Abtrol, kód 981044 Az ellenőrzési intervallumokat és határértékeket az aktuális laboratóriumi követelményekhez kell igazítani. A minőségellenőrző minták eredményeinek a laboratórium által előre beállított határértékek közé kell esniük.

AZ EREDMÉNYEK KISZÁMÍTÁSA Az eredményeket a Konelab analizátor automatikusan kiszámítja a következők szerint: Aktivitás U/l = dA/min x faktor TV x 1000 Elméleti faktor = - ⎯⎯⎯⎯⎯- 6.3 x SV x P ahol: TV = teljes reagáló térfogat ml-ben SV = minta térfogata ml-ben 6.3= a NADPH extinkciós együtthatója 340 nm-en P= küvetta úthossza = 1 Átváltási faktor μkat/l = (U/l)/60 eCal (981830) alkalmazásával történő kalibráláskor az eredményeket a Konelab analizátor egy kalibrációs görbe segítségével automatikusan kiszámítja.

AZ ELJÁRÁS KORLÁTAI Interferencia Kritérium: Az értékek a kezdeti értékek ± 10%-án belül maradnak. Egyreagenses módszer: Konjugált bilirubin: Nem észleltek interferenciát 420 μmol/l (24.6 mg/dl) értékig. Nem konjugált bilirubin: Nem észleltek interferenciát 600 μmol/l (35.1 mg/dl) értékig. Hemolizátum: Nem észleltek interferenciát 10 g/l hemoglobinszintig. Lipaemia: Nem észleltek interferenciát Intralipid® (a Fresenius Kabi AB védjegye) esetén 2 g/l értékig. Gyenge összefüggés van a zavarosság és trigliceridkoncentráció között. 3-reagenses módszer: Konjugált bilirubin: Nem észleltek interferenciát 420 μmol/l (24.6 mg/dl) értékig. Nem konjugált bilirubin: Nem észleltek interferenciát 600 μmol/l (35.1 mg/dl) értékig. Hemolizátum: Nem észleltek interferenciát 8 g/l hemoglobinszintig. Lipaemia: Nem észleltek interferenciát 2g/l Intralipid® szintig. Egyéb interferenciát okozó anyagok tekintetében lásd az 4. referenciát.

VÁRHATÓ ÉRTÉKEK (2) Férfi: < 45 U/l (< 0.74 μkat/l) 37 °C hőmérsékleten Nő: < 34 U/l (< 0.56 μkat/l) 37 °C hőmérsékleten A feltüntetett értékek kizárólag tájékoztató jellegűek. Minden laboratórium esetében ajánlott a normál tartomány megerősítése, illetve a kiszolgált populációra jellemző referenciaintervallum kialakítása.

MÉRÉSI TARTOMÁNY Egyreagenses módszer: 4 -300 U/l (0.07 – 5.00 μkat/l) Kiterjesztett mérési tartomány másodlagos hígítás után: 4 – 1800 U/l (0.07 – 30.00 μkat/l) 3-reagenses módszer: 5 -250 U/l (0.08 – 4.17 μkat/l) Kiterjesztett mérési tartomány másodlagos hígítás után: 5 – 1500 U/l (0.08 – 25.00 μkat/l)

TELJESÍTMÉNY JELLEMZŐK

Detektálási határérték Egyreagenses módszer: 2 U/l (0.03 μkat/l) 3-reagenses módszer: 2 U/l (0.03 μkat/l) A detektálási határérték az a legkisebb mérhető koncentráció/aktivitás, amely még megkülönböztethető a nullától. Kiszámítása a következő: nulla minta koncentrációja + 3 SD (mérés közben n=24).

Pontatlanság (eredmény egység U/l) Egyreagenses módszer: Középérték

33 U/l Középérték


108 U/l SD CV% SD CV% SD CV% Mérés közben 0.6 1.8 0.6 0.6 0.9 0.8 Napok közt 0.5 1.5 0.9 1.0 1.0 0.9 Teljes 1.0 3.0 1.8 2.0 2.7 2.4

3-reagenses módszer: Középérték



109 U/l SD CV% SD CV% SD CV% Mérés közben 0.6 1.8 0.6 0.7 1.0 0.9 Napok közt 0.2 0.7 0.8 0.9 0.8 0.8 Teljes 0.8 2.6 1.5 1.7 2.2 2.0

Az NCCLS EP5-A dokumentumának előírásai alapján pontossági mérést végeztek 20 napon keresztül a Konelab 60 analizátorral, 80-as mérésszámmal (n=80).


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Módszerösszehasonlítás Egyreagenses módszer: Összehasonlítási tanulmányt végeztek az NCCLS EP9-A dokumentumának előírásai alapján, referencianként a Konelab kétreagenses módszerét használva. Lineáris regresszió (eredmény egység U/l): y = 0.75 x +2.8 r = 0.988 n = 60 A mintakoncentrációk 7 és 190 U/l között voltak. 3-reagenses módszer: Összehasonlítási tanulmányt végeztek az NCCLS EP9-A dokumentumának előírásai alapján, referenciaként a Konelab kétreagenses módszerét használva. Lineáris regresszió (eredmény egység U/l): y = 1.00 x + 0.2 r = 1.00 n = 65 A mintakoncentrációk 10 és 155 U/l között voltak. Az egyes laboratóriumokban nyert értékek különbözhetnek a megadott teljesítmény adatoktól.

BIBLIOGRÁFIA 1. Burtis, CA and Ashwood, E R (ed.), Tietz Fundamentals of Clinical Chemistry, 5th

edition, W B Saunders Company, Philadelphia, 2001, pp. 354 - 355. 2. IFCC 2002/5: IFCC Primary Reference Procedures for the Measurement of

Catalytic Activity Concentrations of Enzymes at 37 °C, Part. 4 Reference Procedure for the Measurement of Catalytic Concentrations of Alanine Aminotransferase, Clin.Chem.Lab.Med. 2002, 40(7): 718-724.



GYÁRTÓ Thermo Fisher Scientific Oy Clinical Diagnostics Finland Ratastie 2, P.O. Box 100, FI-01621 Vantaa Tel. +358 9 329 100, Fax +358 9 3291 0300 www.thermo.com/konelab

Ellenőrzés időpontja (éééé-hh-nn) 2007-08-14

Változtatások az előző változathoz képest A cég neve frissítésre került.

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Konelab™ / Serie T ALT / GPT (IFCC) 981361 7 x 50 ml 981769 8 x 20 ml

IL PRESENTE INSERTO NELL’IMBALLO PUO’ ESSERE APPLICATO AL DI FUORI DEGLI STATI UNITI. EVENTUALI RIFERIMENTI A KONELAB SYSTEMS SI RIFERISCE ANCHE ALLA SERIE T.

USO CONSIGLIATO Per la determinazione quantitativa in vitro dell’attività della alanina aminotransferasi (L-Alanina: 2-Ossoglutarato Aminotransferasi (ALT), EC 2.6.1.2) nel siero o nel plasma umano sugli analizzatori Konelab. Tutti i risultati del test devono essere interpretati in riferimento al contesto clinico specifico.

SOMMARIO (1) L’alanina aminotransferasi (ALAT/ALT), precedentemente nota come transaminasi glutammico-piruvica (GPT) e l’aspartato aminotransferasi (ASAT/AST), precedentemente noto come transaminasi glutammico-ossalacetica (GOT) appartengono alle aminotransferasi o transaminasi, un gruppo enzimatico che catalizza la trasformazione reversibile degli α-cheto-acidi in amminoacidi mediante trasferimento di gruppi amminici. L’AST e l’ALT sono normalmente presenti nel plasma umano, nella bile, nel liquido cerebrospinale e nella saliva, ma non si trovano nelle urine, a meno che non sia presente una lesione renale. Nell’epatite virale e in altre forme di epatopatie associate a necrosi epatica, il livello di AST e ALT sieriche è elevato anche prima della comparsa dei segni clinici e dei sintomi indicativi di patologia. L’attività dei due enzimi può raggiungere valori anche 100 volte maggiori del limite superiore di riferimento, benché nella maggior parte dei casi si riscontrino aumenti di 20-50 volte i valori normali. Nonostante i livelli sierici dei due enzimi registrino un innalzamento mentre sono in atto processi che interagiscono sull’integrità delle cellule epatiche, l’ALT è l’enzima più specifico per la diagnosi di danno epatico. Livelli aumentati di AST possono rilevarsi in connessione con danni cardiaci o dei muscoli scheletrici oltre che del parenchima epatico. Raramente viene osservato un aumento dell’attività dell’ALT nel siero in condizioni diverse dalle patologie che interessano il parenchima epatico.

PRINCIPIO DELLA PROCEDURA L’ALT catalizza il passaggio del gruppo amminico da alanina a ossoglutarato con la formazione di glutamato e piruvato. Il piruvato è ridotto a lattato mediante la deidrogenasi del lattato (LDH). ALT L-Alanina+ 2-Ossoglutarato <⎯⎯>L-Glutamato + Piruvato LDH Piruvato + NADH + H+<⎯⎯> D-Lattato + NAD+ In questa stessa reazione una quantità equivalente di NADH viene ossidata in NAD. Ne consegue una diminuzione dell’assorbanza a 340 nm che è direttamente proporzionale all’attività dell’ALT nel siero. Il metodo di riferimento IFCC include piridossal –5’-fosfato (P-5´-P) a un livello di 0.1 mmol/l, che si è rivelato sufficiente per attivare l’apo ALT entro 5 minuti (2).

INFORMAZIONI SUI REAGENTI Reagente A Reagente enzimatico Codice: 981361 7 x 40 ml

Codice: 981769 8 x 16 ml Reagente B Substrato Codice: 981361 7 x 10 ml Codice: 981769 8 x 4 ml

Concentrazioni Reagente A Reagente enzimatico Tampone Tris, pH 7.15 137.5 mmol/l L-Alanina 1700 mmol/l LDH > 1650 U/l NaN3 < 0.1 % Reagente B Substrato 2-ossoglutarato 82.5 mmol/l NADH 1.0 mmol/l NaN3 < 0.1 % Nota: Il piridossal-5’-fosfato liquido non è incluso nel kit. Può essere ordinato separatamente indicando il numero di codice 981839.

Precauzioni Solo per uso diagnostico in vitro. Rispettare le normali precauzioni previste per l’utilizzo di tutti i reagenti di laboratorio. Il reagente contiene sodio azide come conservante. Non ingerire. Evitare il contatto con la cute e le membrane mucose.

Preparazione Codice: 981361, 981769 Metodica monoreagente (senza P-5´-P): Aggiungere il contenuto del reagente B al flacone di reagente A. Tappare il flacone ed agitare. Il monoreagente deve essere conservato al riparo dalla luce. Metodica con 3 reagenti (con P-5´-P): I reagenti sono pronti all’uso. Nota: Controllare che non siano presenti bolle sul collo del flacone o sulla superficie del reagente durante l'inserimento di vial o recipienti di reagente nell'analizzatore Konelab.

Conservazione e stabilità I reagenti in flaconi intatti sono stabili fino alla data di scadenza indicata sull'etichetta, se conservati a una temperatura di 2…8 ° C al riparo dalla luce. Per la stabilità dei reagenti sullo strumento, vedere le note applicative dell'analizzatore Konelab in uso.

RACCOLTA DEL CAMPIONE

Tipo di campione Possono essere utilizzati siero o plasma eparinizzato.

Precauzioni I campioni umani devono essere maneggiati e smaltiti come campioni potenzialmente infetti.

Conservazione (3) Il campione può essere conservato per 3 giorni a 20…25° C, per 7 giorni a 4…8 °C o per 2 giorni a –20 °C.

PROCEDURA ANALITICA Per le procedure automatiche consultare il manuale d’uso e le note applicative dell'analizzatore Konelab. Tutte le applicazioni non esplicitamente approvate da Thermo Fisher Scientific Oy, non possono essere garantite in termini di prestazioni e dovranno pertanto essere valutate dall'utilizzatore.

Materiali inclusi nel kit I reagenti sopra descritti.

Materiali necessari ma non inclusi nel kit Piridoxal –5’-fosfato (codice 981839) per il metodo con 3 reagenti I controlli indicati di seguito.

Calibrazione La risposta dA/min è convertita nelle unità di misura del risultato per mezzo di un fattore di calcolo. In alternativa, utilizzare eCal (981830) conformemente alle istruzioni fornite nell’inserto dell’imballo di eCal (981830).

Controllo qualità Utilizzare i campioni del controllo di qualità almeno una volta al giorno e ogni volta che si utilizza un nuovo flacone di reagente. Controlli disponibili: Nortrol, codice 981043. Abtrol, codice 981044 Gli intervalli e i limiti del controllo devono essere adattati ai requisiti dei singoli laboratori. I risultati dei campioni del controllo di qualità devono rientrare nei limiti di variabilità stabiliti a priori dal laboratorio.

