guia de practicas de uroanalisis
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Laboratorio Cliacutenico PAULINA ARROLLO PEREacuteZ
INSTITUTO SUPERIOR DANIEL ALCIDES CARRION
LABORATORIO CLINICO
GUIA DE PRACTICAS DE
UROANALISIS
2011
Laboratorio Cliacutenico PAULINA ARROLLO PEREacuteZ
PRACTICA 1
EXAMEN FISICO DE LA ORINA
PROPOacuteSITO
Por medio de la observacioacuten directa de la muestra de orina determinar el color y el
aspecto de eacutesta lo cual puede sugerir una patologiacutea del tracto urinario u otras
enfermedades que esteacuten en diferente localizacioacuten pero que sus manifestaciones
secundarias son a nivel del rintildeoacuten
MUESTRA REQUERIDA
30 mL de orina Preferible la primera de la mantildeana 10 mL de orina en muestra de
nintildeos
MATERIALES
- Frascos plaacutesticos transparente de boca ancha con capacidad de 30 mL
- Bolsa pediaacutetrica recolectora de orina
- Papel toalla
- Marcador de vidrio
- Guantes descartables
PROCEDIMIENTO
- Verificar que el frasco esteacute bien identificado y completamente tapado
- Agitar en forma circular sobre la mesa de trabajo
- Observar color y aspecto
- Anotar lo observado
FUENTES DE ERROR
- Frascos sucios
- Toma de muestra inadecuada
- Muestras medicamentosas
- Tiempo transcurrido desde la toma de la muestra hasta la observacioacuten (no mayor
de 2 horas)
FORMA DE REPORTE
Valores de referencia
COLOR Amarillo
ASPECTO Transparente limpia
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63 E PRACTICA 2
EXAMEN QUIMICO DE LA ORINA
XAMEN QUIacuteMICO DE ORINAPROPOacuteSITO
Determinar las sustancias quiacutemicas presentes en una muestra de orina asiacute como
su densidad y
pH a traveacutes de las zonas de reaccioacuten presentes en una tira reactiva
MUESTRA REQUERIDA
30 ml de orina Preferible la primera de la mantildeana 10mL de orina en muestra de
nintildeos
MATERIALES Y REACTIVOS
- Frascos plaacutesticos transparente de boca ancha con capacidad de 30 mL
- Bolsa pediaacutetrica recolectora de orina
- Tubos coacutenicos con capacidad de 15 ml
- Gradilla para tubos
- Papel toalla
- Marcador de vidrio
- Guantes descartables
- Tiras reactivas para orina
PROCEDIMIENTO
- Identificar el tubo coacutenico
- Agitar la muestra de orina en forma circular sobre la mesa de trabajo
- Verter la orina en el tubo coacutenico
- Introducir la tira reactiva en la orina
- Eliminar el exceso de orina colocando la tira sobre un papel absorbente
- Esperar el tiempo recomendado por el fabricante para su lectura
- Anotar los resultados
Los cambios de color que aparecen despueacutes de dos oacute maacutes minutos carecen de
importancia diagnoacutestica
FUENTES DE ERROR
- Muestras medicamentosas
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- Frascos y tubos mal lavados
- Tiras reactivas de mala calidad o vencidas
- Cortar las tiras reactivas
- Leer las tiras reactivas despueacutes del tiempo indicado por el fabricante
FORMA DE REPORTE
pH de 5 a 9
DENSIDAD de 1000 a 1030
LEUCOCITOS 0 a 500 Leucocitos por μl
NITRITOS Positivo oacute Negativo
PROTEIacuteNA 0 a 1000 mg por dL
GLUCOSA 0 - 1000 mg por dL
CUERPOS CETOacuteNICOS de una cruz a tres cruces
UROBILINOacuteGENO de lt1 a 12 mg por dL
BILIRRUBINA de una cruz a tres cruces
SANGREHEMOGLOBINA de 0 a 250 eritrocitos por μL
Siempre que en la tira reactiva no se observe un cambio de color se reportaraacute
como negativo
Valores de referencia
pH de 5 a 6
DENSIDAD de 1005 a 1010
LEUCOCITOS 0 Leucocitos por μl
NITRITOS Negativo
PROTEIacuteNA 0 mg por dL
GLUCOSA 0 mg por dL
CUERPOS CETOacuteNICOS Negativo
UROBILINOacuteGENO lt1 mg por dL
BILIRRUBINA Negativa
SANGRE 0 eritrocitos por μL
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DETERMINACION DE PROTEINURIA
AacuteCIDO SULFOSALICIacuteLICO
Esta teacutecnica se basa en la utilizacioacuten de aacutecido sulfosaliciacutelico cuya propiedad es
precipitar proteiacutenas en ausencia de calor Para esta prueba se usa el reactivo de
Exton en cuya composicioacuten se encuentra dicho aacutecido
Reactivo de Exton
Disolver 88g de sulfato de sodio en 600 ml de agua destilada con ayuda de calor
Enfriar Luego agregar 50 g de aacutecido sulfosaliciacutelico y diluir a 1000 ml
Procedimiento
1-Centrifugar una aliacutecuota de orina y luego utilizar el liacutequido sobrenadante
liacutempido
2- En un tubo de ensayo colocar voluacutemenes iguales del sobrenadante y del
reactivo de Exton Mezclar por inversioacuten y apreciar la turbidez
Interpretar de acuerdo a las siguientes pautas
Negativo No existe turbidez
Trazas Turbidez visible sobre fondo negro
1(+) Se observa turbidez pero no es granular
2(++) Se observa turbidez y es granular
3(+++) La turbidez es considerable y existe aglutinacioacuten
4(++++) Nubosidad densa con masas aglutinadas de gran tamantildeo
El procedimiento de Exton es maacutes sensible que el meacutetodo de las tiras reactivas
Pueden observarse falsos positivos en los tratamientos con tolbutamina penicilina
sulfamidas y despueacutes de la administracioacuten de sustancias de contraste radioloacutegico
Asimismo las orinas muy alcalinas suelen dar resultados negativos falsos
PRUEBA DEL ACIDO ACETICO Y CALOR
Se basa en la precipitacioacuten de proteiacutenas llevando el pH de la orina al valor del
punto isoeleacutectrico al agregar el aacutecido aceacutetico Tambieacuten el calor torna a las
proteiacutenas insolubles provocando su coagulacioacuten
Procedimiento
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1- Centrifugar 10 ml de orina y luego separar el sobrenadante a un tubo de
ensayo El tubo debe estar lleno en las 23 partes
2-Hervir la parte superior del tubo por 2 minutos a la llama ( El tubo debe ser
sostenido formando un aacutengulo sobre la llama y apuntando en direccioacuten opuestas al
cuerpo) Si aparece turbidez puede deberse a la presencia de proteiacutenas fosfatos
y carbonatos
3- Agregar 3 a 5 gotas de aacutecido aceacutetico al 5 o 10 y volver a hervir la parte
superior del tubo a la llama El aacutecido disolveraacute los fosfatos o carbonatos que
puede ser la causa de la turbidez Ademaacutes disminuye el pH llevaacutendolo maacutes
proacuteximo al punto isoeleacutectrico de las proteiacutenas y en consecuencia eacutestas precipitan
aumentando la turbidez
4- Los resultados seraacute dados con la misma escala del reactivo de Exton
Esta teacutecnica detecta albuacuteminas globulinas mucoproteiacutenas e incluso las proteiacutenas
de Bence Jones La hemoglobina y la mioglobina no precipitan con este meacutetodo
La tolbutamida dosis elevadas de penicilina y sustancias de contraste radioloacutegico
pueden resultados positivos falsos Orinas muy alcalinas y orinas muy diluidas
pueden dar resultados negativos falsos
DETERMINACION DE GLUCOSURIA
TECNICA DE BENEDICT
Tiene como fundamento la reduccioacuten del ioacuten cuacuteprico color azul a cuproso que da
un precipitado rojo ladrillo en presencia de glucosa en caliente y en medio alcalino
fuerte
Reactivo
Sulfato de cobre 173 g
Citrato de sodio o de potasio 173g
Cristales de carbonato de sodio 200g
O carbonato de sodio anhiacutedro 100g
Agua destilada para completar 1000ml
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Disolver el citrato y el carbonato en 700ml de agua con ayuda de calor Filtrar y
disolver con el sulfato de cobre en aprox 100ml de agua caliente y vertirlo en la
solucioacuten de citrato-carbonato revolviendo Dejar que se enfriacutee antes de diluir hasta
completar los 1000 ml con agua
Procedimiento
1-Colocar 5ml del reactivo de Benedict en un tubo de ensayo
2- Agregar 8 gotas de orina Mezclar por inversioacuten
3- Llevar el tubo con la mezcla preparada a bantildeo Mariacutea durante 5 minutos o
calentar a la llama hasta su ebullicioacuten durante 1 a 2 minutos
4- Dejar que se enfriacutee lentamente
Se informa de acuerdo a las pautas correspondientes
Negativa Color azul claro puede formarse un precipitado azul
Trazas Color verde azulado
1(+) Color verde precipitado verde o amarillo
2(++) Color amarillo a verde precipitado amarillo
3(+++) Color amarillo-anaranjado precipitado amarillo-anaranjado
4 (++++) Color amarillo-rojizoprecipitado rojo ladrillo o rojo
Este procedimiento es sensible y de puede detectar hasta concentraciones de
002 Dosis aumentadas de penicilina estreptomicina salicilatos
oxitetraciclinas polivinilpirrolidona dextraacuten y el aacutecido p-aminosaliciacutelico dan
reacciones positivos falsos Los conservadores con formalina y formaldehiacutedo
pueden dar lugar tambieacuten a falsos positivos
INVESTIGACION DE CUERPOS CETONICOS
REACCION DE ROTHERA
Es una teacutecnica que usa nitroprusiano y permite la formacioacuten de un anillo Permite
la determinacioacuten del aacutecido diaceacuteticoacetona no permite la deteccioacuten del aacutecido B-
hidroxibutiacuterico
Reactivos
1) Reactivo de Rothera compuesta por 75 g de nitroprusiato de sodio y
200mg de sulfato de amonio
2) Hidroacutexido de amonio concentrado
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Procedimiento
1) En un tubo de ensayo agregar 1g de reactivo de Rothera con 5 ml de orina
Mezclar por inversioacuten
2) Luego agregar 1ml de hidroacutexido de amonio concentrado
3) Si la prueba es positiva se forma un anillo rojo a puacuterpura en el tiempo de
112 minuto en el punto de contacto
Dar los resultados seguacuten la siguiente pauta
Negativa No se forma el anillo o la formacioacuten de un anillo marroacuten
Trazas La formacioacuten de un anillo puacuterpura o de color rosado
2(+) La formacioacuten de un anillo puacuterpura oscuro estrecho limitado
4 (++++) La formacioacuten de un anillo puacuterpura oscuro extenso
DETECCION DE SANGRE EN ORINA (SANGRE OCULTA)
PRUEBA DE BENCIDINA
Reactivo A
Solucioacuten de Bencidina al 1 en aacutecido aceacutetico al 50
Peroacutexido de hidroacutegeno de 10 voluacutemenes
Procedimiento
En un tubo o sobre un papel filtro( en este caso ldquomancharrdquo el papel con la muestra
en estudio)
2 ndash 4 gotas de bencidina
Agregar 2 ndash 4 gotas de peroacutexido de hidroacutegeno (agua oxigenada)
Interpretacioacuten
Si existe sangre se formaraacute un halo verde azulado
Negativo halo marroacuten
Reactivo B
Solucioacuten de Piramidoacuten al 5 en aacutecido aceacutetico al 50
Peroacutexido de hidroacutegeno de 10 voluacutemenes
La solucioacuten de piramidoacuten puede ser preparada sin aacutecido aceacutetico por lo tanto el
orden de uso es piramidoacuten acido aceacutetico agua oxigenada Resultado
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DETERMINACION DE BILIRRUBINA Y UROBILINOGENO
REACCION DEL YODO DE SMITH (BILIRRUBINAS)
En un tubo de ensayo colocar 5ml de orina aacutecida y cubrirla con 2ml de una
solucioacuten de yodo al 07 en alcohopl etiacutelico al 95 La presencia de un anillo de
color verde esmeralda en la interfase de ambos liacutequidos indica la presencia de
bilirrubina
La deteccioacuten de urobilinoacutegeno en orina tambieacuten indican un problema hepaacutetico Uno
de los problemas importantes en la deteccioacuten de urobilinoacutegeno
REACCION CUANTITATIVA DE EHRLICH
Reactivo de Ehrlich
p-dimetilanminobenzaldehiacutedo 10g
HCl concentrado 75ml
Agua destilada 75ml
Procedimiento
1- Colocar 10ml de orina en un tubo de ensayo recieacuten emitida
2- Agregar 1ml del reactivo de Ehrlich
3- Dejar en reposo durante 5 minutos
La presencia urobilinoacutegeno determina que la solucioacuten cambie de color niveles
altos y dan un color rojo cereza
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E PRACTICA 3
DEPURACION DE CREATININACREATININA Generalidad
La creatinina es una sustancia que deriva del metabolismo muscular
(muacutesculo estriado liso y cardiacuteaco) de la creatina y representa el
subproducto de excrecioacuten La produccioacuten de creatinina es independiente
de la dieta y del ejercicio muscular sin embargo es proporcional dentro
de ciertos liacutemites a la masa muscular Se libera de los glomeacuterulos y no
es reabsorbida por los tuacutebulos de los cuales puede ser excretada
especialmente cuando se aumenta la concentracioacuten hemaacutetica El
aumento de la creatinina en el suero empieza a ser evidente cuando el
filtrado glomerular es por debajo de 60 ml por minuto
Indicaciones
La determinacioacuten de la cratinina es utilizada en el diagnoacutestico de las
enfermedades renales agudas o croacutenicas y tambieacuten para el monitoreo
de la diaacutelisis renal El aumento de la creatinina es un iacutendice de la
insuficiencia glomerular en cuanto eacutesta es eliminada por filtracioacuten
glomerular Mientras la uremia en la sangre puede ser controlada a
traveacutes de una oportuna dieta la creatinina se correlaciona casi
exclusivamente a la eficiencia de la filtracioacuten glomerular La creatinina
representa el iacutendice maacutes fiel de la insuficiencia renal
Preparacioacuten del paciente
Ayuno
Modalidad de la toma de muestra
Ninguna particularidad
Transporte
Transportar a temperatura ambiente
Conservacioacuten
Centrifugacioacuten y separacioacuten del suero la toma de muestra se puede
conservar por 1 diacutea a temperatura ambiente de 20-25oC 7 diacuteas 2-4oC y
6 meses en congelacioacuten
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Centrifugacioacuten
Poner el tubo de ensayo en la centriacutefuga de modo balanceado poner el
reloj 5 minutos y centrifugar por 3000 rpm Verificar la idoneidad del
suero o plasma ictericia presencia de coaacutegulos filamentos de fibrina
turbidez Sentildealar eventualmente en el resultado la no idoneidad de la
muestra
Metoacutedicas de determinacioacuten
Meacutetodo cineacutetico enzimaacutetico
El meacutetodo enzimaacutetico colorimeacutetrico consiste en la medida del color
desarrollado con el reactivo de Jaffe antes y despueacutes de una reaccioacuten
con la enzima especiacutefica la creatincinasa esta enzima transforma la
creatinina en creatina con medida final a 340 nm de la creatina
Meacutetodo colorimeacutetrico y procedimiento analiacutetico
Ademaacutes de la determinacioacuten de la creatinina con una teacutecnica de punto
final maacutes frecuentemente se utiliza una teacutecnica cineacutetica en la cual la
creatinina en medio alcalino reacciona con picrato produciendo un
complejo coloreado rojo-naranja la diferencia de absorcioacuten durante el
tiempo de conversioacuten es directamente proporcional a la concentracioacuten
de creatinina en la muestra
Creatinina + aacutecido piacutecrico mdashmdashmdashgt creatinina picrato (complejo)
Materiales
1048664 Guantes descartables no esteacuteriles
1048664 Tubos de ensayo 13 x 100 mm
1048664 Puntas de pipeta 10-100 ul
1048664 1048664 Puntas de pipeta 100-1000 ul
1048664 1048664 Centriacutefuga
1048664 Espectrofotoacutemetro
1048664 Bantildeo Mariacutea
1048664 Reloj marcador
1048664 Pipetas automaacuteticas 10-100 ul
1048664 Pipetas automaacuteticas 100-1000 ul
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Procedimiento
Seguir las instrucciones de la casa comercial
Control de Calidad
Se deberaacuten usar sueros control normal y patoloacutegico en las mismas
condiciones que las muestras
Notas sobre la metoacutedica
Linealidad
Es lineal hasta 250 mgdl
Sensibilidad
Su sensibilidad es 01 mgdl
Especificidad
La metoacutedica es especiacutefica para la creatinina
Las muestras de suero tienen proteiacutenas que pueden reaccionar no
especiacuteficamente con el meacutetodo Jaffe es necesario corregir el valor de
03 mgdl para lograr valores maacutes correctos
Interferencias
Las interferencias maacutes significativas son
Hemoacutelisis con Hb ge100 gl
Icteacuterico bilirrubina ge400 mgdl
Lipemia trigliceacuteridos ge20000 mgdl
Acetona ge500 mgdl
Algunos antibioacuteticos como las cefalosporinas pueden dar valores
falsamente elevados
Valor de referencia
Hombres Hasta 13 mgdl
Mujeres Hasta 11 mgdl
Neonatos o nintildeos Hasta 07 mgdl
Criterios de validacioacuten
Confrontar paraacutemetros de funcionalidad renal (urea potasio proteiacutenas
densidad urinaria)
Confrontar paraacutemetros de equilibrio electroliacuteticos (sodio potasio cloro)
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Controlar sexo y edad del paciente y tambieacuten eventual estado de
embarazo
Controlar paraacutemetros del metabolismo muscular (CPK miacuteoglobulina)
DEPURACION DE CREATININA
Generalidad
La cantidad de creatinina excretada con la orina estaacute en relacioacuten con la
filtracioacuten glomerular La creatinina es una sustancia que deriva del
metabolismo muscular (muacutesculo estriado liso y cardiacuteaco) de la creatina
y representa el subproducto de excrecioacuten La produccioacuten de creatinina
es independiente de la dieta y del ejercicio muscular sin embargo es
proporcional dentro de algunos liacutemites a la masa muscular Se libera
desde los glomeacuterulos y no es reabsorbida por los tuacutebulos de los cuales
puede ser excretada especialmente cuando se aumenta la
concentracioacuten hemaacutetica El aumento de la creatinina en el suero
empieza a ser evidente cuando el filtrado glomerular es por debajo de
60 ml por minuto
La medida de la cantidad de creatinina en la orina producida en un
determinado periacuteodo de tiempo simultaacuteneamente a la medida de la
concentracioacuten plasmaacutetica lleva al caacutelculo el aclaramiento de la
creatinina (volumen del plasma en ml que es depurado de la creatinina
en un minuto de tiempo)
C= U x VP (mlmin)
donde
C= aclaramiento
U= concentracioacuten de creatinina en la orina
V= volumen de la orina eliminada
P= concentracioacuten de creatinina en el plasma
Indicaciones
La estrecha correlacioacuten entre la velocidad de filtracioacuten glomerular y el
valor de la creatinina plasmaacutetica y el hecho que la concentracioacuten de la
creatinina hemaacutetica no es influenciada por la dieta hacen de la
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creatinina en particular el aclaramiento de la creatinina un iacutendice de
funcionalidad renal muy sensible y seguramente maacutes significativo que la
urea
El aclaramiento de la creatinina se modifica en relacioacuten con la
enfermedad renal (glomerulonefritis agudas o croacutenicas rintildeoacuten policiacutestico
obstruccioacuten de la viacutea renal)
Preparacioacuten del paciente
Ayuno
Modalidad de la toma de muestra
A) Recoger la orina de 24 horas con el siguiente procedimiento
Para la recoleccioacuten de orina de 24 horas se tiene que utilizar un frasco
de 25 30 litros de boca ancha con tapoacuten de rosca Antildeadir al frasco un
estabilizante si es necesario
Para la recogida de la orina se procede del modo siguiente
a) En el tiempo preestablecido vaciar la vejiga e eliminar toda la
orina
b) Posteriormente comenzar a recoger toda la orina de 24 horas
c) Al cumplir las 24 horas vaciar de nuevo la vejiga y depositar toda
la orina en el frasco Conservar las orinas a 2-4degC
Al finalizar la recoleccioacuten de orina eacutesta debe ser enviada
inmediatamente al laboratorio
B) Cuando se entrega la muestra de orina es necesario efectuar la toma
de muestra de sangre
Transporte
La muestra de orina debe ser transportada de 2-4degC la muestra de
sangre a temperatura ambiente
Conservacioacuten
Centrifugacioacuten y separacioacuten del suero la toma de muestra se puede
conservar por 1 diacutea a temperatura ambiente de 20-25oC 7 diacuteas 2-4oC y
6 meses en congelacioacuten
Conservar las orinas a 2-4degC
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Verificacioacuten de la muestra
Verificar que el registro de la toma de muestra esteacute correcto
Metoacutedica de determinacioacuten
Cu x Vmin
Aclaramiento de la creatinina = mdashmdashmdashmdashmdashmdashmdashmdashmdashmdashmdashmdash
Ps
donde
Cu= concentracioacuten de creatinina en la orina expresado en mgdl
Ps = concentracioacuten de creatinina en suero expresado en mgdl
Vmin= volumen por minuto (cantidad de la diuresis entre 1440)
Procedimiento analiacutetico
Ver metoacutedica de la creatinina
Notas sobre la metoacutedica
Linealidad
Referirse a las metoacutedicas de creatinina Es lineal hasta 250 mgdl
Sensibilidad
Referirse a las metoacutedicas de creatinina Su sensibilidad es 01 mgdl
Especificidad
Referirse a las metoacutedicas de creatinina
Las muestras de suero tienen proteiacutenas que pueden reaccionar no
especiacuteficamente con el
meacutetodo Jaffe Es necesario corregir el valor de 03 mgdl para lograr
valores maacutes correctos
Interferencias
Las interferencias significativas se deben
Para las orinas
Presencia de partiacuteculas en suspensioacuten (centrifugar las orinas)
Mala recoleccioacuten de orina
Presencia de bacterias de barbituacutericos de cuerpos cetoacutenicos
Para la sangre
Hemoacutelisis con Hb ge100 gl
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Icteacuterico bilirrubina ge400 mgdl
Lipemia trigliceacuteridos ge20000 mgdl
Acetona ge500 mgdl
Valor de referencia
ge70mlmin
PRACTICA 4
EXAMEN MICROSCOacutePICO DEL SEDIMENTO URINARIO
PROPOacuteSITO
Observar microscoacutepicamente en el sedimento urinario elementos celulares
cilindros cristales paraacutesitos filamentos mucoides y bacterias Con el fin
de sugerir una patologiacutea del tracto urinario u otras enfermedades que esteacuten
en diferente localizacioacuten
MUESTRA REQUERIDA
15 mL de orina
MATERIALES
- Tubos coacutenicos de 15 mL
- Laacuteminas portaobjetos
- Laminillas cubreobjetos
- Marcador para vidrio
- Gradillas para tubos
- Guantes descartables
EQUIPO
- Reloj marcador
- Centriacutefuga
- Microscopio
PROCEDIMIENTO
- Centrifugar durante 5 minutos a 2500 rpm
- Descartar el liacutequido sobrenadante
- Suspender el sedimento urinario golpeando ligeramente con la mano
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- Colocar una gota de sedimento entre un porta y un cubreobjeto
- Observar la preparacioacuten con el objetivo 10x para lograr una visioacuten general del
sedimento
- Identificar los elementos formes a mayor aumento 40x
- Anotar lo observado
FUENTES DE ERROR
- Usar portaobjetos y cubreobjetos sucios
- Desecacioacuten del sedimento urinario
-Tiempo transcurrido desde la toma de la muestra hasta la observacioacuten
microscoacutepica
- Uso excesivo de luz
- Centrifugacioacuten inadecuada
FORMA DE REPORTE
CEacuteLULAS EPITELIALES ESCAMOSAS Y REDONDAS reportar escasas
moderadas o abundantes
GLOacuteBULOS ROJOS Reportar el nuacutemero estimado por campo
LEUCOCITOS Reportar el nuacutemero estimado por campo
CILINDROS se pueden encontrar en la orina los siguientes cilindros
hialinos granulosos finos y gruesos leucocitarios hemaacuteticos grasos y ceacutereos
Reportar el nuacutemero de cilindros observados por campo
FILAMENTOS MUCOIDES reportar escasos moderados o abundantes
CRISTALES se pueden encontrar en la orina los siguientes cristales oxalatos de
calcio acido uacuterico uratos amorfos fosfatos amorfos fosfatos triples urato de
amonio leucina cistina y tirosina
Reportar en la forma siguiente escasos moderados o abundantes
LEVADURAS Reportar escasos moderada y abundantes
PARAacuteSITOS Se pueden encontrar en orina Trichomonas vaginalis Phitirus pubis
huevos y quistes de paraacutesitos por contaminacioacuten con heces
BACTERIAS Reportar la presencia de bacterias moderadas o abundantes
solamente cuando se observen maacutes de 10 leucocitos por campo
Valores de referencia
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CEacuteLULAS EPITELIALES ESCAMOSAS Escasas a moderadas
CEacuteLULAS EPITELIALES REDONDAS No deben observarse
GLOacuteBULOS ROJOS No deben observarse
LEUCOCITOS 0-5 por campo
CILINDROS No deben observarse
FILAMENTOS MUCOIDES No deben observarse
CRISTALES Podriacutean observarse oxalatos uratos y fosfatos amorfos de escasa a
moderada cantidad
LEVADURAS No deben observarse
PARAacuteSITOS No deben observarse
BACTERIAS Escasas o no presentes
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PRACTICA 6
UROCULTIVO Y ANTIBIOGRAMA
OBTENCIOacuteN DE MUESTRA DE ORINA PARA CULTIVO
Condiciones generales
La orina es un excelente medio de cultivo para la proliferacioacuten bacteriana por esta
razoacuten la muestra debe ser procesada dentro de las 2 horas despueacutes de haber
sido obtenida o debe refrigerarse a 4 degC (maacuteximo 24 horas) hasta su
procesamiento
Generalmente el desarrollo de dos o maacutes tipos de colonias (en pacientes sin
sonda vesical) indican que la muestra se ha contaminado por recoleccioacuten
incorrecta o demora en la siembra
OBTENCIOacuteN DE MUESTRA DE ORINA DEL CHORRO MEDIO
Obtencioacuten de muestras de orina en pacientes mujeres Materiales y equipos
a) Guantes de laacutetex esteacuteriles
b) Cinco o maacutes piezas de gasa esteacuteril de tamantildeo adecuado pudiendo
ser de 4rdquo x 4rdquo
c) Jaboacuten
d) Agua tibia esteacuteril
e) Frasco esteacuteril de boca ancha para la muestra de orina
Procedimiento
a) Mantener la privacidad de la paciente
b) Rotular el frasco con el nombre de la paciente fecha de obtencioacuten de la
muestra hora y el procedimiento usado para la obtencioacuten de la muestra
c) Lavarse las manos con jaboacuten y abundante agua
Laboratorio Cliacutenico PAULINA ARROLLO PEREacuteZ
d) Preparar una pieza de gasa para la limpieza de los genitales externos
humedicieacutendola con agua y una pequentildea cantidad de jaboacuten Preparar dos piezas
maacutes de gasa para el enjuague con agua tibia
e) Separar los labios mayores con dos dedos de una mano y limpiar el aacuterea
expuesta pasando la gasa de adelante hacia atraacutes
f) Descartar la gasa
g) Con otra gasa humedecida enjuagar el aacuterea de adelante hacia atraacutes Repetir el
procedimiento con otra gasa
h) Finalmente secar el aacuterea de adelante hacia atraacutes con un trozo de gasa seca
i) Mantener separados los labios mayores mientras la paciente empieza a orinar
Luego del chorro inicial colocar el frasco esteacuteril para colectar el chorro medio
j) Al terminar la recoleccioacuten tapar el frasco inmediatamente y limpiarle la
superficie
k) Transportar el frasco con la muestra de orina inmediatamente
Obtencioacuten de muestra de orina en pacientes varones
Materiales
a) Guantes de laacutetex
b) Cinco o maacutes piezas de gasa esteacuteril
c) Jaboacuten
d) Agua tibia esteacuteril
e) Frasco esteacuteril de boca ancha para la obtencioacuten de la muestra
Procedimiento
a) Mantener la privacidad del paciente
b) Rotular el frasco con el nombre del paciente fecha de obtencioacuten de la muestra
hora y el procedimiento usado para la obtencioacuten de la muestra
c) Lavarse las manos con jaboacuten y abundante agua
d) Preparar una pieza de gasa con agua y una pequentildea cantidad de jaboacuten
Preparar dos piezas maacutes de gasa para el enjuague con agua tibia
e) Realizar la higiene de los genitales Retraer el prepucio antes de lavar el glande
con la gasa humedecida con jaboacuten Descartar la gasa
Laboratorio Cliacutenico PAULINA ARROLLO PEREacuteZ
f) Enjuagar el glande usando una gasa huacutemeda Repetir el procedimiento con otra
gasa
g) Secar la zona usando uno o maacutes piezas de gasa seca
h) Indicar al paciente que mantenga el prepucio retirado e inicie la miccioacuten
directamente en un recipiente (orina para descartar)
i) Despueacutes del chorro inicial colocar el frasco esteacuteril para colectar la muestra del
chorro medio
j) Obtenida la muestra tapar el frasco inmediatamente y limpiarle la superficie
k) Transportar el frasco con la muestra de orina inmediatamente al laboratorio
SIEMBRA PRIMARIA DE MUESTRA DE ORINA
Objetivo
Describir el procedimiento para la siembra primaria de muestra de orina
Campo de aplicacioacuten
Se aplica para el cultivo de muestra de orina en el diagnoacutestico bacterioloacutegico de
infecciones del tracto urinario
Materiales y equipos
a) Asa calibrada de platino o descartable de 0001 mL oacute 001 mL
b) Estufa de 35 ndash 37 degC
c) Mechero Bunsen o cabina de flujo laminar
d) Guantes de laacutetex
e) Contenedor de material contaminado
f) Pinza esteacuteril
g) Propipeta o pipetor automaacutetico
h) Medios de cultivo
ndash Placas con agar sangre de carnero (AS)
ndash Placas con agar Mc Conkey (McC)
Procedimiento
a) Mantener las muestras en refrigeracioacuten (4 degC) hasta su procesamiento por
cultivo
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b) Los cultivos deben realizarse en una cabina de bioseguridad o cerca del
mechero Bunsen
c) Las placas con AS y McC que se utilizaraacuten en el urocultivo deben estar a
temperatura ambiente Rotular las placas
d) Si el asa calibrada no es descartable esterilizar el asa de siembra flameacuteandola
en el mechero Bunsen hasta que se ponga rojo vivo Dejar enfriar el asa
e) Tomar el frasco con la muestra de orina abrir la tapa y flamear la boca del
frasco en el mechero Bunsen
f) Tomar la muestra de orina con el asa de siembra esteacuteril introducieacutendola y
sacaacutendola del frasco en forma vertical Tapar el frasco con la muestra
g) Inocular en el centro de la placa con AS a partir del cual se extiende la muestra
hacia delante y hacia atraacutes
h) Luego sin quemar el asa el inoacuteculo se disemina uniformemente con trazos
perpendiculares a la siembra inicial en toda la placa
i) Proceder de la misma forma para el agar Mc Conkey
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Lectura
a) Realizar la evaluacioacuten a las 24 horas si no hay crecimiento bacteriano dejar
incubar hasta las 48 horas
b) La evaluacioacuten consiste en realizar el recuento de colonias cuyo resultado se
multiplica por el factor de dilucioacuten para obtener las UFC por mL
Interpretacioacuten
a) En pacientes sin sonda vesical la cuenta significativa de bacterias en orina es
la presencia de maacutes de 105 UFC mL de un solo germen
b) Los recuentos intermedios (103 ndash 104 UFCmL) indican infeccioacuten si el
procedimiento de recoleccioacuten de orina fue realizado correctamente
c) Generalmente el aislamiento de tres o maacutes especies bacterianas indican que la
muestra se ha contaminado por recoleccioacuten inadecuada o demora en la siembra
d) En pacientes con sonda vesical cuentas bacterianas menores de 105 UFCmL
pueden tener significado asiacute tambieacuten se pueden encontrar bacteriurias
polimicrobianas hasta en casi 15 de enfermos
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e) En pacientes sin cateacuteter se puede comprobar si el procedimiento de obtencioacuten
de muestra fue realizado correctamente observando la frecuencia con la cual se
informan recuentos de colonias intermedias entre 103 ndash 104 UFCmL En
pacientes sin infecciones del tracto urinario el recuento es nulo o se reduce a
pocas colonias
IDENTIFICACION BACTERIANA
Lectura de cultivos en agar Mac Conkey
ndash En agar Mc Conkey Escherichia coli lactosa positiva forma colonias de borde
entero de color fucsia opacas de 2 mm ndash 3 mm de diaacutemetro usualmente
rodeadas de una zona opaca alrededor de la colonia (bilis precipitada) Las cepas
de E coli que son lactosa negativa dan colonias incoloras de 3 ndash 4 mm
ndash En agar Mc Conkey K pneumoniae forma colonias de borde entero de color
rosado a rosado oscuro de 3 ndash 4 mm de diaacutemetro y aspecto mucoide
ndash En agar Mc Conkey Enterobacter spp forma colonias de borde entero de color
rosado de 2 ndash 4 mm de diaacutemetro no tan mucoides como K pneumoniae
Las colonias con estas caracteriacutesticas son subcultivadas en medios diferenciales
PRUEBAS BIOQUIMICAS
TSI
Lectura
Es importante hacer la lectura entre las 18 ndash 24 horas para no obtener resultados
erroacuteneos La lectura se hace sobre la base de tres caracteriacutesticas Utilizacioacuten de
hidratos de carbono produccioacuten de gas y produccioacuten de aacutecido sulfhiacutedrico
Utilizacioacuten de hidratos de carbono
ndash Utilizacioacuten de lactosa Reaccioacuten aacutecida en el pico de flauta (color amarillo)
Abreviatura (A)
ndash Utilizacioacuten de glucosa Reaccioacuten aacutecida en la columna del medio (color amarillo)
Abreviatura (A)
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ndash No hay utilizacioacuten del carbohidrato Se puede observar una reaccioacuten alcalina
(color rojo) o que no hay cambio de color (permanece del mismo color que el
medio no inoculado) Abreviaturas (K) o (N) respectivamente
Nota Cuando el microorganismo tambieacuten produce H2S el precipitado negro
puede ocultar la acidez
Produccioacuten de gas de glucosa
ndash Se considera positivo Presencia de una sola burbuja de gas burbujas en el
medio divisioacuten del medio desplazamiento completo del medio del fondo del tubo
dejando un aacuterea clara o una ligera muesca del medio en el costado del tubo
ndash Se registra la lectura por medio de cruces (+)
Produccioacuten de aacutecido sulfhiacutedrico
ndash Se manifiesta por un color negro distribuido por toda la columna del medio de
cultivo o soacutelo en la parte superior
ndash Se registra la lectura por medio de cruces (+)
Resultados
Ejemplo de simbolizacioacuten e interpretacioacuten
KA ndash+ Significa alcalinidad en la inclinacioacuten y acidez en el fondo (fermentacioacuten de
glucosa) gas negativo y H2S positivo
NN ndash ndashSignifica que no hay utilizacioacuten de la lactosa y glucosa ni produccioacuten de
H2S
AGAR LISINA HIERRO
En este medio se determina simultaacuteneamente la produccioacuten de lisina
descarboxilasa y de la formacioacuten de aacutecido sulfhiacutedrico
Lectura
Es importante hacer la lectura entre las 18 ndash 24 horas si la lectura se realiza antes
podemos obtener resultados falsos positivos asiacute como falsos negativos si se lee
despueacutes de las 24 horas Realizar la lectura en la columna y en la superficie
inclinada y observar la formacioacuten de aacutecido sulfhiacutedrico el cual se evidencia por una
coloracioacuten negra
Nota Generalmente las cepas del grupo Proteus y Providencia desaminan la
lisina a aacutecido ndashcetocarboacutenico Este uacuteltimo forma compuestos pardo-rojizos en la
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regioacuten superficial del medio de cultivo con la sal de hierro y bajo la influencia del
oxiacutegeno
Recomendaciones
No incubar maacutes del tiempo necesario para no ocasionar una alcalinizacioacuten en la
superficie del medio y por lo tanto producir un viraje hacia el violeta
UTILIZACIOacuteN DE CITRATO
Para determinar si un microorganismo es capaz de utilizar citrato como uacutenica
fuente de carbono para su metabolismo
Procedimiento
a) Incubar a 35ndash37 degC de 24 horasndash 48 horas En algunos casos es necesario una
incubacioacuten hasta por 4 diacuteas
b) Ver el viraje de color
Resultados
a) Prueba positiva Crecimiento con un color azul intenso en el pico de flauta o
presencia de colonias en ausencia del color azul
b) Prueba negativa No se observa crecimiento ni cambio de color (verde)
Controles
Positivo Enterobacter cloacae
Negativo Escherichia coli
HIDROacuteLISIS DE LA UREA (PRODUCCIOacuteN DE UREASA)
Es uacutetil para determinar la capacidad de un organismo de degradar la urea
formando dos moleacuteculas de amoniaco por accioacuten de la enzima ureasa
Procedimiento
Realizar la lectura despueacutes de 18 horas ndash 24 horas de incubacioacuten observando el
viraje de color
Resultados
Prueba positiva Color rosado intenso en el pico de flauta o todo el agar
Puede haber una reaccioacuten positiva retardada despueacutes de 24 horas y hasta
6 diacuteas de incubacioacuten (algunas cepas de Klebsiella por ejemplo)
Prueba negativa No se produce cambio de color
Controles
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Negativo Escherichia coli
Positivo Klebsiella pneumoniae
MOTILIDAD (MEDIOS SIM O MIO O AGAR MOVILIDAD)
Para determinar si un organismo es moacutevil o inmoacutevil
Procedimiento
Incubar a 35 ndash 37 degC de 24 a 48 horas
Resultados
Positivo Los microorganismos migran de la liacutenea de siembra y se difunden en el
medio provocando turbidez Tambieacuten puede manifestarse semejando
ldquovellosidadesrdquo a lo largo del trazo de siembra
Negativo Se observa un crecimiento bacteriano acentuado siguiendo el trazo de
siembra y el medio circundante se mantiene claro
Controles
Control positivo Escherichia coli
Control negativo Klebsiella pneumoniae
h) Prueba de indol[6]
Es uacutetil para determinar la capacidad de un microorganismo de producir indol a
partir del aminoaacutecido triptoacutefano
Medios y reactivos
Caldo de triptoacutefano o de peptona o caldo de triptona
Reactivo de indol de Kovacs
Procedimiento
Retirar aseacutepticamente 2 mL de caldo de cutivo con 24 horas de incubacioacuten
Agregar 5 gotas de reactivo de Kovacs
Mover suavemente el tubo y realizar la lectura
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ANTIBIOGRAMA
Preparacioacuten del Agar Mueller Hinton
Preparar el medio a partir de la base deshidratada de acuerdo a las
indicaciones del fabricante
Autoclavar y dejar enfriar en bantildeo de agua hasta que alcance los 45degC - 50degC
Repartir el medio en placas petri (60 ml ndash 70 ml o 25 ml ndash 30 ml para placas de
150 mm o 100 mm de diaacutemetro interno respectivamente) de manera que el
grosor del agar en la placa sea de 4 mm
Realizar las pruebas de esterilidad para cada lote de Mueller Hinton incubando
una o dos placas de cada lote a 30degC ndash 35degC durante 24 horas o maacutes Estas
placas utilizadas deben ser luego descartadas
Preparacioacuten del estaacutendar (05 Mc Farland) para el inoacuteculo
Para estandarizar la densidad del inoacuteculo se usa una suspensioacuten de sulfato de
bario (05 de la escala de Mac Farland) como estaacutendar
Preparacioacuten del estaacutendar de turbidez
a Agregar 05 ml de una solucioacuten de BaCl2 0048 M (BaCl22H2O al 1175 PV)
a 995 mL de una solucioacuten de H2SO4 018 M (036 N) (1 VV) en constante
movimiento para mantener la suspensioacuten
b Verificar la densidad correcta del estaacutendar usando un fotocoloriacutemetro oacute
espectrofotoacutemetro cuya absorbancia a 625 nm es 008 a 010 para el estaacutendar 05
de Mc Farland
c Distribuir de 4 ml a 6 ml en tubos con tapa de rosca o tapoacuten de jebe similares a
los que se usaraacuten para preparar el inoacuteculo
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d Ajustar bien las tapas o tapones y conservarlos en la oscuridad a temperatura
ambiente y anotar la fecha de preparacioacuten
e Antes de ser usado agitar vigorosamente dicho estaacutendar de preferencia en un
agitador mecaacutenico
f Verificar mensualmente la densidad de los estaacutendares de sulfato de bario y
reemplazarlo cuando sea necesario
INOCULACIOacuteN
Preparacioacuten del inoacuteculo
Puede realizarse de dos formas
Meacutetodo de desarrollo previo
a Seleccionar cuatro a cinco colonias bien aisladas del mismo tipo morfoloacutegico
de un cultivo en placa
b Tocar la superficie de cada colonia con una asa de siembra y transferirlo a un
tubo que contiene de 4 a 5 mL de caldo apropiado (Ej Caldo Tripticasa soya)
c Incubar el caldo a una temperatura entre 35degC a 37degC hasta que alcance o
exceda la turbidez del estaacutendar 05 de la escala de Mc Farland (por lo general de
2 a 6 horas)
d Ajustar la turbidez del inoacuteculo con solucioacuten salina o caldo apropiado hasta el
tubo 05 de la escala de Mc Farland por comparacioacuten visual con el estaacutendar Para
realizar este paso correctamente usar una luz apropiada y mirar los tubos contra
un fondo blanco con liacuteneas negras como contraste
e La suspensioacuten preparada contendraacute aproximadamente 1 a 2 x 108 UFCmL
Meacutetodo directo de inoculacioacuten a partir de colonias aisladas
a De una placa de cultivo con agar no selectivo e incubada por 18 - 24 h
seleccionar colonias aisladas y preparar una suspensioacutem directa en solucioacuten
salina oacute caldo
b La suspensioacuten debe ser inmediatamente ajustada a la escala 05 de Mc
Farland
Inoculacioacuten de las Placas
Dentro de los 15 minutos siguientes al ajuste de la turbidez del inoacuteculo sumergir
un hisopo esteacuteril en la suspensioacuten rotar el hisopo varias veces presionando
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firmemente sobre la pared interior del tubo por encima del nivel del liacutequido para
remover el exceso de inoacuteculo
Inocular la superficie seca de la placa de Mueller Hinton estriando con el hisopo
en tres direcciones para asegurar una distribucioacuten uniforme del inoacuteculo Antes de
colocar los discos dejar secar la placa a temperatura ambiente durante 3 a 5
minutos para que cualquier exceso de humedad superficial sea absorbido
APLICACIOacuteN DE LOS DISCOS
Colocar los discos individuales o multidiscos sobre la superficie del agar con la
ayuda de una pinza esteacuteril o la punta de una aguja presionando suavemente sobre
cada disco para asegurar un contacto completo con la superficie del agar
Distribuir los discos uniformemente de modo que esteacuten a una distancia miacutenima de
25 mm uno del otro (el diaacutemetro de los discos seguacuten las normas de la
Organizacioacuten Mundial de la Salud (OMS) debe ser de 6 mm) No deben colocarse
maacutes de 12 discos en una placa de 150 mm ni maacutes de 6 en una placa de 100 mm
de diaacutemetro interno para evitar la superposicioacuten de las zonas de inhibicioacuten Un
disco no debe ser removido una vez que tomoacute contacto con la superficie del agar
debido a que algunos antibioacuteticos se difunden raacutepidamente
INCUBACIOacuteN
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Incubar lar placas en posicioacuten invertida a 35degC por 18 a 24 horas dentro de los 15
minutos posteriores a la aplicacioacuten de los discos
Despueacutes del tiempo recomendado de incubacioacuten examinar cada placa y medir los
diaacutemetros de los halos de inhibicioacuten alrededor de cada disco
LECTURA DE LAS PLACAS E INTERPRETACIOacuteN DE LOS RESULTADOS
Medir los diaacutemetros de las zonas de inhibicioacuten completa (incluyendo el diaacutemetro
del disco) usando
una regla o calibrador Se debe mantener iluminada la parte posterior de la placa
petri con una luz reflejada localizada a unos cuantos centiacutemetros sobre un fondo
negro Tener la precaucioacuten de observar la placa siguiendo una vertical directa para
evitar una lectura erroacutenea de las marcas de la regla por efecto de paralelismo En
los medios suplementados con sangre las zonas son medidas en la parte superior
de la superficie del agar y retirando la tapa Tener cuidado de no medir la zona de
la hemoacutelisis sino la de inhibicioacuten del crecimiento
El punto final debe tomarse como el aacuterea que no muestra un crecimiento obvio
visible que puede ser detectado mediante observacioacuten visual no incluyendo velo
de crecimiento o colonias muy pequentildeas que puedan ser detectadas solo con
mucha dificultad en el borde de la zona Sin embargo las colonias mayores
creciendo dentro de la zona clara deberaacuten ser subcultivadas reidentificadas y
reensayadas Algunos Proteus spp debido a su gran movilidad pueden presentar
un velo de invasioacuten o ldquoswarmingrdquo dentro de las zonas de inhibicioacuten de algunos
antibioacuteticos En estos casos el velo del swarming debe ser ignorado al momento
de medir los halos de inhibicioacuten
DISCOS DE SENSIBILIDAD ANTIBIOacuteTICA A INCLUIR EN EL ANTIBIOGRAMA
Grupo I
Ampicilina
Cefalotina
Ampicilina Sulbactam o Amoxicilina Aacutecido Clavulaacutenico
Cefuroxima
Cefotaxima o Ceftriaxona
Gentamicina
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Amikacina
Aacutecido Nalidiacutexico(1)
Norfloxacina(1)
Ciprofloxacina
Cotrimoxazol (TrimetoprimSulfametoxazol)
Nitrofurantoiacutena(1)
Grupo II
Cefoxitina
Aztreonam
Ceftazidima
Cefixima
CefoperazonaSulbactam
Cefepime o Cefpirome
Imipenem o Meropenem
Cloramfenicol
Ofloxacina (1)
(1) Disco utilizado exclusivamente para infecciones de las viacuteas urinarias
Resistencias Naturales
Las enterobacterias son resistentes a Penicilina Oxacilina Macroacutelidos
Clindamicina y Glicopeacuteptidos
Klebsiella spp es resistente a las Aminopenicilinas
Citrobacter freundii Enterobacter cloacae y Enterobacter aerogenes son
resistentes a las Aminopenicilinas AminopenicilinasInhibidores de
betalactamasas Cefalosporinas de primera generacioacuten y Cefuroxima
Serratia marcescens es resistente a las Aminopenicilinas
AminopenicilinasInhibidores de betalactamasas Cefalosporinas de primera
generacioacuten y Cefoxitina
Proteus mirabilis es resistente a Nitrofurantoiacutena
Proteus vulgaris es resistente a las Aminopenicilinas Cefalosporinas de primera
generacioacuten Cefuroxima y Nitrofurantoiacutena
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Morganella morganii es resistente a las Aminopenicilinas
AminopenicilinasInhibidores de betalactamasas Cefalosporinas de primera
generacioacuten Cefuroxima y Nitrofurantoiacutena
Providentia stuartii es resistente a las Aminopenicilinas
AminopenicilinasInhibidores de betalactamasas Cefalosporinas de primera
generacioacuten Gentamicina (bajo nivel) y Nitrofurantoiacutena
ANTIBIOTICOS Y DIAMETROS CRITICOS PARA ENTEROBACTERIAS
E PRACTICA 7
EXAMEN QUIMICO DE CALCULO RENAL
EXAMEN FISICO
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Se debe pesar el caacutelculo y anotar el dato obtenido Medir dos de los diaacutemetros y
tomar nota del aspecto general textura y color y despueacutes de seccionado el
aspecto general la prominencia y el color de los distintos estratos
Se secciona el caacutelculo con una sierra Se raspan las caras con una aguja Se
procede lo mismo con el nuacutecleo Cada una de las muestras obtenidas se trituran
por separado en un mortero
PROCESO
Se coloca una porcioacuten del polvo del caacutelculo en un crisol y se calienta al fuego Si
no hay ennegrecimiento ni se altera el tamantildeo original el caacutelculo estaraacute formado
por sustancias inorgaacutenicas Si en cambio se carboniza desapareciendo estaraacute
formado por sustancias orgaacutenicas Si se funde y se ennegrece este caacutelculo estaacute
formado por sulfamidasa
Una vez obtenidos los datos pueden seleccionarse las reacciones necesarias
para confirmarlos
REACCIONES QUIMICAS
Solucioacuten A
10mg del polvo en matraz y antildeadir 50 ml de ClH 5 Observar si se
produce efervescencia Calentar en bantildeo de agua hirviendo por 10 a 15 minutos y
filtrar en caliente El filtrado se distribuye en 8 tubos numerados y se introduce un
trocito de papel tornasol en cada uno
Solucioacuten B
Agitar con Cl3CH unos 10 mg del polvo Reposar en tubo tapado a
temperatura ambiente hasta que el insoluble haya precipitado Decantar la
solucioacuten clorofoacutermica y guardar igual que el sedimento por separado
Carbonato efervescencia al agregar el CIH por desprendimiento de CO 2
Amonio al tubo 1 de la solucioacuten A se le agrega solucioacuten de OHNa 10 gota a
gota y agitando hasta que el papel tornasol vire
Agregar 1 ml de reactivo de Nessler Un color amarillo oscuro oporto indica
positividad de la reaccioacuten
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El NH 3 formado por los grupos NH 4 en medio alcalino reacciona con el yoiduro
doble del reactivo de Nesler para dar yoduro amoacutenico dimercuacuterico precipitado
pardo anaranjado
Acido uacuterico Neutralizar el contenido del tubo 2 como se explicoacute antes
Agregar igual volumen de CNN Na 2 y 05 ml de reactivo de Folin para aacutecido
uacuterico Un color azul intenso indica presencia de aacutecido uacuterico
El aacutecido uacuterico reduce al aacutecido fosfotuacutengstico en medio alcalino dando color azul
intenso de azul de tungsteno y a su vez se oxida a alantoiacutena
Reactivo fosfotuacutengstico (Folin y Denis) Antes del uso diluir al 10 en agua
destilada
Oxalato de calcio Neutralizar el contenido del tubo 3 Agregar CH 3 COOH 10
hasta reaccioacuten aacutecida al tornasol Precipitado blanco que no se redisuelve por
agitacioacuten indica presencia de oxalato de calcio
Calcio Neutralizar el tubo 4 Acidificar con CH 3 COOH glacial Agregar 2 ml C 2
O 4 ( NH 4 ) 4 Precipitado blancodenso indica presencia de Ca ++
Fosfato Neutralizar el tubo 5 Agregar 1 ml de solucioacuten de molibdato Mezclar
antildeadir 05 ml de aacutecido aminonaftol sulfoacutenico (ANS) 025 Coloracioacuten azul que
aparece en 5 minutos indica fosfatos
El color azul se debe a los oacutexidos reducidos de molibdeno
Reactivos
1 ClH concentrado2 Solucioacuten de OHK 203 NO 3 H concentrado4 Mo O 4 (NH 4 ) 2 disolver 25 g de la droga en 50 ml de SO 4 H 2 10 N y
diluir a 100 ml con H2 O destilada5 Amoniacuteaco
Reactivo ANS En matraz x 250 ml poner 05 g de aacutecido aminonaftolsulfoacutenico y
agrgar 195 ml de bisulfito de sodio 15 y 5 ml de sulfito de sodio 20 Mezclar
bien hasta disolucioacuten Si no se disuelve en media hora agregar maacutes sulfito y
agitar El reactivo dura unas 2 semanas
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Magnesio Neutralizar el tubo 7 con OHNH 4 y antildeadir 1 ml de solucioacuten alcohoacutelica
de p ndash Nitrobenceno azorresorcinol Un cromoacutegeno rojo indica presencia de
magnesio
En medio alcalino se forma (OH) 2 Mg El colorante azo resulta absorbido por el
(OH) 2 Mg en medio alcalino
Xantina A un tercio del residuo de la solucioacuten B agregarle gotas de NO 3 H
concentrado
Se disuelve el residuo sin desprender gas Evaporar a sequedad en bantildeo Mariacutea
hirviente quedando un residuo amarillo Dejar enfriar y humedecer con gotas de
OHNa 10 Una coloracioacuten anaranjada que vira al rojo oscuro al calentar indica
presencia de xantina
La reaccioacuten es la xantoproteica Migracioacuten de los anillos fenilo existentes en la
tirosina fenilalanina y triptoacutefano que da un color amarillo de los productos de
nitrosustitucioacuten para virar al anaranjado tras la adicioacuten de un aacutelcali ( formacioacuten de
la sal)
Nota El reactivo de molibdato se puede preparar asiacute
Solucioacuten 1 SO 4 H 2 01 N
Medir 450 ml de SO4 H 2 concentrado y agregarlos a 1300 ml de agua
destilada
Solucioacuten 2
A 250 ml de SO 4 H 2 01 N antildeadir la solucioacuten de molibdato y llevar con
agua destilada a 250 ml Mezclar
Sulfamidas Neutralizar el uacuteltimo tubo Antildeadir 1 ml de NO 2 Na 05 preparado
recientemente Agitar y reposar por 3 minutos Antildeadir 5 ml de solucioacuten alcohoacutelica
de dimetil-alfa naftilamina 025 Un color rojizo indica presencia de sulfamidas
Finalmente procede hacer mencioacuten de ciertos procedimientos fiacutesicos como la
microscopia de polarizacioacuten difraccioacuten de rayos X cristalografiacutea
espectrofotometriacutea de rayos infrarrojos etc que permiten actualmente un
conocimiento maacutes confiable de la estructura de los caacutelculos
- Reactivos
-
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PRACTICA 1
EXAMEN FISICO DE LA ORINA
PROPOacuteSITO
Por medio de la observacioacuten directa de la muestra de orina determinar el color y el
aspecto de eacutesta lo cual puede sugerir una patologiacutea del tracto urinario u otras
enfermedades que esteacuten en diferente localizacioacuten pero que sus manifestaciones
secundarias son a nivel del rintildeoacuten
MUESTRA REQUERIDA
30 mL de orina Preferible la primera de la mantildeana 10 mL de orina en muestra de
nintildeos
MATERIALES
- Frascos plaacutesticos transparente de boca ancha con capacidad de 30 mL
- Bolsa pediaacutetrica recolectora de orina
- Papel toalla
- Marcador de vidrio
- Guantes descartables
PROCEDIMIENTO
- Verificar que el frasco esteacute bien identificado y completamente tapado
- Agitar en forma circular sobre la mesa de trabajo
- Observar color y aspecto
- Anotar lo observado
FUENTES DE ERROR
- Frascos sucios
- Toma de muestra inadecuada
- Muestras medicamentosas
- Tiempo transcurrido desde la toma de la muestra hasta la observacioacuten (no mayor
de 2 horas)
FORMA DE REPORTE
Valores de referencia
COLOR Amarillo
ASPECTO Transparente limpia
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63 E PRACTICA 2
EXAMEN QUIMICO DE LA ORINA
XAMEN QUIacuteMICO DE ORINAPROPOacuteSITO
Determinar las sustancias quiacutemicas presentes en una muestra de orina asiacute como
su densidad y
pH a traveacutes de las zonas de reaccioacuten presentes en una tira reactiva
MUESTRA REQUERIDA
30 ml de orina Preferible la primera de la mantildeana 10mL de orina en muestra de
nintildeos
MATERIALES Y REACTIVOS
- Frascos plaacutesticos transparente de boca ancha con capacidad de 30 mL
- Bolsa pediaacutetrica recolectora de orina
- Tubos coacutenicos con capacidad de 15 ml
- Gradilla para tubos
- Papel toalla
- Marcador de vidrio
- Guantes descartables
- Tiras reactivas para orina
PROCEDIMIENTO
- Identificar el tubo coacutenico
- Agitar la muestra de orina en forma circular sobre la mesa de trabajo
- Verter la orina en el tubo coacutenico
- Introducir la tira reactiva en la orina
- Eliminar el exceso de orina colocando la tira sobre un papel absorbente
- Esperar el tiempo recomendado por el fabricante para su lectura
- Anotar los resultados
Los cambios de color que aparecen despueacutes de dos oacute maacutes minutos carecen de
importancia diagnoacutestica
FUENTES DE ERROR
- Muestras medicamentosas
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- Frascos y tubos mal lavados
- Tiras reactivas de mala calidad o vencidas
- Cortar las tiras reactivas
- Leer las tiras reactivas despueacutes del tiempo indicado por el fabricante
FORMA DE REPORTE
pH de 5 a 9
DENSIDAD de 1000 a 1030
LEUCOCITOS 0 a 500 Leucocitos por μl
NITRITOS Positivo oacute Negativo
PROTEIacuteNA 0 a 1000 mg por dL
GLUCOSA 0 - 1000 mg por dL
CUERPOS CETOacuteNICOS de una cruz a tres cruces
UROBILINOacuteGENO de lt1 a 12 mg por dL
BILIRRUBINA de una cruz a tres cruces
SANGREHEMOGLOBINA de 0 a 250 eritrocitos por μL
Siempre que en la tira reactiva no se observe un cambio de color se reportaraacute
como negativo
Valores de referencia
pH de 5 a 6
DENSIDAD de 1005 a 1010
LEUCOCITOS 0 Leucocitos por μl
NITRITOS Negativo
PROTEIacuteNA 0 mg por dL
GLUCOSA 0 mg por dL
CUERPOS CETOacuteNICOS Negativo
UROBILINOacuteGENO lt1 mg por dL
BILIRRUBINA Negativa
SANGRE 0 eritrocitos por μL
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DETERMINACION DE PROTEINURIA
AacuteCIDO SULFOSALICIacuteLICO
Esta teacutecnica se basa en la utilizacioacuten de aacutecido sulfosaliciacutelico cuya propiedad es
precipitar proteiacutenas en ausencia de calor Para esta prueba se usa el reactivo de
Exton en cuya composicioacuten se encuentra dicho aacutecido
Reactivo de Exton
Disolver 88g de sulfato de sodio en 600 ml de agua destilada con ayuda de calor
Enfriar Luego agregar 50 g de aacutecido sulfosaliciacutelico y diluir a 1000 ml
Procedimiento
1-Centrifugar una aliacutecuota de orina y luego utilizar el liacutequido sobrenadante
liacutempido
2- En un tubo de ensayo colocar voluacutemenes iguales del sobrenadante y del
reactivo de Exton Mezclar por inversioacuten y apreciar la turbidez
Interpretar de acuerdo a las siguientes pautas
Negativo No existe turbidez
Trazas Turbidez visible sobre fondo negro
1(+) Se observa turbidez pero no es granular
2(++) Se observa turbidez y es granular
3(+++) La turbidez es considerable y existe aglutinacioacuten
4(++++) Nubosidad densa con masas aglutinadas de gran tamantildeo
El procedimiento de Exton es maacutes sensible que el meacutetodo de las tiras reactivas
Pueden observarse falsos positivos en los tratamientos con tolbutamina penicilina
sulfamidas y despueacutes de la administracioacuten de sustancias de contraste radioloacutegico
Asimismo las orinas muy alcalinas suelen dar resultados negativos falsos
PRUEBA DEL ACIDO ACETICO Y CALOR
Se basa en la precipitacioacuten de proteiacutenas llevando el pH de la orina al valor del
punto isoeleacutectrico al agregar el aacutecido aceacutetico Tambieacuten el calor torna a las
proteiacutenas insolubles provocando su coagulacioacuten
Procedimiento
Laboratorio Cliacutenico PAULINA ARROLLO PEREacuteZ
1- Centrifugar 10 ml de orina y luego separar el sobrenadante a un tubo de
ensayo El tubo debe estar lleno en las 23 partes
2-Hervir la parte superior del tubo por 2 minutos a la llama ( El tubo debe ser
sostenido formando un aacutengulo sobre la llama y apuntando en direccioacuten opuestas al
cuerpo) Si aparece turbidez puede deberse a la presencia de proteiacutenas fosfatos
y carbonatos
3- Agregar 3 a 5 gotas de aacutecido aceacutetico al 5 o 10 y volver a hervir la parte
superior del tubo a la llama El aacutecido disolveraacute los fosfatos o carbonatos que
puede ser la causa de la turbidez Ademaacutes disminuye el pH llevaacutendolo maacutes
proacuteximo al punto isoeleacutectrico de las proteiacutenas y en consecuencia eacutestas precipitan
aumentando la turbidez
4- Los resultados seraacute dados con la misma escala del reactivo de Exton
Esta teacutecnica detecta albuacuteminas globulinas mucoproteiacutenas e incluso las proteiacutenas
de Bence Jones La hemoglobina y la mioglobina no precipitan con este meacutetodo
La tolbutamida dosis elevadas de penicilina y sustancias de contraste radioloacutegico
pueden resultados positivos falsos Orinas muy alcalinas y orinas muy diluidas
pueden dar resultados negativos falsos
DETERMINACION DE GLUCOSURIA
TECNICA DE BENEDICT
Tiene como fundamento la reduccioacuten del ioacuten cuacuteprico color azul a cuproso que da
un precipitado rojo ladrillo en presencia de glucosa en caliente y en medio alcalino
fuerte
Reactivo
Sulfato de cobre 173 g
Citrato de sodio o de potasio 173g
Cristales de carbonato de sodio 200g
O carbonato de sodio anhiacutedro 100g
Agua destilada para completar 1000ml
Laboratorio Cliacutenico PAULINA ARROLLO PEREacuteZ
Disolver el citrato y el carbonato en 700ml de agua con ayuda de calor Filtrar y
disolver con el sulfato de cobre en aprox 100ml de agua caliente y vertirlo en la
solucioacuten de citrato-carbonato revolviendo Dejar que se enfriacutee antes de diluir hasta
completar los 1000 ml con agua
Procedimiento
1-Colocar 5ml del reactivo de Benedict en un tubo de ensayo
2- Agregar 8 gotas de orina Mezclar por inversioacuten
3- Llevar el tubo con la mezcla preparada a bantildeo Mariacutea durante 5 minutos o
calentar a la llama hasta su ebullicioacuten durante 1 a 2 minutos
4- Dejar que se enfriacutee lentamente
Se informa de acuerdo a las pautas correspondientes
Negativa Color azul claro puede formarse un precipitado azul
Trazas Color verde azulado
1(+) Color verde precipitado verde o amarillo
2(++) Color amarillo a verde precipitado amarillo
3(+++) Color amarillo-anaranjado precipitado amarillo-anaranjado
4 (++++) Color amarillo-rojizoprecipitado rojo ladrillo o rojo
Este procedimiento es sensible y de puede detectar hasta concentraciones de
002 Dosis aumentadas de penicilina estreptomicina salicilatos
oxitetraciclinas polivinilpirrolidona dextraacuten y el aacutecido p-aminosaliciacutelico dan
reacciones positivos falsos Los conservadores con formalina y formaldehiacutedo
pueden dar lugar tambieacuten a falsos positivos
INVESTIGACION DE CUERPOS CETONICOS
REACCION DE ROTHERA
Es una teacutecnica que usa nitroprusiano y permite la formacioacuten de un anillo Permite
la determinacioacuten del aacutecido diaceacuteticoacetona no permite la deteccioacuten del aacutecido B-
hidroxibutiacuterico
Reactivos
1) Reactivo de Rothera compuesta por 75 g de nitroprusiato de sodio y
200mg de sulfato de amonio
2) Hidroacutexido de amonio concentrado
Laboratorio Cliacutenico PAULINA ARROLLO PEREacuteZ
Procedimiento
1) En un tubo de ensayo agregar 1g de reactivo de Rothera con 5 ml de orina
Mezclar por inversioacuten
2) Luego agregar 1ml de hidroacutexido de amonio concentrado
3) Si la prueba es positiva se forma un anillo rojo a puacuterpura en el tiempo de
112 minuto en el punto de contacto
Dar los resultados seguacuten la siguiente pauta
Negativa No se forma el anillo o la formacioacuten de un anillo marroacuten
Trazas La formacioacuten de un anillo puacuterpura o de color rosado
2(+) La formacioacuten de un anillo puacuterpura oscuro estrecho limitado
4 (++++) La formacioacuten de un anillo puacuterpura oscuro extenso
DETECCION DE SANGRE EN ORINA (SANGRE OCULTA)
PRUEBA DE BENCIDINA
Reactivo A
Solucioacuten de Bencidina al 1 en aacutecido aceacutetico al 50
Peroacutexido de hidroacutegeno de 10 voluacutemenes
Procedimiento
En un tubo o sobre un papel filtro( en este caso ldquomancharrdquo el papel con la muestra
en estudio)
2 ndash 4 gotas de bencidina
Agregar 2 ndash 4 gotas de peroacutexido de hidroacutegeno (agua oxigenada)
Interpretacioacuten
Si existe sangre se formaraacute un halo verde azulado
Negativo halo marroacuten
Reactivo B
Solucioacuten de Piramidoacuten al 5 en aacutecido aceacutetico al 50
Peroacutexido de hidroacutegeno de 10 voluacutemenes
La solucioacuten de piramidoacuten puede ser preparada sin aacutecido aceacutetico por lo tanto el
orden de uso es piramidoacuten acido aceacutetico agua oxigenada Resultado
Laboratorio Cliacutenico PAULINA ARROLLO PEREacuteZ
DETERMINACION DE BILIRRUBINA Y UROBILINOGENO
REACCION DEL YODO DE SMITH (BILIRRUBINAS)
En un tubo de ensayo colocar 5ml de orina aacutecida y cubrirla con 2ml de una
solucioacuten de yodo al 07 en alcohopl etiacutelico al 95 La presencia de un anillo de
color verde esmeralda en la interfase de ambos liacutequidos indica la presencia de
bilirrubina
La deteccioacuten de urobilinoacutegeno en orina tambieacuten indican un problema hepaacutetico Uno
de los problemas importantes en la deteccioacuten de urobilinoacutegeno
REACCION CUANTITATIVA DE EHRLICH
Reactivo de Ehrlich
p-dimetilanminobenzaldehiacutedo 10g
HCl concentrado 75ml
Agua destilada 75ml
Procedimiento
1- Colocar 10ml de orina en un tubo de ensayo recieacuten emitida
2- Agregar 1ml del reactivo de Ehrlich
3- Dejar en reposo durante 5 minutos
La presencia urobilinoacutegeno determina que la solucioacuten cambie de color niveles
altos y dan un color rojo cereza
Laboratorio Cliacutenico PAULINA ARROLLO PEREacuteZ
E PRACTICA 3
DEPURACION DE CREATININACREATININA Generalidad
La creatinina es una sustancia que deriva del metabolismo muscular
(muacutesculo estriado liso y cardiacuteaco) de la creatina y representa el
subproducto de excrecioacuten La produccioacuten de creatinina es independiente
de la dieta y del ejercicio muscular sin embargo es proporcional dentro
de ciertos liacutemites a la masa muscular Se libera de los glomeacuterulos y no
es reabsorbida por los tuacutebulos de los cuales puede ser excretada
especialmente cuando se aumenta la concentracioacuten hemaacutetica El
aumento de la creatinina en el suero empieza a ser evidente cuando el
filtrado glomerular es por debajo de 60 ml por minuto
Indicaciones
La determinacioacuten de la cratinina es utilizada en el diagnoacutestico de las
enfermedades renales agudas o croacutenicas y tambieacuten para el monitoreo
de la diaacutelisis renal El aumento de la creatinina es un iacutendice de la
insuficiencia glomerular en cuanto eacutesta es eliminada por filtracioacuten
glomerular Mientras la uremia en la sangre puede ser controlada a
traveacutes de una oportuna dieta la creatinina se correlaciona casi
exclusivamente a la eficiencia de la filtracioacuten glomerular La creatinina
representa el iacutendice maacutes fiel de la insuficiencia renal
Preparacioacuten del paciente
Ayuno
Modalidad de la toma de muestra
Ninguna particularidad
Transporte
Transportar a temperatura ambiente
Conservacioacuten
Centrifugacioacuten y separacioacuten del suero la toma de muestra se puede
conservar por 1 diacutea a temperatura ambiente de 20-25oC 7 diacuteas 2-4oC y
6 meses en congelacioacuten
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Centrifugacioacuten
Poner el tubo de ensayo en la centriacutefuga de modo balanceado poner el
reloj 5 minutos y centrifugar por 3000 rpm Verificar la idoneidad del
suero o plasma ictericia presencia de coaacutegulos filamentos de fibrina
turbidez Sentildealar eventualmente en el resultado la no idoneidad de la
muestra
Metoacutedicas de determinacioacuten
Meacutetodo cineacutetico enzimaacutetico
El meacutetodo enzimaacutetico colorimeacutetrico consiste en la medida del color
desarrollado con el reactivo de Jaffe antes y despueacutes de una reaccioacuten
con la enzima especiacutefica la creatincinasa esta enzima transforma la
creatinina en creatina con medida final a 340 nm de la creatina
Meacutetodo colorimeacutetrico y procedimiento analiacutetico
Ademaacutes de la determinacioacuten de la creatinina con una teacutecnica de punto
final maacutes frecuentemente se utiliza una teacutecnica cineacutetica en la cual la
creatinina en medio alcalino reacciona con picrato produciendo un
complejo coloreado rojo-naranja la diferencia de absorcioacuten durante el
tiempo de conversioacuten es directamente proporcional a la concentracioacuten
de creatinina en la muestra
Creatinina + aacutecido piacutecrico mdashmdashmdashgt creatinina picrato (complejo)
Materiales
1048664 Guantes descartables no esteacuteriles
1048664 Tubos de ensayo 13 x 100 mm
1048664 Puntas de pipeta 10-100 ul
1048664 1048664 Puntas de pipeta 100-1000 ul
1048664 1048664 Centriacutefuga
1048664 Espectrofotoacutemetro
1048664 Bantildeo Mariacutea
1048664 Reloj marcador
1048664 Pipetas automaacuteticas 10-100 ul
1048664 Pipetas automaacuteticas 100-1000 ul
Laboratorio Cliacutenico PAULINA ARROLLO PEREacuteZ
Procedimiento
Seguir las instrucciones de la casa comercial
Control de Calidad
Se deberaacuten usar sueros control normal y patoloacutegico en las mismas
condiciones que las muestras
Notas sobre la metoacutedica
Linealidad
Es lineal hasta 250 mgdl
Sensibilidad
Su sensibilidad es 01 mgdl
Especificidad
La metoacutedica es especiacutefica para la creatinina
Las muestras de suero tienen proteiacutenas que pueden reaccionar no
especiacuteficamente con el meacutetodo Jaffe es necesario corregir el valor de
03 mgdl para lograr valores maacutes correctos
Interferencias
Las interferencias maacutes significativas son
Hemoacutelisis con Hb ge100 gl
Icteacuterico bilirrubina ge400 mgdl
Lipemia trigliceacuteridos ge20000 mgdl
Acetona ge500 mgdl
Algunos antibioacuteticos como las cefalosporinas pueden dar valores
falsamente elevados
Valor de referencia
Hombres Hasta 13 mgdl
Mujeres Hasta 11 mgdl
Neonatos o nintildeos Hasta 07 mgdl
Criterios de validacioacuten
Confrontar paraacutemetros de funcionalidad renal (urea potasio proteiacutenas
densidad urinaria)
Confrontar paraacutemetros de equilibrio electroliacuteticos (sodio potasio cloro)
Laboratorio Cliacutenico PAULINA ARROLLO PEREacuteZ
Controlar sexo y edad del paciente y tambieacuten eventual estado de
embarazo
Controlar paraacutemetros del metabolismo muscular (CPK miacuteoglobulina)
DEPURACION DE CREATININA
Generalidad
La cantidad de creatinina excretada con la orina estaacute en relacioacuten con la
filtracioacuten glomerular La creatinina es una sustancia que deriva del
metabolismo muscular (muacutesculo estriado liso y cardiacuteaco) de la creatina
y representa el subproducto de excrecioacuten La produccioacuten de creatinina
es independiente de la dieta y del ejercicio muscular sin embargo es
proporcional dentro de algunos liacutemites a la masa muscular Se libera
desde los glomeacuterulos y no es reabsorbida por los tuacutebulos de los cuales
puede ser excretada especialmente cuando se aumenta la
concentracioacuten hemaacutetica El aumento de la creatinina en el suero
empieza a ser evidente cuando el filtrado glomerular es por debajo de
60 ml por minuto
La medida de la cantidad de creatinina en la orina producida en un
determinado periacuteodo de tiempo simultaacuteneamente a la medida de la
concentracioacuten plasmaacutetica lleva al caacutelculo el aclaramiento de la
creatinina (volumen del plasma en ml que es depurado de la creatinina
en un minuto de tiempo)
C= U x VP (mlmin)
donde
C= aclaramiento
U= concentracioacuten de creatinina en la orina
V= volumen de la orina eliminada
P= concentracioacuten de creatinina en el plasma
Indicaciones
La estrecha correlacioacuten entre la velocidad de filtracioacuten glomerular y el
valor de la creatinina plasmaacutetica y el hecho que la concentracioacuten de la
creatinina hemaacutetica no es influenciada por la dieta hacen de la
Laboratorio Cliacutenico PAULINA ARROLLO PEREacuteZ
creatinina en particular el aclaramiento de la creatinina un iacutendice de
funcionalidad renal muy sensible y seguramente maacutes significativo que la
urea
El aclaramiento de la creatinina se modifica en relacioacuten con la
enfermedad renal (glomerulonefritis agudas o croacutenicas rintildeoacuten policiacutestico
obstruccioacuten de la viacutea renal)
Preparacioacuten del paciente
Ayuno
Modalidad de la toma de muestra
A) Recoger la orina de 24 horas con el siguiente procedimiento
Para la recoleccioacuten de orina de 24 horas se tiene que utilizar un frasco
de 25 30 litros de boca ancha con tapoacuten de rosca Antildeadir al frasco un
estabilizante si es necesario
Para la recogida de la orina se procede del modo siguiente
a) En el tiempo preestablecido vaciar la vejiga e eliminar toda la
orina
b) Posteriormente comenzar a recoger toda la orina de 24 horas
c) Al cumplir las 24 horas vaciar de nuevo la vejiga y depositar toda
la orina en el frasco Conservar las orinas a 2-4degC
Al finalizar la recoleccioacuten de orina eacutesta debe ser enviada
inmediatamente al laboratorio
B) Cuando se entrega la muestra de orina es necesario efectuar la toma
de muestra de sangre
Transporte
La muestra de orina debe ser transportada de 2-4degC la muestra de
sangre a temperatura ambiente
Conservacioacuten
Centrifugacioacuten y separacioacuten del suero la toma de muestra se puede
conservar por 1 diacutea a temperatura ambiente de 20-25oC 7 diacuteas 2-4oC y
6 meses en congelacioacuten
Conservar las orinas a 2-4degC
Laboratorio Cliacutenico PAULINA ARROLLO PEREacuteZ
Verificacioacuten de la muestra
Verificar que el registro de la toma de muestra esteacute correcto
Metoacutedica de determinacioacuten
Cu x Vmin
Aclaramiento de la creatinina = mdashmdashmdashmdashmdashmdashmdashmdashmdashmdashmdashmdash
Ps
donde
Cu= concentracioacuten de creatinina en la orina expresado en mgdl
Ps = concentracioacuten de creatinina en suero expresado en mgdl
Vmin= volumen por minuto (cantidad de la diuresis entre 1440)
Procedimiento analiacutetico
Ver metoacutedica de la creatinina
Notas sobre la metoacutedica
Linealidad
Referirse a las metoacutedicas de creatinina Es lineal hasta 250 mgdl
Sensibilidad
Referirse a las metoacutedicas de creatinina Su sensibilidad es 01 mgdl
Especificidad
Referirse a las metoacutedicas de creatinina
Las muestras de suero tienen proteiacutenas que pueden reaccionar no
especiacuteficamente con el
meacutetodo Jaffe Es necesario corregir el valor de 03 mgdl para lograr
valores maacutes correctos
Interferencias
Las interferencias significativas se deben
Para las orinas
Presencia de partiacuteculas en suspensioacuten (centrifugar las orinas)
Mala recoleccioacuten de orina
Presencia de bacterias de barbituacutericos de cuerpos cetoacutenicos
Para la sangre
Hemoacutelisis con Hb ge100 gl
Laboratorio Cliacutenico PAULINA ARROLLO PEREacuteZ
Icteacuterico bilirrubina ge400 mgdl
Lipemia trigliceacuteridos ge20000 mgdl
Acetona ge500 mgdl
Valor de referencia
ge70mlmin
PRACTICA 4
EXAMEN MICROSCOacutePICO DEL SEDIMENTO URINARIO
PROPOacuteSITO
Observar microscoacutepicamente en el sedimento urinario elementos celulares
cilindros cristales paraacutesitos filamentos mucoides y bacterias Con el fin
de sugerir una patologiacutea del tracto urinario u otras enfermedades que esteacuten
en diferente localizacioacuten
MUESTRA REQUERIDA
15 mL de orina
MATERIALES
- Tubos coacutenicos de 15 mL
- Laacuteminas portaobjetos
- Laminillas cubreobjetos
- Marcador para vidrio
- Gradillas para tubos
- Guantes descartables
EQUIPO
- Reloj marcador
- Centriacutefuga
- Microscopio
PROCEDIMIENTO
- Centrifugar durante 5 minutos a 2500 rpm
- Descartar el liacutequido sobrenadante
- Suspender el sedimento urinario golpeando ligeramente con la mano
Laboratorio Cliacutenico PAULINA ARROLLO PEREacuteZ
- Colocar una gota de sedimento entre un porta y un cubreobjeto
- Observar la preparacioacuten con el objetivo 10x para lograr una visioacuten general del
sedimento
- Identificar los elementos formes a mayor aumento 40x
- Anotar lo observado
FUENTES DE ERROR
- Usar portaobjetos y cubreobjetos sucios
- Desecacioacuten del sedimento urinario
-Tiempo transcurrido desde la toma de la muestra hasta la observacioacuten
microscoacutepica
- Uso excesivo de luz
- Centrifugacioacuten inadecuada
FORMA DE REPORTE
CEacuteLULAS EPITELIALES ESCAMOSAS Y REDONDAS reportar escasas
moderadas o abundantes
GLOacuteBULOS ROJOS Reportar el nuacutemero estimado por campo
LEUCOCITOS Reportar el nuacutemero estimado por campo
CILINDROS se pueden encontrar en la orina los siguientes cilindros
hialinos granulosos finos y gruesos leucocitarios hemaacuteticos grasos y ceacutereos
Reportar el nuacutemero de cilindros observados por campo
FILAMENTOS MUCOIDES reportar escasos moderados o abundantes
CRISTALES se pueden encontrar en la orina los siguientes cristales oxalatos de
calcio acido uacuterico uratos amorfos fosfatos amorfos fosfatos triples urato de
amonio leucina cistina y tirosina
Reportar en la forma siguiente escasos moderados o abundantes
LEVADURAS Reportar escasos moderada y abundantes
PARAacuteSITOS Se pueden encontrar en orina Trichomonas vaginalis Phitirus pubis
huevos y quistes de paraacutesitos por contaminacioacuten con heces
BACTERIAS Reportar la presencia de bacterias moderadas o abundantes
solamente cuando se observen maacutes de 10 leucocitos por campo
Valores de referencia
Laboratorio Cliacutenico PAULINA ARROLLO PEREacuteZ
CEacuteLULAS EPITELIALES ESCAMOSAS Escasas a moderadas
CEacuteLULAS EPITELIALES REDONDAS No deben observarse
GLOacuteBULOS ROJOS No deben observarse
LEUCOCITOS 0-5 por campo
CILINDROS No deben observarse
FILAMENTOS MUCOIDES No deben observarse
CRISTALES Podriacutean observarse oxalatos uratos y fosfatos amorfos de escasa a
moderada cantidad
LEVADURAS No deben observarse
PARAacuteSITOS No deben observarse
BACTERIAS Escasas o no presentes
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PRACTICA 6
UROCULTIVO Y ANTIBIOGRAMA
OBTENCIOacuteN DE MUESTRA DE ORINA PARA CULTIVO
Condiciones generales
La orina es un excelente medio de cultivo para la proliferacioacuten bacteriana por esta
razoacuten la muestra debe ser procesada dentro de las 2 horas despueacutes de haber
sido obtenida o debe refrigerarse a 4 degC (maacuteximo 24 horas) hasta su
procesamiento
Generalmente el desarrollo de dos o maacutes tipos de colonias (en pacientes sin
sonda vesical) indican que la muestra se ha contaminado por recoleccioacuten
incorrecta o demora en la siembra
OBTENCIOacuteN DE MUESTRA DE ORINA DEL CHORRO MEDIO
Obtencioacuten de muestras de orina en pacientes mujeres Materiales y equipos
a) Guantes de laacutetex esteacuteriles
b) Cinco o maacutes piezas de gasa esteacuteril de tamantildeo adecuado pudiendo
ser de 4rdquo x 4rdquo
c) Jaboacuten
d) Agua tibia esteacuteril
e) Frasco esteacuteril de boca ancha para la muestra de orina
Procedimiento
a) Mantener la privacidad de la paciente
b) Rotular el frasco con el nombre de la paciente fecha de obtencioacuten de la
muestra hora y el procedimiento usado para la obtencioacuten de la muestra
c) Lavarse las manos con jaboacuten y abundante agua
Laboratorio Cliacutenico PAULINA ARROLLO PEREacuteZ
d) Preparar una pieza de gasa para la limpieza de los genitales externos
humedicieacutendola con agua y una pequentildea cantidad de jaboacuten Preparar dos piezas
maacutes de gasa para el enjuague con agua tibia
e) Separar los labios mayores con dos dedos de una mano y limpiar el aacuterea
expuesta pasando la gasa de adelante hacia atraacutes
f) Descartar la gasa
g) Con otra gasa humedecida enjuagar el aacuterea de adelante hacia atraacutes Repetir el
procedimiento con otra gasa
h) Finalmente secar el aacuterea de adelante hacia atraacutes con un trozo de gasa seca
i) Mantener separados los labios mayores mientras la paciente empieza a orinar
Luego del chorro inicial colocar el frasco esteacuteril para colectar el chorro medio
j) Al terminar la recoleccioacuten tapar el frasco inmediatamente y limpiarle la
superficie
k) Transportar el frasco con la muestra de orina inmediatamente
Obtencioacuten de muestra de orina en pacientes varones
Materiales
a) Guantes de laacutetex
b) Cinco o maacutes piezas de gasa esteacuteril
c) Jaboacuten
d) Agua tibia esteacuteril
e) Frasco esteacuteril de boca ancha para la obtencioacuten de la muestra
Procedimiento
a) Mantener la privacidad del paciente
b) Rotular el frasco con el nombre del paciente fecha de obtencioacuten de la muestra
hora y el procedimiento usado para la obtencioacuten de la muestra
c) Lavarse las manos con jaboacuten y abundante agua
d) Preparar una pieza de gasa con agua y una pequentildea cantidad de jaboacuten
Preparar dos piezas maacutes de gasa para el enjuague con agua tibia
e) Realizar la higiene de los genitales Retraer el prepucio antes de lavar el glande
con la gasa humedecida con jaboacuten Descartar la gasa
Laboratorio Cliacutenico PAULINA ARROLLO PEREacuteZ
f) Enjuagar el glande usando una gasa huacutemeda Repetir el procedimiento con otra
gasa
g) Secar la zona usando uno o maacutes piezas de gasa seca
h) Indicar al paciente que mantenga el prepucio retirado e inicie la miccioacuten
directamente en un recipiente (orina para descartar)
i) Despueacutes del chorro inicial colocar el frasco esteacuteril para colectar la muestra del
chorro medio
j) Obtenida la muestra tapar el frasco inmediatamente y limpiarle la superficie
k) Transportar el frasco con la muestra de orina inmediatamente al laboratorio
SIEMBRA PRIMARIA DE MUESTRA DE ORINA
Objetivo
Describir el procedimiento para la siembra primaria de muestra de orina
Campo de aplicacioacuten
Se aplica para el cultivo de muestra de orina en el diagnoacutestico bacterioloacutegico de
infecciones del tracto urinario
Materiales y equipos
a) Asa calibrada de platino o descartable de 0001 mL oacute 001 mL
b) Estufa de 35 ndash 37 degC
c) Mechero Bunsen o cabina de flujo laminar
d) Guantes de laacutetex
e) Contenedor de material contaminado
f) Pinza esteacuteril
g) Propipeta o pipetor automaacutetico
h) Medios de cultivo
ndash Placas con agar sangre de carnero (AS)
ndash Placas con agar Mc Conkey (McC)
Procedimiento
a) Mantener las muestras en refrigeracioacuten (4 degC) hasta su procesamiento por
cultivo
Laboratorio Cliacutenico PAULINA ARROLLO PEREacuteZ
b) Los cultivos deben realizarse en una cabina de bioseguridad o cerca del
mechero Bunsen
c) Las placas con AS y McC que se utilizaraacuten en el urocultivo deben estar a
temperatura ambiente Rotular las placas
d) Si el asa calibrada no es descartable esterilizar el asa de siembra flameacuteandola
en el mechero Bunsen hasta que se ponga rojo vivo Dejar enfriar el asa
e) Tomar el frasco con la muestra de orina abrir la tapa y flamear la boca del
frasco en el mechero Bunsen
f) Tomar la muestra de orina con el asa de siembra esteacuteril introducieacutendola y
sacaacutendola del frasco en forma vertical Tapar el frasco con la muestra
g) Inocular en el centro de la placa con AS a partir del cual se extiende la muestra
hacia delante y hacia atraacutes
h) Luego sin quemar el asa el inoacuteculo se disemina uniformemente con trazos
perpendiculares a la siembra inicial en toda la placa
i) Proceder de la misma forma para el agar Mc Conkey
Laboratorio Cliacutenico PAULINA ARROLLO PEREacuteZ
Lectura
a) Realizar la evaluacioacuten a las 24 horas si no hay crecimiento bacteriano dejar
incubar hasta las 48 horas
b) La evaluacioacuten consiste en realizar el recuento de colonias cuyo resultado se
multiplica por el factor de dilucioacuten para obtener las UFC por mL
Interpretacioacuten
a) En pacientes sin sonda vesical la cuenta significativa de bacterias en orina es
la presencia de maacutes de 105 UFC mL de un solo germen
b) Los recuentos intermedios (103 ndash 104 UFCmL) indican infeccioacuten si el
procedimiento de recoleccioacuten de orina fue realizado correctamente
c) Generalmente el aislamiento de tres o maacutes especies bacterianas indican que la
muestra se ha contaminado por recoleccioacuten inadecuada o demora en la siembra
d) En pacientes con sonda vesical cuentas bacterianas menores de 105 UFCmL
pueden tener significado asiacute tambieacuten se pueden encontrar bacteriurias
polimicrobianas hasta en casi 15 de enfermos
Laboratorio Cliacutenico PAULINA ARROLLO PEREacuteZ
e) En pacientes sin cateacuteter se puede comprobar si el procedimiento de obtencioacuten
de muestra fue realizado correctamente observando la frecuencia con la cual se
informan recuentos de colonias intermedias entre 103 ndash 104 UFCmL En
pacientes sin infecciones del tracto urinario el recuento es nulo o se reduce a
pocas colonias
IDENTIFICACION BACTERIANA
Lectura de cultivos en agar Mac Conkey
ndash En agar Mc Conkey Escherichia coli lactosa positiva forma colonias de borde
entero de color fucsia opacas de 2 mm ndash 3 mm de diaacutemetro usualmente
rodeadas de una zona opaca alrededor de la colonia (bilis precipitada) Las cepas
de E coli que son lactosa negativa dan colonias incoloras de 3 ndash 4 mm
ndash En agar Mc Conkey K pneumoniae forma colonias de borde entero de color
rosado a rosado oscuro de 3 ndash 4 mm de diaacutemetro y aspecto mucoide
ndash En agar Mc Conkey Enterobacter spp forma colonias de borde entero de color
rosado de 2 ndash 4 mm de diaacutemetro no tan mucoides como K pneumoniae
Las colonias con estas caracteriacutesticas son subcultivadas en medios diferenciales
PRUEBAS BIOQUIMICAS
TSI
Lectura
Es importante hacer la lectura entre las 18 ndash 24 horas para no obtener resultados
erroacuteneos La lectura se hace sobre la base de tres caracteriacutesticas Utilizacioacuten de
hidratos de carbono produccioacuten de gas y produccioacuten de aacutecido sulfhiacutedrico
Utilizacioacuten de hidratos de carbono
ndash Utilizacioacuten de lactosa Reaccioacuten aacutecida en el pico de flauta (color amarillo)
Abreviatura (A)
ndash Utilizacioacuten de glucosa Reaccioacuten aacutecida en la columna del medio (color amarillo)
Abreviatura (A)
Laboratorio Cliacutenico PAULINA ARROLLO PEREacuteZ
ndash No hay utilizacioacuten del carbohidrato Se puede observar una reaccioacuten alcalina
(color rojo) o que no hay cambio de color (permanece del mismo color que el
medio no inoculado) Abreviaturas (K) o (N) respectivamente
Nota Cuando el microorganismo tambieacuten produce H2S el precipitado negro
puede ocultar la acidez
Produccioacuten de gas de glucosa