CALCOLO DEI RISULTATI I risultati vengono calcolati automaticamente dall’analizzatore Konelab come segue: Attività in U/l = dA/min x Fattore TV x 1000 Fattore teorico =- ⎯⎯⎯⎯⎯- 6.3 x SV x P dove: TV = Volume totale di reazione in ml SV = Volume del campione in ml 6.3= Coefficiente di estinzione del NADH a 340 nm P = Tracciato della cuvetta = 1 Fattore di conversione (kat/l = (U/l)/60 Se come calibratore è usato eCal (981830), i risultati vengono calcolati automaticamente dall’analizzatore Konelab in base ad una curva di calibrazione:

LIMITI DELLA PROCEDURA Interferenze Criterio: Recupero entro ± 10% del valore iniziale. Metodica monoreagente: Bilirubina coniugata: Non sono state rilevate interferenze fino a 420 μmol/l (24.6 mg/dl). Bilirubina non coniugata: Non sono state rilevate interferenze fino a 600 μmol/l (35.1 mg/dl). Emolisato: Non sono state rilevate interferenze fino a 10 g/l di emoglobina.



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Lipemia: Non sono state riscontrate interferenze significative fino a 2 g/l di Intralipid® (marchio registrato di Fresenius Kabi AB). Vi è una scarsa correlazione tra torbidità e concentrazione di trigliceridi. Metodica con tre reagenti: Bilirubina coniugata: Non sono state rilevate interferenze fino a 420 μmol/l (24.6 mg/dl). Bilirubina non coniugata: Non sono state rilevate interferenze fino a 600 μmol/l (35.1 mg/dl). Emolisato: Non sono state rilevate interferenze fino a 8 g/l di emoglobina. Lipemia: Non sono state rilevate interferenze fino a 2 g/l di emoglobina. Per le altre sostanze interferenti, vedere la voce bibliografica 4.

VALORI PREVISTI (2) Uomini: < 45 U/l (< 0.74 μkat/l) a 37 °C Donne: < 34 U/l (< 0.56 (kat/l) a 37 °C I valori citati dovranno servire esclusivamente come riferimento. Si raccomanda ad ogni laboratorio di verificare l'applicabilità di questo intervallo alla propria popolazione di pazienti e, se necessario, di determinare appositi intervalli di riferimento.

INTERVALLO DI MISURAZIONE Metodica monoreagente: 4 - 300 U/l (0.07 – 5.00 μkat/l) Intervallo di misurazione ampliato dopo la seconda diluizione: 4 – 1800 U/l (0.07 – 30.00 μkat/l) Metodica con tre reagenti: 5 - 250 U/l (0.08 – 4.17 μkat/l) Intervallo di misurazione ampliato dopo la seconda diluizione: 5 – 1500 U/l (0.08 – 25.00 μkat/l)

CARATTERISTICHE PRESTAZIONALI Limite di rilevamento Metodica monoreagente: 2 U/l (0.03 (kat/l) Metodica con tre reagenti: 2 U/l (0.03 (kat/l) Il limite di rilevamento rappresenta la concentrazione/attività misurabile più bassa che può essere distinta da zero. È calcolato come la concentrazione misurata nel campione zero + 3 DS (entro la serie, n=24).

Imprecisione (risultati espressi in U/l) Metodica monoreagente: Media

33 U/l Media 90 U/l

Media 108 U/l

DS CV% DS CV% DS CV% Entro la serie 0.6 1.8 0.6 0.6 0.9 0.8 Fra la serie 0.5 1.5 0.9 1.0 1.0 0.9 Totale 1.0 3.0 1.8 2.0 2.7 2.4

Metodica con tre reagenti: Media

31 U/l Media 89 U/l

Media 109 U/l

DS CV% DS CV% DS CV% Entro la serie 0.6 1.8 0.6 0.7 1.0 0.9 Fra la serie 0.2 0.7 0.8 0.9 0.8 0.8 Totale 0.8 2.6 1.5 1.7 2.2 2.0

È stato eseguito uno studio di precisione conformemente al protocollo NCCLS, documento EP5-A, utilizzando un analizzatore Konelab 60 per 20 giorni, con un numero di misurazioni pari a n=80.

Metodo di confronto Metodica monoreagente: È stato eseguito uno studio comparato secondo il protocollo NCCLS Documento EP9-A come linee guida e una metodica bireagente Konelab come riferimento. Regressione lineare (risultato espresso in U/I): y = 0.75 x + 2.8 r = 0.988 n = 60 Le concentrazioni dei campioni erano comprese tra 7 e 190 U/l. Metodica con 3 reagenti: È stato eseguito uno studio comparato secondo il protocollo NCCLS Documento EP9-A come linee guida e una metodica bireagente Konelab come riferimento. Regressione lineare (risultato espresso in U/I): y = 1.00 x + 0.2 r = 1.00 n = 65 Le concentrazioni dei campioni erano comprese tra 10 e 155 U/l. I risultati ottenuti nei singoli laboratori possono differire dai dati di imprecisione e di confronto dei metodi riportati.

BIBLIOGRAFIA 1. Burtis, CA and Ashwood, E R (ed.), Tietz Fundamentals of Clinical Chemistry, 5th





PRODUTTORE Thermo Fisher Scientific Oy Clinical Diagnostics Finland Ratastie 2, P.O. Box 100, FI-01621 Vantaa, Finlandia Tel. +358 9 329 100, Fax +358 9 3291 0300 www.thermo.com/konelab

Data della revisione (aaa-mm-gg) 2007-08-14

Modifiche rispetto alla versione precedente: Ragione sociale aggiornata

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Konelab™ / T serija ALT/GPT (IFCC) 981361 7 x 50 ml 981769 8 x 20 ml

ŠIOS PAKUOTĖS INFORMACINIS LAPELIS TINKAMAS NAUDOTI UŽ JAV RIBŲ. BET KOKIA NUORODA Į KONELAB SYSTEMS APIMA IR T PRODUKTŲ SERIJĄ.

PASKIRTIS In-vitro kiekybiniam alanino aminotransferazės ( L-alaninas: 2-oksoglutarato aminotransferazės (ALT), EC 2.6.1.2) aktyvumo nustatymui žmogaus serume arba plazmoje naudojant Konelab analizatorius. Visi tyrimų rezultatai turi būti interpretuojami atsižvelgiant į klinikinį kontekstą.

SANTRAUKA (1) Alanino aminotransferazė (ALAT/ALT), anksčiau vadinta glutamo piruvine transaminaze (GPT), ir aspartato aminotransferazė (ASAT/AST), anksčiau vadinta glutamo oksalacetato transaminaze (GOT), priklauso fermentų A grupei - aminotransferazėms arba transaminazėms, kurios katalizuoja grįžtamąjį α-keto rūgščių virtimą amino rūgštimis amino grupių perkėlimu. Tiek AST, tiek ir ALT yra žmogaus plazmoje, tulžyje, nugaros smegenų skystyje ir seilėse, tačiau jų nėra šlapime, išskyrus tuos atvejus, kai yra pažeisti inkstai. Esant virusiniam hepatitui ir kitoms kepenų ligų formoms susijusioms su hepatine nekroze, serumo AST ir ALT kiekis padidėja dar net nepasirodžius klinikiniams ligos požymiams ir simptomams. Abiejų fermentų kiekis viršutinę ribą gali viršyti net 100 kartų, tačiau dažniausiai pasitaiko 20-50 kartų viršutinės ribos viršijimas. Nors ir AST, ir ALT kiekis serume padidėja, kai pažeidžiamas kepenų ląstelių vientisumas, ALT yra labiau susijęs su kepenimis fermentas. AST gali padidėti dėl širdies ar skeleto raumenų pažeidimų, taip pat ir dėl kepenų parenchimos. ALT aktyvumo padidėjimas serume retai pastebimas esant kitoms, ne parenchiminėms kepenų ligoms.

PROCEDŪROS PRINCIPAS ALT katalizuoja amino grupės perėjimą iš alanino į oksaglutaratą, susidarant glutamatui ir piruvatui. Piruvatas laktato dehidrogenaze (LDH) redukuojamas į laktatą. ALT L-alaninas + 2-oksoglutaratas <⎯⎯> L-glutamatas + piruvatas LDH Piruvatas + NADH + H+ <⎯⎯> D-laktatas + NAD+ Šioje reakcijoje ekvivalentiškas NADH kiekis yra oksiduojamas į NAD. Dėl to sumažėja absorbcija prie 340 nm ir yra tiesiogiai proporcinga ALT aktyvumui serume. IFCC etaloninis metodas naudoja 0,1 mmol/l piridoksal–5’-fosfato (P-5´-P), kuris, kaip buvo parodyta, yra efektyvus aktyvuoti apo ALT per 5 minutes (2).

INFORMACIJA APIE REAGENTUS Reagentas A: Fermentų reagentas Kodas: 981361 7 x 40 ml Kodas: 981769 8 x 16 ml Reagentas B: Substratas Kodas: 981361 7 x 10 ml Kodas: 981769 8 x 4 ml

Koncentracijos Reagentas A: Fermentų reagentas Tris-buferis, pH 7.15 137.5 mmol/l L-alaninas 700 mmol/l LDH > 1650 U/l NaN3 < 0.1% Reagentas B: Substratas 2-oksoglutaratas 82,5 mmol/l NADH 1,0 mmol/l NaN3 < 0.1 % Pastaba: Skystas piridoksal-5’-fosfatas nėra įtrauktas į rinkinį. Preparatą galima užsakyti atskirai, jo kodo numeris - 981839.

Atsargumo priemonės Tik in vitro diagnostiniam naudojimui. Laikykitės įprastų atsargumo priemonių, būtinų dirbant su laboratoriniais reagentais. Reagentų sudėtyje yra natrio azido, kaip konservanto. Negalima ryti. Venkite patekimo ant odos ir gleivinės.

Paruošimas Kodas: 981361, 981769 1 reagento metodas (be P-5´-P): Supilkite B reagento turini i A reagento buteliuką. Uždarykite buteliuką ir sumaišykite. Sumaišytą reagentą saugokite nuo šviesos! 3 reagentų metodas (su P-5´-P): Reagentai paruošti naudojimui. Pastaba: Prieš dėdami reagento buteliukus ar indus į Konelab analizatorių, įsitikinkite, kad buteliuko kaklelyje arba reagento paviršiuje nėra burbuliukų.

Saugojimas ir stabilumas Jei laikomi apsaugoti nuo šviesos, reagentai uždarytuose buteliukuose yra pastovūs prie 2...8 °C iki ant etiketės užrašytos galiojimo datos. Apie analizatoriuje patalpintų reagentų stabilumą skaitykite Pastabose apie taikymą.

MĖGINIŲ SURINKIMAS

Mėginio rūšis Galima naudoti skaidrų serumą arba heparino plazmą.

Atsargumo priemonės Su žmonių mėginiais reikia dirbti ir juos šalinti taip, lyg jie būtų potencialiai užkrečiami.



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Laikymas (3) Mėginį galima laikyti 3 dienas esant 20...25 °C, 7 dienas esant 4...8 °C arba 2 mėnesius esant -20 °C temperatūrai.

TYRIMO TVARKA Apie automatizuotą procedūrą naudojant Konelab analizatorių skaitykite Vartotojo instrukcijoje ir Pastabose apie taikymą. Jei prietaisas naudojamas procedūroms, kurių nepatvirtino Thermo Fisher Scientific Oy, jų sėkmės garantuoti negalima ir tokį taikymą turi įvertinti vartotojas.

Skiriamos medžiagos Prieš tai aprašyti reagentai.

Būtinos, bet neskiriamos medžiagos Piridoksal-5’-fosfatas (kodas 981839) 3 reagentų metodui. Toliau aprašytos kontrolinės medžiagos.

Kalibravimas Atsakas (A) paverčiamas rezultato vienetais, pritaikant skaičiavimo koeficientą. Taip pat kaip kalibratorių galima naudoti eCal (981830) pagal instrukcijas pateiktas eCal (981830) pakuotės informaciniame lapelyje.

Kokybės valdymas Naudokite kokybės valdymo mėginius bent kartą per dieną ir po kiekvieno kalibravimo, taip pat kiekvieną kartą, kai naudojate naują reagento buteliuką. Kontrolinės medžiagos: Nortrol, kodas 981043 Abtrol, kodas 981044 Kontrolės intervalai ir apribojimai turi būti nustatyti pagal individualios laboratorijos reikalavimus. Kokybės valdymo mėginių rezultatai turi patekti į iš anksto laboratorijos nustatytas ribas.

REZULTATŲ APSKAIČIAVIMAS Konelab analizatorius automatiškai apskaičiuoja rezultatus taip: Aktyvumas išreikštas U/I = dA/min x koeficientas TV x 1000 Teorinis koeficientas = - ⎯⎯⎯⎯⎯- 6.3 x SV x P kai: TV = Bendras reakcijos tūris ml SV= Mėginio tūris ml 6.3= NADH ekstinkcijos koeficientas prie 340 nm P= Kiuvetės trajektorijos ilgis = 1 Konversijos koeficientas µkat/l = (U/l)/60 Jei eCal (981830) naudojamas kaip kalibratorius, Konelab analizatorius automatiškai apskaičiuoja rezultatus, naudodamas kalibravimo kreivę.

PROCEDŪROS RIBOTUMAI Interferencija Kriterijus: Pradinių verčių atstatymas ± 10 % ribose. 1 reagento metodas: Konjuguotasis bilirubinas: Interferencijos nepastebėta iki 420 μmol/l (246 mg/dl). Nekonjuguotasis bilirubinas: Interferencijos nepastebėta iki 600 μmol/l (35.1 mg/dl). Hemolizatas: Iki 10 g/l hemoglobino interferencijos nepastebėta. Lipemija: Iki 2 g/l Intralipid® (Fresenius Kabi AB prekinis ženklas) interferencijos nepastebėta. Koreliacija tarp drumstimosi ir trigliceridu koncentracijos labai nedidele. 3 reagentų metodas: Konjuguotasis bilirubinas: Interferencijos nepastebėta iki 420 μmol/l (24.6 mg/dl). Nekonjuguotasis bilirubinas: Interferencijos nepastebėta iki 600 μmol/l (35.1 mg/dl). Hemolizatas: Interferencijos nepastebėta iki 8 g/l hemoglobino. Lipemija: Iki 1 g/l Intralipid® interferencijos nepastebėta. Daugiau apie interferencijos medžiagas skaitykite 4 nuorodoje.

NUMATOMOS VERTĖS (2) Vyrai: < 45 U/l (< 0.74 μkat/l) prie 37 °C Moterys: < 34 U/l (< 0.56 μkat/l) prie 37 °C Šios vertės yra tik orientacinės. Rekomenduojama, kad kiekviena laboratorija patikrintų šį diapazoną arba išvestų atskaitos intervalą savo aptarnaujamiems gyventojams.

MATAVIMO SRITIS 1 reagento metodas: 4 - 300 U/l (0.07 – 5.00 μkat/l) Praplėsta matavimo sritis atskiedus antrą kartą: 4 - 1800 U/l (0.07 – 30.00 μkat/l) 3 reagentų metodas: 5 - 250 U/l (0.08 – 4.17 μkat/l) Praplėsta matavimo sritis atskiedus antrą kartą: 5 - 1500 U/l (0.08 – 25.00 μkat/l)

EKSPLOATACIJOS CHARAKTERISTIKOS Aptikimo ribos 1 reagento metodas: 2 U/l (0,03 μkat/l) 3 reagentų metodas: 2 U/l (0.03 μkat/l) Aptikimo riba žymi žemiausią išmatuojamą koncentraciją / aktyvumą, kurį galima atskirti nuo nulio. Ji apskaičiuojama kaip nulinio mėginio koncentracija + 3 SD (serijoje, n=24).

Netikslumas (rezultatų matavimo vienetas U/l) 1 reagento metodas: Vidurkis

33 U/l Mean 90 U/l

Mean 108 U/l

SD CV% SD CV% SD CV% Serijoje 0.6 1.8 0.6 0.6 0.9 0.8 Kas seriją 0.5 1.5 0.9 1.0 1.0 0.9 Iš viso 1.0 3.0 1.8 2.0 2.7 2.4

3 reagentų metodas: Vidurkis

31 U/l Mean 89 U/l

Mean 109 U/l

SD CV% SD CV% SD CV% Serijoje 0.6 1.8 0.6 0.7 1.0 0.9 Kas seriją 0.2 0.7 0.8 0.9 0.8 0.8 Iš viso 0.8 2.6 1.5 1.7 2.2 2.0

Tikslumo studija atlikta pagal gaires, išdėstytas NCCLS dokumente EP5-A, 20 dienu naudojant Konelab 60, matavimu skaičius buvo n = 80.

Metodų palyginimas 1 reagento metodas: Palyginimu studija atlikta pagal NCCLS dokumento EP9-A gaires ir, kaip etaloną naudojant Konelab 2 reagentų metodą. Linijinė regresija (rezultatų vienetas U/I): y = 0.75 x + 2.8 r = 0.988 n = 60 Mėginių koncentracijos buvo tarp 7 ir 190 U/I. 3 reagentų metodas: Palyginimu studija atlikta pagal NCCLS dokumento EP9-A gaires ir, kaip etaloną naudojant Konelab 2 reagentų metodą. Linijinė regresija (rezultatų vienetas U/I): y = 1.00 x + 0.2 r = 1.00 n = 65 Mėginių koncentracijos buvo tarp 10 ir 155 U/I. Individualiose laboratorijose gauti rezultatai gali skirtis nuo pateiktųjų duomenų.

BIBLIOGRAFIJA 1. Burtis, CA and Ashwood, E R (ed.), Tietz Fundamentals of Clinical Chemistry, 5th





GAMINTOJAS Thermo Fisher Scientific Oy Clinical Diagnostics Finland Ratastie 2, P.O. Box 100, FI-01621 Vantaa Tel. +358 9 329 100, faksas +358 9 3291 0300 www.thermo.com/konelab

Peržiūros data (metai-mėnuo-diena) 2007-08-14

Pokyčiai nuo ankstesnės versijos Atnaujintas kompanijos pavadinimas.

LV

Konelab™/ T Sērijas ALT/GPT (IFCC) 981361 7 x 50 ml 981769 8 x 20 ml

ŠIS IEPAKOJUMA PIELIKUMS IR PIELIETOJAMS ĀRPUS ASV. JEBKURA ATSAUKSME UZ KONELAB SISTĒMĀM ATTIECAS ARĪ UZ T SĒRIJĀM.

PAREDZĒTĀ LIETOŠANA Lai in vitro kvantitatīvi noteiktu aspartāta alanīna aminotransferāzi (L-Aspartātu L-Alanīna : 2-oksoglutarāta aminotransferāzes (AST), EC 2.6.1.2) aktivitāti cilvēka serumā vai plazmā ar Konelab analizatoriem. Visi testa rezultāti ir jāņem vērā, vadoties pēc klīniskā konteksta.

KOPSAVILKUMS (1) Alanīna aminotransferāze (ALAT/ALT), agrāk saukta glutamiskā piruvīta transamināze glutamātpiruvāttransamināze (GPT), un asparāta aminotransferāze (ASAT/AST), agrāk saukta glutamiskā oksalacētiskā transamināze glutamātoksalacetāttransferāze (GOT), pieder pie enzīmu grupas, aminotransferāzēm jeb transamināzēm, kuras katalizē atgriezenisko alfa-keto skābju transformāciju aminoskābēs, pārvietojot aminogrupas. Gan AST, gan ALT normāli atrodami cilvēka plazmā, žultī, muguras smadzeņu šķidrumā un siekalās, taču šīs vielas nav atrodamas urīnā, ja vien nepastāv nieru bojājums. Vīrusa hepatīta un citos aknu slimību, kas saistītas ar aknu nekrozi, gadījumos seruma AST un ALT līmenis ir paaugstināts pat pirms slimības klīnisko pazīmju un simptomu parādīšanās. Abu enzīmu līmenis var sasniegt vērtības, kas ir 100 reižu lielākas par augstāko pieļaujamo robežu, tomēr visbiežāk sastopams 20 līdz 50 reižu lielāks paaugstinājums Kaut arī gan AST, gan ALT serumu līmenis tiek palielināts ikreiz, kad procesi ietekmē aknu šūnu integritāti, ALT ir daudz specifiskāks aknu enzīms. Palielināti AST līmeņi var tikt paaugstināti saistībā ar sirds vai skeleta muskuļu bojājumiem, kā arī aknu parenhīmas bojājuma gadījumā. Seruma ALT aktivitātes palielināšanās ir reti novērojama apstākļos, kas nav saistīti ar parenhimālu aknu slimību.

PROCEDŪRAS PRINCIPS ALT katalizē aminogrupas pārvietošanos no alanīna uz oksoglutarātu ar glutamāta un pyruvate piruvāta izveidošanos. Pyruvate Piruvāts tiek reducēts uz lactate laktātu ar lactate laktāta dehidrogenāzi (LDH). ALT L- alanīna + 2-oksoglutarāts <⎯⎯> L-glutamāts + Pyruvate Piruvāts LDH Pyruvate Piruvāts + NADH + H+ <⎯⎯> D-Lactate Laktāts + NAD+ Šajā pašā reakcijā līdzvērtīgs NADH daudzums tiek oksidēts par NAD. Seko attiecīga absorbētspējas samazināšanās pie 340 nm, un tā ir tieši proporcionāla ALT aktivitātei serumā. IFCC atsauces metode iekļauj P-5´-P pie 0.1 mmol/l, kas ir apstiprināta kā pietiekoša, lai aktivizētu ALT 5 minūšu laikā (2).

REAĢENTU INFORMĀCIJA Reaģents A: Enzīma reaģents Kods: 981361 7 x 40 ml Kods: 981769 8 x 16 ml Reaģents B: Substrāts Kods: 981361 7 x 10 ml Kods: 981769 8 x 4 ml



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Koncentrācijas Reaģents A: Enzīma reaģents Tris buferšķīdums, pH 7.15 137.5 mmol/l L-Alanine Alanīns 700 mmol/l LDH > 1650 U/l NaN3 < 0.1 % Reaģents B: Substrāts 2-oksoglutarāts 82.5 mmol/l NADH 1.0 mmol/l NaN3 < 0.1 % Piezīme: Šķidrais pirīdoksāl-5’-fosfāts komplektā nav iekļauts. To iespējams pasūtīt atsevišķi at koda numuru 981839.

Piesardzības pasākumi Tikai in vitro diagnostikas vajadzībām. Nodrošiniet parastos piesardzības pasākumus, kas jāievēro attiecībā uz rīkošanos ar visiem laboratorijas reaģentiem. Reaģents satur nātrija azādu kā konservantu. Nenorīt. Izvairieties no kontakta ar ādu un gļotādu.

Sagatavošana Kods: 981361, 981769 1-Viena reaģenta metode (bez P-5´-P): Pievienojiet reaģenta B saturu reaģenta A pudelei. Aizkorķējiet un sajauciet. Aizveriet mēģeni un sajauciet. Monoreaģents ir jāsargā no gaismas iedarbības! 3-Divu reaģentu metode (ar P-5´-P): Reaģenti ir gatavi lietošanai. Piezīme: Ievietojot reaģenta pudelītes vai traukus Konelab analizatorā, pārliecinieties, ka pudelītes kakliņā vai uz reaģenta virsmas nav burbuļi.

Uzglabāšana un Stabilitāte Reaģenti neatvērtās pudelītēs ir stabili 2…8 °C temperatūrā līdz uzglabāšanas laika, kas uzdrukāts uz etiķetes, beigām, ja tie tiek pasargāti no gaismas iedarbības. Vadieties pēc sava Konelab analizatora pielietojuma piezīmēm, lai iegūtu informāciju par ievietoto reaģentu stabilitāti.

PARAUGU IEGŪŠANA

Parauga tips Var izmantot nehemolizētu serumu vai heparīna plazmu.

Piesardzības pasākumi Ar no cilvēkiem iegūtajiem paraugiem ir jārīkojas un no tiem jāatbrīvojas tā, it kā tie būtu iespējami infekciozi.

Uzglabāšana (3) Paraugu var uzglabāt 3 dienas 20…25 °C temperatūrā, 7 dienas 4…8 °C temperatūrā vai 2 dienas –20 °C temperatūrā tums.

PĀRBAUDES PROCEDŪRA Vadieties pēc Uzziņas Rokasgrāmatas un Pielietojuma Piezīmēm, lai iegūtu informāciju par sava Konelab analizatora automātisko procedūru. Jebkāds pielietojuums, kuru nav apstiprinājis Thermo Fisher Scientific Oy, nevar sniegt garantētu rezultātu, tādēļ tas jāizvērtē pašam lietotājam.

Piegādātie materiāli Iepriekš aprakstītie reaģenti.

Nepieciešamie, taču nepiegādātie materiāli Piridoksāl –5’-fosfāts (kods 981839) 3-reağentu metodei. Kontroles, kas aprakstītas tālāk.

Kalibrēšana Atbilde (dA/min) tiek pārveidota rezultāta vienībās, izmantojot aprēķinu faktoru. Jeb izmantojiet eCal (981830) kā kalibrētāju saskaņā ar instrukcijām, kas ievietotas eCal (981830) iepakojumā.

Kvalitātes Kontrole Izmantojiet kvalitātes kontroles paraugus vismaz rezi dienā un ikreiz, kad tiek izmantota jauna reaģenta pudele. Pieejamās kontroles: Nortrol, kods 981043 Abtrol, kods 981044 Kontroles intervāli un ierobžojumi ir jāpiemēro individuālajām laboratorijas prasībām. Kvalitātes kontroles paraugu rezultātiem ir jāsakrīt ar laboratorijas iepriekš noteiktajiem limitiem.

REZULTĀTU APRĒĶINĀŠANA Konelab analizators sekojoši automātiski aprēķina rezultātus: Aktivitāte U/l = dA/min x Faktors TV x 1000 Teorētiskais faktors = ⎯⎯⎯⎯⎯⎯- 6.3 x SV x P kur: TV= Kopējais reakcijas daudzums ml SV= Parauga daudzums ml 6.3= NADH zuduma koeficents pie 340 nm P= Kuvetes ceļš = 1 Konversijas faktors µkat/l = (U/l)/60 Ja kā kalibrētājs tiek izmantots eCal (981830), Konelab analizators rezultātus aprēķina automātiski, izmantojot kalibrēšanas līkni.