ndash Se considera positivo Presencia de una sola burbuja de gas burbujas en el
medio divisioacuten del medio desplazamiento completo del medio del fondo del tubo
dejando un aacuterea clara o una ligera muesca del medio en el costado del tubo
ndash Se registra la lectura por medio de cruces (+)
Produccioacuten de aacutecido sulfhiacutedrico
ndash Se manifiesta por un color negro distribuido por toda la columna del medio de
cultivo o soacutelo en la parte superior
ndash Se registra la lectura por medio de cruces (+)
Resultados
Ejemplo de simbolizacioacuten e interpretacioacuten
KA ndash+ Significa alcalinidad en la inclinacioacuten y acidez en el fondo (fermentacioacuten de
glucosa) gas negativo y H2S positivo
NN ndash ndashSignifica que no hay utilizacioacuten de la lactosa y glucosa ni produccioacuten de
H2S
AGAR LISINA HIERRO
En este medio se determina simultaacuteneamente la produccioacuten de lisina
descarboxilasa y de la formacioacuten de aacutecido sulfhiacutedrico
Lectura
Es importante hacer la lectura entre las 18 ndash 24 horas si la lectura se realiza antes
podemos obtener resultados falsos positivos asiacute como falsos negativos si se lee
despueacutes de las 24 horas Realizar la lectura en la columna y en la superficie
inclinada y observar la formacioacuten de aacutecido sulfhiacutedrico el cual se evidencia por una
coloracioacuten negra
Nota Generalmente las cepas del grupo Proteus y Providencia desaminan la
lisina a aacutecido ndashcetocarboacutenico Este uacuteltimo forma compuestos pardo-rojizos en la
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regioacuten superficial del medio de cultivo con la sal de hierro y bajo la influencia del
oxiacutegeno
Recomendaciones
No incubar maacutes del tiempo necesario para no ocasionar una alcalinizacioacuten en la
superficie del medio y por lo tanto producir un viraje hacia el violeta
UTILIZACIOacuteN DE CITRATO
Para determinar si un microorganismo es capaz de utilizar citrato como uacutenica
fuente de carbono para su metabolismo
Procedimiento
a) Incubar a 35ndash37 degC de 24 horasndash 48 horas En algunos casos es necesario una
incubacioacuten hasta por 4 diacuteas
b) Ver el viraje de color
Resultados
a) Prueba positiva Crecimiento con un color azul intenso en el pico de flauta o
presencia de colonias en ausencia del color azul
b) Prueba negativa No se observa crecimiento ni cambio de color (verde)
Controles
Positivo Enterobacter cloacae
Negativo Escherichia coli
HIDROacuteLISIS DE LA UREA (PRODUCCIOacuteN DE UREASA)
Es uacutetil para determinar la capacidad de un organismo de degradar la urea
formando dos moleacuteculas de amoniaco por accioacuten de la enzima ureasa
Procedimiento
Realizar la lectura despueacutes de 18 horas ndash 24 horas de incubacioacuten observando el
viraje de color
Resultados
Prueba positiva Color rosado intenso en el pico de flauta o todo el agar
Puede haber una reaccioacuten positiva retardada despueacutes de 24 horas y hasta
6 diacuteas de incubacioacuten (algunas cepas de Klebsiella por ejemplo)
Prueba negativa No se produce cambio de color
Controles
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Negativo Escherichia coli
Positivo Klebsiella pneumoniae
MOTILIDAD (MEDIOS SIM O MIO O AGAR MOVILIDAD)
Para determinar si un organismo es moacutevil o inmoacutevil
Procedimiento
Incubar a 35 ndash 37 degC de 24 a 48 horas
Resultados
Positivo Los microorganismos migran de la liacutenea de siembra y se difunden en el
medio provocando turbidez Tambieacuten puede manifestarse semejando
ldquovellosidadesrdquo a lo largo del trazo de siembra
Negativo Se observa un crecimiento bacteriano acentuado siguiendo el trazo de
siembra y el medio circundante se mantiene claro
Controles
Control positivo Escherichia coli
Control negativo Klebsiella pneumoniae
h) Prueba de indol[6]
Es uacutetil para determinar la capacidad de un microorganismo de producir indol a
partir del aminoaacutecido triptoacutefano
Medios y reactivos
Caldo de triptoacutefano o de peptona o caldo de triptona
Reactivo de indol de Kovacs
Procedimiento
Retirar aseacutepticamente 2 mL de caldo de cutivo con 24 horas de incubacioacuten
Agregar 5 gotas de reactivo de Kovacs
Mover suavemente el tubo y realizar la lectura
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ANTIBIOGRAMA
Preparacioacuten del Agar Mueller Hinton
Preparar el medio a partir de la base deshidratada de acuerdo a las
indicaciones del fabricante
Autoclavar y dejar enfriar en bantildeo de agua hasta que alcance los 45degC - 50degC
Repartir el medio en placas petri (60 ml ndash 70 ml o 25 ml ndash 30 ml para placas de
150 mm o 100 mm de diaacutemetro interno respectivamente) de manera que el
grosor del agar en la placa sea de 4 mm
Realizar las pruebas de esterilidad para cada lote de Mueller Hinton incubando
una o dos placas de cada lote a 30degC ndash 35degC durante 24 horas o maacutes Estas
placas utilizadas deben ser luego descartadas
Preparacioacuten del estaacutendar (05 Mc Farland) para el inoacuteculo
Para estandarizar la densidad del inoacuteculo se usa una suspensioacuten de sulfato de
bario (05 de la escala de Mac Farland) como estaacutendar
Preparacioacuten del estaacutendar de turbidez
a Agregar 05 ml de una solucioacuten de BaCl2 0048 M (BaCl22H2O al 1175 PV)
a 995 mL de una solucioacuten de H2SO4 018 M (036 N) (1 VV) en constante
movimiento para mantener la suspensioacuten
b Verificar la densidad correcta del estaacutendar usando un fotocoloriacutemetro oacute
espectrofotoacutemetro cuya absorbancia a 625 nm es 008 a 010 para el estaacutendar 05
de Mc Farland
c Distribuir de 4 ml a 6 ml en tubos con tapa de rosca o tapoacuten de jebe similares a
los que se usaraacuten para preparar el inoacuteculo
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d Ajustar bien las tapas o tapones y conservarlos en la oscuridad a temperatura
ambiente y anotar la fecha de preparacioacuten
e Antes de ser usado agitar vigorosamente dicho estaacutendar de preferencia en un
agitador mecaacutenico
f Verificar mensualmente la densidad de los estaacutendares de sulfato de bario y
reemplazarlo cuando sea necesario
INOCULACIOacuteN
Preparacioacuten del inoacuteculo
Puede realizarse de dos formas
Meacutetodo de desarrollo previo
a Seleccionar cuatro a cinco colonias bien aisladas del mismo tipo morfoloacutegico
de un cultivo en placa
b Tocar la superficie de cada colonia con una asa de siembra y transferirlo a un
tubo que contiene de 4 a 5 mL de caldo apropiado (Ej Caldo Tripticasa soya)
c Incubar el caldo a una temperatura entre 35degC a 37degC hasta que alcance o
exceda la turbidez del estaacutendar 05 de la escala de Mc Farland (por lo general de
2 a 6 horas)
d Ajustar la turbidez del inoacuteculo con solucioacuten salina o caldo apropiado hasta el
tubo 05 de la escala de Mc Farland por comparacioacuten visual con el estaacutendar Para
realizar este paso correctamente usar una luz apropiada y mirar los tubos contra
un fondo blanco con liacuteneas negras como contraste
e La suspensioacuten preparada contendraacute aproximadamente 1 a 2 x 108 UFCmL
Meacutetodo directo de inoculacioacuten a partir de colonias aisladas
a De una placa de cultivo con agar no selectivo e incubada por 18 - 24 h
seleccionar colonias aisladas y preparar una suspensioacutem directa en solucioacuten
salina oacute caldo
b La suspensioacuten debe ser inmediatamente ajustada a la escala 05 de Mc
Farland
Inoculacioacuten de las Placas
Dentro de los 15 minutos siguientes al ajuste de la turbidez del inoacuteculo sumergir
un hisopo esteacuteril en la suspensioacuten rotar el hisopo varias veces presionando
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firmemente sobre la pared interior del tubo por encima del nivel del liacutequido para
remover el exceso de inoacuteculo
Inocular la superficie seca de la placa de Mueller Hinton estriando con el hisopo
en tres direcciones para asegurar una distribucioacuten uniforme del inoacuteculo Antes de
colocar los discos dejar secar la placa a temperatura ambiente durante 3 a 5
minutos para que cualquier exceso de humedad superficial sea absorbido
APLICACIOacuteN DE LOS DISCOS
Colocar los discos individuales o multidiscos sobre la superficie del agar con la
ayuda de una pinza esteacuteril o la punta de una aguja presionando suavemente sobre
cada disco para asegurar un contacto completo con la superficie del agar
Distribuir los discos uniformemente de modo que esteacuten a una distancia miacutenima de
25 mm uno del otro (el diaacutemetro de los discos seguacuten las normas de la
Organizacioacuten Mundial de la Salud (OMS) debe ser de 6 mm) No deben colocarse
maacutes de 12 discos en una placa de 150 mm ni maacutes de 6 en una placa de 100 mm
de diaacutemetro interno para evitar la superposicioacuten de las zonas de inhibicioacuten Un
disco no debe ser removido una vez que tomoacute contacto con la superficie del agar
debido a que algunos antibioacuteticos se difunden raacutepidamente
INCUBACIOacuteN
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Incubar lar placas en posicioacuten invertida a 35degC por 18 a 24 horas dentro de los 15
minutos posteriores a la aplicacioacuten de los discos
Despueacutes del tiempo recomendado de incubacioacuten examinar cada placa y medir los
diaacutemetros de los halos de inhibicioacuten alrededor de cada disco
LECTURA DE LAS PLACAS E INTERPRETACIOacuteN DE LOS RESULTADOS
Medir los diaacutemetros de las zonas de inhibicioacuten completa (incluyendo el diaacutemetro
del disco) usando
una regla o calibrador Se debe mantener iluminada la parte posterior de la placa
petri con una luz reflejada localizada a unos cuantos centiacutemetros sobre un fondo
negro Tener la precaucioacuten de observar la placa siguiendo una vertical directa para
evitar una lectura erroacutenea de las marcas de la regla por efecto de paralelismo En
los medios suplementados con sangre las zonas son medidas en la parte superior
de la superficie del agar y retirando la tapa Tener cuidado de no medir la zona de
la hemoacutelisis sino la de inhibicioacuten del crecimiento
El punto final debe tomarse como el aacuterea que no muestra un crecimiento obvio
visible que puede ser detectado mediante observacioacuten visual no incluyendo velo
de crecimiento o colonias muy pequentildeas que puedan ser detectadas solo con
mucha dificultad en el borde de la zona Sin embargo las colonias mayores
creciendo dentro de la zona clara deberaacuten ser subcultivadas reidentificadas y
reensayadas Algunos Proteus spp debido a su gran movilidad pueden presentar
un velo de invasioacuten o ldquoswarmingrdquo dentro de las zonas de inhibicioacuten de algunos
antibioacuteticos En estos casos el velo del swarming debe ser ignorado al momento
de medir los halos de inhibicioacuten
DISCOS DE SENSIBILIDAD ANTIBIOacuteTICA A INCLUIR EN EL ANTIBIOGRAMA
Grupo I
Ampicilina
Cefalotina
Ampicilina Sulbactam o Amoxicilina Aacutecido Clavulaacutenico
Cefuroxima
Cefotaxima o Ceftriaxona
Gentamicina
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Amikacina
Aacutecido Nalidiacutexico(1)
Norfloxacina(1)
Ciprofloxacina
Cotrimoxazol (TrimetoprimSulfametoxazol)
Nitrofurantoiacutena(1)
Grupo II
Cefoxitina
Aztreonam
Ceftazidima
Cefixima
CefoperazonaSulbactam
Cefepime o Cefpirome
Imipenem o Meropenem
Cloramfenicol
Ofloxacina (1)
(1) Disco utilizado exclusivamente para infecciones de las viacuteas urinarias
Resistencias Naturales
Las enterobacterias son resistentes a Penicilina Oxacilina Macroacutelidos
Clindamicina y Glicopeacuteptidos
Klebsiella spp es resistente a las Aminopenicilinas
Citrobacter freundii Enterobacter cloacae y Enterobacter aerogenes son
resistentes a las Aminopenicilinas AminopenicilinasInhibidores de
betalactamasas Cefalosporinas de primera generacioacuten y Cefuroxima
Serratia marcescens es resistente a las Aminopenicilinas
AminopenicilinasInhibidores de betalactamasas Cefalosporinas de primera
generacioacuten y Cefoxitina
Proteus mirabilis es resistente a Nitrofurantoiacutena
Proteus vulgaris es resistente a las Aminopenicilinas Cefalosporinas de primera
generacioacuten Cefuroxima y Nitrofurantoiacutena
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Morganella morganii es resistente a las Aminopenicilinas
AminopenicilinasInhibidores de betalactamasas Cefalosporinas de primera
generacioacuten Cefuroxima y Nitrofurantoiacutena
Providentia stuartii es resistente a las Aminopenicilinas
AminopenicilinasInhibidores de betalactamasas Cefalosporinas de primera
generacioacuten Gentamicina (bajo nivel) y Nitrofurantoiacutena
ANTIBIOTICOS Y DIAMETROS CRITICOS PARA ENTEROBACTERIAS
E PRACTICA 7
EXAMEN QUIMICO DE CALCULO RENAL
EXAMEN FISICO
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Se debe pesar el caacutelculo y anotar el dato obtenido Medir dos de los diaacutemetros y
tomar nota del aspecto general textura y color y despueacutes de seccionado el
aspecto general la prominencia y el color de los distintos estratos
Se secciona el caacutelculo con una sierra Se raspan las caras con una aguja Se
procede lo mismo con el nuacutecleo Cada una de las muestras obtenidas se trituran
por separado en un mortero
PROCESO
Se coloca una porcioacuten del polvo del caacutelculo en un crisol y se calienta al fuego Si
no hay ennegrecimiento ni se altera el tamantildeo original el caacutelculo estaraacute formado
por sustancias inorgaacutenicas Si en cambio se carboniza desapareciendo estaraacute
formado por sustancias orgaacutenicas Si se funde y se ennegrece este caacutelculo estaacute
formado por sulfamidasa
Una vez obtenidos los datos pueden seleccionarse las reacciones necesarias
para confirmarlos
REACCIONES QUIMICAS
Solucioacuten A
10mg del polvo en matraz y antildeadir 50 ml de ClH 5 Observar si se
produce efervescencia Calentar en bantildeo de agua hirviendo por 10 a 15 minutos y
filtrar en caliente El filtrado se distribuye en 8 tubos numerados y se introduce un
trocito de papel tornasol en cada uno
Solucioacuten B
Agitar con Cl3CH unos 10 mg del polvo Reposar en tubo tapado a
temperatura ambiente hasta que el insoluble haya precipitado Decantar la
solucioacuten clorofoacutermica y guardar igual que el sedimento por separado
Carbonato efervescencia al agregar el CIH por desprendimiento de CO 2
Amonio al tubo 1 de la solucioacuten A se le agrega solucioacuten de OHNa 10 gota a
gota y agitando hasta que el papel tornasol vire
Agregar 1 ml de reactivo de Nessler Un color amarillo oscuro oporto indica
positividad de la reaccioacuten
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El NH 3 formado por los grupos NH 4 en medio alcalino reacciona con el yoiduro
doble del reactivo de Nesler para dar yoduro amoacutenico dimercuacuterico precipitado
pardo anaranjado
Acido uacuterico Neutralizar el contenido del tubo 2 como se explicoacute antes
Agregar igual volumen de CNN Na 2 y 05 ml de reactivo de Folin para aacutecido
uacuterico Un color azul intenso indica presencia de aacutecido uacuterico
El aacutecido uacuterico reduce al aacutecido fosfotuacutengstico en medio alcalino dando color azul
intenso de azul de tungsteno y a su vez se oxida a alantoiacutena
Reactivo fosfotuacutengstico (Folin y Denis) Antes del uso diluir al 10 en agua
destilada
Oxalato de calcio Neutralizar el contenido del tubo 3 Agregar CH 3 COOH 10
hasta reaccioacuten aacutecida al tornasol Precipitado blanco que no se redisuelve por
agitacioacuten indica presencia de oxalato de calcio
Calcio Neutralizar el tubo 4 Acidificar con CH 3 COOH glacial Agregar 2 ml C 2
O 4 ( NH 4 ) 4 Precipitado blancodenso indica presencia de Ca ++
Fosfato Neutralizar el tubo 5 Agregar 1 ml de solucioacuten de molibdato Mezclar
antildeadir 05 ml de aacutecido aminonaftol sulfoacutenico (ANS) 025 Coloracioacuten azul que
aparece en 5 minutos indica fosfatos
El color azul se debe a los oacutexidos reducidos de molibdeno
Reactivos
1 ClH concentrado2 Solucioacuten de OHK 203 NO 3 H concentrado4 Mo O 4 (NH 4 ) 2 disolver 25 g de la droga en 50 ml de SO 4 H 2 10 N y
diluir a 100 ml con H2 O destilada5 Amoniacuteaco
Reactivo ANS En matraz x 250 ml poner 05 g de aacutecido aminonaftolsulfoacutenico y
agrgar 195 ml de bisulfito de sodio 15 y 5 ml de sulfito de sodio 20 Mezclar
bien hasta disolucioacuten Si no se disuelve en media hora agregar maacutes sulfito y
agitar El reactivo dura unas 2 semanas
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Magnesio Neutralizar el tubo 7 con OHNH 4 y antildeadir 1 ml de solucioacuten alcohoacutelica
de p ndash Nitrobenceno azorresorcinol Un cromoacutegeno rojo indica presencia de
magnesio
En medio alcalino se forma (OH) 2 Mg El colorante azo resulta absorbido por el
(OH) 2 Mg en medio alcalino
Xantina A un tercio del residuo de la solucioacuten B agregarle gotas de NO 3 H
concentrado
Se disuelve el residuo sin desprender gas Evaporar a sequedad en bantildeo Mariacutea
hirviente quedando un residuo amarillo Dejar enfriar y humedecer con gotas de
OHNa 10 Una coloracioacuten anaranjada que vira al rojo oscuro al calentar indica
presencia de xantina
La reaccioacuten es la xantoproteica Migracioacuten de los anillos fenilo existentes en la
tirosina fenilalanina y triptoacutefano que da un color amarillo de los productos de
nitrosustitucioacuten para virar al anaranjado tras la adicioacuten de un aacutelcali ( formacioacuten de
la sal)
Nota El reactivo de molibdato se puede preparar asiacute
Solucioacuten 1 SO 4 H 2 01 N
Medir 450 ml de SO4 H 2 concentrado y agregarlos a 1300 ml de agua
destilada
Solucioacuten 2
A 250 ml de SO 4 H 2 01 N antildeadir la solucioacuten de molibdato y llevar con
agua destilada a 250 ml Mezclar
Sulfamidas Neutralizar el uacuteltimo tubo Antildeadir 1 ml de NO 2 Na 05 preparado
recientemente Agitar y reposar por 3 minutos Antildeadir 5 ml de solucioacuten alcohoacutelica
de dimetil-alfa naftilamina 025 Un color rojizo indica presencia de sulfamidas
Finalmente procede hacer mencioacuten de ciertos procedimientos fiacutesicos como la
microscopia de polarizacioacuten difraccioacuten de rayos X cristalografiacutea
espectrofotometriacutea de rayos infrarrojos etc que permiten actualmente un
conocimiento maacutes confiable de la estructura de los caacutelculos
- Reactivos
-
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63 E PRACTICA 2
EXAMEN QUIMICO DE LA ORINA
XAMEN QUIacuteMICO DE ORINAPROPOacuteSITO
Determinar las sustancias quiacutemicas presentes en una muestra de orina asiacute como
su densidad y
pH a traveacutes de las zonas de reaccioacuten presentes en una tira reactiva
MUESTRA REQUERIDA
30 ml de orina Preferible la primera de la mantildeana 10mL de orina en muestra de
nintildeos
MATERIALES Y REACTIVOS
- Frascos plaacutesticos transparente de boca ancha con capacidad de 30 mL
- Bolsa pediaacutetrica recolectora de orina
- Tubos coacutenicos con capacidad de 15 ml
- Gradilla para tubos
- Papel toalla
- Marcador de vidrio
- Guantes descartables
- Tiras reactivas para orina
PROCEDIMIENTO
- Identificar el tubo coacutenico
- Agitar la muestra de orina en forma circular sobre la mesa de trabajo
- Verter la orina en el tubo coacutenico
- Introducir la tira reactiva en la orina
- Eliminar el exceso de orina colocando la tira sobre un papel absorbente
- Esperar el tiempo recomendado por el fabricante para su lectura
- Anotar los resultados
Los cambios de color que aparecen despueacutes de dos oacute maacutes minutos carecen de
importancia diagnoacutestica
FUENTES DE ERROR
- Muestras medicamentosas
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- Frascos y tubos mal lavados
- Tiras reactivas de mala calidad o vencidas
- Cortar las tiras reactivas
- Leer las tiras reactivas despueacutes del tiempo indicado por el fabricante
FORMA DE REPORTE
pH de 5 a 9
DENSIDAD de 1000 a 1030
LEUCOCITOS 0 a 500 Leucocitos por μl
NITRITOS Positivo oacute Negativo
PROTEIacuteNA 0 a 1000 mg por dL
GLUCOSA 0 - 1000 mg por dL
CUERPOS CETOacuteNICOS de una cruz a tres cruces
UROBILINOacuteGENO de lt1 a 12 mg por dL
BILIRRUBINA de una cruz a tres cruces
SANGREHEMOGLOBINA de 0 a 250 eritrocitos por μL
Siempre que en la tira reactiva no se observe un cambio de color se reportaraacute
como negativo
Valores de referencia
pH de 5 a 6
DENSIDAD de 1005 a 1010
LEUCOCITOS 0 Leucocitos por μl
NITRITOS Negativo
PROTEIacuteNA 0 mg por dL
GLUCOSA 0 mg por dL
CUERPOS CETOacuteNICOS Negativo
UROBILINOacuteGENO lt1 mg por dL
BILIRRUBINA Negativa
SANGRE 0 eritrocitos por μL
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DETERMINACION DE PROTEINURIA
AacuteCIDO SULFOSALICIacuteLICO
Esta teacutecnica se basa en la utilizacioacuten de aacutecido sulfosaliciacutelico cuya propiedad es
precipitar proteiacutenas en ausencia de calor Para esta prueba se usa el reactivo de
Exton en cuya composicioacuten se encuentra dicho aacutecido
Reactivo de Exton
Disolver 88g de sulfato de sodio en 600 ml de agua destilada con ayuda de calor
Enfriar Luego agregar 50 g de aacutecido sulfosaliciacutelico y diluir a 1000 ml
Procedimiento
1-Centrifugar una aliacutecuota de orina y luego utilizar el liacutequido sobrenadante
liacutempido
2- En un tubo de ensayo colocar voluacutemenes iguales del sobrenadante y del
reactivo de Exton Mezclar por inversioacuten y apreciar la turbidez
Interpretar de acuerdo a las siguientes pautas
Negativo No existe turbidez
Trazas Turbidez visible sobre fondo negro
1(+) Se observa turbidez pero no es granular
2(++) Se observa turbidez y es granular
3(+++) La turbidez es considerable y existe aglutinacioacuten
4(++++) Nubosidad densa con masas aglutinadas de gran tamantildeo
El procedimiento de Exton es maacutes sensible que el meacutetodo de las tiras reactivas
Pueden observarse falsos positivos en los tratamientos con tolbutamina penicilina
sulfamidas y despueacutes de la administracioacuten de sustancias de contraste radioloacutegico
Asimismo las orinas muy alcalinas suelen dar resultados negativos falsos
PRUEBA DEL ACIDO ACETICO Y CALOR
Se basa en la precipitacioacuten de proteiacutenas llevando el pH de la orina al valor del
punto isoeleacutectrico al agregar el aacutecido aceacutetico Tambieacuten el calor torna a las
proteiacutenas insolubles provocando su coagulacioacuten
Procedimiento
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1- Centrifugar 10 ml de orina y luego separar el sobrenadante a un tubo de
ensayo El tubo debe estar lleno en las 23 partes
2-Hervir la parte superior del tubo por 2 minutos a la llama ( El tubo debe ser
sostenido formando un aacutengulo sobre la llama y apuntando en direccioacuten opuestas al
cuerpo) Si aparece turbidez puede deberse a la presencia de proteiacutenas fosfatos
y carbonatos
3- Agregar 3 a 5 gotas de aacutecido aceacutetico al 5 o 10 y volver a hervir la parte
superior del tubo a la llama El aacutecido disolveraacute los fosfatos o carbonatos que
puede ser la causa de la turbidez Ademaacutes disminuye el pH llevaacutendolo maacutes
proacuteximo al punto isoeleacutectrico de las proteiacutenas y en consecuencia eacutestas precipitan
aumentando la turbidez
4- Los resultados seraacute dados con la misma escala del reactivo de Exton
Esta teacutecnica detecta albuacuteminas globulinas mucoproteiacutenas e incluso las proteiacutenas
de Bence Jones La hemoglobina y la mioglobina no precipitan con este meacutetodo
La tolbutamida dosis elevadas de penicilina y sustancias de contraste radioloacutegico
pueden resultados positivos falsos Orinas muy alcalinas y orinas muy diluidas
pueden dar resultados negativos falsos
DETERMINACION DE GLUCOSURIA
TECNICA DE BENEDICT
Tiene como fundamento la reduccioacuten del ioacuten cuacuteprico color azul a cuproso que da
un precipitado rojo ladrillo en presencia de glucosa en caliente y en medio alcalino
fuerte
Reactivo
Sulfato de cobre 173 g
Citrato de sodio o de potasio 173g
Cristales de carbonato de sodio 200g
O carbonato de sodio anhiacutedro 100g
Agua destilada para completar 1000ml
Laboratorio Cliacutenico PAULINA ARROLLO PEREacuteZ
Disolver el citrato y el carbonato en 700ml de agua con ayuda de calor Filtrar y
disolver con el sulfato de cobre en aprox 100ml de agua caliente y vertirlo en la
solucioacuten de citrato-carbonato revolviendo Dejar que se enfriacutee antes de diluir hasta
completar los 1000 ml con agua
Procedimiento
1-Colocar 5ml del reactivo de Benedict en un tubo de ensayo
2- Agregar 8 gotas de orina Mezclar por inversioacuten
3- Llevar el tubo con la mezcla preparada a bantildeo Mariacutea durante 5 minutos o
calentar a la llama hasta su ebullicioacuten durante 1 a 2 minutos
4- Dejar que se enfriacutee lentamente
Se informa de acuerdo a las pautas correspondientes
Negativa Color azul claro puede formarse un precipitado azul
Trazas Color verde azulado
1(+) Color verde precipitado verde o amarillo
2(++) Color amarillo a verde precipitado amarillo
3(+++) Color amarillo-anaranjado precipitado amarillo-anaranjado
4 (++++) Color amarillo-rojizoprecipitado rojo ladrillo o rojo
Este procedimiento es sensible y de puede detectar hasta concentraciones de
002 Dosis aumentadas de penicilina estreptomicina salicilatos
oxitetraciclinas polivinilpirrolidona dextraacuten y el aacutecido p-aminosaliciacutelico dan
reacciones positivos falsos Los conservadores con formalina y formaldehiacutedo
pueden dar lugar tambieacuten a falsos positivos
INVESTIGACION DE CUERPOS CETONICOS
REACCION DE ROTHERA
Es una teacutecnica que usa nitroprusiano y permite la formacioacuten de un anillo Permite
la determinacioacuten del aacutecido diaceacuteticoacetona no permite la deteccioacuten del aacutecido B-
hidroxibutiacuterico
Reactivos
1) Reactivo de Rothera compuesta por 75 g de nitroprusiato de sodio y
200mg de sulfato de amonio
2) Hidroacutexido de amonio concentrado
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Procedimiento
1) En un tubo de ensayo agregar 1g de reactivo de Rothera con 5 ml de orina
Mezclar por inversioacuten
2) Luego agregar 1ml de hidroacutexido de amonio concentrado
3) Si la prueba es positiva se forma un anillo rojo a puacuterpura en el tiempo de
112 minuto en el punto de contacto
Dar los resultados seguacuten la siguiente pauta
Negativa No se forma el anillo o la formacioacuten de un anillo marroacuten
Trazas La formacioacuten de un anillo puacuterpura o de color rosado
2(+) La formacioacuten de un anillo puacuterpura oscuro estrecho limitado
4 (++++) La formacioacuten de un anillo puacuterpura oscuro extenso
DETECCION DE SANGRE EN ORINA (SANGRE OCULTA)
PRUEBA DE BENCIDINA
Reactivo A
Solucioacuten de Bencidina al 1 en aacutecido aceacutetico al 50
Peroacutexido de hidroacutegeno de 10 voluacutemenes
Procedimiento
En un tubo o sobre un papel filtro( en este caso ldquomancharrdquo el papel con la muestra
en estudio)
2 ndash 4 gotas de bencidina
Agregar 2 ndash 4 gotas de peroacutexido de hidroacutegeno (agua oxigenada)
Interpretacioacuten
Si existe sangre se formaraacute un halo verde azulado
Negativo halo marroacuten
Reactivo B
Solucioacuten de Piramidoacuten al 5 en aacutecido aceacutetico al 50
Peroacutexido de hidroacutegeno de 10 voluacutemenes
La solucioacuten de piramidoacuten puede ser preparada sin aacutecido aceacutetico por lo tanto el
orden de uso es piramidoacuten acido aceacutetico agua oxigenada Resultado
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DETERMINACION DE BILIRRUBINA Y UROBILINOGENO
REACCION DEL YODO DE SMITH (BILIRRUBINAS)
En un tubo de ensayo colocar 5ml de orina aacutecida y cubrirla con 2ml de una
solucioacuten de yodo al 07 en alcohopl etiacutelico al 95 La presencia de un anillo de
color verde esmeralda en la interfase de ambos liacutequidos indica la presencia de
bilirrubina
La deteccioacuten de urobilinoacutegeno en orina tambieacuten indican un problema hepaacutetico Uno
de los problemas importantes en la deteccioacuten de urobilinoacutegeno
REACCION CUANTITATIVA DE EHRLICH
Reactivo de Ehrlich
p-dimetilanminobenzaldehiacutedo 10g
HCl concentrado 75ml
Agua destilada 75ml
Procedimiento
1- Colocar 10ml de orina en un tubo de ensayo recieacuten emitida
2- Agregar 1ml del reactivo de Ehrlich
3- Dejar en reposo durante 5 minutos
La presencia urobilinoacutegeno determina que la solucioacuten cambie de color niveles
altos y dan un color rojo cereza
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E PRACTICA 3
DEPURACION DE CREATININACREATININA Generalidad
La creatinina es una sustancia que deriva del metabolismo muscular
(muacutesculo estriado liso y cardiacuteaco) de la creatina y representa el
subproducto de excrecioacuten La produccioacuten de creatinina es independiente
de la dieta y del ejercicio muscular sin embargo es proporcional dentro
de ciertos liacutemites a la masa muscular Se libera de los glomeacuterulos y no
es reabsorbida por los tuacutebulos de los cuales puede ser excretada
especialmente cuando se aumenta la concentracioacuten hemaacutetica El
aumento de la creatinina en el suero empieza a ser evidente cuando el
filtrado glomerular es por debajo de 60 ml por minuto
Indicaciones
La determinacioacuten de la cratinina es utilizada en el diagnoacutestico de las
enfermedades renales agudas o croacutenicas y tambieacuten para el monitoreo
de la diaacutelisis renal El aumento de la creatinina es un iacutendice de la
insuficiencia glomerular en cuanto eacutesta es eliminada por filtracioacuten
glomerular Mientras la uremia en la sangre puede ser controlada a
traveacutes de una oportuna dieta la creatinina se correlaciona casi
exclusivamente a la eficiencia de la filtracioacuten glomerular La creatinina
representa el iacutendice maacutes fiel de la insuficiencia renal
Preparacioacuten del paciente
Ayuno
Modalidad de la toma de muestra
Ninguna particularidad
Transporte
Transportar a temperatura ambiente
Conservacioacuten
Centrifugacioacuten y separacioacuten del suero la toma de muestra se puede
conservar por 1 diacutea a temperatura ambiente de 20-25oC 7 diacuteas 2-4oC y
6 meses en congelacioacuten
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Centrifugacioacuten
Poner el tubo de ensayo en la centriacutefuga de modo balanceado poner el
reloj 5 minutos y centrifugar por 3000 rpm Verificar la idoneidad del
suero o plasma ictericia presencia de coaacutegulos filamentos de fibrina
turbidez Sentildealar eventualmente en el resultado la no idoneidad de la
muestra
Metoacutedicas de determinacioacuten
Meacutetodo cineacutetico enzimaacutetico
El meacutetodo enzimaacutetico colorimeacutetrico consiste en la medida del color
desarrollado con el reactivo de Jaffe antes y despueacutes de una reaccioacuten
con la enzima especiacutefica la creatincinasa esta enzima transforma la
creatinina en creatina con medida final a 340 nm de la creatina
Meacutetodo colorimeacutetrico y procedimiento analiacutetico
Ademaacutes de la determinacioacuten de la creatinina con una teacutecnica de punto
final maacutes frecuentemente se utiliza una teacutecnica cineacutetica en la cual la
creatinina en medio alcalino reacciona con picrato produciendo un
complejo coloreado rojo-naranja la diferencia de absorcioacuten durante el
tiempo de conversioacuten es directamente proporcional a la concentracioacuten
de creatinina en la muestra
Creatinina + aacutecido piacutecrico mdashmdashmdashgt creatinina picrato (complejo)
Materiales
1048664 Guantes descartables no esteacuteriles
1048664 Tubos de ensayo 13 x 100 mm
1048664 Puntas de pipeta 10-100 ul
1048664 1048664 Puntas de pipeta 100-1000 ul
1048664 1048664 Centriacutefuga
1048664 Espectrofotoacutemetro
1048664 Bantildeo Mariacutea
1048664 Reloj marcador
1048664 Pipetas automaacuteticas 10-100 ul
1048664 Pipetas automaacuteticas 100-1000 ul
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Procedimiento
Seguir las instrucciones de la casa comercial
Control de Calidad
Se deberaacuten usar sueros control normal y patoloacutegico en las mismas
condiciones que las muestras
Notas sobre la metoacutedica
Linealidad
Es lineal hasta 250 mgdl
Sensibilidad
Su sensibilidad es 01 mgdl
Especificidad
La metoacutedica es especiacutefica para la creatinina
Las muestras de suero tienen proteiacutenas que pueden reaccionar no
especiacuteficamente con el meacutetodo Jaffe es necesario corregir el valor de
03 mgdl para lograr valores maacutes correctos
Interferencias
Las interferencias maacutes significativas son
Hemoacutelisis con Hb ge100 gl
Icteacuterico bilirrubina ge400 mgdl
Lipemia trigliceacuteridos ge20000 mgdl
Acetona ge500 mgdl
Algunos antibioacuteticos como las cefalosporinas pueden dar valores
falsamente elevados
Valor de referencia
Hombres Hasta 13 mgdl
Mujeres Hasta 11 mgdl
Neonatos o nintildeos Hasta 07 mgdl
Criterios de validacioacuten
Confrontar paraacutemetros de funcionalidad renal (urea potasio proteiacutenas
densidad urinaria)
Confrontar paraacutemetros de equilibrio electroliacuteticos (sodio potasio cloro)
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Controlar sexo y edad del paciente y tambieacuten eventual estado de
embarazo
Controlar paraacutemetros del metabolismo muscular (CPK miacuteoglobulina)
DEPURACION DE CREATININA
Generalidad
La cantidad de creatinina excretada con la orina estaacute en relacioacuten con la
filtracioacuten glomerular La creatinina es una sustancia que deriva del
metabolismo muscular (muacutesculo estriado liso y cardiacuteaco) de la creatina
y representa el subproducto de excrecioacuten La produccioacuten de creatinina
es independiente de la dieta y del ejercicio muscular sin embargo es
proporcional dentro de algunos liacutemites a la masa muscular Se libera
desde los glomeacuterulos y no es reabsorbida por los tuacutebulos de los cuales
puede ser excretada especialmente cuando se aumenta la
concentracioacuten hemaacutetica El aumento de la creatinina en el suero
empieza a ser evidente cuando el filtrado glomerular es por debajo de
60 ml por minuto
La medida de la cantidad de creatinina en la orina producida en un
determinado periacuteodo de tiempo simultaacuteneamente a la medida de la
concentracioacuten plasmaacutetica lleva al caacutelculo el aclaramiento de la
creatinina (volumen del plasma en ml que es depurado de la creatinina
en un minuto de tiempo)
C= U x VP (mlmin)
donde
C= aclaramiento
U= concentracioacuten de creatinina en la orina
V= volumen de la orina eliminada
P= concentracioacuten de creatinina en el plasma
Indicaciones
La estrecha correlacioacuten entre la velocidad de filtracioacuten glomerular y el
valor de la creatinina plasmaacutetica y el hecho que la concentracioacuten de la
creatinina hemaacutetica no es influenciada por la dieta hacen de la
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creatinina en particular el aclaramiento de la creatinina un iacutendice de
funcionalidad renal muy sensible y seguramente maacutes significativo que la
urea
El aclaramiento de la creatinina se modifica en relacioacuten con la
enfermedad renal (glomerulonefritis agudas o croacutenicas rintildeoacuten policiacutestico
obstruccioacuten de la viacutea renal)
Preparacioacuten del paciente
Ayuno
Modalidad de la toma de muestra
A) Recoger la orina de 24 horas con el siguiente procedimiento
Para la recoleccioacuten de orina de 24 horas se tiene que utilizar un frasco
de 25 30 litros de boca ancha con tapoacuten de rosca Antildeadir al frasco un
estabilizante si es necesario
Para la recogida de la orina se procede del modo siguiente
a) En el tiempo preestablecido vaciar la vejiga e eliminar toda la
orina
b) Posteriormente comenzar a recoger toda la orina de 24 horas
c) Al cumplir las 24 horas vaciar de nuevo la vejiga y depositar toda
la orina en el frasco Conservar las orinas a 2-4degC
Al finalizar la recoleccioacuten de orina eacutesta debe ser enviada
inmediatamente al laboratorio
B) Cuando se entrega la muestra de orina es necesario efectuar la toma
de muestra de sangre
Transporte
La muestra de orina debe ser transportada de 2-4degC la muestra de
sangre a temperatura ambiente
Conservacioacuten
Centrifugacioacuten y separacioacuten del suero la toma de muestra se puede
conservar por 1 diacutea a temperatura ambiente de 20-25oC 7 diacuteas 2-4oC y
6 meses en congelacioacuten
Conservar las orinas a 2-4degC
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Verificacioacuten de la muestra
Verificar que el registro de la toma de muestra esteacute correcto
Metoacutedica de determinacioacuten
Cu x Vmin
Aclaramiento de la creatinina = mdashmdashmdashmdashmdashmdashmdashmdashmdashmdashmdashmdash
Ps
donde
Cu= concentracioacuten de creatinina en la orina expresado en mgdl
Ps = concentracioacuten de creatinina en suero expresado en mgdl
Vmin= volumen por minuto (cantidad de la diuresis entre 1440)
Procedimiento analiacutetico
Ver metoacutedica de la creatinina
Notas sobre la metoacutedica
Linealidad
Referirse a las metoacutedicas de creatinina Es lineal hasta 250 mgdl
Sensibilidad
Referirse a las metoacutedicas de creatinina Su sensibilidad es 01 mgdl
Especificidad
Referirse a las metoacutedicas de creatinina
Las muestras de suero tienen proteiacutenas que pueden reaccionar no
especiacuteficamente con el
meacutetodo Jaffe Es necesario corregir el valor de 03 mgdl para lograr
valores maacutes correctos
Interferencias
Las interferencias significativas se deben
Para las orinas
Presencia de partiacuteculas en suspensioacuten (centrifugar las orinas)
Mala recoleccioacuten de orina
Presencia de bacterias de barbituacutericos de cuerpos cetoacutenicos
Para la sangre
Hemoacutelisis con Hb ge100 gl
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Icteacuterico bilirrubina ge400 mgdl
Lipemia trigliceacuteridos ge20000 mgdl
Acetona ge500 mgdl
Valor de referencia
ge70mlmin
PRACTICA 4
EXAMEN MICROSCOacutePICO DEL SEDIMENTO URINARIO
PROPOacuteSITO
Observar microscoacutepicamente en el sedimento urinario elementos celulares
cilindros cristales paraacutesitos filamentos mucoides y bacterias Con el fin
de sugerir una patologiacutea del tracto urinario u otras enfermedades que esteacuten
en diferente localizacioacuten
MUESTRA REQUERIDA
15 mL de orina
MATERIALES
- Tubos coacutenicos de 15 mL
- Laacuteminas portaobjetos
- Laminillas cubreobjetos
- Marcador para vidrio
- Gradillas para tubos
- Guantes descartables
EQUIPO
- Reloj marcador
- Centriacutefuga
- Microscopio
PROCEDIMIENTO
- Centrifugar durante 5 minutos a 2500 rpm
- Descartar el liacutequido sobrenadante
- Suspender el sedimento urinario golpeando ligeramente con la mano
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- Colocar una gota de sedimento entre un porta y un cubreobjeto
- Observar la preparacioacuten con el objetivo 10x para lograr una visioacuten general del
sedimento
- Identificar los elementos formes a mayor aumento 40x
- Anotar lo observado
FUENTES DE ERROR
- Usar portaobjetos y cubreobjetos sucios
- Desecacioacuten del sedimento urinario
-Tiempo transcurrido desde la toma de la muestra hasta la observacioacuten
microscoacutepica
- Uso excesivo de luz
- Centrifugacioacuten inadecuada
FORMA DE REPORTE
CEacuteLULAS EPITELIALES ESCAMOSAS Y REDONDAS reportar escasas
moderadas o abundantes
GLOacuteBULOS ROJOS Reportar el nuacutemero estimado por campo
LEUCOCITOS Reportar el nuacutemero estimado por campo
CILINDROS se pueden encontrar en la orina los siguientes cilindros
hialinos granulosos finos y gruesos leucocitarios hemaacuteticos grasos y ceacutereos
Reportar el nuacutemero de cilindros observados por campo
FILAMENTOS MUCOIDES reportar escasos moderados o abundantes
CRISTALES se pueden encontrar en la orina los siguientes cristales oxalatos de
calcio acido uacuterico uratos amorfos fosfatos amorfos fosfatos triples urato de
amonio leucina cistina y tirosina
Reportar en la forma siguiente escasos moderados o abundantes
LEVADURAS Reportar escasos moderada y abundantes
PARAacuteSITOS Se pueden encontrar en orina Trichomonas vaginalis Phitirus pubis
huevos y quistes de paraacutesitos por contaminacioacuten con heces
BACTERIAS Reportar la presencia de bacterias moderadas o abundantes
solamente cuando se observen maacutes de 10 leucocitos por campo
Valores de referencia
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CEacuteLULAS EPITELIALES ESCAMOSAS Escasas a moderadas
CEacuteLULAS EPITELIALES REDONDAS No deben observarse
GLOacuteBULOS ROJOS No deben observarse
LEUCOCITOS 0-5 por campo
CILINDROS No deben observarse
FILAMENTOS MUCOIDES No deben observarse
CRISTALES Podriacutean observarse oxalatos uratos y fosfatos amorfos de escasa a
moderada cantidad
LEVADURAS No deben observarse
PARAacuteSITOS No deben observarse
BACTERIAS Escasas o no presentes
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PRACTICA 6
UROCULTIVO Y ANTIBIOGRAMA
OBTENCIOacuteN DE MUESTRA DE ORINA PARA CULTIVO
Condiciones generales
La orina es un excelente medio de cultivo para la proliferacioacuten bacteriana por esta
razoacuten la muestra debe ser procesada dentro de las 2 horas despueacutes de haber
sido obtenida o debe refrigerarse a 4 degC (maacuteximo 24 horas) hasta su
procesamiento
Generalmente el desarrollo de dos o maacutes tipos de colonias (en pacientes sin
sonda vesical) indican que la muestra se ha contaminado por recoleccioacuten
incorrecta o demora en la siembra
OBTENCIOacuteN DE MUESTRA DE ORINA DEL CHORRO MEDIO
Obtencioacuten de muestras de orina en pacientes mujeres Materiales y equipos
a) Guantes de laacutetex esteacuteriles
b) Cinco o maacutes piezas de gasa esteacuteril de tamantildeo adecuado pudiendo
ser de 4rdquo x 4rdquo
c) Jaboacuten
d) Agua tibia esteacuteril
e) Frasco esteacuteril de boca ancha para la muestra de orina
Procedimiento
a) Mantener la privacidad de la paciente
b) Rotular el frasco con el nombre de la paciente fecha de obtencioacuten de la
muestra hora y el procedimiento usado para la obtencioacuten de la muestra
c) Lavarse las manos con jaboacuten y abundante agua
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d) Preparar una pieza de gasa para la limpieza de los genitales externos
humedicieacutendola con agua y una pequentildea cantidad de jaboacuten Preparar dos piezas
maacutes de gasa para el enjuague con agua tibia
e) Separar los labios mayores con dos dedos de una mano y limpiar el aacuterea
expuesta pasando la gasa de adelante hacia atraacutes
f) Descartar la gasa
g) Con otra gasa humedecida enjuagar el aacuterea de adelante hacia atraacutes Repetir el
procedimiento con otra gasa
h) Finalmente secar el aacuterea de adelante hacia atraacutes con un trozo de gasa seca
i) Mantener separados los labios mayores mientras la paciente empieza a orinar
Luego del chorro inicial colocar el frasco esteacuteril para colectar el chorro medio
j) Al terminar la recoleccioacuten tapar el frasco inmediatamente y limpiarle la
superficie
k) Transportar el frasco con la muestra de orina inmediatamente
Obtencioacuten de muestra de orina en pacientes varones
Materiales
a) Guantes de laacutetex
b) Cinco o maacutes piezas de gasa esteacuteril
c) Jaboacuten
d) Agua tibia esteacuteril
e) Frasco esteacuteril de boca ancha para la obtencioacuten de la muestra
Procedimiento
a) Mantener la privacidad del paciente
b) Rotular el frasco con el nombre del paciente fecha de obtencioacuten de la muestra
hora y el procedimiento usado para la obtencioacuten de la muestra
c) Lavarse las manos con jaboacuten y abundante agua
d) Preparar una pieza de gasa con agua y una pequentildea cantidad de jaboacuten
Preparar dos piezas maacutes de gasa para el enjuague con agua tibia
e) Realizar la higiene de los genitales Retraer el prepucio antes de lavar el glande
con la gasa humedecida con jaboacuten Descartar la gasa
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f) Enjuagar el glande usando una gasa huacutemeda Repetir el procedimiento con otra
gasa
g) Secar la zona usando uno o maacutes piezas de gasa seca
h) Indicar al paciente que mantenga el prepucio retirado e inicie la miccioacuten
directamente en un recipiente (orina para descartar)
i) Despueacutes del chorro inicial colocar el frasco esteacuteril para colectar la muestra del
chorro medio
j) Obtenida la muestra tapar el frasco inmediatamente y limpiarle la superficie
k) Transportar el frasco con la muestra de orina inmediatamente al laboratorio
SIEMBRA PRIMARIA DE MUESTRA DE ORINA
Objetivo
Describir el procedimiento para la siembra primaria de muestra de orina
Campo de aplicacioacuten
Se aplica para el cultivo de muestra de orina en el diagnoacutestico bacterioloacutegico de
infecciones del tracto urinario
Materiales y equipos
a) Asa calibrada de platino o descartable de 0001 mL oacute 001 mL
b) Estufa de 35 ndash 37 degC
c) Mechero Bunsen o cabina de flujo laminar
d) Guantes de laacutetex
e) Contenedor de material contaminado
f) Pinza esteacuteril
g) Propipeta o pipetor automaacutetico
h) Medios de cultivo
ndash Placas con agar sangre de carnero (AS)
ndash Placas con agar Mc Conkey (McC)
Procedimiento
a) Mantener las muestras en refrigeracioacuten (4 degC) hasta su procesamiento por
cultivo
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b) Los cultivos deben realizarse en una cabina de bioseguridad o cerca del
mechero Bunsen
c) Las placas con AS y McC que se utilizaraacuten en el urocultivo deben estar a
temperatura ambiente Rotular las placas
d) Si el asa calibrada no es descartable esterilizar el asa de siembra flameacuteandola
en el mechero Bunsen hasta que se ponga rojo vivo Dejar enfriar el asa
e) Tomar el frasco con la muestra de orina abrir la tapa y flamear la boca del
frasco en el mechero Bunsen
f) Tomar la muestra de orina con el asa de siembra esteacuteril introducieacutendola y
sacaacutendola del frasco en forma vertical Tapar el frasco con la muestra
g) Inocular en el centro de la placa con AS a partir del cual se extiende la muestra
hacia delante y hacia atraacutes
h) Luego sin quemar el asa el inoacuteculo se disemina uniformemente con trazos
perpendiculares a la siembra inicial en toda la placa
i) Proceder de la misma forma para el agar Mc Conkey
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Lectura
a) Realizar la evaluacioacuten a las 24 horas si no hay crecimiento bacteriano dejar
incubar hasta las 48 horas
b) La evaluacioacuten consiste en realizar el recuento de colonias cuyo resultado se
multiplica por el factor de dilucioacuten para obtener las UFC por mL
Interpretacioacuten
a) En pacientes sin sonda vesical la cuenta significativa de bacterias en orina es
la presencia de maacutes de 105 UFC mL de un solo germen
b) Los recuentos intermedios (103 ndash 104 UFCmL) indican infeccioacuten si el
procedimiento de recoleccioacuten de orina fue realizado correctamente
c) Generalmente el aislamiento de tres o maacutes especies bacterianas indican que la
muestra se ha contaminado por recoleccioacuten inadecuada o demora en la siembra
d) En pacientes con sonda vesical cuentas bacterianas menores de 105 UFCmL
pueden tener significado asiacute tambieacuten se pueden encontrar bacteriurias
polimicrobianas hasta en casi 15 de enfermos
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e) En pacientes sin cateacuteter se puede comprobar si el procedimiento de obtencioacuten
de muestra fue realizado correctamente observando la frecuencia con la cual se
informan recuentos de colonias intermedias entre 103 ndash 104 UFCmL En
pacientes sin infecciones del tracto urinario el recuento es nulo o se reduce a
pocas colonias
IDENTIFICACION BACTERIANA
Lectura de cultivos en agar Mac Conkey
ndash En agar Mc Conkey Escherichia coli lactosa positiva forma colonias de borde
entero de color fucsia opacas de 2 mm ndash 3 mm de diaacutemetro usualmente
rodeadas de una zona opaca alrededor de la colonia (bilis precipitada) Las cepas
de E coli que son lactosa negativa dan colonias incoloras de 3 ndash 4 mm
ndash En agar Mc Conkey K pneumoniae forma colonias de borde entero de color
rosado a rosado oscuro de 3 ndash 4 mm de diaacutemetro y aspecto mucoide
ndash En agar Mc Conkey Enterobacter spp forma colonias de borde entero de color
rosado de 2 ndash 4 mm de diaacutemetro no tan mucoides como K pneumoniae
Las colonias con estas caracteriacutesticas son subcultivadas en medios diferenciales
PRUEBAS BIOQUIMICAS
TSI
Lectura
Es importante hacer la lectura entre las 18 ndash 24 horas para no obtener resultados
erroacuteneos La lectura se hace sobre la base de tres caracteriacutesticas Utilizacioacuten de
hidratos de carbono produccioacuten de gas y produccioacuten de aacutecido sulfhiacutedrico
Utilizacioacuten de hidratos de carbono
ndash Utilizacioacuten de lactosa Reaccioacuten aacutecida en el pico de flauta (color amarillo)
Abreviatura (A)
ndash Utilizacioacuten de glucosa Reaccioacuten aacutecida en la columna del medio (color amarillo)
Abreviatura (A)
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ndash No hay utilizacioacuten del carbohidrato Se puede observar una reaccioacuten alcalina
(color rojo) o que no hay cambio de color (permanece del mismo color que el
medio no inoculado) Abreviaturas (K) o (N) respectivamente
Nota Cuando el microorganismo tambieacuten produce H2S el precipitado negro
puede ocultar la acidez
Produccioacuten de gas de glucosa
ndash Se considera positivo Presencia de una sola burbuja de gas burbujas en el
medio divisioacuten del medio desplazamiento completo del medio del fondo del tubo
dejando un aacuterea clara o una ligera muesca del medio en el costado del tubo
ndash Se registra la lectura por medio de cruces (+)
Produccioacuten de aacutecido sulfhiacutedrico
ndash Se manifiesta por un color negro distribuido por toda la columna del medio de
cultivo o soacutelo en la parte superior
ndash Se registra la lectura por medio de cruces (+)
Resultados
Ejemplo de simbolizacioacuten e interpretacioacuten
KA ndash+ Significa alcalinidad en la inclinacioacuten y acidez en el fondo (fermentacioacuten de
glucosa) gas negativo y H2S positivo
NN ndash ndashSignifica que no hay utilizacioacuten de la lactosa y glucosa ni produccioacuten de
H2S
AGAR LISINA HIERRO
En este medio se determina simultaacuteneamente la produccioacuten de lisina
descarboxilasa y de la formacioacuten de aacutecido sulfhiacutedrico
Lectura
Es importante hacer la lectura entre las 18 ndash 24 horas si la lectura se realiza antes
podemos obtener resultados falsos positivos asiacute como falsos negativos si se lee
despueacutes de las 24 horas Realizar la lectura en la columna y en la superficie
inclinada y observar la formacioacuten de aacutecido sulfhiacutedrico el cual se evidencia por una
coloracioacuten negra
Nota Generalmente las cepas del grupo Proteus y Providencia desaminan la
lisina a aacutecido ndashcetocarboacutenico Este uacuteltimo forma compuestos pardo-rojizos en la
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regioacuten superficial del medio de cultivo con la sal de hierro y bajo la influencia del
oxiacutegeno
Recomendaciones
No incubar maacutes del tiempo necesario para no ocasionar una alcalinizacioacuten en la
superficie del medio y por lo tanto producir un viraje hacia el violeta
UTILIZACIOacuteN DE CITRATO
Para determinar si un microorganismo es capaz de utilizar citrato como uacutenica
fuente de carbono para su metabolismo
Procedimiento
a) Incubar a 35ndash37 degC de 24 horasndash 48 horas En algunos casos es necesario una
incubacioacuten hasta por 4 diacuteas
b) Ver el viraje de color
Resultados
a) Prueba positiva Crecimiento con un color azul intenso en el pico de flauta o
presencia de colonias en ausencia del color azul
b) Prueba negativa No se observa crecimiento ni cambio de color (verde)
Controles
Positivo Enterobacter cloacae
Negativo Escherichia coli
HIDROacuteLISIS DE LA UREA (PRODUCCIOacuteN DE UREASA)
Es uacutetil para determinar la capacidad de un organismo de degradar la urea
formando dos moleacuteculas de amoniaco por accioacuten de la enzima ureasa
Procedimiento
Realizar la lectura despueacutes de 18 horas ndash 24 horas de incubacioacuten observando el
viraje de color
Resultados
Prueba positiva Color rosado intenso en el pico de flauta o todo el agar
Puede haber una reaccioacuten positiva retardada despueacutes de 24 horas y hasta
6 diacuteas de incubacioacuten (algunas cepas de Klebsiella por ejemplo)
Prueba negativa No se produce cambio de color
Controles
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Negativo Escherichia coli
Positivo Klebsiella pneumoniae
MOTILIDAD (MEDIOS SIM O MIO O AGAR MOVILIDAD)
Para determinar si un organismo es moacutevil o inmoacutevil
Procedimiento
Incubar a 35 ndash 37 degC de 24 a 48 horas
Resultados
Positivo Los microorganismos migran de la liacutenea de siembra y se difunden en el
medio provocando turbidez Tambieacuten puede manifestarse semejando
ldquovellosidadesrdquo a lo largo del trazo de siembra
Negativo Se observa un crecimiento bacteriano acentuado siguiendo el trazo de
siembra y el medio circundante se mantiene claro
Controles
Control positivo Escherichia coli
Control negativo Klebsiella pneumoniae
h) Prueba de indol[6]
Es uacutetil para determinar la capacidad de un microorganismo de producir indol a
partir del aminoaacutecido triptoacutefano
Medios y reactivos
Caldo de triptoacutefano o de peptona o caldo de triptona
Reactivo de indol de Kovacs
Procedimiento
Retirar aseacutepticamente 2 mL de caldo de cutivo con 24 horas de incubacioacuten
Agregar 5 gotas de reactivo de Kovacs
Mover suavemente el tubo y realizar la lectura
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ANTIBIOGRAMA
Preparacioacuten del Agar Mueller Hinton
Preparar el medio a partir de la base deshidratada de acuerdo a las
indicaciones del fabricante
Autoclavar y dejar enfriar en bantildeo de agua hasta que alcance los 45degC - 50degC
Repartir el medio en placas petri (60 ml ndash 70 ml o 25 ml ndash 30 ml para placas de
150 mm o 100 mm de diaacutemetro interno respectivamente) de manera que el
grosor del agar en la placa sea de 4 mm
Realizar las pruebas de esterilidad para cada lote de Mueller Hinton incubando
una o dos placas de cada lote a 30degC ndash 35degC durante 24 horas o maacutes Estas
placas utilizadas deben ser luego descartadas
Preparacioacuten del estaacutendar (05 Mc Farland) para el inoacuteculo
Para estandarizar la densidad del inoacuteculo se usa una suspensioacuten de sulfato de
bario (05 de la escala de Mac Farland) como estaacutendar
Preparacioacuten del estaacutendar de turbidez
a Agregar 05 ml de una solucioacuten de BaCl2 0048 M (BaCl22H2O al 1175 PV)
a 995 mL de una solucioacuten de H2SO4 018 M (036 N) (1 VV) en constante
movimiento para mantener la suspensioacuten
b Verificar la densidad correcta del estaacutendar usando un fotocoloriacutemetro oacute
espectrofotoacutemetro cuya absorbancia a 625 nm es 008 a 010 para el estaacutendar 05
de Mc Farland
c Distribuir de 4 ml a 6 ml en tubos con tapa de rosca o tapoacuten de jebe similares a
los que se usaraacuten para preparar el inoacuteculo
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d Ajustar bien las tapas o tapones y conservarlos en la oscuridad a temperatura
ambiente y anotar la fecha de preparacioacuten
e Antes de ser usado agitar vigorosamente dicho estaacutendar de preferencia en un
agitador mecaacutenico
f Verificar mensualmente la densidad de los estaacutendares de sulfato de bario y
reemplazarlo cuando sea necesario
INOCULACIOacuteN
Preparacioacuten del inoacuteculo
Puede realizarse de dos formas
Meacutetodo de desarrollo previo
a Seleccionar cuatro a cinco colonias bien aisladas del mismo tipo morfoloacutegico
de un cultivo en placa
b Tocar la superficie de cada colonia con una asa de siembra y transferirlo a un
tubo que contiene de 4 a 5 mL de caldo apropiado (Ej Caldo Tripticasa soya)
c Incubar el caldo a una temperatura entre 35degC a 37degC hasta que alcance o
exceda la turbidez del estaacutendar 05 de la escala de Mc Farland (por lo general de
2 a 6 horas)
d Ajustar la turbidez del inoacuteculo con solucioacuten salina o caldo apropiado hasta el
tubo 05 de la escala de Mc Farland por comparacioacuten visual con el estaacutendar Para
realizar este paso correctamente usar una luz apropiada y mirar los tubos contra
un fondo blanco con liacuteneas negras como contraste
e La suspensioacuten preparada contendraacute aproximadamente 1 a 2 x 108 UFCmL
Meacutetodo directo de inoculacioacuten a partir de colonias aisladas
a De una placa de cultivo con agar no selectivo e incubada por 18 - 24 h
seleccionar colonias aisladas y preparar una suspensioacutem directa en solucioacuten
salina oacute caldo
b La suspensioacuten debe ser inmediatamente ajustada a la escala 05 de Mc
Farland
Inoculacioacuten de las Placas
Dentro de los 15 minutos siguientes al ajuste de la turbidez del inoacuteculo sumergir
un hisopo esteacuteril en la suspensioacuten rotar el hisopo varias veces presionando
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firmemente sobre la pared interior del tubo por encima del nivel del liacutequido para
remover el exceso de inoacuteculo
Inocular la superficie seca de la placa de Mueller Hinton estriando con el hisopo
en tres direcciones para asegurar una distribucioacuten uniforme del inoacuteculo Antes de
colocar los discos dejar secar la placa a temperatura ambiente durante 3 a 5
minutos para que cualquier exceso de humedad superficial sea absorbido
APLICACIOacuteN DE LOS DISCOS
Colocar los discos individuales o multidiscos sobre la superficie del agar con la
ayuda de una pinza esteacuteril o la punta de una aguja presionando suavemente sobre
cada disco para asegurar un contacto completo con la superficie del agar
Distribuir los discos uniformemente de modo que esteacuten a una distancia miacutenima de
25 mm uno del otro (el diaacutemetro de los discos seguacuten las normas de la
Organizacioacuten Mundial de la Salud (OMS) debe ser de 6 mm) No deben colocarse
maacutes de 12 discos en una placa de 150 mm ni maacutes de 6 en una placa de 100 mm
de diaacutemetro interno para evitar la superposicioacuten de las zonas de inhibicioacuten Un
disco no debe ser removido una vez que tomoacute contacto con la superficie del agar
debido a que algunos antibioacuteticos se difunden raacutepidamente
INCUBACIOacuteN
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Incubar lar placas en posicioacuten invertida a 35degC por 18 a 24 horas dentro de los 15
minutos posteriores a la aplicacioacuten de los discos
Despueacutes del tiempo recomendado de incubacioacuten examinar cada placa y medir los
diaacutemetros de los halos de inhibicioacuten alrededor de cada disco
LECTURA DE LAS PLACAS E INTERPRETACIOacuteN DE LOS RESULTADOS
Medir los diaacutemetros de las zonas de inhibicioacuten completa (incluyendo el diaacutemetro
del disco) usando
una regla o calibrador Se debe mantener iluminada la parte posterior de la placa
petri con una luz reflejada localizada a unos cuantos centiacutemetros sobre un fondo
negro Tener la precaucioacuten de observar la placa siguiendo una vertical directa para
evitar una lectura erroacutenea de las marcas de la regla por efecto de paralelismo En
los medios suplementados con sangre las zonas son medidas en la parte superior
de la superficie del agar y retirando la tapa Tener cuidado de no medir la zona de
la hemoacutelisis sino la de inhibicioacuten del crecimiento
El punto final debe tomarse como el aacuterea que no muestra un crecimiento obvio
visible que puede ser detectado mediante observacioacuten visual no incluyendo velo
de crecimiento o colonias muy pequentildeas que puedan ser detectadas solo con
mucha dificultad en el borde de la zona Sin embargo las colonias mayores
creciendo dentro de la zona clara deberaacuten ser subcultivadas reidentificadas y
reensayadas Algunos Proteus spp debido a su gran movilidad pueden presentar
un velo de invasioacuten o ldquoswarmingrdquo dentro de las zonas de inhibicioacuten de algunos
antibioacuteticos En estos casos el velo del swarming debe ser ignorado al momento
de medir los halos de inhibicioacuten
DISCOS DE SENSIBILIDAD ANTIBIOacuteTICA A INCLUIR EN EL ANTIBIOGRAMA
Grupo I
Ampicilina
Cefalotina
Ampicilina Sulbactam o Amoxicilina Aacutecido Clavulaacutenico
Cefuroxima
Cefotaxima o Ceftriaxona
Gentamicina
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Amikacina
Aacutecido Nalidiacutexico(1)
Norfloxacina(1)
Ciprofloxacina
Cotrimoxazol (TrimetoprimSulfametoxazol)
Nitrofurantoiacutena(1)
Grupo II
Cefoxitina
Aztreonam
Ceftazidima
Cefixima
CefoperazonaSulbactam
Cefepime o Cefpirome
Imipenem o Meropenem
Cloramfenicol
Ofloxacina (1)
(1) Disco utilizado exclusivamente para infecciones de las viacuteas urinarias
Resistencias Naturales
Las enterobacterias son resistentes a Penicilina Oxacilina Macroacutelidos
Clindamicina y Glicopeacuteptidos
Klebsiella spp es resistente a las Aminopenicilinas
Citrobacter freundii Enterobacter cloacae y Enterobacter aerogenes son
resistentes a las Aminopenicilinas AminopenicilinasInhibidores de
betalactamasas Cefalosporinas de primera generacioacuten y Cefuroxima
Serratia marcescens es resistente a las Aminopenicilinas
AminopenicilinasInhibidores de betalactamasas Cefalosporinas de primera
generacioacuten y Cefoxitina
Proteus mirabilis es resistente a Nitrofurantoiacutena
Proteus vulgaris es resistente a las Aminopenicilinas Cefalosporinas de primera
generacioacuten Cefuroxima y Nitrofurantoiacutena
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Morganella morganii es resistente a las Aminopenicilinas
AminopenicilinasInhibidores de betalactamasas Cefalosporinas de primera
generacioacuten Cefuroxima y Nitrofurantoiacutena
Providentia stuartii es resistente a las Aminopenicilinas
AminopenicilinasInhibidores de betalactamasas Cefalosporinas de primera
generacioacuten Gentamicina (bajo nivel) y Nitrofurantoiacutena
ANTIBIOTICOS Y DIAMETROS CRITICOS PARA ENTEROBACTERIAS
E PRACTICA 7
EXAMEN QUIMICO DE CALCULO RENAL
EXAMEN FISICO
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Se debe pesar el caacutelculo y anotar el dato obtenido Medir dos de los diaacutemetros y
tomar nota del aspecto general textura y color y despueacutes de seccionado el
aspecto general la prominencia y el color de los distintos estratos
Se secciona el caacutelculo con una sierra Se raspan las caras con una aguja Se
procede lo mismo con el nuacutecleo Cada una de las muestras obtenidas se trituran
por separado en un mortero
PROCESO
Se coloca una porcioacuten del polvo del caacutelculo en un crisol y se calienta al fuego Si
no hay ennegrecimiento ni se altera el tamantildeo original el caacutelculo estaraacute formado
por sustancias inorgaacutenicas Si en cambio se carboniza desapareciendo estaraacute
formado por sustancias orgaacutenicas Si se funde y se ennegrece este caacutelculo estaacute
formado por sulfamidasa
Una vez obtenidos los datos pueden seleccionarse las reacciones necesarias
para confirmarlos
REACCIONES QUIMICAS
Solucioacuten A
10mg del polvo en matraz y antildeadir 50 ml de ClH 5 Observar si se
produce efervescencia Calentar en bantildeo de agua hirviendo por 10 a 15 minutos y
filtrar en caliente El filtrado se distribuye en 8 tubos numerados y se introduce un
trocito de papel tornasol en cada uno
Solucioacuten B
Agitar con Cl3CH unos 10 mg del polvo Reposar en tubo tapado a
temperatura ambiente hasta que el insoluble haya precipitado Decantar la
solucioacuten clorofoacutermica y guardar igual que el sedimento por separado
Carbonato efervescencia al agregar el CIH por desprendimiento de CO 2
Amonio al tubo 1 de la solucioacuten A se le agrega solucioacuten de OHNa 10 gota a
gota y agitando hasta que el papel tornasol vire
Agregar 1 ml de reactivo de Nessler Un color amarillo oscuro oporto indica
positividad de la reaccioacuten
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El NH 3 formado por los grupos NH 4 en medio alcalino reacciona con el yoiduro
doble del reactivo de Nesler para dar yoduro amoacutenico dimercuacuterico precipitado
pardo anaranjado
Acido uacuterico Neutralizar el contenido del tubo 2 como se explicoacute antes
Agregar igual volumen de CNN Na 2 y 05 ml de reactivo de Folin para aacutecido
uacuterico Un color azul intenso indica presencia de aacutecido uacuterico
El aacutecido uacuterico reduce al aacutecido fosfotuacutengstico en medio alcalino dando color azul
intenso de azul de tungsteno y a su vez se oxida a alantoiacutena
Reactivo fosfotuacutengstico (Folin y Denis) Antes del uso diluir al 10 en agua
destilada
Oxalato de calcio Neutralizar el contenido del tubo 3 Agregar CH 3 COOH 10
hasta reaccioacuten aacutecida al tornasol Precipitado blanco que no se redisuelve por
agitacioacuten indica presencia de oxalato de calcio
Calcio Neutralizar el tubo 4 Acidificar con CH 3 COOH glacial Agregar 2 ml C 2
O 4 ( NH 4 ) 4 Precipitado blancodenso indica presencia de Ca ++
Fosfato Neutralizar el tubo 5 Agregar 1 ml de solucioacuten de molibdato Mezclar
antildeadir 05 ml de aacutecido aminonaftol sulfoacutenico (ANS) 025 Coloracioacuten azul que
aparece en 5 minutos indica fosfatos
El color azul se debe a los oacutexidos reducidos de molibdeno
Reactivos
1 ClH concentrado2 Solucioacuten de OHK 203 NO 3 H concentrado4 Mo O 4 (NH 4 ) 2 disolver 25 g de la droga en 50 ml de SO 4 H 2 10 N y
diluir a 100 ml con H2 O destilada5 Amoniacuteaco
Reactivo ANS En matraz x 250 ml poner 05 g de aacutecido aminonaftolsulfoacutenico y
agrgar 195 ml de bisulfito de sodio 15 y 5 ml de sulfito de sodio 20 Mezclar
bien hasta disolucioacuten Si no se disuelve en media hora agregar maacutes sulfito y
agitar El reactivo dura unas 2 semanas
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Magnesio Neutralizar el tubo 7 con OHNH 4 y antildeadir 1 ml de solucioacuten alcohoacutelica
de p ndash Nitrobenceno azorresorcinol Un cromoacutegeno rojo indica presencia de
magnesio
En medio alcalino se forma (OH) 2 Mg El colorante azo resulta absorbido por el
(OH) 2 Mg en medio alcalino
Xantina A un tercio del residuo de la solucioacuten B agregarle gotas de NO 3 H
concentrado
Se disuelve el residuo sin desprender gas Evaporar a sequedad en bantildeo Mariacutea
hirviente quedando un residuo amarillo Dejar enfriar y humedecer con gotas de
OHNa 10 Una coloracioacuten anaranjada que vira al rojo oscuro al calentar indica
presencia de xantina
La reaccioacuten es la xantoproteica Migracioacuten de los anillos fenilo existentes en la
tirosina fenilalanina y triptoacutefano que da un color amarillo de los productos de
nitrosustitucioacuten para virar al anaranjado tras la adicioacuten de un aacutelcali ( formacioacuten de
la sal)
Nota El reactivo de molibdato se puede preparar asiacute
Solucioacuten 1 SO 4 H 2 01 N
Medir 450 ml de SO4 H 2 concentrado y agregarlos a 1300 ml de agua
destilada
Solucioacuten 2
A 250 ml de SO 4 H 2 01 N antildeadir la solucioacuten de molibdato y llevar con
agua destilada a 250 ml Mezclar
Sulfamidas Neutralizar el uacuteltimo tubo Antildeadir 1 ml de NO 2 Na 05 preparado
recientemente Agitar y reposar por 3 minutos Antildeadir 5 ml de solucioacuten alcohoacutelica
de dimetil-alfa naftilamina 025 Un color rojizo indica presencia de sulfamidas
Finalmente procede hacer mencioacuten de ciertos procedimientos fiacutesicos como la
microscopia de polarizacioacuten difraccioacuten de rayos X cristalografiacutea
espectrofotometriacutea de rayos infrarrojos etc que permiten actualmente un
conocimiento maacutes confiable de la estructura de los caacutelculos
- Reactivos
-
Laboratorio Cliacutenico PAULINA ARROLLO PEREacuteZ
- Frascos y tubos mal lavados
- Tiras reactivas de mala calidad o vencidas
- Cortar las tiras reactivas
- Leer las tiras reactivas despueacutes del tiempo indicado por el fabricante
FORMA DE REPORTE
pH de 5 a 9
DENSIDAD de 1000 a 1030
LEUCOCITOS 0 a 500 Leucocitos por μl
NITRITOS Positivo oacute Negativo
PROTEIacuteNA 0 a 1000 mg por dL
GLUCOSA 0 - 1000 mg por dL
CUERPOS CETOacuteNICOS de una cruz a tres cruces
UROBILINOacuteGENO de lt1 a 12 mg por dL
BILIRRUBINA de una cruz a tres cruces
SANGREHEMOGLOBINA de 0 a 250 eritrocitos por μL
Siempre que en la tira reactiva no se observe un cambio de color se reportaraacute
como negativo
Valores de referencia
pH de 5 a 6
DENSIDAD de 1005 a 1010
LEUCOCITOS 0 Leucocitos por μl
NITRITOS Negativo
PROTEIacuteNA 0 mg por dL
GLUCOSA 0 mg por dL
CUERPOS CETOacuteNICOS Negativo
UROBILINOacuteGENO lt1 mg por dL
BILIRRUBINA Negativa
SANGRE 0 eritrocitos por μL
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DETERMINACION DE PROTEINURIA
AacuteCIDO SULFOSALICIacuteLICO
Esta teacutecnica se basa en la utilizacioacuten de aacutecido sulfosaliciacutelico cuya propiedad es
precipitar proteiacutenas en ausencia de calor Para esta prueba se usa el reactivo de
Exton en cuya composicioacuten se encuentra dicho aacutecido
Reactivo de Exton
Disolver 88g de sulfato de sodio en 600 ml de agua destilada con ayuda de calor
Enfriar Luego agregar 50 g de aacutecido sulfosaliciacutelico y diluir a 1000 ml
Procedimiento
1-Centrifugar una aliacutecuota de orina y luego utilizar el liacutequido sobrenadante
liacutempido
2- En un tubo de ensayo colocar voluacutemenes iguales del sobrenadante y del
reactivo de Exton Mezclar por inversioacuten y apreciar la turbidez
Interpretar de acuerdo a las siguientes pautas
Negativo No existe turbidez
Trazas Turbidez visible sobre fondo negro
1(+) Se observa turbidez pero no es granular
2(++) Se observa turbidez y es granular
3(+++) La turbidez es considerable y existe aglutinacioacuten
4(++++) Nubosidad densa con masas aglutinadas de gran tamantildeo
El procedimiento de Exton es maacutes sensible que el meacutetodo de las tiras reactivas
Pueden observarse falsos positivos en los tratamientos con tolbutamina penicilina
sulfamidas y despueacutes de la administracioacuten de sustancias de contraste radioloacutegico
Asimismo las orinas muy alcalinas suelen dar resultados negativos falsos
PRUEBA DEL ACIDO ACETICO Y CALOR
Se basa en la precipitacioacuten de proteiacutenas llevando el pH de la orina al valor del
punto isoeleacutectrico al agregar el aacutecido aceacutetico Tambieacuten el calor torna a las
proteiacutenas insolubles provocando su coagulacioacuten
Procedimiento
Laboratorio Cliacutenico PAULINA ARROLLO PEREacuteZ
1- Centrifugar 10 ml de orina y luego separar el sobrenadante a un tubo de
ensayo El tubo debe estar lleno en las 23 partes
2-Hervir la parte superior del tubo por 2 minutos a la llama ( El tubo debe ser
sostenido formando un aacutengulo sobre la llama y apuntando en direccioacuten opuestas al
cuerpo) Si aparece turbidez puede deberse a la presencia de proteiacutenas fosfatos
y carbonatos
3- Agregar 3 a 5 gotas de aacutecido aceacutetico al 5 o 10 y volver a hervir la parte
superior del tubo a la llama El aacutecido disolveraacute los fosfatos o carbonatos que
puede ser la causa de la turbidez Ademaacutes disminuye el pH llevaacutendolo maacutes
proacuteximo al punto isoeleacutectrico de las proteiacutenas y en consecuencia eacutestas precipitan
aumentando la turbidez
4- Los resultados seraacute dados con la misma escala del reactivo de Exton
Esta teacutecnica detecta albuacuteminas globulinas mucoproteiacutenas e incluso las proteiacutenas
de Bence Jones La hemoglobina y la mioglobina no precipitan con este meacutetodo
La tolbutamida dosis elevadas de penicilina y sustancias de contraste radioloacutegico
pueden resultados positivos falsos Orinas muy alcalinas y orinas muy diluidas
pueden dar resultados negativos falsos
DETERMINACION DE GLUCOSURIA
TECNICA DE BENEDICT
Tiene como fundamento la reduccioacuten del ioacuten cuacuteprico color azul a cuproso que da
un precipitado rojo ladrillo en presencia de glucosa en caliente y en medio alcalino
fuerte
Reactivo
Sulfato de cobre 173 g
Citrato de sodio o de potasio 173g
Cristales de carbonato de sodio 200g
O carbonato de sodio anhiacutedro 100g
Agua destilada para completar 1000ml
Laboratorio Cliacutenico PAULINA ARROLLO PEREacuteZ
Disolver el citrato y el carbonato en 700ml de agua con ayuda de calor Filtrar y
disolver con el sulfato de cobre en aprox 100ml de agua caliente y vertirlo en la
solucioacuten de citrato-carbonato revolviendo Dejar que se enfriacutee antes de diluir hasta
completar los 1000 ml con agua
Procedimiento
1-Colocar 5ml del reactivo de Benedict en un tubo de ensayo
2- Agregar 8 gotas de orina Mezclar por inversioacuten
3- Llevar el tubo con la mezcla preparada a bantildeo Mariacutea durante 5 minutos o
calentar a la llama hasta su ebullicioacuten durante 1 a 2 minutos
4- Dejar que se enfriacutee lentamente
Se informa de acuerdo a las pautas correspondientes
Negativa Color azul claro puede formarse un precipitado azul
Trazas Color verde azulado
1(+) Color verde precipitado verde o amarillo
2(++) Color amarillo a verde precipitado amarillo
3(+++) Color amarillo-anaranjado precipitado amarillo-anaranjado
4 (++++) Color amarillo-rojizoprecipitado rojo ladrillo o rojo
Este procedimiento es sensible y de puede detectar hasta concentraciones de
002 Dosis aumentadas de penicilina estreptomicina salicilatos
oxitetraciclinas polivinilpirrolidona dextraacuten y el aacutecido p-aminosaliciacutelico dan
reacciones positivos falsos Los conservadores con formalina y formaldehiacutedo
pueden dar lugar tambieacuten a falsos positivos
INVESTIGACION DE CUERPOS CETONICOS
REACCION DE ROTHERA
Es una teacutecnica que usa nitroprusiano y permite la formacioacuten de un anillo Permite
la determinacioacuten del aacutecido diaceacuteticoacetona no permite la deteccioacuten del aacutecido B-
hidroxibutiacuterico
Reactivos
1) Reactivo de Rothera compuesta por 75 g de nitroprusiato de sodio y
200mg de sulfato de amonio
2) Hidroacutexido de amonio concentrado
Laboratorio Cliacutenico PAULINA ARROLLO PEREacuteZ
Procedimiento
1) En un tubo de ensayo agregar 1g de reactivo de Rothera con 5 ml de orina
Mezclar por inversioacuten
2) Luego agregar 1ml de hidroacutexido de amonio concentrado
3) Si la prueba es positiva se forma un anillo rojo a puacuterpura en el tiempo de
112 minuto en el punto de contacto
Dar los resultados seguacuten la siguiente pauta
Negativa No se forma el anillo o la formacioacuten de un anillo marroacuten
Trazas La formacioacuten de un anillo puacuterpura o de color rosado
2(+) La formacioacuten de un anillo puacuterpura oscuro estrecho limitado
4 (++++) La formacioacuten de un anillo puacuterpura oscuro extenso
DETECCION DE SANGRE EN ORINA (SANGRE OCULTA)
PRUEBA DE BENCIDINA
Reactivo A
Solucioacuten de Bencidina al 1 en aacutecido aceacutetico al 50
Peroacutexido de hidroacutegeno de 10 voluacutemenes
Procedimiento
En un tubo o sobre un papel filtro( en este caso ldquomancharrdquo el papel con la muestra
en estudio)
2 ndash 4 gotas de bencidina
Agregar 2 ndash 4 gotas de peroacutexido de hidroacutegeno (agua oxigenada)
Interpretacioacuten
Si existe sangre se formaraacute un halo verde azulado
Negativo halo marroacuten
Reactivo B
Solucioacuten de Piramidoacuten al 5 en aacutecido aceacutetico al 50
Peroacutexido de hidroacutegeno de 10 voluacutemenes
La solucioacuten de piramidoacuten puede ser preparada sin aacutecido aceacutetico por lo tanto el
orden de uso es piramidoacuten acido aceacutetico agua oxigenada Resultado
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DETERMINACION DE BILIRRUBINA Y UROBILINOGENO
REACCION DEL YODO DE SMITH (BILIRRUBINAS)
En un tubo de ensayo colocar 5ml de orina aacutecida y cubrirla con 2ml de una
solucioacuten de yodo al 07 en alcohopl etiacutelico al 95 La presencia de un anillo de
color verde esmeralda en la interfase de ambos liacutequidos indica la presencia de
bilirrubina
La deteccioacuten de urobilinoacutegeno en orina tambieacuten indican un problema hepaacutetico Uno
de los problemas importantes en la deteccioacuten de urobilinoacutegeno
REACCION CUANTITATIVA DE EHRLICH
Reactivo de Ehrlich
p-dimetilanminobenzaldehiacutedo 10g
HCl concentrado 75ml
Agua destilada 75ml
Procedimiento
1- Colocar 10ml de orina en un tubo de ensayo recieacuten emitida
2- Agregar 1ml del reactivo de Ehrlich
3- Dejar en reposo durante 5 minutos
La presencia urobilinoacutegeno determina que la solucioacuten cambie de color niveles
altos y dan un color rojo cereza
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E PRACTICA 3
DEPURACION DE CREATININACREATININA Generalidad
La creatinina es una sustancia que deriva del metabolismo muscular
(muacutesculo estriado liso y cardiacuteaco) de la creatina y representa el
subproducto de excrecioacuten La produccioacuten de creatinina es independiente
de la dieta y del ejercicio muscular sin embargo es proporcional dentro
de ciertos liacutemites a la masa muscular Se libera de los glomeacuterulos y no
es reabsorbida por los tuacutebulos de los cuales puede ser excretada
especialmente cuando se aumenta la concentracioacuten hemaacutetica El
aumento de la creatinina en el suero empieza a ser evidente cuando el
filtrado glomerular es por debajo de 60 ml por minuto
Indicaciones
La determinacioacuten de la cratinina es utilizada en el diagnoacutestico de las
enfermedades renales agudas o croacutenicas y tambieacuten para el monitoreo
de la diaacutelisis renal El aumento de la creatinina es un iacutendice de la
insuficiencia glomerular en cuanto eacutesta es eliminada por filtracioacuten
glomerular Mientras la uremia en la sangre puede ser controlada a
traveacutes de una oportuna dieta la creatinina se correlaciona casi
exclusivamente a la eficiencia de la filtracioacuten glomerular La creatinina
representa el iacutendice maacutes fiel de la insuficiencia renal
Preparacioacuten del paciente
Ayuno
Modalidad de la toma de muestra
Ninguna particularidad
Transporte
Transportar a temperatura ambiente
Conservacioacuten
Centrifugacioacuten y separacioacuten del suero la toma de muestra se puede
conservar por 1 diacutea a temperatura ambiente de 20-25oC 7 diacuteas 2-4oC y
6 meses en congelacioacuten
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Centrifugacioacuten
Poner el tubo de ensayo en la centriacutefuga de modo balanceado poner el
reloj 5 minutos y centrifugar por 3000 rpm Verificar la idoneidad del
suero o plasma ictericia presencia de coaacutegulos filamentos de fibrina
turbidez Sentildealar eventualmente en el resultado la no idoneidad de la
muestra
Metoacutedicas de determinacioacuten
Meacutetodo cineacutetico enzimaacutetico
El meacutetodo enzimaacutetico colorimeacutetrico consiste en la medida del color
desarrollado con el reactivo de Jaffe antes y despueacutes de una reaccioacuten
con la enzima especiacutefica la creatincinasa esta enzima transforma la
creatinina en creatina con medida final a 340 nm de la creatina
Meacutetodo colorimeacutetrico y procedimiento analiacutetico
Ademaacutes de la determinacioacuten de la creatinina con una teacutecnica de punto
final maacutes frecuentemente se utiliza una teacutecnica cineacutetica en la cual la
creatinina en medio alcalino reacciona con picrato produciendo un
complejo coloreado rojo-naranja la diferencia de absorcioacuten durante el
tiempo de conversioacuten es directamente proporcional a la concentracioacuten
de creatinina en la muestra
Creatinina + aacutecido piacutecrico mdashmdashmdashgt creatinina picrato (complejo)
Materiales
1048664 Guantes descartables no esteacuteriles
1048664 Tubos de ensayo 13 x 100 mm
1048664 Puntas de pipeta 10-100 ul
1048664 1048664 Puntas de pipeta 100-1000 ul
1048664 1048664 Centriacutefuga
1048664 Espectrofotoacutemetro
1048664 Bantildeo Mariacutea
1048664 Reloj marcador
1048664 Pipetas automaacuteticas 10-100 ul
1048664 Pipetas automaacuteticas 100-1000 ul
Laboratorio Cliacutenico PAULINA ARROLLO PEREacuteZ
Procedimiento
Seguir las instrucciones de la casa comercial
Control de Calidad
Se deberaacuten usar sueros control normal y patoloacutegico en las mismas
condiciones que las muestras
Notas sobre la metoacutedica
Linealidad
Es lineal hasta 250 mgdl
Sensibilidad
Su sensibilidad es 01 mgdl
Especificidad
La metoacutedica es especiacutefica para la creatinina
Las muestras de suero tienen proteiacutenas que pueden reaccionar no
especiacuteficamente con el meacutetodo Jaffe es necesario corregir el valor de
03 mgdl para lograr valores maacutes correctos
Interferencias
Las interferencias maacutes significativas son
Hemoacutelisis con Hb ge100 gl
Icteacuterico bilirrubina ge400 mgdl
Lipemia trigliceacuteridos ge20000 mgdl
Acetona ge500 mgdl
Algunos antibioacuteticos como las cefalosporinas pueden dar valores
falsamente elevados
Valor de referencia
Hombres Hasta 13 mgdl
Mujeres Hasta 11 mgdl
Neonatos o nintildeos Hasta 07 mgdl
Criterios de validacioacuten
Confrontar paraacutemetros de funcionalidad renal (urea potasio proteiacutenas
densidad urinaria)
Confrontar paraacutemetros de equilibrio electroliacuteticos (sodio potasio cloro)
Laboratorio Cliacutenico PAULINA ARROLLO PEREacuteZ
Controlar sexo y edad del paciente y tambieacuten eventual estado de
embarazo
Controlar paraacutemetros del metabolismo muscular (CPK miacuteoglobulina)
DEPURACION DE CREATININA
Generalidad
La cantidad de creatinina excretada con la orina estaacute en relacioacuten con la
filtracioacuten glomerular La creatinina es una sustancia que deriva del
metabolismo muscular (muacutesculo estriado liso y cardiacuteaco) de la creatina
y representa el subproducto de excrecioacuten La produccioacuten de creatinina
es independiente de la dieta y del ejercicio muscular sin embargo es
proporcional dentro de algunos liacutemites a la masa muscular Se libera
desde los glomeacuterulos y no es reabsorbida por los tuacutebulos de los cuales
puede ser excretada especialmente cuando se aumenta la
concentracioacuten hemaacutetica El aumento de la creatinina en el suero
empieza a ser evidente cuando el filtrado glomerular es por debajo de
60 ml por minuto
La medida de la cantidad de creatinina en la orina producida en un
determinado periacuteodo de tiempo simultaacuteneamente a la medida de la
concentracioacuten plasmaacutetica lleva al caacutelculo el aclaramiento de la
creatinina (volumen del plasma en ml que es depurado de la creatinina
en un minuto de tiempo)
C= U x VP (mlmin)
donde
C= aclaramiento
U= concentracioacuten de creatinina en la orina
V= volumen de la orina eliminada
P= concentracioacuten de creatinina en el plasma
Indicaciones
La estrecha correlacioacuten entre la velocidad de filtracioacuten glomerular y el
valor de la creatinina plasmaacutetica y el hecho que la concentracioacuten de la
creatinina hemaacutetica no es influenciada por la dieta hacen de la
Laboratorio Cliacutenico PAULINA ARROLLO PEREacuteZ
creatinina en particular el aclaramiento de la creatinina un iacutendice de