PROCEDŪRAS IEROBEŽOJUMI

Interference Kritērijs: Atjaunošana ± 10% robežās no sākotnējām vārtībām. 1-reaģenta metode: Saistīts bilirubīns: Līdz 420 μmol/l (24.6 mg/dl) interference nav novērota. Nesaistīts bilirubīns: Līdz 600 μmol/l (35.1 mg/dl) interference nav novērota. Hemolizēts: Līdz 10 g/l hemoglobīna interference nav novērota. Lipēmija: Līdz 2 g/l Intralipid® (Fresenius Kabi AB preču zīme) interference nav novērota. Pastāv vāja korelācija starp duļķainumu un triglicerīdu koncentrāciju. 3-reaģenta metode: Saistīts bilirubūns: Līdz 420 µmol/l (24.6 mg/dl) interference nav novērota. Nesaistīts bilirubīns: Līdz 600 µmol/l (35.1 mg/dl) interference nav novērota. Hemolizēts: Līdz 8 g/l hemoglobīna interference nav novērota. Lipēmija: Līdz 2 g/l Intralipid® interference nav novērota. Lai iegūtu informāciju par citām interferējošām vielām, lūdzu vadieties pēc uzziņas materiāla 4.

PAREDZAMĀS VĒRTĪBAS (2) Vīriešiem: < 45 U/l (< 0.74 µkat/l) pie 37 °C Sievietēm: < 34 U/l (< 0.56 µkat/l) pie 37 °C Pēdiņās ietvertās vērtības ir jāuztver tikai kā uzziņas vērtībās. Ieteicams, lai katra laboratorija verificētu šo diapazonu vai izstrādātu uzziņas intervālu populācijai, kam tā darbojas.

MĒRĪŠANAS DIAPAZONS 1-reaģenta metode: 4 - 300 U/l (0.07 – 5.00 μkat/l) Paplašināts mērīšanas diapazons pēc sekundāras atšķaidīšanas: 4 – 1800 U/l (0.07 – 30.00 μkat/l) 3-reaģenta metode: 5 - 250 U/l (0.08 – 4.17 μkat/l) Paplašināts mērīšanas diapazons pēc sekundāras atšķaidīšanas: 5 – 1500 U/l (0.08 – 25.00 μkat/l)

VEIKTSPĒJAS RAKSTUROJUMS

Uztveršanas robeža 1-reaģenta metode: 2 U/l (0.03 µkat/l) 3-reaģenta metode: 2 U/l (0.03 μkat/l) Uztveršanas robeža ir zemkākā izmērāmā koncentrācija/aktivitāte, ko var atšķirt no nulles. Tā tiek aprēķināta kā nulles parauga koncentrācija + 3 SD (darbības laikā, n=24).

Neprecizitāte (rezultāta vienība U/l) 1-reaģenta metode: Vidējais

33 U/l Vidējais 90 U/l

Vidējais 108 U/l

SD CV% SD CV% SD CV% Darbības laikā 0.6 1.8 0.6 0.6 0.9 0.8 Ar dienas starpību 0.5 1.5 0.9 1.0 1.0 0.9 Kopā 1.0 3.0 1.8 2.0 2.7 2.4

3-reağenta metode: Vidējais

31 U/l Vidējais 89 U/l

Vidējais 109 U/l

SD CV% SD CV% SD CV% Darbības laikā 0.6 1.8 0.6 0.7 1.0 0.9 Ar dienas starpību 0.2 0.7 0.8 0.9 0.8 0.8 Kopā 0.8 2.6 1.5 1.7 2.2 2.0

Precizitātes izpēte tika veikta saskaņā ar noteikumiem NCCLS Dokumentā EP5-A, izmantojot Konelab 60, divdesmit dienu laikā, kur mērījumu skaitlis bija n = 80.

Metodes salīdzināšana 1-reaģenta metode: Salīdzināšanas izpēte tikai veikta, kā direktīvu izmantojot NCCLS dokumentu EP9-A un citu komerciāli pieejamu divu reaģentu metodi kā atsauci. Lineārā regresija (rezultāta vienība U/l): y = 0.75 x + 2.8 r = 0.988 n = 60 Paraugu koncentrācija bija starp 7 un 190 U/l. 3-reaģenta metode: Salīdzināšanas izpēte tikai veikta, kā direktīvu izmantojot NCCLS dokumentu EP9-A un Konelab divu-reağentu metodi kā atsauci. Lineārā regresija (rezultāta vienība U/l): y = 1.00 x + 0.2 r = 1.00 n = 65 Paraugu koncentrācija bija starp 10 un 155 U/l. Rezultāti, kas iegūti atšķirīgās laboratorijās, var atšķirties no dotajiem veiktspējas datiem.

BIBLIOGRĀFIJA 1. Burtis, CA and Ashwood, E R (ed.), Tietz Fundamentals of Clinical Chemistry, 5th





RAŽOTĀJS Thermo Fisher Scientific Oy Clinical Diagnostics Finland Ratastie 2, P.O. Ratastie 2, P.O. Box 100, FI-01621 Vantaa Tel. +358 9 329 100, Fax +358 9 3291 0300 www.thermo.com/konelab

Atjaunošanas datums (yyyy-mm-dd) 2007-08-14

Izmaiņas no iepriekšējās versijas Atjaunināts uzņēmuma nosaukums.



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Konelab™ / Seria T ALT/GPT (IFCC) 981361 7 x 50 ml 981769 8 x 20 ml

NINIEJSZA ULOTKA OPAKOWANIA PRZEZNACZONA JEST DO STOSOWANIA POZA GRANICAMI USA. WSZELKIE ODNIESIENIA DO SYSTEMÓW KONELAB ODNOSZĄ SIĘ RÓWNIEŻ DO SERII T.

ZASTOSOWANIE Do ilościowego oznaczania in vitro aktywności aminotransferazy alaninowej (L-alanina: 2- oksoglutaran aminotransferazy (ALT), EC 2.6.1.2) w ludzkiej surowicy lub osoczu na analizatorach Konelab. Interpretacji wyników należy dokonać w kontekście klinicznym.

OMÓWIENIE (1) Aminotransferaza alaninowa (ALT) (uprzednio określana jako transaminaza glutaminowo-pirogronianowa) oraz amino-transferaza asparaginianowa (AspAT) (uprzednio określana jako transaminaza glutaminowo-szczawiooctanowa) należą do grupy enzymów – aminotransferaz lub transaminaz – katalizujących odwracalną reakcję przemiany α-ketokwasów w aminokwasy poprzez przeniesienie grup aminowych. AspAT i ALT w warunkach fizjologicznych występują w ludzkim osoczu, żółci, płynie mózgowo-rdzeniowym i ślinie. Oba związki nie występują w moczu, chyba że dojdzie do upośledzenia czynności nerek. U chorych z wirusowym zapaleniem wątroby i innymi schorzeniami wątroby przebiegającymi z martwicą komórek wątrobowych zwiększenie poziomów AspAT i ALT w surowicy następuje przed objawami przedmiotowymi oraz podmiotowymi. Poziomy obu enzymów mogą osiągać wartości 100-krotnie przekraczające górną granicę zakresu referencyjnego. Niemniej jednak najczęściej występuje 20 - 50-krotny wzrost poziomu aktywności. Wprawdzie w przypadku uszkodzenia komórek wątrobowych dochodzi do zwiększenia poziomu AspAT i ALT w surowicy, jednak ALT wykazuje większą swoistość w odniesieniu do schorzeń wątroby. Wzrost poziomu AspAT może nastąpić na skutek uszkodzenia mięśnia sercowego, mięśni szkieletowych lub miąższu wątroby. Wzrost aktywności ALT w surowicy rzadko towarzyszy schorzeniom innym niż uszkodzenie miąższu wątroby.

ZASADA METODY ALT katalizuje przeniesienie grupy aminowej od alaniny do oksoglutaranu z utworzeniem glutaminianu i pirogronianu. Pirogronian jest redukowany do mleczanu przez dehydrogenazę mleczanową (LDH). ALT L-alania + 2- oksoglutaran <⎯⎯> L-glutamian + pirogronian LDH pirogronian + NADH + H+ <⎯⎯> D-mleczanu + NAD+

W tej reakcji równoważna ilość NADH jest utleniana do NAD. Spadek absorbancji przy 340nm jest wprost proporcjonalny do aktywności ALT w surowicy. Metoda odniesienia IFCC zawiera -5’-fosforan (P−5´-P) w ilości 0.1 mmol/l, który został dodany, aby osiągnąć aktywność apo ALT w 5 minut (2).

INFORMACJA O ODCZYNNIKU Odczynnik A: Odczynnik enzymatyczny Numer: 981361 7 x 40 ml Numer: 981769 8 x 16 ml Odczynnik B: Substarat Numer: 981361 7 x 10 ml Numer: 981769 8 x 4 ml

Stężenia Odczynnik A: Odczynnik enzymatyczny Bufor Tris, pH 7.15 137.5 mmol/l L-alanina 700 mmol/l LDH > 1650 U/l NaN3 < 0.1 % Odczynnik B: Substarat 2-oksyglutaran 82.5 mmol/l NADH 1.0 mmol/l NaN3 < 0.1 % Uwaga: Płynny -5’-fosforan pirydoksalu nie należy do zestawu. Może być zamówiony oddzielnie. Numer katalogowy: 981839.

Środki ostrożności Wyłącznie do diagnostyki in vitro. Zachowaj środki ostrożności wymagane dla odczynników laboratoryjnych. Odczynnik zawiera azydek sodu jako konserwant. Nie połykać. Unikać kontaktu ze skórą i błonami śluzowymi.

Przygotowanie Numer: 981361, 981769 Metoda jedno-odczynnikowa (bez P-5´-P): Dodaj zawartość odczynnika B do butelki z odczynnikiem A. Zamknij i zamieszaj. Odczynnik powinien być chroniony przed światłem! Metoda trój-odczynnikowa (z P-5´-P): Odczynniki są gotowe do użycia. Uwaga: Sprawdź przed wstawieniem naczynia z odczynnikiem do analizatora Konelab, czy w fiolce i na powierzchni odczynnika nie znajdują się pęcherzyki powietrza.

Przechowywanie i stabilność Zamknięte odczynniki są trwałe w temperaturze 2…8 °C aż do daty ważności podanej na opakowaniu. Chronić przed światłem. Trwałość odczynników w analizatorze podana jest w aplikacji analizatora Konelab.

POBRANIE I PRZYGOTOWANIE PRÓBKI

Rodzaj próbki Jasna surowica lub osocze pobrane na heparynę.

Środki ostrożności Ludzkie próbki powinny być traktowane jako potencjalnie zakaźne.

Przechowywanie (3) Próbki mogą być przechowywane przez 3 dni w 20…25 °C, przez 7 dni w 4…8 °C lub przez 2 miesiące w –20 °C.

POMIAR Należy odnieść się do instrukcji i aplikacji dla zautomatyzowanej procedury na analizatorze Konelab. Aplikacja, która nie została autoryzowana przez Thermo Fisher Scientific Oy nie może być gwarancją i musi zostać oceniona przez użytkownika.

Dostarczone materiały Odczynniki wymienione powyżej.

Materiały wymagane, nie należące do zestawu 5’-fosforan pirydoksalu (code 981839) do metody trój-odczynnikowej. Kontrole wskazane poniżej.

Kalibracja Wynik otrzymujemy w jednostkach mnożąc odczyt (dA/min) przez współczynnik kalkulacyjny. Odczynnik eCal (981830) można również wykorzystać jako związek odniesienia – sposób postępowania opisano w instrukcji umieszczonej na wkładce informacyjnej do opakowania odczynnika eCal (981830).

Kontrola jakości Zalecane jest wykonanie kontroli jakości co najmniej raz dziennie, po każdej kalibracji i zawsze przy użyciu nowej butelki odczynnika. Dostępne kontrole: Nortrol, numer 981043 Abtrol, numer 981044 Przedziały i limity kontroli muszą być dostosowane do indywidualnych wymagań laboratorium. Wyniki kontroli jakości powinny odpowiadać wartościom ustanowionym wstępnie przez laboratorium.

OBLICZANIE WYNIKÓW Wyniki obliczane są automatycznie przez analizator Konelab, używając wzoru: Aktywność w U/l = dA/min x faktor TV x 1000 Równoważnik miareczkowania = - ⎯⎯⎯⎯⎯ 6.3 x SV x P gdzie: TV = Objętość mieszaniny reakcyjnej w ml SV = Objętość próbki w ml 6.3 = Współczynnik ekstynkcji NADH przy 340 nm P = Światło kuwety = 1 Współczynnik przeliczeniowy μkat/l = (U/l)/60 Jeżeli odczynnik eCal (981830) jest stosowany jako związek odniesienia, uzyskane wyniki są automatycznie obliczane w analizatorze Konelab w oparciu o krzywą kalibracyjną.