funcionalidad renal muy sensible y seguramente maacutes significativo que la
urea
El aclaramiento de la creatinina se modifica en relacioacuten con la
enfermedad renal (glomerulonefritis agudas o croacutenicas rintildeoacuten policiacutestico
obstruccioacuten de la viacutea renal)
Preparacioacuten del paciente
Ayuno
Modalidad de la toma de muestra
A) Recoger la orina de 24 horas con el siguiente procedimiento
Para la recoleccioacuten de orina de 24 horas se tiene que utilizar un frasco
de 25 30 litros de boca ancha con tapoacuten de rosca Antildeadir al frasco un
estabilizante si es necesario
Para la recogida de la orina se procede del modo siguiente
a) En el tiempo preestablecido vaciar la vejiga e eliminar toda la
orina
b) Posteriormente comenzar a recoger toda la orina de 24 horas
c) Al cumplir las 24 horas vaciar de nuevo la vejiga y depositar toda
la orina en el frasco Conservar las orinas a 2-4degC
Al finalizar la recoleccioacuten de orina eacutesta debe ser enviada
inmediatamente al laboratorio
B) Cuando se entrega la muestra de orina es necesario efectuar la toma
de muestra de sangre
Transporte
La muestra de orina debe ser transportada de 2-4degC la muestra de
sangre a temperatura ambiente
Conservacioacuten
Centrifugacioacuten y separacioacuten del suero la toma de muestra se puede
conservar por 1 diacutea a temperatura ambiente de 20-25oC 7 diacuteas 2-4oC y
6 meses en congelacioacuten
Conservar las orinas a 2-4degC
Laboratorio Cliacutenico PAULINA ARROLLO PEREacuteZ
Verificacioacuten de la muestra
Verificar que el registro de la toma de muestra esteacute correcto
Metoacutedica de determinacioacuten
Cu x Vmin
Aclaramiento de la creatinina = mdashmdashmdashmdashmdashmdashmdashmdashmdashmdashmdashmdash
Ps
donde
Cu= concentracioacuten de creatinina en la orina expresado en mgdl
Ps = concentracioacuten de creatinina en suero expresado en mgdl
Vmin= volumen por minuto (cantidad de la diuresis entre 1440)
Procedimiento analiacutetico
Ver metoacutedica de la creatinina
Notas sobre la metoacutedica
Linealidad
Referirse a las metoacutedicas de creatinina Es lineal hasta 250 mgdl
Sensibilidad
Referirse a las metoacutedicas de creatinina Su sensibilidad es 01 mgdl
Especificidad
Referirse a las metoacutedicas de creatinina
Las muestras de suero tienen proteiacutenas que pueden reaccionar no
especiacuteficamente con el
meacutetodo Jaffe Es necesario corregir el valor de 03 mgdl para lograr
valores maacutes correctos
Interferencias
Las interferencias significativas se deben
Para las orinas
Presencia de partiacuteculas en suspensioacuten (centrifugar las orinas)
Mala recoleccioacuten de orina
Presencia de bacterias de barbituacutericos de cuerpos cetoacutenicos
Para la sangre
Hemoacutelisis con Hb ge100 gl
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Icteacuterico bilirrubina ge400 mgdl
Lipemia trigliceacuteridos ge20000 mgdl
Acetona ge500 mgdl
Valor de referencia
ge70mlmin
PRACTICA 4
EXAMEN MICROSCOacutePICO DEL SEDIMENTO URINARIO
PROPOacuteSITO
Observar microscoacutepicamente en el sedimento urinario elementos celulares
cilindros cristales paraacutesitos filamentos mucoides y bacterias Con el fin
de sugerir una patologiacutea del tracto urinario u otras enfermedades que esteacuten
en diferente localizacioacuten
MUESTRA REQUERIDA
15 mL de orina
MATERIALES
- Tubos coacutenicos de 15 mL
- Laacuteminas portaobjetos
- Laminillas cubreobjetos
- Marcador para vidrio
- Gradillas para tubos
- Guantes descartables
EQUIPO
- Reloj marcador
- Centriacutefuga
- Microscopio
PROCEDIMIENTO
- Centrifugar durante 5 minutos a 2500 rpm
- Descartar el liacutequido sobrenadante
- Suspender el sedimento urinario golpeando ligeramente con la mano
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- Colocar una gota de sedimento entre un porta y un cubreobjeto
- Observar la preparacioacuten con el objetivo 10x para lograr una visioacuten general del
sedimento
- Identificar los elementos formes a mayor aumento 40x
- Anotar lo observado
FUENTES DE ERROR
- Usar portaobjetos y cubreobjetos sucios
- Desecacioacuten del sedimento urinario
-Tiempo transcurrido desde la toma de la muestra hasta la observacioacuten
microscoacutepica
- Uso excesivo de luz
- Centrifugacioacuten inadecuada
FORMA DE REPORTE
CEacuteLULAS EPITELIALES ESCAMOSAS Y REDONDAS reportar escasas
moderadas o abundantes
GLOacuteBULOS ROJOS Reportar el nuacutemero estimado por campo
LEUCOCITOS Reportar el nuacutemero estimado por campo
CILINDROS se pueden encontrar en la orina los siguientes cilindros
hialinos granulosos finos y gruesos leucocitarios hemaacuteticos grasos y ceacutereos
Reportar el nuacutemero de cilindros observados por campo
FILAMENTOS MUCOIDES reportar escasos moderados o abundantes
CRISTALES se pueden encontrar en la orina los siguientes cristales oxalatos de
calcio acido uacuterico uratos amorfos fosfatos amorfos fosfatos triples urato de
amonio leucina cistina y tirosina
Reportar en la forma siguiente escasos moderados o abundantes
LEVADURAS Reportar escasos moderada y abundantes
PARAacuteSITOS Se pueden encontrar en orina Trichomonas vaginalis Phitirus pubis
huevos y quistes de paraacutesitos por contaminacioacuten con heces
BACTERIAS Reportar la presencia de bacterias moderadas o abundantes
solamente cuando se observen maacutes de 10 leucocitos por campo
Valores de referencia
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CEacuteLULAS EPITELIALES ESCAMOSAS Escasas a moderadas
CEacuteLULAS EPITELIALES REDONDAS No deben observarse
GLOacuteBULOS ROJOS No deben observarse
LEUCOCITOS 0-5 por campo
CILINDROS No deben observarse
FILAMENTOS MUCOIDES No deben observarse
CRISTALES Podriacutean observarse oxalatos uratos y fosfatos amorfos de escasa a
moderada cantidad
LEVADURAS No deben observarse
PARAacuteSITOS No deben observarse
BACTERIAS Escasas o no presentes
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PRACTICA 6
UROCULTIVO Y ANTIBIOGRAMA
OBTENCIOacuteN DE MUESTRA DE ORINA PARA CULTIVO
Condiciones generales
La orina es un excelente medio de cultivo para la proliferacioacuten bacteriana por esta
razoacuten la muestra debe ser procesada dentro de las 2 horas despueacutes de haber
sido obtenida o debe refrigerarse a 4 degC (maacuteximo 24 horas) hasta su
procesamiento
Generalmente el desarrollo de dos o maacutes tipos de colonias (en pacientes sin
sonda vesical) indican que la muestra se ha contaminado por recoleccioacuten
incorrecta o demora en la siembra
OBTENCIOacuteN DE MUESTRA DE ORINA DEL CHORRO MEDIO
Obtencioacuten de muestras de orina en pacientes mujeres Materiales y equipos
a) Guantes de laacutetex esteacuteriles
b) Cinco o maacutes piezas de gasa esteacuteril de tamantildeo adecuado pudiendo
ser de 4rdquo x 4rdquo
c) Jaboacuten
d) Agua tibia esteacuteril
e) Frasco esteacuteril de boca ancha para la muestra de orina
Procedimiento
a) Mantener la privacidad de la paciente
b) Rotular el frasco con el nombre de la paciente fecha de obtencioacuten de la
muestra hora y el procedimiento usado para la obtencioacuten de la muestra
c) Lavarse las manos con jaboacuten y abundante agua
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d) Preparar una pieza de gasa para la limpieza de los genitales externos
humedicieacutendola con agua y una pequentildea cantidad de jaboacuten Preparar dos piezas
maacutes de gasa para el enjuague con agua tibia
e) Separar los labios mayores con dos dedos de una mano y limpiar el aacuterea
expuesta pasando la gasa de adelante hacia atraacutes
f) Descartar la gasa
g) Con otra gasa humedecida enjuagar el aacuterea de adelante hacia atraacutes Repetir el
procedimiento con otra gasa
h) Finalmente secar el aacuterea de adelante hacia atraacutes con un trozo de gasa seca
i) Mantener separados los labios mayores mientras la paciente empieza a orinar
Luego del chorro inicial colocar el frasco esteacuteril para colectar el chorro medio
j) Al terminar la recoleccioacuten tapar el frasco inmediatamente y limpiarle la
superficie
k) Transportar el frasco con la muestra de orina inmediatamente
Obtencioacuten de muestra de orina en pacientes varones
Materiales
a) Guantes de laacutetex
b) Cinco o maacutes piezas de gasa esteacuteril
c) Jaboacuten
d) Agua tibia esteacuteril
e) Frasco esteacuteril de boca ancha para la obtencioacuten de la muestra
Procedimiento
a) Mantener la privacidad del paciente
b) Rotular el frasco con el nombre del paciente fecha de obtencioacuten de la muestra
hora y el procedimiento usado para la obtencioacuten de la muestra
c) Lavarse las manos con jaboacuten y abundante agua
d) Preparar una pieza de gasa con agua y una pequentildea cantidad de jaboacuten
Preparar dos piezas maacutes de gasa para el enjuague con agua tibia
e) Realizar la higiene de los genitales Retraer el prepucio antes de lavar el glande
con la gasa humedecida con jaboacuten Descartar la gasa
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f) Enjuagar el glande usando una gasa huacutemeda Repetir el procedimiento con otra
gasa
g) Secar la zona usando uno o maacutes piezas de gasa seca
h) Indicar al paciente que mantenga el prepucio retirado e inicie la miccioacuten
directamente en un recipiente (orina para descartar)
i) Despueacutes del chorro inicial colocar el frasco esteacuteril para colectar la muestra del
chorro medio
j) Obtenida la muestra tapar el frasco inmediatamente y limpiarle la superficie
k) Transportar el frasco con la muestra de orina inmediatamente al laboratorio
SIEMBRA PRIMARIA DE MUESTRA DE ORINA
Objetivo
Describir el procedimiento para la siembra primaria de muestra de orina
Campo de aplicacioacuten
Se aplica para el cultivo de muestra de orina en el diagnoacutestico bacterioloacutegico de
infecciones del tracto urinario
Materiales y equipos
a) Asa calibrada de platino o descartable de 0001 mL oacute 001 mL
b) Estufa de 35 ndash 37 degC
c) Mechero Bunsen o cabina de flujo laminar
d) Guantes de laacutetex
e) Contenedor de material contaminado
f) Pinza esteacuteril
g) Propipeta o pipetor automaacutetico
h) Medios de cultivo
ndash Placas con agar sangre de carnero (AS)
ndash Placas con agar Mc Conkey (McC)
Procedimiento
a) Mantener las muestras en refrigeracioacuten (4 degC) hasta su procesamiento por
cultivo
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b) Los cultivos deben realizarse en una cabina de bioseguridad o cerca del
mechero Bunsen
c) Las placas con AS y McC que se utilizaraacuten en el urocultivo deben estar a
temperatura ambiente Rotular las placas
d) Si el asa calibrada no es descartable esterilizar el asa de siembra flameacuteandola
en el mechero Bunsen hasta que se ponga rojo vivo Dejar enfriar el asa
e) Tomar el frasco con la muestra de orina abrir la tapa y flamear la boca del
frasco en el mechero Bunsen
f) Tomar la muestra de orina con el asa de siembra esteacuteril introducieacutendola y
sacaacutendola del frasco en forma vertical Tapar el frasco con la muestra
g) Inocular en el centro de la placa con AS a partir del cual se extiende la muestra
hacia delante y hacia atraacutes
h) Luego sin quemar el asa el inoacuteculo se disemina uniformemente con trazos
perpendiculares a la siembra inicial en toda la placa
i) Proceder de la misma forma para el agar Mc Conkey
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Lectura
a) Realizar la evaluacioacuten a las 24 horas si no hay crecimiento bacteriano dejar
incubar hasta las 48 horas
b) La evaluacioacuten consiste en realizar el recuento de colonias cuyo resultado se
multiplica por el factor de dilucioacuten para obtener las UFC por mL
Interpretacioacuten
a) En pacientes sin sonda vesical la cuenta significativa de bacterias en orina es
la presencia de maacutes de 105 UFC mL de un solo germen
b) Los recuentos intermedios (103 ndash 104 UFCmL) indican infeccioacuten si el
procedimiento de recoleccioacuten de orina fue realizado correctamente
c) Generalmente el aislamiento de tres o maacutes especies bacterianas indican que la
muestra se ha contaminado por recoleccioacuten inadecuada o demora en la siembra
d) En pacientes con sonda vesical cuentas bacterianas menores de 105 UFCmL
pueden tener significado asiacute tambieacuten se pueden encontrar bacteriurias
polimicrobianas hasta en casi 15 de enfermos
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e) En pacientes sin cateacuteter se puede comprobar si el procedimiento de obtencioacuten
de muestra fue realizado correctamente observando la frecuencia con la cual se
informan recuentos de colonias intermedias entre 103 ndash 104 UFCmL En
pacientes sin infecciones del tracto urinario el recuento es nulo o se reduce a
pocas colonias
IDENTIFICACION BACTERIANA
Lectura de cultivos en agar Mac Conkey
ndash En agar Mc Conkey Escherichia coli lactosa positiva forma colonias de borde
entero de color fucsia opacas de 2 mm ndash 3 mm de diaacutemetro usualmente
rodeadas de una zona opaca alrededor de la colonia (bilis precipitada) Las cepas
de E coli que son lactosa negativa dan colonias incoloras de 3 ndash 4 mm
ndash En agar Mc Conkey K pneumoniae forma colonias de borde entero de color
rosado a rosado oscuro de 3 ndash 4 mm de diaacutemetro y aspecto mucoide
ndash En agar Mc Conkey Enterobacter spp forma colonias de borde entero de color
rosado de 2 ndash 4 mm de diaacutemetro no tan mucoides como K pneumoniae
Las colonias con estas caracteriacutesticas son subcultivadas en medios diferenciales
PRUEBAS BIOQUIMICAS
TSI
Lectura
Es importante hacer la lectura entre las 18 ndash 24 horas para no obtener resultados
erroacuteneos La lectura se hace sobre la base de tres caracteriacutesticas Utilizacioacuten de
hidratos de carbono produccioacuten de gas y produccioacuten de aacutecido sulfhiacutedrico
Utilizacioacuten de hidratos de carbono
ndash Utilizacioacuten de lactosa Reaccioacuten aacutecida en el pico de flauta (color amarillo)
Abreviatura (A)
ndash Utilizacioacuten de glucosa Reaccioacuten aacutecida en la columna del medio (color amarillo)
Abreviatura (A)
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ndash No hay utilizacioacuten del carbohidrato Se puede observar una reaccioacuten alcalina
(color rojo) o que no hay cambio de color (permanece del mismo color que el
medio no inoculado) Abreviaturas (K) o (N) respectivamente
Nota Cuando el microorganismo tambieacuten produce H2S el precipitado negro
puede ocultar la acidez
Produccioacuten de gas de glucosa
ndash Se considera positivo Presencia de una sola burbuja de gas burbujas en el
medio divisioacuten del medio desplazamiento completo del medio del fondo del tubo
dejando un aacuterea clara o una ligera muesca del medio en el costado del tubo
ndash Se registra la lectura por medio de cruces (+)
Produccioacuten de aacutecido sulfhiacutedrico
ndash Se manifiesta por un color negro distribuido por toda la columna del medio de
cultivo o soacutelo en la parte superior
ndash Se registra la lectura por medio de cruces (+)
Resultados
Ejemplo de simbolizacioacuten e interpretacioacuten
KA ndash+ Significa alcalinidad en la inclinacioacuten y acidez en el fondo (fermentacioacuten de
glucosa) gas negativo y H2S positivo
NN ndash ndashSignifica que no hay utilizacioacuten de la lactosa y glucosa ni produccioacuten de
H2S
AGAR LISINA HIERRO
En este medio se determina simultaacuteneamente la produccioacuten de lisina
descarboxilasa y de la formacioacuten de aacutecido sulfhiacutedrico
Lectura
Es importante hacer la lectura entre las 18 ndash 24 horas si la lectura se realiza antes
podemos obtener resultados falsos positivos asiacute como falsos negativos si se lee
despueacutes de las 24 horas Realizar la lectura en la columna y en la superficie
inclinada y observar la formacioacuten de aacutecido sulfhiacutedrico el cual se evidencia por una
coloracioacuten negra
Nota Generalmente las cepas del grupo Proteus y Providencia desaminan la
lisina a aacutecido ndashcetocarboacutenico Este uacuteltimo forma compuestos pardo-rojizos en la
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regioacuten superficial del medio de cultivo con la sal de hierro y bajo la influencia del
oxiacutegeno
Recomendaciones
No incubar maacutes del tiempo necesario para no ocasionar una alcalinizacioacuten en la
superficie del medio y por lo tanto producir un viraje hacia el violeta
UTILIZACIOacuteN DE CITRATO
Para determinar si un microorganismo es capaz de utilizar citrato como uacutenica
fuente de carbono para su metabolismo
Procedimiento
a) Incubar a 35ndash37 degC de 24 horasndash 48 horas En algunos casos es necesario una
incubacioacuten hasta por 4 diacuteas
b) Ver el viraje de color
Resultados
a) Prueba positiva Crecimiento con un color azul intenso en el pico de flauta o
presencia de colonias en ausencia del color azul
b) Prueba negativa No se observa crecimiento ni cambio de color (verde)
Controles
Positivo Enterobacter cloacae
Negativo Escherichia coli
HIDROacuteLISIS DE LA UREA (PRODUCCIOacuteN DE UREASA)
Es uacutetil para determinar la capacidad de un organismo de degradar la urea
formando dos moleacuteculas de amoniaco por accioacuten de la enzima ureasa
Procedimiento
Realizar la lectura despueacutes de 18 horas ndash 24 horas de incubacioacuten observando el
viraje de color
Resultados
Prueba positiva Color rosado intenso en el pico de flauta o todo el agar
Puede haber una reaccioacuten positiva retardada despueacutes de 24 horas y hasta
6 diacuteas de incubacioacuten (algunas cepas de Klebsiella por ejemplo)
Prueba negativa No se produce cambio de color
Controles
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Negativo Escherichia coli
Positivo Klebsiella pneumoniae
MOTILIDAD (MEDIOS SIM O MIO O AGAR MOVILIDAD)
Para determinar si un organismo es moacutevil o inmoacutevil
Procedimiento
Incubar a 35 ndash 37 degC de 24 a 48 horas
Resultados
Positivo Los microorganismos migran de la liacutenea de siembra y se difunden en el
medio provocando turbidez Tambieacuten puede manifestarse semejando
ldquovellosidadesrdquo a lo largo del trazo de siembra
Negativo Se observa un crecimiento bacteriano acentuado siguiendo el trazo de
siembra y el medio circundante se mantiene claro
Controles
Control positivo Escherichia coli
Control negativo Klebsiella pneumoniae
h) Prueba de indol[6]
Es uacutetil para determinar la capacidad de un microorganismo de producir indol a
partir del aminoaacutecido triptoacutefano
Medios y reactivos
Caldo de triptoacutefano o de peptona o caldo de triptona
Reactivo de indol de Kovacs
Procedimiento
Retirar aseacutepticamente 2 mL de caldo de cutivo con 24 horas de incubacioacuten
Agregar 5 gotas de reactivo de Kovacs
Mover suavemente el tubo y realizar la lectura
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ANTIBIOGRAMA
Preparacioacuten del Agar Mueller Hinton
Preparar el medio a partir de la base deshidratada de acuerdo a las
indicaciones del fabricante
Autoclavar y dejar enfriar en bantildeo de agua hasta que alcance los 45degC - 50degC
Repartir el medio en placas petri (60 ml ndash 70 ml o 25 ml ndash 30 ml para placas de
150 mm o 100 mm de diaacutemetro interno respectivamente) de manera que el
grosor del agar en la placa sea de 4 mm
Realizar las pruebas de esterilidad para cada lote de Mueller Hinton incubando
una o dos placas de cada lote a 30degC ndash 35degC durante 24 horas o maacutes Estas
placas utilizadas deben ser luego descartadas
Preparacioacuten del estaacutendar (05 Mc Farland) para el inoacuteculo
Para estandarizar la densidad del inoacuteculo se usa una suspensioacuten de sulfato de
bario (05 de la escala de Mac Farland) como estaacutendar
Preparacioacuten del estaacutendar de turbidez
a Agregar 05 ml de una solucioacuten de BaCl2 0048 M (BaCl22H2O al 1175 PV)
a 995 mL de una solucioacuten de H2SO4 018 M (036 N) (1 VV) en constante
movimiento para mantener la suspensioacuten
b Verificar la densidad correcta del estaacutendar usando un fotocoloriacutemetro oacute
espectrofotoacutemetro cuya absorbancia a 625 nm es 008 a 010 para el estaacutendar 05
de Mc Farland
c Distribuir de 4 ml a 6 ml en tubos con tapa de rosca o tapoacuten de jebe similares a
los que se usaraacuten para preparar el inoacuteculo
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d Ajustar bien las tapas o tapones y conservarlos en la oscuridad a temperatura
ambiente y anotar la fecha de preparacioacuten
e Antes de ser usado agitar vigorosamente dicho estaacutendar de preferencia en un
agitador mecaacutenico
f Verificar mensualmente la densidad de los estaacutendares de sulfato de bario y
reemplazarlo cuando sea necesario
INOCULACIOacuteN
Preparacioacuten del inoacuteculo
Puede realizarse de dos formas
Meacutetodo de desarrollo previo
a Seleccionar cuatro a cinco colonias bien aisladas del mismo tipo morfoloacutegico
de un cultivo en placa
b Tocar la superficie de cada colonia con una asa de siembra y transferirlo a un
tubo que contiene de 4 a 5 mL de caldo apropiado (Ej Caldo Tripticasa soya)
c Incubar el caldo a una temperatura entre 35degC a 37degC hasta que alcance o
exceda la turbidez del estaacutendar 05 de la escala de Mc Farland (por lo general de
2 a 6 horas)
d Ajustar la turbidez del inoacuteculo con solucioacuten salina o caldo apropiado hasta el
tubo 05 de la escala de Mc Farland por comparacioacuten visual con el estaacutendar Para
realizar este paso correctamente usar una luz apropiada y mirar los tubos contra
un fondo blanco con liacuteneas negras como contraste
e La suspensioacuten preparada contendraacute aproximadamente 1 a 2 x 108 UFCmL
Meacutetodo directo de inoculacioacuten a partir de colonias aisladas
a De una placa de cultivo con agar no selectivo e incubada por 18 - 24 h
seleccionar colonias aisladas y preparar una suspensioacutem directa en solucioacuten
salina oacute caldo
b La suspensioacuten debe ser inmediatamente ajustada a la escala 05 de Mc
Farland
Inoculacioacuten de las Placas
Dentro de los 15 minutos siguientes al ajuste de la turbidez del inoacuteculo sumergir
un hisopo esteacuteril en la suspensioacuten rotar el hisopo varias veces presionando
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firmemente sobre la pared interior del tubo por encima del nivel del liacutequido para
remover el exceso de inoacuteculo
Inocular la superficie seca de la placa de Mueller Hinton estriando con el hisopo
en tres direcciones para asegurar una distribucioacuten uniforme del inoacuteculo Antes de
colocar los discos dejar secar la placa a temperatura ambiente durante 3 a 5
minutos para que cualquier exceso de humedad superficial sea absorbido
APLICACIOacuteN DE LOS DISCOS
Colocar los discos individuales o multidiscos sobre la superficie del agar con la
ayuda de una pinza esteacuteril o la punta de una aguja presionando suavemente sobre
cada disco para asegurar un contacto completo con la superficie del agar
Distribuir los discos uniformemente de modo que esteacuten a una distancia miacutenima de
25 mm uno del otro (el diaacutemetro de los discos seguacuten las normas de la
Organizacioacuten Mundial de la Salud (OMS) debe ser de 6 mm) No deben colocarse
maacutes de 12 discos en una placa de 150 mm ni maacutes de 6 en una placa de 100 mm
de diaacutemetro interno para evitar la superposicioacuten de las zonas de inhibicioacuten Un
disco no debe ser removido una vez que tomoacute contacto con la superficie del agar
debido a que algunos antibioacuteticos se difunden raacutepidamente
INCUBACIOacuteN
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Incubar lar placas en posicioacuten invertida a 35degC por 18 a 24 horas dentro de los 15
minutos posteriores a la aplicacioacuten de los discos
Despueacutes del tiempo recomendado de incubacioacuten examinar cada placa y medir los
diaacutemetros de los halos de inhibicioacuten alrededor de cada disco
LECTURA DE LAS PLACAS E INTERPRETACIOacuteN DE LOS RESULTADOS
Medir los diaacutemetros de las zonas de inhibicioacuten completa (incluyendo el diaacutemetro
del disco) usando
una regla o calibrador Se debe mantener iluminada la parte posterior de la placa
petri con una luz reflejada localizada a unos cuantos centiacutemetros sobre un fondo
negro Tener la precaucioacuten de observar la placa siguiendo una vertical directa para
evitar una lectura erroacutenea de las marcas de la regla por efecto de paralelismo En
los medios suplementados con sangre las zonas son medidas en la parte superior
de la superficie del agar y retirando la tapa Tener cuidado de no medir la zona de
la hemoacutelisis sino la de inhibicioacuten del crecimiento
El punto final debe tomarse como el aacuterea que no muestra un crecimiento obvio
visible que puede ser detectado mediante observacioacuten visual no incluyendo velo
de crecimiento o colonias muy pequentildeas que puedan ser detectadas solo con
mucha dificultad en el borde de la zona Sin embargo las colonias mayores
creciendo dentro de la zona clara deberaacuten ser subcultivadas reidentificadas y
reensayadas Algunos Proteus spp debido a su gran movilidad pueden presentar
un velo de invasioacuten o ldquoswarmingrdquo dentro de las zonas de inhibicioacuten de algunos
antibioacuteticos En estos casos el velo del swarming debe ser ignorado al momento
de medir los halos de inhibicioacuten
DISCOS DE SENSIBILIDAD ANTIBIOacuteTICA A INCLUIR EN EL ANTIBIOGRAMA
Grupo I
Ampicilina
Cefalotina
Ampicilina Sulbactam o Amoxicilina Aacutecido Clavulaacutenico
Cefuroxima
Cefotaxima o Ceftriaxona
Gentamicina
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Amikacina
Aacutecido Nalidiacutexico(1)
Norfloxacina(1)
Ciprofloxacina
Cotrimoxazol (TrimetoprimSulfametoxazol)
Nitrofurantoiacutena(1)
Grupo II
Cefoxitina
Aztreonam
Ceftazidima
Cefixima
CefoperazonaSulbactam
Cefepime o Cefpirome
Imipenem o Meropenem
Cloramfenicol
Ofloxacina (1)
(1) Disco utilizado exclusivamente para infecciones de las viacuteas urinarias
Resistencias Naturales
Las enterobacterias son resistentes a Penicilina Oxacilina Macroacutelidos
Clindamicina y Glicopeacuteptidos
Klebsiella spp es resistente a las Aminopenicilinas
Citrobacter freundii Enterobacter cloacae y Enterobacter aerogenes son
resistentes a las Aminopenicilinas AminopenicilinasInhibidores de
betalactamasas Cefalosporinas de primera generacioacuten y Cefuroxima
Serratia marcescens es resistente a las Aminopenicilinas
AminopenicilinasInhibidores de betalactamasas Cefalosporinas de primera
generacioacuten y Cefoxitina
Proteus mirabilis es resistente a Nitrofurantoiacutena
Proteus vulgaris es resistente a las Aminopenicilinas Cefalosporinas de primera
generacioacuten Cefuroxima y Nitrofurantoiacutena
Laboratorio Cliacutenico PAULINA ARROLLO PEREacuteZ
Morganella morganii es resistente a las Aminopenicilinas
AminopenicilinasInhibidores de betalactamasas Cefalosporinas de primera
generacioacuten Cefuroxima y Nitrofurantoiacutena
Providentia stuartii es resistente a las Aminopenicilinas
AminopenicilinasInhibidores de betalactamasas Cefalosporinas de primera
generacioacuten Gentamicina (bajo nivel) y Nitrofurantoiacutena
ANTIBIOTICOS Y DIAMETROS CRITICOS PARA ENTEROBACTERIAS
E PRACTICA 7
EXAMEN QUIMICO DE CALCULO RENAL
EXAMEN FISICO
Laboratorio Cliacutenico PAULINA ARROLLO PEREacuteZ
Se debe pesar el caacutelculo y anotar el dato obtenido Medir dos de los diaacutemetros y
tomar nota del aspecto general textura y color y despueacutes de seccionado el
aspecto general la prominencia y el color de los distintos estratos
Se secciona el caacutelculo con una sierra Se raspan las caras con una aguja Se
procede lo mismo con el nuacutecleo Cada una de las muestras obtenidas se trituran
por separado en un mortero
PROCESO
Se coloca una porcioacuten del polvo del caacutelculo en un crisol y se calienta al fuego Si
no hay ennegrecimiento ni se altera el tamantildeo original el caacutelculo estaraacute formado
por sustancias inorgaacutenicas Si en cambio se carboniza desapareciendo estaraacute
formado por sustancias orgaacutenicas Si se funde y se ennegrece este caacutelculo estaacute
formado por sulfamidasa
Una vez obtenidos los datos pueden seleccionarse las reacciones necesarias
para confirmarlos
REACCIONES QUIMICAS
Solucioacuten A
10mg del polvo en matraz y antildeadir 50 ml de ClH 5 Observar si se
produce efervescencia Calentar en bantildeo de agua hirviendo por 10 a 15 minutos y
filtrar en caliente El filtrado se distribuye en 8 tubos numerados y se introduce un
trocito de papel tornasol en cada uno
Solucioacuten B
Agitar con Cl3CH unos 10 mg del polvo Reposar en tubo tapado a
temperatura ambiente hasta que el insoluble haya precipitado Decantar la
solucioacuten clorofoacutermica y guardar igual que el sedimento por separado
Carbonato efervescencia al agregar el CIH por desprendimiento de CO 2
Amonio al tubo 1 de la solucioacuten A se le agrega solucioacuten de OHNa 10 gota a
gota y agitando hasta que el papel tornasol vire
Agregar 1 ml de reactivo de Nessler Un color amarillo oscuro oporto indica
positividad de la reaccioacuten
Laboratorio Cliacutenico PAULINA ARROLLO PEREacuteZ
El NH 3 formado por los grupos NH 4 en medio alcalino reacciona con el yoiduro
doble del reactivo de Nesler para dar yoduro amoacutenico dimercuacuterico precipitado
pardo anaranjado
Acido uacuterico Neutralizar el contenido del tubo 2 como se explicoacute antes
Agregar igual volumen de CNN Na 2 y 05 ml de reactivo de Folin para aacutecido
uacuterico Un color azul intenso indica presencia de aacutecido uacuterico
El aacutecido uacuterico reduce al aacutecido fosfotuacutengstico en medio alcalino dando color azul
intenso de azul de tungsteno y a su vez se oxida a alantoiacutena
Reactivo fosfotuacutengstico (Folin y Denis) Antes del uso diluir al 10 en agua
destilada
Oxalato de calcio Neutralizar el contenido del tubo 3 Agregar CH 3 COOH 10
hasta reaccioacuten aacutecida al tornasol Precipitado blanco que no se redisuelve por
agitacioacuten indica presencia de oxalato de calcio
Calcio Neutralizar el tubo 4 Acidificar con CH 3 COOH glacial Agregar 2 ml C 2
O 4 ( NH 4 ) 4 Precipitado blancodenso indica presencia de Ca ++
Fosfato Neutralizar el tubo 5 Agregar 1 ml de solucioacuten de molibdato Mezclar
antildeadir 05 ml de aacutecido aminonaftol sulfoacutenico (ANS) 025 Coloracioacuten azul que
aparece en 5 minutos indica fosfatos
El color azul se debe a los oacutexidos reducidos de molibdeno
Reactivos
1 ClH concentrado2 Solucioacuten de OHK 203 NO 3 H concentrado4 Mo O 4 (NH 4 ) 2 disolver 25 g de la droga en 50 ml de SO 4 H 2 10 N y
diluir a 100 ml con H2 O destilada5 Amoniacuteaco
Reactivo ANS En matraz x 250 ml poner 05 g de aacutecido aminonaftolsulfoacutenico y
agrgar 195 ml de bisulfito de sodio 15 y 5 ml de sulfito de sodio 20 Mezclar
bien hasta disolucioacuten Si no se disuelve en media hora agregar maacutes sulfito y
agitar El reactivo dura unas 2 semanas
Laboratorio Cliacutenico PAULINA ARROLLO PEREacuteZ
Magnesio Neutralizar el tubo 7 con OHNH 4 y antildeadir 1 ml de solucioacuten alcohoacutelica
de p ndash Nitrobenceno azorresorcinol Un cromoacutegeno rojo indica presencia de
magnesio
En medio alcalino se forma (OH) 2 Mg El colorante azo resulta absorbido por el
(OH) 2 Mg en medio alcalino
Xantina A un tercio del residuo de la solucioacuten B agregarle gotas de NO 3 H
concentrado
Se disuelve el residuo sin desprender gas Evaporar a sequedad en bantildeo Mariacutea
hirviente quedando un residuo amarillo Dejar enfriar y humedecer con gotas de
OHNa 10 Una coloracioacuten anaranjada que vira al rojo oscuro al calentar indica
presencia de xantina
La reaccioacuten es la xantoproteica Migracioacuten de los anillos fenilo existentes en la
tirosina fenilalanina y triptoacutefano que da un color amarillo de los productos de
nitrosustitucioacuten para virar al anaranjado tras la adicioacuten de un aacutelcali ( formacioacuten de
la sal)
Nota El reactivo de molibdato se puede preparar asiacute
Solucioacuten 1 SO 4 H 2 01 N
Medir 450 ml de SO4 H 2 concentrado y agregarlos a 1300 ml de agua
destilada
Solucioacuten 2
A 250 ml de SO 4 H 2 01 N antildeadir la solucioacuten de molibdato y llevar con
agua destilada a 250 ml Mezclar
Sulfamidas Neutralizar el uacuteltimo tubo Antildeadir 1 ml de NO 2 Na 05 preparado
recientemente Agitar y reposar por 3 minutos Antildeadir 5 ml de solucioacuten alcohoacutelica
de dimetil-alfa naftilamina 025 Un color rojizo indica presencia de sulfamidas
Finalmente procede hacer mencioacuten de ciertos procedimientos fiacutesicos como la
microscopia de polarizacioacuten difraccioacuten de rayos X cristalografiacutea
espectrofotometriacutea de rayos infrarrojos etc que permiten actualmente un
conocimiento maacutes confiable de la estructura de los caacutelculos
- Reactivos
-
Laboratorio Cliacutenico PAULINA ARROLLO PEREacuteZ
DETERMINACION DE PROTEINURIA
AacuteCIDO SULFOSALICIacuteLICO
Esta teacutecnica se basa en la utilizacioacuten de aacutecido sulfosaliciacutelico cuya propiedad es
precipitar proteiacutenas en ausencia de calor Para esta prueba se usa el reactivo de
Exton en cuya composicioacuten se encuentra dicho aacutecido
Reactivo de Exton
Disolver 88g de sulfato de sodio en 600 ml de agua destilada con ayuda de calor
Enfriar Luego agregar 50 g de aacutecido sulfosaliciacutelico y diluir a 1000 ml
Procedimiento
1-Centrifugar una aliacutecuota de orina y luego utilizar el liacutequido sobrenadante
liacutempido
2- En un tubo de ensayo colocar voluacutemenes iguales del sobrenadante y del
reactivo de Exton Mezclar por inversioacuten y apreciar la turbidez
Interpretar de acuerdo a las siguientes pautas
Negativo No existe turbidez
Trazas Turbidez visible sobre fondo negro
1(+) Se observa turbidez pero no es granular
2(++) Se observa turbidez y es granular
3(+++) La turbidez es considerable y existe aglutinacioacuten
4(++++) Nubosidad densa con masas aglutinadas de gran tamantildeo
El procedimiento de Exton es maacutes sensible que el meacutetodo de las tiras reactivas
Pueden observarse falsos positivos en los tratamientos con tolbutamina penicilina
sulfamidas y despueacutes de la administracioacuten de sustancias de contraste radioloacutegico
Asimismo las orinas muy alcalinas suelen dar resultados negativos falsos
PRUEBA DEL ACIDO ACETICO Y CALOR
Se basa en la precipitacioacuten de proteiacutenas llevando el pH de la orina al valor del
punto isoeleacutectrico al agregar el aacutecido aceacutetico Tambieacuten el calor torna a las
proteiacutenas insolubles provocando su coagulacioacuten
Procedimiento
Laboratorio Cliacutenico PAULINA ARROLLO PEREacuteZ
1- Centrifugar 10 ml de orina y luego separar el sobrenadante a un tubo de
ensayo El tubo debe estar lleno en las 23 partes
2-Hervir la parte superior del tubo por 2 minutos a la llama ( El tubo debe ser
sostenido formando un aacutengulo sobre la llama y apuntando en direccioacuten opuestas al
cuerpo) Si aparece turbidez puede deberse a la presencia de proteiacutenas fosfatos
y carbonatos
3- Agregar 3 a 5 gotas de aacutecido aceacutetico al 5 o 10 y volver a hervir la parte
superior del tubo a la llama El aacutecido disolveraacute los fosfatos o carbonatos que
puede ser la causa de la turbidez Ademaacutes disminuye el pH llevaacutendolo maacutes
proacuteximo al punto isoeleacutectrico de las proteiacutenas y en consecuencia eacutestas precipitan
aumentando la turbidez
4- Los resultados seraacute dados con la misma escala del reactivo de Exton
Esta teacutecnica detecta albuacuteminas globulinas mucoproteiacutenas e incluso las proteiacutenas
de Bence Jones La hemoglobina y la mioglobina no precipitan con este meacutetodo
La tolbutamida dosis elevadas de penicilina y sustancias de contraste radioloacutegico
pueden resultados positivos falsos Orinas muy alcalinas y orinas muy diluidas
pueden dar resultados negativos falsos
DETERMINACION DE GLUCOSURIA
TECNICA DE BENEDICT
Tiene como fundamento la reduccioacuten del ioacuten cuacuteprico color azul a cuproso que da
un precipitado rojo ladrillo en presencia de glucosa en caliente y en medio alcalino
fuerte
Reactivo
Sulfato de cobre 173 g
Citrato de sodio o de potasio 173g
Cristales de carbonato de sodio 200g
O carbonato de sodio anhiacutedro 100g
Agua destilada para completar 1000ml
Laboratorio Cliacutenico PAULINA ARROLLO PEREacuteZ
Disolver el citrato y el carbonato en 700ml de agua con ayuda de calor Filtrar y
disolver con el sulfato de cobre en aprox 100ml de agua caliente y vertirlo en la
solucioacuten de citrato-carbonato revolviendo Dejar que se enfriacutee antes de diluir hasta
completar los 1000 ml con agua
Procedimiento
1-Colocar 5ml del reactivo de Benedict en un tubo de ensayo
2- Agregar 8 gotas de orina Mezclar por inversioacuten
3- Llevar el tubo con la mezcla preparada a bantildeo Mariacutea durante 5 minutos o
calentar a la llama hasta su ebullicioacuten durante 1 a 2 minutos
4- Dejar que se enfriacutee lentamente
Se informa de acuerdo a las pautas correspondientes
Negativa Color azul claro puede formarse un precipitado azul
Trazas Color verde azulado
1(+) Color verde precipitado verde o amarillo
2(++) Color amarillo a verde precipitado amarillo
3(+++) Color amarillo-anaranjado precipitado amarillo-anaranjado
4 (++++) Color amarillo-rojizoprecipitado rojo ladrillo o rojo
Este procedimiento es sensible y de puede detectar hasta concentraciones de
002 Dosis aumentadas de penicilina estreptomicina salicilatos
oxitetraciclinas polivinilpirrolidona dextraacuten y el aacutecido p-aminosaliciacutelico dan
reacciones positivos falsos Los conservadores con formalina y formaldehiacutedo
pueden dar lugar tambieacuten a falsos positivos
INVESTIGACION DE CUERPOS CETONICOS
REACCION DE ROTHERA
Es una teacutecnica que usa nitroprusiano y permite la formacioacuten de un anillo Permite
la determinacioacuten del aacutecido diaceacuteticoacetona no permite la deteccioacuten del aacutecido B-
hidroxibutiacuterico
Reactivos
1) Reactivo de Rothera compuesta por 75 g de nitroprusiato de sodio y
200mg de sulfato de amonio
2) Hidroacutexido de amonio concentrado
Laboratorio Cliacutenico PAULINA ARROLLO PEREacuteZ
Procedimiento
1) En un tubo de ensayo agregar 1g de reactivo de Rothera con 5 ml de orina
Mezclar por inversioacuten
2) Luego agregar 1ml de hidroacutexido de amonio concentrado
3) Si la prueba es positiva se forma un anillo rojo a puacuterpura en el tiempo de
112 minuto en el punto de contacto
Dar los resultados seguacuten la siguiente pauta
Negativa No se forma el anillo o la formacioacuten de un anillo marroacuten
Trazas La formacioacuten de un anillo puacuterpura o de color rosado
2(+) La formacioacuten de un anillo puacuterpura oscuro estrecho limitado
4 (++++) La formacioacuten de un anillo puacuterpura oscuro extenso
DETECCION DE SANGRE EN ORINA (SANGRE OCULTA)
PRUEBA DE BENCIDINA
Reactivo A
Solucioacuten de Bencidina al 1 en aacutecido aceacutetico al 50
Peroacutexido de hidroacutegeno de 10 voluacutemenes
Procedimiento
En un tubo o sobre un papel filtro( en este caso ldquomancharrdquo el papel con la muestra
en estudio)
2 ndash 4 gotas de bencidina
Agregar 2 ndash 4 gotas de peroacutexido de hidroacutegeno (agua oxigenada)
Interpretacioacuten
Si existe sangre se formaraacute un halo verde azulado
Negativo halo marroacuten
Reactivo B
Solucioacuten de Piramidoacuten al 5 en aacutecido aceacutetico al 50
Peroacutexido de hidroacutegeno de 10 voluacutemenes
La solucioacuten de piramidoacuten puede ser preparada sin aacutecido aceacutetico por lo tanto el
orden de uso es piramidoacuten acido aceacutetico agua oxigenada Resultado
Laboratorio Cliacutenico PAULINA ARROLLO PEREacuteZ
DETERMINACION DE BILIRRUBINA Y UROBILINOGENO
REACCION DEL YODO DE SMITH (BILIRRUBINAS)
En un tubo de ensayo colocar 5ml de orina aacutecida y cubrirla con 2ml de una
solucioacuten de yodo al 07 en alcohopl etiacutelico al 95 La presencia de un anillo de
color verde esmeralda en la interfase de ambos liacutequidos indica la presencia de
bilirrubina
La deteccioacuten de urobilinoacutegeno en orina tambieacuten indican un problema hepaacutetico Uno
de los problemas importantes en la deteccioacuten de urobilinoacutegeno
REACCION CUANTITATIVA DE EHRLICH
Reactivo de Ehrlich
p-dimetilanminobenzaldehiacutedo 10g
HCl concentrado 75ml
Agua destilada 75ml
Procedimiento
1- Colocar 10ml de orina en un tubo de ensayo recieacuten emitida
2- Agregar 1ml del reactivo de Ehrlich
3- Dejar en reposo durante 5 minutos
La presencia urobilinoacutegeno determina que la solucioacuten cambie de color niveles
altos y dan un color rojo cereza
Laboratorio Cliacutenico PAULINA ARROLLO PEREacuteZ
E PRACTICA 3
DEPURACION DE CREATININACREATININA Generalidad
La creatinina es una sustancia que deriva del metabolismo muscular
(muacutesculo estriado liso y cardiacuteaco) de la creatina y representa el
subproducto de excrecioacuten La produccioacuten de creatinina es independiente
de la dieta y del ejercicio muscular sin embargo es proporcional dentro
de ciertos liacutemites a la masa muscular Se libera de los glomeacuterulos y no
es reabsorbida por los tuacutebulos de los cuales puede ser excretada
especialmente cuando se aumenta la concentracioacuten hemaacutetica El
aumento de la creatinina en el suero empieza a ser evidente cuando el
filtrado glomerular es por debajo de 60 ml por minuto
Indicaciones
La determinacioacuten de la cratinina es utilizada en el diagnoacutestico de las
enfermedades renales agudas o croacutenicas y tambieacuten para el monitoreo
de la diaacutelisis renal El aumento de la creatinina es un iacutendice de la
insuficiencia glomerular en cuanto eacutesta es eliminada por filtracioacuten
glomerular Mientras la uremia en la sangre puede ser controlada a
traveacutes de una oportuna dieta la creatinina se correlaciona casi
exclusivamente a la eficiencia de la filtracioacuten glomerular La creatinina
representa el iacutendice maacutes fiel de la insuficiencia renal
Preparacioacuten del paciente
Ayuno
Modalidad de la toma de muestra
Ninguna particularidad
Transporte
Transportar a temperatura ambiente
Conservacioacuten
Centrifugacioacuten y separacioacuten del suero la toma de muestra se puede
conservar por 1 diacutea a temperatura ambiente de 20-25oC 7 diacuteas 2-4oC y
6 meses en congelacioacuten
Laboratorio Cliacutenico PAULINA ARROLLO PEREacuteZ
Centrifugacioacuten
Poner el tubo de ensayo en la centriacutefuga de modo balanceado poner el
reloj 5 minutos y centrifugar por 3000 rpm Verificar la idoneidad del
suero o plasma ictericia presencia de coaacutegulos filamentos de fibrina
turbidez Sentildealar eventualmente en el resultado la no idoneidad de la
muestra
Metoacutedicas de determinacioacuten
Meacutetodo cineacutetico enzimaacutetico
El meacutetodo enzimaacutetico colorimeacutetrico consiste en la medida del color
desarrollado con el reactivo de Jaffe antes y despueacutes de una reaccioacuten
con la enzima especiacutefica la creatincinasa esta enzima transforma la
creatinina en creatina con medida final a 340 nm de la creatina
Meacutetodo colorimeacutetrico y procedimiento analiacutetico
Ademaacutes de la determinacioacuten de la creatinina con una teacutecnica de punto
final maacutes frecuentemente se utiliza una teacutecnica cineacutetica en la cual la
creatinina en medio alcalino reacciona con picrato produciendo un
complejo coloreado rojo-naranja la diferencia de absorcioacuten durante el
tiempo de conversioacuten es directamente proporcional a la concentracioacuten
de creatinina en la muestra
Creatinina + aacutecido piacutecrico mdashmdashmdashgt creatinina picrato (complejo)
Materiales
1048664 Guantes descartables no esteacuteriles
1048664 Tubos de ensayo 13 x 100 mm
1048664 Puntas de pipeta 10-100 ul
1048664 1048664 Puntas de pipeta 100-1000 ul
1048664 1048664 Centriacutefuga
1048664 Espectrofotoacutemetro
1048664 Bantildeo Mariacutea
1048664 Reloj marcador
1048664 Pipetas automaacuteticas 10-100 ul
1048664 Pipetas automaacuteticas 100-1000 ul
Laboratorio Cliacutenico PAULINA ARROLLO PEREacuteZ
Procedimiento
Seguir las instrucciones de la casa comercial
Control de Calidad
Se deberaacuten usar sueros control normal y patoloacutegico en las mismas
condiciones que las muestras
Notas sobre la metoacutedica
Linealidad
Es lineal hasta 250 mgdl
Sensibilidad
Su sensibilidad es 01 mgdl
Especificidad
La metoacutedica es especiacutefica para la creatinina
Las muestras de suero tienen proteiacutenas que pueden reaccionar no
especiacuteficamente con el meacutetodo Jaffe es necesario corregir el valor de
03 mgdl para lograr valores maacutes correctos
Interferencias
Las interferencias maacutes significativas son
Hemoacutelisis con Hb ge100 gl
Icteacuterico bilirrubina ge400 mgdl
Lipemia trigliceacuteridos ge20000 mgdl
Acetona ge500 mgdl
Algunos antibioacuteticos como las cefalosporinas pueden dar valores
falsamente elevados
Valor de referencia
Hombres Hasta 13 mgdl
Mujeres Hasta 11 mgdl
Neonatos o nintildeos Hasta 07 mgdl
Criterios de validacioacuten
Confrontar paraacutemetros de funcionalidad renal (urea potasio proteiacutenas
densidad urinaria)
Confrontar paraacutemetros de equilibrio electroliacuteticos (sodio potasio cloro)
Laboratorio Cliacutenico PAULINA ARROLLO PEREacuteZ
Controlar sexo y edad del paciente y tambieacuten eventual estado de
embarazo
Controlar paraacutemetros del metabolismo muscular (CPK miacuteoglobulina)
DEPURACION DE CREATININA
Generalidad
La cantidad de creatinina excretada con la orina estaacute en relacioacuten con la
filtracioacuten glomerular La creatinina es una sustancia que deriva del
metabolismo muscular (muacutesculo estriado liso y cardiacuteaco) de la creatina
y representa el subproducto de excrecioacuten La produccioacuten de creatinina
es independiente de la dieta y del ejercicio muscular sin embargo es
proporcional dentro de algunos liacutemites a la masa muscular Se libera
desde los glomeacuterulos y no es reabsorbida por los tuacutebulos de los cuales
puede ser excretada especialmente cuando se aumenta la
concentracioacuten hemaacutetica El aumento de la creatinina en el suero
empieza a ser evidente cuando el filtrado glomerular es por debajo de
60 ml por minuto
La medida de la cantidad de creatinina en la orina producida en un
determinado periacuteodo de tiempo simultaacuteneamente a la medida de la
concentracioacuten plasmaacutetica lleva al caacutelculo el aclaramiento de la
creatinina (volumen del plasma en ml que es depurado de la creatinina
en un minuto de tiempo)
C= U x VP (mlmin)
donde
C= aclaramiento
U= concentracioacuten de creatinina en la orina
V= volumen de la orina eliminada
P= concentracioacuten de creatinina en el plasma
Indicaciones
La estrecha correlacioacuten entre la velocidad de filtracioacuten glomerular y el
valor de la creatinina plasmaacutetica y el hecho que la concentracioacuten de la
creatinina hemaacutetica no es influenciada por la dieta hacen de la
Laboratorio Cliacutenico PAULINA ARROLLO PEREacuteZ
creatinina en particular el aclaramiento de la creatinina un iacutendice de
funcionalidad renal muy sensible y seguramente maacutes significativo que la
urea
El aclaramiento de la creatinina se modifica en relacioacuten con la
enfermedad renal (glomerulonefritis agudas o croacutenicas rintildeoacuten policiacutestico
obstruccioacuten de la viacutea renal)
Preparacioacuten del paciente
Ayuno
Modalidad de la toma de muestra
A) Recoger la orina de 24 horas con el siguiente procedimiento
Para la recoleccioacuten de orina de 24 horas se tiene que utilizar un frasco
de 25 30 litros de boca ancha con tapoacuten de rosca Antildeadir al frasco un
estabilizante si es necesario
Para la recogida de la orina se procede del modo siguiente
a) En el tiempo preestablecido vaciar la vejiga e eliminar toda la
orina
b) Posteriormente comenzar a recoger toda la orina de 24 horas
c) Al cumplir las 24 horas vaciar de nuevo la vejiga y depositar toda
la orina en el frasco Conservar las orinas a 2-4degC
Al finalizar la recoleccioacuten de orina eacutesta debe ser enviada
inmediatamente al laboratorio
B) Cuando se entrega la muestra de orina es necesario efectuar la toma
de muestra de sangre
Transporte
La muestra de orina debe ser transportada de 2-4degC la muestra de
sangre a temperatura ambiente
Conservacioacuten
Centrifugacioacuten y separacioacuten del suero la toma de muestra se puede
conservar por 1 diacutea a temperatura ambiente de 20-25oC 7 diacuteas 2-4oC y
6 meses en congelacioacuten
Conservar las orinas a 2-4degC
Laboratorio Cliacutenico PAULINA ARROLLO PEREacuteZ
Verificacioacuten de la muestra
Verificar que el registro de la toma de muestra esteacute correcto
Metoacutedica de determinacioacuten
Cu x Vmin
Aclaramiento de la creatinina = mdashmdashmdashmdashmdashmdashmdashmdashmdashmdashmdashmdash
Ps
donde
Cu= concentracioacuten de creatinina en la orina expresado en mgdl
Ps = concentracioacuten de creatinina en suero expresado en mgdl
Vmin= volumen por minuto (cantidad de la diuresis entre 1440)
Procedimiento analiacutetico
Ver metoacutedica de la creatinina
Notas sobre la metoacutedica
Linealidad
Referirse a las metoacutedicas de creatinina Es lineal hasta 250 mgdl
Sensibilidad
Referirse a las metoacutedicas de creatinina Su sensibilidad es 01 mgdl
Especificidad
Referirse a las metoacutedicas de creatinina
Las muestras de suero tienen proteiacutenas que pueden reaccionar no
especiacuteficamente con el
meacutetodo Jaffe Es necesario corregir el valor de 03 mgdl para lograr
valores maacutes correctos
Interferencias
Las interferencias significativas se deben
Para las orinas
Presencia de partiacuteculas en suspensioacuten (centrifugar las orinas)
Mala recoleccioacuten de orina
Presencia de bacterias de barbituacutericos de cuerpos cetoacutenicos
Para la sangre
Hemoacutelisis con Hb ge100 gl
Laboratorio Cliacutenico PAULINA ARROLLO PEREacuteZ
Icteacuterico bilirrubina ge400 mgdl
Lipemia trigliceacuteridos ge20000 mgdl
Acetona ge500 mgdl
Valor de referencia
ge70mlmin
PRACTICA 4
EXAMEN MICROSCOacutePICO DEL SEDIMENTO URINARIO
PROPOacuteSITO
Observar microscoacutepicamente en el sedimento urinario elementos celulares
cilindros cristales paraacutesitos filamentos mucoides y bacterias Con el fin
de sugerir una patologiacutea del tracto urinario u otras enfermedades que esteacuten
en diferente localizacioacuten
MUESTRA REQUERIDA
15 mL de orina
MATERIALES
- Tubos coacutenicos de 15 mL
- Laacuteminas portaobjetos
- Laminillas cubreobjetos
- Marcador para vidrio
- Gradillas para tubos
- Guantes descartables
EQUIPO
- Reloj marcador
- Centriacutefuga
- Microscopio
PROCEDIMIENTO
- Centrifugar durante 5 minutos a 2500 rpm
- Descartar el liacutequido sobrenadante
- Suspender el sedimento urinario golpeando ligeramente con la mano
Laboratorio Cliacutenico PAULINA ARROLLO PEREacuteZ
- Colocar una gota de sedimento entre un porta y un cubreobjeto
- Observar la preparacioacuten con el objetivo 10x para lograr una visioacuten general del
sedimento
- Identificar los elementos formes a mayor aumento 40x
- Anotar lo observado
FUENTES DE ERROR
- Usar portaobjetos y cubreobjetos sucios
- Desecacioacuten del sedimento urinario
-Tiempo transcurrido desde la toma de la muestra hasta la observacioacuten
microscoacutepica
- Uso excesivo de luz
- Centrifugacioacuten inadecuada
FORMA DE REPORTE
CEacuteLULAS EPITELIALES ESCAMOSAS Y REDONDAS reportar escasas
moderadas o abundantes
GLOacuteBULOS ROJOS Reportar el nuacutemero estimado por campo
LEUCOCITOS Reportar el nuacutemero estimado por campo
CILINDROS se pueden encontrar en la orina los siguientes cilindros
hialinos granulosos finos y gruesos leucocitarios hemaacuteticos grasos y ceacutereos
Reportar el nuacutemero de cilindros observados por campo
FILAMENTOS MUCOIDES reportar escasos moderados o abundantes
CRISTALES se pueden encontrar en la orina los siguientes cristales oxalatos de
calcio acido uacuterico uratos amorfos fosfatos amorfos fosfatos triples urato de
amonio leucina cistina y tirosina
Reportar en la forma siguiente escasos moderados o abundantes
LEVADURAS Reportar escasos moderada y abundantes
PARAacuteSITOS Se pueden encontrar en orina Trichomonas vaginalis Phitirus pubis
huevos y quistes de paraacutesitos por contaminacioacuten con heces
BACTERIAS Reportar la presencia de bacterias moderadas o abundantes
solamente cuando se observen maacutes de 10 leucocitos por campo
Valores de referencia
Laboratorio Cliacutenico PAULINA ARROLLO PEREacuteZ
CEacuteLULAS EPITELIALES ESCAMOSAS Escasas a moderadas
CEacuteLULAS EPITELIALES REDONDAS No deben observarse
GLOacuteBULOS ROJOS No deben observarse
LEUCOCITOS 0-5 por campo
CILINDROS No deben observarse
FILAMENTOS MUCOIDES No deben observarse
CRISTALES Podriacutean observarse oxalatos uratos y fosfatos amorfos de escasa a
moderada cantidad
LEVADURAS No deben observarse
PARAacuteSITOS No deben observarse
BACTERIAS Escasas o no presentes
Laboratorio Cliacutenico PAULINA ARROLLO PEREacuteZ
PRACTICA 6
UROCULTIVO Y ANTIBIOGRAMA
OBTENCIOacuteN DE MUESTRA DE ORINA PARA CULTIVO
Condiciones generales
La orina es un excelente medio de cultivo para la proliferacioacuten bacteriana por esta
razoacuten la muestra debe ser procesada dentro de las 2 horas despueacutes de haber
sido obtenida o debe refrigerarse a 4 degC (maacuteximo 24 horas) hasta su
procesamiento
Generalmente el desarrollo de dos o maacutes tipos de colonias (en pacientes sin
sonda vesical) indican que la muestra se ha contaminado por recoleccioacuten
incorrecta o demora en la siembra
OBTENCIOacuteN DE MUESTRA DE ORINA DEL CHORRO MEDIO
Obtencioacuten de muestras de orina en pacientes mujeres Materiales y equipos
a) Guantes de laacutetex esteacuteriles
b) Cinco o maacutes piezas de gasa esteacuteril de tamantildeo adecuado pudiendo
ser de 4rdquo x 4rdquo
c) Jaboacuten
d) Agua tibia esteacuteril
e) Frasco esteacuteril de boca ancha para la muestra de orina
Procedimiento
a) Mantener la privacidad de la paciente
b) Rotular el frasco con el nombre de la paciente fecha de obtencioacuten de la
muestra hora y el procedimiento usado para la obtencioacuten de la muestra
c) Lavarse las manos con jaboacuten y abundante agua
Laboratorio Cliacutenico PAULINA ARROLLO PEREacuteZ
d) Preparar una pieza de gasa para la limpieza de los genitales externos
humedicieacutendola con agua y una pequentildea cantidad de jaboacuten Preparar dos piezas
maacutes de gasa para el enjuague con agua tibia
e) Separar los labios mayores con dos dedos de una mano y limpiar el aacuterea
expuesta pasando la gasa de adelante hacia atraacutes
f) Descartar la gasa
g) Con otra gasa humedecida enjuagar el aacuterea de adelante hacia atraacutes Repetir el
procedimiento con otra gasa
h) Finalmente secar el aacuterea de adelante hacia atraacutes con un trozo de gasa seca
i) Mantener separados los labios mayores mientras la paciente empieza a orinar
Luego del chorro inicial colocar el frasco esteacuteril para colectar el chorro medio
j) Al terminar la recoleccioacuten tapar el frasco inmediatamente y limpiarle la
superficie
k) Transportar el frasco con la muestra de orina inmediatamente
Obtencioacuten de muestra de orina en pacientes varones
Materiales
a) Guantes de laacutetex
b) Cinco o maacutes piezas de gasa esteacuteril
c) Jaboacuten
d) Agua tibia esteacuteril
e) Frasco esteacuteril de boca ancha para la obtencioacuten de la muestra
Procedimiento
a) Mantener la privacidad del paciente
b) Rotular el frasco con el nombre del paciente fecha de obtencioacuten de la muestra
hora y el procedimiento usado para la obtencioacuten de la muestra
c) Lavarse las manos con jaboacuten y abundante agua
d) Preparar una pieza de gasa con agua y una pequentildea cantidad de jaboacuten
Preparar dos piezas maacutes de gasa para el enjuague con agua tibia
e) Realizar la higiene de los genitales Retraer el prepucio antes de lavar el glande
con la gasa humedecida con jaboacuten Descartar la gasa
Laboratorio Cliacutenico PAULINA ARROLLO PEREacuteZ
f) Enjuagar el glande usando una gasa huacutemeda Repetir el procedimiento con otra
gasa
g) Secar la zona usando uno o maacutes piezas de gasa seca
h) Indicar al paciente que mantenga el prepucio retirado e inicie la miccioacuten
directamente en un recipiente (orina para descartar)
i) Despueacutes del chorro inicial colocar el frasco esteacuteril para colectar la muestra del
chorro medio
j) Obtenida la muestra tapar el frasco inmediatamente y limpiarle la superficie
k) Transportar el frasco con la muestra de orina inmediatamente al laboratorio
SIEMBRA PRIMARIA DE MUESTRA DE ORINA
Objetivo
Describir el procedimiento para la siembra primaria de muestra de orina
Campo de aplicacioacuten
Se aplica para el cultivo de muestra de orina en el diagnoacutestico bacterioloacutegico de
infecciones del tracto urinario
Materiales y equipos
a) Asa calibrada de platino o descartable de 0001 mL oacute 001 mL
b) Estufa de 35 ndash 37 degC
c) Mechero Bunsen o cabina de flujo laminar
d) Guantes de laacutetex
e) Contenedor de material contaminado
f) Pinza esteacuteril
g) Propipeta o pipetor automaacutetico
h) Medios de cultivo
ndash Placas con agar sangre de carnero (AS)
ndash Placas con agar Mc Conkey (McC)
Procedimiento
a) Mantener las muestras en refrigeracioacuten (4 degC) hasta su procesamiento por
cultivo
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b) Los cultivos deben realizarse en una cabina de bioseguridad o cerca del
mechero Bunsen
c) Las placas con AS y McC que se utilizaraacuten en el urocultivo deben estar a
temperatura ambiente Rotular las placas
d) Si el asa calibrada no es descartable esterilizar el asa de siembra flameacuteandola
en el mechero Bunsen hasta que se ponga rojo vivo Dejar enfriar el asa
e) Tomar el frasco con la muestra de orina abrir la tapa y flamear la boca del
frasco en el mechero Bunsen
f) Tomar la muestra de orina con el asa de siembra esteacuteril introducieacutendola y
sacaacutendola del frasco en forma vertical Tapar el frasco con la muestra
g) Inocular en el centro de la placa con AS a partir del cual se extiende la muestra
hacia delante y hacia atraacutes
h) Luego sin quemar el asa el inoacuteculo se disemina uniformemente con trazos
perpendiculares a la siembra inicial en toda la placa
i) Proceder de la misma forma para el agar Mc Conkey
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Lectura
a) Realizar la evaluacioacuten a las 24 horas si no hay crecimiento bacteriano dejar
incubar hasta las 48 horas
b) La evaluacioacuten consiste en realizar el recuento de colonias cuyo resultado se
multiplica por el factor de dilucioacuten para obtener las UFC por mL
Interpretacioacuten
a) En pacientes sin sonda vesical la cuenta significativa de bacterias en orina es
la presencia de maacutes de 105 UFC mL de un solo germen
b) Los recuentos intermedios (103 ndash 104 UFCmL) indican infeccioacuten si el
procedimiento de recoleccioacuten de orina fue realizado correctamente
c) Generalmente el aislamiento de tres o maacutes especies bacterianas indican que la
muestra se ha contaminado por recoleccioacuten inadecuada o demora en la siembra
d) En pacientes con sonda vesical cuentas bacterianas menores de 105 UFCmL
pueden tener significado asiacute tambieacuten se pueden encontrar bacteriurias
polimicrobianas hasta en casi 15 de enfermos
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e) En pacientes sin cateacuteter se puede comprobar si el procedimiento de obtencioacuten
de muestra fue realizado correctamente observando la frecuencia con la cual se
informan recuentos de colonias intermedias entre 103 ndash 104 UFCmL En
pacientes sin infecciones del tracto urinario el recuento es nulo o se reduce a
pocas colonias
IDENTIFICACION BACTERIANA
Lectura de cultivos en agar Mac Conkey
ndash En agar Mc Conkey Escherichia coli lactosa positiva forma colonias de borde
entero de color fucsia opacas de 2 mm ndash 3 mm de diaacutemetro usualmente
rodeadas de una zona opaca alrededor de la colonia (bilis precipitada) Las cepas
de E coli que son lactosa negativa dan colonias incoloras de 3 ndash 4 mm
ndash En agar Mc Conkey K pneumoniae forma colonias de borde entero de color
rosado a rosado oscuro de 3 ndash 4 mm de diaacutemetro y aspecto mucoide
ndash En agar Mc Conkey Enterobacter spp forma colonias de borde entero de color
rosado de 2 ndash 4 mm de diaacutemetro no tan mucoides como K pneumoniae
Las colonias con estas caracteriacutesticas son subcultivadas en medios diferenciales
PRUEBAS BIOQUIMICAS
TSI
Lectura
Es importante hacer la lectura entre las 18 ndash 24 horas para no obtener resultados
erroacuteneos La lectura se hace sobre la base de tres caracteriacutesticas Utilizacioacuten de
hidratos de carbono produccioacuten de gas y produccioacuten de aacutecido sulfhiacutedrico
Utilizacioacuten de hidratos de carbono
ndash Utilizacioacuten de lactosa Reaccioacuten aacutecida en el pico de flauta (color amarillo)
Abreviatura (A)
ndash Utilizacioacuten de glucosa Reaccioacuten aacutecida en la columna del medio (color amarillo)
Abreviatura (A)
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ndash No hay utilizacioacuten del carbohidrato Se puede observar una reaccioacuten alcalina
(color rojo) o que no hay cambio de color (permanece del mismo color que el
medio no inoculado) Abreviaturas (K) o (N) respectivamente
Nota Cuando el microorganismo tambieacuten produce H2S el precipitado negro
puede ocultar la acidez
Produccioacuten de gas de glucosa
ndash Se considera positivo Presencia de una sola burbuja de gas burbujas en el
medio divisioacuten del medio desplazamiento completo del medio del fondo del tubo
dejando un aacuterea clara o una ligera muesca del medio en el costado del tubo
ndash Se registra la lectura por medio de cruces (+)
Produccioacuten de aacutecido sulfhiacutedrico
ndash Se manifiesta por un color negro distribuido por toda la columna del medio de
cultivo o soacutelo en la parte superior
ndash Se registra la lectura por medio de cruces (+)
Resultados
Ejemplo de simbolizacioacuten e interpretacioacuten
KA ndash+ Significa alcalinidad en la inclinacioacuten y acidez en el fondo (fermentacioacuten de
glucosa) gas negativo y H2S positivo
NN ndash ndashSignifica que no hay utilizacioacuten de la lactosa y glucosa ni produccioacuten de
H2S
AGAR LISINA HIERRO
En este medio se determina simultaacuteneamente la produccioacuten de lisina
descarboxilasa y de la formacioacuten de aacutecido sulfhiacutedrico
Lectura
Es importante hacer la lectura entre las 18 ndash 24 horas si la lectura se realiza antes
podemos obtener resultados falsos positivos asiacute como falsos negativos si se lee
despueacutes de las 24 horas Realizar la lectura en la columna y en la superficie
inclinada y observar la formacioacuten de aacutecido sulfhiacutedrico el cual se evidencia por una
coloracioacuten negra
Nota Generalmente las cepas del grupo Proteus y Providencia desaminan la
lisina a aacutecido ndashcetocarboacutenico Este uacuteltimo forma compuestos pardo-rojizos en la
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regioacuten superficial del medio de cultivo con la sal de hierro y bajo la influencia del
oxiacutegeno
Recomendaciones
No incubar maacutes del tiempo necesario para no ocasionar una alcalinizacioacuten en la
superficie del medio y por lo tanto producir un viraje hacia el violeta
UTILIZACIOacuteN DE CITRATO
Para determinar si un microorganismo es capaz de utilizar citrato como uacutenica
fuente de carbono para su metabolismo
Procedimiento
a) Incubar a 35ndash37 degC de 24 horasndash 48 horas En algunos casos es necesario una
incubacioacuten hasta por 4 diacuteas
b) Ver el viraje de color
Resultados
a) Prueba positiva Crecimiento con un color azul intenso en el pico de flauta o
presencia de colonias en ausencia del color azul
b) Prueba negativa No se observa crecimiento ni cambio de color (verde)
Controles
Positivo Enterobacter cloacae
Negativo Escherichia coli
HIDROacuteLISIS DE LA UREA (PRODUCCIOacuteN DE UREASA)
Es uacutetil para determinar la capacidad de un organismo de degradar la urea
formando dos moleacuteculas de amoniaco por accioacuten de la enzima ureasa
Procedimiento
Realizar la lectura despueacutes de 18 horas ndash 24 horas de incubacioacuten observando el
viraje de color
Resultados
Prueba positiva Color rosado intenso en el pico de flauta o todo el agar
Puede haber una reaccioacuten positiva retardada despueacutes de 24 horas y hasta
6 diacuteas de incubacioacuten (algunas cepas de Klebsiella por ejemplo)
Prueba negativa No se produce cambio de color
Controles
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Negativo Escherichia coli
Positivo Klebsiella pneumoniae
MOTILIDAD (MEDIOS SIM O MIO O AGAR MOVILIDAD)
Para determinar si un organismo es moacutevil o inmoacutevil
Procedimiento
Incubar a 35 ndash 37 degC de 24 a 48 horas
Resultados
Positivo Los microorganismos migran de la liacutenea de siembra y se difunden en el
medio provocando turbidez Tambieacuten puede manifestarse semejando
ldquovellosidadesrdquo a lo largo del trazo de siembra
Negativo Se observa un crecimiento bacteriano acentuado siguiendo el trazo de
siembra y el medio circundante se mantiene claro
Controles
Control positivo Escherichia coli
Control negativo Klebsiella pneumoniae
h) Prueba de indol[6]
Es uacutetil para determinar la capacidad de un microorganismo de producir indol a
partir del aminoaacutecido triptoacutefano
Medios y reactivos
Caldo de triptoacutefano o de peptona o caldo de triptona
Reactivo de indol de Kovacs
Procedimiento
Retirar aseacutepticamente 2 mL de caldo de cutivo con 24 horas de incubacioacuten
Agregar 5 gotas de reactivo de Kovacs
Mover suavemente el tubo y realizar la lectura
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ANTIBIOGRAMA
Preparacioacuten del Agar Mueller Hinton
Preparar el medio a partir de la base deshidratada de acuerdo a las
indicaciones del fabricante
Autoclavar y dejar enfriar en bantildeo de agua hasta que alcance los 45degC - 50degC
Repartir el medio en placas petri (60 ml ndash 70 ml o 25 ml ndash 30 ml para placas de
150 mm o 100 mm de diaacutemetro interno respectivamente) de manera que el
grosor del agar en la placa sea de 4 mm
Realizar las pruebas de esterilidad para cada lote de Mueller Hinton incubando
una o dos placas de cada lote a 30degC ndash 35degC durante 24 horas o maacutes Estas
placas utilizadas deben ser luego descartadas
Preparacioacuten del estaacutendar (05 Mc Farland) para el inoacuteculo
Para estandarizar la densidad del inoacuteculo se usa una suspensioacuten de sulfato de
bario (05 de la escala de Mac Farland) como estaacutendar
Preparacioacuten del estaacutendar de turbidez
a Agregar 05 ml de una solucioacuten de BaCl2 0048 M (BaCl22H2O al 1175 PV)
a 995 mL de una solucioacuten de H2SO4 018 M (036 N) (1 VV) en constante
movimiento para mantener la suspensioacuten
b Verificar la densidad correcta del estaacutendar usando un fotocoloriacutemetro oacute
espectrofotoacutemetro cuya absorbancia a 625 nm es 008 a 010 para el estaacutendar 05
de Mc Farland
c Distribuir de 4 ml a 6 ml en tubos con tapa de rosca o tapoacuten de jebe similares a
los que se usaraacuten para preparar el inoacuteculo
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d Ajustar bien las tapas o tapones y conservarlos en la oscuridad a temperatura
ambiente y anotar la fecha de preparacioacuten
e Antes de ser usado agitar vigorosamente dicho estaacutendar de preferencia en un
agitador mecaacutenico
f Verificar mensualmente la densidad de los estaacutendares de sulfato de bario y
reemplazarlo cuando sea necesario
INOCULACIOacuteN
Preparacioacuten del inoacuteculo
Puede realizarse de dos formas
Meacutetodo de desarrollo previo
a Seleccionar cuatro a cinco colonias bien aisladas del mismo tipo morfoloacutegico
de un cultivo en placa
b Tocar la superficie de cada colonia con una asa de siembra y transferirlo a un
tubo que contiene de 4 a 5 mL de caldo apropiado (Ej Caldo Tripticasa soya)
c Incubar el caldo a una temperatura entre 35degC a 37degC hasta que alcance o
exceda la turbidez del estaacutendar 05 de la escala de Mc Farland (por lo general de
2 a 6 horas)
d Ajustar la turbidez del inoacuteculo con solucioacuten salina o caldo apropiado hasta el
tubo 05 de la escala de Mc Farland por comparacioacuten visual con el estaacutendar Para
realizar este paso correctamente usar una luz apropiada y mirar los tubos contra
un fondo blanco con liacuteneas negras como contraste
e La suspensioacuten preparada contendraacute aproximadamente 1 a 2 x 108 UFCmL
Meacutetodo directo de inoculacioacuten a partir de colonias aisladas
a De una placa de cultivo con agar no selectivo e incubada por 18 - 24 h
seleccionar colonias aisladas y preparar una suspensioacutem directa en solucioacuten
salina oacute caldo
b La suspensioacuten debe ser inmediatamente ajustada a la escala 05 de Mc
Farland
Inoculacioacuten de las Placas
Dentro de los 15 minutos siguientes al ajuste de la turbidez del inoacuteculo sumergir
un hisopo esteacuteril en la suspensioacuten rotar el hisopo varias veces presionando
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firmemente sobre la pared interior del tubo por encima del nivel del liacutequido para
remover el exceso de inoacuteculo
Inocular la superficie seca de la placa de Mueller Hinton estriando con el hisopo
en tres direcciones para asegurar una distribucioacuten uniforme del inoacuteculo Antes de
colocar los discos dejar secar la placa a temperatura ambiente durante 3 a 5
minutos para que cualquier exceso de humedad superficial sea absorbido
APLICACIOacuteN DE LOS DISCOS
Colocar los discos individuales o multidiscos sobre la superficie del agar con la
ayuda de una pinza esteacuteril o la punta de una aguja presionando suavemente sobre
cada disco para asegurar un contacto completo con la superficie del agar
Distribuir los discos uniformemente de modo que esteacuten a una distancia miacutenima de
25 mm uno del otro (el diaacutemetro de los discos seguacuten las normas de la
Organizacioacuten Mundial de la Salud (OMS) debe ser de 6 mm) No deben colocarse
maacutes de 12 discos en una placa de 150 mm ni maacutes de 6 en una placa de 100 mm
de diaacutemetro interno para evitar la superposicioacuten de las zonas de inhibicioacuten Un
disco no debe ser removido una vez que tomoacute contacto con la superficie del agar
debido a que algunos antibioacuteticos se difunden raacutepidamente
INCUBACIOacuteN
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Incubar lar placas en posicioacuten invertida a 35degC por 18 a 24 horas dentro de los 15
minutos posteriores a la aplicacioacuten de los discos
Despueacutes del tiempo recomendado de incubacioacuten examinar cada placa y medir los
diaacutemetros de los halos de inhibicioacuten alrededor de cada disco
LECTURA DE LAS PLACAS E INTERPRETACIOacuteN DE LOS RESULTADOS
Medir los diaacutemetros de las zonas de inhibicioacuten completa (incluyendo el diaacutemetro
del disco) usando
una regla o calibrador Se debe mantener iluminada la parte posterior de la placa
petri con una luz reflejada localizada a unos cuantos centiacutemetros sobre un fondo
negro Tener la precaucioacuten de observar la placa siguiendo una vertical directa para
evitar una lectura erroacutenea de las marcas de la regla por efecto de paralelismo En
los medios suplementados con sangre las zonas son medidas en la parte superior
de la superficie del agar y retirando la tapa Tener cuidado de no medir la zona de
la hemoacutelisis sino la de inhibicioacuten del crecimiento
El punto final debe tomarse como el aacuterea que no muestra un crecimiento obvio
visible que puede ser detectado mediante observacioacuten visual no incluyendo velo
de crecimiento o colonias muy pequentildeas que puedan ser detectadas solo con
mucha dificultad en el borde de la zona Sin embargo las colonias mayores
creciendo dentro de la zona clara deberaacuten ser subcultivadas reidentificadas y
reensayadas Algunos Proteus spp debido a su gran movilidad pueden presentar
un velo de invasioacuten o ldquoswarmingrdquo dentro de las zonas de inhibicioacuten de algunos
antibioacuteticos En estos casos el velo del swarming debe ser ignorado al momento
de medir los halos de inhibicioacuten
DISCOS DE SENSIBILIDAD ANTIBIOacuteTICA A INCLUIR EN EL ANTIBIOGRAMA
Grupo I
Ampicilina
Cefalotina
Ampicilina Sulbactam o Amoxicilina Aacutecido Clavulaacutenico
Cefuroxima
Cefotaxima o Ceftriaxona
Gentamicina
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Amikacina
Aacutecido Nalidiacutexico(1)
Norfloxacina(1)
Ciprofloxacina
Cotrimoxazol (TrimetoprimSulfametoxazol)
Nitrofurantoiacutena(1)
Grupo II
Cefoxitina
Aztreonam
Ceftazidima
Cefixima
CefoperazonaSulbactam
Cefepime o Cefpirome
Imipenem o Meropenem
Cloramfenicol
Ofloxacina (1)
(1) Disco utilizado exclusivamente para infecciones de las viacuteas urinarias
Resistencias Naturales
Las enterobacterias son resistentes a Penicilina Oxacilina Macroacutelidos
Clindamicina y Glicopeacuteptidos
Klebsiella spp es resistente a las Aminopenicilinas
Citrobacter freundii Enterobacter cloacae y Enterobacter aerogenes son
resistentes a las Aminopenicilinas AminopenicilinasInhibidores de
betalactamasas Cefalosporinas de primera generacioacuten y Cefuroxima
Serratia marcescens es resistente a las Aminopenicilinas
AminopenicilinasInhibidores de betalactamasas Cefalosporinas de primera
generacioacuten y Cefoxitina
Proteus mirabilis es resistente a Nitrofurantoiacutena
Proteus vulgaris es resistente a las Aminopenicilinas Cefalosporinas de primera
generacioacuten Cefuroxima y Nitrofurantoiacutena
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Morganella morganii es resistente a las Aminopenicilinas
AminopenicilinasInhibidores de betalactamasas Cefalosporinas de primera
generacioacuten Cefuroxima y Nitrofurantoiacutena
Providentia stuartii es resistente a las Aminopenicilinas
AminopenicilinasInhibidores de betalactamasas Cefalosporinas de primera
generacioacuten Gentamicina (bajo nivel) y Nitrofurantoiacutena
ANTIBIOTICOS Y DIAMETROS CRITICOS PARA ENTEROBACTERIAS
E PRACTICA 7
EXAMEN QUIMICO DE CALCULO RENAL
EXAMEN FISICO
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Se debe pesar el caacutelculo y anotar el dato obtenido Medir dos de los diaacutemetros y
tomar nota del aspecto general textura y color y despueacutes de seccionado el
aspecto general la prominencia y el color de los distintos estratos
Se secciona el caacutelculo con una sierra Se raspan las caras con una aguja Se
procede lo mismo con el nuacutecleo Cada una de las muestras obtenidas se trituran
por separado en un mortero
PROCESO
Se coloca una porcioacuten del polvo del caacutelculo en un crisol y se calienta al fuego Si
no hay ennegrecimiento ni se altera el tamantildeo original el caacutelculo estaraacute formado
por sustancias inorgaacutenicas Si en cambio se carboniza desapareciendo estaraacute
formado por sustancias orgaacutenicas Si se funde y se ennegrece este caacutelculo estaacute
formado por sulfamidasa
Una vez obtenidos los datos pueden seleccionarse las reacciones necesarias
para confirmarlos
REACCIONES QUIMICAS
Solucioacuten A
10mg del polvo en matraz y antildeadir 50 ml de ClH 5 Observar si se
produce efervescencia Calentar en bantildeo de agua hirviendo por 10 a 15 minutos y
filtrar en caliente El filtrado se distribuye en 8 tubos numerados y se introduce un
trocito de papel tornasol en cada uno
Solucioacuten B
Agitar con Cl3CH unos 10 mg del polvo Reposar en tubo tapado a
temperatura ambiente hasta que el insoluble haya precipitado Decantar la
solucioacuten clorofoacutermica y guardar igual que el sedimento por separado
Carbonato efervescencia al agregar el CIH por desprendimiento de CO 2
Amonio al tubo 1 de la solucioacuten A se le agrega solucioacuten de OHNa 10 gota a
gota y agitando hasta que el papel tornasol vire
Agregar 1 ml de reactivo de Nessler Un color amarillo oscuro oporto indica
positividad de la reaccioacuten
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El NH 3 formado por los grupos NH 4 en medio alcalino reacciona con el yoiduro
doble del reactivo de Nesler para dar yoduro amoacutenico dimercuacuterico precipitado
pardo anaranjado
Acido uacuterico Neutralizar el contenido del tubo 2 como se explicoacute antes
Agregar igual volumen de CNN Na 2 y 05 ml de reactivo de Folin para aacutecido
uacuterico Un color azul intenso indica presencia de aacutecido uacuterico
El aacutecido uacuterico reduce al aacutecido fosfotuacutengstico en medio alcalino dando color azul
intenso de azul de tungsteno y a su vez se oxida a alantoiacutena
Reactivo fosfotuacutengstico (Folin y Denis) Antes del uso diluir al 10 en agua
destilada
Oxalato de calcio Neutralizar el contenido del tubo 3 Agregar CH 3 COOH 10
hasta reaccioacuten aacutecida al tornasol Precipitado blanco que no se redisuelve por
agitacioacuten indica presencia de oxalato de calcio
Calcio Neutralizar el tubo 4 Acidificar con CH 3 COOH glacial Agregar 2 ml C 2
O 4 ( NH 4 ) 4 Precipitado blancodenso indica presencia de Ca ++
Fosfato Neutralizar el tubo 5 Agregar 1 ml de solucioacuten de molibdato Mezclar
antildeadir 05 ml de aacutecido aminonaftol sulfoacutenico (ANS) 025 Coloracioacuten azul que
aparece en 5 minutos indica fosfatos
El color azul se debe a los oacutexidos reducidos de molibdeno
Reactivos
1 ClH concentrado2 Solucioacuten de OHK 203 NO 3 H concentrado4 Mo O 4 (NH 4 ) 2 disolver 25 g de la droga en 50 ml de SO 4 H 2 10 N y
diluir a 100 ml con H2 O destilada5 Amoniacuteaco
Reactivo ANS En matraz x 250 ml poner 05 g de aacutecido aminonaftolsulfoacutenico y
agrgar 195 ml de bisulfito de sodio 15 y 5 ml de sulfito de sodio 20 Mezclar
bien hasta disolucioacuten Si no se disuelve en media hora agregar maacutes sulfito y
agitar El reactivo dura unas 2 semanas
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Magnesio Neutralizar el tubo 7 con OHNH 4 y antildeadir 1 ml de solucioacuten alcohoacutelica
de p ndash Nitrobenceno azorresorcinol Un cromoacutegeno rojo indica presencia de
magnesio
En medio alcalino se forma (OH) 2 Mg El colorante azo resulta absorbido por el
(OH) 2 Mg en medio alcalino
Xantina A un tercio del residuo de la solucioacuten B agregarle gotas de NO 3 H
concentrado
Se disuelve el residuo sin desprender gas Evaporar a sequedad en bantildeo Mariacutea
hirviente quedando un residuo amarillo Dejar enfriar y humedecer con gotas de
OHNa 10 Una coloracioacuten anaranjada que vira al rojo oscuro al calentar indica
presencia de xantina
La reaccioacuten es la xantoproteica Migracioacuten de los anillos fenilo existentes en la
tirosina fenilalanina y triptoacutefano que da un color amarillo de los productos de
nitrosustitucioacuten para virar al anaranjado tras la adicioacuten de un aacutelcali ( formacioacuten de
la sal)
Nota El reactivo de molibdato se puede preparar asiacute
Solucioacuten 1 SO 4 H 2 01 N
Medir 450 ml de SO4 H 2 concentrado y agregarlos a 1300 ml de agua
destilada
Solucioacuten 2
A 250 ml de SO 4 H 2 01 N antildeadir la solucioacuten de molibdato y llevar con
agua destilada a 250 ml Mezclar
Sulfamidas Neutralizar el uacuteltimo tubo Antildeadir 1 ml de NO 2 Na 05 preparado
recientemente Agitar y reposar por 3 minutos Antildeadir 5 ml de solucioacuten alcohoacutelica
de dimetil-alfa naftilamina 025 Un color rojizo indica presencia de sulfamidas
Finalmente procede hacer mencioacuten de ciertos procedimientos fiacutesicos como la
microscopia de polarizacioacuten difraccioacuten de rayos X cristalografiacutea
espectrofotometriacutea de rayos infrarrojos etc que permiten actualmente un
conocimiento maacutes confiable de la estructura de los caacutelculos
- Reactivos
-
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1- Centrifugar 10 ml de orina y luego separar el sobrenadante a un tubo de
ensayo El tubo debe estar lleno en las 23 partes
2-Hervir la parte superior del tubo por 2 minutos a la llama ( El tubo debe ser
sostenido formando un aacutengulo sobre la llama y apuntando en direccioacuten opuestas al
cuerpo) Si aparece turbidez puede deberse a la presencia de proteiacutenas fosfatos
y carbonatos
3- Agregar 3 a 5 gotas de aacutecido aceacutetico al 5 o 10 y volver a hervir la parte
superior del tubo a la llama El aacutecido disolveraacute los fosfatos o carbonatos que
puede ser la causa de la turbidez Ademaacutes disminuye el pH llevaacutendolo maacutes
proacuteximo al punto isoeleacutectrico de las proteiacutenas y en consecuencia eacutestas precipitan
aumentando la turbidez
4- Los resultados seraacute dados con la misma escala del reactivo de Exton
Esta teacutecnica detecta albuacuteminas globulinas mucoproteiacutenas e incluso las proteiacutenas
de Bence Jones La hemoglobina y la mioglobina no precipitan con este meacutetodo
La tolbutamida dosis elevadas de penicilina y sustancias de contraste radioloacutegico
pueden resultados positivos falsos Orinas muy alcalinas y orinas muy diluidas
pueden dar resultados negativos falsos
DETERMINACION DE GLUCOSURIA
TECNICA DE BENEDICT
Tiene como fundamento la reduccioacuten del ioacuten cuacuteprico color azul a cuproso que da
un precipitado rojo ladrillo en presencia de glucosa en caliente y en medio alcalino
fuerte
Reactivo
Sulfato de cobre 173 g
Citrato de sodio o de potasio 173g
Cristales de carbonato de sodio 200g
O carbonato de sodio anhiacutedro 100g
Agua destilada para completar 1000ml
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Disolver el citrato y el carbonato en 700ml de agua con ayuda de calor Filtrar y
disolver con el sulfato de cobre en aprox 100ml de agua caliente y vertirlo en la
solucioacuten de citrato-carbonato revolviendo Dejar que se enfriacutee antes de diluir hasta
completar los 1000 ml con agua
Procedimiento
1-Colocar 5ml del reactivo de Benedict en un tubo de ensayo
2- Agregar 8 gotas de orina Mezclar por inversioacuten
3- Llevar el tubo con la mezcla preparada a bantildeo Mariacutea durante 5 minutos o
calentar a la llama hasta su ebullicioacuten durante 1 a 2 minutos
4- Dejar que se enfriacutee lentamente
Se informa de acuerdo a las pautas correspondientes
Negativa Color azul claro puede formarse un precipitado azul
Trazas Color verde azulado
1(+) Color verde precipitado verde o amarillo
2(++) Color amarillo a verde precipitado amarillo
3(+++) Color amarillo-anaranjado precipitado amarillo-anaranjado
4 (++++) Color amarillo-rojizoprecipitado rojo ladrillo o rojo
Este procedimiento es sensible y de puede detectar hasta concentraciones de
002 Dosis aumentadas de penicilina estreptomicina salicilatos
oxitetraciclinas polivinilpirrolidona dextraacuten y el aacutecido p-aminosaliciacutelico dan
reacciones positivos falsos Los conservadores con formalina y formaldehiacutedo
pueden dar lugar tambieacuten a falsos positivos
INVESTIGACION DE CUERPOS CETONICOS
REACCION DE ROTHERA
Es una teacutecnica que usa nitroprusiano y permite la formacioacuten de un anillo Permite
la determinacioacuten del aacutecido diaceacuteticoacetona no permite la deteccioacuten del aacutecido B-
hidroxibutiacuterico
Reactivos
1) Reactivo de Rothera compuesta por 75 g de nitroprusiato de sodio y
200mg de sulfato de amonio
2) Hidroacutexido de amonio concentrado
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Procedimiento
1) En un tubo de ensayo agregar 1g de reactivo de Rothera con 5 ml de orina
Mezclar por inversioacuten
2) Luego agregar 1ml de hidroacutexido de amonio concentrado
3) Si la prueba es positiva se forma un anillo rojo a puacuterpura en el tiempo de
112 minuto en el punto de contacto
Dar los resultados seguacuten la siguiente pauta
Negativa No se forma el anillo o la formacioacuten de un anillo marroacuten
Trazas La formacioacuten de un anillo puacuterpura o de color rosado
2(+) La formacioacuten de un anillo puacuterpura oscuro estrecho limitado
4 (++++) La formacioacuten de un anillo puacuterpura oscuro extenso
DETECCION DE SANGRE EN ORINA (SANGRE OCULTA)
PRUEBA DE BENCIDINA
Reactivo A
Solucioacuten de Bencidina al 1 en aacutecido aceacutetico al 50
Peroacutexido de hidroacutegeno de 10 voluacutemenes
Procedimiento
En un tubo o sobre un papel filtro( en este caso ldquomancharrdquo el papel con la muestra
en estudio)
2 ndash 4 gotas de bencidina
Agregar 2 ndash 4 gotas de peroacutexido de hidroacutegeno (agua oxigenada)
Interpretacioacuten
Si existe sangre se formaraacute un halo verde azulado
Negativo halo marroacuten
Reactivo B
Solucioacuten de Piramidoacuten al 5 en aacutecido aceacutetico al 50
Peroacutexido de hidroacutegeno de 10 voluacutemenes
La solucioacuten de piramidoacuten puede ser preparada sin aacutecido aceacutetico por lo tanto el
orden de uso es piramidoacuten acido aceacutetico agua oxigenada Resultado
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DETERMINACION DE BILIRRUBINA Y UROBILINOGENO
REACCION DEL YODO DE SMITH (BILIRRUBINAS)
En un tubo de ensayo colocar 5ml de orina aacutecida y cubrirla con 2ml de una
solucioacuten de yodo al 07 en alcohopl etiacutelico al 95 La presencia de un anillo de
color verde esmeralda en la interfase de ambos liacutequidos indica la presencia de
bilirrubina
La deteccioacuten de urobilinoacutegeno en orina tambieacuten indican un problema hepaacutetico Uno
de los problemas importantes en la deteccioacuten de urobilinoacutegeno
REACCION CUANTITATIVA DE EHRLICH
Reactivo de Ehrlich
p-dimetilanminobenzaldehiacutedo 10g
HCl concentrado 75ml
Agua destilada 75ml
Procedimiento
1- Colocar 10ml de orina en un tubo de ensayo recieacuten emitida
2- Agregar 1ml del reactivo de Ehrlich
3- Dejar en reposo durante 5 minutos
La presencia urobilinoacutegeno determina que la solucioacuten cambie de color niveles
altos y dan un color rojo cereza
Laboratorio Cliacutenico PAULINA ARROLLO PEREacuteZ
E PRACTICA 3
DEPURACION DE CREATININACREATININA Generalidad
La creatinina es una sustancia que deriva del metabolismo muscular
(muacutesculo estriado liso y cardiacuteaco) de la creatina y representa el
subproducto de excrecioacuten La produccioacuten de creatinina es independiente
de la dieta y del ejercicio muscular sin embargo es proporcional dentro
de ciertos liacutemites a la masa muscular Se libera de los glomeacuterulos y no
es reabsorbida por los tuacutebulos de los cuales puede ser excretada
especialmente cuando se aumenta la concentracioacuten hemaacutetica El
aumento de la creatinina en el suero empieza a ser evidente cuando el
filtrado glomerular es por debajo de 60 ml por minuto
Indicaciones
La determinacioacuten de la cratinina es utilizada en el diagnoacutestico de las
enfermedades renales agudas o croacutenicas y tambieacuten para el monitoreo
de la diaacutelisis renal El aumento de la creatinina es un iacutendice de la
insuficiencia glomerular en cuanto eacutesta es eliminada por filtracioacuten
glomerular Mientras la uremia en la sangre puede ser controlada a
traveacutes de una oportuna dieta la creatinina se correlaciona casi
exclusivamente a la eficiencia de la filtracioacuten glomerular La creatinina
representa el iacutendice maacutes fiel de la insuficiencia renal
Preparacioacuten del paciente
Ayuno
Modalidad de la toma de muestra
Ninguna particularidad
Transporte
Transportar a temperatura ambiente
Conservacioacuten
Centrifugacioacuten y separacioacuten del suero la toma de muestra se puede
conservar por 1 diacutea a temperatura ambiente de 20-25oC 7 diacuteas 2-4oC y
6 meses en congelacioacuten
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Centrifugacioacuten
Poner el tubo de ensayo en la centriacutefuga de modo balanceado poner el
reloj 5 minutos y centrifugar por 3000 rpm Verificar la idoneidad del
suero o plasma ictericia presencia de coaacutegulos filamentos de fibrina
turbidez Sentildealar eventualmente en el resultado la no idoneidad de la
muestra
Metoacutedicas de determinacioacuten
Meacutetodo cineacutetico enzimaacutetico
El meacutetodo enzimaacutetico colorimeacutetrico consiste en la medida del color
desarrollado con el reactivo de Jaffe antes y despueacutes de una reaccioacuten
con la enzima especiacutefica la creatincinasa esta enzima transforma la
creatinina en creatina con medida final a 340 nm de la creatina
Meacutetodo colorimeacutetrico y procedimiento analiacutetico
Ademaacutes de la determinacioacuten de la creatinina con una teacutecnica de punto
final maacutes frecuentemente se utiliza una teacutecnica cineacutetica en la cual la
creatinina en medio alcalino reacciona con picrato produciendo un
complejo coloreado rojo-naranja la diferencia de absorcioacuten durante el
tiempo de conversioacuten es directamente proporcional a la concentracioacuten
de creatinina en la muestra
Creatinina + aacutecido piacutecrico mdashmdashmdashgt creatinina picrato (complejo)
Materiales
1048664 Guantes descartables no esteacuteriles
1048664 Tubos de ensayo 13 x 100 mm
1048664 Puntas de pipeta 10-100 ul
1048664 1048664 Puntas de pipeta 100-1000 ul
1048664 1048664 Centriacutefuga
1048664 Espectrofotoacutemetro
1048664 Bantildeo Mariacutea
1048664 Reloj marcador
1048664 Pipetas automaacuteticas 10-100 ul
1048664 Pipetas automaacuteticas 100-1000 ul
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Procedimiento
Seguir las instrucciones de la casa comercial
Control de Calidad
Se deberaacuten usar sueros control normal y patoloacutegico en las mismas
condiciones que las muestras
Notas sobre la metoacutedica
Linealidad
Es lineal hasta 250 mgdl
Sensibilidad
Su sensibilidad es 01 mgdl
Especificidad
La metoacutedica es especiacutefica para la creatinina
Las muestras de suero tienen proteiacutenas que pueden reaccionar no
especiacuteficamente con el meacutetodo Jaffe es necesario corregir el valor de
03 mgdl para lograr valores maacutes correctos
Interferencias
Las interferencias maacutes significativas son
Hemoacutelisis con Hb ge100 gl
Icteacuterico bilirrubina ge400 mgdl
Lipemia trigliceacuteridos ge20000 mgdl
Acetona ge500 mgdl
Algunos antibioacuteticos como las cefalosporinas pueden dar valores
falsamente elevados
Valor de referencia
Hombres Hasta 13 mgdl
Mujeres Hasta 11 mgdl
Neonatos o nintildeos Hasta 07 mgdl
Criterios de validacioacuten
Confrontar paraacutemetros de funcionalidad renal (urea potasio proteiacutenas
densidad urinaria)
Confrontar paraacutemetros de equilibrio electroliacuteticos (sodio potasio cloro)
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Controlar sexo y edad del paciente y tambieacuten eventual estado de
embarazo
Controlar paraacutemetros del metabolismo muscular (CPK miacuteoglobulina)
DEPURACION DE CREATININA
Generalidad
La cantidad de creatinina excretada con la orina estaacute en relacioacuten con la
filtracioacuten glomerular La creatinina es una sustancia que deriva del
metabolismo muscular (muacutesculo estriado liso y cardiacuteaco) de la creatina
y representa el subproducto de excrecioacuten La produccioacuten de creatinina
es independiente de la dieta y del ejercicio muscular sin embargo es
proporcional dentro de algunos liacutemites a la masa muscular Se libera
desde los glomeacuterulos y no es reabsorbida por los tuacutebulos de los cuales
puede ser excretada especialmente cuando se aumenta la
concentracioacuten hemaacutetica El aumento de la creatinina en el suero
empieza a ser evidente cuando el filtrado glomerular es por debajo de
60 ml por minuto
La medida de la cantidad de creatinina en la orina producida en un
determinado periacuteodo de tiempo simultaacuteneamente a la medida de la
concentracioacuten plasmaacutetica lleva al caacutelculo el aclaramiento de la
creatinina (volumen del plasma en ml que es depurado de la creatinina
en un minuto de tiempo)
C= U x VP (mlmin)
donde
C= aclaramiento
U= concentracioacuten de creatinina en la orina
V= volumen de la orina eliminada
P= concentracioacuten de creatinina en el plasma
Indicaciones
La estrecha correlacioacuten entre la velocidad de filtracioacuten glomerular y el
valor de la creatinina plasmaacutetica y el hecho que la concentracioacuten de la
creatinina hemaacutetica no es influenciada por la dieta hacen de la
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creatinina en particular el aclaramiento de la creatinina un iacutendice de
funcionalidad renal muy sensible y seguramente maacutes significativo que la
urea
El aclaramiento de la creatinina se modifica en relacioacuten con la
enfermedad renal (glomerulonefritis agudas o croacutenicas rintildeoacuten policiacutestico
obstruccioacuten de la viacutea renal)
Preparacioacuten del paciente
Ayuno
Modalidad de la toma de muestra
A) Recoger la orina de 24 horas con el siguiente procedimiento
Para la recoleccioacuten de orina de 24 horas se tiene que utilizar un frasco
de 25 30 litros de boca ancha con tapoacuten de rosca Antildeadir al frasco un
estabilizante si es necesario
Para la recogida de la orina se procede del modo siguiente
a) En el tiempo preestablecido vaciar la vejiga e eliminar toda la
orina
b) Posteriormente comenzar a recoger toda la orina de 24 horas
c) Al cumplir las 24 horas vaciar de nuevo la vejiga y depositar toda
la orina en el frasco Conservar las orinas a 2-4degC
Al finalizar la recoleccioacuten de orina eacutesta debe ser enviada
inmediatamente al laboratorio
B) Cuando se entrega la muestra de orina es necesario efectuar la toma
de muestra de sangre
Transporte
La muestra de orina debe ser transportada de 2-4degC la muestra de
sangre a temperatura ambiente
Conservacioacuten
Centrifugacioacuten y separacioacuten del suero la toma de muestra se puede
conservar por 1 diacutea a temperatura ambiente de 20-25oC 7 diacuteas 2-4oC y
6 meses en congelacioacuten
Conservar las orinas a 2-4degC
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Verificacioacuten de la muestra
Verificar que el registro de la toma de muestra esteacute correcto
Metoacutedica de determinacioacuten
Cu x Vmin
Aclaramiento de la creatinina = mdashmdashmdashmdashmdashmdashmdashmdashmdashmdashmdashmdash
Ps
donde
Cu= concentracioacuten de creatinina en la orina expresado en mgdl
Ps = concentracioacuten de creatinina en suero expresado en mgdl
Vmin= volumen por minuto (cantidad de la diuresis entre 1440)
Procedimiento analiacutetico
Ver metoacutedica de la creatinina
Notas sobre la metoacutedica
Linealidad
Referirse a las metoacutedicas de creatinina Es lineal hasta 250 mgdl
Sensibilidad
Referirse a las metoacutedicas de creatinina Su sensibilidad es 01 mgdl
Especificidad
Referirse a las metoacutedicas de creatinina
Las muestras de suero tienen proteiacutenas que pueden reaccionar no
especiacuteficamente con el
meacutetodo Jaffe Es necesario corregir el valor de 03 mgdl para lograr
valores maacutes correctos
Interferencias
Las interferencias significativas se deben
Para las orinas
Presencia de partiacuteculas en suspensioacuten (centrifugar las orinas)
Mala recoleccioacuten de orina
Presencia de bacterias de barbituacutericos de cuerpos cetoacutenicos
Para la sangre
Hemoacutelisis con Hb ge100 gl
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Icteacuterico bilirrubina ge400 mgdl
Lipemia trigliceacuteridos ge20000 mgdl
Acetona ge500 mgdl
Valor de referencia
ge70mlmin
PRACTICA 4
EXAMEN MICROSCOacutePICO DEL SEDIMENTO URINARIO
PROPOacuteSITO
Observar microscoacutepicamente en el sedimento urinario elementos celulares
cilindros cristales paraacutesitos filamentos mucoides y bacterias Con el fin
de sugerir una patologiacutea del tracto urinario u otras enfermedades que esteacuten
en diferente localizacioacuten
MUESTRA REQUERIDA
15 mL de orina
MATERIALES
- Tubos coacutenicos de 15 mL
- Laacuteminas portaobjetos
- Laminillas cubreobjetos
- Marcador para vidrio
- Gradillas para tubos
- Guantes descartables
EQUIPO
- Reloj marcador
- Centriacutefuga
- Microscopio
PROCEDIMIENTO
- Centrifugar durante 5 minutos a 2500 rpm
- Descartar el liacutequido sobrenadante
- Suspender el sedimento urinario golpeando ligeramente con la mano
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- Colocar una gota de sedimento entre un porta y un cubreobjeto
- Observar la preparacioacuten con el objetivo 10x para lograr una visioacuten general del
sedimento
- Identificar los elementos formes a mayor aumento 40x
- Anotar lo observado
FUENTES DE ERROR
- Usar portaobjetos y cubreobjetos sucios
- Desecacioacuten del sedimento urinario
-Tiempo transcurrido desde la toma de la muestra hasta la observacioacuten
microscoacutepica
- Uso excesivo de luz
- Centrifugacioacuten inadecuada
FORMA DE REPORTE
CEacuteLULAS EPITELIALES ESCAMOSAS Y REDONDAS reportar escasas
moderadas o abundantes
GLOacuteBULOS ROJOS Reportar el nuacutemero estimado por campo
LEUCOCITOS Reportar el nuacutemero estimado por campo
CILINDROS se pueden encontrar en la orina los siguientes cilindros
hialinos granulosos finos y gruesos leucocitarios hemaacuteticos grasos y ceacutereos
Reportar el nuacutemero de cilindros observados por campo
FILAMENTOS MUCOIDES reportar escasos moderados o abundantes
CRISTALES se pueden encontrar en la orina los siguientes cristales oxalatos de
calcio acido uacuterico uratos amorfos fosfatos amorfos fosfatos triples urato de
amonio leucina cistina y tirosina
Reportar en la forma siguiente escasos moderados o abundantes
LEVADURAS Reportar escasos moderada y abundantes
PARAacuteSITOS Se pueden encontrar en orina Trichomonas vaginalis Phitirus pubis
huevos y quistes de paraacutesitos por contaminacioacuten con heces
BACTERIAS Reportar la presencia de bacterias moderadas o abundantes
solamente cuando se observen maacutes de 10 leucocitos por campo
Valores de referencia
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CEacuteLULAS EPITELIALES ESCAMOSAS Escasas a moderadas
CEacuteLULAS EPITELIALES REDONDAS No deben observarse
GLOacuteBULOS ROJOS No deben observarse
LEUCOCITOS 0-5 por campo
CILINDROS No deben observarse
FILAMENTOS MUCOIDES No deben observarse
CRISTALES Podriacutean observarse oxalatos uratos y fosfatos amorfos de escasa a
moderada cantidad
LEVADURAS No deben observarse
PARAacuteSITOS No deben observarse
BACTERIAS Escasas o no presentes
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PRACTICA 6
UROCULTIVO Y ANTIBIOGRAMA
OBTENCIOacuteN DE MUESTRA DE ORINA PARA CULTIVO
Condiciones generales
La orina es un excelente medio de cultivo para la proliferacioacuten bacteriana por esta
razoacuten la muestra debe ser procesada dentro de las 2 horas despueacutes de haber
sido obtenida o debe refrigerarse a 4 degC (maacuteximo 24 horas) hasta su
procesamiento
Generalmente el desarrollo de dos o maacutes tipos de colonias (en pacientes sin
sonda vesical) indican que la muestra se ha contaminado por recoleccioacuten
incorrecta o demora en la siembra
OBTENCIOacuteN DE MUESTRA DE ORINA DEL CHORRO MEDIO
Obtencioacuten de muestras de orina en pacientes mujeres Materiales y equipos
a) Guantes de laacutetex esteacuteriles
b) Cinco o maacutes piezas de gasa esteacuteril de tamantildeo adecuado pudiendo
ser de 4rdquo x 4rdquo
c) Jaboacuten
d) Agua tibia esteacuteril
e) Frasco esteacuteril de boca ancha para la muestra de orina
Procedimiento
a) Mantener la privacidad de la paciente
b) Rotular el frasco con el nombre de la paciente fecha de obtencioacuten de la
muestra hora y el procedimiento usado para la obtencioacuten de la muestra
c) Lavarse las manos con jaboacuten y abundante agua
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d) Preparar una pieza de gasa para la limpieza de los genitales externos
humedicieacutendola con agua y una pequentildea cantidad de jaboacuten Preparar dos piezas
maacutes de gasa para el enjuague con agua tibia
e) Separar los labios mayores con dos dedos de una mano y limpiar el aacuterea
expuesta pasando la gasa de adelante hacia atraacutes
f) Descartar la gasa
g) Con otra gasa humedecida enjuagar el aacuterea de adelante hacia atraacutes Repetir el
procedimiento con otra gasa
h) Finalmente secar el aacuterea de adelante hacia atraacutes con un trozo de gasa seca
i) Mantener separados los labios mayores mientras la paciente empieza a orinar
Luego del chorro inicial colocar el frasco esteacuteril para colectar el chorro medio
j) Al terminar la recoleccioacuten tapar el frasco inmediatamente y limpiarle la
superficie
k) Transportar el frasco con la muestra de orina inmediatamente
Obtencioacuten de muestra de orina en pacientes varones
Materiales
a) Guantes de laacutetex
b) Cinco o maacutes piezas de gasa esteacuteril
c) Jaboacuten
d) Agua tibia esteacuteril
e) Frasco esteacuteril de boca ancha para la obtencioacuten de la muestra
Procedimiento
a) Mantener la privacidad del paciente
b) Rotular el frasco con el nombre del paciente fecha de obtencioacuten de la muestra
hora y el procedimiento usado para la obtencioacuten de la muestra
c) Lavarse las manos con jaboacuten y abundante agua
d) Preparar una pieza de gasa con agua y una pequentildea cantidad de jaboacuten
Preparar dos piezas maacutes de gasa para el enjuague con agua tibia
e) Realizar la higiene de los genitales Retraer el prepucio antes de lavar el glande
con la gasa humedecida con jaboacuten Descartar la gasa
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f) Enjuagar el glande usando una gasa huacutemeda Repetir el procedimiento con otra
gasa
g) Secar la zona usando uno o maacutes piezas de gasa seca
h) Indicar al paciente que mantenga el prepucio retirado e inicie la miccioacuten
directamente en un recipiente (orina para descartar)
i) Despueacutes del chorro inicial colocar el frasco esteacuteril para colectar la muestra del
chorro medio
j) Obtenida la muestra tapar el frasco inmediatamente y limpiarle la superficie
k) Transportar el frasco con la muestra de orina inmediatamente al laboratorio
SIEMBRA PRIMARIA DE MUESTRA DE ORINA
Objetivo
Describir el procedimiento para la siembra primaria de muestra de orina
Campo de aplicacioacuten
Se aplica para el cultivo de muestra de orina en el diagnoacutestico bacterioloacutegico de
infecciones del tracto urinario
Materiales y equipos
a) Asa calibrada de platino o descartable de 0001 mL oacute 001 mL
b) Estufa de 35 ndash 37 degC
c) Mechero Bunsen o cabina de flujo laminar
d) Guantes de laacutetex
e) Contenedor de material contaminado
f) Pinza esteacuteril
g) Propipeta o pipetor automaacutetico
h) Medios de cultivo
ndash Placas con agar sangre de carnero (AS)
ndash Placas con agar Mc Conkey (McC)
Procedimiento
a) Mantener las muestras en refrigeracioacuten (4 degC) hasta su procesamiento por
cultivo
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b) Los cultivos deben realizarse en una cabina de bioseguridad o cerca del
mechero Bunsen
c) Las placas con AS y McC que se utilizaraacuten en el urocultivo deben estar a
temperatura ambiente Rotular las placas
d) Si el asa calibrada no es descartable esterilizar el asa de siembra flameacuteandola
en el mechero Bunsen hasta que se ponga rojo vivo Dejar enfriar el asa
e) Tomar el frasco con la muestra de orina abrir la tapa y flamear la boca del
frasco en el mechero Bunsen
f) Tomar la muestra de orina con el asa de siembra esteacuteril introducieacutendola y
sacaacutendola del frasco en forma vertical Tapar el frasco con la muestra
g) Inocular en el centro de la placa con AS a partir del cual se extiende la muestra
hacia delante y hacia atraacutes
h) Luego sin quemar el asa el inoacuteculo se disemina uniformemente con trazos
perpendiculares a la siembra inicial en toda la placa
i) Proceder de la misma forma para el agar Mc Conkey
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Lectura
a) Realizar la evaluacioacuten a las 24 horas si no hay crecimiento bacteriano dejar
incubar hasta las 48 horas
b) La evaluacioacuten consiste en realizar el recuento de colonias cuyo resultado se
multiplica por el factor de dilucioacuten para obtener las UFC por mL
Interpretacioacuten
a) En pacientes sin sonda vesical la cuenta significativa de bacterias en orina es
la presencia de maacutes de 105 UFC mL de un solo germen
b) Los recuentos intermedios (103 ndash 104 UFCmL) indican infeccioacuten si el
procedimiento de recoleccioacuten de orina fue realizado correctamente
c) Generalmente el aislamiento de tres o maacutes especies bacterianas indican que la
muestra se ha contaminado por recoleccioacuten inadecuada o demora en la siembra
d) En pacientes con sonda vesical cuentas bacterianas menores de 105 UFCmL
pueden tener significado asiacute tambieacuten se pueden encontrar bacteriurias
polimicrobianas hasta en casi 15 de enfermos
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e) En pacientes sin cateacuteter se puede comprobar si el procedimiento de obtencioacuten
de muestra fue realizado correctamente observando la frecuencia con la cual se
informan recuentos de colonias intermedias entre 103 ndash 104 UFCmL En
pacientes sin infecciones del tracto urinario el recuento es nulo o se reduce a
pocas colonias
IDENTIFICACION BACTERIANA
Lectura de cultivos en agar Mac Conkey
ndash En agar Mc Conkey Escherichia coli lactosa positiva forma colonias de borde
entero de color fucsia opacas de 2 mm ndash 3 mm de diaacutemetro usualmente
rodeadas de una zona opaca alrededor de la colonia (bilis precipitada) Las cepas
de E coli que son lactosa negativa dan colonias incoloras de 3 ndash 4 mm
ndash En agar Mc Conkey K pneumoniae forma colonias de borde entero de color
rosado a rosado oscuro de 3 ndash 4 mm de diaacutemetro y aspecto mucoide
ndash En agar Mc Conkey Enterobacter spp forma colonias de borde entero de color
rosado de 2 ndash 4 mm de diaacutemetro no tan mucoides como K pneumoniae
Las colonias con estas caracteriacutesticas son subcultivadas en medios diferenciales
PRUEBAS BIOQUIMICAS
TSI
Lectura
Es importante hacer la lectura entre las 18 ndash 24 horas para no obtener resultados
erroacuteneos La lectura se hace sobre la base de tres caracteriacutesticas Utilizacioacuten de
hidratos de carbono produccioacuten de gas y produccioacuten de aacutecido sulfhiacutedrico
Utilizacioacuten de hidratos de carbono
ndash Utilizacioacuten de lactosa Reaccioacuten aacutecida en el pico de flauta (color amarillo)
Abreviatura (A)
ndash Utilizacioacuten de glucosa Reaccioacuten aacutecida en la columna del medio (color amarillo)
Abreviatura (A)
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ndash No hay utilizacioacuten del carbohidrato Se puede observar una reaccioacuten alcalina
(color rojo) o que no hay cambio de color (permanece del mismo color que el
medio no inoculado) Abreviaturas (K) o (N) respectivamente
Nota Cuando el microorganismo tambieacuten produce H2S el precipitado negro
puede ocultar la acidez
Produccioacuten de gas de glucosa
ndash Se considera positivo Presencia de una sola burbuja de gas burbujas en el
medio divisioacuten del medio desplazamiento completo del medio del fondo del tubo
dejando un aacuterea clara o una ligera muesca del medio en el costado del tubo
ndash Se registra la lectura por medio de cruces (+)
Produccioacuten de aacutecido sulfhiacutedrico
ndash Se manifiesta por un color negro distribuido por toda la columna del medio de
cultivo o soacutelo en la parte superior
ndash Se registra la lectura por medio de cruces (+)
Resultados
Ejemplo de simbolizacioacuten e interpretacioacuten
KA ndash+ Significa alcalinidad en la inclinacioacuten y acidez en el fondo (fermentacioacuten de
glucosa) gas negativo y H2S positivo
NN ndash ndashSignifica que no hay utilizacioacuten de la lactosa y glucosa ni produccioacuten de
H2S
AGAR LISINA HIERRO
En este medio se determina simultaacuteneamente la produccioacuten de lisina
descarboxilasa y de la formacioacuten de aacutecido sulfhiacutedrico
Lectura
Es importante hacer la lectura entre las 18 ndash 24 horas si la lectura se realiza antes
podemos obtener resultados falsos positivos asiacute como falsos negativos si se lee
despueacutes de las 24 horas Realizar la lectura en la columna y en la superficie
inclinada y observar la formacioacuten de aacutecido sulfhiacutedrico el cual se evidencia por una
coloracioacuten negra
Nota Generalmente las cepas del grupo Proteus y Providencia desaminan la
lisina a aacutecido ndashcetocarboacutenico Este uacuteltimo forma compuestos pardo-rojizos en la
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regioacuten superficial del medio de cultivo con la sal de hierro y bajo la influencia del
oxiacutegeno
Recomendaciones
No incubar maacutes del tiempo necesario para no ocasionar una alcalinizacioacuten en la
superficie del medio y por lo tanto producir un viraje hacia el violeta
UTILIZACIOacuteN DE CITRATO
Para determinar si un microorganismo es capaz de utilizar citrato como uacutenica
fuente de carbono para su metabolismo
Procedimiento
a) Incubar a 35ndash37 degC de 24 horasndash 48 horas En algunos casos es necesario una
incubacioacuten hasta por 4 diacuteas
b) Ver el viraje de color
Resultados
a) Prueba positiva Crecimiento con un color azul intenso en el pico de flauta o
presencia de colonias en ausencia del color azul
b) Prueba negativa No se observa crecimiento ni cambio de color (verde)
Controles
Positivo Enterobacter cloacae
Negativo Escherichia coli
HIDROacuteLISIS DE LA UREA (PRODUCCIOacuteN DE UREASA)
Es uacutetil para determinar la capacidad de un organismo de degradar la urea
formando dos moleacuteculas de amoniaco por accioacuten de la enzima ureasa
Procedimiento
Realizar la lectura despueacutes de 18 horas ndash 24 horas de incubacioacuten observando el
viraje de color
Resultados
Prueba positiva Color rosado intenso en el pico de flauta o todo el agar
Puede haber una reaccioacuten positiva retardada despueacutes de 24 horas y hasta
6 diacuteas de incubacioacuten (algunas cepas de Klebsiella por ejemplo)
Prueba negativa No se produce cambio de color
Controles
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Negativo Escherichia coli
Positivo Klebsiella pneumoniae
MOTILIDAD (MEDIOS SIM O MIO O AGAR MOVILIDAD)
Para determinar si un organismo es moacutevil o inmoacutevil
Procedimiento
Incubar a 35 ndash 37 degC de 24 a 48 horas
Resultados
Positivo Los microorganismos migran de la liacutenea de siembra y se difunden en el
medio provocando turbidez Tambieacuten puede manifestarse semejando
ldquovellosidadesrdquo a lo largo del trazo de siembra
Negativo Se observa un crecimiento bacteriano acentuado siguiendo el trazo de
siembra y el medio circundante se mantiene claro
Controles
Control positivo Escherichia coli
Control negativo Klebsiella pneumoniae
h) Prueba de indol[6]
Es uacutetil para determinar la capacidad de un microorganismo de producir indol a
partir del aminoaacutecido triptoacutefano
Medios y reactivos
Caldo de triptoacutefano o de peptona o caldo de triptona
Reactivo de indol de Kovacs
Procedimiento
Retirar aseacutepticamente 2 mL de caldo de cutivo con 24 horas de incubacioacuten
Agregar 5 gotas de reactivo de Kovacs
Mover suavemente el tubo y realizar la lectura
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Laboratorio Cliacutenico PAULINA ARROLLO PEREacuteZ
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ANTIBIOGRAMA
Preparacioacuten del Agar Mueller Hinton
Preparar el medio a partir de la base deshidratada de acuerdo a las
indicaciones del fabricante
Autoclavar y dejar enfriar en bantildeo de agua hasta que alcance los 45degC - 50degC
Repartir el medio en placas petri (60 ml ndash 70 ml o 25 ml ndash 30 ml para placas de
150 mm o 100 mm de diaacutemetro interno respectivamente) de manera que el
grosor del agar en la placa sea de 4 mm
Realizar las pruebas de esterilidad para cada lote de Mueller Hinton incubando
una o dos placas de cada lote a 30degC ndash 35degC durante 24 horas o maacutes Estas
placas utilizadas deben ser luego descartadas
Preparacioacuten del estaacutendar (05 Mc Farland) para el inoacuteculo
Para estandarizar la densidad del inoacuteculo se usa una suspensioacuten de sulfato de
bario (05 de la escala de Mac Farland) como estaacutendar
Preparacioacuten del estaacutendar de turbidez
a Agregar 05 ml de una solucioacuten de BaCl2 0048 M (BaCl22H2O al 1175 PV)
a 995 mL de una solucioacuten de H2SO4 018 M (036 N) (1 VV) en constante
movimiento para mantener la suspensioacuten
b Verificar la densidad correcta del estaacutendar usando un fotocoloriacutemetro oacute
espectrofotoacutemetro cuya absorbancia a 625 nm es 008 a 010 para el estaacutendar 05
de Mc Farland
c Distribuir de 4 ml a 6 ml en tubos con tapa de rosca o tapoacuten de jebe similares a
los que se usaraacuten para preparar el inoacuteculo
Laboratorio Cliacutenico PAULINA ARROLLO PEREacuteZ
d Ajustar bien las tapas o tapones y conservarlos en la oscuridad a temperatura
ambiente y anotar la fecha de preparacioacuten
e Antes de ser usado agitar vigorosamente dicho estaacutendar de preferencia en un
agitador mecaacutenico
f Verificar mensualmente la densidad de los estaacutendares de sulfato de bario y
reemplazarlo cuando sea necesario
INOCULACIOacuteN
Preparacioacuten del inoacuteculo
Puede realizarse de dos formas
Meacutetodo de desarrollo previo
a Seleccionar cuatro a cinco colonias bien aisladas del mismo tipo morfoloacutegico
de un cultivo en placa
b Tocar la superficie de cada colonia con una asa de siembra y transferirlo a un
tubo que contiene de 4 a 5 mL de caldo apropiado (Ej Caldo Tripticasa soya)
c Incubar el caldo a una temperatura entre 35degC a 37degC hasta que alcance o
exceda la turbidez del estaacutendar 05 de la escala de Mc Farland (por lo general de
2 a 6 horas)
d Ajustar la turbidez del inoacuteculo con solucioacuten salina o caldo apropiado hasta el
tubo 05 de la escala de Mc Farland por comparacioacuten visual con el estaacutendar Para
realizar este paso correctamente usar una luz apropiada y mirar los tubos contra
un fondo blanco con liacuteneas negras como contraste
e La suspensioacuten preparada contendraacute aproximadamente 1 a 2 x 108 UFCmL
Meacutetodo directo de inoculacioacuten a partir de colonias aisladas
a De una placa de cultivo con agar no selectivo e incubada por 18 - 24 h
seleccionar colonias aisladas y preparar una suspensioacutem directa en solucioacuten
salina oacute caldo
b La suspensioacuten debe ser inmediatamente ajustada a la escala 05 de Mc
Farland
Inoculacioacuten de las Placas
Dentro de los 15 minutos siguientes al ajuste de la turbidez del inoacuteculo sumergir
un hisopo esteacuteril en la suspensioacuten rotar el hisopo varias veces presionando
Laboratorio Cliacutenico PAULINA ARROLLO PEREacuteZ
firmemente sobre la pared interior del tubo por encima del nivel del liacutequido para
remover el exceso de inoacuteculo
Inocular la superficie seca de la placa de Mueller Hinton estriando con el hisopo
en tres direcciones para asegurar una distribucioacuten uniforme del inoacuteculo Antes de
colocar los discos dejar secar la placa a temperatura ambiente durante 3 a 5
minutos para que cualquier exceso de humedad superficial sea absorbido
APLICACIOacuteN DE LOS DISCOS
Colocar los discos individuales o multidiscos sobre la superficie del agar con la
ayuda de una pinza esteacuteril o la punta de una aguja presionando suavemente sobre
cada disco para asegurar un contacto completo con la superficie del agar
Distribuir los discos uniformemente de modo que esteacuten a una distancia miacutenima de
25 mm uno del otro (el diaacutemetro de los discos seguacuten las normas de la
Organizacioacuten Mundial de la Salud (OMS) debe ser de 6 mm) No deben colocarse
maacutes de 12 discos en una placa de 150 mm ni maacutes de 6 en una placa de 100 mm
de diaacutemetro interno para evitar la superposicioacuten de las zonas de inhibicioacuten Un
disco no debe ser removido una vez que tomoacute contacto con la superficie del agar
debido a que algunos antibioacuteticos se difunden raacutepidamente
INCUBACIOacuteN
Laboratorio Cliacutenico PAULINA ARROLLO PEREacuteZ
Incubar lar placas en posicioacuten invertida a 35degC por 18 a 24 horas dentro de los 15
minutos posteriores a la aplicacioacuten de los discos
Despueacutes del tiempo recomendado de incubacioacuten examinar cada placa y medir los
diaacutemetros de los halos de inhibicioacuten alrededor de cada disco
LECTURA DE LAS PLACAS E INTERPRETACIOacuteN DE LOS RESULTADOS
Medir los diaacutemetros de las zonas de inhibicioacuten completa (incluyendo el diaacutemetro
del disco) usando
una regla o calibrador Se debe mantener iluminada la parte posterior de la placa
petri con una luz reflejada localizada a unos cuantos centiacutemetros sobre un fondo
negro Tener la precaucioacuten de observar la placa siguiendo una vertical directa para
evitar una lectura erroacutenea de las marcas de la regla por efecto de paralelismo En
los medios suplementados con sangre las zonas son medidas en la parte superior
de la superficie del agar y retirando la tapa Tener cuidado de no medir la zona de
la hemoacutelisis sino la de inhibicioacuten del crecimiento
El punto final debe tomarse como el aacuterea que no muestra un crecimiento obvio
visible que puede ser detectado mediante observacioacuten visual no incluyendo velo
de crecimiento o colonias muy pequentildeas que puedan ser detectadas solo con
mucha dificultad en el borde de la zona Sin embargo las colonias mayores
creciendo dentro de la zona clara deberaacuten ser subcultivadas reidentificadas y
reensayadas Algunos Proteus spp debido a su gran movilidad pueden presentar
un velo de invasioacuten o ldquoswarmingrdquo dentro de las zonas de inhibicioacuten de algunos
antibioacuteticos En estos casos el velo del swarming debe ser ignorado al momento
de medir los halos de inhibicioacuten
DISCOS DE SENSIBILIDAD ANTIBIOacuteTICA A INCLUIR EN EL ANTIBIOGRAMA
Grupo I
Ampicilina
Cefalotina
Ampicilina Sulbactam o Amoxicilina Aacutecido Clavulaacutenico
Cefuroxima
Cefotaxima o Ceftriaxona
Gentamicina
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Amikacina
Aacutecido Nalidiacutexico(1)
Norfloxacina(1)
Ciprofloxacina
Cotrimoxazol (TrimetoprimSulfametoxazol)
Nitrofurantoiacutena(1)
Grupo II
Cefoxitina
Aztreonam
Ceftazidima
Cefixima
CefoperazonaSulbactam
Cefepime o Cefpirome
Imipenem o Meropenem
Cloramfenicol
Ofloxacina (1)
(1) Disco utilizado exclusivamente para infecciones de las viacuteas urinarias
Resistencias Naturales
Las enterobacterias son resistentes a Penicilina Oxacilina Macroacutelidos
Clindamicina y Glicopeacuteptidos
Klebsiella spp es resistente a las Aminopenicilinas
Citrobacter freundii Enterobacter cloacae y Enterobacter aerogenes son
resistentes a las Aminopenicilinas AminopenicilinasInhibidores de
betalactamasas Cefalosporinas de primera generacioacuten y Cefuroxima
Serratia marcescens es resistente a las Aminopenicilinas
AminopenicilinasInhibidores de betalactamasas Cefalosporinas de primera
generacioacuten y Cefoxitina
Proteus mirabilis es resistente a Nitrofurantoiacutena
Proteus vulgaris es resistente a las Aminopenicilinas Cefalosporinas de primera
generacioacuten Cefuroxima y Nitrofurantoiacutena
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Morganella morganii es resistente a las Aminopenicilinas
AminopenicilinasInhibidores de betalactamasas Cefalosporinas de primera
generacioacuten Cefuroxima y Nitrofurantoiacutena
Providentia stuartii es resistente a las Aminopenicilinas
AminopenicilinasInhibidores de betalactamasas Cefalosporinas de primera
generacioacuten Gentamicina (bajo nivel) y Nitrofurantoiacutena
ANTIBIOTICOS Y DIAMETROS CRITICOS PARA ENTEROBACTERIAS
E PRACTICA 7
EXAMEN QUIMICO DE CALCULO RENAL
EXAMEN FISICO
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Se debe pesar el caacutelculo y anotar el dato obtenido Medir dos de los diaacutemetros y
tomar nota del aspecto general textura y color y despueacutes de seccionado el
aspecto general la prominencia y el color de los distintos estratos
Se secciona el caacutelculo con una sierra Se raspan las caras con una aguja Se
procede lo mismo con el nuacutecleo Cada una de las muestras obtenidas se trituran
por separado en un mortero
PROCESO
Se coloca una porcioacuten del polvo del caacutelculo en un crisol y se calienta al fuego Si
no hay ennegrecimiento ni se altera el tamantildeo original el caacutelculo estaraacute formado
por sustancias inorgaacutenicas Si en cambio se carboniza desapareciendo estaraacute
formado por sustancias orgaacutenicas Si se funde y se ennegrece este caacutelculo estaacute
formado por sulfamidasa
Una vez obtenidos los datos pueden seleccionarse las reacciones necesarias
para confirmarlos
REACCIONES QUIMICAS
Solucioacuten A
10mg del polvo en matraz y antildeadir 50 ml de ClH 5 Observar si se
produce efervescencia Calentar en bantildeo de agua hirviendo por 10 a 15 minutos y
filtrar en caliente El filtrado se distribuye en 8 tubos numerados y se introduce un
trocito de papel tornasol en cada uno
Solucioacuten B
Agitar con Cl3CH unos 10 mg del polvo Reposar en tubo tapado a
temperatura ambiente hasta que el insoluble haya precipitado Decantar la
solucioacuten clorofoacutermica y guardar igual que el sedimento por separado
Carbonato efervescencia al agregar el CIH por desprendimiento de CO 2
Amonio al tubo 1 de la solucioacuten A se le agrega solucioacuten de OHNa 10 gota a
gota y agitando hasta que el papel tornasol vire
Agregar 1 ml de reactivo de Nessler Un color amarillo oscuro oporto indica
positividad de la reaccioacuten
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El NH 3 formado por los grupos NH 4 en medio alcalino reacciona con el yoiduro
doble del reactivo de Nesler para dar yoduro amoacutenico dimercuacuterico precipitado
pardo anaranjado
Acido uacuterico Neutralizar el contenido del tubo 2 como se explicoacute antes
Agregar igual volumen de CNN Na 2 y 05 ml de reactivo de Folin para aacutecido
uacuterico Un color azul intenso indica presencia de aacutecido uacuterico
El aacutecido uacuterico reduce al aacutecido fosfotuacutengstico en medio alcalino dando color azul
intenso de azul de tungsteno y a su vez se oxida a alantoiacutena
Reactivo fosfotuacutengstico (Folin y Denis) Antes del uso diluir al 10 en agua
destilada
Oxalato de calcio Neutralizar el contenido del tubo 3 Agregar CH 3 COOH 10
hasta reaccioacuten aacutecida al tornasol Precipitado blanco que no se redisuelve por
agitacioacuten indica presencia de oxalato de calcio
Calcio Neutralizar el tubo 4 Acidificar con CH 3 COOH glacial Agregar 2 ml C 2
O 4 ( NH 4 ) 4 Precipitado blancodenso indica presencia de Ca ++
Fosfato Neutralizar el tubo 5 Agregar 1 ml de solucioacuten de molibdato Mezclar
antildeadir 05 ml de aacutecido aminonaftol sulfoacutenico (ANS) 025 Coloracioacuten azul que
aparece en 5 minutos indica fosfatos
El color azul se debe a los oacutexidos reducidos de molibdeno
Reactivos
1 ClH concentrado2 Solucioacuten de OHK 203 NO 3 H concentrado4 Mo O 4 (NH 4 ) 2 disolver 25 g de la droga en 50 ml de SO 4 H 2 10 N y
diluir a 100 ml con H2 O destilada5 Amoniacuteaco
Reactivo ANS En matraz x 250 ml poner 05 g de aacutecido aminonaftolsulfoacutenico y
agrgar 195 ml de bisulfito de sodio 15 y 5 ml de sulfito de sodio 20 Mezclar
bien hasta disolucioacuten Si no se disuelve en media hora agregar maacutes sulfito y
agitar El reactivo dura unas 2 semanas
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Magnesio Neutralizar el tubo 7 con OHNH 4 y antildeadir 1 ml de solucioacuten alcohoacutelica
de p ndash Nitrobenceno azorresorcinol Un cromoacutegeno rojo indica presencia de
magnesio
En medio alcalino se forma (OH) 2 Mg El colorante azo resulta absorbido por el
(OH) 2 Mg en medio alcalino
Xantina A un tercio del residuo de la solucioacuten B agregarle gotas de NO 3 H
concentrado
Se disuelve el residuo sin desprender gas Evaporar a sequedad en bantildeo Mariacutea
hirviente quedando un residuo amarillo Dejar enfriar y humedecer con gotas de
OHNa 10 Una coloracioacuten anaranjada que vira al rojo oscuro al calentar indica
presencia de xantina
La reaccioacuten es la xantoproteica Migracioacuten de los anillos fenilo existentes en la
tirosina fenilalanina y triptoacutefano que da un color amarillo de los productos de
nitrosustitucioacuten para virar al anaranjado tras la adicioacuten de un aacutelcali ( formacioacuten de
la sal)
Nota El reactivo de molibdato se puede preparar asiacute
Solucioacuten 1 SO 4 H 2 01 N
Medir 450 ml de SO4 H 2 concentrado y agregarlos a 1300 ml de agua
destilada
Solucioacuten 2
A 250 ml de SO 4 H 2 01 N antildeadir la solucioacuten de molibdato y llevar con
agua destilada a 250 ml Mezclar
Sulfamidas Neutralizar el uacuteltimo tubo Antildeadir 1 ml de NO 2 Na 05 preparado
recientemente Agitar y reposar por 3 minutos Antildeadir 5 ml de solucioacuten alcohoacutelica
de dimetil-alfa naftilamina 025 Un color rojizo indica presencia de sulfamidas
Finalmente procede hacer mencioacuten de ciertos procedimientos fiacutesicos como la
microscopia de polarizacioacuten difraccioacuten de rayos X cristalografiacutea
espectrofotometriacutea de rayos infrarrojos etc que permiten actualmente un
conocimiento maacutes confiable de la estructura de los caacutelculos
- Reactivos
-
Laboratorio Cliacutenico PAULINA ARROLLO PEREacuteZ
Disolver el citrato y el carbonato en 700ml de agua con ayuda de calor Filtrar y
disolver con el sulfato de cobre en aprox 100ml de agua caliente y vertirlo en la
solucioacuten de citrato-carbonato revolviendo Dejar que se enfriacutee antes de diluir hasta
completar los 1000 ml con agua
Procedimiento
1-Colocar 5ml del reactivo de Benedict en un tubo de ensayo
2- Agregar 8 gotas de orina Mezclar por inversioacuten
3- Llevar el tubo con la mezcla preparada a bantildeo Mariacutea durante 5 minutos o
calentar a la llama hasta su ebullicioacuten durante 1 a 2 minutos
4- Dejar que se enfriacutee lentamente
Se informa de acuerdo a las pautas correspondientes
Negativa Color azul claro puede formarse un precipitado azul
Trazas Color verde azulado
1(+) Color verde precipitado verde o amarillo
2(++) Color amarillo a verde precipitado amarillo
3(+++) Color amarillo-anaranjado precipitado amarillo-anaranjado
4 (++++) Color amarillo-rojizoprecipitado rojo ladrillo o rojo
Este procedimiento es sensible y de puede detectar hasta concentraciones de
002 Dosis aumentadas de penicilina estreptomicina salicilatos
oxitetraciclinas polivinilpirrolidona dextraacuten y el aacutecido p-aminosaliciacutelico dan
reacciones positivos falsos Los conservadores con formalina y formaldehiacutedo
pueden dar lugar tambieacuten a falsos positivos
INVESTIGACION DE CUERPOS CETONICOS
REACCION DE ROTHERA
Es una teacutecnica que usa nitroprusiano y permite la formacioacuten de un anillo Permite
la determinacioacuten del aacutecido diaceacuteticoacetona no permite la deteccioacuten del aacutecido B-
hidroxibutiacuterico
Reactivos
1) Reactivo de Rothera compuesta por 75 g de nitroprusiato de sodio y
200mg de sulfato de amonio
2) Hidroacutexido de amonio concentrado
Laboratorio Cliacutenico PAULINA ARROLLO PEREacuteZ
Procedimiento
1) En un tubo de ensayo agregar 1g de reactivo de Rothera con 5 ml de orina
Mezclar por inversioacuten
2) Luego agregar 1ml de hidroacutexido de amonio concentrado
3) Si la prueba es positiva se forma un anillo rojo a puacuterpura en el tiempo de
112 minuto en el punto de contacto
Dar los resultados seguacuten la siguiente pauta
Negativa No se forma el anillo o la formacioacuten de un anillo marroacuten
Trazas La formacioacuten de un anillo puacuterpura o de color rosado
2(+) La formacioacuten de un anillo puacuterpura oscuro estrecho limitado
4 (++++) La formacioacuten de un anillo puacuterpura oscuro extenso
DETECCION DE SANGRE EN ORINA (SANGRE OCULTA)
PRUEBA DE BENCIDINA
Reactivo A
Solucioacuten de Bencidina al 1 en aacutecido aceacutetico al 50
Peroacutexido de hidroacutegeno de 10 voluacutemenes
Procedimiento
En un tubo o sobre un papel filtro( en este caso ldquomancharrdquo el papel con la muestra
en estudio)
2 ndash 4 gotas de bencidina
Agregar 2 ndash 4 gotas de peroacutexido de hidroacutegeno (agua oxigenada)
Interpretacioacuten
Si existe sangre se formaraacute un halo verde azulado
Negativo halo marroacuten
Reactivo B
Solucioacuten de Piramidoacuten al 5 en aacutecido aceacutetico al 50
Peroacutexido de hidroacutegeno de 10 voluacutemenes
La solucioacuten de piramidoacuten puede ser preparada sin aacutecido aceacutetico por lo tanto el
orden de uso es piramidoacuten acido aceacutetico agua oxigenada Resultado
Laboratorio Cliacutenico PAULINA ARROLLO PEREacuteZ
DETERMINACION DE BILIRRUBINA Y UROBILINOGENO
REACCION DEL YODO DE SMITH (BILIRRUBINAS)
En un tubo de ensayo colocar 5ml de orina aacutecida y cubrirla con 2ml de una
solucioacuten de yodo al 07 en alcohopl etiacutelico al 95 La presencia de un anillo de
color verde esmeralda en la interfase de ambos liacutequidos indica la presencia de
bilirrubina
La deteccioacuten de urobilinoacutegeno en orina tambieacuten indican un problema hepaacutetico Uno
de los problemas importantes en la deteccioacuten de urobilinoacutegeno
REACCION CUANTITATIVA DE EHRLICH
Reactivo de Ehrlich
p-dimetilanminobenzaldehiacutedo 10g
HCl concentrado 75ml
Agua destilada 75ml
Procedimiento
1- Colocar 10ml de orina en un tubo de ensayo recieacuten emitida
2- Agregar 1ml del reactivo de Ehrlich
3- Dejar en reposo durante 5 minutos
La presencia urobilinoacutegeno determina que la solucioacuten cambie de color niveles
altos y dan un color rojo cereza
Laboratorio Cliacutenico PAULINA ARROLLO PEREacuteZ
E PRACTICA 3
DEPURACION DE CREATININACREATININA Generalidad
La creatinina es una sustancia que deriva del metabolismo muscular
(muacutesculo estriado liso y cardiacuteaco) de la creatina y representa el
subproducto de excrecioacuten La produccioacuten de creatinina es independiente
de la dieta y del ejercicio muscular sin embargo es proporcional dentro
de ciertos liacutemites a la masa muscular Se libera de los glomeacuterulos y no
es reabsorbida por los tuacutebulos de los cuales puede ser excretada
especialmente cuando se aumenta la concentracioacuten hemaacutetica El
aumento de la creatinina en el suero empieza a ser evidente cuando el
filtrado glomerular es por debajo de 60 ml por minuto
Indicaciones
La determinacioacuten de la cratinina es utilizada en el diagnoacutestico de las
enfermedades renales agudas o croacutenicas y tambieacuten para el monitoreo
de la diaacutelisis renal El aumento de la creatinina es un iacutendice de la
insuficiencia glomerular en cuanto eacutesta es eliminada por filtracioacuten
glomerular Mientras la uremia en la sangre puede ser controlada a
traveacutes de una oportuna dieta la creatinina se correlaciona casi
exclusivamente a la eficiencia de la filtracioacuten glomerular La creatinina
representa el iacutendice maacutes fiel de la insuficiencia renal
Preparacioacuten del paciente
Ayuno
Modalidad de la toma de muestra
Ninguna particularidad
Transporte
Transportar a temperatura ambiente
Conservacioacuten
Centrifugacioacuten y separacioacuten del suero la toma de muestra se puede
conservar por 1 diacutea a temperatura ambiente de 20-25oC 7 diacuteas 2-4oC y
6 meses en congelacioacuten
Laboratorio Cliacutenico PAULINA ARROLLO PEREacuteZ
Centrifugacioacuten
Poner el tubo de ensayo en la centriacutefuga de modo balanceado poner el
reloj 5 minutos y centrifugar por 3000 rpm Verificar la idoneidad del
suero o plasma ictericia presencia de coaacutegulos filamentos de fibrina
turbidez Sentildealar eventualmente en el resultado la no idoneidad de la
muestra
Metoacutedicas de determinacioacuten
Meacutetodo cineacutetico enzimaacutetico
El meacutetodo enzimaacutetico colorimeacutetrico consiste en la medida del color
desarrollado con el reactivo de Jaffe antes y despueacutes de una reaccioacuten
con la enzima especiacutefica la creatincinasa esta enzima transforma la
creatinina en creatina con medida final a 340 nm de la creatina
Meacutetodo colorimeacutetrico y procedimiento analiacutetico
Ademaacutes de la determinacioacuten de la creatinina con una teacutecnica de punto
final maacutes frecuentemente se utiliza una teacutecnica cineacutetica en la cual la
creatinina en medio alcalino reacciona con picrato produciendo un
complejo coloreado rojo-naranja la diferencia de absorcioacuten durante el
tiempo de conversioacuten es directamente proporcional a la concentracioacuten
de creatinina en la muestra
Creatinina + aacutecido piacutecrico mdashmdashmdashgt creatinina picrato (complejo)
Materiales
1048664 Guantes descartables no esteacuteriles
1048664 Tubos de ensayo 13 x 100 mm
1048664 Puntas de pipeta 10-100 ul
1048664 1048664 Puntas de pipeta 100-1000 ul
1048664 1048664 Centriacutefuga
1048664 Espectrofotoacutemetro
1048664 Bantildeo Mariacutea
1048664 Reloj marcador
1048664 Pipetas automaacuteticas 10-100 ul
1048664 Pipetas automaacuteticas 100-1000 ul
Laboratorio Cliacutenico PAULINA ARROLLO PEREacuteZ
Procedimiento
Seguir las instrucciones de la casa comercial
Control de Calidad
Se deberaacuten usar sueros control normal y patoloacutegico en las mismas
condiciones que las muestras
Notas sobre la metoacutedica
Linealidad
Es lineal hasta 250 mgdl
Sensibilidad
Su sensibilidad es 01 mgdl
Especificidad
La metoacutedica es especiacutefica para la creatinina
Las muestras de suero tienen proteiacutenas que pueden reaccionar no
especiacuteficamente con el meacutetodo Jaffe es necesario corregir el valor de
03 mgdl para lograr valores maacutes correctos
Interferencias
Las interferencias maacutes significativas son
Hemoacutelisis con Hb ge100 gl
Icteacuterico bilirrubina ge400 mgdl
Lipemia trigliceacuteridos ge20000 mgdl
Acetona ge500 mgdl
Algunos antibioacuteticos como las cefalosporinas pueden dar valores
falsamente elevados
Valor de referencia
Hombres Hasta 13 mgdl
Mujeres Hasta 11 mgdl
Neonatos o nintildeos Hasta 07 mgdl
Criterios de validacioacuten
Confrontar paraacutemetros de funcionalidad renal (urea potasio proteiacutenas
densidad urinaria)
Confrontar paraacutemetros de equilibrio electroliacuteticos (sodio potasio cloro)
Laboratorio Cliacutenico PAULINA ARROLLO PEREacuteZ
Controlar sexo y edad del paciente y tambieacuten eventual estado de
embarazo
Controlar paraacutemetros del metabolismo muscular (CPK miacuteoglobulina)
DEPURACION DE CREATININA
Generalidad
La cantidad de creatinina excretada con la orina estaacute en relacioacuten con la
filtracioacuten glomerular La creatinina es una sustancia que deriva del
metabolismo muscular (muacutesculo estriado liso y cardiacuteaco) de la creatina
y representa el subproducto de excrecioacuten La produccioacuten de creatinina
es independiente de la dieta y del ejercicio muscular sin embargo es
proporcional dentro de algunos liacutemites a la masa muscular Se libera
desde los glomeacuterulos y no es reabsorbida por los tuacutebulos de los cuales
puede ser excretada especialmente cuando se aumenta la
concentracioacuten hemaacutetica El aumento de la creatinina en el suero
empieza a ser evidente cuando el filtrado glomerular es por debajo de
60 ml por minuto
La medida de la cantidad de creatinina en la orina producida en un
determinado periacuteodo de tiempo simultaacuteneamente a la medida de la
concentracioacuten plasmaacutetica lleva al caacutelculo el aclaramiento de la
creatinina (volumen del plasma en ml que es depurado de la creatinina
en un minuto de tiempo)
C= U x VP (mlmin)
donde
C= aclaramiento
U= concentracioacuten de creatinina en la orina
V= volumen de la orina eliminada
P= concentracioacuten de creatinina en el plasma
Indicaciones
La estrecha correlacioacuten entre la velocidad de filtracioacuten glomerular y el
valor de la creatinina plasmaacutetica y el hecho que la concentracioacuten de la
creatinina hemaacutetica no es influenciada por la dieta hacen de la
Laboratorio Cliacutenico PAULINA ARROLLO PEREacuteZ
creatinina en particular el aclaramiento de la creatinina un iacutendice de
funcionalidad renal muy sensible y seguramente maacutes significativo que la
urea
El aclaramiento de la creatinina se modifica en relacioacuten con la
enfermedad renal (glomerulonefritis agudas o croacutenicas rintildeoacuten policiacutestico
obstruccioacuten de la viacutea renal)
Preparacioacuten del paciente
Ayuno
Modalidad de la toma de muestra
A) Recoger la orina de 24 horas con el siguiente procedimiento
Para la recoleccioacuten de orina de 24 horas se tiene que utilizar un frasco
de 25 30 litros de boca ancha con tapoacuten de rosca Antildeadir al frasco un
estabilizante si es necesario
Para la recogida de la orina se procede del modo siguiente
a) En el tiempo preestablecido vaciar la vejiga e eliminar toda la
orina
b) Posteriormente comenzar a recoger toda la orina de 24 horas
c) Al cumplir las 24 horas vaciar de nuevo la vejiga y depositar toda
la orina en el frasco Conservar las orinas a 2-4degC
Al finalizar la recoleccioacuten de orina eacutesta debe ser enviada
inmediatamente al laboratorio
B) Cuando se entrega la muestra de orina es necesario efectuar la toma
de muestra de sangre
Transporte
La muestra de orina debe ser transportada de 2-4degC la muestra de
sangre a temperatura ambiente
Conservacioacuten
Centrifugacioacuten y separacioacuten del suero la toma de muestra se puede
conservar por 1 diacutea a temperatura ambiente de 20-25oC 7 diacuteas 2-4oC y
6 meses en congelacioacuten
Conservar las orinas a 2-4degC
Laboratorio Cliacutenico PAULINA ARROLLO PEREacuteZ
Verificacioacuten de la muestra
Verificar que el registro de la toma de muestra esteacute correcto
Metoacutedica de determinacioacuten
Cu x Vmin
Aclaramiento de la creatinina = mdashmdashmdashmdashmdashmdashmdashmdashmdashmdashmdashmdash
Ps
donde
Cu= concentracioacuten de creatinina en la orina expresado en mgdl
Ps = concentracioacuten de creatinina en suero expresado en mgdl
Vmin= volumen por minuto (cantidad de la diuresis entre 1440)
Procedimiento analiacutetico
Ver metoacutedica de la creatinina
Notas sobre la metoacutedica
Linealidad
Referirse a las metoacutedicas de creatinina Es lineal hasta 250 mgdl
Sensibilidad
Referirse a las metoacutedicas de creatinina Su sensibilidad es 01 mgdl
Especificidad
Referirse a las metoacutedicas de creatinina
Las muestras de suero tienen proteiacutenas que pueden reaccionar no
especiacuteficamente con el
meacutetodo Jaffe Es necesario corregir el valor de 03 mgdl para lograr
valores maacutes correctos
Interferencias
Las interferencias significativas se deben
Para las orinas
Presencia de partiacuteculas en suspensioacuten (centrifugar las orinas)
Mala recoleccioacuten de orina
Presencia de bacterias de barbituacutericos de cuerpos cetoacutenicos
Para la sangre
Hemoacutelisis con Hb ge100 gl
Laboratorio Cliacutenico PAULINA ARROLLO PEREacuteZ
Icteacuterico bilirrubina ge400 mgdl
Lipemia trigliceacuteridos ge20000 mgdl
Acetona ge500 mgdl
Valor de referencia
ge70mlmin
PRACTICA 4
EXAMEN MICROSCOacutePICO DEL SEDIMENTO URINARIO
PROPOacuteSITO
Observar microscoacutepicamente en el sedimento urinario elementos celulares
cilindros cristales paraacutesitos filamentos mucoides y bacterias Con el fin
de sugerir una patologiacutea del tracto urinario u otras enfermedades que esteacuten
en diferente localizacioacuten
MUESTRA REQUERIDA
15 mL de orina
MATERIALES
- Tubos coacutenicos de 15 mL
- Laacuteminas portaobjetos
- Laminillas cubreobjetos
- Marcador para vidrio
- Gradillas para tubos
- Guantes descartables
EQUIPO
- Reloj marcador
- Centriacutefuga
- Microscopio
PROCEDIMIENTO
- Centrifugar durante 5 minutos a 2500 rpm
- Descartar el liacutequido sobrenadante
- Suspender el sedimento urinario golpeando ligeramente con la mano
Laboratorio Cliacutenico PAULINA ARROLLO PEREacuteZ
- Colocar una gota de sedimento entre un porta y un cubreobjeto
- Observar la preparacioacuten con el objetivo 10x para lograr una visioacuten general del
sedimento
- Identificar los elementos formes a mayor aumento 40x
- Anotar lo observado
FUENTES DE ERROR
- Usar portaobjetos y cubreobjetos sucios
- Desecacioacuten del sedimento urinario
-Tiempo transcurrido desde la toma de la muestra hasta la observacioacuten
microscoacutepica
- Uso excesivo de luz
- Centrifugacioacuten inadecuada
FORMA DE REPORTE
CEacuteLULAS EPITELIALES ESCAMOSAS Y REDONDAS reportar escasas
moderadas o abundantes
GLOacuteBULOS ROJOS Reportar el nuacutemero estimado por campo
LEUCOCITOS Reportar el nuacutemero estimado por campo
CILINDROS se pueden encontrar en la orina los siguientes cilindros
hialinos granulosos finos y gruesos leucocitarios hemaacuteticos grasos y ceacutereos
Reportar el nuacutemero de cilindros observados por campo
FILAMENTOS MUCOIDES reportar escasos moderados o abundantes
CRISTALES se pueden encontrar en la orina los siguientes cristales oxalatos de
calcio acido uacuterico uratos amorfos fosfatos amorfos fosfatos triples urato de
amonio leucina cistina y tirosina
Reportar en la forma siguiente escasos moderados o abundantes
LEVADURAS Reportar escasos moderada y abundantes
PARAacuteSITOS Se pueden encontrar en orina Trichomonas vaginalis Phitirus pubis
huevos y quistes de paraacutesitos por contaminacioacuten con heces
BACTERIAS Reportar la presencia de bacterias moderadas o abundantes
solamente cuando se observen maacutes de 10 leucocitos por campo
Valores de referencia
Laboratorio Cliacutenico PAULINA ARROLLO PEREacuteZ
CEacuteLULAS EPITELIALES ESCAMOSAS Escasas a moderadas
CEacuteLULAS EPITELIALES REDONDAS No deben observarse
GLOacuteBULOS ROJOS No deben observarse
LEUCOCITOS 0-5 por campo
CILINDROS No deben observarse
FILAMENTOS MUCOIDES No deben observarse
CRISTALES Podriacutean observarse oxalatos uratos y fosfatos amorfos de escasa a
moderada cantidad
LEVADURAS No deben observarse
PARAacuteSITOS No deben observarse
BACTERIAS Escasas o no presentes
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PRACTICA 6
UROCULTIVO Y ANTIBIOGRAMA
OBTENCIOacuteN DE MUESTRA DE ORINA PARA CULTIVO
Condiciones generales
La orina es un excelente medio de cultivo para la proliferacioacuten bacteriana por esta
razoacuten la muestra debe ser procesada dentro de las 2 horas despueacutes de haber
sido obtenida o debe refrigerarse a 4 degC (maacuteximo 24 horas) hasta su
procesamiento
Generalmente el desarrollo de dos o maacutes tipos de colonias (en pacientes sin
sonda vesical) indican que la muestra se ha contaminado por recoleccioacuten
incorrecta o demora en la siembra
OBTENCIOacuteN DE MUESTRA DE ORINA DEL CHORRO MEDIO
Obtencioacuten de muestras de orina en pacientes mujeres Materiales y equipos
a) Guantes de laacutetex esteacuteriles
b) Cinco o maacutes piezas de gasa esteacuteril de tamantildeo adecuado pudiendo
ser de 4rdquo x 4rdquo
c) Jaboacuten
d) Agua tibia esteacuteril
e) Frasco esteacuteril de boca ancha para la muestra de orina
Procedimiento
a) Mantener la privacidad de la paciente
b) Rotular el frasco con el nombre de la paciente fecha de obtencioacuten de la
muestra hora y el procedimiento usado para la obtencioacuten de la muestra
c) Lavarse las manos con jaboacuten y abundante agua
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d) Preparar una pieza de gasa para la limpieza de los genitales externos
humedicieacutendola con agua y una pequentildea cantidad de jaboacuten Preparar dos piezas
maacutes de gasa para el enjuague con agua tibia
e) Separar los labios mayores con dos dedos de una mano y limpiar el aacuterea
expuesta pasando la gasa de adelante hacia atraacutes
f) Descartar la gasa
g) Con otra gasa humedecida enjuagar el aacuterea de adelante hacia atraacutes Repetir el
procedimiento con otra gasa
h) Finalmente secar el aacuterea de adelante hacia atraacutes con un trozo de gasa seca
i) Mantener separados los labios mayores mientras la paciente empieza a orinar
Luego del chorro inicial colocar el frasco esteacuteril para colectar el chorro medio
j) Al terminar la recoleccioacuten tapar el frasco inmediatamente y limpiarle la
superficie
k) Transportar el frasco con la muestra de orina inmediatamente
Obtencioacuten de muestra de orina en pacientes varones
Materiales
a) Guantes de laacutetex
b) Cinco o maacutes piezas de gasa esteacuteril
c) Jaboacuten
d) Agua tibia esteacuteril
e) Frasco esteacuteril de boca ancha para la obtencioacuten de la muestra
Procedimiento
a) Mantener la privacidad del paciente
b) Rotular el frasco con el nombre del paciente fecha de obtencioacuten de la muestra
hora y el procedimiento usado para la obtencioacuten de la muestra
c) Lavarse las manos con jaboacuten y abundante agua
d) Preparar una pieza de gasa con agua y una pequentildea cantidad de jaboacuten
Preparar dos piezas maacutes de gasa para el enjuague con agua tibia
e) Realizar la higiene de los genitales Retraer el prepucio antes de lavar el glande
con la gasa humedecida con jaboacuten Descartar la gasa
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f) Enjuagar el glande usando una gasa huacutemeda Repetir el procedimiento con otra
gasa
g) Secar la zona usando uno o maacutes piezas de gasa seca
h) Indicar al paciente que mantenga el prepucio retirado e inicie la miccioacuten
directamente en un recipiente (orina para descartar)
i) Despueacutes del chorro inicial colocar el frasco esteacuteril para colectar la muestra del
chorro medio
j) Obtenida la muestra tapar el frasco inmediatamente y limpiarle la superficie
k) Transportar el frasco con la muestra de orina inmediatamente al laboratorio
SIEMBRA PRIMARIA DE MUESTRA DE ORINA
Objetivo
Describir el procedimiento para la siembra primaria de muestra de orina
Campo de aplicacioacuten
Se aplica para el cultivo de muestra de orina en el diagnoacutestico bacterioloacutegico de
infecciones del tracto urinario
Materiales y equipos
a) Asa calibrada de platino o descartable de 0001 mL oacute 001 mL
b) Estufa de 35 ndash 37 degC
c) Mechero Bunsen o cabina de flujo laminar
d) Guantes de laacutetex
e) Contenedor de material contaminado
f) Pinza esteacuteril
g) Propipeta o pipetor automaacutetico
h) Medios de cultivo
ndash Placas con agar sangre de carnero (AS)
ndash Placas con agar Mc Conkey (McC)
Procedimiento
a) Mantener las muestras en refrigeracioacuten (4 degC) hasta su procesamiento por
cultivo
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b) Los cultivos deben realizarse en una cabina de bioseguridad o cerca del
mechero Bunsen
c) Las placas con AS y McC que se utilizaraacuten en el urocultivo deben estar a
temperatura ambiente Rotular las placas
d) Si el asa calibrada no es descartable esterilizar el asa de siembra flameacuteandola
en el mechero Bunsen hasta que se ponga rojo vivo Dejar enfriar el asa
e) Tomar el frasco con la muestra de orina abrir la tapa y flamear la boca del
frasco en el mechero Bunsen
f) Tomar la muestra de orina con el asa de siembra esteacuteril introducieacutendola y
sacaacutendola del frasco en forma vertical Tapar el frasco con la muestra
g) Inocular en el centro de la placa con AS a partir del cual se extiende la muestra
hacia delante y hacia atraacutes
h) Luego sin quemar el asa el inoacuteculo se disemina uniformemente con trazos
perpendiculares a la siembra inicial en toda la placa
i) Proceder de la misma forma para el agar Mc Conkey
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Lectura
a) Realizar la evaluacioacuten a las 24 horas si no hay crecimiento bacteriano dejar
incubar hasta las 48 horas
b) La evaluacioacuten consiste en realizar el recuento de colonias cuyo resultado se
multiplica por el factor de dilucioacuten para obtener las UFC por mL
Interpretacioacuten
a) En pacientes sin sonda vesical la cuenta significativa de bacterias en orina es
la presencia de maacutes de 105 UFC mL de un solo germen
b) Los recuentos intermedios (103 ndash 104 UFCmL) indican infeccioacuten si el
procedimiento de recoleccioacuten de orina fue realizado correctamente
c) Generalmente el aislamiento de tres o maacutes especies bacterianas indican que la
muestra se ha contaminado por recoleccioacuten inadecuada o demora en la siembra
d) En pacientes con sonda vesical cuentas bacterianas menores de 105 UFCmL
pueden tener significado asiacute tambieacuten se pueden encontrar bacteriurias
polimicrobianas hasta en casi 15 de enfermos
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e) En pacientes sin cateacuteter se puede comprobar si el procedimiento de obtencioacuten
de muestra fue realizado correctamente observando la frecuencia con la cual se
informan recuentos de colonias intermedias entre 103 ndash 104 UFCmL En
pacientes sin infecciones del tracto urinario el recuento es nulo o se reduce a
pocas colonias
IDENTIFICACION BACTERIANA
Lectura de cultivos en agar Mac Conkey
ndash En agar Mc Conkey Escherichia coli lactosa positiva forma colonias de borde
entero de color fucsia opacas de 2 mm ndash 3 mm de diaacutemetro usualmente
rodeadas de una zona opaca alrededor de la colonia (bilis precipitada) Las cepas
de E coli que son lactosa negativa dan colonias incoloras de 3 ndash 4 mm
ndash En agar Mc Conkey K pneumoniae forma colonias de borde entero de color
rosado a rosado oscuro de 3 ndash 4 mm de diaacutemetro y aspecto mucoide
ndash En agar Mc Conkey Enterobacter spp forma colonias de borde entero de color
rosado de 2 ndash 4 mm de diaacutemetro no tan mucoides como K pneumoniae
Las colonias con estas caracteriacutesticas son subcultivadas en medios diferenciales
PRUEBAS BIOQUIMICAS
TSI
Lectura
Es importante hacer la lectura entre las 18 ndash 24 horas para no obtener resultados
erroacuteneos La lectura se hace sobre la base de tres caracteriacutesticas Utilizacioacuten de
hidratos de carbono produccioacuten de gas y produccioacuten de aacutecido sulfhiacutedrico
Utilizacioacuten de hidratos de carbono
ndash Utilizacioacuten de lactosa Reaccioacuten aacutecida en el pico de flauta (color amarillo)
Abreviatura (A)
ndash Utilizacioacuten de glucosa Reaccioacuten aacutecida en la columna del medio (color amarillo)
Abreviatura (A)
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ndash No hay utilizacioacuten del carbohidrato Se puede observar una reaccioacuten alcalina
(color rojo) o que no hay cambio de color (permanece del mismo color que el
medio no inoculado) Abreviaturas (K) o (N) respectivamente
Nota Cuando el microorganismo tambieacuten produce H2S el precipitado negro
puede ocultar la acidez
Produccioacuten de gas de glucosa
ndash Se considera positivo Presencia de una sola burbuja de gas burbujas en el
medio divisioacuten del medio desplazamiento completo del medio del fondo del tubo
dejando un aacuterea clara o una ligera muesca del medio en el costado del tubo
ndash Se registra la lectura por medio de cruces (+)
Produccioacuten de aacutecido sulfhiacutedrico
ndash Se manifiesta por un color negro distribuido por toda la columna del medio de
cultivo o soacutelo en la parte superior
ndash Se registra la lectura por medio de cruces (+)
Resultados
Ejemplo de simbolizacioacuten e interpretacioacuten
KA ndash+ Significa alcalinidad en la inclinacioacuten y acidez en el fondo (fermentacioacuten de
glucosa) gas negativo y H2S positivo
NN ndash ndashSignifica que no hay utilizacioacuten de la lactosa y glucosa ni produccioacuten de
H2S
AGAR LISINA HIERRO
En este medio se determina simultaacuteneamente la produccioacuten de lisina
descarboxilasa y de la formacioacuten de aacutecido sulfhiacutedrico
Lectura
Es importante hacer la lectura entre las 18 ndash 24 horas si la lectura se realiza antes
podemos obtener resultados falsos positivos asiacute como falsos negativos si se lee
despueacutes de las 24 horas Realizar la lectura en la columna y en la superficie
inclinada y observar la formacioacuten de aacutecido sulfhiacutedrico el cual se evidencia por una
coloracioacuten negra
Nota Generalmente las cepas del grupo Proteus y Providencia desaminan la
lisina a aacutecido ndashcetocarboacutenico Este uacuteltimo forma compuestos pardo-rojizos en la
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regioacuten superficial del medio de cultivo con la sal de hierro y bajo la influencia del
oxiacutegeno
Recomendaciones
No incubar maacutes del tiempo necesario para no ocasionar una alcalinizacioacuten en la
superficie del medio y por lo tanto producir un viraje hacia el violeta
UTILIZACIOacuteN DE CITRATO
Para determinar si un microorganismo es capaz de utilizar citrato como uacutenica
fuente de carbono para su metabolismo
Procedimiento
a) Incubar a 35ndash37 degC de 24 horasndash 48 horas En algunos casos es necesario una
incubacioacuten hasta por 4 diacuteas
b) Ver el viraje de color
Resultados
a) Prueba positiva Crecimiento con un color azul intenso en el pico de flauta o
presencia de colonias en ausencia del color azul
b) Prueba negativa No se observa crecimiento ni cambio de color (verde)
Controles
Positivo Enterobacter cloacae
Negativo Escherichia coli
HIDROacuteLISIS DE LA UREA (PRODUCCIOacuteN DE UREASA)
Es uacutetil para determinar la capacidad de un organismo de degradar la urea
formando dos moleacuteculas de amoniaco por accioacuten de la enzima ureasa
Procedimiento
Realizar la lectura despueacutes de 18 horas ndash 24 horas de incubacioacuten observando el
viraje de color
Resultados
Prueba positiva Color rosado intenso en el pico de flauta o todo el agar
Puede haber una reaccioacuten positiva retardada despueacutes de 24 horas y hasta
6 diacuteas de incubacioacuten (algunas cepas de Klebsiella por ejemplo)
Prueba negativa No se produce cambio de color
Controles
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Negativo Escherichia coli
Positivo Klebsiella pneumoniae
MOTILIDAD (MEDIOS SIM O MIO O AGAR MOVILIDAD)
Para determinar si un organismo es moacutevil o inmoacutevil
Procedimiento
Incubar a 35 ndash 37 degC de 24 a 48 horas
Resultados
Positivo Los microorganismos migran de la liacutenea de siembra y se difunden en el
medio provocando turbidez Tambieacuten puede manifestarse semejando
ldquovellosidadesrdquo a lo largo del trazo de siembra
Negativo Se observa un crecimiento bacteriano acentuado siguiendo el trazo de
siembra y el medio circundante se mantiene claro
Controles
Control positivo Escherichia coli
Control negativo Klebsiella pneumoniae
h) Prueba de indol[6]
Es uacutetil para determinar la capacidad de un microorganismo de producir indol a
partir del aminoaacutecido triptoacutefano
Medios y reactivos
Caldo de triptoacutefano o de peptona o caldo de triptona
Reactivo de indol de Kovacs
Procedimiento
Retirar aseacutepticamente 2 mL de caldo de cutivo con 24 horas de incubacioacuten
Agregar 5 gotas de reactivo de Kovacs
Mover suavemente el tubo y realizar la lectura
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ANTIBIOGRAMA
Preparacioacuten del Agar Mueller Hinton
Preparar el medio a partir de la base deshidratada de acuerdo a las
indicaciones del fabricante
Autoclavar y dejar enfriar en bantildeo de agua hasta que alcance los 45degC - 50degC
Repartir el medio en placas petri (60 ml ndash 70 ml o 25 ml ndash 30 ml para placas de
150 mm o 100 mm de diaacutemetro interno respectivamente) de manera que el
grosor del agar en la placa sea de 4 mm
Realizar las pruebas de esterilidad para cada lote de Mueller Hinton incubando
una o dos placas de cada lote a 30degC ndash 35degC durante 24 horas o maacutes Estas
placas utilizadas deben ser luego descartadas
Preparacioacuten del estaacutendar (05 Mc Farland) para el inoacuteculo
Para estandarizar la densidad del inoacuteculo se usa una suspensioacuten de sulfato de
bario (05 de la escala de Mac Farland) como estaacutendar
Preparacioacuten del estaacutendar de turbidez
a Agregar 05 ml de una solucioacuten de BaCl2 0048 M (BaCl22H2O al 1175 PV)
a 995 mL de una solucioacuten de H2SO4 018 M (036 N) (1 VV) en constante
movimiento para mantener la suspensioacuten
b Verificar la densidad correcta del estaacutendar usando un fotocoloriacutemetro oacute
espectrofotoacutemetro cuya absorbancia a 625 nm es 008 a 010 para el estaacutendar 05
de Mc Farland
c Distribuir de 4 ml a 6 ml en tubos con tapa de rosca o tapoacuten de jebe similares a
los que se usaraacuten para preparar el inoacuteculo
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d Ajustar bien las tapas o tapones y conservarlos en la oscuridad a temperatura
ambiente y anotar la fecha de preparacioacuten
e Antes de ser usado agitar vigorosamente dicho estaacutendar de preferencia en un
agitador mecaacutenico
f Verificar mensualmente la densidad de los estaacutendares de sulfato de bario y
reemplazarlo cuando sea necesario
INOCULACIOacuteN
Preparacioacuten del inoacuteculo
Puede realizarse de dos formas
Meacutetodo de desarrollo previo
a Seleccionar cuatro a cinco colonias bien aisladas del mismo tipo morfoloacutegico
de un cultivo en placa
b Tocar la superficie de cada colonia con una asa de siembra y transferirlo a un
tubo que contiene de 4 a 5 mL de caldo apropiado (Ej Caldo Tripticasa soya)
c Incubar el caldo a una temperatura entre 35degC a 37degC hasta que alcance o
exceda la turbidez del estaacutendar 05 de la escala de Mc Farland (por lo general de
2 a 6 horas)
d Ajustar la turbidez del inoacuteculo con solucioacuten salina o caldo apropiado hasta el
tubo 05 de la escala de Mc Farland por comparacioacuten visual con el estaacutendar Para
realizar este paso correctamente usar una luz apropiada y mirar los tubos contra
un fondo blanco con liacuteneas negras como contraste
e La suspensioacuten preparada contendraacute aproximadamente 1 a 2 x 108 UFCmL
Meacutetodo directo de inoculacioacuten a partir de colonias aisladas
a De una placa de cultivo con agar no selectivo e incubada por 18 - 24 h
seleccionar colonias aisladas y preparar una suspensioacutem directa en solucioacuten
salina oacute caldo
b La suspensioacuten debe ser inmediatamente ajustada a la escala 05 de Mc
Farland
Inoculacioacuten de las Placas
Dentro de los 15 minutos siguientes al ajuste de la turbidez del inoacuteculo sumergir
un hisopo esteacuteril en la suspensioacuten rotar el hisopo varias veces presionando
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firmemente sobre la pared interior del tubo por encima del nivel del liacutequido para
remover el exceso de inoacuteculo
Inocular la superficie seca de la placa de Mueller Hinton estriando con el hisopo
en tres direcciones para asegurar una distribucioacuten uniforme del inoacuteculo Antes de
colocar los discos dejar secar la placa a temperatura ambiente durante 3 a 5
minutos para que cualquier exceso de humedad superficial sea absorbido
APLICACIOacuteN DE LOS DISCOS
Colocar los discos individuales o multidiscos sobre la superficie del agar con la
ayuda de una pinza esteacuteril o la punta de una aguja presionando suavemente sobre
cada disco para asegurar un contacto completo con la superficie del agar
Distribuir los discos uniformemente de modo que esteacuten a una distancia miacutenima de
25 mm uno del otro (el diaacutemetro de los discos seguacuten las normas de la
Organizacioacuten Mundial de la Salud (OMS) debe ser de 6 mm) No deben colocarse
maacutes de 12 discos en una placa de 150 mm ni maacutes de 6 en una placa de 100 mm
de diaacutemetro interno para evitar la superposicioacuten de las zonas de inhibicioacuten Un
disco no debe ser removido una vez que tomoacute contacto con la superficie del agar
debido a que algunos antibioacuteticos se difunden raacutepidamente
INCUBACIOacuteN
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Incubar lar placas en posicioacuten invertida a 35degC por 18 a 24 horas dentro de los 15
minutos posteriores a la aplicacioacuten de los discos
Despueacutes del tiempo recomendado de incubacioacuten examinar cada placa y medir los
diaacutemetros de los halos de inhibicioacuten alrededor de cada disco
LECTURA DE LAS PLACAS E INTERPRETACIOacuteN DE LOS RESULTADOS
Medir los diaacutemetros de las zonas de inhibicioacuten completa (incluyendo el diaacutemetro
del disco) usando
una regla o calibrador Se debe mantener iluminada la parte posterior de la placa
petri con una luz reflejada localizada a unos cuantos centiacutemetros sobre un fondo
negro Tener la precaucioacuten de observar la placa siguiendo una vertical directa para
evitar una lectura erroacutenea de las marcas de la regla por efecto de paralelismo En
los medios suplementados con sangre las zonas son medidas en la parte superior
de la superficie del agar y retirando la tapa Tener cuidado de no medir la zona de
la hemoacutelisis sino la de inhibicioacuten del crecimiento
El punto final debe tomarse como el aacuterea que no muestra un crecimiento obvio
visible que puede ser detectado mediante observacioacuten visual no incluyendo velo
de crecimiento o colonias muy pequentildeas que puedan ser detectadas solo con
mucha dificultad en el borde de la zona Sin embargo las colonias mayores
creciendo dentro de la zona clara deberaacuten ser subcultivadas reidentificadas y
reensayadas Algunos Proteus spp debido a su gran movilidad pueden presentar
un velo de invasioacuten o ldquoswarmingrdquo dentro de las zonas de inhibicioacuten de algunos
antibioacuteticos En estos casos el velo del swarming debe ser ignorado al momento
de medir los halos de inhibicioacuten
DISCOS DE SENSIBILIDAD ANTIBIOacuteTICA A INCLUIR EN EL ANTIBIOGRAMA
Grupo I
Ampicilina
Cefalotina
Ampicilina Sulbactam o Amoxicilina Aacutecido Clavulaacutenico
Cefuroxima
Cefotaxima o Ceftriaxona
Gentamicina
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Amikacina
Aacutecido Nalidiacutexico(1)
Norfloxacina(1)
Ciprofloxacina
Cotrimoxazol (TrimetoprimSulfametoxazol)
Nitrofurantoiacutena(1)
Grupo II
Cefoxitina
Aztreonam
Ceftazidima
Cefixima
CefoperazonaSulbactam
Cefepime o Cefpirome
Imipenem o Meropenem
Cloramfenicol
Ofloxacina (1)
(1) Disco utilizado exclusivamente para infecciones de las viacuteas urinarias
Resistencias Naturales
Las enterobacterias son resistentes a Penicilina Oxacilina Macroacutelidos
Clindamicina y Glicopeacuteptidos
Klebsiella spp es resistente a las Aminopenicilinas
Citrobacter freundii Enterobacter cloacae y Enterobacter aerogenes son
resistentes a las Aminopenicilinas AminopenicilinasInhibidores de
betalactamasas Cefalosporinas de primera generacioacuten y Cefuroxima
Serratia marcescens es resistente a las Aminopenicilinas
AminopenicilinasInhibidores de betalactamasas Cefalosporinas de primera
generacioacuten y Cefoxitina
Proteus mirabilis es resistente a Nitrofurantoiacutena
Proteus vulgaris es resistente a las Aminopenicilinas Cefalosporinas de primera
generacioacuten Cefuroxima y Nitrofurantoiacutena
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Morganella morganii es resistente a las Aminopenicilinas
AminopenicilinasInhibidores de betalactamasas Cefalosporinas de primera
generacioacuten Cefuroxima y Nitrofurantoiacutena
Providentia stuartii es resistente a las Aminopenicilinas
AminopenicilinasInhibidores de betalactamasas Cefalosporinas de primera
generacioacuten Gentamicina (bajo nivel) y Nitrofurantoiacutena
ANTIBIOTICOS Y DIAMETROS CRITICOS PARA ENTEROBACTERIAS
E PRACTICA 7
EXAMEN QUIMICO DE CALCULO RENAL
EXAMEN FISICO
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Se debe pesar el caacutelculo y anotar el dato obtenido Medir dos de los diaacutemetros y
tomar nota del aspecto general textura y color y despueacutes de seccionado el
aspecto general la prominencia y el color de los distintos estratos
Se secciona el caacutelculo con una sierra Se raspan las caras con una aguja Se
procede lo mismo con el nuacutecleo Cada una de las muestras obtenidas se trituran
por separado en un mortero
PROCESO
Se coloca una porcioacuten del polvo del caacutelculo en un crisol y se calienta al fuego Si
no hay ennegrecimiento ni se altera el tamantildeo original el caacutelculo estaraacute formado
por sustancias inorgaacutenicas Si en cambio se carboniza desapareciendo estaraacute
formado por sustancias orgaacutenicas Si se funde y se ennegrece este caacutelculo estaacute
formado por sulfamidasa
Una vez obtenidos los datos pueden seleccionarse las reacciones necesarias
para confirmarlos
REACCIONES QUIMICAS
Solucioacuten A
10mg del polvo en matraz y antildeadir 50 ml de ClH 5 Observar si se
produce efervescencia Calentar en bantildeo de agua hirviendo por 10 a 15 minutos y
filtrar en caliente El filtrado se distribuye en 8 tubos numerados y se introduce un
trocito de papel tornasol en cada uno
Solucioacuten B
Agitar con Cl3CH unos 10 mg del polvo Reposar en tubo tapado a
temperatura ambiente hasta que el insoluble haya precipitado Decantar la
solucioacuten clorofoacutermica y guardar igual que el sedimento por separado
Carbonato efervescencia al agregar el CIH por desprendimiento de CO 2
Amonio al tubo 1 de la solucioacuten A se le agrega solucioacuten de OHNa 10 gota a
gota y agitando hasta que el papel tornasol vire
Agregar 1 ml de reactivo de Nessler Un color amarillo oscuro oporto indica
positividad de la reaccioacuten
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El NH 3 formado por los grupos NH 4 en medio alcalino reacciona con el yoiduro
doble del reactivo de Nesler para dar yoduro amoacutenico dimercuacuterico precipitado
pardo anaranjado
Acido uacuterico Neutralizar el contenido del tubo 2 como se explicoacute antes
Agregar igual volumen de CNN Na 2 y 05 ml de reactivo de Folin para aacutecido
uacuterico Un color azul intenso indica presencia de aacutecido uacuterico
El aacutecido uacuterico reduce al aacutecido fosfotuacutengstico en medio alcalino dando color azul
intenso de azul de tungsteno y a su vez se oxida a alantoiacutena
Reactivo fosfotuacutengstico (Folin y Denis) Antes del uso diluir al 10 en agua