OGRANICZENIA PROCEDURY

Interferencje Kryterium: Zakres±10% wartości początkowych. Metoda jedno-odczynnikowa: Bilirubina związana: Nie ma wpływu aż do 420 μmol/l (24.6 mg/dl). Bilirubina wolna: Nie ma wpływu aż do 600 μmol/l (35.1 mg/dl). Hemoliza: Nie ma wpływu aż do 10 g/l hemoglobiny. Lipemia: Nie ma wpływu aż do 2 g/l Intralipid® (znak firmowy Fresenius Kabi AB). Istnieje słaba korelacja pomiędzy stopniem zmętnienia a stężeniem triglicerydów Metoda trój-odczynnikowa: Bilirubina związana: Nie ma wpływu aż do 420 μmol/l (24.6 mg/dl). Bilirubina wolna: Nie ma wpływu aż do 600 μmol/l (35.1 mg/dl). Hemoliza: Nie ma wpływu aż do 8 g/l hemoglobiny. Lipemia: Nie ma wpływu aż do 2g/l Intralipid®. Dla innych interferujących substancji, odnieś się do pozycji 4.

WARTOŚCI OCZEKIWANE (2) Mężczyźni: < 45 U/l (< 0.74 μkat/l) w 37 °C Kobiety: < 34 U/l (< 0.56 μkat/l) w 37 °C Podane wartości powinny służyć tylko jako wytyczne. Zaleca się, aby każde laboratorium zweryfikowało ten zakres, lub wprowadziło zmiany dla danej populacji.

ZAKRES POMIARU Metoda jedno-odczynnikowa: 4 - 300 U/l (0.07 – 5.00 μkat/l) Rozszerzony zakres pomiaru po rozcieńczeniu: 4 – 1800 U/l (0.07 – 30.00 μkat/l) Metoda trój-odczynnikowa: 5 - 250 U/l (0.08 – 4.17 μkat/l) Rozszerzony zakres pomiaru po rozcieńczeniu: 5 – 1500 U/l (0.08 – 25.00 μkat/l)

CHARAKTERYSTYKA PRACY Granica wykrywalności Metoda jedno-odczynnikowa: 2 U/l (0.03 μkat/l) Metoda trój-odczynnikowa: 2 U/l (0.03 μkat/l) Granica wykrywalności to najniższe wymierne stężenie/aktywność, które może zostać odróżnione od zera. Obliczane jest jako stężenie próbki zerowej + 3 SD (wewnątrz serii, n =24).

Nieprecyzyjność (wyniki w jednostkach U/l) Metoda jedno-odczynnikowa: Średnia

33 U/l Średnia 90 U/l

Średnia 108 U/l

SD CV% SD CV% SD CV% Wewnątrz oznaczenia 0.6 1.8 0.6 0.6 0.9 0.8 Pomiędzy oznaczeniami 0.5 1.5 0.9 1.0 1.0 0.9 Całkowita 1.0 3.0 1.8 2.0 2.7 2.4

Metoda trój-odczynnikowa: Średnia

31 U/l Średnia 89 U/l

Średnia 109 U/l

SD CV% SD CV% SD CV% Wewnątrz oznaczenia 0.6 1.8 0.6 0.7 1.0 0.9 Pomiędzy oznaczeniami 0.2 0.7 0.8 0.9 0.8 0.8 Całkowita 0.8 2.6 1.5 1.7 2.2 2.0


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Precyzja została wykonana zgodnie z zaleceniami NCCLS dokument EP5-A używając Konelab 60 przez 20 dni z ilością pomiarów n = 80.

Metoda porównawcza Metoda jedno-odczynnikowa: Porównanie zostało wykonane zgodnie z zaleceniami NCCLS dokument EP9-A jako wytyczne i Konelab metody dwu-odczynnikowej jako odniesienia. Regresja liniowa (wyniki w jednostkach U/l): y = 0.75 x + 2.8 r = 0.988 n = 60 Stężenia próbek znajdowały się między 7 i 190 U/l. Metoda trój-odczynnikowa: Porównanie zostało wykonane zgodnie z zaleceniami NCCLS dokument EP9-A jako wytyczne i Konelab metody dwu-odczynnikowej jako odniesienia. Regresja liniowa (wyniki w jednostkach U/l): y = 1.00 x + 0.2 r = 1.00 n = 65 Stężenia próbek znajdowały się między 10 i 155 U/l. Rezultaty w indywidualnych laboratoriach mogą różnić się dla podanych precyzji oraz danych dla metod porównawczych.

PIŚMIENNICTWO 1. Burtis, CA and Ashwood, E R (ed.), Tietz Fundamentals of Clinical Chemistry, 5th





PRODUCENT Thermo Fisher Scientific Oy Clinical Diagnostics Finland Ratastie 2, P.O. Box 100, FI-01621 Vantaa, Finland Tel. +358 9 329 100, Fax +358 9 3291 0300 www.thermo.com/konelab

Ostatnia zmiana (yyyy-mm-dd) 2007-08-14

Zmiany w stosunku do poprzedniej wersji Zaktualizowano nazwę firmy.

PT

Konelab™ / Série T ALT/GPT (IFCC) 981361 7 x 50 ml 981769 8 x 20 ml

ESTE FOLHETO INFORMATIVO É APLICÁVEL PARA USO FORA DOS E.U.A. QUALQUER REFERÊNCIA AOS SISTEMAS KONELAB TAMBÉM SE REFERE À SÉRIE T.

USO PRETENDIDO Para a determinação quantitativa in vitro da actividade da alanina aminotransferase (L-Alanina: 2-Oxoglutarato Aminotransferase (ALT), EC 2.6.1.2) no soro ou plasma humano, nos analisadores Konelab. Todos os resultados dos testes têm de ser interpretados no contexto clínico.

SUMÁRIO (1) A alanina aminotransferase (ALAT/ALT), anteriormente designada como transamínase glutâmico pirúvica (GPT) e a aspartato aminotransferase (ASAT/AST), anteriormente designada como transamínase glutâmico oxalacética (GOT) pertencem a um grupo de enzimas, as aminotransferases ou transaminases, que catalizam a transformação reversível de ácidos α-ceto em aminoácidos por intermédio da transferência de aminogrupos. A AST e a ALT estão normalmente presentes no plasma humano, na bílis, no fluido cérebro-espinal e na saliva, mas não se encontram na urina a menos que ocorra uma lesão renal. Na hepatite viral e noutras formas de doenças hepáticas associadas à necrose hepática, o nível de AST e de ALT no soro já é elevado mesmo antes dos sinais e sintomas clínicos da doença surgirem. Os níveis das duas enzimas podem alcançar valores tão elevados quanto 100 vezes o limite superior de referência, apesar de ser mais frequente encontrar níveis 20 a 50 vezes mais elevados. Apesar dos níveis séricos da AST e da ALT se tornarem elevados sempre que determinados processos afectam a integridade das células hepáticas, a ALT é a enzima mais específica do fígado. Podem ocorrer níveis mais elevados de AST derivados de lesões no músculo cardíaco ou nos músculos interósseos ou de um parênquima hepático. A elevação sérica da actividade da ALT raramente é observada em outras condições que não sejam doenças hepáticas parenquimais.

PRINCÍPIO DO PROCEDIMENTO A ALT cataliza a transferência de amino grupos da alanina para o oxoglutarato com a formação de glutamato e de piruvato. O piruvato é reduzido a lactato pela enzima lactato dehidrogenase (LDH). ALT L-Alanina + 2-Oxoglutarato <⎯⎯> L-Glutamato + Piruvato LDH Piruvato + NADH + H+ <⎯⎯> D-Lactato + NAD+

Nessa mesma reacção uma quantidade equivalente de NADH é oxidada para NAD. A redução daí resultante na absorvência a 340 nm é seguida e é directamente proporcional à actividade da ALT no soro. O método de referência IFCC inclui piridoxal –5’-fosfato (P-5´-P) a um nível de 0,1 mmol/l, o qual tem sido considerado suficiente para activar a apoproteína ALT em 5 minutos (2).

INFORMAÇÕES DOS REAGENTES Reagente A: Reagente da enzima Código: 981361 7 x 40 ml Código: 981769 8 x 16 ml Reagente B: Substrato Código: 981361 7 x 10 ml Código: 981769 8 x 4 ml

Concentrações Reagente A: Reagente da enzima Tris tampão, pH 7.15 137.5 mmol/l L-Alanina 700 mmol/l LDH > 1650 U/l NaN3 < 0.1 % Reagente B: Substrato 2-oxoglutarato 82.5 mmol/l NADH 1.0 mmol/l NaN3 < 0.1 % Nota: O piridoxal-5’-fosfato líquido não está incluído no kit. Pode ser encomendado em separado através do código 981839.

Precauções Só para uso diagnóstico in vitro. Adopte as precauções habitualmente requeridas para o manuseamento dos reagentes de laboratório. Os reagentes contêm azida de sódio como conservante. Não ingira. Evite o contacto com a pele e com as membranas mucosas.

Preparação Código: 981361, 981769 Sistema de um reagente (sem P-5´-P): Adicione o conteúdo do Reagente B ao frasco do Reagente A. Feche o frasco e agite. O monoreagente deve ser protegido da luz! Sistema de três reagentes (com P-5´-P): Os reagentes estão prontos a usar. Nota: Certifique-se de que não há nenhuma bolha no gargalo do frasco ou na superfície do reagente quando inserir o frasco ou a ampola do reagente no analisador Konelab.

Armazenamento e Estabilidade Os reagentes que se encontram em frascos fechados permanecem estáveis até à data indicada no rótulo, desde que mantidos a 2...8 °C e protegidos da luz. Consulte as Notas de aplicação do analisador Konelab para obter mais informações sobre a estabilidade dos reagentes quando inseridos no analisador.

COLHEITA DA AMOSTRA

Tipo de amostra Pode utilizar-se soro claro ou plasma de heparina.

Precauções As amostras humanas devem ser manuseadas e eliminadas como se fossem potencialmente infecciosas.

Armazenamento (3) A amostra pode ser armazenada durante 3 dias a 20...25 °C, durante 7 dias a 4...8 °C ou durante 2 dias a -20 °C.

PROCEDIMENTO Consulte o Manual de referência e as Notas de aplicação para obter mais informações sobre o procedimento automático do analisador Konelab. Qualquer aplicação não validada pela Thermo Fisher Scientific Oy, não pode ter o desempenho garantido e, por isso, tem de ser avaliada pelo utilizador.

Materiais fornecidos Reagentes conforme descrito acima.

Materiais necessários mas não incluídos Piridoxal-5’-fosfato (código 981839) para o método de três reagentes. Controlos conforme indicado abaixo.

Calibragem A resposta dA/min é convertida para unidades de resultado através de um factor de cálculo. Ou utilize o eCal (981830) como calibrador de acordo com as instruções fornecidas no folheto da embalagem do eCal (981830).

Controlo de qualidade Utilize amostras de controlo de qualidade pelo menos uma vez por dia e sempre que usar um novo frasco de reagente. Controlos disponíveis: Nortrol, código 981043 Abtrol, código 981044 Os intervalos e limites do Controlo devem ser adaptados aos requisitos individuais de cada laboratório. Os resultados das amostras de controlo de qualidade devem ficar dentro dos limites predefinidos pelo laboratório.

CÁLCULO DE RESULTADOS Os resultados são automaticamente calculados pelo analisador Konelab da seguinte forma: Actividade em U/l = dA/min x Factor TV x 1000 Factor teórico = - ⎯⎯⎯⎯⎯- 6.3 x SV x P

sendo que: TV = Volume total da reacção em ml SV = Volume da amostra em ml 6.3 = Coeficiente de extinção do NADH a 340 nm P = Comprimento do percurso da cuvette = 1 Factor de conversão μkat/l = (U/l)/60 Se utilizar o eCal (981830) como calibrador, os resultados são calculados automaticamente pelo analisador Konelab através de uma curva de calibragem.

LIMITAÇÕES DO PROCEDIMENTO Interferência Critério: Recuperação dentro de ± 10% dos valores iniciais. Sistema de um reagente: Bilirrubina conjugada: Nenhuma interferência detectada até 420 μmol/l (24.6 mg/dl). Bilirrubina não conjugada: Nenhuma interferência detectada até 600 μmol/l (35.1 mg/dl). Hemolizado: Nenhuma interferência detectada até 10 g/l de hemoglobina.



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Lipemia: Nenhuma interferência detectada até 2 g/l de Intralipid® (marca comercial da Fresenius Kabi AB). Há uma correlação fraca entre a turvação e a concentração de triglicéridos. Sistema de três reagentes: Bilirrubina conjugada: Nenhuma interferência detectada até 420 μmol/l (24.6 mg/dl). Bilirrubina não conjugada: Nenhuma interferência detectada até 600 μmol/l (35.1 mg/dl). Hemolizado: Nenhuma interferência detectada até 8 g/l de hemoglobina. Lipemia: Nenhuma interferência detectada até 2 g/l de Intralipid®. Para obter informações sobre outras substâncias interferentes, consulte a referência 4.