destilada
Oxalato de calcio Neutralizar el contenido del tubo 3 Agregar CH 3 COOH 10
hasta reaccioacuten aacutecida al tornasol Precipitado blanco que no se redisuelve por
agitacioacuten indica presencia de oxalato de calcio
Calcio Neutralizar el tubo 4 Acidificar con CH 3 COOH glacial Agregar 2 ml C 2
O 4 ( NH 4 ) 4 Precipitado blancodenso indica presencia de Ca ++
Fosfato Neutralizar el tubo 5 Agregar 1 ml de solucioacuten de molibdato Mezclar
antildeadir 05 ml de aacutecido aminonaftol sulfoacutenico (ANS) 025 Coloracioacuten azul que
aparece en 5 minutos indica fosfatos
El color azul se debe a los oacutexidos reducidos de molibdeno
Reactivos
1 ClH concentrado2 Solucioacuten de OHK 203 NO 3 H concentrado4 Mo O 4 (NH 4 ) 2 disolver 25 g de la droga en 50 ml de SO 4 H 2 10 N y
diluir a 100 ml con H2 O destilada5 Amoniacuteaco
Reactivo ANS En matraz x 250 ml poner 05 g de aacutecido aminonaftolsulfoacutenico y
agrgar 195 ml de bisulfito de sodio 15 y 5 ml de sulfito de sodio 20 Mezclar
bien hasta disolucioacuten Si no se disuelve en media hora agregar maacutes sulfito y
agitar El reactivo dura unas 2 semanas
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Magnesio Neutralizar el tubo 7 con OHNH 4 y antildeadir 1 ml de solucioacuten alcohoacutelica
de p ndash Nitrobenceno azorresorcinol Un cromoacutegeno rojo indica presencia de
magnesio
En medio alcalino se forma (OH) 2 Mg El colorante azo resulta absorbido por el
(OH) 2 Mg en medio alcalino
Xantina A un tercio del residuo de la solucioacuten B agregarle gotas de NO 3 H
concentrado
Se disuelve el residuo sin desprender gas Evaporar a sequedad en bantildeo Mariacutea
hirviente quedando un residuo amarillo Dejar enfriar y humedecer con gotas de
OHNa 10 Una coloracioacuten anaranjada que vira al rojo oscuro al calentar indica
presencia de xantina
La reaccioacuten es la xantoproteica Migracioacuten de los anillos fenilo existentes en la
tirosina fenilalanina y triptoacutefano que da un color amarillo de los productos de
nitrosustitucioacuten para virar al anaranjado tras la adicioacuten de un aacutelcali ( formacioacuten de
la sal)
Nota El reactivo de molibdato se puede preparar asiacute
Solucioacuten 1 SO 4 H 2 01 N
Medir 450 ml de SO4 H 2 concentrado y agregarlos a 1300 ml de agua
destilada
Solucioacuten 2
A 250 ml de SO 4 H 2 01 N antildeadir la solucioacuten de molibdato y llevar con
agua destilada a 250 ml Mezclar
Sulfamidas Neutralizar el uacuteltimo tubo Antildeadir 1 ml de NO 2 Na 05 preparado
recientemente Agitar y reposar por 3 minutos Antildeadir 5 ml de solucioacuten alcohoacutelica
de dimetil-alfa naftilamina 025 Un color rojizo indica presencia de sulfamidas
Finalmente procede hacer mencioacuten de ciertos procedimientos fiacutesicos como la
microscopia de polarizacioacuten difraccioacuten de rayos X cristalografiacutea
espectrofotometriacutea de rayos infrarrojos etc que permiten actualmente un
conocimiento maacutes confiable de la estructura de los caacutelculos
- Reactivos
-
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Procedimiento
1) En un tubo de ensayo agregar 1g de reactivo de Rothera con 5 ml de orina
Mezclar por inversioacuten
2) Luego agregar 1ml de hidroacutexido de amonio concentrado
3) Si la prueba es positiva se forma un anillo rojo a puacuterpura en el tiempo de
112 minuto en el punto de contacto
Dar los resultados seguacuten la siguiente pauta
Negativa No se forma el anillo o la formacioacuten de un anillo marroacuten
Trazas La formacioacuten de un anillo puacuterpura o de color rosado
2(+) La formacioacuten de un anillo puacuterpura oscuro estrecho limitado
4 (++++) La formacioacuten de un anillo puacuterpura oscuro extenso
DETECCION DE SANGRE EN ORINA (SANGRE OCULTA)
PRUEBA DE BENCIDINA
Reactivo A
Solucioacuten de Bencidina al 1 en aacutecido aceacutetico al 50
Peroacutexido de hidroacutegeno de 10 voluacutemenes
Procedimiento
En un tubo o sobre un papel filtro( en este caso ldquomancharrdquo el papel con la muestra
en estudio)
2 ndash 4 gotas de bencidina
Agregar 2 ndash 4 gotas de peroacutexido de hidroacutegeno (agua oxigenada)
Interpretacioacuten
Si existe sangre se formaraacute un halo verde azulado
Negativo halo marroacuten
Reactivo B
Solucioacuten de Piramidoacuten al 5 en aacutecido aceacutetico al 50
Peroacutexido de hidroacutegeno de 10 voluacutemenes
La solucioacuten de piramidoacuten puede ser preparada sin aacutecido aceacutetico por lo tanto el
orden de uso es piramidoacuten acido aceacutetico agua oxigenada Resultado
Laboratorio Cliacutenico PAULINA ARROLLO PEREacuteZ
DETERMINACION DE BILIRRUBINA Y UROBILINOGENO
REACCION DEL YODO DE SMITH (BILIRRUBINAS)
En un tubo de ensayo colocar 5ml de orina aacutecida y cubrirla con 2ml de una
solucioacuten de yodo al 07 en alcohopl etiacutelico al 95 La presencia de un anillo de
color verde esmeralda en la interfase de ambos liacutequidos indica la presencia de
bilirrubina
La deteccioacuten de urobilinoacutegeno en orina tambieacuten indican un problema hepaacutetico Uno
de los problemas importantes en la deteccioacuten de urobilinoacutegeno
REACCION CUANTITATIVA DE EHRLICH
Reactivo de Ehrlich
p-dimetilanminobenzaldehiacutedo 10g
HCl concentrado 75ml
Agua destilada 75ml
Procedimiento
1- Colocar 10ml de orina en un tubo de ensayo recieacuten emitida
2- Agregar 1ml del reactivo de Ehrlich
3- Dejar en reposo durante 5 minutos
La presencia urobilinoacutegeno determina que la solucioacuten cambie de color niveles
altos y dan un color rojo cereza
Laboratorio Cliacutenico PAULINA ARROLLO PEREacuteZ
E PRACTICA 3
DEPURACION DE CREATININACREATININA Generalidad
La creatinina es una sustancia que deriva del metabolismo muscular
(muacutesculo estriado liso y cardiacuteaco) de la creatina y representa el
subproducto de excrecioacuten La produccioacuten de creatinina es independiente
de la dieta y del ejercicio muscular sin embargo es proporcional dentro
de ciertos liacutemites a la masa muscular Se libera de los glomeacuterulos y no
es reabsorbida por los tuacutebulos de los cuales puede ser excretada
especialmente cuando se aumenta la concentracioacuten hemaacutetica El
aumento de la creatinina en el suero empieza a ser evidente cuando el
filtrado glomerular es por debajo de 60 ml por minuto
Indicaciones
La determinacioacuten de la cratinina es utilizada en el diagnoacutestico de las
enfermedades renales agudas o croacutenicas y tambieacuten para el monitoreo
de la diaacutelisis renal El aumento de la creatinina es un iacutendice de la
insuficiencia glomerular en cuanto eacutesta es eliminada por filtracioacuten
glomerular Mientras la uremia en la sangre puede ser controlada a
traveacutes de una oportuna dieta la creatinina se correlaciona casi
exclusivamente a la eficiencia de la filtracioacuten glomerular La creatinina
representa el iacutendice maacutes fiel de la insuficiencia renal
Preparacioacuten del paciente
Ayuno
Modalidad de la toma de muestra
Ninguna particularidad
Transporte
Transportar a temperatura ambiente
Conservacioacuten
Centrifugacioacuten y separacioacuten del suero la toma de muestra se puede
conservar por 1 diacutea a temperatura ambiente de 20-25oC 7 diacuteas 2-4oC y
6 meses en congelacioacuten
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Centrifugacioacuten
Poner el tubo de ensayo en la centriacutefuga de modo balanceado poner el
reloj 5 minutos y centrifugar por 3000 rpm Verificar la idoneidad del
suero o plasma ictericia presencia de coaacutegulos filamentos de fibrina
turbidez Sentildealar eventualmente en el resultado la no idoneidad de la
muestra
Metoacutedicas de determinacioacuten
Meacutetodo cineacutetico enzimaacutetico
El meacutetodo enzimaacutetico colorimeacutetrico consiste en la medida del color
desarrollado con el reactivo de Jaffe antes y despueacutes de una reaccioacuten
con la enzima especiacutefica la creatincinasa esta enzima transforma la
creatinina en creatina con medida final a 340 nm de la creatina
Meacutetodo colorimeacutetrico y procedimiento analiacutetico
Ademaacutes de la determinacioacuten de la creatinina con una teacutecnica de punto
final maacutes frecuentemente se utiliza una teacutecnica cineacutetica en la cual la
creatinina en medio alcalino reacciona con picrato produciendo un
complejo coloreado rojo-naranja la diferencia de absorcioacuten durante el
tiempo de conversioacuten es directamente proporcional a la concentracioacuten
de creatinina en la muestra
Creatinina + aacutecido piacutecrico mdashmdashmdashgt creatinina picrato (complejo)
Materiales
1048664 Guantes descartables no esteacuteriles
1048664 Tubos de ensayo 13 x 100 mm
1048664 Puntas de pipeta 10-100 ul
1048664 1048664 Puntas de pipeta 100-1000 ul
1048664 1048664 Centriacutefuga
1048664 Espectrofotoacutemetro
1048664 Bantildeo Mariacutea
1048664 Reloj marcador
1048664 Pipetas automaacuteticas 10-100 ul
1048664 Pipetas automaacuteticas 100-1000 ul
Laboratorio Cliacutenico PAULINA ARROLLO PEREacuteZ
Procedimiento
Seguir las instrucciones de la casa comercial
Control de Calidad
Se deberaacuten usar sueros control normal y patoloacutegico en las mismas
condiciones que las muestras
Notas sobre la metoacutedica
Linealidad
Es lineal hasta 250 mgdl
Sensibilidad
Su sensibilidad es 01 mgdl
Especificidad
La metoacutedica es especiacutefica para la creatinina
Las muestras de suero tienen proteiacutenas que pueden reaccionar no
especiacuteficamente con el meacutetodo Jaffe es necesario corregir el valor de
03 mgdl para lograr valores maacutes correctos
Interferencias
Las interferencias maacutes significativas son
Hemoacutelisis con Hb ge100 gl
Icteacuterico bilirrubina ge400 mgdl
Lipemia trigliceacuteridos ge20000 mgdl
Acetona ge500 mgdl
Algunos antibioacuteticos como las cefalosporinas pueden dar valores
falsamente elevados
Valor de referencia
Hombres Hasta 13 mgdl
Mujeres Hasta 11 mgdl
Neonatos o nintildeos Hasta 07 mgdl
Criterios de validacioacuten
Confrontar paraacutemetros de funcionalidad renal (urea potasio proteiacutenas
densidad urinaria)
Confrontar paraacutemetros de equilibrio electroliacuteticos (sodio potasio cloro)
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Controlar sexo y edad del paciente y tambieacuten eventual estado de
embarazo
Controlar paraacutemetros del metabolismo muscular (CPK miacuteoglobulina)
DEPURACION DE CREATININA
Generalidad
La cantidad de creatinina excretada con la orina estaacute en relacioacuten con la
filtracioacuten glomerular La creatinina es una sustancia que deriva del
metabolismo muscular (muacutesculo estriado liso y cardiacuteaco) de la creatina
y representa el subproducto de excrecioacuten La produccioacuten de creatinina
es independiente de la dieta y del ejercicio muscular sin embargo es
proporcional dentro de algunos liacutemites a la masa muscular Se libera
desde los glomeacuterulos y no es reabsorbida por los tuacutebulos de los cuales
puede ser excretada especialmente cuando se aumenta la
concentracioacuten hemaacutetica El aumento de la creatinina en el suero
empieza a ser evidente cuando el filtrado glomerular es por debajo de
60 ml por minuto
La medida de la cantidad de creatinina en la orina producida en un
determinado periacuteodo de tiempo simultaacuteneamente a la medida de la
concentracioacuten plasmaacutetica lleva al caacutelculo el aclaramiento de la
creatinina (volumen del plasma en ml que es depurado de la creatinina
en un minuto de tiempo)
C= U x VP (mlmin)
donde
C= aclaramiento
U= concentracioacuten de creatinina en la orina
V= volumen de la orina eliminada
P= concentracioacuten de creatinina en el plasma
Indicaciones
La estrecha correlacioacuten entre la velocidad de filtracioacuten glomerular y el
valor de la creatinina plasmaacutetica y el hecho que la concentracioacuten de la
creatinina hemaacutetica no es influenciada por la dieta hacen de la
Laboratorio Cliacutenico PAULINA ARROLLO PEREacuteZ
creatinina en particular el aclaramiento de la creatinina un iacutendice de
funcionalidad renal muy sensible y seguramente maacutes significativo que la
urea
El aclaramiento de la creatinina se modifica en relacioacuten con la
enfermedad renal (glomerulonefritis agudas o croacutenicas rintildeoacuten policiacutestico
obstruccioacuten de la viacutea renal)
Preparacioacuten del paciente
Ayuno
Modalidad de la toma de muestra
A) Recoger la orina de 24 horas con el siguiente procedimiento
Para la recoleccioacuten de orina de 24 horas se tiene que utilizar un frasco
de 25 30 litros de boca ancha con tapoacuten de rosca Antildeadir al frasco un
estabilizante si es necesario
Para la recogida de la orina se procede del modo siguiente
a) En el tiempo preestablecido vaciar la vejiga e eliminar toda la
orina
b) Posteriormente comenzar a recoger toda la orina de 24 horas
c) Al cumplir las 24 horas vaciar de nuevo la vejiga y depositar toda
la orina en el frasco Conservar las orinas a 2-4degC
Al finalizar la recoleccioacuten de orina eacutesta debe ser enviada
inmediatamente al laboratorio
B) Cuando se entrega la muestra de orina es necesario efectuar la toma
de muestra de sangre
Transporte
La muestra de orina debe ser transportada de 2-4degC la muestra de
sangre a temperatura ambiente
Conservacioacuten
Centrifugacioacuten y separacioacuten del suero la toma de muestra se puede
conservar por 1 diacutea a temperatura ambiente de 20-25oC 7 diacuteas 2-4oC y
6 meses en congelacioacuten
Conservar las orinas a 2-4degC
Laboratorio Cliacutenico PAULINA ARROLLO PEREacuteZ
Verificacioacuten de la muestra
Verificar que el registro de la toma de muestra esteacute correcto
Metoacutedica de determinacioacuten
Cu x Vmin
Aclaramiento de la creatinina = mdashmdashmdashmdashmdashmdashmdashmdashmdashmdashmdashmdash
Ps
donde
Cu= concentracioacuten de creatinina en la orina expresado en mgdl
Ps = concentracioacuten de creatinina en suero expresado en mgdl
Vmin= volumen por minuto (cantidad de la diuresis entre 1440)
Procedimiento analiacutetico
Ver metoacutedica de la creatinina
Notas sobre la metoacutedica
Linealidad
Referirse a las metoacutedicas de creatinina Es lineal hasta 250 mgdl
Sensibilidad
Referirse a las metoacutedicas de creatinina Su sensibilidad es 01 mgdl
Especificidad
Referirse a las metoacutedicas de creatinina
Las muestras de suero tienen proteiacutenas que pueden reaccionar no
especiacuteficamente con el
meacutetodo Jaffe Es necesario corregir el valor de 03 mgdl para lograr
valores maacutes correctos
Interferencias
Las interferencias significativas se deben
Para las orinas
Presencia de partiacuteculas en suspensioacuten (centrifugar las orinas)
Mala recoleccioacuten de orina
Presencia de bacterias de barbituacutericos de cuerpos cetoacutenicos
Para la sangre
Hemoacutelisis con Hb ge100 gl
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Icteacuterico bilirrubina ge400 mgdl
Lipemia trigliceacuteridos ge20000 mgdl
Acetona ge500 mgdl
Valor de referencia
ge70mlmin
PRACTICA 4
EXAMEN MICROSCOacutePICO DEL SEDIMENTO URINARIO
PROPOacuteSITO
Observar microscoacutepicamente en el sedimento urinario elementos celulares
cilindros cristales paraacutesitos filamentos mucoides y bacterias Con el fin
de sugerir una patologiacutea del tracto urinario u otras enfermedades que esteacuten
en diferente localizacioacuten
MUESTRA REQUERIDA
15 mL de orina
MATERIALES
- Tubos coacutenicos de 15 mL
- Laacuteminas portaobjetos
- Laminillas cubreobjetos
- Marcador para vidrio
- Gradillas para tubos
- Guantes descartables
EQUIPO
- Reloj marcador
- Centriacutefuga
- Microscopio
PROCEDIMIENTO
- Centrifugar durante 5 minutos a 2500 rpm
- Descartar el liacutequido sobrenadante
- Suspender el sedimento urinario golpeando ligeramente con la mano
Laboratorio Cliacutenico PAULINA ARROLLO PEREacuteZ
- Colocar una gota de sedimento entre un porta y un cubreobjeto
- Observar la preparacioacuten con el objetivo 10x para lograr una visioacuten general del
sedimento
- Identificar los elementos formes a mayor aumento 40x
- Anotar lo observado
FUENTES DE ERROR
- Usar portaobjetos y cubreobjetos sucios
- Desecacioacuten del sedimento urinario
-Tiempo transcurrido desde la toma de la muestra hasta la observacioacuten
microscoacutepica
- Uso excesivo de luz
- Centrifugacioacuten inadecuada
FORMA DE REPORTE
CEacuteLULAS EPITELIALES ESCAMOSAS Y REDONDAS reportar escasas
moderadas o abundantes
GLOacuteBULOS ROJOS Reportar el nuacutemero estimado por campo
LEUCOCITOS Reportar el nuacutemero estimado por campo
CILINDROS se pueden encontrar en la orina los siguientes cilindros
hialinos granulosos finos y gruesos leucocitarios hemaacuteticos grasos y ceacutereos
Reportar el nuacutemero de cilindros observados por campo
FILAMENTOS MUCOIDES reportar escasos moderados o abundantes
CRISTALES se pueden encontrar en la orina los siguientes cristales oxalatos de
calcio acido uacuterico uratos amorfos fosfatos amorfos fosfatos triples urato de
amonio leucina cistina y tirosina
Reportar en la forma siguiente escasos moderados o abundantes
LEVADURAS Reportar escasos moderada y abundantes
PARAacuteSITOS Se pueden encontrar en orina Trichomonas vaginalis Phitirus pubis
huevos y quistes de paraacutesitos por contaminacioacuten con heces
BACTERIAS Reportar la presencia de bacterias moderadas o abundantes
solamente cuando se observen maacutes de 10 leucocitos por campo
Valores de referencia
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CEacuteLULAS EPITELIALES ESCAMOSAS Escasas a moderadas
CEacuteLULAS EPITELIALES REDONDAS No deben observarse
GLOacuteBULOS ROJOS No deben observarse
LEUCOCITOS 0-5 por campo
CILINDROS No deben observarse
FILAMENTOS MUCOIDES No deben observarse
CRISTALES Podriacutean observarse oxalatos uratos y fosfatos amorfos de escasa a
moderada cantidad
LEVADURAS No deben observarse
PARAacuteSITOS No deben observarse
BACTERIAS Escasas o no presentes
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PRACTICA 6
UROCULTIVO Y ANTIBIOGRAMA
OBTENCIOacuteN DE MUESTRA DE ORINA PARA CULTIVO
Condiciones generales
La orina es un excelente medio de cultivo para la proliferacioacuten bacteriana por esta
razoacuten la muestra debe ser procesada dentro de las 2 horas despueacutes de haber
sido obtenida o debe refrigerarse a 4 degC (maacuteximo 24 horas) hasta su
procesamiento
Generalmente el desarrollo de dos o maacutes tipos de colonias (en pacientes sin
sonda vesical) indican que la muestra se ha contaminado por recoleccioacuten
incorrecta o demora en la siembra
OBTENCIOacuteN DE MUESTRA DE ORINA DEL CHORRO MEDIO
Obtencioacuten de muestras de orina en pacientes mujeres Materiales y equipos
a) Guantes de laacutetex esteacuteriles
b) Cinco o maacutes piezas de gasa esteacuteril de tamantildeo adecuado pudiendo
ser de 4rdquo x 4rdquo
c) Jaboacuten
d) Agua tibia esteacuteril
e) Frasco esteacuteril de boca ancha para la muestra de orina
Procedimiento
a) Mantener la privacidad de la paciente
b) Rotular el frasco con el nombre de la paciente fecha de obtencioacuten de la
muestra hora y el procedimiento usado para la obtencioacuten de la muestra
c) Lavarse las manos con jaboacuten y abundante agua
Laboratorio Cliacutenico PAULINA ARROLLO PEREacuteZ
d) Preparar una pieza de gasa para la limpieza de los genitales externos
humedicieacutendola con agua y una pequentildea cantidad de jaboacuten Preparar dos piezas
maacutes de gasa para el enjuague con agua tibia
e) Separar los labios mayores con dos dedos de una mano y limpiar el aacuterea
expuesta pasando la gasa de adelante hacia atraacutes
f) Descartar la gasa
g) Con otra gasa humedecida enjuagar el aacuterea de adelante hacia atraacutes Repetir el
procedimiento con otra gasa
h) Finalmente secar el aacuterea de adelante hacia atraacutes con un trozo de gasa seca
i) Mantener separados los labios mayores mientras la paciente empieza a orinar
Luego del chorro inicial colocar el frasco esteacuteril para colectar el chorro medio
j) Al terminar la recoleccioacuten tapar el frasco inmediatamente y limpiarle la
superficie
k) Transportar el frasco con la muestra de orina inmediatamente
Obtencioacuten de muestra de orina en pacientes varones
Materiales
a) Guantes de laacutetex
b) Cinco o maacutes piezas de gasa esteacuteril
c) Jaboacuten
d) Agua tibia esteacuteril
e) Frasco esteacuteril de boca ancha para la obtencioacuten de la muestra
Procedimiento
a) Mantener la privacidad del paciente
b) Rotular el frasco con el nombre del paciente fecha de obtencioacuten de la muestra
hora y el procedimiento usado para la obtencioacuten de la muestra
c) Lavarse las manos con jaboacuten y abundante agua
d) Preparar una pieza de gasa con agua y una pequentildea cantidad de jaboacuten
Preparar dos piezas maacutes de gasa para el enjuague con agua tibia
e) Realizar la higiene de los genitales Retraer el prepucio antes de lavar el glande
con la gasa humedecida con jaboacuten Descartar la gasa
Laboratorio Cliacutenico PAULINA ARROLLO PEREacuteZ
f) Enjuagar el glande usando una gasa huacutemeda Repetir el procedimiento con otra
gasa
g) Secar la zona usando uno o maacutes piezas de gasa seca
h) Indicar al paciente que mantenga el prepucio retirado e inicie la miccioacuten
directamente en un recipiente (orina para descartar)
i) Despueacutes del chorro inicial colocar el frasco esteacuteril para colectar la muestra del
chorro medio
j) Obtenida la muestra tapar el frasco inmediatamente y limpiarle la superficie
k) Transportar el frasco con la muestra de orina inmediatamente al laboratorio
SIEMBRA PRIMARIA DE MUESTRA DE ORINA
Objetivo
Describir el procedimiento para la siembra primaria de muestra de orina
Campo de aplicacioacuten
Se aplica para el cultivo de muestra de orina en el diagnoacutestico bacterioloacutegico de
infecciones del tracto urinario
Materiales y equipos
a) Asa calibrada de platino o descartable de 0001 mL oacute 001 mL
b) Estufa de 35 ndash 37 degC
c) Mechero Bunsen o cabina de flujo laminar
d) Guantes de laacutetex
e) Contenedor de material contaminado
f) Pinza esteacuteril
g) Propipeta o pipetor automaacutetico
h) Medios de cultivo
ndash Placas con agar sangre de carnero (AS)
ndash Placas con agar Mc Conkey (McC)
Procedimiento
a) Mantener las muestras en refrigeracioacuten (4 degC) hasta su procesamiento por
cultivo
Laboratorio Cliacutenico PAULINA ARROLLO PEREacuteZ
b) Los cultivos deben realizarse en una cabina de bioseguridad o cerca del
mechero Bunsen
c) Las placas con AS y McC que se utilizaraacuten en el urocultivo deben estar a
temperatura ambiente Rotular las placas
d) Si el asa calibrada no es descartable esterilizar el asa de siembra flameacuteandola
en el mechero Bunsen hasta que se ponga rojo vivo Dejar enfriar el asa
e) Tomar el frasco con la muestra de orina abrir la tapa y flamear la boca del
frasco en el mechero Bunsen
f) Tomar la muestra de orina con el asa de siembra esteacuteril introducieacutendola y
sacaacutendola del frasco en forma vertical Tapar el frasco con la muestra
g) Inocular en el centro de la placa con AS a partir del cual se extiende la muestra
hacia delante y hacia atraacutes
h) Luego sin quemar el asa el inoacuteculo se disemina uniformemente con trazos
perpendiculares a la siembra inicial en toda la placa
i) Proceder de la misma forma para el agar Mc Conkey
Laboratorio Cliacutenico PAULINA ARROLLO PEREacuteZ
Lectura
a) Realizar la evaluacioacuten a las 24 horas si no hay crecimiento bacteriano dejar
incubar hasta las 48 horas
b) La evaluacioacuten consiste en realizar el recuento de colonias cuyo resultado se
multiplica por el factor de dilucioacuten para obtener las UFC por mL
Interpretacioacuten
a) En pacientes sin sonda vesical la cuenta significativa de bacterias en orina es
la presencia de maacutes de 105 UFC mL de un solo germen
b) Los recuentos intermedios (103 ndash 104 UFCmL) indican infeccioacuten si el
procedimiento de recoleccioacuten de orina fue realizado correctamente
c) Generalmente el aislamiento de tres o maacutes especies bacterianas indican que la
muestra se ha contaminado por recoleccioacuten inadecuada o demora en la siembra
d) En pacientes con sonda vesical cuentas bacterianas menores de 105 UFCmL
pueden tener significado asiacute tambieacuten se pueden encontrar bacteriurias
polimicrobianas hasta en casi 15 de enfermos
Laboratorio Cliacutenico PAULINA ARROLLO PEREacuteZ
e) En pacientes sin cateacuteter se puede comprobar si el procedimiento de obtencioacuten
de muestra fue realizado correctamente observando la frecuencia con la cual se
informan recuentos de colonias intermedias entre 103 ndash 104 UFCmL En
pacientes sin infecciones del tracto urinario el recuento es nulo o se reduce a
pocas colonias
IDENTIFICACION BACTERIANA
Lectura de cultivos en agar Mac Conkey
ndash En agar Mc Conkey Escherichia coli lactosa positiva forma colonias de borde
entero de color fucsia opacas de 2 mm ndash 3 mm de diaacutemetro usualmente
rodeadas de una zona opaca alrededor de la colonia (bilis precipitada) Las cepas
de E coli que son lactosa negativa dan colonias incoloras de 3 ndash 4 mm
ndash En agar Mc Conkey K pneumoniae forma colonias de borde entero de color
rosado a rosado oscuro de 3 ndash 4 mm de diaacutemetro y aspecto mucoide
ndash En agar Mc Conkey Enterobacter spp forma colonias de borde entero de color
rosado de 2 ndash 4 mm de diaacutemetro no tan mucoides como K pneumoniae
Las colonias con estas caracteriacutesticas son subcultivadas en medios diferenciales
PRUEBAS BIOQUIMICAS
TSI
Lectura
Es importante hacer la lectura entre las 18 ndash 24 horas para no obtener resultados
erroacuteneos La lectura se hace sobre la base de tres caracteriacutesticas Utilizacioacuten de
hidratos de carbono produccioacuten de gas y produccioacuten de aacutecido sulfhiacutedrico
Utilizacioacuten de hidratos de carbono
ndash Utilizacioacuten de lactosa Reaccioacuten aacutecida en el pico de flauta (color amarillo)
Abreviatura (A)
ndash Utilizacioacuten de glucosa Reaccioacuten aacutecida en la columna del medio (color amarillo)
Abreviatura (A)
Laboratorio Cliacutenico PAULINA ARROLLO PEREacuteZ
ndash No hay utilizacioacuten del carbohidrato Se puede observar una reaccioacuten alcalina
(color rojo) o que no hay cambio de color (permanece del mismo color que el
medio no inoculado) Abreviaturas (K) o (N) respectivamente
Nota Cuando el microorganismo tambieacuten produce H2S el precipitado negro
puede ocultar la acidez
Produccioacuten de gas de glucosa
ndash Se considera positivo Presencia de una sola burbuja de gas burbujas en el
medio divisioacuten del medio desplazamiento completo del medio del fondo del tubo
dejando un aacuterea clara o una ligera muesca del medio en el costado del tubo
ndash Se registra la lectura por medio de cruces (+)
Produccioacuten de aacutecido sulfhiacutedrico
ndash Se manifiesta por un color negro distribuido por toda la columna del medio de
cultivo o soacutelo en la parte superior
ndash Se registra la lectura por medio de cruces (+)
Resultados
Ejemplo de simbolizacioacuten e interpretacioacuten
KA ndash+ Significa alcalinidad en la inclinacioacuten y acidez en el fondo (fermentacioacuten de
glucosa) gas negativo y H2S positivo
NN ndash ndashSignifica que no hay utilizacioacuten de la lactosa y glucosa ni produccioacuten de
H2S
AGAR LISINA HIERRO
En este medio se determina simultaacuteneamente la produccioacuten de lisina
descarboxilasa y de la formacioacuten de aacutecido sulfhiacutedrico
Lectura
Es importante hacer la lectura entre las 18 ndash 24 horas si la lectura se realiza antes
podemos obtener resultados falsos positivos asiacute como falsos negativos si se lee
despueacutes de las 24 horas Realizar la lectura en la columna y en la superficie
inclinada y observar la formacioacuten de aacutecido sulfhiacutedrico el cual se evidencia por una
coloracioacuten negra
Nota Generalmente las cepas del grupo Proteus y Providencia desaminan la
lisina a aacutecido ndashcetocarboacutenico Este uacuteltimo forma compuestos pardo-rojizos en la
Laboratorio Cliacutenico PAULINA ARROLLO PEREacuteZ
regioacuten superficial del medio de cultivo con la sal de hierro y bajo la influencia del
oxiacutegeno
Recomendaciones
No incubar maacutes del tiempo necesario para no ocasionar una alcalinizacioacuten en la
superficie del medio y por lo tanto producir un viraje hacia el violeta
UTILIZACIOacuteN DE CITRATO
Para determinar si un microorganismo es capaz de utilizar citrato como uacutenica
fuente de carbono para su metabolismo
Procedimiento
a) Incubar a 35ndash37 degC de 24 horasndash 48 horas En algunos casos es necesario una
incubacioacuten hasta por 4 diacuteas
b) Ver el viraje de color
Resultados
a) Prueba positiva Crecimiento con un color azul intenso en el pico de flauta o
presencia de colonias en ausencia del color azul
b) Prueba negativa No se observa crecimiento ni cambio de color (verde)
Controles
Positivo Enterobacter cloacae
Negativo Escherichia coli
HIDROacuteLISIS DE LA UREA (PRODUCCIOacuteN DE UREASA)
Es uacutetil para determinar la capacidad de un organismo de degradar la urea
formando dos moleacuteculas de amoniaco por accioacuten de la enzima ureasa
Procedimiento
Realizar la lectura despueacutes de 18 horas ndash 24 horas de incubacioacuten observando el
viraje de color
Resultados
Prueba positiva Color rosado intenso en el pico de flauta o todo el agar
Puede haber una reaccioacuten positiva retardada despueacutes de 24 horas y hasta
6 diacuteas de incubacioacuten (algunas cepas de Klebsiella por ejemplo)
Prueba negativa No se produce cambio de color
Controles
Laboratorio Cliacutenico PAULINA ARROLLO PEREacuteZ
Negativo Escherichia coli
Positivo Klebsiella pneumoniae
MOTILIDAD (MEDIOS SIM O MIO O AGAR MOVILIDAD)
Para determinar si un organismo es moacutevil o inmoacutevil
Procedimiento
Incubar a 35 ndash 37 degC de 24 a 48 horas
Resultados
Positivo Los microorganismos migran de la liacutenea de siembra y se difunden en el
medio provocando turbidez Tambieacuten puede manifestarse semejando
ldquovellosidadesrdquo a lo largo del trazo de siembra
Negativo Se observa un crecimiento bacteriano acentuado siguiendo el trazo de
siembra y el medio circundante se mantiene claro
Controles
Control positivo Escherichia coli
Control negativo Klebsiella pneumoniae
h) Prueba de indol[6]
Es uacutetil para determinar la capacidad de un microorganismo de producir indol a
partir del aminoaacutecido triptoacutefano
Medios y reactivos
Caldo de triptoacutefano o de peptona o caldo de triptona
Reactivo de indol de Kovacs
Procedimiento
Retirar aseacutepticamente 2 mL de caldo de cutivo con 24 horas de incubacioacuten
Agregar 5 gotas de reactivo de Kovacs
Mover suavemente el tubo y realizar la lectura
Laboratorio Cliacutenico PAULINA ARROLLO PEREacuteZ
Laboratorio Cliacutenico PAULINA ARROLLO PEREacuteZ
Laboratorio Cliacutenico PAULINA ARROLLO PEREacuteZ
ANTIBIOGRAMA
Preparacioacuten del Agar Mueller Hinton
Preparar el medio a partir de la base deshidratada de acuerdo a las
indicaciones del fabricante
Autoclavar y dejar enfriar en bantildeo de agua hasta que alcance los 45degC - 50degC
Repartir el medio en placas petri (60 ml ndash 70 ml o 25 ml ndash 30 ml para placas de
150 mm o 100 mm de diaacutemetro interno respectivamente) de manera que el
grosor del agar en la placa sea de 4 mm
Realizar las pruebas de esterilidad para cada lote de Mueller Hinton incubando
una o dos placas de cada lote a 30degC ndash 35degC durante 24 horas o maacutes Estas
placas utilizadas deben ser luego descartadas
Preparacioacuten del estaacutendar (05 Mc Farland) para el inoacuteculo
Para estandarizar la densidad del inoacuteculo se usa una suspensioacuten de sulfato de
bario (05 de la escala de Mac Farland) como estaacutendar
Preparacioacuten del estaacutendar de turbidez
a Agregar 05 ml de una solucioacuten de BaCl2 0048 M (BaCl22H2O al 1175 PV)
a 995 mL de una solucioacuten de H2SO4 018 M (036 N) (1 VV) en constante
movimiento para mantener la suspensioacuten
b Verificar la densidad correcta del estaacutendar usando un fotocoloriacutemetro oacute
espectrofotoacutemetro cuya absorbancia a 625 nm es 008 a 010 para el estaacutendar 05
de Mc Farland
c Distribuir de 4 ml a 6 ml en tubos con tapa de rosca o tapoacuten de jebe similares a
los que se usaraacuten para preparar el inoacuteculo
Laboratorio Cliacutenico PAULINA ARROLLO PEREacuteZ
d Ajustar bien las tapas o tapones y conservarlos en la oscuridad a temperatura
ambiente y anotar la fecha de preparacioacuten
e Antes de ser usado agitar vigorosamente dicho estaacutendar de preferencia en un
agitador mecaacutenico
f Verificar mensualmente la densidad de los estaacutendares de sulfato de bario y
reemplazarlo cuando sea necesario
INOCULACIOacuteN
Preparacioacuten del inoacuteculo
Puede realizarse de dos formas
Meacutetodo de desarrollo previo
a Seleccionar cuatro a cinco colonias bien aisladas del mismo tipo morfoloacutegico
de un cultivo en placa
b Tocar la superficie de cada colonia con una asa de siembra y transferirlo a un
tubo que contiene de 4 a 5 mL de caldo apropiado (Ej Caldo Tripticasa soya)
c Incubar el caldo a una temperatura entre 35degC a 37degC hasta que alcance o
exceda la turbidez del estaacutendar 05 de la escala de Mc Farland (por lo general de
2 a 6 horas)
d Ajustar la turbidez del inoacuteculo con solucioacuten salina o caldo apropiado hasta el
tubo 05 de la escala de Mc Farland por comparacioacuten visual con el estaacutendar Para
realizar este paso correctamente usar una luz apropiada y mirar los tubos contra
un fondo blanco con liacuteneas negras como contraste
e La suspensioacuten preparada contendraacute aproximadamente 1 a 2 x 108 UFCmL
Meacutetodo directo de inoculacioacuten a partir de colonias aisladas
a De una placa de cultivo con agar no selectivo e incubada por 18 - 24 h
seleccionar colonias aisladas y preparar una suspensioacutem directa en solucioacuten
salina oacute caldo
b La suspensioacuten debe ser inmediatamente ajustada a la escala 05 de Mc
Farland
Inoculacioacuten de las Placas
Dentro de los 15 minutos siguientes al ajuste de la turbidez del inoacuteculo sumergir
un hisopo esteacuteril en la suspensioacuten rotar el hisopo varias veces presionando
Laboratorio Cliacutenico PAULINA ARROLLO PEREacuteZ
firmemente sobre la pared interior del tubo por encima del nivel del liacutequido para
remover el exceso de inoacuteculo
Inocular la superficie seca de la placa de Mueller Hinton estriando con el hisopo
en tres direcciones para asegurar una distribucioacuten uniforme del inoacuteculo Antes de
colocar los discos dejar secar la placa a temperatura ambiente durante 3 a 5
minutos para que cualquier exceso de humedad superficial sea absorbido
APLICACIOacuteN DE LOS DISCOS
Colocar los discos individuales o multidiscos sobre la superficie del agar con la
ayuda de una pinza esteacuteril o la punta de una aguja presionando suavemente sobre
cada disco para asegurar un contacto completo con la superficie del agar
Distribuir los discos uniformemente de modo que esteacuten a una distancia miacutenima de
25 mm uno del otro (el diaacutemetro de los discos seguacuten las normas de la
Organizacioacuten Mundial de la Salud (OMS) debe ser de 6 mm) No deben colocarse
maacutes de 12 discos en una placa de 150 mm ni maacutes de 6 en una placa de 100 mm
de diaacutemetro interno para evitar la superposicioacuten de las zonas de inhibicioacuten Un
disco no debe ser removido una vez que tomoacute contacto con la superficie del agar
debido a que algunos antibioacuteticos se difunden raacutepidamente
INCUBACIOacuteN
Laboratorio Cliacutenico PAULINA ARROLLO PEREacuteZ
Incubar lar placas en posicioacuten invertida a 35degC por 18 a 24 horas dentro de los 15
minutos posteriores a la aplicacioacuten de los discos
Despueacutes del tiempo recomendado de incubacioacuten examinar cada placa y medir los
diaacutemetros de los halos de inhibicioacuten alrededor de cada disco
LECTURA DE LAS PLACAS E INTERPRETACIOacuteN DE LOS RESULTADOS
Medir los diaacutemetros de las zonas de inhibicioacuten completa (incluyendo el diaacutemetro
del disco) usando
una regla o calibrador Se debe mantener iluminada la parte posterior de la placa
petri con una luz reflejada localizada a unos cuantos centiacutemetros sobre un fondo
negro Tener la precaucioacuten de observar la placa siguiendo una vertical directa para
evitar una lectura erroacutenea de las marcas de la regla por efecto de paralelismo En
los medios suplementados con sangre las zonas son medidas en la parte superior
de la superficie del agar y retirando la tapa Tener cuidado de no medir la zona de
la hemoacutelisis sino la de inhibicioacuten del crecimiento
El punto final debe tomarse como el aacuterea que no muestra un crecimiento obvio
visible que puede ser detectado mediante observacioacuten visual no incluyendo velo
de crecimiento o colonias muy pequentildeas que puedan ser detectadas solo con
mucha dificultad en el borde de la zona Sin embargo las colonias mayores
creciendo dentro de la zona clara deberaacuten ser subcultivadas reidentificadas y
reensayadas Algunos Proteus spp debido a su gran movilidad pueden presentar
un velo de invasioacuten o ldquoswarmingrdquo dentro de las zonas de inhibicioacuten de algunos
antibioacuteticos En estos casos el velo del swarming debe ser ignorado al momento
de medir los halos de inhibicioacuten
DISCOS DE SENSIBILIDAD ANTIBIOacuteTICA A INCLUIR EN EL ANTIBIOGRAMA
Grupo I
Ampicilina
Cefalotina
Ampicilina Sulbactam o Amoxicilina Aacutecido Clavulaacutenico
Cefuroxima
Cefotaxima o Ceftriaxona
Gentamicina
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Amikacina
Aacutecido Nalidiacutexico(1)
Norfloxacina(1)
Ciprofloxacina
Cotrimoxazol (TrimetoprimSulfametoxazol)
Nitrofurantoiacutena(1)
Grupo II
Cefoxitina
Aztreonam
Ceftazidima
Cefixima
CefoperazonaSulbactam
Cefepime o Cefpirome
Imipenem o Meropenem
Cloramfenicol
Ofloxacina (1)
(1) Disco utilizado exclusivamente para infecciones de las viacuteas urinarias
Resistencias Naturales
Las enterobacterias son resistentes a Penicilina Oxacilina Macroacutelidos
Clindamicina y Glicopeacuteptidos
Klebsiella spp es resistente a las Aminopenicilinas
Citrobacter freundii Enterobacter cloacae y Enterobacter aerogenes son
resistentes a las Aminopenicilinas AminopenicilinasInhibidores de
betalactamasas Cefalosporinas de primera generacioacuten y Cefuroxima
Serratia marcescens es resistente a las Aminopenicilinas
AminopenicilinasInhibidores de betalactamasas Cefalosporinas de primera
generacioacuten y Cefoxitina
Proteus mirabilis es resistente a Nitrofurantoiacutena
Proteus vulgaris es resistente a las Aminopenicilinas Cefalosporinas de primera
generacioacuten Cefuroxima y Nitrofurantoiacutena
Laboratorio Cliacutenico PAULINA ARROLLO PEREacuteZ
Morganella morganii es resistente a las Aminopenicilinas
AminopenicilinasInhibidores de betalactamasas Cefalosporinas de primera
generacioacuten Cefuroxima y Nitrofurantoiacutena
Providentia stuartii es resistente a las Aminopenicilinas
AminopenicilinasInhibidores de betalactamasas Cefalosporinas de primera
generacioacuten Gentamicina (bajo nivel) y Nitrofurantoiacutena
ANTIBIOTICOS Y DIAMETROS CRITICOS PARA ENTEROBACTERIAS
E PRACTICA 7
EXAMEN QUIMICO DE CALCULO RENAL
EXAMEN FISICO
Laboratorio Cliacutenico PAULINA ARROLLO PEREacuteZ
Se debe pesar el caacutelculo y anotar el dato obtenido Medir dos de los diaacutemetros y
tomar nota del aspecto general textura y color y despueacutes de seccionado el
aspecto general la prominencia y el color de los distintos estratos
Se secciona el caacutelculo con una sierra Se raspan las caras con una aguja Se
procede lo mismo con el nuacutecleo Cada una de las muestras obtenidas se trituran
por separado en un mortero
PROCESO
Se coloca una porcioacuten del polvo del caacutelculo en un crisol y se calienta al fuego Si
no hay ennegrecimiento ni se altera el tamantildeo original el caacutelculo estaraacute formado
por sustancias inorgaacutenicas Si en cambio se carboniza desapareciendo estaraacute
formado por sustancias orgaacutenicas Si se funde y se ennegrece este caacutelculo estaacute
formado por sulfamidasa
Una vez obtenidos los datos pueden seleccionarse las reacciones necesarias
para confirmarlos
REACCIONES QUIMICAS
Solucioacuten A
10mg del polvo en matraz y antildeadir 50 ml de ClH 5 Observar si se
produce efervescencia Calentar en bantildeo de agua hirviendo por 10 a 15 minutos y
filtrar en caliente El filtrado se distribuye en 8 tubos numerados y se introduce un
trocito de papel tornasol en cada uno
Solucioacuten B
Agitar con Cl3CH unos 10 mg del polvo Reposar en tubo tapado a
temperatura ambiente hasta que el insoluble haya precipitado Decantar la
solucioacuten clorofoacutermica y guardar igual que el sedimento por separado
Carbonato efervescencia al agregar el CIH por desprendimiento de CO 2
Amonio al tubo 1 de la solucioacuten A se le agrega solucioacuten de OHNa 10 gota a
gota y agitando hasta que el papel tornasol vire
Agregar 1 ml de reactivo de Nessler Un color amarillo oscuro oporto indica
positividad de la reaccioacuten
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El NH 3 formado por los grupos NH 4 en medio alcalino reacciona con el yoiduro
doble del reactivo de Nesler para dar yoduro amoacutenico dimercuacuterico precipitado
pardo anaranjado
Acido uacuterico Neutralizar el contenido del tubo 2 como se explicoacute antes
Agregar igual volumen de CNN Na 2 y 05 ml de reactivo de Folin para aacutecido
uacuterico Un color azul intenso indica presencia de aacutecido uacuterico
El aacutecido uacuterico reduce al aacutecido fosfotuacutengstico en medio alcalino dando color azul
intenso de azul de tungsteno y a su vez se oxida a alantoiacutena
Reactivo fosfotuacutengstico (Folin y Denis) Antes del uso diluir al 10 en agua
destilada
Oxalato de calcio Neutralizar el contenido del tubo 3 Agregar CH 3 COOH 10
hasta reaccioacuten aacutecida al tornasol Precipitado blanco que no se redisuelve por
agitacioacuten indica presencia de oxalato de calcio
Calcio Neutralizar el tubo 4 Acidificar con CH 3 COOH glacial Agregar 2 ml C 2
O 4 ( NH 4 ) 4 Precipitado blancodenso indica presencia de Ca ++
Fosfato Neutralizar el tubo 5 Agregar 1 ml de solucioacuten de molibdato Mezclar
antildeadir 05 ml de aacutecido aminonaftol sulfoacutenico (ANS) 025 Coloracioacuten azul que
aparece en 5 minutos indica fosfatos
El color azul se debe a los oacutexidos reducidos de molibdeno
Reactivos
1 ClH concentrado2 Solucioacuten de OHK 203 NO 3 H concentrado4 Mo O 4 (NH 4 ) 2 disolver 25 g de la droga en 50 ml de SO 4 H 2 10 N y
diluir a 100 ml con H2 O destilada5 Amoniacuteaco
Reactivo ANS En matraz x 250 ml poner 05 g de aacutecido aminonaftolsulfoacutenico y
agrgar 195 ml de bisulfito de sodio 15 y 5 ml de sulfito de sodio 20 Mezclar
bien hasta disolucioacuten Si no se disuelve en media hora agregar maacutes sulfito y
agitar El reactivo dura unas 2 semanas
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Magnesio Neutralizar el tubo 7 con OHNH 4 y antildeadir 1 ml de solucioacuten alcohoacutelica
de p ndash Nitrobenceno azorresorcinol Un cromoacutegeno rojo indica presencia de
magnesio
En medio alcalino se forma (OH) 2 Mg El colorante azo resulta absorbido por el
(OH) 2 Mg en medio alcalino
Xantina A un tercio del residuo de la solucioacuten B agregarle gotas de NO 3 H
concentrado
Se disuelve el residuo sin desprender gas Evaporar a sequedad en bantildeo Mariacutea
hirviente quedando un residuo amarillo Dejar enfriar y humedecer con gotas de
OHNa 10 Una coloracioacuten anaranjada que vira al rojo oscuro al calentar indica
presencia de xantina
La reaccioacuten es la xantoproteica Migracioacuten de los anillos fenilo existentes en la
tirosina fenilalanina y triptoacutefano que da un color amarillo de los productos de
nitrosustitucioacuten para virar al anaranjado tras la adicioacuten de un aacutelcali ( formacioacuten de
la sal)
Nota El reactivo de molibdato se puede preparar asiacute
Solucioacuten 1 SO 4 H 2 01 N
Medir 450 ml de SO4 H 2 concentrado y agregarlos a 1300 ml de agua
destilada
Solucioacuten 2
A 250 ml de SO 4 H 2 01 N antildeadir la solucioacuten de molibdato y llevar con
agua destilada a 250 ml Mezclar
Sulfamidas Neutralizar el uacuteltimo tubo Antildeadir 1 ml de NO 2 Na 05 preparado
recientemente Agitar y reposar por 3 minutos Antildeadir 5 ml de solucioacuten alcohoacutelica
de dimetil-alfa naftilamina 025 Un color rojizo indica presencia de sulfamidas
Finalmente procede hacer mencioacuten de ciertos procedimientos fiacutesicos como la
microscopia de polarizacioacuten difraccioacuten de rayos X cristalografiacutea
espectrofotometriacutea de rayos infrarrojos etc que permiten actualmente un
conocimiento maacutes confiable de la estructura de los caacutelculos
- Reactivos
-
Laboratorio Cliacutenico PAULINA ARROLLO PEREacuteZ
DETERMINACION DE BILIRRUBINA Y UROBILINOGENO
REACCION DEL YODO DE SMITH (BILIRRUBINAS)
En un tubo de ensayo colocar 5ml de orina aacutecida y cubrirla con 2ml de una
solucioacuten de yodo al 07 en alcohopl etiacutelico al 95 La presencia de un anillo de
color verde esmeralda en la interfase de ambos liacutequidos indica la presencia de
bilirrubina
La deteccioacuten de urobilinoacutegeno en orina tambieacuten indican un problema hepaacutetico Uno
de los problemas importantes en la deteccioacuten de urobilinoacutegeno
REACCION CUANTITATIVA DE EHRLICH
Reactivo de Ehrlich
p-dimetilanminobenzaldehiacutedo 10g
HCl concentrado 75ml
Agua destilada 75ml
Procedimiento
1- Colocar 10ml de orina en un tubo de ensayo recieacuten emitida
2- Agregar 1ml del reactivo de Ehrlich
3- Dejar en reposo durante 5 minutos
La presencia urobilinoacutegeno determina que la solucioacuten cambie de color niveles
altos y dan un color rojo cereza
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E PRACTICA 3
DEPURACION DE CREATININACREATININA Generalidad
La creatinina es una sustancia que deriva del metabolismo muscular
(muacutesculo estriado liso y cardiacuteaco) de la creatina y representa el
subproducto de excrecioacuten La produccioacuten de creatinina es independiente
de la dieta y del ejercicio muscular sin embargo es proporcional dentro
de ciertos liacutemites a la masa muscular Se libera de los glomeacuterulos y no
es reabsorbida por los tuacutebulos de los cuales puede ser excretada
especialmente cuando se aumenta la concentracioacuten hemaacutetica El
aumento de la creatinina en el suero empieza a ser evidente cuando el
filtrado glomerular es por debajo de 60 ml por minuto
Indicaciones
La determinacioacuten de la cratinina es utilizada en el diagnoacutestico de las
enfermedades renales agudas o croacutenicas y tambieacuten para el monitoreo
de la diaacutelisis renal El aumento de la creatinina es un iacutendice de la
insuficiencia glomerular en cuanto eacutesta es eliminada por filtracioacuten
glomerular Mientras la uremia en la sangre puede ser controlada a
traveacutes de una oportuna dieta la creatinina se correlaciona casi
exclusivamente a la eficiencia de la filtracioacuten glomerular La creatinina
representa el iacutendice maacutes fiel de la insuficiencia renal
Preparacioacuten del paciente
Ayuno
Modalidad de la toma de muestra
Ninguna particularidad
Transporte
Transportar a temperatura ambiente
Conservacioacuten
Centrifugacioacuten y separacioacuten del suero la toma de muestra se puede
conservar por 1 diacutea a temperatura ambiente de 20-25oC 7 diacuteas 2-4oC y
6 meses en congelacioacuten
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Centrifugacioacuten
Poner el tubo de ensayo en la centriacutefuga de modo balanceado poner el
reloj 5 minutos y centrifugar por 3000 rpm Verificar la idoneidad del
suero o plasma ictericia presencia de coaacutegulos filamentos de fibrina
turbidez Sentildealar eventualmente en el resultado la no idoneidad de la
muestra
Metoacutedicas de determinacioacuten
Meacutetodo cineacutetico enzimaacutetico
El meacutetodo enzimaacutetico colorimeacutetrico consiste en la medida del color
desarrollado con el reactivo de Jaffe antes y despueacutes de una reaccioacuten
con la enzima especiacutefica la creatincinasa esta enzima transforma la
creatinina en creatina con medida final a 340 nm de la creatina
Meacutetodo colorimeacutetrico y procedimiento analiacutetico
Ademaacutes de la determinacioacuten de la creatinina con una teacutecnica de punto
final maacutes frecuentemente se utiliza una teacutecnica cineacutetica en la cual la
creatinina en medio alcalino reacciona con picrato produciendo un
complejo coloreado rojo-naranja la diferencia de absorcioacuten durante el
tiempo de conversioacuten es directamente proporcional a la concentracioacuten
de creatinina en la muestra
Creatinina + aacutecido piacutecrico mdashmdashmdashgt creatinina picrato (complejo)
Materiales
1048664 Guantes descartables no esteacuteriles
1048664 Tubos de ensayo 13 x 100 mm
1048664 Puntas de pipeta 10-100 ul
1048664 1048664 Puntas de pipeta 100-1000 ul
1048664 1048664 Centriacutefuga
1048664 Espectrofotoacutemetro
1048664 Bantildeo Mariacutea
1048664 Reloj marcador
1048664 Pipetas automaacuteticas 10-100 ul
1048664 Pipetas automaacuteticas 100-1000 ul
Laboratorio Cliacutenico PAULINA ARROLLO PEREacuteZ
Procedimiento
Seguir las instrucciones de la casa comercial
Control de Calidad
Se deberaacuten usar sueros control normal y patoloacutegico en las mismas
condiciones que las muestras
Notas sobre la metoacutedica
Linealidad
Es lineal hasta 250 mgdl
Sensibilidad
Su sensibilidad es 01 mgdl
Especificidad
La metoacutedica es especiacutefica para la creatinina
Las muestras de suero tienen proteiacutenas que pueden reaccionar no
especiacuteficamente con el meacutetodo Jaffe es necesario corregir el valor de
03 mgdl para lograr valores maacutes correctos
Interferencias
Las interferencias maacutes significativas son
Hemoacutelisis con Hb ge100 gl
Icteacuterico bilirrubina ge400 mgdl
Lipemia trigliceacuteridos ge20000 mgdl
Acetona ge500 mgdl
Algunos antibioacuteticos como las cefalosporinas pueden dar valores
falsamente elevados
Valor de referencia
Hombres Hasta 13 mgdl
Mujeres Hasta 11 mgdl
Neonatos o nintildeos Hasta 07 mgdl
Criterios de validacioacuten
Confrontar paraacutemetros de funcionalidad renal (urea potasio proteiacutenas
densidad urinaria)
Confrontar paraacutemetros de equilibrio electroliacuteticos (sodio potasio cloro)
Laboratorio Cliacutenico PAULINA ARROLLO PEREacuteZ
Controlar sexo y edad del paciente y tambieacuten eventual estado de
embarazo
Controlar paraacutemetros del metabolismo muscular (CPK miacuteoglobulina)
DEPURACION DE CREATININA
Generalidad
La cantidad de creatinina excretada con la orina estaacute en relacioacuten con la
filtracioacuten glomerular La creatinina es una sustancia que deriva del
metabolismo muscular (muacutesculo estriado liso y cardiacuteaco) de la creatina
y representa el subproducto de excrecioacuten La produccioacuten de creatinina
es independiente de la dieta y del ejercicio muscular sin embargo es
proporcional dentro de algunos liacutemites a la masa muscular Se libera
desde los glomeacuterulos y no es reabsorbida por los tuacutebulos de los cuales
puede ser excretada especialmente cuando se aumenta la
concentracioacuten hemaacutetica El aumento de la creatinina en el suero
empieza a ser evidente cuando el filtrado glomerular es por debajo de
60 ml por minuto
La medida de la cantidad de creatinina en la orina producida en un
determinado periacuteodo de tiempo simultaacuteneamente a la medida de la
concentracioacuten plasmaacutetica lleva al caacutelculo el aclaramiento de la
creatinina (volumen del plasma en ml que es depurado de la creatinina
en un minuto de tiempo)
C= U x VP (mlmin)
donde
C= aclaramiento
U= concentracioacuten de creatinina en la orina
V= volumen de la orina eliminada
P= concentracioacuten de creatinina en el plasma
Indicaciones
La estrecha correlacioacuten entre la velocidad de filtracioacuten glomerular y el
valor de la creatinina plasmaacutetica y el hecho que la concentracioacuten de la
creatinina hemaacutetica no es influenciada por la dieta hacen de la
Laboratorio Cliacutenico PAULINA ARROLLO PEREacuteZ
creatinina en particular el aclaramiento de la creatinina un iacutendice de
funcionalidad renal muy sensible y seguramente maacutes significativo que la
urea
El aclaramiento de la creatinina se modifica en relacioacuten con la
enfermedad renal (glomerulonefritis agudas o croacutenicas rintildeoacuten policiacutestico
obstruccioacuten de la viacutea renal)
Preparacioacuten del paciente
Ayuno
Modalidad de la toma de muestra
A) Recoger la orina de 24 horas con el siguiente procedimiento
Para la recoleccioacuten de orina de 24 horas se tiene que utilizar un frasco
de 25 30 litros de boca ancha con tapoacuten de rosca Antildeadir al frasco un
estabilizante si es necesario
Para la recogida de la orina se procede del modo siguiente
a) En el tiempo preestablecido vaciar la vejiga e eliminar toda la
orina
b) Posteriormente comenzar a recoger toda la orina de 24 horas
c) Al cumplir las 24 horas vaciar de nuevo la vejiga y depositar toda
la orina en el frasco Conservar las orinas a 2-4degC
Al finalizar la recoleccioacuten de orina eacutesta debe ser enviada
inmediatamente al laboratorio
B) Cuando se entrega la muestra de orina es necesario efectuar la toma
de muestra de sangre
Transporte
La muestra de orina debe ser transportada de 2-4degC la muestra de
sangre a temperatura ambiente
Conservacioacuten
Centrifugacioacuten y separacioacuten del suero la toma de muestra se puede
conservar por 1 diacutea a temperatura ambiente de 20-25oC 7 diacuteas 2-4oC y
6 meses en congelacioacuten
Conservar las orinas a 2-4degC
Laboratorio Cliacutenico PAULINA ARROLLO PEREacuteZ
Verificacioacuten de la muestra
Verificar que el registro de la toma de muestra esteacute correcto
Metoacutedica de determinacioacuten
Cu x Vmin
Aclaramiento de la creatinina = mdashmdashmdashmdashmdashmdashmdashmdashmdashmdashmdashmdash
Ps
donde
Cu= concentracioacuten de creatinina en la orina expresado en mgdl
Ps = concentracioacuten de creatinina en suero expresado en mgdl
Vmin= volumen por minuto (cantidad de la diuresis entre 1440)
Procedimiento analiacutetico
Ver metoacutedica de la creatinina
Notas sobre la metoacutedica
Linealidad
Referirse a las metoacutedicas de creatinina Es lineal hasta 250 mgdl
Sensibilidad
Referirse a las metoacutedicas de creatinina Su sensibilidad es 01 mgdl
Especificidad
Referirse a las metoacutedicas de creatinina
Las muestras de suero tienen proteiacutenas que pueden reaccionar no
especiacuteficamente con el
meacutetodo Jaffe Es necesario corregir el valor de 03 mgdl para lograr
valores maacutes correctos
Interferencias
Las interferencias significativas se deben
Para las orinas
Presencia de partiacuteculas en suspensioacuten (centrifugar las orinas)
Mala recoleccioacuten de orina
Presencia de bacterias de barbituacutericos de cuerpos cetoacutenicos
Para la sangre
Hemoacutelisis con Hb ge100 gl
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Icteacuterico bilirrubina ge400 mgdl
Lipemia trigliceacuteridos ge20000 mgdl
Acetona ge500 mgdl
Valor de referencia
ge70mlmin
PRACTICA 4
EXAMEN MICROSCOacutePICO DEL SEDIMENTO URINARIO
PROPOacuteSITO
Observar microscoacutepicamente en el sedimento urinario elementos celulares
cilindros cristales paraacutesitos filamentos mucoides y bacterias Con el fin
de sugerir una patologiacutea del tracto urinario u otras enfermedades que esteacuten
en diferente localizacioacuten
MUESTRA REQUERIDA
15 mL de orina
MATERIALES
- Tubos coacutenicos de 15 mL
- Laacuteminas portaobjetos
- Laminillas cubreobjetos
- Marcador para vidrio
- Gradillas para tubos
- Guantes descartables
EQUIPO
- Reloj marcador
- Centriacutefuga
- Microscopio
PROCEDIMIENTO
- Centrifugar durante 5 minutos a 2500 rpm
- Descartar el liacutequido sobrenadante
- Suspender el sedimento urinario golpeando ligeramente con la mano
Laboratorio Cliacutenico PAULINA ARROLLO PEREacuteZ
- Colocar una gota de sedimento entre un porta y un cubreobjeto
- Observar la preparacioacuten con el objetivo 10x para lograr una visioacuten general del
sedimento
- Identificar los elementos formes a mayor aumento 40x
- Anotar lo observado
FUENTES DE ERROR
- Usar portaobjetos y cubreobjetos sucios
- Desecacioacuten del sedimento urinario
-Tiempo transcurrido desde la toma de la muestra hasta la observacioacuten
microscoacutepica
- Uso excesivo de luz
- Centrifugacioacuten inadecuada
FORMA DE REPORTE
CEacuteLULAS EPITELIALES ESCAMOSAS Y REDONDAS reportar escasas
moderadas o abundantes
GLOacuteBULOS ROJOS Reportar el nuacutemero estimado por campo
LEUCOCITOS Reportar el nuacutemero estimado por campo
CILINDROS se pueden encontrar en la orina los siguientes cilindros
hialinos granulosos finos y gruesos leucocitarios hemaacuteticos grasos y ceacutereos
Reportar el nuacutemero de cilindros observados por campo
FILAMENTOS MUCOIDES reportar escasos moderados o abundantes
CRISTALES se pueden encontrar en la orina los siguientes cristales oxalatos de
calcio acido uacuterico uratos amorfos fosfatos amorfos fosfatos triples urato de
amonio leucina cistina y tirosina
Reportar en la forma siguiente escasos moderados o abundantes
LEVADURAS Reportar escasos moderada y abundantes
PARAacuteSITOS Se pueden encontrar en orina Trichomonas vaginalis Phitirus pubis
huevos y quistes de paraacutesitos por contaminacioacuten con heces
BACTERIAS Reportar la presencia de bacterias moderadas o abundantes
solamente cuando se observen maacutes de 10 leucocitos por campo
Valores de referencia
Laboratorio Cliacutenico PAULINA ARROLLO PEREacuteZ
CEacuteLULAS EPITELIALES ESCAMOSAS Escasas a moderadas
CEacuteLULAS EPITELIALES REDONDAS No deben observarse
GLOacuteBULOS ROJOS No deben observarse
LEUCOCITOS 0-5 por campo
CILINDROS No deben observarse
FILAMENTOS MUCOIDES No deben observarse
CRISTALES Podriacutean observarse oxalatos uratos y fosfatos amorfos de escasa a
moderada cantidad
LEVADURAS No deben observarse
PARAacuteSITOS No deben observarse
BACTERIAS Escasas o no presentes
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PRACTICA 6
UROCULTIVO Y ANTIBIOGRAMA
OBTENCIOacuteN DE MUESTRA DE ORINA PARA CULTIVO
Condiciones generales
La orina es un excelente medio de cultivo para la proliferacioacuten bacteriana por esta
razoacuten la muestra debe ser procesada dentro de las 2 horas despueacutes de haber
sido obtenida o debe refrigerarse a 4 degC (maacuteximo 24 horas) hasta su
procesamiento
Generalmente el desarrollo de dos o maacutes tipos de colonias (en pacientes sin
sonda vesical) indican que la muestra se ha contaminado por recoleccioacuten
incorrecta o demora en la siembra
OBTENCIOacuteN DE MUESTRA DE ORINA DEL CHORRO MEDIO
Obtencioacuten de muestras de orina en pacientes mujeres Materiales y equipos
a) Guantes de laacutetex esteacuteriles
b) Cinco o maacutes piezas de gasa esteacuteril de tamantildeo adecuado pudiendo
ser de 4rdquo x 4rdquo
c) Jaboacuten
d) Agua tibia esteacuteril
e) Frasco esteacuteril de boca ancha para la muestra de orina
Procedimiento
a) Mantener la privacidad de la paciente
b) Rotular el frasco con el nombre de la paciente fecha de obtencioacuten de la
muestra hora y el procedimiento usado para la obtencioacuten de la muestra
c) Lavarse las manos con jaboacuten y abundante agua
Laboratorio Cliacutenico PAULINA ARROLLO PEREacuteZ
d) Preparar una pieza de gasa para la limpieza de los genitales externos
humedicieacutendola con agua y una pequentildea cantidad de jaboacuten Preparar dos piezas
maacutes de gasa para el enjuague con agua tibia
e) Separar los labios mayores con dos dedos de una mano y limpiar el aacuterea
expuesta pasando la gasa de adelante hacia atraacutes
f) Descartar la gasa
g) Con otra gasa humedecida enjuagar el aacuterea de adelante hacia atraacutes Repetir el
procedimiento con otra gasa
h) Finalmente secar el aacuterea de adelante hacia atraacutes con un trozo de gasa seca
i) Mantener separados los labios mayores mientras la paciente empieza a orinar
Luego del chorro inicial colocar el frasco esteacuteril para colectar el chorro medio
j) Al terminar la recoleccioacuten tapar el frasco inmediatamente y limpiarle la
superficie
k) Transportar el frasco con la muestra de orina inmediatamente
Obtencioacuten de muestra de orina en pacientes varones
Materiales
a) Guantes de laacutetex
b) Cinco o maacutes piezas de gasa esteacuteril
c) Jaboacuten
d) Agua tibia esteacuteril
e) Frasco esteacuteril de boca ancha para la obtencioacuten de la muestra
Procedimiento
a) Mantener la privacidad del paciente
b) Rotular el frasco con el nombre del paciente fecha de obtencioacuten de la muestra
hora y el procedimiento usado para la obtencioacuten de la muestra
c) Lavarse las manos con jaboacuten y abundante agua
d) Preparar una pieza de gasa con agua y una pequentildea cantidad de jaboacuten
Preparar dos piezas maacutes de gasa para el enjuague con agua tibia
e) Realizar la higiene de los genitales Retraer el prepucio antes de lavar el glande
con la gasa humedecida con jaboacuten Descartar la gasa
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f) Enjuagar el glande usando una gasa huacutemeda Repetir el procedimiento con otra
gasa
g) Secar la zona usando uno o maacutes piezas de gasa seca
h) Indicar al paciente que mantenga el prepucio retirado e inicie la miccioacuten
directamente en un recipiente (orina para descartar)
i) Despueacutes del chorro inicial colocar el frasco esteacuteril para colectar la muestra del
chorro medio
j) Obtenida la muestra tapar el frasco inmediatamente y limpiarle la superficie
k) Transportar el frasco con la muestra de orina inmediatamente al laboratorio
SIEMBRA PRIMARIA DE MUESTRA DE ORINA
Objetivo
Describir el procedimiento para la siembra primaria de muestra de orina
Campo de aplicacioacuten
Se aplica para el cultivo de muestra de orina en el diagnoacutestico bacterioloacutegico de
infecciones del tracto urinario
Materiales y equipos
a) Asa calibrada de platino o descartable de 0001 mL oacute 001 mL
b) Estufa de 35 ndash 37 degC
c) Mechero Bunsen o cabina de flujo laminar
d) Guantes de laacutetex
e) Contenedor de material contaminado
f) Pinza esteacuteril
g) Propipeta o pipetor automaacutetico
h) Medios de cultivo
ndash Placas con agar sangre de carnero (AS)
ndash Placas con agar Mc Conkey (McC)
Procedimiento
a) Mantener las muestras en refrigeracioacuten (4 degC) hasta su procesamiento por
cultivo
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b) Los cultivos deben realizarse en una cabina de bioseguridad o cerca del
mechero Bunsen
c) Las placas con AS y McC que se utilizaraacuten en el urocultivo deben estar a
temperatura ambiente Rotular las placas
d) Si el asa calibrada no es descartable esterilizar el asa de siembra flameacuteandola
en el mechero Bunsen hasta que se ponga rojo vivo Dejar enfriar el asa
e) Tomar el frasco con la muestra de orina abrir la tapa y flamear la boca del
frasco en el mechero Bunsen
f) Tomar la muestra de orina con el asa de siembra esteacuteril introducieacutendola y
sacaacutendola del frasco en forma vertical Tapar el frasco con la muestra
g) Inocular en el centro de la placa con AS a partir del cual se extiende la muestra
hacia delante y hacia atraacutes
h) Luego sin quemar el asa el inoacuteculo se disemina uniformemente con trazos
perpendiculares a la siembra inicial en toda la placa
i) Proceder de la misma forma para el agar Mc Conkey
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Lectura
a) Realizar la evaluacioacuten a las 24 horas si no hay crecimiento bacteriano dejar
incubar hasta las 48 horas
b) La evaluacioacuten consiste en realizar el recuento de colonias cuyo resultado se
multiplica por el factor de dilucioacuten para obtener las UFC por mL
Interpretacioacuten
a) En pacientes sin sonda vesical la cuenta significativa de bacterias en orina es
la presencia de maacutes de 105 UFC mL de un solo germen
b) Los recuentos intermedios (103 ndash 104 UFCmL) indican infeccioacuten si el
procedimiento de recoleccioacuten de orina fue realizado correctamente
c) Generalmente el aislamiento de tres o maacutes especies bacterianas indican que la
muestra se ha contaminado por recoleccioacuten inadecuada o demora en la siembra
d) En pacientes con sonda vesical cuentas bacterianas menores de 105 UFCmL
pueden tener significado asiacute tambieacuten se pueden encontrar bacteriurias
polimicrobianas hasta en casi 15 de enfermos
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e) En pacientes sin cateacuteter se puede comprobar si el procedimiento de obtencioacuten
de muestra fue realizado correctamente observando la frecuencia con la cual se
informan recuentos de colonias intermedias entre 103 ndash 104 UFCmL En
pacientes sin infecciones del tracto urinario el recuento es nulo o se reduce a
pocas colonias
IDENTIFICACION BACTERIANA
Lectura de cultivos en agar Mac Conkey
ndash En agar Mc Conkey Escherichia coli lactosa positiva forma colonias de borde
entero de color fucsia opacas de 2 mm ndash 3 mm de diaacutemetro usualmente
rodeadas de una zona opaca alrededor de la colonia (bilis precipitada) Las cepas
de E coli que son lactosa negativa dan colonias incoloras de 3 ndash 4 mm
ndash En agar Mc Conkey K pneumoniae forma colonias de borde entero de color
rosado a rosado oscuro de 3 ndash 4 mm de diaacutemetro y aspecto mucoide
ndash En agar Mc Conkey Enterobacter spp forma colonias de borde entero de color
rosado de 2 ndash 4 mm de diaacutemetro no tan mucoides como K pneumoniae
Las colonias con estas caracteriacutesticas son subcultivadas en medios diferenciales
PRUEBAS BIOQUIMICAS
TSI
Lectura
Es importante hacer la lectura entre las 18 ndash 24 horas para no obtener resultados
erroacuteneos La lectura se hace sobre la base de tres caracteriacutesticas Utilizacioacuten de
hidratos de carbono produccioacuten de gas y produccioacuten de aacutecido sulfhiacutedrico
Utilizacioacuten de hidratos de carbono
ndash Utilizacioacuten de lactosa Reaccioacuten aacutecida en el pico de flauta (color amarillo)
Abreviatura (A)
ndash Utilizacioacuten de glucosa Reaccioacuten aacutecida en la columna del medio (color amarillo)
Abreviatura (A)
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ndash No hay utilizacioacuten del carbohidrato Se puede observar una reaccioacuten alcalina
(color rojo) o que no hay cambio de color (permanece del mismo color que el
medio no inoculado) Abreviaturas (K) o (N) respectivamente
Nota Cuando el microorganismo tambieacuten produce H2S el precipitado negro
puede ocultar la acidez
Produccioacuten de gas de glucosa
ndash Se considera positivo Presencia de una sola burbuja de gas burbujas en el
medio divisioacuten del medio desplazamiento completo del medio del fondo del tubo
dejando un aacuterea clara o una ligera muesca del medio en el costado del tubo
ndash Se registra la lectura por medio de cruces (+)
Produccioacuten de aacutecido sulfhiacutedrico
ndash Se manifiesta por un color negro distribuido por toda la columna del medio de
cultivo o soacutelo en la parte superior
ndash Se registra la lectura por medio de cruces (+)
Resultados
Ejemplo de simbolizacioacuten e interpretacioacuten
KA ndash+ Significa alcalinidad en la inclinacioacuten y acidez en el fondo (fermentacioacuten de
glucosa) gas negativo y H2S positivo
NN ndash ndashSignifica que no hay utilizacioacuten de la lactosa y glucosa ni produccioacuten de
H2S
AGAR LISINA HIERRO
En este medio se determina simultaacuteneamente la produccioacuten de lisina
descarboxilasa y de la formacioacuten de aacutecido sulfhiacutedrico
Lectura
Es importante hacer la lectura entre las 18 ndash 24 horas si la lectura se realiza antes
podemos obtener resultados falsos positivos asiacute como falsos negativos si se lee
despueacutes de las 24 horas Realizar la lectura en la columna y en la superficie
inclinada y observar la formacioacuten de aacutecido sulfhiacutedrico el cual se evidencia por una
coloracioacuten negra
Nota Generalmente las cepas del grupo Proteus y Providencia desaminan la
lisina a aacutecido ndashcetocarboacutenico Este uacuteltimo forma compuestos pardo-rojizos en la
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regioacuten superficial del medio de cultivo con la sal de hierro y bajo la influencia del
oxiacutegeno
Recomendaciones
No incubar maacutes del tiempo necesario para no ocasionar una alcalinizacioacuten en la
superficie del medio y por lo tanto producir un viraje hacia el violeta
UTILIZACIOacuteN DE CITRATO
Para determinar si un microorganismo es capaz de utilizar citrato como uacutenica
fuente de carbono para su metabolismo
Procedimiento
a) Incubar a 35ndash37 degC de 24 horasndash 48 horas En algunos casos es necesario una
incubacioacuten hasta por 4 diacuteas
b) Ver el viraje de color
Resultados
a) Prueba positiva Crecimiento con un color azul intenso en el pico de flauta o
presencia de colonias en ausencia del color azul
b) Prueba negativa No se observa crecimiento ni cambio de color (verde)
Controles
Positivo Enterobacter cloacae
Negativo Escherichia coli
HIDROacuteLISIS DE LA UREA (PRODUCCIOacuteN DE UREASA)
Es uacutetil para determinar la capacidad de un organismo de degradar la urea
formando dos moleacuteculas de amoniaco por accioacuten de la enzima ureasa
Procedimiento
Realizar la lectura despueacutes de 18 horas ndash 24 horas de incubacioacuten observando el
viraje de color
Resultados
Prueba positiva Color rosado intenso en el pico de flauta o todo el agar
Puede haber una reaccioacuten positiva retardada despueacutes de 24 horas y hasta
6 diacuteas de incubacioacuten (algunas cepas de Klebsiella por ejemplo)
Prueba negativa No se produce cambio de color
Controles
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Negativo Escherichia coli
Positivo Klebsiella pneumoniae
MOTILIDAD (MEDIOS SIM O MIO O AGAR MOVILIDAD)
Para determinar si un organismo es moacutevil o inmoacutevil
Procedimiento
Incubar a 35 ndash 37 degC de 24 a 48 horas
Resultados
Positivo Los microorganismos migran de la liacutenea de siembra y se difunden en el
medio provocando turbidez Tambieacuten puede manifestarse semejando
ldquovellosidadesrdquo a lo largo del trazo de siembra
Negativo Se observa un crecimiento bacteriano acentuado siguiendo el trazo de
siembra y el medio circundante se mantiene claro
Controles
Control positivo Escherichia coli
Control negativo Klebsiella pneumoniae
h) Prueba de indol[6]
Es uacutetil para determinar la capacidad de un microorganismo de producir indol a
partir del aminoaacutecido triptoacutefano
Medios y reactivos
Caldo de triptoacutefano o de peptona o caldo de triptona
Reactivo de indol de Kovacs
Procedimiento
Retirar aseacutepticamente 2 mL de caldo de cutivo con 24 horas de incubacioacuten
Agregar 5 gotas de reactivo de Kovacs
Mover suavemente el tubo y realizar la lectura
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ANTIBIOGRAMA
Preparacioacuten del Agar Mueller Hinton
Preparar el medio a partir de la base deshidratada de acuerdo a las
indicaciones del fabricante
Autoclavar y dejar enfriar en bantildeo de agua hasta que alcance los 45degC - 50degC
Repartir el medio en placas petri (60 ml ndash 70 ml o 25 ml ndash 30 ml para placas de
150 mm o 100 mm de diaacutemetro interno respectivamente) de manera que el
grosor del agar en la placa sea de 4 mm
Realizar las pruebas de esterilidad para cada lote de Mueller Hinton incubando
una o dos placas de cada lote a 30degC ndash 35degC durante 24 horas o maacutes Estas
placas utilizadas deben ser luego descartadas
Preparacioacuten del estaacutendar (05 Mc Farland) para el inoacuteculo
Para estandarizar la densidad del inoacuteculo se usa una suspensioacuten de sulfato de
bario (05 de la escala de Mac Farland) como estaacutendar
Preparacioacuten del estaacutendar de turbidez
a Agregar 05 ml de una solucioacuten de BaCl2 0048 M (BaCl22H2O al 1175 PV)
a 995 mL de una solucioacuten de H2SO4 018 M (036 N) (1 VV) en constante
movimiento para mantener la suspensioacuten
b Verificar la densidad correcta del estaacutendar usando un fotocoloriacutemetro oacute
espectrofotoacutemetro cuya absorbancia a 625 nm es 008 a 010 para el estaacutendar 05
de Mc Farland
c Distribuir de 4 ml a 6 ml en tubos con tapa de rosca o tapoacuten de jebe similares a
los que se usaraacuten para preparar el inoacuteculo
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d Ajustar bien las tapas o tapones y conservarlos en la oscuridad a temperatura
ambiente y anotar la fecha de preparacioacuten
e Antes de ser usado agitar vigorosamente dicho estaacutendar de preferencia en un
agitador mecaacutenico
f Verificar mensualmente la densidad de los estaacutendares de sulfato de bario y
reemplazarlo cuando sea necesario
INOCULACIOacuteN
Preparacioacuten del inoacuteculo
Puede realizarse de dos formas
Meacutetodo de desarrollo previo
a Seleccionar cuatro a cinco colonias bien aisladas del mismo tipo morfoloacutegico
de un cultivo en placa
b Tocar la superficie de cada colonia con una asa de siembra y transferirlo a un
tubo que contiene de 4 a 5 mL de caldo apropiado (Ej Caldo Tripticasa soya)
c Incubar el caldo a una temperatura entre 35degC a 37degC hasta que alcance o
exceda la turbidez del estaacutendar 05 de la escala de Mc Farland (por lo general de
2 a 6 horas)
d Ajustar la turbidez del inoacuteculo con solucioacuten salina o caldo apropiado hasta el
tubo 05 de la escala de Mc Farland por comparacioacuten visual con el estaacutendar Para
realizar este paso correctamente usar una luz apropiada y mirar los tubos contra
un fondo blanco con liacuteneas negras como contraste
e La suspensioacuten preparada contendraacute aproximadamente 1 a 2 x 108 UFCmL
Meacutetodo directo de inoculacioacuten a partir de colonias aisladas
a De una placa de cultivo con agar no selectivo e incubada por 18 - 24 h
seleccionar colonias aisladas y preparar una suspensioacutem directa en solucioacuten
salina oacute caldo
b La suspensioacuten debe ser inmediatamente ajustada a la escala 05 de Mc
Farland
Inoculacioacuten de las Placas
Dentro de los 15 minutos siguientes al ajuste de la turbidez del inoacuteculo sumergir
un hisopo esteacuteril en la suspensioacuten rotar el hisopo varias veces presionando
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firmemente sobre la pared interior del tubo por encima del nivel del liacutequido para
remover el exceso de inoacuteculo
Inocular la superficie seca de la placa de Mueller Hinton estriando con el hisopo
en tres direcciones para asegurar una distribucioacuten uniforme del inoacuteculo Antes de
colocar los discos dejar secar la placa a temperatura ambiente durante 3 a 5
minutos para que cualquier exceso de humedad superficial sea absorbido
APLICACIOacuteN DE LOS DISCOS
Colocar los discos individuales o multidiscos sobre la superficie del agar con la
ayuda de una pinza esteacuteril o la punta de una aguja presionando suavemente sobre
cada disco para asegurar un contacto completo con la superficie del agar
Distribuir los discos uniformemente de modo que esteacuten a una distancia miacutenima de
25 mm uno del otro (el diaacutemetro de los discos seguacuten las normas de la
Organizacioacuten Mundial de la Salud (OMS) debe ser de 6 mm) No deben colocarse
maacutes de 12 discos en una placa de 150 mm ni maacutes de 6 en una placa de 100 mm
de diaacutemetro interno para evitar la superposicioacuten de las zonas de inhibicioacuten Un
disco no debe ser removido una vez que tomoacute contacto con la superficie del agar
debido a que algunos antibioacuteticos se difunden raacutepidamente
INCUBACIOacuteN
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Incubar lar placas en posicioacuten invertida a 35degC por 18 a 24 horas dentro de los 15
minutos posteriores a la aplicacioacuten de los discos
Despueacutes del tiempo recomendado de incubacioacuten examinar cada placa y medir los
diaacutemetros de los halos de inhibicioacuten alrededor de cada disco
LECTURA DE LAS PLACAS E INTERPRETACIOacuteN DE LOS RESULTADOS
Medir los diaacutemetros de las zonas de inhibicioacuten completa (incluyendo el diaacutemetro
del disco) usando
una regla o calibrador Se debe mantener iluminada la parte posterior de la placa
petri con una luz reflejada localizada a unos cuantos centiacutemetros sobre un fondo
negro Tener la precaucioacuten de observar la placa siguiendo una vertical directa para
evitar una lectura erroacutenea de las marcas de la regla por efecto de paralelismo En
los medios suplementados con sangre las zonas son medidas en la parte superior
de la superficie del agar y retirando la tapa Tener cuidado de no medir la zona de
la hemoacutelisis sino la de inhibicioacuten del crecimiento
El punto final debe tomarse como el aacuterea que no muestra un crecimiento obvio
visible que puede ser detectado mediante observacioacuten visual no incluyendo velo
de crecimiento o colonias muy pequentildeas que puedan ser detectadas solo con
mucha dificultad en el borde de la zona Sin embargo las colonias mayores
creciendo dentro de la zona clara deberaacuten ser subcultivadas reidentificadas y
reensayadas Algunos Proteus spp debido a su gran movilidad pueden presentar
un velo de invasioacuten o ldquoswarmingrdquo dentro de las zonas de inhibicioacuten de algunos
antibioacuteticos En estos casos el velo del swarming debe ser ignorado al momento
de medir los halos de inhibicioacuten
DISCOS DE SENSIBILIDAD ANTIBIOacuteTICA A INCLUIR EN EL ANTIBIOGRAMA
Grupo I
Ampicilina
Cefalotina
Ampicilina Sulbactam o Amoxicilina Aacutecido Clavulaacutenico
Cefuroxima
Cefotaxima o Ceftriaxona
Gentamicina
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Amikacina
Aacutecido Nalidiacutexico(1)
Norfloxacina(1)
Ciprofloxacina
Cotrimoxazol (TrimetoprimSulfametoxazol)
Nitrofurantoiacutena(1)
Grupo II
Cefoxitina
Aztreonam
Ceftazidima
Cefixima
CefoperazonaSulbactam
Cefepime o Cefpirome
Imipenem o Meropenem
Cloramfenicol
Ofloxacina (1)
(1) Disco utilizado exclusivamente para infecciones de las viacuteas urinarias
Resistencias Naturales
Las enterobacterias son resistentes a Penicilina Oxacilina Macroacutelidos
Clindamicina y Glicopeacuteptidos
Klebsiella spp es resistente a las Aminopenicilinas
Citrobacter freundii Enterobacter cloacae y Enterobacter aerogenes son
resistentes a las Aminopenicilinas AminopenicilinasInhibidores de
betalactamasas Cefalosporinas de primera generacioacuten y Cefuroxima
Serratia marcescens es resistente a las Aminopenicilinas
AminopenicilinasInhibidores de betalactamasas Cefalosporinas de primera
generacioacuten y Cefoxitina
Proteus mirabilis es resistente a Nitrofurantoiacutena
Proteus vulgaris es resistente a las Aminopenicilinas Cefalosporinas de primera
generacioacuten Cefuroxima y Nitrofurantoiacutena
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Morganella morganii es resistente a las Aminopenicilinas
AminopenicilinasInhibidores de betalactamasas Cefalosporinas de primera
generacioacuten Cefuroxima y Nitrofurantoiacutena
Providentia stuartii es resistente a las Aminopenicilinas
AminopenicilinasInhibidores de betalactamasas Cefalosporinas de primera
generacioacuten Gentamicina (bajo nivel) y Nitrofurantoiacutena
ANTIBIOTICOS Y DIAMETROS CRITICOS PARA ENTEROBACTERIAS
E PRACTICA 7
EXAMEN QUIMICO DE CALCULO RENAL
EXAMEN FISICO
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Se debe pesar el caacutelculo y anotar el dato obtenido Medir dos de los diaacutemetros y
tomar nota del aspecto general textura y color y despueacutes de seccionado el
aspecto general la prominencia y el color de los distintos estratos
Se secciona el caacutelculo con una sierra Se raspan las caras con una aguja Se
procede lo mismo con el nuacutecleo Cada una de las muestras obtenidas se trituran
por separado en un mortero
PROCESO
Se coloca una porcioacuten del polvo del caacutelculo en un crisol y se calienta al fuego Si
no hay ennegrecimiento ni se altera el tamantildeo original el caacutelculo estaraacute formado
por sustancias inorgaacutenicas Si en cambio se carboniza desapareciendo estaraacute
formado por sustancias orgaacutenicas Si se funde y se ennegrece este caacutelculo estaacute
formado por sulfamidasa
Una vez obtenidos los datos pueden seleccionarse las reacciones necesarias
para confirmarlos
REACCIONES QUIMICAS
Solucioacuten A
10mg del polvo en matraz y antildeadir 50 ml de ClH 5 Observar si se
produce efervescencia Calentar en bantildeo de agua hirviendo por 10 a 15 minutos y
filtrar en caliente El filtrado se distribuye en 8 tubos numerados y se introduce un
trocito de papel tornasol en cada uno
Solucioacuten B
Agitar con Cl3CH unos 10 mg del polvo Reposar en tubo tapado a
temperatura ambiente hasta que el insoluble haya precipitado Decantar la
solucioacuten clorofoacutermica y guardar igual que el sedimento por separado
Carbonato efervescencia al agregar el CIH por desprendimiento de CO 2
Amonio al tubo 1 de la solucioacuten A se le agrega solucioacuten de OHNa 10 gota a
gota y agitando hasta que el papel tornasol vire
Agregar 1 ml de reactivo de Nessler Un color amarillo oscuro oporto indica
positividad de la reaccioacuten
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El NH 3 formado por los grupos NH 4 en medio alcalino reacciona con el yoiduro
doble del reactivo de Nesler para dar yoduro amoacutenico dimercuacuterico precipitado
pardo anaranjado
Acido uacuterico Neutralizar el contenido del tubo 2 como se explicoacute antes
Agregar igual volumen de CNN Na 2 y 05 ml de reactivo de Folin para aacutecido
uacuterico Un color azul intenso indica presencia de aacutecido uacuterico
El aacutecido uacuterico reduce al aacutecido fosfotuacutengstico en medio alcalino dando color azul
intenso de azul de tungsteno y a su vez se oxida a alantoiacutena
Reactivo fosfotuacutengstico (Folin y Denis) Antes del uso diluir al 10 en agua
destilada
Oxalato de calcio Neutralizar el contenido del tubo 3 Agregar CH 3 COOH 10
hasta reaccioacuten aacutecida al tornasol Precipitado blanco que no se redisuelve por
agitacioacuten indica presencia de oxalato de calcio
Calcio Neutralizar el tubo 4 Acidificar con CH 3 COOH glacial Agregar 2 ml C 2
O 4 ( NH 4 ) 4 Precipitado blancodenso indica presencia de Ca ++
Fosfato Neutralizar el tubo 5 Agregar 1 ml de solucioacuten de molibdato Mezclar
antildeadir 05 ml de aacutecido aminonaftol sulfoacutenico (ANS) 025 Coloracioacuten azul que
aparece en 5 minutos indica fosfatos
El color azul se debe a los oacutexidos reducidos de molibdeno
Reactivos
1 ClH concentrado2 Solucioacuten de OHK 203 NO 3 H concentrado4 Mo O 4 (NH 4 ) 2 disolver 25 g de la droga en 50 ml de SO 4 H 2 10 N y
diluir a 100 ml con H2 O destilada5 Amoniacuteaco
Reactivo ANS En matraz x 250 ml poner 05 g de aacutecido aminonaftolsulfoacutenico y
agrgar 195 ml de bisulfito de sodio 15 y 5 ml de sulfito de sodio 20 Mezclar
bien hasta disolucioacuten Si no se disuelve en media hora agregar maacutes sulfito y
agitar El reactivo dura unas 2 semanas
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Magnesio Neutralizar el tubo 7 con OHNH 4 y antildeadir 1 ml de solucioacuten alcohoacutelica
de p ndash Nitrobenceno azorresorcinol Un cromoacutegeno rojo indica presencia de
magnesio
En medio alcalino se forma (OH) 2 Mg El colorante azo resulta absorbido por el
(OH) 2 Mg en medio alcalino
Xantina A un tercio del residuo de la solucioacuten B agregarle gotas de NO 3 H
concentrado
Se disuelve el residuo sin desprender gas Evaporar a sequedad en bantildeo Mariacutea
hirviente quedando un residuo amarillo Dejar enfriar y humedecer con gotas de
OHNa 10 Una coloracioacuten anaranjada que vira al rojo oscuro al calentar indica
presencia de xantina
La reaccioacuten es la xantoproteica Migracioacuten de los anillos fenilo existentes en la
tirosina fenilalanina y triptoacutefano que da un color amarillo de los productos de
nitrosustitucioacuten para virar al anaranjado tras la adicioacuten de un aacutelcali ( formacioacuten de
la sal)
Nota El reactivo de molibdato se puede preparar asiacute
Solucioacuten 1 SO 4 H 2 01 N
Medir 450 ml de SO4 H 2 concentrado y agregarlos a 1300 ml de agua
destilada
Solucioacuten 2
A 250 ml de SO 4 H 2 01 N antildeadir la solucioacuten de molibdato y llevar con
agua destilada a 250 ml Mezclar
Sulfamidas Neutralizar el uacuteltimo tubo Antildeadir 1 ml de NO 2 Na 05 preparado
recientemente Agitar y reposar por 3 minutos Antildeadir 5 ml de solucioacuten alcohoacutelica
de dimetil-alfa naftilamina 025 Un color rojizo indica presencia de sulfamidas
Finalmente procede hacer mencioacuten de ciertos procedimientos fiacutesicos como la
microscopia de polarizacioacuten difraccioacuten de rayos X cristalografiacutea
espectrofotometriacutea de rayos infrarrojos etc que permiten actualmente un
conocimiento maacutes confiable de la estructura de los caacutelculos
- Reactivos
-
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E PRACTICA 3
DEPURACION DE CREATININACREATININA Generalidad
La creatinina es una sustancia que deriva del metabolismo muscular
(muacutesculo estriado liso y cardiacuteaco) de la creatina y representa el
subproducto de excrecioacuten La produccioacuten de creatinina es independiente
de la dieta y del ejercicio muscular sin embargo es proporcional dentro
de ciertos liacutemites a la masa muscular Se libera de los glomeacuterulos y no
es reabsorbida por los tuacutebulos de los cuales puede ser excretada
especialmente cuando se aumenta la concentracioacuten hemaacutetica El
aumento de la creatinina en el suero empieza a ser evidente cuando el
filtrado glomerular es por debajo de 60 ml por minuto
Indicaciones
La determinacioacuten de la cratinina es utilizada en el diagnoacutestico de las
enfermedades renales agudas o croacutenicas y tambieacuten para el monitoreo
de la diaacutelisis renal El aumento de la creatinina es un iacutendice de la
insuficiencia glomerular en cuanto eacutesta es eliminada por filtracioacuten
glomerular Mientras la uremia en la sangre puede ser controlada a
traveacutes de una oportuna dieta la creatinina se correlaciona casi
exclusivamente a la eficiencia de la filtracioacuten glomerular La creatinina
representa el iacutendice maacutes fiel de la insuficiencia renal
Preparacioacuten del paciente
Ayuno
Modalidad de la toma de muestra
Ninguna particularidad
Transporte
Transportar a temperatura ambiente
Conservacioacuten
Centrifugacioacuten y separacioacuten del suero la toma de muestra se puede
conservar por 1 diacutea a temperatura ambiente de 20-25oC 7 diacuteas 2-4oC y
6 meses en congelacioacuten
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Centrifugacioacuten
Poner el tubo de ensayo en la centriacutefuga de modo balanceado poner el
reloj 5 minutos y centrifugar por 3000 rpm Verificar la idoneidad del
suero o plasma ictericia presencia de coaacutegulos filamentos de fibrina
turbidez Sentildealar eventualmente en el resultado la no idoneidad de la
muestra
Metoacutedicas de determinacioacuten
Meacutetodo cineacutetico enzimaacutetico
El meacutetodo enzimaacutetico colorimeacutetrico consiste en la medida del color
desarrollado con el reactivo de Jaffe antes y despueacutes de una reaccioacuten
con la enzima especiacutefica la creatincinasa esta enzima transforma la
creatinina en creatina con medida final a 340 nm de la creatina
Meacutetodo colorimeacutetrico y procedimiento analiacutetico
Ademaacutes de la determinacioacuten de la creatinina con una teacutecnica de punto
final maacutes frecuentemente se utiliza una teacutecnica cineacutetica en la cual la
creatinina en medio alcalino reacciona con picrato produciendo un
complejo coloreado rojo-naranja la diferencia de absorcioacuten durante el
tiempo de conversioacuten es directamente proporcional a la concentracioacuten
de creatinina en la muestra
Creatinina + aacutecido piacutecrico mdashmdashmdashgt creatinina picrato (complejo)
Materiales
1048664 Guantes descartables no esteacuteriles
1048664 Tubos de ensayo 13 x 100 mm
1048664 Puntas de pipeta 10-100 ul
1048664 1048664 Puntas de pipeta 100-1000 ul
1048664 1048664 Centriacutefuga
1048664 Espectrofotoacutemetro
1048664 Bantildeo Mariacutea
1048664 Reloj marcador
1048664 Pipetas automaacuteticas 10-100 ul
1048664 Pipetas automaacuteticas 100-1000 ul
Laboratorio Cliacutenico PAULINA ARROLLO PEREacuteZ
Procedimiento
Seguir las instrucciones de la casa comercial
Control de Calidad
Se deberaacuten usar sueros control normal y patoloacutegico en las mismas
condiciones que las muestras
Notas sobre la metoacutedica
Linealidad
Es lineal hasta 250 mgdl
Sensibilidad
Su sensibilidad es 01 mgdl
Especificidad
La metoacutedica es especiacutefica para la creatinina
Las muestras de suero tienen proteiacutenas que pueden reaccionar no
especiacuteficamente con el meacutetodo Jaffe es necesario corregir el valor de
03 mgdl para lograr valores maacutes correctos
Interferencias
Las interferencias maacutes significativas son
Hemoacutelisis con Hb ge100 gl
Icteacuterico bilirrubina ge400 mgdl
Lipemia trigliceacuteridos ge20000 mgdl
Acetona ge500 mgdl
Algunos antibioacuteticos como las cefalosporinas pueden dar valores
falsamente elevados
Valor de referencia
Hombres Hasta 13 mgdl
Mujeres Hasta 11 mgdl
Neonatos o nintildeos Hasta 07 mgdl
Criterios de validacioacuten
Confrontar paraacutemetros de funcionalidad renal (urea potasio proteiacutenas
densidad urinaria)
Confrontar paraacutemetros de equilibrio electroliacuteticos (sodio potasio cloro)
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Controlar sexo y edad del paciente y tambieacuten eventual estado de
embarazo
Controlar paraacutemetros del metabolismo muscular (CPK miacuteoglobulina)
DEPURACION DE CREATININA
Generalidad
La cantidad de creatinina excretada con la orina estaacute en relacioacuten con la
filtracioacuten glomerular La creatinina es una sustancia que deriva del
metabolismo muscular (muacutesculo estriado liso y cardiacuteaco) de la creatina
y representa el subproducto de excrecioacuten La produccioacuten de creatinina
es independiente de la dieta y del ejercicio muscular sin embargo es
proporcional dentro de algunos liacutemites a la masa muscular Se libera
desde los glomeacuterulos y no es reabsorbida por los tuacutebulos de los cuales
puede ser excretada especialmente cuando se aumenta la
concentracioacuten hemaacutetica El aumento de la creatinina en el suero
empieza a ser evidente cuando el filtrado glomerular es por debajo de
60 ml por minuto
La medida de la cantidad de creatinina en la orina producida en un
determinado periacuteodo de tiempo simultaacuteneamente a la medida de la
concentracioacuten plasmaacutetica lleva al caacutelculo el aclaramiento de la
creatinina (volumen del plasma en ml que es depurado de la creatinina
en un minuto de tiempo)
C= U x VP (mlmin)
donde
C= aclaramiento
U= concentracioacuten de creatinina en la orina
V= volumen de la orina eliminada
P= concentracioacuten de creatinina en el plasma
Indicaciones
La estrecha correlacioacuten entre la velocidad de filtracioacuten glomerular y el
valor de la creatinina plasmaacutetica y el hecho que la concentracioacuten de la
creatinina hemaacutetica no es influenciada por la dieta hacen de la
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creatinina en particular el aclaramiento de la creatinina un iacutendice de
funcionalidad renal muy sensible y seguramente maacutes significativo que la
urea
El aclaramiento de la creatinina se modifica en relacioacuten con la
enfermedad renal (glomerulonefritis agudas o croacutenicas rintildeoacuten policiacutestico
obstruccioacuten de la viacutea renal)
Preparacioacuten del paciente
Ayuno
Modalidad de la toma de muestra
A) Recoger la orina de 24 horas con el siguiente procedimiento
Para la recoleccioacuten de orina de 24 horas se tiene que utilizar un frasco
de 25 30 litros de boca ancha con tapoacuten de rosca Antildeadir al frasco un
estabilizante si es necesario
Para la recogida de la orina se procede del modo siguiente
a) En el tiempo preestablecido vaciar la vejiga e eliminar toda la
orina
b) Posteriormente comenzar a recoger toda la orina de 24 horas
c) Al cumplir las 24 horas vaciar de nuevo la vejiga y depositar toda
la orina en el frasco Conservar las orinas a 2-4degC
Al finalizar la recoleccioacuten de orina eacutesta debe ser enviada
inmediatamente al laboratorio
B) Cuando se entrega la muestra de orina es necesario efectuar la toma
de muestra de sangre
Transporte
La muestra de orina debe ser transportada de 2-4degC la muestra de
sangre a temperatura ambiente
Conservacioacuten
Centrifugacioacuten y separacioacuten del suero la toma de muestra se puede
conservar por 1 diacutea a temperatura ambiente de 20-25oC 7 diacuteas 2-4oC y
6 meses en congelacioacuten
Conservar las orinas a 2-4degC
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Verificacioacuten de la muestra
Verificar que el registro de la toma de muestra esteacute correcto
Metoacutedica de determinacioacuten
Cu x Vmin
Aclaramiento de la creatinina = mdashmdashmdashmdashmdashmdashmdashmdashmdashmdashmdashmdash
Ps
donde
Cu= concentracioacuten de creatinina en la orina expresado en mgdl
Ps = concentracioacuten de creatinina en suero expresado en mgdl
Vmin= volumen por minuto (cantidad de la diuresis entre 1440)
Procedimiento analiacutetico
Ver metoacutedica de la creatinina
Notas sobre la metoacutedica
Linealidad
Referirse a las metoacutedicas de creatinina Es lineal hasta 250 mgdl
Sensibilidad
Referirse a las metoacutedicas de creatinina Su sensibilidad es 01 mgdl
Especificidad
Referirse a las metoacutedicas de creatinina
Las muestras de suero tienen proteiacutenas que pueden reaccionar no
especiacuteficamente con el
meacutetodo Jaffe Es necesario corregir el valor de 03 mgdl para lograr
valores maacutes correctos
Interferencias
Las interferencias significativas se deben
Para las orinas
Presencia de partiacuteculas en suspensioacuten (centrifugar las orinas)
Mala recoleccioacuten de orina
Presencia de bacterias de barbituacutericos de cuerpos cetoacutenicos
Para la sangre
Hemoacutelisis con Hb ge100 gl
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Icteacuterico bilirrubina ge400 mgdl
Lipemia trigliceacuteridos ge20000 mgdl
Acetona ge500 mgdl
Valor de referencia
ge70mlmin
PRACTICA 4
EXAMEN MICROSCOacutePICO DEL SEDIMENTO URINARIO
PROPOacuteSITO
Observar microscoacutepicamente en el sedimento urinario elementos celulares
cilindros cristales paraacutesitos filamentos mucoides y bacterias Con el fin
de sugerir una patologiacutea del tracto urinario u otras enfermedades que esteacuten
en diferente localizacioacuten
MUESTRA REQUERIDA
15 mL de orina
MATERIALES
- Tubos coacutenicos de 15 mL
- Laacuteminas portaobjetos
- Laminillas cubreobjetos
- Marcador para vidrio
- Gradillas para tubos
- Guantes descartables
EQUIPO
- Reloj marcador
- Centriacutefuga
- Microscopio
PROCEDIMIENTO
- Centrifugar durante 5 minutos a 2500 rpm
- Descartar el liacutequido sobrenadante
- Suspender el sedimento urinario golpeando ligeramente con la mano
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- Colocar una gota de sedimento entre un porta y un cubreobjeto
- Observar la preparacioacuten con el objetivo 10x para lograr una visioacuten general del
sedimento
- Identificar los elementos formes a mayor aumento 40x
- Anotar lo observado
FUENTES DE ERROR
- Usar portaobjetos y cubreobjetos sucios
- Desecacioacuten del sedimento urinario
-Tiempo transcurrido desde la toma de la muestra hasta la observacioacuten
microscoacutepica
- Uso excesivo de luz
- Centrifugacioacuten inadecuada
FORMA DE REPORTE
CEacuteLULAS EPITELIALES ESCAMOSAS Y REDONDAS reportar escasas
moderadas o abundantes
GLOacuteBULOS ROJOS Reportar el nuacutemero estimado por campo
LEUCOCITOS Reportar el nuacutemero estimado por campo
CILINDROS se pueden encontrar en la orina los siguientes cilindros
hialinos granulosos finos y gruesos leucocitarios hemaacuteticos grasos y ceacutereos
Reportar el nuacutemero de cilindros observados por campo
FILAMENTOS MUCOIDES reportar escasos moderados o abundantes
CRISTALES se pueden encontrar en la orina los siguientes cristales oxalatos de
calcio acido uacuterico uratos amorfos fosfatos amorfos fosfatos triples urato de
amonio leucina cistina y tirosina
Reportar en la forma siguiente escasos moderados o abundantes
LEVADURAS Reportar escasos moderada y abundantes
PARAacuteSITOS Se pueden encontrar en orina Trichomonas vaginalis Phitirus pubis
huevos y quistes de paraacutesitos por contaminacioacuten con heces
BACTERIAS Reportar la presencia de bacterias moderadas o abundantes
solamente cuando se observen maacutes de 10 leucocitos por campo
Valores de referencia
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CEacuteLULAS EPITELIALES ESCAMOSAS Escasas a moderadas
CEacuteLULAS EPITELIALES REDONDAS No deben observarse
GLOacuteBULOS ROJOS No deben observarse
LEUCOCITOS 0-5 por campo
CILINDROS No deben observarse
FILAMENTOS MUCOIDES No deben observarse
CRISTALES Podriacutean observarse oxalatos uratos y fosfatos amorfos de escasa a
moderada cantidad
LEVADURAS No deben observarse
PARAacuteSITOS No deben observarse
BACTERIAS Escasas o no presentes
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PRACTICA 6
UROCULTIVO Y ANTIBIOGRAMA
OBTENCIOacuteN DE MUESTRA DE ORINA PARA CULTIVO
Condiciones generales
La orina es un excelente medio de cultivo para la proliferacioacuten bacteriana por esta
razoacuten la muestra debe ser procesada dentro de las 2 horas despueacutes de haber
sido obtenida o debe refrigerarse a 4 degC (maacuteximo 24 horas) hasta su
procesamiento
Generalmente el desarrollo de dos o maacutes tipos de colonias (en pacientes sin
sonda vesical) indican que la muestra se ha contaminado por recoleccioacuten
incorrecta o demora en la siembra
OBTENCIOacuteN DE MUESTRA DE ORINA DEL CHORRO MEDIO
Obtencioacuten de muestras de orina en pacientes mujeres Materiales y equipos
a) Guantes de laacutetex esteacuteriles
b) Cinco o maacutes piezas de gasa esteacuteril de tamantildeo adecuado pudiendo
ser de 4rdquo x 4rdquo
c) Jaboacuten
d) Agua tibia esteacuteril
e) Frasco esteacuteril de boca ancha para la muestra de orina
Procedimiento
a) Mantener la privacidad de la paciente
b) Rotular el frasco con el nombre de la paciente fecha de obtencioacuten de la
muestra hora y el procedimiento usado para la obtencioacuten de la muestra
c) Lavarse las manos con jaboacuten y abundante agua
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d) Preparar una pieza de gasa para la limpieza de los genitales externos
humedicieacutendola con agua y una pequentildea cantidad de jaboacuten Preparar dos piezas
maacutes de gasa para el enjuague con agua tibia
e) Separar los labios mayores con dos dedos de una mano y limpiar el aacuterea
expuesta pasando la gasa de adelante hacia atraacutes
f) Descartar la gasa
g) Con otra gasa humedecida enjuagar el aacuterea de adelante hacia atraacutes Repetir el
procedimiento con otra gasa
h) Finalmente secar el aacuterea de adelante hacia atraacutes con un trozo de gasa seca
i) Mantener separados los labios mayores mientras la paciente empieza a orinar
Luego del chorro inicial colocar el frasco esteacuteril para colectar el chorro medio
j) Al terminar la recoleccioacuten tapar el frasco inmediatamente y limpiarle la
superficie
k) Transportar el frasco con la muestra de orina inmediatamente
Obtencioacuten de muestra de orina en pacientes varones
Materiales
a) Guantes de laacutetex
b) Cinco o maacutes piezas de gasa esteacuteril
c) Jaboacuten
d) Agua tibia esteacuteril
e) Frasco esteacuteril de boca ancha para la obtencioacuten de la muestra
Procedimiento
a) Mantener la privacidad del paciente
b) Rotular el frasco con el nombre del paciente fecha de obtencioacuten de la muestra
hora y el procedimiento usado para la obtencioacuten de la muestra
c) Lavarse las manos con jaboacuten y abundante agua
d) Preparar una pieza de gasa con agua y una pequentildea cantidad de jaboacuten
Preparar dos piezas maacutes de gasa para el enjuague con agua tibia
e) Realizar la higiene de los genitales Retraer el prepucio antes de lavar el glande
con la gasa humedecida con jaboacuten Descartar la gasa
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f) Enjuagar el glande usando una gasa huacutemeda Repetir el procedimiento con otra
gasa
g) Secar la zona usando uno o maacutes piezas de gasa seca
h) Indicar al paciente que mantenga el prepucio retirado e inicie la miccioacuten
directamente en un recipiente (orina para descartar)
i) Despueacutes del chorro inicial colocar el frasco esteacuteril para colectar la muestra del
chorro medio
j) Obtenida la muestra tapar el frasco inmediatamente y limpiarle la superficie
k) Transportar el frasco con la muestra de orina inmediatamente al laboratorio
SIEMBRA PRIMARIA DE MUESTRA DE ORINA
Objetivo
Describir el procedimiento para la siembra primaria de muestra de orina
Campo de aplicacioacuten
Se aplica para el cultivo de muestra de orina en el diagnoacutestico bacterioloacutegico de
infecciones del tracto urinario
Materiales y equipos
a) Asa calibrada de platino o descartable de 0001 mL oacute 001 mL
b) Estufa de 35 ndash 37 degC
c) Mechero Bunsen o cabina de flujo laminar
d) Guantes de laacutetex
e) Contenedor de material contaminado
f) Pinza esteacuteril
g) Propipeta o pipetor automaacutetico
h) Medios de cultivo
ndash Placas con agar sangre de carnero (AS)
ndash Placas con agar Mc Conkey (McC)
Procedimiento
a) Mantener las muestras en refrigeracioacuten (4 degC) hasta su procesamiento por
cultivo
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b) Los cultivos deben realizarse en una cabina de bioseguridad o cerca del
mechero Bunsen
c) Las placas con AS y McC que se utilizaraacuten en el urocultivo deben estar a
temperatura ambiente Rotular las placas
d) Si el asa calibrada no es descartable esterilizar el asa de siembra flameacuteandola
en el mechero Bunsen hasta que se ponga rojo vivo Dejar enfriar el asa
e) Tomar el frasco con la muestra de orina abrir la tapa y flamear la boca del
frasco en el mechero Bunsen
f) Tomar la muestra de orina con el asa de siembra esteacuteril introducieacutendola y
sacaacutendola del frasco en forma vertical Tapar el frasco con la muestra
g) Inocular en el centro de la placa con AS a partir del cual se extiende la muestra
hacia delante y hacia atraacutes
h) Luego sin quemar el asa el inoacuteculo se disemina uniformemente con trazos
perpendiculares a la siembra inicial en toda la placa
i) Proceder de la misma forma para el agar Mc Conkey
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Lectura
a) Realizar la evaluacioacuten a las 24 horas si no hay crecimiento bacteriano dejar
incubar hasta las 48 horas
b) La evaluacioacuten consiste en realizar el recuento de colonias cuyo resultado se
multiplica por el factor de dilucioacuten para obtener las UFC por mL
Interpretacioacuten
a) En pacientes sin sonda vesical la cuenta significativa de bacterias en orina es
la presencia de maacutes de 105 UFC mL de un solo germen
b) Los recuentos intermedios (103 ndash 104 UFCmL) indican infeccioacuten si el
procedimiento de recoleccioacuten de orina fue realizado correctamente
c) Generalmente el aislamiento de tres o maacutes especies bacterianas indican que la
muestra se ha contaminado por recoleccioacuten inadecuada o demora en la siembra
d) En pacientes con sonda vesical cuentas bacterianas menores de 105 UFCmL
pueden tener significado asiacute tambieacuten se pueden encontrar bacteriurias
polimicrobianas hasta en casi 15 de enfermos
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e) En pacientes sin cateacuteter se puede comprobar si el procedimiento de obtencioacuten
de muestra fue realizado correctamente observando la frecuencia con la cual se
informan recuentos de colonias intermedias entre 103 ndash 104 UFCmL En
pacientes sin infecciones del tracto urinario el recuento es nulo o se reduce a
pocas colonias
IDENTIFICACION BACTERIANA
Lectura de cultivos en agar Mac Conkey
ndash En agar Mc Conkey Escherichia coli lactosa positiva forma colonias de borde
entero de color fucsia opacas de 2 mm ndash 3 mm de diaacutemetro usualmente
rodeadas de una zona opaca alrededor de la colonia (bilis precipitada) Las cepas
de E coli que son lactosa negativa dan colonias incoloras de 3 ndash 4 mm
ndash En agar Mc Conkey K pneumoniae forma colonias de borde entero de color
rosado a rosado oscuro de 3 ndash 4 mm de diaacutemetro y aspecto mucoide
ndash En agar Mc Conkey Enterobacter spp forma colonias de borde entero de color
rosado de 2 ndash 4 mm de diaacutemetro no tan mucoides como K pneumoniae
Las colonias con estas caracteriacutesticas son subcultivadas en medios diferenciales
PRUEBAS BIOQUIMICAS
TSI
Lectura
Es importante hacer la lectura entre las 18 ndash 24 horas para no obtener resultados
erroacuteneos La lectura se hace sobre la base de tres caracteriacutesticas Utilizacioacuten de
hidratos de carbono produccioacuten de gas y produccioacuten de aacutecido sulfhiacutedrico
Utilizacioacuten de hidratos de carbono
ndash Utilizacioacuten de lactosa Reaccioacuten aacutecida en el pico de flauta (color amarillo)
Abreviatura (A)
ndash Utilizacioacuten de glucosa Reaccioacuten aacutecida en la columna del medio (color amarillo)
Abreviatura (A)
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ndash No hay utilizacioacuten del carbohidrato Se puede observar una reaccioacuten alcalina
(color rojo) o que no hay cambio de color (permanece del mismo color que el
medio no inoculado) Abreviaturas (K) o (N) respectivamente
Nota Cuando el microorganismo tambieacuten produce H2S el precipitado negro
puede ocultar la acidez
Produccioacuten de gas de glucosa
ndash Se considera positivo Presencia de una sola burbuja de gas burbujas en el
medio divisioacuten del medio desplazamiento completo del medio del fondo del tubo
dejando un aacuterea clara o una ligera muesca del medio en el costado del tubo
ndash Se registra la lectura por medio de cruces (+)
Produccioacuten de aacutecido sulfhiacutedrico
ndash Se manifiesta por un color negro distribuido por toda la columna del medio de
cultivo o soacutelo en la parte superior
ndash Se registra la lectura por medio de cruces (+)
Resultados
Ejemplo de simbolizacioacuten e interpretacioacuten
KA ndash+ Significa alcalinidad en la inclinacioacuten y acidez en el fondo (fermentacioacuten de
glucosa) gas negativo y H2S positivo
NN ndash ndashSignifica que no hay utilizacioacuten de la lactosa y glucosa ni produccioacuten de
H2S
AGAR LISINA HIERRO
En este medio se determina simultaacuteneamente la produccioacuten de lisina
descarboxilasa y de la formacioacuten de aacutecido sulfhiacutedrico
Lectura
Es importante hacer la lectura entre las 18 ndash 24 horas si la lectura se realiza antes
podemos obtener resultados falsos positivos asiacute como falsos negativos si se lee
despueacutes de las 24 horas Realizar la lectura en la columna y en la superficie
inclinada y observar la formacioacuten de aacutecido sulfhiacutedrico el cual se evidencia por una
coloracioacuten negra
Nota Generalmente las cepas del grupo Proteus y Providencia desaminan la
lisina a aacutecido ndashcetocarboacutenico Este uacuteltimo forma compuestos pardo-rojizos en la
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regioacuten superficial del medio de cultivo con la sal de hierro y bajo la influencia del
oxiacutegeno
Recomendaciones
No incubar maacutes del tiempo necesario para no ocasionar una alcalinizacioacuten en la
superficie del medio y por lo tanto producir un viraje hacia el violeta
UTILIZACIOacuteN DE CITRATO
Para determinar si un microorganismo es capaz de utilizar citrato como uacutenica
fuente de carbono para su metabolismo
Procedimiento
a) Incubar a 35ndash37 degC de 24 horasndash 48 horas En algunos casos es necesario una
incubacioacuten hasta por 4 diacuteas
b) Ver el viraje de color
Resultados
a) Prueba positiva Crecimiento con un color azul intenso en el pico de flauta o
presencia de colonias en ausencia del color azul
b) Prueba negativa No se observa crecimiento ni cambio de color (verde)
Controles
Positivo Enterobacter cloacae
Negativo Escherichia coli
HIDROacuteLISIS DE LA UREA (PRODUCCIOacuteN DE UREASA)
Es uacutetil para determinar la capacidad de un organismo de degradar la urea
formando dos moleacuteculas de amoniaco por accioacuten de la enzima ureasa
Procedimiento
Realizar la lectura despueacutes de 18 horas ndash 24 horas de incubacioacuten observando el
viraje de color
Resultados
Prueba positiva Color rosado intenso en el pico de flauta o todo el agar
Puede haber una reaccioacuten positiva retardada despueacutes de 24 horas y hasta
6 diacuteas de incubacioacuten (algunas cepas de Klebsiella por ejemplo)
Prueba negativa No se produce cambio de color
Controles
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Negativo Escherichia coli
Positivo Klebsiella pneumoniae
MOTILIDAD (MEDIOS SIM O MIO O AGAR MOVILIDAD)
Para determinar si un organismo es moacutevil o inmoacutevil
Procedimiento
Incubar a 35 ndash 37 degC de 24 a 48 horas
Resultados
Positivo Los microorganismos migran de la liacutenea de siembra y se difunden en el
medio provocando turbidez Tambieacuten puede manifestarse semejando
ldquovellosidadesrdquo a lo largo del trazo de siembra
Negativo Se observa un crecimiento bacteriano acentuado siguiendo el trazo de
siembra y el medio circundante se mantiene claro
Controles
Control positivo Escherichia coli
Control negativo Klebsiella pneumoniae
h) Prueba de indol[6]
Es uacutetil para determinar la capacidad de un microorganismo de producir indol a
partir del aminoaacutecido triptoacutefano
Medios y reactivos
Caldo de triptoacutefano o de peptona o caldo de triptona
Reactivo de indol de Kovacs
Procedimiento
Retirar aseacutepticamente 2 mL de caldo de cutivo con 24 horas de incubacioacuten
Agregar 5 gotas de reactivo de Kovacs
Mover suavemente el tubo y realizar la lectura
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ANTIBIOGRAMA
Preparacioacuten del Agar Mueller Hinton
Preparar el medio a partir de la base deshidratada de acuerdo a las
indicaciones del fabricante
Autoclavar y dejar enfriar en bantildeo de agua hasta que alcance los 45degC - 50degC
Repartir el medio en placas petri (60 ml ndash 70 ml o 25 ml ndash 30 ml para placas de
150 mm o 100 mm de diaacutemetro interno respectivamente) de manera que el
grosor del agar en la placa sea de 4 mm
Realizar las pruebas de esterilidad para cada lote de Mueller Hinton incubando
una o dos placas de cada lote a 30degC ndash 35degC durante 24 horas o maacutes Estas
placas utilizadas deben ser luego descartadas
Preparacioacuten del estaacutendar (05 Mc Farland) para el inoacuteculo
Para estandarizar la densidad del inoacuteculo se usa una suspensioacuten de sulfato de
bario (05 de la escala de Mac Farland) como estaacutendar
Preparacioacuten del estaacutendar de turbidez
a Agregar 05 ml de una solucioacuten de BaCl2 0048 M (BaCl22H2O al 1175 PV)
a 995 mL de una solucioacuten de H2SO4 018 M (036 N) (1 VV) en constante
movimiento para mantener la suspensioacuten
b Verificar la densidad correcta del estaacutendar usando un fotocoloriacutemetro oacute
espectrofotoacutemetro cuya absorbancia a 625 nm es 008 a 010 para el estaacutendar 05
de Mc Farland
c Distribuir de 4 ml a 6 ml en tubos con tapa de rosca o tapoacuten de jebe similares a
los que se usaraacuten para preparar el inoacuteculo
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d Ajustar bien las tapas o tapones y conservarlos en la oscuridad a temperatura
ambiente y anotar la fecha de preparacioacuten
e Antes de ser usado agitar vigorosamente dicho estaacutendar de preferencia en un
agitador mecaacutenico
f Verificar mensualmente la densidad de los estaacutendares de sulfato de bario y
reemplazarlo cuando sea necesario
INOCULACIOacuteN
Preparacioacuten del inoacuteculo
Puede realizarse de dos formas
Meacutetodo de desarrollo previo
a Seleccionar cuatro a cinco colonias bien aisladas del mismo tipo morfoloacutegico
de un cultivo en placa
b Tocar la superficie de cada colonia con una asa de siembra y transferirlo a un
tubo que contiene de 4 a 5 mL de caldo apropiado (Ej Caldo Tripticasa soya)
c Incubar el caldo a una temperatura entre 35degC a 37degC hasta que alcance o
exceda la turbidez del estaacutendar 05 de la escala de Mc Farland (por lo general de
2 a 6 horas)
d Ajustar la turbidez del inoacuteculo con solucioacuten salina o caldo apropiado hasta el
tubo 05 de la escala de Mc Farland por comparacioacuten visual con el estaacutendar Para
realizar este paso correctamente usar una luz apropiada y mirar los tubos contra
un fondo blanco con liacuteneas negras como contraste
e La suspensioacuten preparada contendraacute aproximadamente 1 a 2 x 108 UFCmL
Meacutetodo directo de inoculacioacuten a partir de colonias aisladas
a De una placa de cultivo con agar no selectivo e incubada por 18 - 24 h
seleccionar colonias aisladas y preparar una suspensioacutem directa en solucioacuten
salina oacute caldo
b La suspensioacuten debe ser inmediatamente ajustada a la escala 05 de Mc
Farland
Inoculacioacuten de las Placas
Dentro de los 15 minutos siguientes al ajuste de la turbidez del inoacuteculo sumergir
un hisopo esteacuteril en la suspensioacuten rotar el hisopo varias veces presionando
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firmemente sobre la pared interior del tubo por encima del nivel del liacutequido para
remover el exceso de inoacuteculo
Inocular la superficie seca de la placa de Mueller Hinton estriando con el hisopo
en tres direcciones para asegurar una distribucioacuten uniforme del inoacuteculo Antes de
colocar los discos dejar secar la placa a temperatura ambiente durante 3 a 5
minutos para que cualquier exceso de humedad superficial sea absorbido
APLICACIOacuteN DE LOS DISCOS
Colocar los discos individuales o multidiscos sobre la superficie del agar con la
ayuda de una pinza esteacuteril o la punta de una aguja presionando suavemente sobre
cada disco para asegurar un contacto completo con la superficie del agar
Distribuir los discos uniformemente de modo que esteacuten a una distancia miacutenima de
25 mm uno del otro (el diaacutemetro de los discos seguacuten las normas de la
Organizacioacuten Mundial de la Salud (OMS) debe ser de 6 mm) No deben colocarse
maacutes de 12 discos en una placa de 150 mm ni maacutes de 6 en una placa de 100 mm
de diaacutemetro interno para evitar la superposicioacuten de las zonas de inhibicioacuten Un
disco no debe ser removido una vez que tomoacute contacto con la superficie del agar
debido a que algunos antibioacuteticos se difunden raacutepidamente
INCUBACIOacuteN
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Incubar lar placas en posicioacuten invertida a 35degC por 18 a 24 horas dentro de los 15
minutos posteriores a la aplicacioacuten de los discos
Despueacutes del tiempo recomendado de incubacioacuten examinar cada placa y medir los
diaacutemetros de los halos de inhibicioacuten alrededor de cada disco
LECTURA DE LAS PLACAS E INTERPRETACIOacuteN DE LOS RESULTADOS
Medir los diaacutemetros de las zonas de inhibicioacuten completa (incluyendo el diaacutemetro
del disco) usando
una regla o calibrador Se debe mantener iluminada la parte posterior de la placa
petri con una luz reflejada localizada a unos cuantos centiacutemetros sobre un fondo
negro Tener la precaucioacuten de observar la placa siguiendo una vertical directa para
evitar una lectura erroacutenea de las marcas de la regla por efecto de paralelismo En
los medios suplementados con sangre las zonas son medidas en la parte superior
de la superficie del agar y retirando la tapa Tener cuidado de no medir la zona de
la hemoacutelisis sino la de inhibicioacuten del crecimiento
El punto final debe tomarse como el aacuterea que no muestra un crecimiento obvio
visible que puede ser detectado mediante observacioacuten visual no incluyendo velo
de crecimiento o colonias muy pequentildeas que puedan ser detectadas solo con
mucha dificultad en el borde de la zona Sin embargo las colonias mayores
creciendo dentro de la zona clara deberaacuten ser subcultivadas reidentificadas y
reensayadas Algunos Proteus spp debido a su gran movilidad pueden presentar
un velo de invasioacuten o ldquoswarmingrdquo dentro de las zonas de inhibicioacuten de algunos
antibioacuteticos En estos casos el velo del swarming debe ser ignorado al momento
de medir los halos de inhibicioacuten
DISCOS DE SENSIBILIDAD ANTIBIOacuteTICA A INCLUIR EN EL ANTIBIOGRAMA
Grupo I
Ampicilina
Cefalotina
Ampicilina Sulbactam o Amoxicilina Aacutecido Clavulaacutenico
Cefuroxima
Cefotaxima o Ceftriaxona
Gentamicina
Laboratorio Cliacutenico PAULINA ARROLLO PEREacuteZ
Amikacina
Aacutecido Nalidiacutexico(1)
Norfloxacina(1)
Ciprofloxacina
Cotrimoxazol (TrimetoprimSulfametoxazol)
Nitrofurantoiacutena(1)
Grupo II
Cefoxitina
Aztreonam
Ceftazidima
Cefixima
CefoperazonaSulbactam
Cefepime o Cefpirome
Imipenem o Meropenem
Cloramfenicol
Ofloxacina (1)
(1) Disco utilizado exclusivamente para infecciones de las viacuteas urinarias
Resistencias Naturales
Las enterobacterias son resistentes a Penicilina Oxacilina Macroacutelidos
Clindamicina y Glicopeacuteptidos
Klebsiella spp es resistente a las Aminopenicilinas
Citrobacter freundii Enterobacter cloacae y Enterobacter aerogenes son
resistentes a las Aminopenicilinas AminopenicilinasInhibidores de
betalactamasas Cefalosporinas de primera generacioacuten y Cefuroxima
Serratia marcescens es resistente a las Aminopenicilinas
AminopenicilinasInhibidores de betalactamasas Cefalosporinas de primera
generacioacuten y Cefoxitina
Proteus mirabilis es resistente a Nitrofurantoiacutena
Proteus vulgaris es resistente a las Aminopenicilinas Cefalosporinas de primera
generacioacuten Cefuroxima y Nitrofurantoiacutena
Laboratorio Cliacutenico PAULINA ARROLLO PEREacuteZ
Morganella morganii es resistente a las Aminopenicilinas
AminopenicilinasInhibidores de betalactamasas Cefalosporinas de primera
generacioacuten Cefuroxima y Nitrofurantoiacutena
Providentia stuartii es resistente a las Aminopenicilinas
AminopenicilinasInhibidores de betalactamasas Cefalosporinas de primera
generacioacuten Gentamicina (bajo nivel) y Nitrofurantoiacutena
ANTIBIOTICOS Y DIAMETROS CRITICOS PARA ENTEROBACTERIAS
E PRACTICA 7
EXAMEN QUIMICO DE CALCULO RENAL
EXAMEN FISICO
Laboratorio Cliacutenico PAULINA ARROLLO PEREacuteZ
Se debe pesar el caacutelculo y anotar el dato obtenido Medir dos de los diaacutemetros y
tomar nota del aspecto general textura y color y despueacutes de seccionado el
aspecto general la prominencia y el color de los distintos estratos
Se secciona el caacutelculo con una sierra Se raspan las caras con una aguja Se
procede lo mismo con el nuacutecleo Cada una de las muestras obtenidas se trituran
por separado en un mortero
PROCESO
Se coloca una porcioacuten del polvo del caacutelculo en un crisol y se calienta al fuego Si
no hay ennegrecimiento ni se altera el tamantildeo original el caacutelculo estaraacute formado
por sustancias inorgaacutenicas Si en cambio se carboniza desapareciendo estaraacute
formado por sustancias orgaacutenicas Si se funde y se ennegrece este caacutelculo estaacute
formado por sulfamidasa
Una vez obtenidos los datos pueden seleccionarse las reacciones necesarias
para confirmarlos
REACCIONES QUIMICAS
Solucioacuten A
10mg del polvo en matraz y antildeadir 50 ml de ClH 5 Observar si se
produce efervescencia Calentar en bantildeo de agua hirviendo por 10 a 15 minutos y
filtrar en caliente El filtrado se distribuye en 8 tubos numerados y se introduce un
trocito de papel tornasol en cada uno
Solucioacuten B
Agitar con Cl3CH unos 10 mg del polvo Reposar en tubo tapado a
temperatura ambiente hasta que el insoluble haya precipitado Decantar la
solucioacuten clorofoacutermica y guardar igual que el sedimento por separado
Carbonato efervescencia al agregar el CIH por desprendimiento de CO 2
Amonio al tubo 1 de la solucioacuten A se le agrega solucioacuten de OHNa 10 gota a
gota y agitando hasta que el papel tornasol vire
Agregar 1 ml de reactivo de Nessler Un color amarillo oscuro oporto indica
positividad de la reaccioacuten
Laboratorio Cliacutenico PAULINA ARROLLO PEREacuteZ
El NH 3 formado por los grupos NH 4 en medio alcalino reacciona con el yoiduro
doble del reactivo de Nesler para dar yoduro amoacutenico dimercuacuterico precipitado
pardo anaranjado
Acido uacuterico Neutralizar el contenido del tubo 2 como se explicoacute antes
Agregar igual volumen de CNN Na 2 y 05 ml de reactivo de Folin para aacutecido
uacuterico Un color azul intenso indica presencia de aacutecido uacuterico
El aacutecido uacuterico reduce al aacutecido fosfotuacutengstico en medio alcalino dando color azul
intenso de azul de tungsteno y a su vez se oxida a alantoiacutena
Reactivo fosfotuacutengstico (Folin y Denis) Antes del uso diluir al 10 en agua
destilada
Oxalato de calcio Neutralizar el contenido del tubo 3 Agregar CH 3 COOH 10
hasta reaccioacuten aacutecida al tornasol Precipitado blanco que no se redisuelve por
agitacioacuten indica presencia de oxalato de calcio
Calcio Neutralizar el tubo 4 Acidificar con CH 3 COOH glacial Agregar 2 ml C 2
O 4 ( NH 4 ) 4 Precipitado blancodenso indica presencia de Ca ++
Fosfato Neutralizar el tubo 5 Agregar 1 ml de solucioacuten de molibdato Mezclar
antildeadir 05 ml de aacutecido aminonaftol sulfoacutenico (ANS) 025 Coloracioacuten azul que
aparece en 5 minutos indica fosfatos
El color azul se debe a los oacutexidos reducidos de molibdeno
Reactivos
1 ClH concentrado2 Solucioacuten de OHK 203 NO 3 H concentrado4 Mo O 4 (NH 4 ) 2 disolver 25 g de la droga en 50 ml de SO 4 H 2 10 N y
diluir a 100 ml con H2 O destilada5 Amoniacuteaco
Reactivo ANS En matraz x 250 ml poner 05 g de aacutecido aminonaftolsulfoacutenico y
agrgar 195 ml de bisulfito de sodio 15 y 5 ml de sulfito de sodio 20 Mezclar
bien hasta disolucioacuten Si no se disuelve en media hora agregar maacutes sulfito y
agitar El reactivo dura unas 2 semanas
Laboratorio Cliacutenico PAULINA ARROLLO PEREacuteZ
Magnesio Neutralizar el tubo 7 con OHNH 4 y antildeadir 1 ml de solucioacuten alcohoacutelica
de p ndash Nitrobenceno azorresorcinol Un cromoacutegeno rojo indica presencia de
magnesio
En medio alcalino se forma (OH) 2 Mg El colorante azo resulta absorbido por el
(OH) 2 Mg en medio alcalino
Xantina A un tercio del residuo de la solucioacuten B agregarle gotas de NO 3 H
concentrado
Se disuelve el residuo sin desprender gas Evaporar a sequedad en bantildeo Mariacutea
hirviente quedando un residuo amarillo Dejar enfriar y humedecer con gotas de
OHNa 10 Una coloracioacuten anaranjada que vira al rojo oscuro al calentar indica
presencia de xantina
La reaccioacuten es la xantoproteica Migracioacuten de los anillos fenilo existentes en la
tirosina fenilalanina y triptoacutefano que da un color amarillo de los productos de
nitrosustitucioacuten para virar al anaranjado tras la adicioacuten de un aacutelcali ( formacioacuten de
la sal)
Nota El reactivo de molibdato se puede preparar asiacute
Solucioacuten 1 SO 4 H 2 01 N
Medir 450 ml de SO4 H 2 concentrado y agregarlos a 1300 ml de agua
destilada
Solucioacuten 2
A 250 ml de SO 4 H 2 01 N antildeadir la solucioacuten de molibdato y llevar con
agua destilada a 250 ml Mezclar
Sulfamidas Neutralizar el uacuteltimo tubo Antildeadir 1 ml de NO 2 Na 05 preparado
recientemente Agitar y reposar por 3 minutos Antildeadir 5 ml de solucioacuten alcohoacutelica
de dimetil-alfa naftilamina 025 Un color rojizo indica presencia de sulfamidas
Finalmente procede hacer mencioacuten de ciertos procedimientos fiacutesicos como la
microscopia de polarizacioacuten difraccioacuten de rayos X cristalografiacutea
espectrofotometriacutea de rayos infrarrojos etc que permiten actualmente un
conocimiento maacutes confiable de la estructura de los caacutelculos
- Reactivos
-
Laboratorio Cliacutenico PAULINA ARROLLO PEREacuteZ
Centrifugacioacuten
Poner el tubo de ensayo en la centriacutefuga de modo balanceado poner el
reloj 5 minutos y centrifugar por 3000 rpm Verificar la idoneidad del
suero o plasma ictericia presencia de coaacutegulos filamentos de fibrina
turbidez Sentildealar eventualmente en el resultado la no idoneidad de la
muestra
Metoacutedicas de determinacioacuten
Meacutetodo cineacutetico enzimaacutetico
El meacutetodo enzimaacutetico colorimeacutetrico consiste en la medida del color
desarrollado con el reactivo de Jaffe antes y despueacutes de una reaccioacuten
con la enzima especiacutefica la creatincinasa esta enzima transforma la
creatinina en creatina con medida final a 340 nm de la creatina
Meacutetodo colorimeacutetrico y procedimiento analiacutetico
Ademaacutes de la determinacioacuten de la creatinina con una teacutecnica de punto
final maacutes frecuentemente se utiliza una teacutecnica cineacutetica en la cual la
creatinina en medio alcalino reacciona con picrato produciendo un
complejo coloreado rojo-naranja la diferencia de absorcioacuten durante el
tiempo de conversioacuten es directamente proporcional a la concentracioacuten
de creatinina en la muestra
Creatinina + aacutecido piacutecrico mdashmdashmdashgt creatinina picrato (complejo)
Materiales
1048664 Guantes descartables no esteacuteriles
1048664 Tubos de ensayo 13 x 100 mm
1048664 Puntas de pipeta 10-100 ul
1048664 1048664 Puntas de pipeta 100-1000 ul
1048664 1048664 Centriacutefuga
1048664 Espectrofotoacutemetro
1048664 Bantildeo Mariacutea
1048664 Reloj marcador
1048664 Pipetas automaacuteticas 10-100 ul
1048664 Pipetas automaacuteticas 100-1000 ul
Laboratorio Cliacutenico PAULINA ARROLLO PEREacuteZ
Procedimiento
Seguir las instrucciones de la casa comercial
Control de Calidad
Se deberaacuten usar sueros control normal y patoloacutegico en las mismas
condiciones que las muestras
Notas sobre la metoacutedica
Linealidad
Es lineal hasta 250 mgdl
Sensibilidad
Su sensibilidad es 01 mgdl
Especificidad
La metoacutedica es especiacutefica para la creatinina
Las muestras de suero tienen proteiacutenas que pueden reaccionar no
especiacuteficamente con el meacutetodo Jaffe es necesario corregir el valor de
03 mgdl para lograr valores maacutes correctos
Interferencias
Las interferencias maacutes significativas son
Hemoacutelisis con Hb ge100 gl
Icteacuterico bilirrubina ge400 mgdl
Lipemia trigliceacuteridos ge20000 mgdl
Acetona ge500 mgdl
Algunos antibioacuteticos como las cefalosporinas pueden dar valores
falsamente elevados
Valor de referencia
Hombres Hasta 13 mgdl
Mujeres Hasta 11 mgdl
Neonatos o nintildeos Hasta 07 mgdl
Criterios de validacioacuten
Confrontar paraacutemetros de funcionalidad renal (urea potasio proteiacutenas
densidad urinaria)
Confrontar paraacutemetros de equilibrio electroliacuteticos (sodio potasio cloro)
Laboratorio Cliacutenico PAULINA ARROLLO PEREacuteZ
Controlar sexo y edad del paciente y tambieacuten eventual estado de
embarazo
Controlar paraacutemetros del metabolismo muscular (CPK miacuteoglobulina)
DEPURACION DE CREATININA
Generalidad
La cantidad de creatinina excretada con la orina estaacute en relacioacuten con la
filtracioacuten glomerular La creatinina es una sustancia que deriva del
metabolismo muscular (muacutesculo estriado liso y cardiacuteaco) de la creatina
y representa el subproducto de excrecioacuten La produccioacuten de creatinina
es independiente de la dieta y del ejercicio muscular sin embargo es
proporcional dentro de algunos liacutemites a la masa muscular Se libera
desde los glomeacuterulos y no es reabsorbida por los tuacutebulos de los cuales
puede ser excretada especialmente cuando se aumenta la
concentracioacuten hemaacutetica El aumento de la creatinina en el suero
empieza a ser evidente cuando el filtrado glomerular es por debajo de
60 ml por minuto
La medida de la cantidad de creatinina en la orina producida en un
determinado periacuteodo de tiempo simultaacuteneamente a la medida de la
concentracioacuten plasmaacutetica lleva al caacutelculo el aclaramiento de la
creatinina (volumen del plasma en ml que es depurado de la creatinina
en un minuto de tiempo)
C= U x VP (mlmin)
donde
C= aclaramiento
U= concentracioacuten de creatinina en la orina
V= volumen de la orina eliminada
P= concentracioacuten de creatinina en el plasma
Indicaciones
La estrecha correlacioacuten entre la velocidad de filtracioacuten glomerular y el
valor de la creatinina plasmaacutetica y el hecho que la concentracioacuten de la
creatinina hemaacutetica no es influenciada por la dieta hacen de la
Laboratorio Cliacutenico PAULINA ARROLLO PEREacuteZ
creatinina en particular el aclaramiento de la creatinina un iacutendice de
funcionalidad renal muy sensible y seguramente maacutes significativo que la
urea
El aclaramiento de la creatinina se modifica en relacioacuten con la
enfermedad renal (glomerulonefritis agudas o croacutenicas rintildeoacuten policiacutestico
obstruccioacuten de la viacutea renal)
Preparacioacuten del paciente
Ayuno
Modalidad de la toma de muestra
A) Recoger la orina de 24 horas con el siguiente procedimiento
Para la recoleccioacuten de orina de 24 horas se tiene que utilizar un frasco
de 25 30 litros de boca ancha con tapoacuten de rosca Antildeadir al frasco un
estabilizante si es necesario
Para la recogida de la orina se procede del modo siguiente
a) En el tiempo preestablecido vaciar la vejiga e eliminar toda la
orina
b) Posteriormente comenzar a recoger toda la orina de 24 horas
c) Al cumplir las 24 horas vaciar de nuevo la vejiga y depositar toda
la orina en el frasco Conservar las orinas a 2-4degC
Al finalizar la recoleccioacuten de orina eacutesta debe ser enviada
inmediatamente al laboratorio
B) Cuando se entrega la muestra de orina es necesario efectuar la toma
de muestra de sangre
Transporte
La muestra de orina debe ser transportada de 2-4degC la muestra de
sangre a temperatura ambiente
Conservacioacuten
Centrifugacioacuten y separacioacuten del suero la toma de muestra se puede
conservar por 1 diacutea a temperatura ambiente de 20-25oC 7 diacuteas 2-4oC y
6 meses en congelacioacuten
Conservar las orinas a 2-4degC
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Verificacioacuten de la muestra
Verificar que el registro de la toma de muestra esteacute correcto
Metoacutedica de determinacioacuten
Cu x Vmin
Aclaramiento de la creatinina = mdashmdashmdashmdashmdashmdashmdashmdashmdashmdashmdashmdash
Ps
donde
Cu= concentracioacuten de creatinina en la orina expresado en mgdl
Ps = concentracioacuten de creatinina en suero expresado en mgdl
Vmin= volumen por minuto (cantidad de la diuresis entre 1440)
Procedimiento analiacutetico
Ver metoacutedica de la creatinina
Notas sobre la metoacutedica
Linealidad
Referirse a las metoacutedicas de creatinina Es lineal hasta 250 mgdl
Sensibilidad
Referirse a las metoacutedicas de creatinina Su sensibilidad es 01 mgdl
Especificidad
Referirse a las metoacutedicas de creatinina
Las muestras de suero tienen proteiacutenas que pueden reaccionar no
especiacuteficamente con el
meacutetodo Jaffe Es necesario corregir el valor de 03 mgdl para lograr
valores maacutes correctos
Interferencias
Las interferencias significativas se deben
Para las orinas
Presencia de partiacuteculas en suspensioacuten (centrifugar las orinas)
Mala recoleccioacuten de orina
Presencia de bacterias de barbituacutericos de cuerpos cetoacutenicos
Para la sangre
Hemoacutelisis con Hb ge100 gl
Laboratorio Cliacutenico PAULINA ARROLLO PEREacuteZ
Icteacuterico bilirrubina ge400 mgdl
Lipemia trigliceacuteridos ge20000 mgdl
Acetona ge500 mgdl
Valor de referencia
ge70mlmin
PRACTICA 4
EXAMEN MICROSCOacutePICO DEL SEDIMENTO URINARIO
PROPOacuteSITO
Observar microscoacutepicamente en el sedimento urinario elementos celulares
cilindros cristales paraacutesitos filamentos mucoides y bacterias Con el fin
de sugerir una patologiacutea del tracto urinario u otras enfermedades que esteacuten
en diferente localizacioacuten
MUESTRA REQUERIDA
15 mL de orina
MATERIALES
- Tubos coacutenicos de 15 mL
- Laacuteminas portaobjetos
- Laminillas cubreobjetos
- Marcador para vidrio
- Gradillas para tubos
- Guantes descartables
EQUIPO
- Reloj marcador
- Centriacutefuga
- Microscopio
PROCEDIMIENTO
- Centrifugar durante 5 minutos a 2500 rpm
- Descartar el liacutequido sobrenadante
- Suspender el sedimento urinario golpeando ligeramente con la mano
Laboratorio Cliacutenico PAULINA ARROLLO PEREacuteZ
- Colocar una gota de sedimento entre un porta y un cubreobjeto
- Observar la preparacioacuten con el objetivo 10x para lograr una visioacuten general del
sedimento
- Identificar los elementos formes a mayor aumento 40x
- Anotar lo observado
FUENTES DE ERROR
- Usar portaobjetos y cubreobjetos sucios
- Desecacioacuten del sedimento urinario
-Tiempo transcurrido desde la toma de la muestra hasta la observacioacuten
microscoacutepica
- Uso excesivo de luz
- Centrifugacioacuten inadecuada
FORMA DE REPORTE
CEacuteLULAS EPITELIALES ESCAMOSAS Y REDONDAS reportar escasas
moderadas o abundantes
GLOacuteBULOS ROJOS Reportar el nuacutemero estimado por campo
LEUCOCITOS Reportar el nuacutemero estimado por campo
CILINDROS se pueden encontrar en la orina los siguientes cilindros
hialinos granulosos finos y gruesos leucocitarios hemaacuteticos grasos y ceacutereos
Reportar el nuacutemero de cilindros observados por campo
FILAMENTOS MUCOIDES reportar escasos moderados o abundantes
CRISTALES se pueden encontrar en la orina los siguientes cristales oxalatos de
calcio acido uacuterico uratos amorfos fosfatos amorfos fosfatos triples urato de
amonio leucina cistina y tirosina
Reportar en la forma siguiente escasos moderados o abundantes
LEVADURAS Reportar escasos moderada y abundantes
PARAacuteSITOS Se pueden encontrar en orina Trichomonas vaginalis Phitirus pubis
huevos y quistes de paraacutesitos por contaminacioacuten con heces
BACTERIAS Reportar la presencia de bacterias moderadas o abundantes
solamente cuando se observen maacutes de 10 leucocitos por campo
Valores de referencia
Laboratorio Cliacutenico PAULINA ARROLLO PEREacuteZ
CEacuteLULAS EPITELIALES ESCAMOSAS Escasas a moderadas
CEacuteLULAS EPITELIALES REDONDAS No deben observarse
GLOacuteBULOS ROJOS No deben observarse
LEUCOCITOS 0-5 por campo
CILINDROS No deben observarse
FILAMENTOS MUCOIDES No deben observarse
CRISTALES Podriacutean observarse oxalatos uratos y fosfatos amorfos de escasa a
moderada cantidad
LEVADURAS No deben observarse
PARAacuteSITOS No deben observarse
BACTERIAS Escasas o no presentes
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PRACTICA 6
UROCULTIVO Y ANTIBIOGRAMA
OBTENCIOacuteN DE MUESTRA DE ORINA PARA CULTIVO
Condiciones generales
La orina es un excelente medio de cultivo para la proliferacioacuten bacteriana por esta
razoacuten la muestra debe ser procesada dentro de las 2 horas despueacutes de haber
sido obtenida o debe refrigerarse a 4 degC (maacuteximo 24 horas) hasta su
procesamiento
Generalmente el desarrollo de dos o maacutes tipos de colonias (en pacientes sin
sonda vesical) indican que la muestra se ha contaminado por recoleccioacuten
incorrecta o demora en la siembra
OBTENCIOacuteN DE MUESTRA DE ORINA DEL CHORRO MEDIO
Obtencioacuten de muestras de orina en pacientes mujeres Materiales y equipos
a) Guantes de laacutetex esteacuteriles
b) Cinco o maacutes piezas de gasa esteacuteril de tamantildeo adecuado pudiendo
ser de 4rdquo x 4rdquo
c) Jaboacuten
d) Agua tibia esteacuteril
e) Frasco esteacuteril de boca ancha para la muestra de orina
Procedimiento
a) Mantener la privacidad de la paciente
b) Rotular el frasco con el nombre de la paciente fecha de obtencioacuten de la
muestra hora y el procedimiento usado para la obtencioacuten de la muestra
c) Lavarse las manos con jaboacuten y abundante agua
Laboratorio Cliacutenico PAULINA ARROLLO PEREacuteZ
d) Preparar una pieza de gasa para la limpieza de los genitales externos
humedicieacutendola con agua y una pequentildea cantidad de jaboacuten Preparar dos piezas
maacutes de gasa para el enjuague con agua tibia
e) Separar los labios mayores con dos dedos de una mano y limpiar el aacuterea
expuesta pasando la gasa de adelante hacia atraacutes
f) Descartar la gasa
g) Con otra gasa humedecida enjuagar el aacuterea de adelante hacia atraacutes Repetir el
procedimiento con otra gasa
h) Finalmente secar el aacuterea de adelante hacia atraacutes con un trozo de gasa seca
i) Mantener separados los labios mayores mientras la paciente empieza a orinar
Luego del chorro inicial colocar el frasco esteacuteril para colectar el chorro medio
j) Al terminar la recoleccioacuten tapar el frasco inmediatamente y limpiarle la
superficie
k) Transportar el frasco con la muestra de orina inmediatamente
Obtencioacuten de muestra de orina en pacientes varones
Materiales
a) Guantes de laacutetex
b) Cinco o maacutes piezas de gasa esteacuteril
c) Jaboacuten
d) Agua tibia esteacuteril
e) Frasco esteacuteril de boca ancha para la obtencioacuten de la muestra
Procedimiento
a) Mantener la privacidad del paciente
b) Rotular el frasco con el nombre del paciente fecha de obtencioacuten de la muestra
hora y el procedimiento usado para la obtencioacuten de la muestra
c) Lavarse las manos con jaboacuten y abundante agua
d) Preparar una pieza de gasa con agua y una pequentildea cantidad de jaboacuten
Preparar dos piezas maacutes de gasa para el enjuague con agua tibia
e) Realizar la higiene de los genitales Retraer el prepucio antes de lavar el glande
con la gasa humedecida con jaboacuten Descartar la gasa
Laboratorio Cliacutenico PAULINA ARROLLO PEREacuteZ
f) Enjuagar el glande usando una gasa huacutemeda Repetir el procedimiento con otra
gasa
g) Secar la zona usando uno o maacutes piezas de gasa seca
h) Indicar al paciente que mantenga el prepucio retirado e inicie la miccioacuten
directamente en un recipiente (orina para descartar)
i) Despueacutes del chorro inicial colocar el frasco esteacuteril para colectar la muestra del
chorro medio
j) Obtenida la muestra tapar el frasco inmediatamente y limpiarle la superficie
k) Transportar el frasco con la muestra de orina inmediatamente al laboratorio
SIEMBRA PRIMARIA DE MUESTRA DE ORINA
Objetivo
Describir el procedimiento para la siembra primaria de muestra de orina
Campo de aplicacioacuten
Se aplica para el cultivo de muestra de orina en el diagnoacutestico bacterioloacutegico de
infecciones del tracto urinario
Materiales y equipos
a) Asa calibrada de platino o descartable de 0001 mL oacute 001 mL
b) Estufa de 35 ndash 37 degC
c) Mechero Bunsen o cabina de flujo laminar
d) Guantes de laacutetex
e) Contenedor de material contaminado
f) Pinza esteacuteril
g) Propipeta o pipetor automaacutetico
h) Medios de cultivo
ndash Placas con agar sangre de carnero (AS)
ndash Placas con agar Mc Conkey (McC)
Procedimiento
a) Mantener las muestras en refrigeracioacuten (4 degC) hasta su procesamiento por
cultivo
Laboratorio Cliacutenico PAULINA ARROLLO PEREacuteZ
b) Los cultivos deben realizarse en una cabina de bioseguridad o cerca del
mechero Bunsen
c) Las placas con AS y McC que se utilizaraacuten en el urocultivo deben estar a
temperatura ambiente Rotular las placas
d) Si el asa calibrada no es descartable esterilizar el asa de siembra flameacuteandola
en el mechero Bunsen hasta que se ponga rojo vivo Dejar enfriar el asa
e) Tomar el frasco con la muestra de orina abrir la tapa y flamear la boca del
frasco en el mechero Bunsen
f) Tomar la muestra de orina con el asa de siembra esteacuteril introducieacutendola y
sacaacutendola del frasco en forma vertical Tapar el frasco con la muestra
g) Inocular en el centro de la placa con AS a partir del cual se extiende la muestra
hacia delante y hacia atraacutes
h) Luego sin quemar el asa el inoacuteculo se disemina uniformemente con trazos
perpendiculares a la siembra inicial en toda la placa
i) Proceder de la misma forma para el agar Mc Conkey
Laboratorio Cliacutenico PAULINA ARROLLO PEREacuteZ
Lectura
a) Realizar la evaluacioacuten a las 24 horas si no hay crecimiento bacteriano dejar
incubar hasta las 48 horas
b) La evaluacioacuten consiste en realizar el recuento de colonias cuyo resultado se
multiplica por el factor de dilucioacuten para obtener las UFC por mL
Interpretacioacuten
a) En pacientes sin sonda vesical la cuenta significativa de bacterias en orina es
la presencia de maacutes de 105 UFC mL de un solo germen
b) Los recuentos intermedios (103 ndash 104 UFCmL) indican infeccioacuten si el
procedimiento de recoleccioacuten de orina fue realizado correctamente
c) Generalmente el aislamiento de tres o maacutes especies bacterianas indican que la
muestra se ha contaminado por recoleccioacuten inadecuada o demora en la siembra
d) En pacientes con sonda vesical cuentas bacterianas menores de 105 UFCmL
pueden tener significado asiacute tambieacuten se pueden encontrar bacteriurias
polimicrobianas hasta en casi 15 de enfermos
Laboratorio Cliacutenico PAULINA ARROLLO PEREacuteZ
e) En pacientes sin cateacuteter se puede comprobar si el procedimiento de obtencioacuten
de muestra fue realizado correctamente observando la frecuencia con la cual se
informan recuentos de colonias intermedias entre 103 ndash 104 UFCmL En
pacientes sin infecciones del tracto urinario el recuento es nulo o se reduce a
pocas colonias
IDENTIFICACION BACTERIANA
Lectura de cultivos en agar Mac Conkey
ndash En agar Mc Conkey Escherichia coli lactosa positiva forma colonias de borde
entero de color fucsia opacas de 2 mm ndash 3 mm de diaacutemetro usualmente
rodeadas de una zona opaca alrededor de la colonia (bilis precipitada) Las cepas
de E coli que son lactosa negativa dan colonias incoloras de 3 ndash 4 mm
ndash En agar Mc Conkey K pneumoniae forma colonias de borde entero de color
rosado a rosado oscuro de 3 ndash 4 mm de diaacutemetro y aspecto mucoide
ndash En agar Mc Conkey Enterobacter spp forma colonias de borde entero de color
rosado de 2 ndash 4 mm de diaacutemetro no tan mucoides como K pneumoniae
Las colonias con estas caracteriacutesticas son subcultivadas en medios diferenciales
PRUEBAS BIOQUIMICAS
TSI
Lectura
Es importante hacer la lectura entre las 18 ndash 24 horas para no obtener resultados
erroacuteneos La lectura se hace sobre la base de tres caracteriacutesticas Utilizacioacuten de
hidratos de carbono produccioacuten de gas y produccioacuten de aacutecido sulfhiacutedrico
Utilizacioacuten de hidratos de carbono
ndash Utilizacioacuten de lactosa Reaccioacuten aacutecida en el pico de flauta (color amarillo)
Abreviatura (A)
ndash Utilizacioacuten de glucosa Reaccioacuten aacutecida en la columna del medio (color amarillo)
Abreviatura (A)
Laboratorio Cliacutenico PAULINA ARROLLO PEREacuteZ
ndash No hay utilizacioacuten del carbohidrato Se puede observar una reaccioacuten alcalina
(color rojo) o que no hay cambio de color (permanece del mismo color que el
medio no inoculado) Abreviaturas (K) o (N) respectivamente
Nota Cuando el microorganismo tambieacuten produce H2S el precipitado negro
puede ocultar la acidez
Produccioacuten de gas de glucosa
ndash Se considera positivo Presencia de una sola burbuja de gas burbujas en el
medio divisioacuten del medio desplazamiento completo del medio del fondo del tubo
dejando un aacuterea clara o una ligera muesca del medio en el costado del tubo
ndash Se registra la lectura por medio de cruces (+)
Produccioacuten de aacutecido sulfhiacutedrico
ndash Se manifiesta por un color negro distribuido por toda la columna del medio de
cultivo o soacutelo en la parte superior
ndash Se registra la lectura por medio de cruces (+)
Resultados
Ejemplo de simbolizacioacuten e interpretacioacuten
KA ndash+ Significa alcalinidad en la inclinacioacuten y acidez en el fondo (fermentacioacuten de
glucosa) gas negativo y H2S positivo
NN ndash ndashSignifica que no hay utilizacioacuten de la lactosa y glucosa ni produccioacuten de
H2S
AGAR LISINA HIERRO
En este medio se determina simultaacuteneamente la produccioacuten de lisina
descarboxilasa y de la formacioacuten de aacutecido sulfhiacutedrico
Lectura
Es importante hacer la lectura entre las 18 ndash 24 horas si la lectura se realiza antes
podemos obtener resultados falsos positivos asiacute como falsos negativos si se lee
despueacutes de las 24 horas Realizar la lectura en la columna y en la superficie
inclinada y observar la formacioacuten de aacutecido sulfhiacutedrico el cual se evidencia por una
coloracioacuten negra
Nota Generalmente las cepas del grupo Proteus y Providencia desaminan la
lisina a aacutecido ndashcetocarboacutenico Este uacuteltimo forma compuestos pardo-rojizos en la
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regioacuten superficial del medio de cultivo con la sal de hierro y bajo la influencia del
oxiacutegeno
Recomendaciones
No incubar maacutes del tiempo necesario para no ocasionar una alcalinizacioacuten en la
superficie del medio y por lo tanto producir un viraje hacia el violeta
UTILIZACIOacuteN DE CITRATO
Para determinar si un microorganismo es capaz de utilizar citrato como uacutenica
fuente de carbono para su metabolismo
Procedimiento
a) Incubar a 35ndash37 degC de 24 horasndash 48 horas En algunos casos es necesario una
incubacioacuten hasta por 4 diacuteas
b) Ver el viraje de color
Resultados
a) Prueba positiva Crecimiento con un color azul intenso en el pico de flauta o
presencia de colonias en ausencia del color azul
b) Prueba negativa No se observa crecimiento ni cambio de color (verde)
Controles
Positivo Enterobacter cloacae
Negativo Escherichia coli
HIDROacuteLISIS DE LA UREA (PRODUCCIOacuteN DE UREASA)
Es uacutetil para determinar la capacidad de un organismo de degradar la urea
formando dos moleacuteculas de amoniaco por accioacuten de la enzima ureasa
Procedimiento
Realizar la lectura despueacutes de 18 horas ndash 24 horas de incubacioacuten observando el
viraje de color
Resultados
Prueba positiva Color rosado intenso en el pico de flauta o todo el agar
Puede haber una reaccioacuten positiva retardada despueacutes de 24 horas y hasta
6 diacuteas de incubacioacuten (algunas cepas de Klebsiella por ejemplo)
Prueba negativa No se produce cambio de color
Controles
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Negativo Escherichia coli
Positivo Klebsiella pneumoniae
MOTILIDAD (MEDIOS SIM O MIO O AGAR MOVILIDAD)
Para determinar si un organismo es moacutevil o inmoacutevil
Procedimiento
Incubar a 35 ndash 37 degC de 24 a 48 horas
Resultados
Positivo Los microorganismos migran de la liacutenea de siembra y se difunden en el
medio provocando turbidez Tambieacuten puede manifestarse semejando
ldquovellosidadesrdquo a lo largo del trazo de siembra
Negativo Se observa un crecimiento bacteriano acentuado siguiendo el trazo de
siembra y el medio circundante se mantiene claro
Controles
Control positivo Escherichia coli
Control negativo Klebsiella pneumoniae
h) Prueba de indol[6]
Es uacutetil para determinar la capacidad de un microorganismo de producir indol a
partir del aminoaacutecido triptoacutefano
Medios y reactivos
Caldo de triptoacutefano o de peptona o caldo de triptona
Reactivo de indol de Kovacs
Procedimiento
Retirar aseacutepticamente 2 mL de caldo de cutivo con 24 horas de incubacioacuten
Agregar 5 gotas de reactivo de Kovacs
Mover suavemente el tubo y realizar la lectura
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ANTIBIOGRAMA
Preparacioacuten del Agar Mueller Hinton
Preparar el medio a partir de la base deshidratada de acuerdo a las
indicaciones del fabricante
Autoclavar y dejar enfriar en bantildeo de agua hasta que alcance los 45degC - 50degC
Repartir el medio en placas petri (60 ml ndash 70 ml o 25 ml ndash 30 ml para placas de
150 mm o 100 mm de diaacutemetro interno respectivamente) de manera que el
grosor del agar en la placa sea de 4 mm
Realizar las pruebas de esterilidad para cada lote de Mueller Hinton incubando
una o dos placas de cada lote a 30degC ndash 35degC durante 24 horas o maacutes Estas
placas utilizadas deben ser luego descartadas
Preparacioacuten del estaacutendar (05 Mc Farland) para el inoacuteculo
Para estandarizar la densidad del inoacuteculo se usa una suspensioacuten de sulfato de
bario (05 de la escala de Mac Farland) como estaacutendar
Preparacioacuten del estaacutendar de turbidez
a Agregar 05 ml de una solucioacuten de BaCl2 0048 M (BaCl22H2O al 1175 PV)
a 995 mL de una solucioacuten de H2SO4 018 M (036 N) (1 VV) en constante
movimiento para mantener la suspensioacuten
b Verificar la densidad correcta del estaacutendar usando un fotocoloriacutemetro oacute
espectrofotoacutemetro cuya absorbancia a 625 nm es 008 a 010 para el estaacutendar 05
de Mc Farland
c Distribuir de 4 ml a 6 ml en tubos con tapa de rosca o tapoacuten de jebe similares a
los que se usaraacuten para preparar el inoacuteculo
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d Ajustar bien las tapas o tapones y conservarlos en la oscuridad a temperatura
ambiente y anotar la fecha de preparacioacuten
e Antes de ser usado agitar vigorosamente dicho estaacutendar de preferencia en un
agitador mecaacutenico
f Verificar mensualmente la densidad de los estaacutendares de sulfato de bario y
reemplazarlo cuando sea necesario
INOCULACIOacuteN
Preparacioacuten del inoacuteculo
Puede realizarse de dos formas
Meacutetodo de desarrollo previo
a Seleccionar cuatro a cinco colonias bien aisladas del mismo tipo morfoloacutegico
de un cultivo en placa
b Tocar la superficie de cada colonia con una asa de siembra y transferirlo a un
tubo que contiene de 4 a 5 mL de caldo apropiado (Ej Caldo Tripticasa soya)
c Incubar el caldo a una temperatura entre 35degC a 37degC hasta que alcance o
exceda la turbidez del estaacutendar 05 de la escala de Mc Farland (por lo general de
2 a 6 horas)
d Ajustar la turbidez del inoacuteculo con solucioacuten salina o caldo apropiado hasta el
tubo 05 de la escala de Mc Farland por comparacioacuten visual con el estaacutendar Para
realizar este paso correctamente usar una luz apropiada y mirar los tubos contra
un fondo blanco con liacuteneas negras como contraste
e La suspensioacuten preparada contendraacute aproximadamente 1 a 2 x 108 UFCmL
Meacutetodo directo de inoculacioacuten a partir de colonias aisladas
a De una placa de cultivo con agar no selectivo e incubada por 18 - 24 h
seleccionar colonias aisladas y preparar una suspensioacutem directa en solucioacuten
salina oacute caldo
b La suspensioacuten debe ser inmediatamente ajustada a la escala 05 de Mc
Farland
Inoculacioacuten de las Placas
Dentro de los 15 minutos siguientes al ajuste de la turbidez del inoacuteculo sumergir
un hisopo esteacuteril en la suspensioacuten rotar el hisopo varias veces presionando
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firmemente sobre la pared interior del tubo por encima del nivel del liacutequido para
remover el exceso de inoacuteculo
Inocular la superficie seca de la placa de Mueller Hinton estriando con el hisopo
en tres direcciones para asegurar una distribucioacuten uniforme del inoacuteculo Antes de
colocar los discos dejar secar la placa a temperatura ambiente durante 3 a 5
minutos para que cualquier exceso de humedad superficial sea absorbido
APLICACIOacuteN DE LOS DISCOS
Colocar los discos individuales o multidiscos sobre la superficie del agar con la
ayuda de una pinza esteacuteril o la punta de una aguja presionando suavemente sobre
cada disco para asegurar un contacto completo con la superficie del agar
Distribuir los discos uniformemente de modo que esteacuten a una distancia miacutenima de
25 mm uno del otro (el diaacutemetro de los discos seguacuten las normas de la
Organizacioacuten Mundial de la Salud (OMS) debe ser de 6 mm) No deben colocarse
maacutes de 12 discos en una placa de 150 mm ni maacutes de 6 en una placa de 100 mm
de diaacutemetro interno para evitar la superposicioacuten de las zonas de inhibicioacuten Un
disco no debe ser removido una vez que tomoacute contacto con la superficie del agar
debido a que algunos antibioacuteticos se difunden raacutepidamente
INCUBACIOacuteN
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Incubar lar placas en posicioacuten invertida a 35degC por 18 a 24 horas dentro de los 15
minutos posteriores a la aplicacioacuten de los discos
Despueacutes del tiempo recomendado de incubacioacuten examinar cada placa y medir los
diaacutemetros de los halos de inhibicioacuten alrededor de cada disco
LECTURA DE LAS PLACAS E INTERPRETACIOacuteN DE LOS RESULTADOS
Medir los diaacutemetros de las zonas de inhibicioacuten completa (incluyendo el diaacutemetro
del disco) usando
una regla o calibrador Se debe mantener iluminada la parte posterior de la placa
petri con una luz reflejada localizada a unos cuantos centiacutemetros sobre un fondo
negro Tener la precaucioacuten de observar la placa siguiendo una vertical directa para
evitar una lectura erroacutenea de las marcas de la regla por efecto de paralelismo En
los medios suplementados con sangre las zonas son medidas en la parte superior
de la superficie del agar y retirando la tapa Tener cuidado de no medir la zona de
la hemoacutelisis sino la de inhibicioacuten del crecimiento
El punto final debe tomarse como el aacuterea que no muestra un crecimiento obvio
visible que puede ser detectado mediante observacioacuten visual no incluyendo velo
de crecimiento o colonias muy pequentildeas que puedan ser detectadas solo con
mucha dificultad en el borde de la zona Sin embargo las colonias mayores
creciendo dentro de la zona clara deberaacuten ser subcultivadas reidentificadas y
reensayadas Algunos Proteus spp debido a su gran movilidad pueden presentar
un velo de invasioacuten o ldquoswarmingrdquo dentro de las zonas de inhibicioacuten de algunos
antibioacuteticos En estos casos el velo del swarming debe ser ignorado al momento
de medir los halos de inhibicioacuten
DISCOS DE SENSIBILIDAD ANTIBIOacuteTICA A INCLUIR EN EL ANTIBIOGRAMA
Grupo I
Ampicilina
Cefalotina
Ampicilina Sulbactam o Amoxicilina Aacutecido Clavulaacutenico
Cefuroxima
Cefotaxima o Ceftriaxona
Gentamicina
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Amikacina
Aacutecido Nalidiacutexico(1)
Norfloxacina(1)
Ciprofloxacina
Cotrimoxazol (TrimetoprimSulfametoxazol)
Nitrofurantoiacutena(1)
Grupo II
Cefoxitina
Aztreonam
Ceftazidima
Cefixima
CefoperazonaSulbactam
Cefepime o Cefpirome
Imipenem o Meropenem
Cloramfenicol
Ofloxacina (1)
(1) Disco utilizado exclusivamente para infecciones de las viacuteas urinarias
Resistencias Naturales
Las enterobacterias son resistentes a Penicilina Oxacilina Macroacutelidos
Clindamicina y Glicopeacuteptidos
Klebsiella spp es resistente a las Aminopenicilinas
Citrobacter freundii Enterobacter cloacae y Enterobacter aerogenes son
resistentes a las Aminopenicilinas AminopenicilinasInhibidores de
betalactamasas Cefalosporinas de primera generacioacuten y Cefuroxima
Serratia marcescens es resistente a las Aminopenicilinas
AminopenicilinasInhibidores de betalactamasas Cefalosporinas de primera
generacioacuten y Cefoxitina
Proteus mirabilis es resistente a Nitrofurantoiacutena
Proteus vulgaris es resistente a las Aminopenicilinas Cefalosporinas de primera
generacioacuten Cefuroxima y Nitrofurantoiacutena
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Morganella morganii es resistente a las Aminopenicilinas
AminopenicilinasInhibidores de betalactamasas Cefalosporinas de primera
generacioacuten Cefuroxima y Nitrofurantoiacutena
Providentia stuartii es resistente a las Aminopenicilinas
AminopenicilinasInhibidores de betalactamasas Cefalosporinas de primera
generacioacuten Gentamicina (bajo nivel) y Nitrofurantoiacutena
ANTIBIOTICOS Y DIAMETROS CRITICOS PARA ENTEROBACTERIAS
E PRACTICA 7
EXAMEN QUIMICO DE CALCULO RENAL
EXAMEN FISICO
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Se debe pesar el caacutelculo y anotar el dato obtenido Medir dos de los diaacutemetros y
tomar nota del aspecto general textura y color y despueacutes de seccionado el
aspecto general la prominencia y el color de los distintos estratos
Se secciona el caacutelculo con una sierra Se raspan las caras con una aguja Se
procede lo mismo con el nuacutecleo Cada una de las muestras obtenidas se trituran
por separado en un mortero
PROCESO
Se coloca una porcioacuten del polvo del caacutelculo en un crisol y se calienta al fuego Si
no hay ennegrecimiento ni se altera el tamantildeo original el caacutelculo estaraacute formado
por sustancias inorgaacutenicas Si en cambio se carboniza desapareciendo estaraacute
formado por sustancias orgaacutenicas Si se funde y se ennegrece este caacutelculo estaacute
formado por sulfamidasa
Una vez obtenidos los datos pueden seleccionarse las reacciones necesarias
para confirmarlos
REACCIONES QUIMICAS
Solucioacuten A
10mg del polvo en matraz y antildeadir 50 ml de ClH 5 Observar si se
produce efervescencia Calentar en bantildeo de agua hirviendo por 10 a 15 minutos y
filtrar en caliente El filtrado se distribuye en 8 tubos numerados y se introduce un
trocito de papel tornasol en cada uno
Solucioacuten B
Agitar con Cl3CH unos 10 mg del polvo Reposar en tubo tapado a
temperatura ambiente hasta que el insoluble haya precipitado Decantar la
solucioacuten clorofoacutermica y guardar igual que el sedimento por separado
Carbonato efervescencia al agregar el CIH por desprendimiento de CO 2
Amonio al tubo 1 de la solucioacuten A se le agrega solucioacuten de OHNa 10 gota a
gota y agitando hasta que el papel tornasol vire
Agregar 1 ml de reactivo de Nessler Un color amarillo oscuro oporto indica
positividad de la reaccioacuten
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El NH 3 formado por los grupos NH 4 en medio alcalino reacciona con el yoiduro
doble del reactivo de Nesler para dar yoduro amoacutenico dimercuacuterico precipitado
pardo anaranjado
Acido uacuterico Neutralizar el contenido del tubo 2 como se explicoacute antes
Agregar igual volumen de CNN Na 2 y 05 ml de reactivo de Folin para aacutecido
uacuterico Un color azul intenso indica presencia de aacutecido uacuterico
El aacutecido uacuterico reduce al aacutecido fosfotuacutengstico en medio alcalino dando color azul
intenso de azul de tungsteno y a su vez se oxida a alantoiacutena
Reactivo fosfotuacutengstico (Folin y Denis) Antes del uso diluir al 10 en agua
destilada
Oxalato de calcio Neutralizar el contenido del tubo 3 Agregar CH 3 COOH 10
hasta reaccioacuten aacutecida al tornasol Precipitado blanco que no se redisuelve por
agitacioacuten indica presencia de oxalato de calcio
Calcio Neutralizar el tubo 4 Acidificar con CH 3 COOH glacial Agregar 2 ml C 2
O 4 ( NH 4 ) 4 Precipitado blancodenso indica presencia de Ca ++
Fosfato Neutralizar el tubo 5 Agregar 1 ml de solucioacuten de molibdato Mezclar
antildeadir 05 ml de aacutecido aminonaftol sulfoacutenico (ANS) 025 Coloracioacuten azul que
aparece en 5 minutos indica fosfatos
El color azul se debe a los oacutexidos reducidos de molibdeno
Reactivos
1 ClH concentrado2 Solucioacuten de OHK 203 NO 3 H concentrado4 Mo O 4 (NH 4 ) 2 disolver 25 g de la droga en 50 ml de SO 4 H 2 10 N y
diluir a 100 ml con H2 O destilada5 Amoniacuteaco
Reactivo ANS En matraz x 250 ml poner 05 g de aacutecido aminonaftolsulfoacutenico y
agrgar 195 ml de bisulfito de sodio 15 y 5 ml de sulfito de sodio 20 Mezclar
bien hasta disolucioacuten Si no se disuelve en media hora agregar maacutes sulfito y
agitar El reactivo dura unas 2 semanas
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Magnesio Neutralizar el tubo 7 con OHNH 4 y antildeadir 1 ml de solucioacuten alcohoacutelica
de p ndash Nitrobenceno azorresorcinol Un cromoacutegeno rojo indica presencia de
magnesio
En medio alcalino se forma (OH) 2 Mg El colorante azo resulta absorbido por el
(OH) 2 Mg en medio alcalino
Xantina A un tercio del residuo de la solucioacuten B agregarle gotas de NO 3 H
concentrado
Se disuelve el residuo sin desprender gas Evaporar a sequedad en bantildeo Mariacutea
hirviente quedando un residuo amarillo Dejar enfriar y humedecer con gotas de
OHNa 10 Una coloracioacuten anaranjada que vira al rojo oscuro al calentar indica
presencia de xantina
La reaccioacuten es la xantoproteica Migracioacuten de los anillos fenilo existentes en la
tirosina fenilalanina y triptoacutefano que da un color amarillo de los productos de
nitrosustitucioacuten para virar al anaranjado tras la adicioacuten de un aacutelcali ( formacioacuten de
la sal)
Nota El reactivo de molibdato se puede preparar asiacute
Solucioacuten 1 SO 4 H 2 01 N
Medir 450 ml de SO4 H 2 concentrado y agregarlos a 1300 ml de agua
destilada
Solucioacuten 2
A 250 ml de SO 4 H 2 01 N antildeadir la solucioacuten de molibdato y llevar con
agua destilada a 250 ml Mezclar
Sulfamidas Neutralizar el uacuteltimo tubo Antildeadir 1 ml de NO 2 Na 05 preparado
recientemente Agitar y reposar por 3 minutos Antildeadir 5 ml de solucioacuten alcohoacutelica
de dimetil-alfa naftilamina 025 Un color rojizo indica presencia de sulfamidas
Finalmente procede hacer mencioacuten de ciertos procedimientos fiacutesicos como la
microscopia de polarizacioacuten difraccioacuten de rayos X cristalografiacutea
espectrofotometriacutea de rayos infrarrojos etc que permiten actualmente un
conocimiento maacutes confiable de la estructura de los caacutelculos
- Reactivos
-
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Procedimiento
Seguir las instrucciones de la casa comercial
Control de Calidad
Se deberaacuten usar sueros control normal y patoloacutegico en las mismas
condiciones que las muestras
Notas sobre la metoacutedica
Linealidad
Es lineal hasta 250 mgdl
Sensibilidad
Su sensibilidad es 01 mgdl
Especificidad
La metoacutedica es especiacutefica para la creatinina
Las muestras de suero tienen proteiacutenas que pueden reaccionar no
especiacuteficamente con el meacutetodo Jaffe es necesario corregir el valor de
03 mgdl para lograr valores maacutes correctos
Interferencias
Las interferencias maacutes significativas son
Hemoacutelisis con Hb ge100 gl
Icteacuterico bilirrubina ge400 mgdl
Lipemia trigliceacuteridos ge20000 mgdl
Acetona ge500 mgdl
Algunos antibioacuteticos como las cefalosporinas pueden dar valores
falsamente elevados
Valor de referencia
Hombres Hasta 13 mgdl
Mujeres Hasta 11 mgdl
Neonatos o nintildeos Hasta 07 mgdl
Criterios de validacioacuten
Confrontar paraacutemetros de funcionalidad renal (urea potasio proteiacutenas
densidad urinaria)
Confrontar paraacutemetros de equilibrio electroliacuteticos (sodio potasio cloro)
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Controlar sexo y edad del paciente y tambieacuten eventual estado de
embarazo
Controlar paraacutemetros del metabolismo muscular (CPK miacuteoglobulina)
DEPURACION DE CREATININA
Generalidad
La cantidad de creatinina excretada con la orina estaacute en relacioacuten con la
filtracioacuten glomerular La creatinina es una sustancia que deriva del
metabolismo muscular (muacutesculo estriado liso y cardiacuteaco) de la creatina
y representa el subproducto de excrecioacuten La produccioacuten de creatinina
es independiente de la dieta y del ejercicio muscular sin embargo es
proporcional dentro de algunos liacutemites a la masa muscular Se libera
desde los glomeacuterulos y no es reabsorbida por los tuacutebulos de los cuales
puede ser excretada especialmente cuando se aumenta la
concentracioacuten hemaacutetica El aumento de la creatinina en el suero
empieza a ser evidente cuando el filtrado glomerular es por debajo de
60 ml por minuto
La medida de la cantidad de creatinina en la orina producida en un
determinado periacuteodo de tiempo simultaacuteneamente a la medida de la
concentracioacuten plasmaacutetica lleva al caacutelculo el aclaramiento de la
creatinina (volumen del plasma en ml que es depurado de la creatinina
en un minuto de tiempo)
C= U x VP (mlmin)
donde
C= aclaramiento
U= concentracioacuten de creatinina en la orina
V= volumen de la orina eliminada
P= concentracioacuten de creatinina en el plasma
Indicaciones
La estrecha correlacioacuten entre la velocidad de filtracioacuten glomerular y el
valor de la creatinina plasmaacutetica y el hecho que la concentracioacuten de la
creatinina hemaacutetica no es influenciada por la dieta hacen de la
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creatinina en particular el aclaramiento de la creatinina un iacutendice de
funcionalidad renal muy sensible y seguramente maacutes significativo que la
urea
El aclaramiento de la creatinina se modifica en relacioacuten con la
enfermedad renal (glomerulonefritis agudas o croacutenicas rintildeoacuten policiacutestico
obstruccioacuten de la viacutea renal)
Preparacioacuten del paciente
Ayuno
Modalidad de la toma de muestra
A) Recoger la orina de 24 horas con el siguiente procedimiento
Para la recoleccioacuten de orina de 24 horas se tiene que utilizar un frasco
de 25 30 litros de boca ancha con tapoacuten de rosca Antildeadir al frasco un
estabilizante si es necesario
Para la recogida de la orina se procede del modo siguiente
a) En el tiempo preestablecido vaciar la vejiga e eliminar toda la
orina
b) Posteriormente comenzar a recoger toda la orina de 24 horas