VALORES DE REFERÊNCIA (2) Sexo masculino: < 45 U/l (< 0.74 μkat/l) a 37 °C Sexo feminino: < 34 U/l (< 0.56 μkat/l) a 37 °C Os valores indicados devem servir apenas como uma referência. Recomendamos que cada laboratório verifique este intervalo ou obtenha um intervalo de referência para a população que serve.

INTERVALO DE MEDIÇÃO Sistema de um reagente: 4 - 300 U/l (0.07 – 5.00 μkat/l) Intervalo de medição alargado após a segunda diluição: 4 – 1800 U/l (0.07 – 30.00 μkat/l) Sistema de três reagentes: 5 - 250 U/l (0.08 – 4.17 μkat/l) Intervalo de medição alargado após a segunda diluição: 5 – 1500 U/l (0.08 – 25.00 μkat/l)

CARACTERÍSTICAS DE DESEMPENHO

Limite de detecção Sistema de um reagente: 2 U/l (0.03 μkat/l) Sistema de três reagentes: 2 U/l (0.03 μkat/l) O limite de detecção representa a concentração/actividade mensurável mais baixa que pode ser distinguida de zero. É calculada como a concentração da amostra de zero + 3 DS (ensaio, n=24).

Imprecisão (unidade do resultado U/l) Sistema de um reagente: Média

33 U/l Média 90 U/l

Média 108 U/l

DS CV% DS CV% DS CV% Ensaio 0.6 1.8 0.6 0.6 0.9 0.8 Vários dias 0.5 1.5 0.9 1.0 1.0 0.9 Total 1.0 3.0 1.8 2.0 2.7 2.4

Sistema de três reagentes: Média

31 U/l Média 89 U/l

Média 109 U/l

DS CV% DS CV% DS CV% Ensaio 0.6 1.8 0.6 0.7 1.0 0.9 Vários dias 0.2 0.7 0.8 0.9 0.8 0.8 Total 0.8 2.6 1.5 1.7 2.2 2.0

Efectuou-se um estudo de precisão de acordo com as directrizes do Documento EP5-A da NCCLS mediante a utilização de um analisador Konelab 60 durante 20 dias, com um número de medições equivalente a n = 80.

Comparação de métodos Sistema de um reagente: Realizou-se um estudo comparativo de acordo com o Documento EP9-A da NCCLS, tendo-se utilizado como método de referência o método de dois reagentes da Konelab. Regressão linear (unidade do resultado U/l): y = 0.75 x + 2.8 r = 0.988 n = 60 Concentrações das amostras entre 7 e 190 U/l. Sistema de três reagentes: Realizou-se um estudo comparativo de acordo com as indicações contidas no Documento EP9-A da NCCLS, tendo-se utilizado como método de referência o método de dois reagentes da Konelab. Regressão linear (unidade do resultado U/l): y = 1.00 x + 0.2 r = 1.00 n = 65 Concentrações das amostras entre 10 e 155 U/l. Os resultados obtidos em laboratórios individuais podem diferir dos dados de comparação de métodos e de imprecisão fornecidos.






FABRICANTE Thermo Fisher Scientific Oy Clinical Diagnostics Finland Ratastie 2, P.O. Box 100, FI-01621 Vantaa Tel. +358 9 329 100, Fax +358 9 3291 0300 www.thermo.com/konelab

Data de revisão (aaaa-mm-dd) 2007-08-14

Alterações à versão anterior: Nome da empresa actualizado.

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Konelab™ / T Series ALT/GPT (IFCC) 981361 7 x 50 ml 981769 8 x 20 ml

ACEST PROSPECT INTRODUS ÎN PACHET ESTE APLICABIL PENTRU FOLOSIREA ÎN AFARA S.U.A. ORICE REFERINŢĂ LA KONELAB SYSTEMS SE REFERĂ ŞI LA SERIA T.

UTILIZAREA RECOMANDATĂ Pentru determinarea cantitativă in vitro a activităţii alanin aminotransferazei (L-Alanină: 2-oxoglutarat aminotransferază (ALT), EC 2.6.1.2) din serul sau plasma umane, cu dispozitivele de analiză Konelab. Toate rezultatele analizei trebuie interpretate în context clinic.

REZUMAT(1) Alanin aminotransferaza (ALAT/ALT), denumită anterior şi transaminază glutamil-piruvică (GPT), şi aspartat aminotransferaza (ASAT/AST), denumită anterior şi transaminază glutamil-oxaloacetică (GOT), aparţin unui grup de enzime, aminotransferazele sau transaminazele, care catalizează transformarea reversibilă a α-cetoacizilor în aminoacizi prin transferarea grupărilor amino. Atât AST cât şi ALT se găsesc în mod normal în plasma umană, în bilă, în lichidul cefalorahidian şi în salivă, dar nu se găsesc în urină decât în caz de leziuni renale. În hepatita virală şi în alte boli hepatice asociate cu necroza hepatică, nivelurile serice ale AST şi ALT cresc înainte de apariţia semnelor clinice şi a simptomelor bolii. Nivelurile ambelor enzime pot atinge valori de până la 100 de ori mai mari faţă de limita superioară de referinţă, deşi cel mai frecvent se întâlnesc creşteri de 20-50 de ori. Deşi nivelurile serice ale ambelor enzime AST şi ALT cresc atunci când procesele afectează integritatea celulei hepatice, ALT este enzima cea mai specifică pentru ficat. Nivelurile crescute de AST apar ca urmare a leziunilor cardiace sau ale muşchilor scheletici, precum şi ale parenchimului hepatic. Creşterea activităţii serice a ALT se constată rareori în alte condiţii decât în boala parenchimului hepatic.

PRINCIPIUL DETERMINĂRII ALT catalizează transferul grupării amino de la alanină la oxoglutarat cu formarea glutamatului şi a piruvatului. Piruvatul este redus la lactat de către lactat-dehidrogenază(LDH). ALT L-Alanină + 2-Oxoglutarat <⎯⎯> L-Glutamat + Piruvat LDH Piruvat + NADH + H+ <⎯⎯> D-Lactat + NAD+ În aceeaşi reacţie se oxidează o cantitate echivalentă de NADH la NAD. Descreşterea care rezultă în absorbanţa la 340 nm e urmată şi e direct proporţională cu activitatea ALT din ser. Metoda de referinţă IFCC include piridoxal –5’-fosfat (P-5´-P) cu un nivel de 0.1 mmol/l, ce s-a demonstrat a fi suficient ca să activeze apo ALT în 5 minute (2).

INFORMAŢII PRIVIND REACTIVII Reactiv A: Reactiv enzimă Cod: 981361 7 x 40 ml Cod: 981769 8 x 16 ml Reactiv B: Substrat Cod: 981361 7 x 10 ml Cod: 981769 8 x 4 ml

Concentraţii Reactiv A: Reactiv enzimă Tampon Tris, pH 7.15 137.5 mmol/l L-Alanină 700 mmol/l LDH > 1650 U/l NaN3 < 0.1 % Reactiv B: Substrat 2-oxoglutarat 82.5 mmol/l NADH 1.0 mmol/l NaN3 < 0.1 % Notă: Piridoxal-5’-fosfatul lichid nu este inclus în trusă. Poate fi comandat separat cu numărul de cod 981839.

Precauţii Numai pentru diagnostic in vitro. Adoptaţi măsurile normale de precauţie necesare pentru mânuirea reactivilor de laborator. Reactivul conţine azidă de sodiu drept conservant. Nu înghiţiţi. Evitaţi contactul cu pielea şi membranele mucoasei.

Pregătirea Cod: 981361, 981769 Metoda cu 1 reactiv (fără P-5´-P): Adăugaţi conţinutul reactivului B în flaconul cu reactiv A. Închideţi flaconul şi omogenizaţi. Monoreactivul trebuie ferit de lumină! Metoda cu 3 reactivi (cu P-5´-P): Reactivii sunt gata de folosire. Notă: Verificaţi să nu existe bule în gâtul flaconului sau la suprafaţa reactivului când introduceţi fiolele sau recipientele cu reactiv în analizorul Konelab.

Păstrarea şi stabilitatea Reactivii din fiolele nedeschise sunt stabili la 2…8 °C până la data de expirare tipărită pe etichetă, dacă sunt feriţi de lumină. Consultaţi Notele de Aplicare ale dispozitivului dv. de analiză Konelab pentru stabilitatea reactivilor în cazul respectiv.

RECOLTAREA PROBELOR

Tipul de probe Pot fi folosite ser sau plasmă heparinizată limpezi.

Precauţii Probele umane trebuie mânuite şi aruncate ca şi cum ar fi potenţial infecţioase.

Păstrarea (3) Proba poate fi păstrată timp de 3 zile la 20…25 °C, timp de 7 zile la 4…8 °C sau timp de 2 zile la –20 °C.


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PROCEDURA DE ANALIZARE Consultaţi Manualul de Referinţă şi Notele de Aplicare pentru procedura automată cu dispozitivul dv. de analiză Konelab. Toate aplicaţiile care nu au fost validate de Thermo Fisher Scientific Oy nu garantează performanţa şi, prin urmare, trebuie evaluate de către utilizator.

Materiale furnizate Reactivii mai sus-menţionaţi.

Materiale necesare, dar care nu sunt furnizate Piridoxal-5’-fosfat (cod 981839) pentru metoda cu 3 reactivi. Martorii indicaţi mai jos.

Calibrarea Răspunsul (dA/min) e convertit în unităţile rezultatului, cu ajutorul unui factor de calcul. Sau folosiţi eCal (981830) drept calibrator, conform instrucţiunilor din prospectul din pachetul cu eCal (981830).

Controlul de calitate Folosiţi probe pentru controlul de calitate cel puţin o dată pe zi şi de fiecare dată când se foloseşte un flacon nou de reactiv. Martori disponibili: Nortrol, cod 981043 Abtrol, cod 981044 Intervalele şi limitele Martorului trebuie adaptate la necesităţile individuale ale laboratorului. Rezultatele probelor pentru controlul de calitate trebuie să se încadreze în limitele stabilite de laborator.

CALCULAREA REZULTATELOR Rezultatele sunt calculate automat de dispozitivul de analiză Konelab după cum urmează: Activitatea în U/l = dA/min x Factor TV x 1000 Factor teoretic = - ⎯⎯⎯⎯⎯- 6.3 x SV x P unde: TV= Volumul total de reacţie în ml SV = Volumul probei în ml 6.3 = Coeficientul de extincţie al NADH la 340 nm P = Lungimea cuvei = 1 Factor de conversie μkat/l = (U/l)/60 Dacă se foloseşte eCal (981830) drept calibrator, rezultatele sunt calculate automat de dispozitivul de analiză Konelab folosind o curbă de calibrare.

LIMITELE PROCEDURII Interferenţe Criteriu: Recuperare în interval ± 10% din valorile iniţiale. Metoda cu 1 reactiv: Bilirubină conjugată: Nu s-au găsit interferenţe până la 420 μmol/l (24.6 mg/dl). Bilirubină neconjugată: Nu s-au găsit interferenţe până la 600 μmol/l (35.1 mg/dl). Hemolizat: Nu s-au găsit interferenţe până la 10 g/l de hemoglobină. Lipemie: Nu s-au găsit interferenţe până la 2 g/l de Intralipid® (marcă comercială a Fresenius Kabi AB). Există o corelaţie scăzută între turbiditate şi concentraţia trigliceridelor. Metoda cu 3 reactivi: Bilirubină conjugată: Nu s-au găsit interferenţe până la 420 μmol/l (24.6 mg/dl). Bilirubină neconjugată: Nu s-au găsit interferenţe până la 600 μmol/l (35.1 mg/dl). Hemolizat: Nu s-au găsit interferenţe până la 8 g/l de hemoglobină. Lipemie: Nu s-au găsit interferenţe până la 2 g/l de Intralipid®. Pentru alte substanţe care pot interfera, vă rugăm să consultaţi referinţa 4.

VALORI ESTIMATE (2) Bărbaţi: < 45 U/l (< 0.74 μkat/l) la 37 °C Femei: < 34 U/l (< 0.56 μkat/l) la 37 °C Valorile menţionate au doar caracter indicativ. Se recomandă ca fiecare laborator să verifice acest interval sau să elaboreze un interval de referinţă pentru populaţia pe care o deserveşte.

INTERVAL DE MĂSURARE Metoda cu 1 reactiv: 4 - 300 U/l (0.07 – 5.00 μkat/l) Interval extins de măsurare după a doua diluţie: 4 – 1800 U/l (0.07 – 30.00 μkat/l) Metoda cu 3 reactivi: 5 - 250 U/l (0.08 – 4.17 μkat/l) Interval extins de măsurare după a doua diluţie: 5 – 1500 U/l (0.08 – 25.00 μkat/l)

CARACTERISTICILE PERFORMANŢEI Limită de detecţie Metoda cu 1 reactiv: 2 U/l (0.03 μkat/l) Metoda cu 3 reactivi: 2 U/l (0.03 μkat/l) Limita de detecţie reprezintă cea mai mică concentraţie/activitate măsurabilă care poate fi distinsă de zero. Este calculată ca fiind concentraţia probei zero + 3 DS (în cadrul aceleiaşi analize, n=24).