c) Al cumplir las 24 horas vaciar de nuevo la vejiga y depositar toda
la orina en el frasco Conservar las orinas a 2-4degC
Al finalizar la recoleccioacuten de orina eacutesta debe ser enviada
inmediatamente al laboratorio
B) Cuando se entrega la muestra de orina es necesario efectuar la toma
de muestra de sangre
Transporte
La muestra de orina debe ser transportada de 2-4degC la muestra de
sangre a temperatura ambiente
Conservacioacuten
Centrifugacioacuten y separacioacuten del suero la toma de muestra se puede
conservar por 1 diacutea a temperatura ambiente de 20-25oC 7 diacuteas 2-4oC y
6 meses en congelacioacuten
Conservar las orinas a 2-4degC
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Verificacioacuten de la muestra
Verificar que el registro de la toma de muestra esteacute correcto
Metoacutedica de determinacioacuten
Cu x Vmin
Aclaramiento de la creatinina = mdashmdashmdashmdashmdashmdashmdashmdashmdashmdashmdashmdash
Ps
donde
Cu= concentracioacuten de creatinina en la orina expresado en mgdl
Ps = concentracioacuten de creatinina en suero expresado en mgdl
Vmin= volumen por minuto (cantidad de la diuresis entre 1440)
Procedimiento analiacutetico
Ver metoacutedica de la creatinina
Notas sobre la metoacutedica
Linealidad
Referirse a las metoacutedicas de creatinina Es lineal hasta 250 mgdl
Sensibilidad
Referirse a las metoacutedicas de creatinina Su sensibilidad es 01 mgdl
Especificidad
Referirse a las metoacutedicas de creatinina
Las muestras de suero tienen proteiacutenas que pueden reaccionar no
especiacuteficamente con el
meacutetodo Jaffe Es necesario corregir el valor de 03 mgdl para lograr
valores maacutes correctos
Interferencias
Las interferencias significativas se deben
Para las orinas
Presencia de partiacuteculas en suspensioacuten (centrifugar las orinas)
Mala recoleccioacuten de orina
Presencia de bacterias de barbituacutericos de cuerpos cetoacutenicos
Para la sangre
Hemoacutelisis con Hb ge100 gl
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Icteacuterico bilirrubina ge400 mgdl
Lipemia trigliceacuteridos ge20000 mgdl
Acetona ge500 mgdl
Valor de referencia
ge70mlmin
PRACTICA 4
EXAMEN MICROSCOacutePICO DEL SEDIMENTO URINARIO
PROPOacuteSITO
Observar microscoacutepicamente en el sedimento urinario elementos celulares
cilindros cristales paraacutesitos filamentos mucoides y bacterias Con el fin
de sugerir una patologiacutea del tracto urinario u otras enfermedades que esteacuten
en diferente localizacioacuten
MUESTRA REQUERIDA
15 mL de orina
MATERIALES
- Tubos coacutenicos de 15 mL
- Laacuteminas portaobjetos
- Laminillas cubreobjetos
- Marcador para vidrio
- Gradillas para tubos
- Guantes descartables
EQUIPO
- Reloj marcador
- Centriacutefuga
- Microscopio
PROCEDIMIENTO
- Centrifugar durante 5 minutos a 2500 rpm
- Descartar el liacutequido sobrenadante
- Suspender el sedimento urinario golpeando ligeramente con la mano
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- Colocar una gota de sedimento entre un porta y un cubreobjeto
- Observar la preparacioacuten con el objetivo 10x para lograr una visioacuten general del
sedimento
- Identificar los elementos formes a mayor aumento 40x
- Anotar lo observado
FUENTES DE ERROR
- Usar portaobjetos y cubreobjetos sucios
- Desecacioacuten del sedimento urinario
-Tiempo transcurrido desde la toma de la muestra hasta la observacioacuten
microscoacutepica
- Uso excesivo de luz
- Centrifugacioacuten inadecuada
FORMA DE REPORTE
CEacuteLULAS EPITELIALES ESCAMOSAS Y REDONDAS reportar escasas
moderadas o abundantes
GLOacuteBULOS ROJOS Reportar el nuacutemero estimado por campo
LEUCOCITOS Reportar el nuacutemero estimado por campo
CILINDROS se pueden encontrar en la orina los siguientes cilindros
hialinos granulosos finos y gruesos leucocitarios hemaacuteticos grasos y ceacutereos
Reportar el nuacutemero de cilindros observados por campo
FILAMENTOS MUCOIDES reportar escasos moderados o abundantes
CRISTALES se pueden encontrar en la orina los siguientes cristales oxalatos de
calcio acido uacuterico uratos amorfos fosfatos amorfos fosfatos triples urato de
amonio leucina cistina y tirosina
Reportar en la forma siguiente escasos moderados o abundantes
LEVADURAS Reportar escasos moderada y abundantes
PARAacuteSITOS Se pueden encontrar en orina Trichomonas vaginalis Phitirus pubis
huevos y quistes de paraacutesitos por contaminacioacuten con heces
BACTERIAS Reportar la presencia de bacterias moderadas o abundantes
solamente cuando se observen maacutes de 10 leucocitos por campo
Valores de referencia
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CEacuteLULAS EPITELIALES ESCAMOSAS Escasas a moderadas
CEacuteLULAS EPITELIALES REDONDAS No deben observarse
GLOacuteBULOS ROJOS No deben observarse
LEUCOCITOS 0-5 por campo
CILINDROS No deben observarse
FILAMENTOS MUCOIDES No deben observarse
CRISTALES Podriacutean observarse oxalatos uratos y fosfatos amorfos de escasa a
moderada cantidad
LEVADURAS No deben observarse
PARAacuteSITOS No deben observarse
BACTERIAS Escasas o no presentes
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PRACTICA 6
UROCULTIVO Y ANTIBIOGRAMA
OBTENCIOacuteN DE MUESTRA DE ORINA PARA CULTIVO
Condiciones generales
La orina es un excelente medio de cultivo para la proliferacioacuten bacteriana por esta
razoacuten la muestra debe ser procesada dentro de las 2 horas despueacutes de haber
sido obtenida o debe refrigerarse a 4 degC (maacuteximo 24 horas) hasta su
procesamiento
Generalmente el desarrollo de dos o maacutes tipos de colonias (en pacientes sin
sonda vesical) indican que la muestra se ha contaminado por recoleccioacuten
incorrecta o demora en la siembra
OBTENCIOacuteN DE MUESTRA DE ORINA DEL CHORRO MEDIO
Obtencioacuten de muestras de orina en pacientes mujeres Materiales y equipos
a) Guantes de laacutetex esteacuteriles
b) Cinco o maacutes piezas de gasa esteacuteril de tamantildeo adecuado pudiendo
ser de 4rdquo x 4rdquo
c) Jaboacuten
d) Agua tibia esteacuteril
e) Frasco esteacuteril de boca ancha para la muestra de orina
Procedimiento
a) Mantener la privacidad de la paciente
b) Rotular el frasco con el nombre de la paciente fecha de obtencioacuten de la
muestra hora y el procedimiento usado para la obtencioacuten de la muestra
c) Lavarse las manos con jaboacuten y abundante agua
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d) Preparar una pieza de gasa para la limpieza de los genitales externos
humedicieacutendola con agua y una pequentildea cantidad de jaboacuten Preparar dos piezas
maacutes de gasa para el enjuague con agua tibia
e) Separar los labios mayores con dos dedos de una mano y limpiar el aacuterea
expuesta pasando la gasa de adelante hacia atraacutes
f) Descartar la gasa
g) Con otra gasa humedecida enjuagar el aacuterea de adelante hacia atraacutes Repetir el
procedimiento con otra gasa
h) Finalmente secar el aacuterea de adelante hacia atraacutes con un trozo de gasa seca
i) Mantener separados los labios mayores mientras la paciente empieza a orinar
Luego del chorro inicial colocar el frasco esteacuteril para colectar el chorro medio
j) Al terminar la recoleccioacuten tapar el frasco inmediatamente y limpiarle la
superficie
k) Transportar el frasco con la muestra de orina inmediatamente
Obtencioacuten de muestra de orina en pacientes varones
Materiales
a) Guantes de laacutetex
b) Cinco o maacutes piezas de gasa esteacuteril
c) Jaboacuten
d) Agua tibia esteacuteril
e) Frasco esteacuteril de boca ancha para la obtencioacuten de la muestra
Procedimiento
a) Mantener la privacidad del paciente
b) Rotular el frasco con el nombre del paciente fecha de obtencioacuten de la muestra
hora y el procedimiento usado para la obtencioacuten de la muestra
c) Lavarse las manos con jaboacuten y abundante agua
d) Preparar una pieza de gasa con agua y una pequentildea cantidad de jaboacuten
Preparar dos piezas maacutes de gasa para el enjuague con agua tibia
e) Realizar la higiene de los genitales Retraer el prepucio antes de lavar el glande
con la gasa humedecida con jaboacuten Descartar la gasa
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f) Enjuagar el glande usando una gasa huacutemeda Repetir el procedimiento con otra
gasa
g) Secar la zona usando uno o maacutes piezas de gasa seca
h) Indicar al paciente que mantenga el prepucio retirado e inicie la miccioacuten
directamente en un recipiente (orina para descartar)
i) Despueacutes del chorro inicial colocar el frasco esteacuteril para colectar la muestra del
chorro medio
j) Obtenida la muestra tapar el frasco inmediatamente y limpiarle la superficie
k) Transportar el frasco con la muestra de orina inmediatamente al laboratorio
SIEMBRA PRIMARIA DE MUESTRA DE ORINA
Objetivo
Describir el procedimiento para la siembra primaria de muestra de orina
Campo de aplicacioacuten
Se aplica para el cultivo de muestra de orina en el diagnoacutestico bacterioloacutegico de
infecciones del tracto urinario
Materiales y equipos
a) Asa calibrada de platino o descartable de 0001 mL oacute 001 mL
b) Estufa de 35 ndash 37 degC
c) Mechero Bunsen o cabina de flujo laminar
d) Guantes de laacutetex
e) Contenedor de material contaminado
f) Pinza esteacuteril
g) Propipeta o pipetor automaacutetico
h) Medios de cultivo
ndash Placas con agar sangre de carnero (AS)
ndash Placas con agar Mc Conkey (McC)
Procedimiento
a) Mantener las muestras en refrigeracioacuten (4 degC) hasta su procesamiento por
cultivo
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b) Los cultivos deben realizarse en una cabina de bioseguridad o cerca del
mechero Bunsen
c) Las placas con AS y McC que se utilizaraacuten en el urocultivo deben estar a
temperatura ambiente Rotular las placas
d) Si el asa calibrada no es descartable esterilizar el asa de siembra flameacuteandola
en el mechero Bunsen hasta que se ponga rojo vivo Dejar enfriar el asa
e) Tomar el frasco con la muestra de orina abrir la tapa y flamear la boca del
frasco en el mechero Bunsen
f) Tomar la muestra de orina con el asa de siembra esteacuteril introducieacutendola y
sacaacutendola del frasco en forma vertical Tapar el frasco con la muestra
g) Inocular en el centro de la placa con AS a partir del cual se extiende la muestra
hacia delante y hacia atraacutes
h) Luego sin quemar el asa el inoacuteculo se disemina uniformemente con trazos
perpendiculares a la siembra inicial en toda la placa
i) Proceder de la misma forma para el agar Mc Conkey
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Lectura
a) Realizar la evaluacioacuten a las 24 horas si no hay crecimiento bacteriano dejar
incubar hasta las 48 horas
b) La evaluacioacuten consiste en realizar el recuento de colonias cuyo resultado se
multiplica por el factor de dilucioacuten para obtener las UFC por mL
Interpretacioacuten
a) En pacientes sin sonda vesical la cuenta significativa de bacterias en orina es
la presencia de maacutes de 105 UFC mL de un solo germen
b) Los recuentos intermedios (103 ndash 104 UFCmL) indican infeccioacuten si el
procedimiento de recoleccioacuten de orina fue realizado correctamente
c) Generalmente el aislamiento de tres o maacutes especies bacterianas indican que la
muestra se ha contaminado por recoleccioacuten inadecuada o demora en la siembra
d) En pacientes con sonda vesical cuentas bacterianas menores de 105 UFCmL
pueden tener significado asiacute tambieacuten se pueden encontrar bacteriurias
polimicrobianas hasta en casi 15 de enfermos
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e) En pacientes sin cateacuteter se puede comprobar si el procedimiento de obtencioacuten
de muestra fue realizado correctamente observando la frecuencia con la cual se
informan recuentos de colonias intermedias entre 103 ndash 104 UFCmL En
pacientes sin infecciones del tracto urinario el recuento es nulo o se reduce a
pocas colonias
IDENTIFICACION BACTERIANA
Lectura de cultivos en agar Mac Conkey
ndash En agar Mc Conkey Escherichia coli lactosa positiva forma colonias de borde
entero de color fucsia opacas de 2 mm ndash 3 mm de diaacutemetro usualmente
rodeadas de una zona opaca alrededor de la colonia (bilis precipitada) Las cepas
de E coli que son lactosa negativa dan colonias incoloras de 3 ndash 4 mm
ndash En agar Mc Conkey K pneumoniae forma colonias de borde entero de color
rosado a rosado oscuro de 3 ndash 4 mm de diaacutemetro y aspecto mucoide
ndash En agar Mc Conkey Enterobacter spp forma colonias de borde entero de color
rosado de 2 ndash 4 mm de diaacutemetro no tan mucoides como K pneumoniae
Las colonias con estas caracteriacutesticas son subcultivadas en medios diferenciales
PRUEBAS BIOQUIMICAS
TSI
Lectura
Es importante hacer la lectura entre las 18 ndash 24 horas para no obtener resultados
erroacuteneos La lectura se hace sobre la base de tres caracteriacutesticas Utilizacioacuten de
hidratos de carbono produccioacuten de gas y produccioacuten de aacutecido sulfhiacutedrico
Utilizacioacuten de hidratos de carbono
ndash Utilizacioacuten de lactosa Reaccioacuten aacutecida en el pico de flauta (color amarillo)
Abreviatura (A)
ndash Utilizacioacuten de glucosa Reaccioacuten aacutecida en la columna del medio (color amarillo)
Abreviatura (A)
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ndash No hay utilizacioacuten del carbohidrato Se puede observar una reaccioacuten alcalina
(color rojo) o que no hay cambio de color (permanece del mismo color que el
medio no inoculado) Abreviaturas (K) o (N) respectivamente
Nota Cuando el microorganismo tambieacuten produce H2S el precipitado negro
puede ocultar la acidez
Produccioacuten de gas de glucosa
ndash Se considera positivo Presencia de una sola burbuja de gas burbujas en el
medio divisioacuten del medio desplazamiento completo del medio del fondo del tubo
dejando un aacuterea clara o una ligera muesca del medio en el costado del tubo
ndash Se registra la lectura por medio de cruces (+)
Produccioacuten de aacutecido sulfhiacutedrico
ndash Se manifiesta por un color negro distribuido por toda la columna del medio de
cultivo o soacutelo en la parte superior
ndash Se registra la lectura por medio de cruces (+)
Resultados
Ejemplo de simbolizacioacuten e interpretacioacuten
KA ndash+ Significa alcalinidad en la inclinacioacuten y acidez en el fondo (fermentacioacuten de
glucosa) gas negativo y H2S positivo
NN ndash ndashSignifica que no hay utilizacioacuten de la lactosa y glucosa ni produccioacuten de
H2S
AGAR LISINA HIERRO
En este medio se determina simultaacuteneamente la produccioacuten de lisina
descarboxilasa y de la formacioacuten de aacutecido sulfhiacutedrico
Lectura
Es importante hacer la lectura entre las 18 ndash 24 horas si la lectura se realiza antes
podemos obtener resultados falsos positivos asiacute como falsos negativos si se lee
despueacutes de las 24 horas Realizar la lectura en la columna y en la superficie
inclinada y observar la formacioacuten de aacutecido sulfhiacutedrico el cual se evidencia por una
coloracioacuten negra
Nota Generalmente las cepas del grupo Proteus y Providencia desaminan la
lisina a aacutecido ndashcetocarboacutenico Este uacuteltimo forma compuestos pardo-rojizos en la
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regioacuten superficial del medio de cultivo con la sal de hierro y bajo la influencia del
oxiacutegeno
Recomendaciones
No incubar maacutes del tiempo necesario para no ocasionar una alcalinizacioacuten en la
superficie del medio y por lo tanto producir un viraje hacia el violeta
UTILIZACIOacuteN DE CITRATO
Para determinar si un microorganismo es capaz de utilizar citrato como uacutenica
fuente de carbono para su metabolismo
Procedimiento
a) Incubar a 35ndash37 degC de 24 horasndash 48 horas En algunos casos es necesario una
incubacioacuten hasta por 4 diacuteas
b) Ver el viraje de color
Resultados
a) Prueba positiva Crecimiento con un color azul intenso en el pico de flauta o
presencia de colonias en ausencia del color azul
b) Prueba negativa No se observa crecimiento ni cambio de color (verde)
Controles
Positivo Enterobacter cloacae
Negativo Escherichia coli
HIDROacuteLISIS DE LA UREA (PRODUCCIOacuteN DE UREASA)
Es uacutetil para determinar la capacidad de un organismo de degradar la urea
formando dos moleacuteculas de amoniaco por accioacuten de la enzima ureasa
Procedimiento
Realizar la lectura despueacutes de 18 horas ndash 24 horas de incubacioacuten observando el
viraje de color
Resultados
Prueba positiva Color rosado intenso en el pico de flauta o todo el agar
Puede haber una reaccioacuten positiva retardada despueacutes de 24 horas y hasta
6 diacuteas de incubacioacuten (algunas cepas de Klebsiella por ejemplo)
Prueba negativa No se produce cambio de color
Controles
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Negativo Escherichia coli
Positivo Klebsiella pneumoniae
MOTILIDAD (MEDIOS SIM O MIO O AGAR MOVILIDAD)
Para determinar si un organismo es moacutevil o inmoacutevil
Procedimiento
Incubar a 35 ndash 37 degC de 24 a 48 horas
Resultados
Positivo Los microorganismos migran de la liacutenea de siembra y se difunden en el
medio provocando turbidez Tambieacuten puede manifestarse semejando
ldquovellosidadesrdquo a lo largo del trazo de siembra
Negativo Se observa un crecimiento bacteriano acentuado siguiendo el trazo de
siembra y el medio circundante se mantiene claro
Controles
Control positivo Escherichia coli
Control negativo Klebsiella pneumoniae
h) Prueba de indol[6]
Es uacutetil para determinar la capacidad de un microorganismo de producir indol a
partir del aminoaacutecido triptoacutefano
Medios y reactivos
Caldo de triptoacutefano o de peptona o caldo de triptona
Reactivo de indol de Kovacs
Procedimiento
Retirar aseacutepticamente 2 mL de caldo de cutivo con 24 horas de incubacioacuten
Agregar 5 gotas de reactivo de Kovacs
Mover suavemente el tubo y realizar la lectura
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ANTIBIOGRAMA
Preparacioacuten del Agar Mueller Hinton
Preparar el medio a partir de la base deshidratada de acuerdo a las
indicaciones del fabricante
Autoclavar y dejar enfriar en bantildeo de agua hasta que alcance los 45degC - 50degC
Repartir el medio en placas petri (60 ml ndash 70 ml o 25 ml ndash 30 ml para placas de
150 mm o 100 mm de diaacutemetro interno respectivamente) de manera que el
grosor del agar en la placa sea de 4 mm
Realizar las pruebas de esterilidad para cada lote de Mueller Hinton incubando
una o dos placas de cada lote a 30degC ndash 35degC durante 24 horas o maacutes Estas
placas utilizadas deben ser luego descartadas
Preparacioacuten del estaacutendar (05 Mc Farland) para el inoacuteculo
Para estandarizar la densidad del inoacuteculo se usa una suspensioacuten de sulfato de
bario (05 de la escala de Mac Farland) como estaacutendar
Preparacioacuten del estaacutendar de turbidez
a Agregar 05 ml de una solucioacuten de BaCl2 0048 M (BaCl22H2O al 1175 PV)
a 995 mL de una solucioacuten de H2SO4 018 M (036 N) (1 VV) en constante
movimiento para mantener la suspensioacuten
b Verificar la densidad correcta del estaacutendar usando un fotocoloriacutemetro oacute
espectrofotoacutemetro cuya absorbancia a 625 nm es 008 a 010 para el estaacutendar 05
de Mc Farland
c Distribuir de 4 ml a 6 ml en tubos con tapa de rosca o tapoacuten de jebe similares a
los que se usaraacuten para preparar el inoacuteculo
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d Ajustar bien las tapas o tapones y conservarlos en la oscuridad a temperatura
ambiente y anotar la fecha de preparacioacuten
e Antes de ser usado agitar vigorosamente dicho estaacutendar de preferencia en un
agitador mecaacutenico
f Verificar mensualmente la densidad de los estaacutendares de sulfato de bario y
reemplazarlo cuando sea necesario
INOCULACIOacuteN
Preparacioacuten del inoacuteculo
Puede realizarse de dos formas
Meacutetodo de desarrollo previo
a Seleccionar cuatro a cinco colonias bien aisladas del mismo tipo morfoloacutegico
de un cultivo en placa
b Tocar la superficie de cada colonia con una asa de siembra y transferirlo a un
tubo que contiene de 4 a 5 mL de caldo apropiado (Ej Caldo Tripticasa soya)
c Incubar el caldo a una temperatura entre 35degC a 37degC hasta que alcance o
exceda la turbidez del estaacutendar 05 de la escala de Mc Farland (por lo general de
2 a 6 horas)
d Ajustar la turbidez del inoacuteculo con solucioacuten salina o caldo apropiado hasta el
tubo 05 de la escala de Mc Farland por comparacioacuten visual con el estaacutendar Para
realizar este paso correctamente usar una luz apropiada y mirar los tubos contra
un fondo blanco con liacuteneas negras como contraste
e La suspensioacuten preparada contendraacute aproximadamente 1 a 2 x 108 UFCmL
Meacutetodo directo de inoculacioacuten a partir de colonias aisladas
a De una placa de cultivo con agar no selectivo e incubada por 18 - 24 h
seleccionar colonias aisladas y preparar una suspensioacutem directa en solucioacuten
salina oacute caldo
b La suspensioacuten debe ser inmediatamente ajustada a la escala 05 de Mc
Farland
Inoculacioacuten de las Placas
Dentro de los 15 minutos siguientes al ajuste de la turbidez del inoacuteculo sumergir
un hisopo esteacuteril en la suspensioacuten rotar el hisopo varias veces presionando
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firmemente sobre la pared interior del tubo por encima del nivel del liacutequido para
remover el exceso de inoacuteculo
Inocular la superficie seca de la placa de Mueller Hinton estriando con el hisopo
en tres direcciones para asegurar una distribucioacuten uniforme del inoacuteculo Antes de
colocar los discos dejar secar la placa a temperatura ambiente durante 3 a 5
minutos para que cualquier exceso de humedad superficial sea absorbido
APLICACIOacuteN DE LOS DISCOS
Colocar los discos individuales o multidiscos sobre la superficie del agar con la
ayuda de una pinza esteacuteril o la punta de una aguja presionando suavemente sobre
cada disco para asegurar un contacto completo con la superficie del agar
Distribuir los discos uniformemente de modo que esteacuten a una distancia miacutenima de
25 mm uno del otro (el diaacutemetro de los discos seguacuten las normas de la
Organizacioacuten Mundial de la Salud (OMS) debe ser de 6 mm) No deben colocarse
maacutes de 12 discos en una placa de 150 mm ni maacutes de 6 en una placa de 100 mm
de diaacutemetro interno para evitar la superposicioacuten de las zonas de inhibicioacuten Un
disco no debe ser removido una vez que tomoacute contacto con la superficie del agar
debido a que algunos antibioacuteticos se difunden raacutepidamente
INCUBACIOacuteN
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Incubar lar placas en posicioacuten invertida a 35degC por 18 a 24 horas dentro de los 15
minutos posteriores a la aplicacioacuten de los discos
Despueacutes del tiempo recomendado de incubacioacuten examinar cada placa y medir los
diaacutemetros de los halos de inhibicioacuten alrededor de cada disco
LECTURA DE LAS PLACAS E INTERPRETACIOacuteN DE LOS RESULTADOS
Medir los diaacutemetros de las zonas de inhibicioacuten completa (incluyendo el diaacutemetro
del disco) usando
una regla o calibrador Se debe mantener iluminada la parte posterior de la placa
petri con una luz reflejada localizada a unos cuantos centiacutemetros sobre un fondo
negro Tener la precaucioacuten de observar la placa siguiendo una vertical directa para
evitar una lectura erroacutenea de las marcas de la regla por efecto de paralelismo En
los medios suplementados con sangre las zonas son medidas en la parte superior
de la superficie del agar y retirando la tapa Tener cuidado de no medir la zona de
la hemoacutelisis sino la de inhibicioacuten del crecimiento
El punto final debe tomarse como el aacuterea que no muestra un crecimiento obvio
visible que puede ser detectado mediante observacioacuten visual no incluyendo velo
de crecimiento o colonias muy pequentildeas que puedan ser detectadas solo con
mucha dificultad en el borde de la zona Sin embargo las colonias mayores
creciendo dentro de la zona clara deberaacuten ser subcultivadas reidentificadas y
reensayadas Algunos Proteus spp debido a su gran movilidad pueden presentar
un velo de invasioacuten o ldquoswarmingrdquo dentro de las zonas de inhibicioacuten de algunos
antibioacuteticos En estos casos el velo del swarming debe ser ignorado al momento
de medir los halos de inhibicioacuten
DISCOS DE SENSIBILIDAD ANTIBIOacuteTICA A INCLUIR EN EL ANTIBIOGRAMA
Grupo I
Ampicilina
Cefalotina
Ampicilina Sulbactam o Amoxicilina Aacutecido Clavulaacutenico
Cefuroxima
Cefotaxima o Ceftriaxona
Gentamicina
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Amikacina
Aacutecido Nalidiacutexico(1)
Norfloxacina(1)
Ciprofloxacina
Cotrimoxazol (TrimetoprimSulfametoxazol)
Nitrofurantoiacutena(1)
Grupo II
Cefoxitina
Aztreonam
Ceftazidima
Cefixima
CefoperazonaSulbactam
Cefepime o Cefpirome
Imipenem o Meropenem
Cloramfenicol
Ofloxacina (1)
(1) Disco utilizado exclusivamente para infecciones de las viacuteas urinarias
Resistencias Naturales
Las enterobacterias son resistentes a Penicilina Oxacilina Macroacutelidos
Clindamicina y Glicopeacuteptidos
Klebsiella spp es resistente a las Aminopenicilinas
Citrobacter freundii Enterobacter cloacae y Enterobacter aerogenes son
resistentes a las Aminopenicilinas AminopenicilinasInhibidores de
betalactamasas Cefalosporinas de primera generacioacuten y Cefuroxima
Serratia marcescens es resistente a las Aminopenicilinas
AminopenicilinasInhibidores de betalactamasas Cefalosporinas de primera
generacioacuten y Cefoxitina
Proteus mirabilis es resistente a Nitrofurantoiacutena
Proteus vulgaris es resistente a las Aminopenicilinas Cefalosporinas de primera
generacioacuten Cefuroxima y Nitrofurantoiacutena
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Morganella morganii es resistente a las Aminopenicilinas
AminopenicilinasInhibidores de betalactamasas Cefalosporinas de primera
generacioacuten Cefuroxima y Nitrofurantoiacutena
Providentia stuartii es resistente a las Aminopenicilinas
AminopenicilinasInhibidores de betalactamasas Cefalosporinas de primera
generacioacuten Gentamicina (bajo nivel) y Nitrofurantoiacutena
ANTIBIOTICOS Y DIAMETROS CRITICOS PARA ENTEROBACTERIAS
E PRACTICA 7
EXAMEN QUIMICO DE CALCULO RENAL
EXAMEN FISICO
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Se debe pesar el caacutelculo y anotar el dato obtenido Medir dos de los diaacutemetros y
tomar nota del aspecto general textura y color y despueacutes de seccionado el
aspecto general la prominencia y el color de los distintos estratos
Se secciona el caacutelculo con una sierra Se raspan las caras con una aguja Se
procede lo mismo con el nuacutecleo Cada una de las muestras obtenidas se trituran
por separado en un mortero
PROCESO
Se coloca una porcioacuten del polvo del caacutelculo en un crisol y se calienta al fuego Si
no hay ennegrecimiento ni se altera el tamantildeo original el caacutelculo estaraacute formado
por sustancias inorgaacutenicas Si en cambio se carboniza desapareciendo estaraacute
formado por sustancias orgaacutenicas Si se funde y se ennegrece este caacutelculo estaacute
formado por sulfamidasa
Una vez obtenidos los datos pueden seleccionarse las reacciones necesarias
para confirmarlos
REACCIONES QUIMICAS
Solucioacuten A
10mg del polvo en matraz y antildeadir 50 ml de ClH 5 Observar si se
produce efervescencia Calentar en bantildeo de agua hirviendo por 10 a 15 minutos y
filtrar en caliente El filtrado se distribuye en 8 tubos numerados y se introduce un
trocito de papel tornasol en cada uno
Solucioacuten B
Agitar con Cl3CH unos 10 mg del polvo Reposar en tubo tapado a
temperatura ambiente hasta que el insoluble haya precipitado Decantar la
solucioacuten clorofoacutermica y guardar igual que el sedimento por separado
Carbonato efervescencia al agregar el CIH por desprendimiento de CO 2
Amonio al tubo 1 de la solucioacuten A se le agrega solucioacuten de OHNa 10 gota a
gota y agitando hasta que el papel tornasol vire
Agregar 1 ml de reactivo de Nessler Un color amarillo oscuro oporto indica
positividad de la reaccioacuten
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El NH 3 formado por los grupos NH 4 en medio alcalino reacciona con el yoiduro
doble del reactivo de Nesler para dar yoduro amoacutenico dimercuacuterico precipitado
pardo anaranjado
Acido uacuterico Neutralizar el contenido del tubo 2 como se explicoacute antes
Agregar igual volumen de CNN Na 2 y 05 ml de reactivo de Folin para aacutecido
uacuterico Un color azul intenso indica presencia de aacutecido uacuterico
El aacutecido uacuterico reduce al aacutecido fosfotuacutengstico en medio alcalino dando color azul
intenso de azul de tungsteno y a su vez se oxida a alantoiacutena
Reactivo fosfotuacutengstico (Folin y Denis) Antes del uso diluir al 10 en agua
destilada
Oxalato de calcio Neutralizar el contenido del tubo 3 Agregar CH 3 COOH 10
hasta reaccioacuten aacutecida al tornasol Precipitado blanco que no se redisuelve por
agitacioacuten indica presencia de oxalato de calcio
Calcio Neutralizar el tubo 4 Acidificar con CH 3 COOH glacial Agregar 2 ml C 2
O 4 ( NH 4 ) 4 Precipitado blancodenso indica presencia de Ca ++
Fosfato Neutralizar el tubo 5 Agregar 1 ml de solucioacuten de molibdato Mezclar
antildeadir 05 ml de aacutecido aminonaftol sulfoacutenico (ANS) 025 Coloracioacuten azul que
aparece en 5 minutos indica fosfatos
El color azul se debe a los oacutexidos reducidos de molibdeno
Reactivos
1 ClH concentrado2 Solucioacuten de OHK 203 NO 3 H concentrado4 Mo O 4 (NH 4 ) 2 disolver 25 g de la droga en 50 ml de SO 4 H 2 10 N y
diluir a 100 ml con H2 O destilada5 Amoniacuteaco
Reactivo ANS En matraz x 250 ml poner 05 g de aacutecido aminonaftolsulfoacutenico y
agrgar 195 ml de bisulfito de sodio 15 y 5 ml de sulfito de sodio 20 Mezclar
bien hasta disolucioacuten Si no se disuelve en media hora agregar maacutes sulfito y
agitar El reactivo dura unas 2 semanas
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Magnesio Neutralizar el tubo 7 con OHNH 4 y antildeadir 1 ml de solucioacuten alcohoacutelica
de p ndash Nitrobenceno azorresorcinol Un cromoacutegeno rojo indica presencia de
magnesio
En medio alcalino se forma (OH) 2 Mg El colorante azo resulta absorbido por el
(OH) 2 Mg en medio alcalino
Xantina A un tercio del residuo de la solucioacuten B agregarle gotas de NO 3 H
concentrado
Se disuelve el residuo sin desprender gas Evaporar a sequedad en bantildeo Mariacutea
hirviente quedando un residuo amarillo Dejar enfriar y humedecer con gotas de
OHNa 10 Una coloracioacuten anaranjada que vira al rojo oscuro al calentar indica
presencia de xantina
La reaccioacuten es la xantoproteica Migracioacuten de los anillos fenilo existentes en la
tirosina fenilalanina y triptoacutefano que da un color amarillo de los productos de
nitrosustitucioacuten para virar al anaranjado tras la adicioacuten de un aacutelcali ( formacioacuten de
la sal)
Nota El reactivo de molibdato se puede preparar asiacute
Solucioacuten 1 SO 4 H 2 01 N
Medir 450 ml de SO4 H 2 concentrado y agregarlos a 1300 ml de agua
destilada
Solucioacuten 2
A 250 ml de SO 4 H 2 01 N antildeadir la solucioacuten de molibdato y llevar con
agua destilada a 250 ml Mezclar
Sulfamidas Neutralizar el uacuteltimo tubo Antildeadir 1 ml de NO 2 Na 05 preparado
recientemente Agitar y reposar por 3 minutos Antildeadir 5 ml de solucioacuten alcohoacutelica
de dimetil-alfa naftilamina 025 Un color rojizo indica presencia de sulfamidas
Finalmente procede hacer mencioacuten de ciertos procedimientos fiacutesicos como la
microscopia de polarizacioacuten difraccioacuten de rayos X cristalografiacutea
espectrofotometriacutea de rayos infrarrojos etc que permiten actualmente un
conocimiento maacutes confiable de la estructura de los caacutelculos
- Reactivos
-
Laboratorio Cliacutenico PAULINA ARROLLO PEREacuteZ
Controlar sexo y edad del paciente y tambieacuten eventual estado de
embarazo
Controlar paraacutemetros del metabolismo muscular (CPK miacuteoglobulina)
DEPURACION DE CREATININA
Generalidad
La cantidad de creatinina excretada con la orina estaacute en relacioacuten con la
filtracioacuten glomerular La creatinina es una sustancia que deriva del
metabolismo muscular (muacutesculo estriado liso y cardiacuteaco) de la creatina
y representa el subproducto de excrecioacuten La produccioacuten de creatinina
es independiente de la dieta y del ejercicio muscular sin embargo es
proporcional dentro de algunos liacutemites a la masa muscular Se libera
desde los glomeacuterulos y no es reabsorbida por los tuacutebulos de los cuales
puede ser excretada especialmente cuando se aumenta la
concentracioacuten hemaacutetica El aumento de la creatinina en el suero
empieza a ser evidente cuando el filtrado glomerular es por debajo de
60 ml por minuto
La medida de la cantidad de creatinina en la orina producida en un
determinado periacuteodo de tiempo simultaacuteneamente a la medida de la
concentracioacuten plasmaacutetica lleva al caacutelculo el aclaramiento de la
creatinina (volumen del plasma en ml que es depurado de la creatinina
en un minuto de tiempo)
C= U x VP (mlmin)
donde
C= aclaramiento
U= concentracioacuten de creatinina en la orina
V= volumen de la orina eliminada
P= concentracioacuten de creatinina en el plasma
Indicaciones
La estrecha correlacioacuten entre la velocidad de filtracioacuten glomerular y el
valor de la creatinina plasmaacutetica y el hecho que la concentracioacuten de la
creatinina hemaacutetica no es influenciada por la dieta hacen de la
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creatinina en particular el aclaramiento de la creatinina un iacutendice de
funcionalidad renal muy sensible y seguramente maacutes significativo que la
urea
El aclaramiento de la creatinina se modifica en relacioacuten con la
enfermedad renal (glomerulonefritis agudas o croacutenicas rintildeoacuten policiacutestico
obstruccioacuten de la viacutea renal)
Preparacioacuten del paciente
Ayuno
Modalidad de la toma de muestra
A) Recoger la orina de 24 horas con el siguiente procedimiento
Para la recoleccioacuten de orina de 24 horas se tiene que utilizar un frasco
de 25 30 litros de boca ancha con tapoacuten de rosca Antildeadir al frasco un
estabilizante si es necesario
Para la recogida de la orina se procede del modo siguiente
a) En el tiempo preestablecido vaciar la vejiga e eliminar toda la
orina
b) Posteriormente comenzar a recoger toda la orina de 24 horas
c) Al cumplir las 24 horas vaciar de nuevo la vejiga y depositar toda
la orina en el frasco Conservar las orinas a 2-4degC
Al finalizar la recoleccioacuten de orina eacutesta debe ser enviada
inmediatamente al laboratorio
B) Cuando se entrega la muestra de orina es necesario efectuar la toma
de muestra de sangre
Transporte
La muestra de orina debe ser transportada de 2-4degC la muestra de
sangre a temperatura ambiente
Conservacioacuten
Centrifugacioacuten y separacioacuten del suero la toma de muestra se puede
conservar por 1 diacutea a temperatura ambiente de 20-25oC 7 diacuteas 2-4oC y
6 meses en congelacioacuten
Conservar las orinas a 2-4degC
Laboratorio Cliacutenico PAULINA ARROLLO PEREacuteZ
Verificacioacuten de la muestra
Verificar que el registro de la toma de muestra esteacute correcto
Metoacutedica de determinacioacuten
Cu x Vmin
Aclaramiento de la creatinina = mdashmdashmdashmdashmdashmdashmdashmdashmdashmdashmdashmdash
Ps
donde
Cu= concentracioacuten de creatinina en la orina expresado en mgdl
Ps = concentracioacuten de creatinina en suero expresado en mgdl
Vmin= volumen por minuto (cantidad de la diuresis entre 1440)
Procedimiento analiacutetico
Ver metoacutedica de la creatinina
Notas sobre la metoacutedica
Linealidad
Referirse a las metoacutedicas de creatinina Es lineal hasta 250 mgdl
Sensibilidad
Referirse a las metoacutedicas de creatinina Su sensibilidad es 01 mgdl
Especificidad
Referirse a las metoacutedicas de creatinina
Las muestras de suero tienen proteiacutenas que pueden reaccionar no
especiacuteficamente con el
meacutetodo Jaffe Es necesario corregir el valor de 03 mgdl para lograr
valores maacutes correctos
Interferencias
Las interferencias significativas se deben
Para las orinas
Presencia de partiacuteculas en suspensioacuten (centrifugar las orinas)
Mala recoleccioacuten de orina
Presencia de bacterias de barbituacutericos de cuerpos cetoacutenicos
Para la sangre
Hemoacutelisis con Hb ge100 gl
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Icteacuterico bilirrubina ge400 mgdl
Lipemia trigliceacuteridos ge20000 mgdl
Acetona ge500 mgdl
Valor de referencia
ge70mlmin
PRACTICA 4
EXAMEN MICROSCOacutePICO DEL SEDIMENTO URINARIO
PROPOacuteSITO
Observar microscoacutepicamente en el sedimento urinario elementos celulares
cilindros cristales paraacutesitos filamentos mucoides y bacterias Con el fin
de sugerir una patologiacutea del tracto urinario u otras enfermedades que esteacuten
en diferente localizacioacuten
MUESTRA REQUERIDA
15 mL de orina
MATERIALES
- Tubos coacutenicos de 15 mL
- Laacuteminas portaobjetos
- Laminillas cubreobjetos
- Marcador para vidrio
- Gradillas para tubos
- Guantes descartables
EQUIPO
- Reloj marcador
- Centriacutefuga
- Microscopio
PROCEDIMIENTO
- Centrifugar durante 5 minutos a 2500 rpm
- Descartar el liacutequido sobrenadante
- Suspender el sedimento urinario golpeando ligeramente con la mano
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- Colocar una gota de sedimento entre un porta y un cubreobjeto
- Observar la preparacioacuten con el objetivo 10x para lograr una visioacuten general del
sedimento
- Identificar los elementos formes a mayor aumento 40x
- Anotar lo observado
FUENTES DE ERROR
- Usar portaobjetos y cubreobjetos sucios
- Desecacioacuten del sedimento urinario
-Tiempo transcurrido desde la toma de la muestra hasta la observacioacuten
microscoacutepica
- Uso excesivo de luz
- Centrifugacioacuten inadecuada
FORMA DE REPORTE
CEacuteLULAS EPITELIALES ESCAMOSAS Y REDONDAS reportar escasas
moderadas o abundantes
GLOacuteBULOS ROJOS Reportar el nuacutemero estimado por campo
LEUCOCITOS Reportar el nuacutemero estimado por campo
CILINDROS se pueden encontrar en la orina los siguientes cilindros
hialinos granulosos finos y gruesos leucocitarios hemaacuteticos grasos y ceacutereos
Reportar el nuacutemero de cilindros observados por campo
FILAMENTOS MUCOIDES reportar escasos moderados o abundantes
CRISTALES se pueden encontrar en la orina los siguientes cristales oxalatos de
calcio acido uacuterico uratos amorfos fosfatos amorfos fosfatos triples urato de
amonio leucina cistina y tirosina
Reportar en la forma siguiente escasos moderados o abundantes
LEVADURAS Reportar escasos moderada y abundantes
PARAacuteSITOS Se pueden encontrar en orina Trichomonas vaginalis Phitirus pubis
huevos y quistes de paraacutesitos por contaminacioacuten con heces
BACTERIAS Reportar la presencia de bacterias moderadas o abundantes
solamente cuando se observen maacutes de 10 leucocitos por campo
Valores de referencia
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CEacuteLULAS EPITELIALES ESCAMOSAS Escasas a moderadas
CEacuteLULAS EPITELIALES REDONDAS No deben observarse
GLOacuteBULOS ROJOS No deben observarse
LEUCOCITOS 0-5 por campo
CILINDROS No deben observarse
FILAMENTOS MUCOIDES No deben observarse
CRISTALES Podriacutean observarse oxalatos uratos y fosfatos amorfos de escasa a
moderada cantidad
LEVADURAS No deben observarse
PARAacuteSITOS No deben observarse
BACTERIAS Escasas o no presentes
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PRACTICA 6
UROCULTIVO Y ANTIBIOGRAMA
OBTENCIOacuteN DE MUESTRA DE ORINA PARA CULTIVO
Condiciones generales
La orina es un excelente medio de cultivo para la proliferacioacuten bacteriana por esta
razoacuten la muestra debe ser procesada dentro de las 2 horas despueacutes de haber
sido obtenida o debe refrigerarse a 4 degC (maacuteximo 24 horas) hasta su
procesamiento
Generalmente el desarrollo de dos o maacutes tipos de colonias (en pacientes sin
sonda vesical) indican que la muestra se ha contaminado por recoleccioacuten
incorrecta o demora en la siembra
OBTENCIOacuteN DE MUESTRA DE ORINA DEL CHORRO MEDIO
Obtencioacuten de muestras de orina en pacientes mujeres Materiales y equipos
a) Guantes de laacutetex esteacuteriles
b) Cinco o maacutes piezas de gasa esteacuteril de tamantildeo adecuado pudiendo
ser de 4rdquo x 4rdquo
c) Jaboacuten
d) Agua tibia esteacuteril
e) Frasco esteacuteril de boca ancha para la muestra de orina
Procedimiento
a) Mantener la privacidad de la paciente
b) Rotular el frasco con el nombre de la paciente fecha de obtencioacuten de la
muestra hora y el procedimiento usado para la obtencioacuten de la muestra
c) Lavarse las manos con jaboacuten y abundante agua
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d) Preparar una pieza de gasa para la limpieza de los genitales externos
humedicieacutendola con agua y una pequentildea cantidad de jaboacuten Preparar dos piezas
maacutes de gasa para el enjuague con agua tibia
e) Separar los labios mayores con dos dedos de una mano y limpiar el aacuterea
expuesta pasando la gasa de adelante hacia atraacutes
f) Descartar la gasa
g) Con otra gasa humedecida enjuagar el aacuterea de adelante hacia atraacutes Repetir el
procedimiento con otra gasa
h) Finalmente secar el aacuterea de adelante hacia atraacutes con un trozo de gasa seca
i) Mantener separados los labios mayores mientras la paciente empieza a orinar
Luego del chorro inicial colocar el frasco esteacuteril para colectar el chorro medio
j) Al terminar la recoleccioacuten tapar el frasco inmediatamente y limpiarle la
superficie
k) Transportar el frasco con la muestra de orina inmediatamente
Obtencioacuten de muestra de orina en pacientes varones
Materiales
a) Guantes de laacutetex
b) Cinco o maacutes piezas de gasa esteacuteril
c) Jaboacuten
d) Agua tibia esteacuteril
e) Frasco esteacuteril de boca ancha para la obtencioacuten de la muestra
Procedimiento
a) Mantener la privacidad del paciente
b) Rotular el frasco con el nombre del paciente fecha de obtencioacuten de la muestra
hora y el procedimiento usado para la obtencioacuten de la muestra
c) Lavarse las manos con jaboacuten y abundante agua
d) Preparar una pieza de gasa con agua y una pequentildea cantidad de jaboacuten
Preparar dos piezas maacutes de gasa para el enjuague con agua tibia
e) Realizar la higiene de los genitales Retraer el prepucio antes de lavar el glande
con la gasa humedecida con jaboacuten Descartar la gasa
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f) Enjuagar el glande usando una gasa huacutemeda Repetir el procedimiento con otra
gasa
g) Secar la zona usando uno o maacutes piezas de gasa seca
h) Indicar al paciente que mantenga el prepucio retirado e inicie la miccioacuten
directamente en un recipiente (orina para descartar)
i) Despueacutes del chorro inicial colocar el frasco esteacuteril para colectar la muestra del
chorro medio
j) Obtenida la muestra tapar el frasco inmediatamente y limpiarle la superficie
k) Transportar el frasco con la muestra de orina inmediatamente al laboratorio
SIEMBRA PRIMARIA DE MUESTRA DE ORINA
Objetivo
Describir el procedimiento para la siembra primaria de muestra de orina
Campo de aplicacioacuten
Se aplica para el cultivo de muestra de orina en el diagnoacutestico bacterioloacutegico de
infecciones del tracto urinario
Materiales y equipos
a) Asa calibrada de platino o descartable de 0001 mL oacute 001 mL
b) Estufa de 35 ndash 37 degC
c) Mechero Bunsen o cabina de flujo laminar
d) Guantes de laacutetex
e) Contenedor de material contaminado
f) Pinza esteacuteril
g) Propipeta o pipetor automaacutetico
h) Medios de cultivo
ndash Placas con agar sangre de carnero (AS)
ndash Placas con agar Mc Conkey (McC)
Procedimiento
a) Mantener las muestras en refrigeracioacuten (4 degC) hasta su procesamiento por
cultivo
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b) Los cultivos deben realizarse en una cabina de bioseguridad o cerca del
mechero Bunsen
c) Las placas con AS y McC que se utilizaraacuten en el urocultivo deben estar a
temperatura ambiente Rotular las placas
d) Si el asa calibrada no es descartable esterilizar el asa de siembra flameacuteandola
en el mechero Bunsen hasta que se ponga rojo vivo Dejar enfriar el asa
e) Tomar el frasco con la muestra de orina abrir la tapa y flamear la boca del
frasco en el mechero Bunsen
f) Tomar la muestra de orina con el asa de siembra esteacuteril introducieacutendola y
sacaacutendola del frasco en forma vertical Tapar el frasco con la muestra
g) Inocular en el centro de la placa con AS a partir del cual se extiende la muestra
hacia delante y hacia atraacutes
h) Luego sin quemar el asa el inoacuteculo se disemina uniformemente con trazos
perpendiculares a la siembra inicial en toda la placa
i) Proceder de la misma forma para el agar Mc Conkey
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Lectura
a) Realizar la evaluacioacuten a las 24 horas si no hay crecimiento bacteriano dejar
incubar hasta las 48 horas
b) La evaluacioacuten consiste en realizar el recuento de colonias cuyo resultado se
multiplica por el factor de dilucioacuten para obtener las UFC por mL
Interpretacioacuten
a) En pacientes sin sonda vesical la cuenta significativa de bacterias en orina es
la presencia de maacutes de 105 UFC mL de un solo germen
b) Los recuentos intermedios (103 ndash 104 UFCmL) indican infeccioacuten si el
procedimiento de recoleccioacuten de orina fue realizado correctamente
c) Generalmente el aislamiento de tres o maacutes especies bacterianas indican que la
muestra se ha contaminado por recoleccioacuten inadecuada o demora en la siembra
d) En pacientes con sonda vesical cuentas bacterianas menores de 105 UFCmL
pueden tener significado asiacute tambieacuten se pueden encontrar bacteriurias
polimicrobianas hasta en casi 15 de enfermos
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e) En pacientes sin cateacuteter se puede comprobar si el procedimiento de obtencioacuten
de muestra fue realizado correctamente observando la frecuencia con la cual se
informan recuentos de colonias intermedias entre 103 ndash 104 UFCmL En
pacientes sin infecciones del tracto urinario el recuento es nulo o se reduce a
pocas colonias
IDENTIFICACION BACTERIANA
Lectura de cultivos en agar Mac Conkey
ndash En agar Mc Conkey Escherichia coli lactosa positiva forma colonias de borde
entero de color fucsia opacas de 2 mm ndash 3 mm de diaacutemetro usualmente
rodeadas de una zona opaca alrededor de la colonia (bilis precipitada) Las cepas
de E coli que son lactosa negativa dan colonias incoloras de 3 ndash 4 mm
ndash En agar Mc Conkey K pneumoniae forma colonias de borde entero de color
rosado a rosado oscuro de 3 ndash 4 mm de diaacutemetro y aspecto mucoide
ndash En agar Mc Conkey Enterobacter spp forma colonias de borde entero de color
rosado de 2 ndash 4 mm de diaacutemetro no tan mucoides como K pneumoniae
Las colonias con estas caracteriacutesticas son subcultivadas en medios diferenciales
PRUEBAS BIOQUIMICAS
TSI
Lectura
Es importante hacer la lectura entre las 18 ndash 24 horas para no obtener resultados
erroacuteneos La lectura se hace sobre la base de tres caracteriacutesticas Utilizacioacuten de
hidratos de carbono produccioacuten de gas y produccioacuten de aacutecido sulfhiacutedrico
Utilizacioacuten de hidratos de carbono
ndash Utilizacioacuten de lactosa Reaccioacuten aacutecida en el pico de flauta (color amarillo)
Abreviatura (A)
ndash Utilizacioacuten de glucosa Reaccioacuten aacutecida en la columna del medio (color amarillo)
Abreviatura (A)
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ndash No hay utilizacioacuten del carbohidrato Se puede observar una reaccioacuten alcalina
(color rojo) o que no hay cambio de color (permanece del mismo color que el
medio no inoculado) Abreviaturas (K) o (N) respectivamente
Nota Cuando el microorganismo tambieacuten produce H2S el precipitado negro
puede ocultar la acidez
Produccioacuten de gas de glucosa
ndash Se considera positivo Presencia de una sola burbuja de gas burbujas en el
medio divisioacuten del medio desplazamiento completo del medio del fondo del tubo
dejando un aacuterea clara o una ligera muesca del medio en el costado del tubo
ndash Se registra la lectura por medio de cruces (+)
Produccioacuten de aacutecido sulfhiacutedrico
ndash Se manifiesta por un color negro distribuido por toda la columna del medio de
cultivo o soacutelo en la parte superior
ndash Se registra la lectura por medio de cruces (+)
Resultados
Ejemplo de simbolizacioacuten e interpretacioacuten
KA ndash+ Significa alcalinidad en la inclinacioacuten y acidez en el fondo (fermentacioacuten de
glucosa) gas negativo y H2S positivo
NN ndash ndashSignifica que no hay utilizacioacuten de la lactosa y glucosa ni produccioacuten de
H2S
AGAR LISINA HIERRO
En este medio se determina simultaacuteneamente la produccioacuten de lisina
descarboxilasa y de la formacioacuten de aacutecido sulfhiacutedrico
Lectura
Es importante hacer la lectura entre las 18 ndash 24 horas si la lectura se realiza antes
podemos obtener resultados falsos positivos asiacute como falsos negativos si se lee
despueacutes de las 24 horas Realizar la lectura en la columna y en la superficie
inclinada y observar la formacioacuten de aacutecido sulfhiacutedrico el cual se evidencia por una
coloracioacuten negra
Nota Generalmente las cepas del grupo Proteus y Providencia desaminan la
lisina a aacutecido ndashcetocarboacutenico Este uacuteltimo forma compuestos pardo-rojizos en la
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regioacuten superficial del medio de cultivo con la sal de hierro y bajo la influencia del
oxiacutegeno
Recomendaciones
No incubar maacutes del tiempo necesario para no ocasionar una alcalinizacioacuten en la
superficie del medio y por lo tanto producir un viraje hacia el violeta
UTILIZACIOacuteN DE CITRATO
Para determinar si un microorganismo es capaz de utilizar citrato como uacutenica
fuente de carbono para su metabolismo
Procedimiento
a) Incubar a 35ndash37 degC de 24 horasndash 48 horas En algunos casos es necesario una
incubacioacuten hasta por 4 diacuteas
b) Ver el viraje de color
Resultados
a) Prueba positiva Crecimiento con un color azul intenso en el pico de flauta o
presencia de colonias en ausencia del color azul
b) Prueba negativa No se observa crecimiento ni cambio de color (verde)
Controles
Positivo Enterobacter cloacae
Negativo Escherichia coli
HIDROacuteLISIS DE LA UREA (PRODUCCIOacuteN DE UREASA)
Es uacutetil para determinar la capacidad de un organismo de degradar la urea
formando dos moleacuteculas de amoniaco por accioacuten de la enzima ureasa
Procedimiento
Realizar la lectura despueacutes de 18 horas ndash 24 horas de incubacioacuten observando el
viraje de color
Resultados
Prueba positiva Color rosado intenso en el pico de flauta o todo el agar
Puede haber una reaccioacuten positiva retardada despueacutes de 24 horas y hasta
6 diacuteas de incubacioacuten (algunas cepas de Klebsiella por ejemplo)
Prueba negativa No se produce cambio de color
Controles
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Negativo Escherichia coli
Positivo Klebsiella pneumoniae
MOTILIDAD (MEDIOS SIM O MIO O AGAR MOVILIDAD)
Para determinar si un organismo es moacutevil o inmoacutevil
Procedimiento
Incubar a 35 ndash 37 degC de 24 a 48 horas
Resultados
Positivo Los microorganismos migran de la liacutenea de siembra y se difunden en el
medio provocando turbidez Tambieacuten puede manifestarse semejando
ldquovellosidadesrdquo a lo largo del trazo de siembra
Negativo Se observa un crecimiento bacteriano acentuado siguiendo el trazo de
siembra y el medio circundante se mantiene claro
Controles
Control positivo Escherichia coli
Control negativo Klebsiella pneumoniae
h) Prueba de indol[6]
Es uacutetil para determinar la capacidad de un microorganismo de producir indol a
partir del aminoaacutecido triptoacutefano
Medios y reactivos
Caldo de triptoacutefano o de peptona o caldo de triptona
Reactivo de indol de Kovacs
Procedimiento
Retirar aseacutepticamente 2 mL de caldo de cutivo con 24 horas de incubacioacuten
Agregar 5 gotas de reactivo de Kovacs
Mover suavemente el tubo y realizar la lectura
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ANTIBIOGRAMA
Preparacioacuten del Agar Mueller Hinton
Preparar el medio a partir de la base deshidratada de acuerdo a las
indicaciones del fabricante
Autoclavar y dejar enfriar en bantildeo de agua hasta que alcance los 45degC - 50degC
Repartir el medio en placas petri (60 ml ndash 70 ml o 25 ml ndash 30 ml para placas de
150 mm o 100 mm de diaacutemetro interno respectivamente) de manera que el
grosor del agar en la placa sea de 4 mm
Realizar las pruebas de esterilidad para cada lote de Mueller Hinton incubando
una o dos placas de cada lote a 30degC ndash 35degC durante 24 horas o maacutes Estas
placas utilizadas deben ser luego descartadas
Preparacioacuten del estaacutendar (05 Mc Farland) para el inoacuteculo
Para estandarizar la densidad del inoacuteculo se usa una suspensioacuten de sulfato de
bario (05 de la escala de Mac Farland) como estaacutendar
Preparacioacuten del estaacutendar de turbidez
a Agregar 05 ml de una solucioacuten de BaCl2 0048 M (BaCl22H2O al 1175 PV)
a 995 mL de una solucioacuten de H2SO4 018 M (036 N) (1 VV) en constante
movimiento para mantener la suspensioacuten
b Verificar la densidad correcta del estaacutendar usando un fotocoloriacutemetro oacute
espectrofotoacutemetro cuya absorbancia a 625 nm es 008 a 010 para el estaacutendar 05
de Mc Farland
c Distribuir de 4 ml a 6 ml en tubos con tapa de rosca o tapoacuten de jebe similares a
los que se usaraacuten para preparar el inoacuteculo
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d Ajustar bien las tapas o tapones y conservarlos en la oscuridad a temperatura
ambiente y anotar la fecha de preparacioacuten
e Antes de ser usado agitar vigorosamente dicho estaacutendar de preferencia en un
agitador mecaacutenico
f Verificar mensualmente la densidad de los estaacutendares de sulfato de bario y
reemplazarlo cuando sea necesario
INOCULACIOacuteN
Preparacioacuten del inoacuteculo
Puede realizarse de dos formas
Meacutetodo de desarrollo previo
a Seleccionar cuatro a cinco colonias bien aisladas del mismo tipo morfoloacutegico
de un cultivo en placa
b Tocar la superficie de cada colonia con una asa de siembra y transferirlo a un
tubo que contiene de 4 a 5 mL de caldo apropiado (Ej Caldo Tripticasa soya)
c Incubar el caldo a una temperatura entre 35degC a 37degC hasta que alcance o
exceda la turbidez del estaacutendar 05 de la escala de Mc Farland (por lo general de
2 a 6 horas)
d Ajustar la turbidez del inoacuteculo con solucioacuten salina o caldo apropiado hasta el
tubo 05 de la escala de Mc Farland por comparacioacuten visual con el estaacutendar Para
realizar este paso correctamente usar una luz apropiada y mirar los tubos contra
un fondo blanco con liacuteneas negras como contraste
e La suspensioacuten preparada contendraacute aproximadamente 1 a 2 x 108 UFCmL
Meacutetodo directo de inoculacioacuten a partir de colonias aisladas
a De una placa de cultivo con agar no selectivo e incubada por 18 - 24 h
seleccionar colonias aisladas y preparar una suspensioacutem directa en solucioacuten
salina oacute caldo
b La suspensioacuten debe ser inmediatamente ajustada a la escala 05 de Mc
Farland
Inoculacioacuten de las Placas
Dentro de los 15 minutos siguientes al ajuste de la turbidez del inoacuteculo sumergir
un hisopo esteacuteril en la suspensioacuten rotar el hisopo varias veces presionando
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firmemente sobre la pared interior del tubo por encima del nivel del liacutequido para
remover el exceso de inoacuteculo
Inocular la superficie seca de la placa de Mueller Hinton estriando con el hisopo
en tres direcciones para asegurar una distribucioacuten uniforme del inoacuteculo Antes de
colocar los discos dejar secar la placa a temperatura ambiente durante 3 a 5
minutos para que cualquier exceso de humedad superficial sea absorbido
APLICACIOacuteN DE LOS DISCOS
Colocar los discos individuales o multidiscos sobre la superficie del agar con la
ayuda de una pinza esteacuteril o la punta de una aguja presionando suavemente sobre
cada disco para asegurar un contacto completo con la superficie del agar
Distribuir los discos uniformemente de modo que esteacuten a una distancia miacutenima de
25 mm uno del otro (el diaacutemetro de los discos seguacuten las normas de la
Organizacioacuten Mundial de la Salud (OMS) debe ser de 6 mm) No deben colocarse
maacutes de 12 discos en una placa de 150 mm ni maacutes de 6 en una placa de 100 mm
de diaacutemetro interno para evitar la superposicioacuten de las zonas de inhibicioacuten Un
disco no debe ser removido una vez que tomoacute contacto con la superficie del agar
debido a que algunos antibioacuteticos se difunden raacutepidamente
INCUBACIOacuteN
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Incubar lar placas en posicioacuten invertida a 35degC por 18 a 24 horas dentro de los 15
minutos posteriores a la aplicacioacuten de los discos
Despueacutes del tiempo recomendado de incubacioacuten examinar cada placa y medir los
diaacutemetros de los halos de inhibicioacuten alrededor de cada disco
LECTURA DE LAS PLACAS E INTERPRETACIOacuteN DE LOS RESULTADOS
Medir los diaacutemetros de las zonas de inhibicioacuten completa (incluyendo el diaacutemetro
del disco) usando
una regla o calibrador Se debe mantener iluminada la parte posterior de la placa
petri con una luz reflejada localizada a unos cuantos centiacutemetros sobre un fondo
negro Tener la precaucioacuten de observar la placa siguiendo una vertical directa para
evitar una lectura erroacutenea de las marcas de la regla por efecto de paralelismo En
los medios suplementados con sangre las zonas son medidas en la parte superior
de la superficie del agar y retirando la tapa Tener cuidado de no medir la zona de
la hemoacutelisis sino la de inhibicioacuten del crecimiento
El punto final debe tomarse como el aacuterea que no muestra un crecimiento obvio
visible que puede ser detectado mediante observacioacuten visual no incluyendo velo
de crecimiento o colonias muy pequentildeas que puedan ser detectadas solo con
mucha dificultad en el borde de la zona Sin embargo las colonias mayores
creciendo dentro de la zona clara deberaacuten ser subcultivadas reidentificadas y
reensayadas Algunos Proteus spp debido a su gran movilidad pueden presentar
un velo de invasioacuten o ldquoswarmingrdquo dentro de las zonas de inhibicioacuten de algunos
antibioacuteticos En estos casos el velo del swarming debe ser ignorado al momento
de medir los halos de inhibicioacuten
DISCOS DE SENSIBILIDAD ANTIBIOacuteTICA A INCLUIR EN EL ANTIBIOGRAMA
Grupo I
Ampicilina
Cefalotina
Ampicilina Sulbactam o Amoxicilina Aacutecido Clavulaacutenico
Cefuroxima
Cefotaxima o Ceftriaxona
Gentamicina
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Amikacina
Aacutecido Nalidiacutexico(1)
Norfloxacina(1)
Ciprofloxacina
Cotrimoxazol (TrimetoprimSulfametoxazol)
Nitrofurantoiacutena(1)
Grupo II
Cefoxitina
Aztreonam
Ceftazidima
Cefixima
CefoperazonaSulbactam
Cefepime o Cefpirome
Imipenem o Meropenem
Cloramfenicol
Ofloxacina (1)
(1) Disco utilizado exclusivamente para infecciones de las viacuteas urinarias
Resistencias Naturales
Las enterobacterias son resistentes a Penicilina Oxacilina Macroacutelidos
Clindamicina y Glicopeacuteptidos
Klebsiella spp es resistente a las Aminopenicilinas
Citrobacter freundii Enterobacter cloacae y Enterobacter aerogenes son
resistentes a las Aminopenicilinas AminopenicilinasInhibidores de
betalactamasas Cefalosporinas de primera generacioacuten y Cefuroxima
Serratia marcescens es resistente a las Aminopenicilinas
AminopenicilinasInhibidores de betalactamasas Cefalosporinas de primera
generacioacuten y Cefoxitina
Proteus mirabilis es resistente a Nitrofurantoiacutena
Proteus vulgaris es resistente a las Aminopenicilinas Cefalosporinas de primera
generacioacuten Cefuroxima y Nitrofurantoiacutena
Laboratorio Cliacutenico PAULINA ARROLLO PEREacuteZ
Morganella morganii es resistente a las Aminopenicilinas
AminopenicilinasInhibidores de betalactamasas Cefalosporinas de primera
generacioacuten Cefuroxima y Nitrofurantoiacutena
Providentia stuartii es resistente a las Aminopenicilinas
AminopenicilinasInhibidores de betalactamasas Cefalosporinas de primera
generacioacuten Gentamicina (bajo nivel) y Nitrofurantoiacutena
ANTIBIOTICOS Y DIAMETROS CRITICOS PARA ENTEROBACTERIAS
E PRACTICA 7
EXAMEN QUIMICO DE CALCULO RENAL
EXAMEN FISICO
Laboratorio Cliacutenico PAULINA ARROLLO PEREacuteZ
Se debe pesar el caacutelculo y anotar el dato obtenido Medir dos de los diaacutemetros y
tomar nota del aspecto general textura y color y despueacutes de seccionado el
aspecto general la prominencia y el color de los distintos estratos
Se secciona el caacutelculo con una sierra Se raspan las caras con una aguja Se
procede lo mismo con el nuacutecleo Cada una de las muestras obtenidas se trituran
por separado en un mortero
PROCESO
Se coloca una porcioacuten del polvo del caacutelculo en un crisol y se calienta al fuego Si
no hay ennegrecimiento ni se altera el tamantildeo original el caacutelculo estaraacute formado
por sustancias inorgaacutenicas Si en cambio se carboniza desapareciendo estaraacute
formado por sustancias orgaacutenicas Si se funde y se ennegrece este caacutelculo estaacute
formado por sulfamidasa
Una vez obtenidos los datos pueden seleccionarse las reacciones necesarias
para confirmarlos
REACCIONES QUIMICAS
Solucioacuten A
10mg del polvo en matraz y antildeadir 50 ml de ClH 5 Observar si se
produce efervescencia Calentar en bantildeo de agua hirviendo por 10 a 15 minutos y
filtrar en caliente El filtrado se distribuye en 8 tubos numerados y se introduce un
trocito de papel tornasol en cada uno
Solucioacuten B
Agitar con Cl3CH unos 10 mg del polvo Reposar en tubo tapado a
temperatura ambiente hasta que el insoluble haya precipitado Decantar la
solucioacuten clorofoacutermica y guardar igual que el sedimento por separado
Carbonato efervescencia al agregar el CIH por desprendimiento de CO 2
Amonio al tubo 1 de la solucioacuten A se le agrega solucioacuten de OHNa 10 gota a
gota y agitando hasta que el papel tornasol vire
Agregar 1 ml de reactivo de Nessler Un color amarillo oscuro oporto indica
positividad de la reaccioacuten
Laboratorio Cliacutenico PAULINA ARROLLO PEREacuteZ
El NH 3 formado por los grupos NH 4 en medio alcalino reacciona con el yoiduro
doble del reactivo de Nesler para dar yoduro amoacutenico dimercuacuterico precipitado
pardo anaranjado
Acido uacuterico Neutralizar el contenido del tubo 2 como se explicoacute antes
Agregar igual volumen de CNN Na 2 y 05 ml de reactivo de Folin para aacutecido
uacuterico Un color azul intenso indica presencia de aacutecido uacuterico
El aacutecido uacuterico reduce al aacutecido fosfotuacutengstico en medio alcalino dando color azul
intenso de azul de tungsteno y a su vez se oxida a alantoiacutena
Reactivo fosfotuacutengstico (Folin y Denis) Antes del uso diluir al 10 en agua
destilada
Oxalato de calcio Neutralizar el contenido del tubo 3 Agregar CH 3 COOH 10
hasta reaccioacuten aacutecida al tornasol Precipitado blanco que no se redisuelve por
agitacioacuten indica presencia de oxalato de calcio
Calcio Neutralizar el tubo 4 Acidificar con CH 3 COOH glacial Agregar 2 ml C 2
O 4 ( NH 4 ) 4 Precipitado blancodenso indica presencia de Ca ++
Fosfato Neutralizar el tubo 5 Agregar 1 ml de solucioacuten de molibdato Mezclar
antildeadir 05 ml de aacutecido aminonaftol sulfoacutenico (ANS) 025 Coloracioacuten azul que
aparece en 5 minutos indica fosfatos
El color azul se debe a los oacutexidos reducidos de molibdeno
Reactivos
1 ClH concentrado2 Solucioacuten de OHK 203 NO 3 H concentrado4 Mo O 4 (NH 4 ) 2 disolver 25 g de la droga en 50 ml de SO 4 H 2 10 N y
diluir a 100 ml con H2 O destilada5 Amoniacuteaco
Reactivo ANS En matraz x 250 ml poner 05 g de aacutecido aminonaftolsulfoacutenico y
agrgar 195 ml de bisulfito de sodio 15 y 5 ml de sulfito de sodio 20 Mezclar
bien hasta disolucioacuten Si no se disuelve en media hora agregar maacutes sulfito y
agitar El reactivo dura unas 2 semanas
Laboratorio Cliacutenico PAULINA ARROLLO PEREacuteZ
Magnesio Neutralizar el tubo 7 con OHNH 4 y antildeadir 1 ml de solucioacuten alcohoacutelica
de p ndash Nitrobenceno azorresorcinol Un cromoacutegeno rojo indica presencia de
magnesio
En medio alcalino se forma (OH) 2 Mg El colorante azo resulta absorbido por el
(OH) 2 Mg en medio alcalino
Xantina A un tercio del residuo de la solucioacuten B agregarle gotas de NO 3 H
concentrado
Se disuelve el residuo sin desprender gas Evaporar a sequedad en bantildeo Mariacutea
hirviente quedando un residuo amarillo Dejar enfriar y humedecer con gotas de
OHNa 10 Una coloracioacuten anaranjada que vira al rojo oscuro al calentar indica
presencia de xantina
La reaccioacuten es la xantoproteica Migracioacuten de los anillos fenilo existentes en la
tirosina fenilalanina y triptoacutefano que da un color amarillo de los productos de
nitrosustitucioacuten para virar al anaranjado tras la adicioacuten de un aacutelcali ( formacioacuten de
la sal)
Nota El reactivo de molibdato se puede preparar asiacute
Solucioacuten 1 SO 4 H 2 01 N
Medir 450 ml de SO4 H 2 concentrado y agregarlos a 1300 ml de agua
destilada
Solucioacuten 2
A 250 ml de SO 4 H 2 01 N antildeadir la solucioacuten de molibdato y llevar con
agua destilada a 250 ml Mezclar
Sulfamidas Neutralizar el uacuteltimo tubo Antildeadir 1 ml de NO 2 Na 05 preparado
recientemente Agitar y reposar por 3 minutos Antildeadir 5 ml de solucioacuten alcohoacutelica
de dimetil-alfa naftilamina 025 Un color rojizo indica presencia de sulfamidas
Finalmente procede hacer mencioacuten de ciertos procedimientos fiacutesicos como la
microscopia de polarizacioacuten difraccioacuten de rayos X cristalografiacutea
espectrofotometriacutea de rayos infrarrojos etc que permiten actualmente un
conocimiento maacutes confiable de la estructura de los caacutelculos
- Reactivos
-
Laboratorio Cliacutenico PAULINA ARROLLO PEREacuteZ
creatinina en particular el aclaramiento de la creatinina un iacutendice de
funcionalidad renal muy sensible y seguramente maacutes significativo que la
urea
El aclaramiento de la creatinina se modifica en relacioacuten con la
enfermedad renal (glomerulonefritis agudas o croacutenicas rintildeoacuten policiacutestico
obstruccioacuten de la viacutea renal)
Preparacioacuten del paciente
Ayuno
Modalidad de la toma de muestra
A) Recoger la orina de 24 horas con el siguiente procedimiento
Para la recoleccioacuten de orina de 24 horas se tiene que utilizar un frasco
de 25 30 litros de boca ancha con tapoacuten de rosca Antildeadir al frasco un
estabilizante si es necesario
Para la recogida de la orina se procede del modo siguiente
a) En el tiempo preestablecido vaciar la vejiga e eliminar toda la
orina
b) Posteriormente comenzar a recoger toda la orina de 24 horas
c) Al cumplir las 24 horas vaciar de nuevo la vejiga y depositar toda
la orina en el frasco Conservar las orinas a 2-4degC
Al finalizar la recoleccioacuten de orina eacutesta debe ser enviada
inmediatamente al laboratorio
B) Cuando se entrega la muestra de orina es necesario efectuar la toma
de muestra de sangre
Transporte
La muestra de orina debe ser transportada de 2-4degC la muestra de
sangre a temperatura ambiente
Conservacioacuten
Centrifugacioacuten y separacioacuten del suero la toma de muestra se puede
conservar por 1 diacutea a temperatura ambiente de 20-25oC 7 diacuteas 2-4oC y
6 meses en congelacioacuten
Conservar las orinas a 2-4degC
Laboratorio Cliacutenico PAULINA ARROLLO PEREacuteZ
Verificacioacuten de la muestra
Verificar que el registro de la toma de muestra esteacute correcto
Metoacutedica de determinacioacuten
Cu x Vmin
Aclaramiento de la creatinina = mdashmdashmdashmdashmdashmdashmdashmdashmdashmdashmdashmdash
Ps
donde
Cu= concentracioacuten de creatinina en la orina expresado en mgdl
Ps = concentracioacuten de creatinina en suero expresado en mgdl
Vmin= volumen por minuto (cantidad de la diuresis entre 1440)
Procedimiento analiacutetico
Ver metoacutedica de la creatinina
Notas sobre la metoacutedica
Linealidad
Referirse a las metoacutedicas de creatinina Es lineal hasta 250 mgdl
Sensibilidad
Referirse a las metoacutedicas de creatinina Su sensibilidad es 01 mgdl
Especificidad
Referirse a las metoacutedicas de creatinina
Las muestras de suero tienen proteiacutenas que pueden reaccionar no
especiacuteficamente con el
meacutetodo Jaffe Es necesario corregir el valor de 03 mgdl para lograr
valores maacutes correctos
Interferencias
Las interferencias significativas se deben
Para las orinas
Presencia de partiacuteculas en suspensioacuten (centrifugar las orinas)
Mala recoleccioacuten de orina
Presencia de bacterias de barbituacutericos de cuerpos cetoacutenicos
Para la sangre
Hemoacutelisis con Hb ge100 gl
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Icteacuterico bilirrubina ge400 mgdl
Lipemia trigliceacuteridos ge20000 mgdl
Acetona ge500 mgdl
Valor de referencia
ge70mlmin
PRACTICA 4
EXAMEN MICROSCOacutePICO DEL SEDIMENTO URINARIO
PROPOacuteSITO
Observar microscoacutepicamente en el sedimento urinario elementos celulares
cilindros cristales paraacutesitos filamentos mucoides y bacterias Con el fin
de sugerir una patologiacutea del tracto urinario u otras enfermedades que esteacuten
en diferente localizacioacuten
MUESTRA REQUERIDA
15 mL de orina
MATERIALES
- Tubos coacutenicos de 15 mL
- Laacuteminas portaobjetos
- Laminillas cubreobjetos
- Marcador para vidrio
- Gradillas para tubos
- Guantes descartables
EQUIPO
- Reloj marcador
- Centriacutefuga
- Microscopio
PROCEDIMIENTO
- Centrifugar durante 5 minutos a 2500 rpm
- Descartar el liacutequido sobrenadante
- Suspender el sedimento urinario golpeando ligeramente con la mano
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- Colocar una gota de sedimento entre un porta y un cubreobjeto
- Observar la preparacioacuten con el objetivo 10x para lograr una visioacuten general del
sedimento
- Identificar los elementos formes a mayor aumento 40x
- Anotar lo observado
FUENTES DE ERROR
- Usar portaobjetos y cubreobjetos sucios
- Desecacioacuten del sedimento urinario
-Tiempo transcurrido desde la toma de la muestra hasta la observacioacuten
microscoacutepica
- Uso excesivo de luz
- Centrifugacioacuten inadecuada
FORMA DE REPORTE
CEacuteLULAS EPITELIALES ESCAMOSAS Y REDONDAS reportar escasas
moderadas o abundantes
GLOacuteBULOS ROJOS Reportar el nuacutemero estimado por campo
LEUCOCITOS Reportar el nuacutemero estimado por campo
CILINDROS se pueden encontrar en la orina los siguientes cilindros
hialinos granulosos finos y gruesos leucocitarios hemaacuteticos grasos y ceacutereos
Reportar el nuacutemero de cilindros observados por campo
FILAMENTOS MUCOIDES reportar escasos moderados o abundantes
CRISTALES se pueden encontrar en la orina los siguientes cristales oxalatos de
calcio acido uacuterico uratos amorfos fosfatos amorfos fosfatos triples urato de
amonio leucina cistina y tirosina
Reportar en la forma siguiente escasos moderados o abundantes
LEVADURAS Reportar escasos moderada y abundantes
PARAacuteSITOS Se pueden encontrar en orina Trichomonas vaginalis Phitirus pubis
huevos y quistes de paraacutesitos por contaminacioacuten con heces
BACTERIAS Reportar la presencia de bacterias moderadas o abundantes
solamente cuando se observen maacutes de 10 leucocitos por campo
Valores de referencia
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CEacuteLULAS EPITELIALES ESCAMOSAS Escasas a moderadas
CEacuteLULAS EPITELIALES REDONDAS No deben observarse
GLOacuteBULOS ROJOS No deben observarse
LEUCOCITOS 0-5 por campo
CILINDROS No deben observarse
FILAMENTOS MUCOIDES No deben observarse
CRISTALES Podriacutean observarse oxalatos uratos y fosfatos amorfos de escasa a
moderada cantidad
LEVADURAS No deben observarse
PARAacuteSITOS No deben observarse
BACTERIAS Escasas o no presentes
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PRACTICA 6
UROCULTIVO Y ANTIBIOGRAMA
OBTENCIOacuteN DE MUESTRA DE ORINA PARA CULTIVO
Condiciones generales
La orina es un excelente medio de cultivo para la proliferacioacuten bacteriana por esta
razoacuten la muestra debe ser procesada dentro de las 2 horas despueacutes de haber
sido obtenida o debe refrigerarse a 4 degC (maacuteximo 24 horas) hasta su
procesamiento
Generalmente el desarrollo de dos o maacutes tipos de colonias (en pacientes sin
sonda vesical) indican que la muestra se ha contaminado por recoleccioacuten
incorrecta o demora en la siembra
OBTENCIOacuteN DE MUESTRA DE ORINA DEL CHORRO MEDIO
Obtencioacuten de muestras de orina en pacientes mujeres Materiales y equipos
a) Guantes de laacutetex esteacuteriles
b) Cinco o maacutes piezas de gasa esteacuteril de tamantildeo adecuado pudiendo
ser de 4rdquo x 4rdquo
c) Jaboacuten
d) Agua tibia esteacuteril
e) Frasco esteacuteril de boca ancha para la muestra de orina
Procedimiento
a) Mantener la privacidad de la paciente
b) Rotular el frasco con el nombre de la paciente fecha de obtencioacuten de la
muestra hora y el procedimiento usado para la obtencioacuten de la muestra
c) Lavarse las manos con jaboacuten y abundante agua
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d) Preparar una pieza de gasa para la limpieza de los genitales externos
humedicieacutendola con agua y una pequentildea cantidad de jaboacuten Preparar dos piezas
maacutes de gasa para el enjuague con agua tibia
e) Separar los labios mayores con dos dedos de una mano y limpiar el aacuterea
expuesta pasando la gasa de adelante hacia atraacutes
f) Descartar la gasa
g) Con otra gasa humedecida enjuagar el aacuterea de adelante hacia atraacutes Repetir el
procedimiento con otra gasa
h) Finalmente secar el aacuterea de adelante hacia atraacutes con un trozo de gasa seca
i) Mantener separados los labios mayores mientras la paciente empieza a orinar
Luego del chorro inicial colocar el frasco esteacuteril para colectar el chorro medio
j) Al terminar la recoleccioacuten tapar el frasco inmediatamente y limpiarle la
superficie
k) Transportar el frasco con la muestra de orina inmediatamente
Obtencioacuten de muestra de orina en pacientes varones
Materiales
a) Guantes de laacutetex
b) Cinco o maacutes piezas de gasa esteacuteril
c) Jaboacuten
d) Agua tibia esteacuteril
e) Frasco esteacuteril de boca ancha para la obtencioacuten de la muestra
Procedimiento
a) Mantener la privacidad del paciente
b) Rotular el frasco con el nombre del paciente fecha de obtencioacuten de la muestra
hora y el procedimiento usado para la obtencioacuten de la muestra
c) Lavarse las manos con jaboacuten y abundante agua
d) Preparar una pieza de gasa con agua y una pequentildea cantidad de jaboacuten
Preparar dos piezas maacutes de gasa para el enjuague con agua tibia
e) Realizar la higiene de los genitales Retraer el prepucio antes de lavar el glande
con la gasa humedecida con jaboacuten Descartar la gasa
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f) Enjuagar el glande usando una gasa huacutemeda Repetir el procedimiento con otra
gasa
g) Secar la zona usando uno o maacutes piezas de gasa seca
h) Indicar al paciente que mantenga el prepucio retirado e inicie la miccioacuten
directamente en un recipiente (orina para descartar)
i) Despueacutes del chorro inicial colocar el frasco esteacuteril para colectar la muestra del
chorro medio
j) Obtenida la muestra tapar el frasco inmediatamente y limpiarle la superficie
k) Transportar el frasco con la muestra de orina inmediatamente al laboratorio
SIEMBRA PRIMARIA DE MUESTRA DE ORINA
Objetivo
Describir el procedimiento para la siembra primaria de muestra de orina
Campo de aplicacioacuten
Se aplica para el cultivo de muestra de orina en el diagnoacutestico bacterioloacutegico de
infecciones del tracto urinario
Materiales y equipos
a) Asa calibrada de platino o descartable de 0001 mL oacute 001 mL
b) Estufa de 35 ndash 37 degC
c) Mechero Bunsen o cabina de flujo laminar
d) Guantes de laacutetex
e) Contenedor de material contaminado
f) Pinza esteacuteril
g) Propipeta o pipetor automaacutetico
h) Medios de cultivo
ndash Placas con agar sangre de carnero (AS)
ndash Placas con agar Mc Conkey (McC)
Procedimiento
a) Mantener las muestras en refrigeracioacuten (4 degC) hasta su procesamiento por
cultivo
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b) Los cultivos deben realizarse en una cabina de bioseguridad o cerca del
mechero Bunsen
c) Las placas con AS y McC que se utilizaraacuten en el urocultivo deben estar a
temperatura ambiente Rotular las placas
d) Si el asa calibrada no es descartable esterilizar el asa de siembra flameacuteandola
en el mechero Bunsen hasta que se ponga rojo vivo Dejar enfriar el asa
e) Tomar el frasco con la muestra de orina abrir la tapa y flamear la boca del
frasco en el mechero Bunsen
f) Tomar la muestra de orina con el asa de siembra esteacuteril introducieacutendola y
sacaacutendola del frasco en forma vertical Tapar el frasco con la muestra
g) Inocular en el centro de la placa con AS a partir del cual se extiende la muestra
hacia delante y hacia atraacutes
h) Luego sin quemar el asa el inoacuteculo se disemina uniformemente con trazos
perpendiculares a la siembra inicial en toda la placa
i) Proceder de la misma forma para el agar Mc Conkey
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Lectura
a) Realizar la evaluacioacuten a las 24 horas si no hay crecimiento bacteriano dejar
incubar hasta las 48 horas
b) La evaluacioacuten consiste en realizar el recuento de colonias cuyo resultado se
multiplica por el factor de dilucioacuten para obtener las UFC por mL
Interpretacioacuten
a) En pacientes sin sonda vesical la cuenta significativa de bacterias en orina es
la presencia de maacutes de 105 UFC mL de un solo germen
b) Los recuentos intermedios (103 ndash 104 UFCmL) indican infeccioacuten si el
procedimiento de recoleccioacuten de orina fue realizado correctamente
c) Generalmente el aislamiento de tres o maacutes especies bacterianas indican que la
muestra se ha contaminado por recoleccioacuten inadecuada o demora en la siembra
d) En pacientes con sonda vesical cuentas bacterianas menores de 105 UFCmL
pueden tener significado asiacute tambieacuten se pueden encontrar bacteriurias
polimicrobianas hasta en casi 15 de enfermos
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e) En pacientes sin cateacuteter se puede comprobar si el procedimiento de obtencioacuten
de muestra fue realizado correctamente observando la frecuencia con la cual se
informan recuentos de colonias intermedias entre 103 ndash 104 UFCmL En
pacientes sin infecciones del tracto urinario el recuento es nulo o se reduce a
pocas colonias
IDENTIFICACION BACTERIANA
Lectura de cultivos en agar Mac Conkey
ndash En agar Mc Conkey Escherichia coli lactosa positiva forma colonias de borde
entero de color fucsia opacas de 2 mm ndash 3 mm de diaacutemetro usualmente
rodeadas de una zona opaca alrededor de la colonia (bilis precipitada) Las cepas
de E coli que son lactosa negativa dan colonias incoloras de 3 ndash 4 mm
ndash En agar Mc Conkey K pneumoniae forma colonias de borde entero de color
rosado a rosado oscuro de 3 ndash 4 mm de diaacutemetro y aspecto mucoide
ndash En agar Mc Conkey Enterobacter spp forma colonias de borde entero de color
rosado de 2 ndash 4 mm de diaacutemetro no tan mucoides como K pneumoniae
Las colonias con estas caracteriacutesticas son subcultivadas en medios diferenciales
PRUEBAS BIOQUIMICAS
TSI
Lectura
Es importante hacer la lectura entre las 18 ndash 24 horas para no obtener resultados
erroacuteneos La lectura se hace sobre la base de tres caracteriacutesticas Utilizacioacuten de
hidratos de carbono produccioacuten de gas y produccioacuten de aacutecido sulfhiacutedrico
Utilizacioacuten de hidratos de carbono
ndash Utilizacioacuten de lactosa Reaccioacuten aacutecida en el pico de flauta (color amarillo)
Abreviatura (A)
ndash Utilizacioacuten de glucosa Reaccioacuten aacutecida en la columna del medio (color amarillo)
Abreviatura (A)
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ndash No hay utilizacioacuten del carbohidrato Se puede observar una reaccioacuten alcalina
(color rojo) o que no hay cambio de color (permanece del mismo color que el
medio no inoculado) Abreviaturas (K) o (N) respectivamente
Nota Cuando el microorganismo tambieacuten produce H2S el precipitado negro
puede ocultar la acidez
Produccioacuten de gas de glucosa
ndash Se considera positivo Presencia de una sola burbuja de gas burbujas en el
medio divisioacuten del medio desplazamiento completo del medio del fondo del tubo
dejando un aacuterea clara o una ligera muesca del medio en el costado del tubo
ndash Se registra la lectura por medio de cruces (+)
Produccioacuten de aacutecido sulfhiacutedrico
ndash Se manifiesta por un color negro distribuido por toda la columna del medio de
cultivo o soacutelo en la parte superior
ndash Se registra la lectura por medio de cruces (+)
Resultados
Ejemplo de simbolizacioacuten e interpretacioacuten
KA ndash+ Significa alcalinidad en la inclinacioacuten y acidez en el fondo (fermentacioacuten de
glucosa) gas negativo y H2S positivo
NN ndash ndashSignifica que no hay utilizacioacuten de la lactosa y glucosa ni produccioacuten de
H2S
AGAR LISINA HIERRO
En este medio se determina simultaacuteneamente la produccioacuten de lisina
descarboxilasa y de la formacioacuten de aacutecido sulfhiacutedrico
Lectura
Es importante hacer la lectura entre las 18 ndash 24 horas si la lectura se realiza antes
podemos obtener resultados falsos positivos asiacute como falsos negativos si se lee
despueacutes de las 24 horas Realizar la lectura en la columna y en la superficie
inclinada y observar la formacioacuten de aacutecido sulfhiacutedrico el cual se evidencia por una
coloracioacuten negra
Nota Generalmente las cepas del grupo Proteus y Providencia desaminan la
lisina a aacutecido ndashcetocarboacutenico Este uacuteltimo forma compuestos pardo-rojizos en la
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regioacuten superficial del medio de cultivo con la sal de hierro y bajo la influencia del