Imprecizie (unitatea rezultatului U/l) Metoda cu 1 reactiv: Medie

33 U/l Medie 90 U/l

Medie 108 U/l

DS CV% DS CV% DS CV% În cadrul aceleiaşi analize 0.6 1.8 0.6 0.6 0.9 0.8 Între analize 0.5 1.5 0.9 1.0 1.0 0.9 Total 1.0 3.0 1.8 2.0 2.7 2.4

Metoda cu 3 reactivi: Medie

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Medie 109 U/l

DS CV% DS CV% DS CV% În cadrul aceleiaşi analize 0.6 1.8 0.6 0.7 1.0 0.9 Între analize 0.2 0.7 0.8 0.9 0.8 0.8 Total 0.8 2.6 1.5 1.7 2.2 2.0

Un studiu asupra preciziei a fost efectuat conform liniilor directoare din Documentul EP5-A NCCLS, folosind Konelab 60 într-un interval de 20 zile, cu numărul măsurătorilor n = 80.

Comparaţia metodelor Metoda cu 1 reactiv: A fost efectuat un studiu comparativ folosindu-se Documentul EP9-A NCCLS ca ghid şi o metodă Konelab cu doi reactivi ca referinţă. Regresia liniară (unitatea rezultatului U/l): y = 0.75 x + 2.8 r = 0.988 n = 60 Concentraţiile probelor au fost între 7 şi 190 U/l. Metoda cu 3 reactivi: A fost efectuat un studiu comparativ folosindu-se Documentul EP9-A NCCLS ca ghid şi o metodă Konelab cu doi reactivi ca referinţă. Regresia liniară (unitatea rezultatului U/l): y = 1.00 x + 0.2 r = 1.00 n = 65 Concentraţiile probelor au fost între 10 şi 155 U/l. Rezultatele obţinute în laboratoarele individuale pot diferi de datele referitoare la performanţă menţionate.

BIBLIOGRAFIE 1. Burtis, CA and Ashwood, E R (ed.), Tietz Fundamentals of Clinical Chemistry, 5th





PRODUCĂTOR Thermo Fisher Scientific Oy Clinical Diagnostics Finland Ratastie 2, P.O. Box 100, FI-01621 Vantaa Tel. +358 9 329 100, Fax +358 9 3291 0300 www.thermo.com/konelab

Data reviziei (aaaa-ll-zz) 2007-12-07

Modificări faţă de versiunea precedentă

SK

Konelab™/ Séria T ALT/GPT (IFCC) 981361 7 x 50 ml 981769 8 x 20 ml

TENTO PRÍBALOVÝ LETÁK JE URČENÝ NA POUŽITIE MIMO USA. AKÁKOĽVEK ZMIENKA SYSTÉMOV KONELAB SA VZŤAHUJE AJ NA SÉRIU T.

POUŽITIE Na kvantitatívne in vitro stanovenie alanín aminotransferázy (L-alanín: 2-oxoglutarát aminotransferázy (ALT), EC 2.6.1.2) v ľudskom sére, alebo plazme v Konelab analyzátoroch. Všetky výsledky testov musia byť interpretované s ohľadom na klinický kontext.

ZHRNUTIE (1) Alanín aminotransferáza (ALAT/ALT), predtým glutamát pyruvát transamináza (GPT) a aspartát aminotransferáza (ASAT/AST), predtým glutamát oxaloacelát transamináza (GOT) patria do skupiny enzýmov, aminotransferázy alebo transaminázy, ktoré katalyzujú reverzibilnú transformáciu α-keto kyselín na aminokyseliny presunom aminoskupín. Oba enzýmy AST aj ALT sa normálne nachádzajú v ľudskej plazme, žlči, mozgovomiešnom moku a slinách, ale nenachádzajú sa v moči, ak nie sú poškodené obličky. Pri vírusovej hepatitíde a iných formách ochorenia pečene, ktoré sú asociované s hepatálnou nekrózou, sa zvyšujú hladiny AST a ALT ešte pred nástupom klinických príznakov ochorenia. Hladiny oboch enzýmov môžu dosiahnuť hodnoty až 100 krát vyššie ako horná referenčná hranica, hoci najčastejšie je zvýšenie 20 až 50 násobné Hoci sérové hladiny AST aj ALT sa zvyšujú akonáhle patologický proces naruší integritu pečeňovej bunky, ALT je špecifickejší pečeňový enzým. Zvýšenie hladiny AST sa objavuje v súvislosti s poškodením srdca a kostrového svalu, ako aj pečeňového parenchýmu. Elevácia aktivity ALT v sére sa vyskytuje zriedkavo v iných prípadoch ako je ochorenie pečeňového parenchýmu.

PRINCÍP METÓDY ALT katalyzuje prenos aminoskupiny z alanínu na oxoglutarát pričom vzniká glutamát a pyruvát. Pyruvát sa redukuje na laktát pomocou malát dehydrogenázy (LDH). ALT L-alanín + 2-oxoglutarát <⎯⎯> L-glutamát + pyruvát LDH Pyruvát + NADH + H+ <⎯⎯> D-Laktát + NAD+ V tejto reakcii sa ekvivalentné množstvo NADH oxiduje na NAD. Nasleduje zníženie absorbancie pri 340 nm, ktoré je priamo úmerné aktivite ALT v sére. IFCC referenčná metóda obsahuje pyridoxal-5'-fosfát (P-5'-P) v hladine 0.1 mmol/l, ktorá sa ukázala ako dostatočná na aktiváciu apo ALT za 5 minút (2).

INFORMÁCIE O ČINIDLÁCH Činidlo A: Enzýmové činidlo Kód: 981361 7 x 40 ml Kód: 981769 8 x 16 ml Činidlo B: Substrát Kód: 981361 7 x 10 ml Kód: 981769 8 x 4 ml



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Koncentrácie Činidlo A: Enzýmové činidlo tris pufer, pH 7.15 137.5 mmol/l L-Alanín 700 mmol/l LDH > 1650 U/l NaN3 < 0.1 % Činidlo B: Substrát 2-oxoglutarát 82.5 mmol/l NADH 1.0 mmol/l NaN3 < 0.1 % Poznámka: Tekutý pyridoxal-5’-fosfát nie je súčasťou sady. Možno ho objednať samostatne pod kódovým číslom 981839.

Varovanie Len na in vitro diagnostiku. Dodržujte normálne bezpečnostné opatrenia, ktoré sú nevyhnutné pri manipulácii so všetkými laboratórnymi činidlami. Činidlo obsahuje azid sodný ako konzervačnú látku. Neprehĺtajte/nepožívajte. Zabráňte styku spokožkou a sliznicami.

Príprava Kód: 981361, 981769 Metóda s jedným činidlom (bez P-5'-P): Pridajte obsah činidla B do nádoby s činidlom A. Zatvorte nádobku a premiešajte. Monočinidlo musí byť chránené pred svetlom! Metóda s tromi činidlami (s P-5'-P): Činidlá sú pripravené na použitie. Poznámka: Pred vložením nádobiek do analyzéra Konelab skontrolujte, či sa v hrdle nádobky, alebo na povrchu činidla nenachádzajú bubliny.

Uskladnenie a trvanlivosť Činidlá v neotvorených nádobách sú stabilné pri 2...8 °C až do exspiračnej doby vytlačenej na štítku ak sú chránené pred svetlom. Informácie o stabilite činidiel nájdete v Používateľskej príručke vášho analyzéra Konelab.

ODBER VZORIEK

Typ vzorky Môžete používať sérum, alebo heparinizovanú plazmu.

Varovanie Manipulujte a znehodnocujte ľudské vzorky ako potenciálne infekčný materiál.

Uskladnenie (3) Vzorku môžete skladovať 3 dni pri teplote 20...25 °C, 7 dní pri 4...8 °C a 2 dní pri –20 °C.

TESTOVACÍ POSTUP Automatický postup použitia analyzátora Konelab nájdete v manuáli a Používateľskej príručke. Meranie postupom, ktorý nie je validizovaný firmou Thermo Fisher Scientific Oy nie je garantované a musí byť vyhodnotené užívateľom.

Poskytnuté materiály Činidlá popísané vyššie.

Materiály potrebné, ale neposkytované Pyridoxal –5’-fosfát (kód 981839) pre metódu s tromi činidlami. Kontroly uvedené nižšie.

Kalibrácia Výsledok (dA/min) sa konvertuje na výsledné jednotky pomocou prepočtového koeficientu. Môžete použiť aj eCal (981830) ako kalibrátor, v súlade s inštrukciami v príbalovom letáku eCal (981830).

Kontrola kvality Používajte vzorky na kontrolu kvality aspoň raz denne a vždy, keď použijete novú fľašku s činidlom. Dostupné kontroly: Nortrol, kód 981043 Abtrol, kód 981044 Intervaly a rozmedzia kontrolných hodnôt sa musia prispôsobiť individuálnym požiadavkám laboratória. Výsledné hodnoty kontrolných vzoriek by mali byť vrozmedzí referenčných hodnôt laboratória.

VÝPOČET VÝSLEDKOV Výsledky sa vypočítajú automaticky Konelab analyzátorom: Aktivita v U/l = dA/min x faktor TV x 1000 teoretický faktor = − ⎯⎯⎯⎯⎯- 6.3 x SV x P kde: TV = Celkový reagujúci objem v ml SV = Objem vzorky v ml 6.3 = Extinkčný koeficient NADH pri 340 nm P = Veľkosť kyvety = 1 Konverzný pomer μkat/l = (U/l)/60 Ak sa eCal (981830) používa ako kalibrátor, výsledky sa automaticky vypočítajú Konelab analyzátorom pomocou kalibračnej krivky.

OBMEDZENIA METODIKY

Interferencie Kritérium: Návrat k východziemu stavu ±10% počiatočných hodnôt. Metóda s jedným činidlom: Konjugovaný bilirubín: Bez interferencie do 420 μmol/l (24,6 mg/dl). Nekonjugovaný bilirubín: Bez interferencie do 600 μmol/l (35,1 mg/dl). Hemolyzát: Bez interferencie do 10 g/l hemoglobínu. Lipémia: Bez interferencie do 2 g/l Intralipid® (registrovaná značka Fresenius Kabi AB). Korelácia medzi turbiditou a koncentráciou triglyceridov je nízka. Metóda s tromi činidlami: Konjugovaný bilirubín: Bez interferencie do 420 μmol/l (24.6 mg/dl). Nekonjugovaný bilirubín: Bez interferencie do 600 μmol/l (35.1 mg/dl). Hemolyzát: Bez interferencie do 8 g/l hemoglobínu. Lipémia: Bez interferencie do 2 g/l Intralipid®.

Ďalšie interferujúce substancie nájdete v Bibliografii č 4.

OČAKÁVANÉ HODNOTY (2) Muž: < 45 U/l (< 0.74 μkat/l) pri 37 °C Žena: < 34 U/l (< 0.56 μkat/l) pri 37 °C Tieto hodnoty slúžia len ako smernica. Odporúča sa, aby si každé laboratórium prispôsobilo rozsah referenčných hodnôt na konkrétnu populáciu.

MERACÍ ROZSAH Metóda s jedným činidlom: 4 - 300 U/l (0.07 – 5.00 μkat/l) Rozšírený merací rozsah po sekundárnom rozriedení: 4 – 1800 U/l (0.07 – 30.00 μkat/l) Metóda s tromi činidlami: 5 - 250 U/l (0.08 – 4.17 μkat/l) Rozšírený merací rozsah po sekundárnom rozriedení: 5 – 1500 U/l (0.08 – 25.00 μkat/l)

PREVÁDZKOVÉ CHARAKTERISTIKY

Hranica citlivosti detekcie Metóda s jedným činidlom: 2 U/l (0.03 μkat/l) Metóda s tromi činidlami: 2 U/l (0.03 μkat/l) Hranica citlivosti detekcie reprezentuje najnižšiu merateľnú koncentráciu/aktivitu, ktorá sa dá odlíšiť od nuly. Vypočíta sa ako koncentrácia nulovej vzorky + 3 SD (počas procesu, n=24).

Nepresnosť (výsledok v jednotkách U/I) Metóda s jedným činidlom: Priemer

33 U/l Priemer 90 U/l

Priemer 108 U/l

SD CV% SD CV% SD CV% Počas procesu 0.6 1.8 0.6 0.6 0.9 0.8 Medzi jednotlivými dňami 0.5 1.5 0.9 1.0 1.0 0.9 Celkovo 1.0 3.0 1.8 2.0 2.7 2.4

Metóda s tromi činidlami: Priemer

31 U/l Priemer 89 U/l

Priemer 109 U/l

SD CV% SD CV% SD CV% Počas procesu 0.6 1.8 0.6 0.7 1.0 0.9 Medzi jednotlivými dňami

0.2 0.7 0.8 0.9 0.8 0.8

Celkovo 0.8 2.6 1.5 1.7 2.2 2.0 Vykonala sa štúdia presnosti v súlade so smernicami NCCLS dokumentu EP5-A s prístrojom Konelab 60 počas 20 dní, s počtom meraní n= 80.

Porovnanie metódy Metóda s jedným činidlom: Vykonala sa porovnávacia štúdia s použitím NCCLS dokumentu EP9-A ako smernice a Konelab metódou s dvoma činidlami ako referencie. Lineárna regresia (výsledok v jednotkách U/I): y = 0.75 x + 2.8 r = 0.988 n = 60 Koncentrácie vzoriek sa pohybovali medzi 7 a 190 U/I. Metóda s tromi činidlami: Vykonala sa porovnávacia štúdia s použitím NCCLS dokumentu EP9-A ako smernice a Konelab metódy s dvoma činidlami ako referencie. Lineárna regresia (výsledok v jednotkách U/I): y = 1.00 x + 0.2 r = 1.00 n = 65 Koncentrácie vzoriek sa pohybovali medzi 10 a 155 U/I. Výsledky získané v jednotlivých laboratóriách sa môžu líšiť od daných prevádzkových dát.






VÝROBCA Thermo Fisher Scientific Oy Clinical Diagnostics Finland Ratastie 2, P.O. Box 100, FI-01621 Vantaa Tel. +358 9 329 100, Fax +358 9 3291 0300 www.thermo.com/konelab

Dátum revízie (RRRR-MM-DD) 2007-08-14

Zmeny od predchádzajúcej verzie Meno spoločnosti aktualizované.



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Konelab™ / T Serien ALT/GPT (IFCC) 981361 7 x 50 ml 981769 8 x 20 ml

DENNA BIPACKSEDEL GÄLLER FÖR ANVÄNDNING UTOM USA. ALLA HÄNVISNINGAR TILL KONELAB SYSTEM AVSER ÄVEN T SERIEN.

AVSEDD ANVÄNDNING För kvantitativ bestämning in vitro av alaninaminotransferas (L-alanin: 2-oxoglutarat-aminotransferas (ALT), EC 2.6.1.2) aktivitet i humant serum eller plasma på Konelab-analysatorer. Alla testresultat måste tolkas med hänsyn till det kliniska sammanhanget.

SAMMANFATTNING (1) Alaninaminotransferas (ALAT/ALT), som tidigare kallades glutaminsyra-pyrodruvsyratransaminas (GPT) och aspartataminotransferas (ASAT/AST), som tidigare kallades glutaminsyra-oxalättiksyratransaminas (GOT) tillhör en grupp enzymer, aminotransferas eller transaminas, som katalyserar reversibel transformation av α-ketosyror till aminosyror, genom överföring av aminogrupper. Både AST och ALT finns normalt i humant plasma, galla, cerebrospinalvätska och saliv, men finns inte i urin, utom om det finns en njurlesion. Vid virushepatit och andra former av leversjukdom som förknippas med levernekros är nivån serum-AST och serum-ALT förhöjd även innan kliniska tecken och symtom på sjukdomen förekommer. Nivåerna för båda enzymerna kan nå värden så höga som 100 gånger den övre referensgränsen, trots att 20 till 50 gångers förhöjning är det oftast förekommande. Trots att serumnivåer för både AST och ALT blir förhöjda när processer påverkar levercellernas funktionsduglighet är ALT det mer leverspecifika enzymet. Förhöjd AST-nivå kan inträffa i anslutning till skador på hjärta eller skelettmuskulatur samt leverparenkym. Serumförhöjning av ALT aktivitet uppträder sällan vid andra tillstånd än leverparenkym-sjukdom.

TESTPRINCIP ALT katalyserar överföring av aminogruppen från alanin till oxoglutarat, vilket bildar glutamat och pyruvat. Pyruvat reduceras till laktat via laktatdehydrogenas (LDH). ALT L-alanin + 2-oxoglutarat <⎯⎯> L-glutamat + pyruvat LDH Pyruvat + NADH + H+ <⎯⎯> D-laktat + NAD+

I denna samma reaktion oxideras en likvärdig mängd NADH till NAD. Den påföljande minskningen i absorbans vid 340 nm följer och är direkt proportionell mot aktiviteten av ALT i serum. IFCC-referensmetoden inkluderar pyridoxal-5’-fosfat (P-5´-P) vid en nivå av 0,1 mmol/l, vilket har visat sig vara tillräckligt för att aktivera apo-ALT på 5 minuter (2).

REAGENSINNEHÅLL Reagens A: Enzymreagens Artikelnr.: 981361 7 x 40 ml Artikelnr.: 981769 8 x 16 ml Reagens B: Substrat Artikelnr.: 981361 7 x 10 ml Artikelnr.: 981769 8 x 4 ml

Koncentrationer Reagens A: Enzymreagens Tris-buffert, pH 7.15 137.5 mmol/l L-alanin 700 mmol/l LDH > 1650 U/l NaN3 < 0.1 % Reagens B: Substrat 2-oxoglutarat 82.5 mmol/l NADH 1.0 mmol/l NaN3 < 0.1 % Obs: Flytande pyridoxal-5’-fosfat ingår inte i kitet. Det kan beställas separat under artikelnummer 981839.

Försiktighetsåtgärder Endast för in vitro-diagnostik. Vidta normala försiktighetsåtgärder som vid all hantering av laboratoriereagenser. Reagenserna innehåller natriumazid som konserveringsmedel. Får ej sväljas. Undvik kontakt med hud och slemhinnor.

Beredning Artikelnr.: 981361, 981769 Ett-reagens-system (utan P-5´-P): Tillsätt innehållet i Reagens B i flaskan med Reagens A. Tillslut flaskan och blanda. Monoreagenset måste skyddas mot ljus! Tre-reagens-system (med P-5´-P): Reagenserna är klara för användning. Obs: Kontrollera att det ej finns bubblor i flaskhalsen eller på ytan av reagens då behållarna placeras i Konelab-analysatorn.

Förvaring och hållbarhet Reagens i oöppnade flaskor är hållbar vid 2…8 °C till på etiketten angivet utgångsdatum, om det skyddas mot ljus. Se Application Notes för aktuell Konelab-analysator för information om reagensernas hållbarhet i instrumentet.

PROVTAGNING

Provmaterial Klart serum eller heparinplasma kan användas.

Försiktighetsåtgärder Humana prover ska behandlas som potentiellt smittförande, både vid hantering och kassering.

Förvaring (3) Provet kan förvaras i 3 dagar vid 20…25 °C, i 7 dagar vid 4…8 °C eller i 2 dagar vid –20 °C.

TESTUTFÖRANDE Se Handhavandemanualen och Application Notes för automatiskt utförande på aktuell Konelab-analysator. Varje applikation som ej har validerats av Thermo Fisher Scientific Oy, kan ej garanteras vad gäller prestanda och måste därför utvärderas av användaren.

Bifogat material Reagenser enligt ovan.

Erforderligt material som ej medföljer Pyridoxal-5’-fosfat (artikelnr. 981839) för tre-reagenssystem. Kontroller enligt nedan.

Kalibrering Svaret dA/min omvandlas till resultatenheter med en omräkningsfaktor. Använd alternativt eCal (981830) som en kalibrator, enligt anvisningarna som ges på bipacksedeln för eCal (981830).

Kvalitetskontroll Använd kvalitetskontrollprover minst en gång om dagen och varje gång en ny reagensflaska används. Tillgängliga kontroller: Nortrol, artikelnr. 981043 Abtrol, artikelnr. 981044 Kontrollintervaller och -gränser måste anpassas efter det enskilda laboratoriets krav. Resultatet från kvalitetskontrollproven bör ligga inom de av laboratoriet fastställda gränserna.

RESULTATBERÄKNING Resultaten beräknas automatiskt av Konelab-analysatorn enligt följande: Aktivitet i U/l = dA/min x Faktor TV x 1000 Teoretisk faktor = - ⎯⎯⎯⎯⎯- 6.3 x SV x P

där: TV = Total reaktionsvolym i ml SV = Provvolym i ml 6.3 = Utplåningskoefficient för NADH vid 340 nm P = Kyvettlängd = 1 Omvandlingsfaktor μkat/l = (U/l)/60 Om eCal (981830) används som en kalibrator kommer resultaten att beräknas automatiskt av Konelab-analysatorn med hjälp av en kalibreringskurva.

BEGRÄNSNINGAR I UTFÖRANDET

Interferens Kriterium: Utbyte inom ± 10 % av initialvärdena. Ett-reagens-system: Konjugerat bilirubin: Ingen interferens har konstaterats upp till 420 μmol/l (24.6 mg/dl). Okonjugerat bilirubin: Ingen interferens har konstaterats upp till 600 μmol/l (35.1 mg/dl). Hemolysat: Ingen interferens har konstaterats upp till 10 g/l hemoglobin. Lipemi: Ingen interferens har konstaterats upp till 2 g/l av Intralipid® (varumärket tillhör Fresenius Kabi AB). Det är dålig korrelation mellan grumlighet och triglyceridkoncentration. Tre-reagens-system: Konjugerat bilirubin: Ingen interferens har konstaterats upp till 420 μmol/l (24.6 mg/dl). Okonjugerat bilirubin: Ingen interferens har konstaterats upp till 600 μmol/l (35.1 mg/dl). Hemolysat: Ingen interferens har konstaterats upp till 8 g/l hemoglobin. Lipemi: Ingen interferens har konstaterats upp till 2 g/l av Intralipid®. För andra interfererande ämnen, se referens 4.

REFERENSOMRÅDE (2) Man: < 45 U/l (< 0.74 μkat/l) vid 37 °C Kvinna: < 34 U/l (< 0.56 μkat/l) vid 37 °C Angivna värden är endast avsedda som vägledning. Vi rekommenderar att varje laboratorium verifierar detta område eller fastställer ett referensintervall för populationen som betjänas.

MÄTOMRÅDE Ett-reagens-system: 4 - 300 U/l (0.07 – 5.00 μkat/l) Utökat mätområde efter sekundär spädning: 4 – 1800 U/l (0.07 – 30.00 μkat/l) Tre-reagens-system: 5 - 250 U/l (0.08 – 4.17 μkat/l) Utökat mätområde efter sekundär spädning: 5 – 1500 U/l (0.08 – 25.00 μkat/l)

UTFÖRANDETS KARAKTERISTIKA

Detektionsgräns Ett-reagens-system: 2 U/l (0.03 μkat/l) Tre-reagens-system: 2 U/l (0.03 μkat/l) Detektionsgränsen representerar lägsta mätbara koncentration/aktivitet som kan skiljas från noll. Den beräknas som koncentrationen av nollprov + 3 SD (standardavvikelser) (inom serien, n=24).

Imprecision (resultatenhet U/l) Ett-reagenssystem: Medel

33 U/l Medel 90 U/l

Medel 108 U/l

SD CV% SD CV% SD CV% Inom serie 0.6 1.8 0.6 0.6 0.9 0.8 Mellandags 0.5 1.5 0.9 1.0 1.0 0.9 Totalt 1.0 3.0 1.8 2.0 2.7 2.4

Tre-reagensystem: Medel

31 U/l Medel 89 U/l

Medel 109 U/l

SD CV% SD CV% SD CV% Inom serie 0.6 1.8 0.6 0.7 1.0 0.9 Mellandags 0.2 0.7 0.8 0.9 0.8 0.8 Totalt 0.8 2.6 1.5 1.7 2.2 2.0

En precisionsstudie har utförts enligt anvisningarna i NCCLS Dokument EP5-A med Konelab 60 under 20 dagar. Antalet mätningar var n = 80.


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Metodjämförelse Ett-reagens-system: En jämförelsestudie har utförts enligt anvisningarna i NCCLS Dokument EP9-A med Konelab två-reagens-metod som referens. Linjär regression (resultatenhet U/l): y = 0.75 x + 2.8 r = 0.988 n = 60 Provens koncentration låg mellan 7 och 190 U/l. Tre-reagens-system: En jämförelsestudie har utförts enligt anvisningarna i NCCLS Dokument EP9-A med Konelab två-reagens-metod som referens. Linjär regression (resultatenhet U/l): y = 1.00 x + 0.2 r = 1.00 n = 65 Provens koncentration låg mellan 10 och 155 U/l. Resultaten som erhålls vid varje enskilt laboratorium kan skilja sig från angivna data för prestanda.

REFERENSER 1. Burtis, CA and Ashwood, E R (ed.), Tietz Fundamentals of Clinical Chemistry, 5th





TILLVERKARE Thermo Fisher Scientific Oy Clinical Diagnostics Finland Ratastie 2, P.O. Box 100, FI-01621 Vantaa Tel. +358 9 329 100, Fax +358 9 3291 0300 www.thermo.com/konelab

Rev. datum (åååå-mm-dd) 2007-08-14

Ändringar från tidigare utgåva: Företagsnamnet är uppdaterat.


konelab™ / t series test procedure alt/gpt (ifcc).pdf · 2013-08-23 · pyridoxal-5’-phosphate...

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