oxiacutegeno
Recomendaciones
No incubar maacutes del tiempo necesario para no ocasionar una alcalinizacioacuten en la
superficie del medio y por lo tanto producir un viraje hacia el violeta
UTILIZACIOacuteN DE CITRATO
Para determinar si un microorganismo es capaz de utilizar citrato como uacutenica
fuente de carbono para su metabolismo
Procedimiento
a) Incubar a 35ndash37 degC de 24 horasndash 48 horas En algunos casos es necesario una
incubacioacuten hasta por 4 diacuteas
b) Ver el viraje de color
Resultados
a) Prueba positiva Crecimiento con un color azul intenso en el pico de flauta o
presencia de colonias en ausencia del color azul
b) Prueba negativa No se observa crecimiento ni cambio de color (verde)
Controles
Positivo Enterobacter cloacae
Negativo Escherichia coli
HIDROacuteLISIS DE LA UREA (PRODUCCIOacuteN DE UREASA)
Es uacutetil para determinar la capacidad de un organismo de degradar la urea
formando dos moleacuteculas de amoniaco por accioacuten de la enzima ureasa
Procedimiento
Realizar la lectura despueacutes de 18 horas ndash 24 horas de incubacioacuten observando el
viraje de color
Resultados
Prueba positiva Color rosado intenso en el pico de flauta o todo el agar
Puede haber una reaccioacuten positiva retardada despueacutes de 24 horas y hasta
6 diacuteas de incubacioacuten (algunas cepas de Klebsiella por ejemplo)
Prueba negativa No se produce cambio de color
Controles
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Negativo Escherichia coli
Positivo Klebsiella pneumoniae
MOTILIDAD (MEDIOS SIM O MIO O AGAR MOVILIDAD)
Para determinar si un organismo es moacutevil o inmoacutevil
Procedimiento
Incubar a 35 ndash 37 degC de 24 a 48 horas
Resultados
Positivo Los microorganismos migran de la liacutenea de siembra y se difunden en el
medio provocando turbidez Tambieacuten puede manifestarse semejando
ldquovellosidadesrdquo a lo largo del trazo de siembra
Negativo Se observa un crecimiento bacteriano acentuado siguiendo el trazo de
siembra y el medio circundante se mantiene claro
Controles
Control positivo Escherichia coli
Control negativo Klebsiella pneumoniae
h) Prueba de indol[6]
Es uacutetil para determinar la capacidad de un microorganismo de producir indol a
partir del aminoaacutecido triptoacutefano
Medios y reactivos
Caldo de triptoacutefano o de peptona o caldo de triptona
Reactivo de indol de Kovacs
Procedimiento
Retirar aseacutepticamente 2 mL de caldo de cutivo con 24 horas de incubacioacuten
Agregar 5 gotas de reactivo de Kovacs
Mover suavemente el tubo y realizar la lectura
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ANTIBIOGRAMA
Preparacioacuten del Agar Mueller Hinton
Preparar el medio a partir de la base deshidratada de acuerdo a las
indicaciones del fabricante
Autoclavar y dejar enfriar en bantildeo de agua hasta que alcance los 45degC - 50degC
Repartir el medio en placas petri (60 ml ndash 70 ml o 25 ml ndash 30 ml para placas de
150 mm o 100 mm de diaacutemetro interno respectivamente) de manera que el
grosor del agar en la placa sea de 4 mm
Realizar las pruebas de esterilidad para cada lote de Mueller Hinton incubando
una o dos placas de cada lote a 30degC ndash 35degC durante 24 horas o maacutes Estas
placas utilizadas deben ser luego descartadas
Preparacioacuten del estaacutendar (05 Mc Farland) para el inoacuteculo
Para estandarizar la densidad del inoacuteculo se usa una suspensioacuten de sulfato de
bario (05 de la escala de Mac Farland) como estaacutendar
Preparacioacuten del estaacutendar de turbidez
a Agregar 05 ml de una solucioacuten de BaCl2 0048 M (BaCl22H2O al 1175 PV)
a 995 mL de una solucioacuten de H2SO4 018 M (036 N) (1 VV) en constante
movimiento para mantener la suspensioacuten
b Verificar la densidad correcta del estaacutendar usando un fotocoloriacutemetro oacute
espectrofotoacutemetro cuya absorbancia a 625 nm es 008 a 010 para el estaacutendar 05
de Mc Farland
c Distribuir de 4 ml a 6 ml en tubos con tapa de rosca o tapoacuten de jebe similares a
los que se usaraacuten para preparar el inoacuteculo
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d Ajustar bien las tapas o tapones y conservarlos en la oscuridad a temperatura
ambiente y anotar la fecha de preparacioacuten
e Antes de ser usado agitar vigorosamente dicho estaacutendar de preferencia en un
agitador mecaacutenico
f Verificar mensualmente la densidad de los estaacutendares de sulfato de bario y
reemplazarlo cuando sea necesario
INOCULACIOacuteN
Preparacioacuten del inoacuteculo
Puede realizarse de dos formas
Meacutetodo de desarrollo previo
a Seleccionar cuatro a cinco colonias bien aisladas del mismo tipo morfoloacutegico
de un cultivo en placa
b Tocar la superficie de cada colonia con una asa de siembra y transferirlo a un
tubo que contiene de 4 a 5 mL de caldo apropiado (Ej Caldo Tripticasa soya)
c Incubar el caldo a una temperatura entre 35degC a 37degC hasta que alcance o
exceda la turbidez del estaacutendar 05 de la escala de Mc Farland (por lo general de
2 a 6 horas)
d Ajustar la turbidez del inoacuteculo con solucioacuten salina o caldo apropiado hasta el
tubo 05 de la escala de Mc Farland por comparacioacuten visual con el estaacutendar Para
realizar este paso correctamente usar una luz apropiada y mirar los tubos contra
un fondo blanco con liacuteneas negras como contraste
e La suspensioacuten preparada contendraacute aproximadamente 1 a 2 x 108 UFCmL
Meacutetodo directo de inoculacioacuten a partir de colonias aisladas
a De una placa de cultivo con agar no selectivo e incubada por 18 - 24 h
seleccionar colonias aisladas y preparar una suspensioacutem directa en solucioacuten
salina oacute caldo
b La suspensioacuten debe ser inmediatamente ajustada a la escala 05 de Mc
Farland
Inoculacioacuten de las Placas
Dentro de los 15 minutos siguientes al ajuste de la turbidez del inoacuteculo sumergir
un hisopo esteacuteril en la suspensioacuten rotar el hisopo varias veces presionando
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firmemente sobre la pared interior del tubo por encima del nivel del liacutequido para
remover el exceso de inoacuteculo
Inocular la superficie seca de la placa de Mueller Hinton estriando con el hisopo
en tres direcciones para asegurar una distribucioacuten uniforme del inoacuteculo Antes de
colocar los discos dejar secar la placa a temperatura ambiente durante 3 a 5
minutos para que cualquier exceso de humedad superficial sea absorbido
APLICACIOacuteN DE LOS DISCOS
Colocar los discos individuales o multidiscos sobre la superficie del agar con la
ayuda de una pinza esteacuteril o la punta de una aguja presionando suavemente sobre
cada disco para asegurar un contacto completo con la superficie del agar
Distribuir los discos uniformemente de modo que esteacuten a una distancia miacutenima de
25 mm uno del otro (el diaacutemetro de los discos seguacuten las normas de la
Organizacioacuten Mundial de la Salud (OMS) debe ser de 6 mm) No deben colocarse
maacutes de 12 discos en una placa de 150 mm ni maacutes de 6 en una placa de 100 mm
de diaacutemetro interno para evitar la superposicioacuten de las zonas de inhibicioacuten Un
disco no debe ser removido una vez que tomoacute contacto con la superficie del agar
debido a que algunos antibioacuteticos se difunden raacutepidamente
INCUBACIOacuteN
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Incubar lar placas en posicioacuten invertida a 35degC por 18 a 24 horas dentro de los 15
minutos posteriores a la aplicacioacuten de los discos
Despueacutes del tiempo recomendado de incubacioacuten examinar cada placa y medir los
diaacutemetros de los halos de inhibicioacuten alrededor de cada disco
LECTURA DE LAS PLACAS E INTERPRETACIOacuteN DE LOS RESULTADOS
Medir los diaacutemetros de las zonas de inhibicioacuten completa (incluyendo el diaacutemetro
del disco) usando
una regla o calibrador Se debe mantener iluminada la parte posterior de la placa
petri con una luz reflejada localizada a unos cuantos centiacutemetros sobre un fondo
negro Tener la precaucioacuten de observar la placa siguiendo una vertical directa para
evitar una lectura erroacutenea de las marcas de la regla por efecto de paralelismo En
los medios suplementados con sangre las zonas son medidas en la parte superior
de la superficie del agar y retirando la tapa Tener cuidado de no medir la zona de
la hemoacutelisis sino la de inhibicioacuten del crecimiento
El punto final debe tomarse como el aacuterea que no muestra un crecimiento obvio
visible que puede ser detectado mediante observacioacuten visual no incluyendo velo
de crecimiento o colonias muy pequentildeas que puedan ser detectadas solo con
mucha dificultad en el borde de la zona Sin embargo las colonias mayores
creciendo dentro de la zona clara deberaacuten ser subcultivadas reidentificadas y
reensayadas Algunos Proteus spp debido a su gran movilidad pueden presentar
un velo de invasioacuten o ldquoswarmingrdquo dentro de las zonas de inhibicioacuten de algunos
antibioacuteticos En estos casos el velo del swarming debe ser ignorado al momento
de medir los halos de inhibicioacuten
DISCOS DE SENSIBILIDAD ANTIBIOacuteTICA A INCLUIR EN EL ANTIBIOGRAMA
Grupo I
Ampicilina
Cefalotina
Ampicilina Sulbactam o Amoxicilina Aacutecido Clavulaacutenico
Cefuroxima
Cefotaxima o Ceftriaxona
Gentamicina
Laboratorio Cliacutenico PAULINA ARROLLO PEREacuteZ
Amikacina
Aacutecido Nalidiacutexico(1)
Norfloxacina(1)
Ciprofloxacina
Cotrimoxazol (TrimetoprimSulfametoxazol)
Nitrofurantoiacutena(1)
Grupo II
Cefoxitina
Aztreonam
Ceftazidima
Cefixima
CefoperazonaSulbactam
Cefepime o Cefpirome
Imipenem o Meropenem
Cloramfenicol
Ofloxacina (1)
(1) Disco utilizado exclusivamente para infecciones de las viacuteas urinarias
Resistencias Naturales
Las enterobacterias son resistentes a Penicilina Oxacilina Macroacutelidos
Clindamicina y Glicopeacuteptidos
Klebsiella spp es resistente a las Aminopenicilinas
Citrobacter freundii Enterobacter cloacae y Enterobacter aerogenes son
resistentes a las Aminopenicilinas AminopenicilinasInhibidores de
betalactamasas Cefalosporinas de primera generacioacuten y Cefuroxima
Serratia marcescens es resistente a las Aminopenicilinas
AminopenicilinasInhibidores de betalactamasas Cefalosporinas de primera
generacioacuten y Cefoxitina
Proteus mirabilis es resistente a Nitrofurantoiacutena
Proteus vulgaris es resistente a las Aminopenicilinas Cefalosporinas de primera
generacioacuten Cefuroxima y Nitrofurantoiacutena
Laboratorio Cliacutenico PAULINA ARROLLO PEREacuteZ
Morganella morganii es resistente a las Aminopenicilinas
AminopenicilinasInhibidores de betalactamasas Cefalosporinas de primera
generacioacuten Cefuroxima y Nitrofurantoiacutena
Providentia stuartii es resistente a las Aminopenicilinas
AminopenicilinasInhibidores de betalactamasas Cefalosporinas de primera
generacioacuten Gentamicina (bajo nivel) y Nitrofurantoiacutena
ANTIBIOTICOS Y DIAMETROS CRITICOS PARA ENTEROBACTERIAS
E PRACTICA 7
EXAMEN QUIMICO DE CALCULO RENAL
EXAMEN FISICO
Laboratorio Cliacutenico PAULINA ARROLLO PEREacuteZ
Se debe pesar el caacutelculo y anotar el dato obtenido Medir dos de los diaacutemetros y
tomar nota del aspecto general textura y color y despueacutes de seccionado el
aspecto general la prominencia y el color de los distintos estratos
Se secciona el caacutelculo con una sierra Se raspan las caras con una aguja Se
procede lo mismo con el nuacutecleo Cada una de las muestras obtenidas se trituran
por separado en un mortero
PROCESO
Se coloca una porcioacuten del polvo del caacutelculo en un crisol y se calienta al fuego Si
no hay ennegrecimiento ni se altera el tamantildeo original el caacutelculo estaraacute formado
por sustancias inorgaacutenicas Si en cambio se carboniza desapareciendo estaraacute
formado por sustancias orgaacutenicas Si se funde y se ennegrece este caacutelculo estaacute
formado por sulfamidasa
Una vez obtenidos los datos pueden seleccionarse las reacciones necesarias
para confirmarlos
REACCIONES QUIMICAS
Solucioacuten A
10mg del polvo en matraz y antildeadir 50 ml de ClH 5 Observar si se
produce efervescencia Calentar en bantildeo de agua hirviendo por 10 a 15 minutos y
filtrar en caliente El filtrado se distribuye en 8 tubos numerados y se introduce un
trocito de papel tornasol en cada uno
Solucioacuten B
Agitar con Cl3CH unos 10 mg del polvo Reposar en tubo tapado a
temperatura ambiente hasta que el insoluble haya precipitado Decantar la
solucioacuten clorofoacutermica y guardar igual que el sedimento por separado
Carbonato efervescencia al agregar el CIH por desprendimiento de CO 2
Amonio al tubo 1 de la solucioacuten A se le agrega solucioacuten de OHNa 10 gota a
gota y agitando hasta que el papel tornasol vire
Agregar 1 ml de reactivo de Nessler Un color amarillo oscuro oporto indica
positividad de la reaccioacuten
Laboratorio Cliacutenico PAULINA ARROLLO PEREacuteZ
El NH 3 formado por los grupos NH 4 en medio alcalino reacciona con el yoiduro
doble del reactivo de Nesler para dar yoduro amoacutenico dimercuacuterico precipitado
pardo anaranjado
Acido uacuterico Neutralizar el contenido del tubo 2 como se explicoacute antes
Agregar igual volumen de CNN Na 2 y 05 ml de reactivo de Folin para aacutecido
uacuterico Un color azul intenso indica presencia de aacutecido uacuterico
El aacutecido uacuterico reduce al aacutecido fosfotuacutengstico en medio alcalino dando color azul
intenso de azul de tungsteno y a su vez se oxida a alantoiacutena
Reactivo fosfotuacutengstico (Folin y Denis) Antes del uso diluir al 10 en agua
destilada
Oxalato de calcio Neutralizar el contenido del tubo 3 Agregar CH 3 COOH 10
hasta reaccioacuten aacutecida al tornasol Precipitado blanco que no se redisuelve por
agitacioacuten indica presencia de oxalato de calcio
Calcio Neutralizar el tubo 4 Acidificar con CH 3 COOH glacial Agregar 2 ml C 2
O 4 ( NH 4 ) 4 Precipitado blancodenso indica presencia de Ca ++
Fosfato Neutralizar el tubo 5 Agregar 1 ml de solucioacuten de molibdato Mezclar
antildeadir 05 ml de aacutecido aminonaftol sulfoacutenico (ANS) 025 Coloracioacuten azul que
aparece en 5 minutos indica fosfatos
El color azul se debe a los oacutexidos reducidos de molibdeno
Reactivos
1 ClH concentrado2 Solucioacuten de OHK 203 NO 3 H concentrado4 Mo O 4 (NH 4 ) 2 disolver 25 g de la droga en 50 ml de SO 4 H 2 10 N y
diluir a 100 ml con H2 O destilada5 Amoniacuteaco
Reactivo ANS En matraz x 250 ml poner 05 g de aacutecido aminonaftolsulfoacutenico y
agrgar 195 ml de bisulfito de sodio 15 y 5 ml de sulfito de sodio 20 Mezclar
bien hasta disolucioacuten Si no se disuelve en media hora agregar maacutes sulfito y
agitar El reactivo dura unas 2 semanas
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Magnesio Neutralizar el tubo 7 con OHNH 4 y antildeadir 1 ml de solucioacuten alcohoacutelica
de p ndash Nitrobenceno azorresorcinol Un cromoacutegeno rojo indica presencia de
magnesio
En medio alcalino se forma (OH) 2 Mg El colorante azo resulta absorbido por el
(OH) 2 Mg en medio alcalino
Xantina A un tercio del residuo de la solucioacuten B agregarle gotas de NO 3 H
concentrado
Se disuelve el residuo sin desprender gas Evaporar a sequedad en bantildeo Mariacutea
hirviente quedando un residuo amarillo Dejar enfriar y humedecer con gotas de
OHNa 10 Una coloracioacuten anaranjada que vira al rojo oscuro al calentar indica
presencia de xantina
La reaccioacuten es la xantoproteica Migracioacuten de los anillos fenilo existentes en la
tirosina fenilalanina y triptoacutefano que da un color amarillo de los productos de
nitrosustitucioacuten para virar al anaranjado tras la adicioacuten de un aacutelcali ( formacioacuten de
la sal)
Nota El reactivo de molibdato se puede preparar asiacute
Solucioacuten 1 SO 4 H 2 01 N
Medir 450 ml de SO4 H 2 concentrado y agregarlos a 1300 ml de agua
destilada
Solucioacuten 2
A 250 ml de SO 4 H 2 01 N antildeadir la solucioacuten de molibdato y llevar con
agua destilada a 250 ml Mezclar
Sulfamidas Neutralizar el uacuteltimo tubo Antildeadir 1 ml de NO 2 Na 05 preparado
recientemente Agitar y reposar por 3 minutos Antildeadir 5 ml de solucioacuten alcohoacutelica
de dimetil-alfa naftilamina 025 Un color rojizo indica presencia de sulfamidas
Finalmente procede hacer mencioacuten de ciertos procedimientos fiacutesicos como la
microscopia de polarizacioacuten difraccioacuten de rayos X cristalografiacutea
espectrofotometriacutea de rayos infrarrojos etc que permiten actualmente un
conocimiento maacutes confiable de la estructura de los caacutelculos
- Reactivos
-
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Verificacioacuten de la muestra
Verificar que el registro de la toma de muestra esteacute correcto
Metoacutedica de determinacioacuten
Cu x Vmin
Aclaramiento de la creatinina = mdashmdashmdashmdashmdashmdashmdashmdashmdashmdashmdashmdash
Ps
donde
Cu= concentracioacuten de creatinina en la orina expresado en mgdl
Ps = concentracioacuten de creatinina en suero expresado en mgdl
Vmin= volumen por minuto (cantidad de la diuresis entre 1440)
Procedimiento analiacutetico
Ver metoacutedica de la creatinina
Notas sobre la metoacutedica
Linealidad
Referirse a las metoacutedicas de creatinina Es lineal hasta 250 mgdl
Sensibilidad
Referirse a las metoacutedicas de creatinina Su sensibilidad es 01 mgdl
Especificidad
Referirse a las metoacutedicas de creatinina
Las muestras de suero tienen proteiacutenas que pueden reaccionar no
especiacuteficamente con el
meacutetodo Jaffe Es necesario corregir el valor de 03 mgdl para lograr
valores maacutes correctos
Interferencias
Las interferencias significativas se deben
Para las orinas
Presencia de partiacuteculas en suspensioacuten (centrifugar las orinas)
Mala recoleccioacuten de orina
Presencia de bacterias de barbituacutericos de cuerpos cetoacutenicos
Para la sangre
Hemoacutelisis con Hb ge100 gl
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Icteacuterico bilirrubina ge400 mgdl
Lipemia trigliceacuteridos ge20000 mgdl
Acetona ge500 mgdl
Valor de referencia
ge70mlmin
PRACTICA 4
EXAMEN MICROSCOacutePICO DEL SEDIMENTO URINARIO
PROPOacuteSITO
Observar microscoacutepicamente en el sedimento urinario elementos celulares
cilindros cristales paraacutesitos filamentos mucoides y bacterias Con el fin
de sugerir una patologiacutea del tracto urinario u otras enfermedades que esteacuten
en diferente localizacioacuten
MUESTRA REQUERIDA
15 mL de orina
MATERIALES
- Tubos coacutenicos de 15 mL
- Laacuteminas portaobjetos
- Laminillas cubreobjetos
- Marcador para vidrio
- Gradillas para tubos
- Guantes descartables
EQUIPO
- Reloj marcador
- Centriacutefuga
- Microscopio
PROCEDIMIENTO
- Centrifugar durante 5 minutos a 2500 rpm
- Descartar el liacutequido sobrenadante
- Suspender el sedimento urinario golpeando ligeramente con la mano
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- Colocar una gota de sedimento entre un porta y un cubreobjeto
- Observar la preparacioacuten con el objetivo 10x para lograr una visioacuten general del
sedimento
- Identificar los elementos formes a mayor aumento 40x
- Anotar lo observado
FUENTES DE ERROR
- Usar portaobjetos y cubreobjetos sucios
- Desecacioacuten del sedimento urinario
-Tiempo transcurrido desde la toma de la muestra hasta la observacioacuten
microscoacutepica
- Uso excesivo de luz
- Centrifugacioacuten inadecuada
FORMA DE REPORTE
CEacuteLULAS EPITELIALES ESCAMOSAS Y REDONDAS reportar escasas
moderadas o abundantes
GLOacuteBULOS ROJOS Reportar el nuacutemero estimado por campo
LEUCOCITOS Reportar el nuacutemero estimado por campo
CILINDROS se pueden encontrar en la orina los siguientes cilindros
hialinos granulosos finos y gruesos leucocitarios hemaacuteticos grasos y ceacutereos
Reportar el nuacutemero de cilindros observados por campo
FILAMENTOS MUCOIDES reportar escasos moderados o abundantes
CRISTALES se pueden encontrar en la orina los siguientes cristales oxalatos de
calcio acido uacuterico uratos amorfos fosfatos amorfos fosfatos triples urato de
amonio leucina cistina y tirosina
Reportar en la forma siguiente escasos moderados o abundantes
LEVADURAS Reportar escasos moderada y abundantes
PARAacuteSITOS Se pueden encontrar en orina Trichomonas vaginalis Phitirus pubis
huevos y quistes de paraacutesitos por contaminacioacuten con heces
BACTERIAS Reportar la presencia de bacterias moderadas o abundantes
solamente cuando se observen maacutes de 10 leucocitos por campo
Valores de referencia
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CEacuteLULAS EPITELIALES ESCAMOSAS Escasas a moderadas
CEacuteLULAS EPITELIALES REDONDAS No deben observarse
GLOacuteBULOS ROJOS No deben observarse
LEUCOCITOS 0-5 por campo
CILINDROS No deben observarse
FILAMENTOS MUCOIDES No deben observarse
CRISTALES Podriacutean observarse oxalatos uratos y fosfatos amorfos de escasa a
moderada cantidad
LEVADURAS No deben observarse
PARAacuteSITOS No deben observarse
BACTERIAS Escasas o no presentes
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PRACTICA 6
UROCULTIVO Y ANTIBIOGRAMA
OBTENCIOacuteN DE MUESTRA DE ORINA PARA CULTIVO
Condiciones generales
La orina es un excelente medio de cultivo para la proliferacioacuten bacteriana por esta
razoacuten la muestra debe ser procesada dentro de las 2 horas despueacutes de haber
sido obtenida o debe refrigerarse a 4 degC (maacuteximo 24 horas) hasta su
procesamiento
Generalmente el desarrollo de dos o maacutes tipos de colonias (en pacientes sin
sonda vesical) indican que la muestra se ha contaminado por recoleccioacuten
incorrecta o demora en la siembra
OBTENCIOacuteN DE MUESTRA DE ORINA DEL CHORRO MEDIO
Obtencioacuten de muestras de orina en pacientes mujeres Materiales y equipos
a) Guantes de laacutetex esteacuteriles
b) Cinco o maacutes piezas de gasa esteacuteril de tamantildeo adecuado pudiendo
ser de 4rdquo x 4rdquo
c) Jaboacuten
d) Agua tibia esteacuteril
e) Frasco esteacuteril de boca ancha para la muestra de orina
Procedimiento
a) Mantener la privacidad de la paciente
b) Rotular el frasco con el nombre de la paciente fecha de obtencioacuten de la
muestra hora y el procedimiento usado para la obtencioacuten de la muestra
c) Lavarse las manos con jaboacuten y abundante agua
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d) Preparar una pieza de gasa para la limpieza de los genitales externos
humedicieacutendola con agua y una pequentildea cantidad de jaboacuten Preparar dos piezas
maacutes de gasa para el enjuague con agua tibia
e) Separar los labios mayores con dos dedos de una mano y limpiar el aacuterea
expuesta pasando la gasa de adelante hacia atraacutes
f) Descartar la gasa
g) Con otra gasa humedecida enjuagar el aacuterea de adelante hacia atraacutes Repetir el
procedimiento con otra gasa
h) Finalmente secar el aacuterea de adelante hacia atraacutes con un trozo de gasa seca
i) Mantener separados los labios mayores mientras la paciente empieza a orinar
Luego del chorro inicial colocar el frasco esteacuteril para colectar el chorro medio
j) Al terminar la recoleccioacuten tapar el frasco inmediatamente y limpiarle la
superficie
k) Transportar el frasco con la muestra de orina inmediatamente
Obtencioacuten de muestra de orina en pacientes varones
Materiales
a) Guantes de laacutetex
b) Cinco o maacutes piezas de gasa esteacuteril
c) Jaboacuten
d) Agua tibia esteacuteril
e) Frasco esteacuteril de boca ancha para la obtencioacuten de la muestra
Procedimiento
a) Mantener la privacidad del paciente
b) Rotular el frasco con el nombre del paciente fecha de obtencioacuten de la muestra
hora y el procedimiento usado para la obtencioacuten de la muestra
c) Lavarse las manos con jaboacuten y abundante agua
d) Preparar una pieza de gasa con agua y una pequentildea cantidad de jaboacuten
Preparar dos piezas maacutes de gasa para el enjuague con agua tibia
e) Realizar la higiene de los genitales Retraer el prepucio antes de lavar el glande
con la gasa humedecida con jaboacuten Descartar la gasa
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f) Enjuagar el glande usando una gasa huacutemeda Repetir el procedimiento con otra
gasa
g) Secar la zona usando uno o maacutes piezas de gasa seca
h) Indicar al paciente que mantenga el prepucio retirado e inicie la miccioacuten
directamente en un recipiente (orina para descartar)
i) Despueacutes del chorro inicial colocar el frasco esteacuteril para colectar la muestra del
chorro medio
j) Obtenida la muestra tapar el frasco inmediatamente y limpiarle la superficie
k) Transportar el frasco con la muestra de orina inmediatamente al laboratorio
SIEMBRA PRIMARIA DE MUESTRA DE ORINA
Objetivo
Describir el procedimiento para la siembra primaria de muestra de orina
Campo de aplicacioacuten
Se aplica para el cultivo de muestra de orina en el diagnoacutestico bacterioloacutegico de
infecciones del tracto urinario
Materiales y equipos
a) Asa calibrada de platino o descartable de 0001 mL oacute 001 mL
b) Estufa de 35 ndash 37 degC
c) Mechero Bunsen o cabina de flujo laminar
d) Guantes de laacutetex
e) Contenedor de material contaminado
f) Pinza esteacuteril
g) Propipeta o pipetor automaacutetico
h) Medios de cultivo
ndash Placas con agar sangre de carnero (AS)
ndash Placas con agar Mc Conkey (McC)
Procedimiento
a) Mantener las muestras en refrigeracioacuten (4 degC) hasta su procesamiento por
cultivo
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b) Los cultivos deben realizarse en una cabina de bioseguridad o cerca del
mechero Bunsen
c) Las placas con AS y McC que se utilizaraacuten en el urocultivo deben estar a
temperatura ambiente Rotular las placas
d) Si el asa calibrada no es descartable esterilizar el asa de siembra flameacuteandola
en el mechero Bunsen hasta que se ponga rojo vivo Dejar enfriar el asa
e) Tomar el frasco con la muestra de orina abrir la tapa y flamear la boca del
frasco en el mechero Bunsen
f) Tomar la muestra de orina con el asa de siembra esteacuteril introducieacutendola y
sacaacutendola del frasco en forma vertical Tapar el frasco con la muestra
g) Inocular en el centro de la placa con AS a partir del cual se extiende la muestra
hacia delante y hacia atraacutes
h) Luego sin quemar el asa el inoacuteculo se disemina uniformemente con trazos
perpendiculares a la siembra inicial en toda la placa
i) Proceder de la misma forma para el agar Mc Conkey
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Lectura
a) Realizar la evaluacioacuten a las 24 horas si no hay crecimiento bacteriano dejar
incubar hasta las 48 horas
b) La evaluacioacuten consiste en realizar el recuento de colonias cuyo resultado se
multiplica por el factor de dilucioacuten para obtener las UFC por mL
Interpretacioacuten
a) En pacientes sin sonda vesical la cuenta significativa de bacterias en orina es
la presencia de maacutes de 105 UFC mL de un solo germen
b) Los recuentos intermedios (103 ndash 104 UFCmL) indican infeccioacuten si el
procedimiento de recoleccioacuten de orina fue realizado correctamente
c) Generalmente el aislamiento de tres o maacutes especies bacterianas indican que la
muestra se ha contaminado por recoleccioacuten inadecuada o demora en la siembra
d) En pacientes con sonda vesical cuentas bacterianas menores de 105 UFCmL
pueden tener significado asiacute tambieacuten se pueden encontrar bacteriurias
polimicrobianas hasta en casi 15 de enfermos
Laboratorio Cliacutenico PAULINA ARROLLO PEREacuteZ
e) En pacientes sin cateacuteter se puede comprobar si el procedimiento de obtencioacuten
de muestra fue realizado correctamente observando la frecuencia con la cual se
informan recuentos de colonias intermedias entre 103 ndash 104 UFCmL En
pacientes sin infecciones del tracto urinario el recuento es nulo o se reduce a
pocas colonias
IDENTIFICACION BACTERIANA
Lectura de cultivos en agar Mac Conkey
ndash En agar Mc Conkey Escherichia coli lactosa positiva forma colonias de borde
entero de color fucsia opacas de 2 mm ndash 3 mm de diaacutemetro usualmente
rodeadas de una zona opaca alrededor de la colonia (bilis precipitada) Las cepas
de E coli que son lactosa negativa dan colonias incoloras de 3 ndash 4 mm
ndash En agar Mc Conkey K pneumoniae forma colonias de borde entero de color
rosado a rosado oscuro de 3 ndash 4 mm de diaacutemetro y aspecto mucoide
ndash En agar Mc Conkey Enterobacter spp forma colonias de borde entero de color
rosado de 2 ndash 4 mm de diaacutemetro no tan mucoides como K pneumoniae
Las colonias con estas caracteriacutesticas son subcultivadas en medios diferenciales
PRUEBAS BIOQUIMICAS
TSI
Lectura
Es importante hacer la lectura entre las 18 ndash 24 horas para no obtener resultados
erroacuteneos La lectura se hace sobre la base de tres caracteriacutesticas Utilizacioacuten de
hidratos de carbono produccioacuten de gas y produccioacuten de aacutecido sulfhiacutedrico
Utilizacioacuten de hidratos de carbono
ndash Utilizacioacuten de lactosa Reaccioacuten aacutecida en el pico de flauta (color amarillo)
Abreviatura (A)
ndash Utilizacioacuten de glucosa Reaccioacuten aacutecida en la columna del medio (color amarillo)
Abreviatura (A)
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ndash No hay utilizacioacuten del carbohidrato Se puede observar una reaccioacuten alcalina
(color rojo) o que no hay cambio de color (permanece del mismo color que el
medio no inoculado) Abreviaturas (K) o (N) respectivamente
Nota Cuando el microorganismo tambieacuten produce H2S el precipitado negro
puede ocultar la acidez
Produccioacuten de gas de glucosa
ndash Se considera positivo Presencia de una sola burbuja de gas burbujas en el
medio divisioacuten del medio desplazamiento completo del medio del fondo del tubo
dejando un aacuterea clara o una ligera muesca del medio en el costado del tubo
ndash Se registra la lectura por medio de cruces (+)
Produccioacuten de aacutecido sulfhiacutedrico
ndash Se manifiesta por un color negro distribuido por toda la columna del medio de
cultivo o soacutelo en la parte superior
ndash Se registra la lectura por medio de cruces (+)
Resultados
Ejemplo de simbolizacioacuten e interpretacioacuten
KA ndash+ Significa alcalinidad en la inclinacioacuten y acidez en el fondo (fermentacioacuten de
glucosa) gas negativo y H2S positivo
NN ndash ndashSignifica que no hay utilizacioacuten de la lactosa y glucosa ni produccioacuten de
H2S
AGAR LISINA HIERRO
En este medio se determina simultaacuteneamente la produccioacuten de lisina
descarboxilasa y de la formacioacuten de aacutecido sulfhiacutedrico
Lectura
Es importante hacer la lectura entre las 18 ndash 24 horas si la lectura se realiza antes
podemos obtener resultados falsos positivos asiacute como falsos negativos si se lee
despueacutes de las 24 horas Realizar la lectura en la columna y en la superficie
inclinada y observar la formacioacuten de aacutecido sulfhiacutedrico el cual se evidencia por una
coloracioacuten negra
Nota Generalmente las cepas del grupo Proteus y Providencia desaminan la
lisina a aacutecido ndashcetocarboacutenico Este uacuteltimo forma compuestos pardo-rojizos en la
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regioacuten superficial del medio de cultivo con la sal de hierro y bajo la influencia del
oxiacutegeno
Recomendaciones
No incubar maacutes del tiempo necesario para no ocasionar una alcalinizacioacuten en la
superficie del medio y por lo tanto producir un viraje hacia el violeta
UTILIZACIOacuteN DE CITRATO
Para determinar si un microorganismo es capaz de utilizar citrato como uacutenica
fuente de carbono para su metabolismo
Procedimiento
a) Incubar a 35ndash37 degC de 24 horasndash 48 horas En algunos casos es necesario una
incubacioacuten hasta por 4 diacuteas
b) Ver el viraje de color
Resultados
a) Prueba positiva Crecimiento con un color azul intenso en el pico de flauta o
presencia de colonias en ausencia del color azul
b) Prueba negativa No se observa crecimiento ni cambio de color (verde)
Controles
Positivo Enterobacter cloacae
Negativo Escherichia coli
HIDROacuteLISIS DE LA UREA (PRODUCCIOacuteN DE UREASA)
Es uacutetil para determinar la capacidad de un organismo de degradar la urea
formando dos moleacuteculas de amoniaco por accioacuten de la enzima ureasa
Procedimiento
Realizar la lectura despueacutes de 18 horas ndash 24 horas de incubacioacuten observando el
viraje de color
Resultados
Prueba positiva Color rosado intenso en el pico de flauta o todo el agar
Puede haber una reaccioacuten positiva retardada despueacutes de 24 horas y hasta
6 diacuteas de incubacioacuten (algunas cepas de Klebsiella por ejemplo)
Prueba negativa No se produce cambio de color
Controles
Laboratorio Cliacutenico PAULINA ARROLLO PEREacuteZ
Negativo Escherichia coli
Positivo Klebsiella pneumoniae
MOTILIDAD (MEDIOS SIM O MIO O AGAR MOVILIDAD)
Para determinar si un organismo es moacutevil o inmoacutevil
Procedimiento
Incubar a 35 ndash 37 degC de 24 a 48 horas
Resultados
Positivo Los microorganismos migran de la liacutenea de siembra y se difunden en el
medio provocando turbidez Tambieacuten puede manifestarse semejando
ldquovellosidadesrdquo a lo largo del trazo de siembra
Negativo Se observa un crecimiento bacteriano acentuado siguiendo el trazo de
siembra y el medio circundante se mantiene claro
Controles
Control positivo Escherichia coli
Control negativo Klebsiella pneumoniae
h) Prueba de indol[6]
Es uacutetil para determinar la capacidad de un microorganismo de producir indol a
partir del aminoaacutecido triptoacutefano
Medios y reactivos
Caldo de triptoacutefano o de peptona o caldo de triptona
Reactivo de indol de Kovacs
Procedimiento
Retirar aseacutepticamente 2 mL de caldo de cutivo con 24 horas de incubacioacuten
Agregar 5 gotas de reactivo de Kovacs
Mover suavemente el tubo y realizar la lectura
Laboratorio Cliacutenico PAULINA ARROLLO PEREacuteZ
Laboratorio Cliacutenico PAULINA ARROLLO PEREacuteZ
Laboratorio Cliacutenico PAULINA ARROLLO PEREacuteZ
ANTIBIOGRAMA
Preparacioacuten del Agar Mueller Hinton
Preparar el medio a partir de la base deshidratada de acuerdo a las
indicaciones del fabricante
Autoclavar y dejar enfriar en bantildeo de agua hasta que alcance los 45degC - 50degC
Repartir el medio en placas petri (60 ml ndash 70 ml o 25 ml ndash 30 ml para placas de
150 mm o 100 mm de diaacutemetro interno respectivamente) de manera que el
grosor del agar en la placa sea de 4 mm
Realizar las pruebas de esterilidad para cada lote de Mueller Hinton incubando
una o dos placas de cada lote a 30degC ndash 35degC durante 24 horas o maacutes Estas
placas utilizadas deben ser luego descartadas
Preparacioacuten del estaacutendar (05 Mc Farland) para el inoacuteculo
Para estandarizar la densidad del inoacuteculo se usa una suspensioacuten de sulfato de
bario (05 de la escala de Mac Farland) como estaacutendar
Preparacioacuten del estaacutendar de turbidez
a Agregar 05 ml de una solucioacuten de BaCl2 0048 M (BaCl22H2O al 1175 PV)
a 995 mL de una solucioacuten de H2SO4 018 M (036 N) (1 VV) en constante
movimiento para mantener la suspensioacuten
b Verificar la densidad correcta del estaacutendar usando un fotocoloriacutemetro oacute
espectrofotoacutemetro cuya absorbancia a 625 nm es 008 a 010 para el estaacutendar 05
de Mc Farland
c Distribuir de 4 ml a 6 ml en tubos con tapa de rosca o tapoacuten de jebe similares a
los que se usaraacuten para preparar el inoacuteculo
Laboratorio Cliacutenico PAULINA ARROLLO PEREacuteZ
d Ajustar bien las tapas o tapones y conservarlos en la oscuridad a temperatura
ambiente y anotar la fecha de preparacioacuten
e Antes de ser usado agitar vigorosamente dicho estaacutendar de preferencia en un
agitador mecaacutenico
f Verificar mensualmente la densidad de los estaacutendares de sulfato de bario y
reemplazarlo cuando sea necesario
INOCULACIOacuteN
Preparacioacuten del inoacuteculo
Puede realizarse de dos formas
Meacutetodo de desarrollo previo
a Seleccionar cuatro a cinco colonias bien aisladas del mismo tipo morfoloacutegico
de un cultivo en placa
b Tocar la superficie de cada colonia con una asa de siembra y transferirlo a un
tubo que contiene de 4 a 5 mL de caldo apropiado (Ej Caldo Tripticasa soya)
c Incubar el caldo a una temperatura entre 35degC a 37degC hasta que alcance o
exceda la turbidez del estaacutendar 05 de la escala de Mc Farland (por lo general de
2 a 6 horas)
d Ajustar la turbidez del inoacuteculo con solucioacuten salina o caldo apropiado hasta el
tubo 05 de la escala de Mc Farland por comparacioacuten visual con el estaacutendar Para
realizar este paso correctamente usar una luz apropiada y mirar los tubos contra
un fondo blanco con liacuteneas negras como contraste
e La suspensioacuten preparada contendraacute aproximadamente 1 a 2 x 108 UFCmL
Meacutetodo directo de inoculacioacuten a partir de colonias aisladas
a De una placa de cultivo con agar no selectivo e incubada por 18 - 24 h
seleccionar colonias aisladas y preparar una suspensioacutem directa en solucioacuten
salina oacute caldo
b La suspensioacuten debe ser inmediatamente ajustada a la escala 05 de Mc
Farland
Inoculacioacuten de las Placas
Dentro de los 15 minutos siguientes al ajuste de la turbidez del inoacuteculo sumergir
un hisopo esteacuteril en la suspensioacuten rotar el hisopo varias veces presionando
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firmemente sobre la pared interior del tubo por encima del nivel del liacutequido para
remover el exceso de inoacuteculo
Inocular la superficie seca de la placa de Mueller Hinton estriando con el hisopo
en tres direcciones para asegurar una distribucioacuten uniforme del inoacuteculo Antes de
colocar los discos dejar secar la placa a temperatura ambiente durante 3 a 5
minutos para que cualquier exceso de humedad superficial sea absorbido
APLICACIOacuteN DE LOS DISCOS
Colocar los discos individuales o multidiscos sobre la superficie del agar con la
ayuda de una pinza esteacuteril o la punta de una aguja presionando suavemente sobre
cada disco para asegurar un contacto completo con la superficie del agar
Distribuir los discos uniformemente de modo que esteacuten a una distancia miacutenima de
25 mm uno del otro (el diaacutemetro de los discos seguacuten las normas de la
Organizacioacuten Mundial de la Salud (OMS) debe ser de 6 mm) No deben colocarse
maacutes de 12 discos en una placa de 150 mm ni maacutes de 6 en una placa de 100 mm
de diaacutemetro interno para evitar la superposicioacuten de las zonas de inhibicioacuten Un
disco no debe ser removido una vez que tomoacute contacto con la superficie del agar
debido a que algunos antibioacuteticos se difunden raacutepidamente
INCUBACIOacuteN
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Incubar lar placas en posicioacuten invertida a 35degC por 18 a 24 horas dentro de los 15
minutos posteriores a la aplicacioacuten de los discos
Despueacutes del tiempo recomendado de incubacioacuten examinar cada placa y medir los
diaacutemetros de los halos de inhibicioacuten alrededor de cada disco
LECTURA DE LAS PLACAS E INTERPRETACIOacuteN DE LOS RESULTADOS
Medir los diaacutemetros de las zonas de inhibicioacuten completa (incluyendo el diaacutemetro
del disco) usando
una regla o calibrador Se debe mantener iluminada la parte posterior de la placa
petri con una luz reflejada localizada a unos cuantos centiacutemetros sobre un fondo
negro Tener la precaucioacuten de observar la placa siguiendo una vertical directa para
evitar una lectura erroacutenea de las marcas de la regla por efecto de paralelismo En
los medios suplementados con sangre las zonas son medidas en la parte superior
de la superficie del agar y retirando la tapa Tener cuidado de no medir la zona de
la hemoacutelisis sino la de inhibicioacuten del crecimiento
El punto final debe tomarse como el aacuterea que no muestra un crecimiento obvio
visible que puede ser detectado mediante observacioacuten visual no incluyendo velo
de crecimiento o colonias muy pequentildeas que puedan ser detectadas solo con
mucha dificultad en el borde de la zona Sin embargo las colonias mayores
creciendo dentro de la zona clara deberaacuten ser subcultivadas reidentificadas y
reensayadas Algunos Proteus spp debido a su gran movilidad pueden presentar
un velo de invasioacuten o ldquoswarmingrdquo dentro de las zonas de inhibicioacuten de algunos
antibioacuteticos En estos casos el velo del swarming debe ser ignorado al momento
de medir los halos de inhibicioacuten
DISCOS DE SENSIBILIDAD ANTIBIOacuteTICA A INCLUIR EN EL ANTIBIOGRAMA
Grupo I
Ampicilina
Cefalotina
Ampicilina Sulbactam o Amoxicilina Aacutecido Clavulaacutenico
Cefuroxima
Cefotaxima o Ceftriaxona
Gentamicina
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Amikacina
Aacutecido Nalidiacutexico(1)
Norfloxacina(1)
Ciprofloxacina
Cotrimoxazol (TrimetoprimSulfametoxazol)
Nitrofurantoiacutena(1)
Grupo II
Cefoxitina
Aztreonam
Ceftazidima
Cefixima
CefoperazonaSulbactam
Cefepime o Cefpirome
Imipenem o Meropenem
Cloramfenicol
Ofloxacina (1)
(1) Disco utilizado exclusivamente para infecciones de las viacuteas urinarias
Resistencias Naturales
Las enterobacterias son resistentes a Penicilina Oxacilina Macroacutelidos
Clindamicina y Glicopeacuteptidos
Klebsiella spp es resistente a las Aminopenicilinas
Citrobacter freundii Enterobacter cloacae y Enterobacter aerogenes son
resistentes a las Aminopenicilinas AminopenicilinasInhibidores de
betalactamasas Cefalosporinas de primera generacioacuten y Cefuroxima
Serratia marcescens es resistente a las Aminopenicilinas
AminopenicilinasInhibidores de betalactamasas Cefalosporinas de primera
generacioacuten y Cefoxitina
Proteus mirabilis es resistente a Nitrofurantoiacutena
Proteus vulgaris es resistente a las Aminopenicilinas Cefalosporinas de primera
generacioacuten Cefuroxima y Nitrofurantoiacutena
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Morganella morganii es resistente a las Aminopenicilinas
AminopenicilinasInhibidores de betalactamasas Cefalosporinas de primera
generacioacuten Cefuroxima y Nitrofurantoiacutena
Providentia stuartii es resistente a las Aminopenicilinas
AminopenicilinasInhibidores de betalactamasas Cefalosporinas de primera
generacioacuten Gentamicina (bajo nivel) y Nitrofurantoiacutena
ANTIBIOTICOS Y DIAMETROS CRITICOS PARA ENTEROBACTERIAS
E PRACTICA 7
EXAMEN QUIMICO DE CALCULO RENAL
EXAMEN FISICO
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Se debe pesar el caacutelculo y anotar el dato obtenido Medir dos de los diaacutemetros y
tomar nota del aspecto general textura y color y despueacutes de seccionado el
aspecto general la prominencia y el color de los distintos estratos
Se secciona el caacutelculo con una sierra Se raspan las caras con una aguja Se
procede lo mismo con el nuacutecleo Cada una de las muestras obtenidas se trituran
por separado en un mortero
PROCESO
Se coloca una porcioacuten del polvo del caacutelculo en un crisol y se calienta al fuego Si
no hay ennegrecimiento ni se altera el tamantildeo original el caacutelculo estaraacute formado
por sustancias inorgaacutenicas Si en cambio se carboniza desapareciendo estaraacute
formado por sustancias orgaacutenicas Si se funde y se ennegrece este caacutelculo estaacute
formado por sulfamidasa
Una vez obtenidos los datos pueden seleccionarse las reacciones necesarias
para confirmarlos
REACCIONES QUIMICAS
Solucioacuten A
10mg del polvo en matraz y antildeadir 50 ml de ClH 5 Observar si se
produce efervescencia Calentar en bantildeo de agua hirviendo por 10 a 15 minutos y
filtrar en caliente El filtrado se distribuye en 8 tubos numerados y se introduce un
trocito de papel tornasol en cada uno
Solucioacuten B
Agitar con Cl3CH unos 10 mg del polvo Reposar en tubo tapado a
temperatura ambiente hasta que el insoluble haya precipitado Decantar la
solucioacuten clorofoacutermica y guardar igual que el sedimento por separado
Carbonato efervescencia al agregar el CIH por desprendimiento de CO 2
Amonio al tubo 1 de la solucioacuten A se le agrega solucioacuten de OHNa 10 gota a
gota y agitando hasta que el papel tornasol vire
Agregar 1 ml de reactivo de Nessler Un color amarillo oscuro oporto indica
positividad de la reaccioacuten
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El NH 3 formado por los grupos NH 4 en medio alcalino reacciona con el yoiduro
doble del reactivo de Nesler para dar yoduro amoacutenico dimercuacuterico precipitado
pardo anaranjado
Acido uacuterico Neutralizar el contenido del tubo 2 como se explicoacute antes
Agregar igual volumen de CNN Na 2 y 05 ml de reactivo de Folin para aacutecido
uacuterico Un color azul intenso indica presencia de aacutecido uacuterico
El aacutecido uacuterico reduce al aacutecido fosfotuacutengstico en medio alcalino dando color azul
intenso de azul de tungsteno y a su vez se oxida a alantoiacutena
Reactivo fosfotuacutengstico (Folin y Denis) Antes del uso diluir al 10 en agua
destilada
Oxalato de calcio Neutralizar el contenido del tubo 3 Agregar CH 3 COOH 10
hasta reaccioacuten aacutecida al tornasol Precipitado blanco que no se redisuelve por
agitacioacuten indica presencia de oxalato de calcio
Calcio Neutralizar el tubo 4 Acidificar con CH 3 COOH glacial Agregar 2 ml C 2
O 4 ( NH 4 ) 4 Precipitado blancodenso indica presencia de Ca ++
Fosfato Neutralizar el tubo 5 Agregar 1 ml de solucioacuten de molibdato Mezclar
antildeadir 05 ml de aacutecido aminonaftol sulfoacutenico (ANS) 025 Coloracioacuten azul que
aparece en 5 minutos indica fosfatos
El color azul se debe a los oacutexidos reducidos de molibdeno
Reactivos
1 ClH concentrado2 Solucioacuten de OHK 203 NO 3 H concentrado4 Mo O 4 (NH 4 ) 2 disolver 25 g de la droga en 50 ml de SO 4 H 2 10 N y
diluir a 100 ml con H2 O destilada5 Amoniacuteaco
Reactivo ANS En matraz x 250 ml poner 05 g de aacutecido aminonaftolsulfoacutenico y
agrgar 195 ml de bisulfito de sodio 15 y 5 ml de sulfito de sodio 20 Mezclar
bien hasta disolucioacuten Si no se disuelve en media hora agregar maacutes sulfito y
agitar El reactivo dura unas 2 semanas
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Magnesio Neutralizar el tubo 7 con OHNH 4 y antildeadir 1 ml de solucioacuten alcohoacutelica
de p ndash Nitrobenceno azorresorcinol Un cromoacutegeno rojo indica presencia de
magnesio
En medio alcalino se forma (OH) 2 Mg El colorante azo resulta absorbido por el
(OH) 2 Mg en medio alcalino
Xantina A un tercio del residuo de la solucioacuten B agregarle gotas de NO 3 H
concentrado
Se disuelve el residuo sin desprender gas Evaporar a sequedad en bantildeo Mariacutea
hirviente quedando un residuo amarillo Dejar enfriar y humedecer con gotas de
OHNa 10 Una coloracioacuten anaranjada que vira al rojo oscuro al calentar indica
presencia de xantina
La reaccioacuten es la xantoproteica Migracioacuten de los anillos fenilo existentes en la
tirosina fenilalanina y triptoacutefano que da un color amarillo de los productos de
nitrosustitucioacuten para virar al anaranjado tras la adicioacuten de un aacutelcali ( formacioacuten de
la sal)
Nota El reactivo de molibdato se puede preparar asiacute
Solucioacuten 1 SO 4 H 2 01 N
Medir 450 ml de SO4 H 2 concentrado y agregarlos a 1300 ml de agua
destilada
Solucioacuten 2
A 250 ml de SO 4 H 2 01 N antildeadir la solucioacuten de molibdato y llevar con
agua destilada a 250 ml Mezclar
Sulfamidas Neutralizar el uacuteltimo tubo Antildeadir 1 ml de NO 2 Na 05 preparado
recientemente Agitar y reposar por 3 minutos Antildeadir 5 ml de solucioacuten alcohoacutelica
de dimetil-alfa naftilamina 025 Un color rojizo indica presencia de sulfamidas
Finalmente procede hacer mencioacuten de ciertos procedimientos fiacutesicos como la
microscopia de polarizacioacuten difraccioacuten de rayos X cristalografiacutea
espectrofotometriacutea de rayos infrarrojos etc que permiten actualmente un
conocimiento maacutes confiable de la estructura de los caacutelculos
- Reactivos
-
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Icteacuterico bilirrubina ge400 mgdl
Lipemia trigliceacuteridos ge20000 mgdl
Acetona ge500 mgdl
Valor de referencia
ge70mlmin
PRACTICA 4
EXAMEN MICROSCOacutePICO DEL SEDIMENTO URINARIO
PROPOacuteSITO
Observar microscoacutepicamente en el sedimento urinario elementos celulares
cilindros cristales paraacutesitos filamentos mucoides y bacterias Con el fin
de sugerir una patologiacutea del tracto urinario u otras enfermedades que esteacuten
en diferente localizacioacuten
MUESTRA REQUERIDA
15 mL de orina
MATERIALES
- Tubos coacutenicos de 15 mL
- Laacuteminas portaobjetos
- Laminillas cubreobjetos
- Marcador para vidrio
- Gradillas para tubos
- Guantes descartables
EQUIPO
- Reloj marcador
- Centriacutefuga
- Microscopio
PROCEDIMIENTO
- Centrifugar durante 5 minutos a 2500 rpm
- Descartar el liacutequido sobrenadante
- Suspender el sedimento urinario golpeando ligeramente con la mano
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- Colocar una gota de sedimento entre un porta y un cubreobjeto
- Observar la preparacioacuten con el objetivo 10x para lograr una visioacuten general del
sedimento
- Identificar los elementos formes a mayor aumento 40x
- Anotar lo observado
FUENTES DE ERROR
- Usar portaobjetos y cubreobjetos sucios
- Desecacioacuten del sedimento urinario
-Tiempo transcurrido desde la toma de la muestra hasta la observacioacuten
microscoacutepica
- Uso excesivo de luz
- Centrifugacioacuten inadecuada
FORMA DE REPORTE
CEacuteLULAS EPITELIALES ESCAMOSAS Y REDONDAS reportar escasas
moderadas o abundantes
GLOacuteBULOS ROJOS Reportar el nuacutemero estimado por campo
LEUCOCITOS Reportar el nuacutemero estimado por campo
CILINDROS se pueden encontrar en la orina los siguientes cilindros
hialinos granulosos finos y gruesos leucocitarios hemaacuteticos grasos y ceacutereos
Reportar el nuacutemero de cilindros observados por campo
FILAMENTOS MUCOIDES reportar escasos moderados o abundantes
CRISTALES se pueden encontrar en la orina los siguientes cristales oxalatos de
calcio acido uacuterico uratos amorfos fosfatos amorfos fosfatos triples urato de
amonio leucina cistina y tirosina
Reportar en la forma siguiente escasos moderados o abundantes
LEVADURAS Reportar escasos moderada y abundantes
PARAacuteSITOS Se pueden encontrar en orina Trichomonas vaginalis Phitirus pubis
huevos y quistes de paraacutesitos por contaminacioacuten con heces
BACTERIAS Reportar la presencia de bacterias moderadas o abundantes
solamente cuando se observen maacutes de 10 leucocitos por campo
Valores de referencia
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CEacuteLULAS EPITELIALES ESCAMOSAS Escasas a moderadas
CEacuteLULAS EPITELIALES REDONDAS No deben observarse
GLOacuteBULOS ROJOS No deben observarse
LEUCOCITOS 0-5 por campo
CILINDROS No deben observarse
FILAMENTOS MUCOIDES No deben observarse
CRISTALES Podriacutean observarse oxalatos uratos y fosfatos amorfos de escasa a
moderada cantidad
LEVADURAS No deben observarse
PARAacuteSITOS No deben observarse
BACTERIAS Escasas o no presentes
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PRACTICA 6
UROCULTIVO Y ANTIBIOGRAMA
OBTENCIOacuteN DE MUESTRA DE ORINA PARA CULTIVO
Condiciones generales
La orina es un excelente medio de cultivo para la proliferacioacuten bacteriana por esta
razoacuten la muestra debe ser procesada dentro de las 2 horas despueacutes de haber
sido obtenida o debe refrigerarse a 4 degC (maacuteximo 24 horas) hasta su
procesamiento
Generalmente el desarrollo de dos o maacutes tipos de colonias (en pacientes sin
sonda vesical) indican que la muestra se ha contaminado por recoleccioacuten
incorrecta o demora en la siembra
OBTENCIOacuteN DE MUESTRA DE ORINA DEL CHORRO MEDIO
Obtencioacuten de muestras de orina en pacientes mujeres Materiales y equipos
a) Guantes de laacutetex esteacuteriles
b) Cinco o maacutes piezas de gasa esteacuteril de tamantildeo adecuado pudiendo
ser de 4rdquo x 4rdquo
c) Jaboacuten
d) Agua tibia esteacuteril
e) Frasco esteacuteril de boca ancha para la muestra de orina
Procedimiento
a) Mantener la privacidad de la paciente
b) Rotular el frasco con el nombre de la paciente fecha de obtencioacuten de la
muestra hora y el procedimiento usado para la obtencioacuten de la muestra
c) Lavarse las manos con jaboacuten y abundante agua
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d) Preparar una pieza de gasa para la limpieza de los genitales externos
humedicieacutendola con agua y una pequentildea cantidad de jaboacuten Preparar dos piezas
maacutes de gasa para el enjuague con agua tibia
e) Separar los labios mayores con dos dedos de una mano y limpiar el aacuterea
expuesta pasando la gasa de adelante hacia atraacutes
f) Descartar la gasa
g) Con otra gasa humedecida enjuagar el aacuterea de adelante hacia atraacutes Repetir el
procedimiento con otra gasa
h) Finalmente secar el aacuterea de adelante hacia atraacutes con un trozo de gasa seca
i) Mantener separados los labios mayores mientras la paciente empieza a orinar
Luego del chorro inicial colocar el frasco esteacuteril para colectar el chorro medio
j) Al terminar la recoleccioacuten tapar el frasco inmediatamente y limpiarle la
superficie
k) Transportar el frasco con la muestra de orina inmediatamente
Obtencioacuten de muestra de orina en pacientes varones
Materiales
a) Guantes de laacutetex
b) Cinco o maacutes piezas de gasa esteacuteril
c) Jaboacuten
d) Agua tibia esteacuteril
e) Frasco esteacuteril de boca ancha para la obtencioacuten de la muestra
Procedimiento
a) Mantener la privacidad del paciente
b) Rotular el frasco con el nombre del paciente fecha de obtencioacuten de la muestra
hora y el procedimiento usado para la obtencioacuten de la muestra
c) Lavarse las manos con jaboacuten y abundante agua
d) Preparar una pieza de gasa con agua y una pequentildea cantidad de jaboacuten
Preparar dos piezas maacutes de gasa para el enjuague con agua tibia
e) Realizar la higiene de los genitales Retraer el prepucio antes de lavar el glande
con la gasa humedecida con jaboacuten Descartar la gasa
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f) Enjuagar el glande usando una gasa huacutemeda Repetir el procedimiento con otra
gasa
g) Secar la zona usando uno o maacutes piezas de gasa seca
h) Indicar al paciente que mantenga el prepucio retirado e inicie la miccioacuten
directamente en un recipiente (orina para descartar)
i) Despueacutes del chorro inicial colocar el frasco esteacuteril para colectar la muestra del
chorro medio
j) Obtenida la muestra tapar el frasco inmediatamente y limpiarle la superficie
k) Transportar el frasco con la muestra de orina inmediatamente al laboratorio
SIEMBRA PRIMARIA DE MUESTRA DE ORINA
Objetivo
Describir el procedimiento para la siembra primaria de muestra de orina
Campo de aplicacioacuten
Se aplica para el cultivo de muestra de orina en el diagnoacutestico bacterioloacutegico de
infecciones del tracto urinario
Materiales y equipos
a) Asa calibrada de platino o descartable de 0001 mL oacute 001 mL
b) Estufa de 35 ndash 37 degC
c) Mechero Bunsen o cabina de flujo laminar
d) Guantes de laacutetex
e) Contenedor de material contaminado
f) Pinza esteacuteril
g) Propipeta o pipetor automaacutetico
h) Medios de cultivo
ndash Placas con agar sangre de carnero (AS)
ndash Placas con agar Mc Conkey (McC)
Procedimiento
a) Mantener las muestras en refrigeracioacuten (4 degC) hasta su procesamiento por
cultivo
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b) Los cultivos deben realizarse en una cabina de bioseguridad o cerca del
mechero Bunsen
c) Las placas con AS y McC que se utilizaraacuten en el urocultivo deben estar a
temperatura ambiente Rotular las placas
d) Si el asa calibrada no es descartable esterilizar el asa de siembra flameacuteandola
en el mechero Bunsen hasta que se ponga rojo vivo Dejar enfriar el asa
e) Tomar el frasco con la muestra de orina abrir la tapa y flamear la boca del
frasco en el mechero Bunsen
f) Tomar la muestra de orina con el asa de siembra esteacuteril introducieacutendola y
sacaacutendola del frasco en forma vertical Tapar el frasco con la muestra
g) Inocular en el centro de la placa con AS a partir del cual se extiende la muestra
hacia delante y hacia atraacutes
h) Luego sin quemar el asa el inoacuteculo se disemina uniformemente con trazos
perpendiculares a la siembra inicial en toda la placa
i) Proceder de la misma forma para el agar Mc Conkey
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Lectura
a) Realizar la evaluacioacuten a las 24 horas si no hay crecimiento bacteriano dejar
incubar hasta las 48 horas
b) La evaluacioacuten consiste en realizar el recuento de colonias cuyo resultado se
multiplica por el factor de dilucioacuten para obtener las UFC por mL
Interpretacioacuten
a) En pacientes sin sonda vesical la cuenta significativa de bacterias en orina es
la presencia de maacutes de 105 UFC mL de un solo germen
b) Los recuentos intermedios (103 ndash 104 UFCmL) indican infeccioacuten si el
procedimiento de recoleccioacuten de orina fue realizado correctamente
c) Generalmente el aislamiento de tres o maacutes especies bacterianas indican que la
muestra se ha contaminado por recoleccioacuten inadecuada o demora en la siembra
d) En pacientes con sonda vesical cuentas bacterianas menores de 105 UFCmL
pueden tener significado asiacute tambieacuten se pueden encontrar bacteriurias
polimicrobianas hasta en casi 15 de enfermos
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e) En pacientes sin cateacuteter se puede comprobar si el procedimiento de obtencioacuten
de muestra fue realizado correctamente observando la frecuencia con la cual se
informan recuentos de colonias intermedias entre 103 ndash 104 UFCmL En
pacientes sin infecciones del tracto urinario el recuento es nulo o se reduce a
pocas colonias
IDENTIFICACION BACTERIANA
Lectura de cultivos en agar Mac Conkey
ndash En agar Mc Conkey Escherichia coli lactosa positiva forma colonias de borde
entero de color fucsia opacas de 2 mm ndash 3 mm de diaacutemetro usualmente
rodeadas de una zona opaca alrededor de la colonia (bilis precipitada) Las cepas
de E coli que son lactosa negativa dan colonias incoloras de 3 ndash 4 mm
ndash En agar Mc Conkey K pneumoniae forma colonias de borde entero de color
rosado a rosado oscuro de 3 ndash 4 mm de diaacutemetro y aspecto mucoide
ndash En agar Mc Conkey Enterobacter spp forma colonias de borde entero de color
rosado de 2 ndash 4 mm de diaacutemetro no tan mucoides como K pneumoniae
Las colonias con estas caracteriacutesticas son subcultivadas en medios diferenciales
PRUEBAS BIOQUIMICAS
TSI
Lectura
Es importante hacer la lectura entre las 18 ndash 24 horas para no obtener resultados
erroacuteneos La lectura se hace sobre la base de tres caracteriacutesticas Utilizacioacuten de
hidratos de carbono produccioacuten de gas y produccioacuten de aacutecido sulfhiacutedrico
Utilizacioacuten de hidratos de carbono
ndash Utilizacioacuten de lactosa Reaccioacuten aacutecida en el pico de flauta (color amarillo)
Abreviatura (A)
ndash Utilizacioacuten de glucosa Reaccioacuten aacutecida en la columna del medio (color amarillo)
Abreviatura (A)
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ndash No hay utilizacioacuten del carbohidrato Se puede observar una reaccioacuten alcalina
(color rojo) o que no hay cambio de color (permanece del mismo color que el
medio no inoculado) Abreviaturas (K) o (N) respectivamente
Nota Cuando el microorganismo tambieacuten produce H2S el precipitado negro
puede ocultar la acidez
Produccioacuten de gas de glucosa
ndash Se considera positivo Presencia de una sola burbuja de gas burbujas en el
medio divisioacuten del medio desplazamiento completo del medio del fondo del tubo
dejando un aacuterea clara o una ligera muesca del medio en el costado del tubo
ndash Se registra la lectura por medio de cruces (+)
Produccioacuten de aacutecido sulfhiacutedrico
ndash Se manifiesta por un color negro distribuido por toda la columna del medio de
cultivo o soacutelo en la parte superior
ndash Se registra la lectura por medio de cruces (+)
Resultados
Ejemplo de simbolizacioacuten e interpretacioacuten
KA ndash+ Significa alcalinidad en la inclinacioacuten y acidez en el fondo (fermentacioacuten de
glucosa) gas negativo y H2S positivo
NN ndash ndashSignifica que no hay utilizacioacuten de la lactosa y glucosa ni produccioacuten de
H2S
AGAR LISINA HIERRO
En este medio se determina simultaacuteneamente la produccioacuten de lisina
descarboxilasa y de la formacioacuten de aacutecido sulfhiacutedrico
Lectura
Es importante hacer la lectura entre las 18 ndash 24 horas si la lectura se realiza antes
podemos obtener resultados falsos positivos asiacute como falsos negativos si se lee
despueacutes de las 24 horas Realizar la lectura en la columna y en la superficie
inclinada y observar la formacioacuten de aacutecido sulfhiacutedrico el cual se evidencia por una
coloracioacuten negra
Nota Generalmente las cepas del grupo Proteus y Providencia desaminan la
lisina a aacutecido ndashcetocarboacutenico Este uacuteltimo forma compuestos pardo-rojizos en la
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regioacuten superficial del medio de cultivo con la sal de hierro y bajo la influencia del
oxiacutegeno
Recomendaciones
No incubar maacutes del tiempo necesario para no ocasionar una alcalinizacioacuten en la
superficie del medio y por lo tanto producir un viraje hacia el violeta
UTILIZACIOacuteN DE CITRATO
Para determinar si un microorganismo es capaz de utilizar citrato como uacutenica
fuente de carbono para su metabolismo
Procedimiento
a) Incubar a 35ndash37 degC de 24 horasndash 48 horas En algunos casos es necesario una
incubacioacuten hasta por 4 diacuteas
b) Ver el viraje de color
Resultados
a) Prueba positiva Crecimiento con un color azul intenso en el pico de flauta o
presencia de colonias en ausencia del color azul
b) Prueba negativa No se observa crecimiento ni cambio de color (verde)
Controles
Positivo Enterobacter cloacae
Negativo Escherichia coli
HIDROacuteLISIS DE LA UREA (PRODUCCIOacuteN DE UREASA)
Es uacutetil para determinar la capacidad de un organismo de degradar la urea
formando dos moleacuteculas de amoniaco por accioacuten de la enzima ureasa
Procedimiento
Realizar la lectura despueacutes de 18 horas ndash 24 horas de incubacioacuten observando el
viraje de color
Resultados
Prueba positiva Color rosado intenso en el pico de flauta o todo el agar
Puede haber una reaccioacuten positiva retardada despueacutes de 24 horas y hasta
6 diacuteas de incubacioacuten (algunas cepas de Klebsiella por ejemplo)
Prueba negativa No se produce cambio de color
Controles
Laboratorio Cliacutenico PAULINA ARROLLO PEREacuteZ
Negativo Escherichia coli
Positivo Klebsiella pneumoniae
MOTILIDAD (MEDIOS SIM O MIO O AGAR MOVILIDAD)
Para determinar si un organismo es moacutevil o inmoacutevil
Procedimiento
Incubar a 35 ndash 37 degC de 24 a 48 horas
Resultados
Positivo Los microorganismos migran de la liacutenea de siembra y se difunden en el
medio provocando turbidez Tambieacuten puede manifestarse semejando
ldquovellosidadesrdquo a lo largo del trazo de siembra
Negativo Se observa un crecimiento bacteriano acentuado siguiendo el trazo de
siembra y el medio circundante se mantiene claro
Controles
Control positivo Escherichia coli
Control negativo Klebsiella pneumoniae
h) Prueba de indol[6]
Es uacutetil para determinar la capacidad de un microorganismo de producir indol a
partir del aminoaacutecido triptoacutefano
Medios y reactivos
Caldo de triptoacutefano o de peptona o caldo de triptona
Reactivo de indol de Kovacs
Procedimiento
Retirar aseacutepticamente 2 mL de caldo de cutivo con 24 horas de incubacioacuten
Agregar 5 gotas de reactivo de Kovacs
Mover suavemente el tubo y realizar la lectura
Laboratorio Cliacutenico PAULINA ARROLLO PEREacuteZ
Laboratorio Cliacutenico PAULINA ARROLLO PEREacuteZ
Laboratorio Cliacutenico PAULINA ARROLLO PEREacuteZ
ANTIBIOGRAMA
Preparacioacuten del Agar Mueller Hinton
Preparar el medio a partir de la base deshidratada de acuerdo a las
indicaciones del fabricante
Autoclavar y dejar enfriar en bantildeo de agua hasta que alcance los 45degC - 50degC
Repartir el medio en placas petri (60 ml ndash 70 ml o 25 ml ndash 30 ml para placas de
150 mm o 100 mm de diaacutemetro interno respectivamente) de manera que el
grosor del agar en la placa sea de 4 mm
Realizar las pruebas de esterilidad para cada lote de Mueller Hinton incubando
una o dos placas de cada lote a 30degC ndash 35degC durante 24 horas o maacutes Estas
placas utilizadas deben ser luego descartadas
Preparacioacuten del estaacutendar (05 Mc Farland) para el inoacuteculo
Para estandarizar la densidad del inoacuteculo se usa una suspensioacuten de sulfato de
bario (05 de la escala de Mac Farland) como estaacutendar
Preparacioacuten del estaacutendar de turbidez
a Agregar 05 ml de una solucioacuten de BaCl2 0048 M (BaCl22H2O al 1175 PV)
a 995 mL de una solucioacuten de H2SO4 018 M (036 N) (1 VV) en constante
movimiento para mantener la suspensioacuten
b Verificar la densidad correcta del estaacutendar usando un fotocoloriacutemetro oacute
espectrofotoacutemetro cuya absorbancia a 625 nm es 008 a 010 para el estaacutendar 05
de Mc Farland
c Distribuir de 4 ml a 6 ml en tubos con tapa de rosca o tapoacuten de jebe similares a
los que se usaraacuten para preparar el inoacuteculo
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d Ajustar bien las tapas o tapones y conservarlos en la oscuridad a temperatura
ambiente y anotar la fecha de preparacioacuten
e Antes de ser usado agitar vigorosamente dicho estaacutendar de preferencia en un
agitador mecaacutenico
f Verificar mensualmente la densidad de los estaacutendares de sulfato de bario y
reemplazarlo cuando sea necesario
INOCULACIOacuteN
Preparacioacuten del inoacuteculo
Puede realizarse de dos formas
Meacutetodo de desarrollo previo
a Seleccionar cuatro a cinco colonias bien aisladas del mismo tipo morfoloacutegico
de un cultivo en placa
b Tocar la superficie de cada colonia con una asa de siembra y transferirlo a un
tubo que contiene de 4 a 5 mL de caldo apropiado (Ej Caldo Tripticasa soya)
c Incubar el caldo a una temperatura entre 35degC a 37degC hasta que alcance o
exceda la turbidez del estaacutendar 05 de la escala de Mc Farland (por lo general de
2 a 6 horas)
d Ajustar la turbidez del inoacuteculo con solucioacuten salina o caldo apropiado hasta el
tubo 05 de la escala de Mc Farland por comparacioacuten visual con el estaacutendar Para
realizar este paso correctamente usar una luz apropiada y mirar los tubos contra
un fondo blanco con liacuteneas negras como contraste
e La suspensioacuten preparada contendraacute aproximadamente 1 a 2 x 108 UFCmL
Meacutetodo directo de inoculacioacuten a partir de colonias aisladas
a De una placa de cultivo con agar no selectivo e incubada por 18 - 24 h
seleccionar colonias aisladas y preparar una suspensioacutem directa en solucioacuten
salina oacute caldo
b La suspensioacuten debe ser inmediatamente ajustada a la escala 05 de Mc
Farland
Inoculacioacuten de las Placas
Dentro de los 15 minutos siguientes al ajuste de la turbidez del inoacuteculo sumergir
un hisopo esteacuteril en la suspensioacuten rotar el hisopo varias veces presionando
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firmemente sobre la pared interior del tubo por encima del nivel del liacutequido para
remover el exceso de inoacuteculo
Inocular la superficie seca de la placa de Mueller Hinton estriando con el hisopo
en tres direcciones para asegurar una distribucioacuten uniforme del inoacuteculo Antes de
colocar los discos dejar secar la placa a temperatura ambiente durante 3 a 5
minutos para que cualquier exceso de humedad superficial sea absorbido
APLICACIOacuteN DE LOS DISCOS
Colocar los discos individuales o multidiscos sobre la superficie del agar con la
ayuda de una pinza esteacuteril o la punta de una aguja presionando suavemente sobre
cada disco para asegurar un contacto completo con la superficie del agar
Distribuir los discos uniformemente de modo que esteacuten a una distancia miacutenima de
25 mm uno del otro (el diaacutemetro de los discos seguacuten las normas de la
Organizacioacuten Mundial de la Salud (OMS) debe ser de 6 mm) No deben colocarse
maacutes de 12 discos en una placa de 150 mm ni maacutes de 6 en una placa de 100 mm
de diaacutemetro interno para evitar la superposicioacuten de las zonas de inhibicioacuten Un
disco no debe ser removido una vez que tomoacute contacto con la superficie del agar
debido a que algunos antibioacuteticos se difunden raacutepidamente
INCUBACIOacuteN
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Incubar lar placas en posicioacuten invertida a 35degC por 18 a 24 horas dentro de los 15
minutos posteriores a la aplicacioacuten de los discos
Despueacutes del tiempo recomendado de incubacioacuten examinar cada placa y medir los
diaacutemetros de los halos de inhibicioacuten alrededor de cada disco
LECTURA DE LAS PLACAS E INTERPRETACIOacuteN DE LOS RESULTADOS
Medir los diaacutemetros de las zonas de inhibicioacuten completa (incluyendo el diaacutemetro
del disco) usando
una regla o calibrador Se debe mantener iluminada la parte posterior de la placa
petri con una luz reflejada localizada a unos cuantos centiacutemetros sobre un fondo
negro Tener la precaucioacuten de observar la placa siguiendo una vertical directa para
evitar una lectura erroacutenea de las marcas de la regla por efecto de paralelismo En
los medios suplementados con sangre las zonas son medidas en la parte superior
de la superficie del agar y retirando la tapa Tener cuidado de no medir la zona de
la hemoacutelisis sino la de inhibicioacuten del crecimiento
El punto final debe tomarse como el aacuterea que no muestra un crecimiento obvio
visible que puede ser detectado mediante observacioacuten visual no incluyendo velo
de crecimiento o colonias muy pequentildeas que puedan ser detectadas solo con
mucha dificultad en el borde de la zona Sin embargo las colonias mayores
creciendo dentro de la zona clara deberaacuten ser subcultivadas reidentificadas y
reensayadas Algunos Proteus spp debido a su gran movilidad pueden presentar
un velo de invasioacuten o ldquoswarmingrdquo dentro de las zonas de inhibicioacuten de algunos
antibioacuteticos En estos casos el velo del swarming debe ser ignorado al momento
de medir los halos de inhibicioacuten
DISCOS DE SENSIBILIDAD ANTIBIOacuteTICA A INCLUIR EN EL ANTIBIOGRAMA
Grupo I
Ampicilina
Cefalotina
Ampicilina Sulbactam o Amoxicilina Aacutecido Clavulaacutenico
Cefuroxima
Cefotaxima o Ceftriaxona
Gentamicina
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Amikacina
Aacutecido Nalidiacutexico(1)
Norfloxacina(1)
Ciprofloxacina
Cotrimoxazol (TrimetoprimSulfametoxazol)
Nitrofurantoiacutena(1)
Grupo II
Cefoxitina
Aztreonam
Ceftazidima
Cefixima
CefoperazonaSulbactam
Cefepime o Cefpirome
Imipenem o Meropenem
Cloramfenicol
Ofloxacina (1)
(1) Disco utilizado exclusivamente para infecciones de las viacuteas urinarias
Resistencias Naturales
Las enterobacterias son resistentes a Penicilina Oxacilina Macroacutelidos
Clindamicina y Glicopeacuteptidos
Klebsiella spp es resistente a las Aminopenicilinas
Citrobacter freundii Enterobacter cloacae y Enterobacter aerogenes son
resistentes a las Aminopenicilinas AminopenicilinasInhibidores de
betalactamasas Cefalosporinas de primera generacioacuten y Cefuroxima
Serratia marcescens es resistente a las Aminopenicilinas
AminopenicilinasInhibidores de betalactamasas Cefalosporinas de primera
generacioacuten y Cefoxitina
Proteus mirabilis es resistente a Nitrofurantoiacutena
Proteus vulgaris es resistente a las Aminopenicilinas Cefalosporinas de primera
generacioacuten Cefuroxima y Nitrofurantoiacutena
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Morganella morganii es resistente a las Aminopenicilinas
AminopenicilinasInhibidores de betalactamasas Cefalosporinas de primera
generacioacuten Cefuroxima y Nitrofurantoiacutena
Providentia stuartii es resistente a las Aminopenicilinas
AminopenicilinasInhibidores de betalactamasas Cefalosporinas de primera
generacioacuten Gentamicina (bajo nivel) y Nitrofurantoiacutena
ANTIBIOTICOS Y DIAMETROS CRITICOS PARA ENTEROBACTERIAS
E PRACTICA 7
EXAMEN QUIMICO DE CALCULO RENAL
EXAMEN FISICO
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Se debe pesar el caacutelculo y anotar el dato obtenido Medir dos de los diaacutemetros y
tomar nota del aspecto general textura y color y despueacutes de seccionado el
aspecto general la prominencia y el color de los distintos estratos
Se secciona el caacutelculo con una sierra Se raspan las caras con una aguja Se
procede lo mismo con el nuacutecleo Cada una de las muestras obtenidas se trituran
por separado en un mortero
PROCESO
Se coloca una porcioacuten del polvo del caacutelculo en un crisol y se calienta al fuego Si
no hay ennegrecimiento ni se altera el tamantildeo original el caacutelculo estaraacute formado
por sustancias inorgaacutenicas Si en cambio se carboniza desapareciendo estaraacute
formado por sustancias orgaacutenicas Si se funde y se ennegrece este caacutelculo estaacute
formado por sulfamidasa
Una vez obtenidos los datos pueden seleccionarse las reacciones necesarias
para confirmarlos
REACCIONES QUIMICAS
Solucioacuten A
10mg del polvo en matraz y antildeadir 50 ml de ClH 5 Observar si se
produce efervescencia Calentar en bantildeo de agua hirviendo por 10 a 15 minutos y
filtrar en caliente El filtrado se distribuye en 8 tubos numerados y se introduce un
trocito de papel tornasol en cada uno
Solucioacuten B
Agitar con Cl3CH unos 10 mg del polvo Reposar en tubo tapado a
temperatura ambiente hasta que el insoluble haya precipitado Decantar la
solucioacuten clorofoacutermica y guardar igual que el sedimento por separado
Carbonato efervescencia al agregar el CIH por desprendimiento de CO 2
Amonio al tubo 1 de la solucioacuten A se le agrega solucioacuten de OHNa 10 gota a
gota y agitando hasta que el papel tornasol vire
Agregar 1 ml de reactivo de Nessler Un color amarillo oscuro oporto indica
positividad de la reaccioacuten
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El NH 3 formado por los grupos NH 4 en medio alcalino reacciona con el yoiduro
doble del reactivo de Nesler para dar yoduro amoacutenico dimercuacuterico precipitado
pardo anaranjado
Acido uacuterico Neutralizar el contenido del tubo 2 como se explicoacute antes
Agregar igual volumen de CNN Na 2 y 05 ml de reactivo de Folin para aacutecido
uacuterico Un color azul intenso indica presencia de aacutecido uacuterico
El aacutecido uacuterico reduce al aacutecido fosfotuacutengstico en medio alcalino dando color azul
intenso de azul de tungsteno y a su vez se oxida a alantoiacutena
Reactivo fosfotuacutengstico (Folin y Denis) Antes del uso diluir al 10 en agua
destilada
Oxalato de calcio Neutralizar el contenido del tubo 3 Agregar CH 3 COOH 10
hasta reaccioacuten aacutecida al tornasol Precipitado blanco que no se redisuelve por
agitacioacuten indica presencia de oxalato de calcio
Calcio Neutralizar el tubo 4 Acidificar con CH 3 COOH glacial Agregar 2 ml C 2
O 4 ( NH 4 ) 4 Precipitado blancodenso indica presencia de Ca ++
Fosfato Neutralizar el tubo 5 Agregar 1 ml de solucioacuten de molibdato Mezclar
antildeadir 05 ml de aacutecido aminonaftol sulfoacutenico (ANS) 025 Coloracioacuten azul que
aparece en 5 minutos indica fosfatos
El color azul se debe a los oacutexidos reducidos de molibdeno
Reactivos
1 ClH concentrado2 Solucioacuten de OHK 203 NO 3 H concentrado4 Mo O 4 (NH 4 ) 2 disolver 25 g de la droga en 50 ml de SO 4 H 2 10 N y
diluir a 100 ml con H2 O destilada5 Amoniacuteaco
Reactivo ANS En matraz x 250 ml poner 05 g de aacutecido aminonaftolsulfoacutenico y
agrgar 195 ml de bisulfito de sodio 15 y 5 ml de sulfito de sodio 20 Mezclar
bien hasta disolucioacuten Si no se disuelve en media hora agregar maacutes sulfito y
agitar El reactivo dura unas 2 semanas
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Magnesio Neutralizar el tubo 7 con OHNH 4 y antildeadir 1 ml de solucioacuten alcohoacutelica
de p ndash Nitrobenceno azorresorcinol Un cromoacutegeno rojo indica presencia de
magnesio
En medio alcalino se forma (OH) 2 Mg El colorante azo resulta absorbido por el
(OH) 2 Mg en medio alcalino
Xantina A un tercio del residuo de la solucioacuten B agregarle gotas de NO 3 H
concentrado
Se disuelve el residuo sin desprender gas Evaporar a sequedad en bantildeo Mariacutea
hirviente quedando un residuo amarillo Dejar enfriar y humedecer con gotas de
OHNa 10 Una coloracioacuten anaranjada que vira al rojo oscuro al calentar indica
presencia de xantina
La reaccioacuten es la xantoproteica Migracioacuten de los anillos fenilo existentes en la
tirosina fenilalanina y triptoacutefano que da un color amarillo de los productos de
nitrosustitucioacuten para virar al anaranjado tras la adicioacuten de un aacutelcali ( formacioacuten de
la sal)
Nota El reactivo de molibdato se puede preparar asiacute
Solucioacuten 1 SO 4 H 2 01 N
Medir 450 ml de SO4 H 2 concentrado y agregarlos a 1300 ml de agua
destilada
Solucioacuten 2
A 250 ml de SO 4 H 2 01 N antildeadir la solucioacuten de molibdato y llevar con
agua destilada a 250 ml Mezclar
Sulfamidas Neutralizar el uacuteltimo tubo Antildeadir 1 ml de NO 2 Na 05 preparado
recientemente Agitar y reposar por 3 minutos Antildeadir 5 ml de solucioacuten alcohoacutelica
de dimetil-alfa naftilamina 025 Un color rojizo indica presencia de sulfamidas
Finalmente procede hacer mencioacuten de ciertos procedimientos fiacutesicos como la
microscopia de polarizacioacuten difraccioacuten de rayos X cristalografiacutea
espectrofotometriacutea de rayos infrarrojos etc que permiten actualmente un
conocimiento maacutes confiable de la estructura de los caacutelculos
- Reactivos
-
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- Colocar una gota de sedimento entre un porta y un cubreobjeto
- Observar la preparacioacuten con el objetivo 10x para lograr una visioacuten general del
sedimento
- Identificar los elementos formes a mayor aumento 40x
- Anotar lo observado
FUENTES DE ERROR
- Usar portaobjetos y cubreobjetos sucios
- Desecacioacuten del sedimento urinario
-Tiempo transcurrido desde la toma de la muestra hasta la observacioacuten
microscoacutepica
- Uso excesivo de luz
- Centrifugacioacuten inadecuada
FORMA DE REPORTE
CEacuteLULAS EPITELIALES ESCAMOSAS Y REDONDAS reportar escasas
moderadas o abundantes
GLOacuteBULOS ROJOS Reportar el nuacutemero estimado por campo
LEUCOCITOS Reportar el nuacutemero estimado por campo
CILINDROS se pueden encontrar en la orina los siguientes cilindros
hialinos granulosos finos y gruesos leucocitarios hemaacuteticos grasos y ceacutereos
Reportar el nuacutemero de cilindros observados por campo
FILAMENTOS MUCOIDES reportar escasos moderados o abundantes
CRISTALES se pueden encontrar en la orina los siguientes cristales oxalatos de
calcio acido uacuterico uratos amorfos fosfatos amorfos fosfatos triples urato de
amonio leucina cistina y tirosina
Reportar en la forma siguiente escasos moderados o abundantes
LEVADURAS Reportar escasos moderada y abundantes
PARAacuteSITOS Se pueden encontrar en orina Trichomonas vaginalis Phitirus pubis
huevos y quistes de paraacutesitos por contaminacioacuten con heces
BACTERIAS Reportar la presencia de bacterias moderadas o abundantes
solamente cuando se observen maacutes de 10 leucocitos por campo
Valores de referencia
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CEacuteLULAS EPITELIALES ESCAMOSAS Escasas a moderadas
CEacuteLULAS EPITELIALES REDONDAS No deben observarse
GLOacuteBULOS ROJOS No deben observarse
LEUCOCITOS 0-5 por campo
CILINDROS No deben observarse
FILAMENTOS MUCOIDES No deben observarse
CRISTALES Podriacutean observarse oxalatos uratos y fosfatos amorfos de escasa a
moderada cantidad
LEVADURAS No deben observarse
PARAacuteSITOS No deben observarse
BACTERIAS Escasas o no presentes
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PRACTICA 6
UROCULTIVO Y ANTIBIOGRAMA
OBTENCIOacuteN DE MUESTRA DE ORINA PARA CULTIVO
Condiciones generales
La orina es un excelente medio de cultivo para la proliferacioacuten bacteriana por esta
razoacuten la muestra debe ser procesada dentro de las 2 horas despueacutes de haber
sido obtenida o debe refrigerarse a 4 degC (maacuteximo 24 horas) hasta su
procesamiento
Generalmente el desarrollo de dos o maacutes tipos de colonias (en pacientes sin
sonda vesical) indican que la muestra se ha contaminado por recoleccioacuten
incorrecta o demora en la siembra
OBTENCIOacuteN DE MUESTRA DE ORINA DEL CHORRO MEDIO
Obtencioacuten de muestras de orina en pacientes mujeres Materiales y equipos
a) Guantes de laacutetex esteacuteriles
b) Cinco o maacutes piezas de gasa esteacuteril de tamantildeo adecuado pudiendo
ser de 4rdquo x 4rdquo
c) Jaboacuten
d) Agua tibia esteacuteril
e) Frasco esteacuteril de boca ancha para la muestra de orina
Procedimiento
a) Mantener la privacidad de la paciente
b) Rotular el frasco con el nombre de la paciente fecha de obtencioacuten de la
muestra hora y el procedimiento usado para la obtencioacuten de la muestra
c) Lavarse las manos con jaboacuten y abundante agua
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d) Preparar una pieza de gasa para la limpieza de los genitales externos
humedicieacutendola con agua y una pequentildea cantidad de jaboacuten Preparar dos piezas
maacutes de gasa para el enjuague con agua tibia
e) Separar los labios mayores con dos dedos de una mano y limpiar el aacuterea
expuesta pasando la gasa de adelante hacia atraacutes
f) Descartar la gasa
g) Con otra gasa humedecida enjuagar el aacuterea de adelante hacia atraacutes Repetir el
procedimiento con otra gasa
h) Finalmente secar el aacuterea de adelante hacia atraacutes con un trozo de gasa seca
i) Mantener separados los labios mayores mientras la paciente empieza a orinar
Luego del chorro inicial colocar el frasco esteacuteril para colectar el chorro medio
j) Al terminar la recoleccioacuten tapar el frasco inmediatamente y limpiarle la
superficie
k) Transportar el frasco con la muestra de orina inmediatamente
Obtencioacuten de muestra de orina en pacientes varones
Materiales
a) Guantes de laacutetex
b) Cinco o maacutes piezas de gasa esteacuteril
c) Jaboacuten
d) Agua tibia esteacuteril
e) Frasco esteacuteril de boca ancha para la obtencioacuten de la muestra
Procedimiento
a) Mantener la privacidad del paciente
b) Rotular el frasco con el nombre del paciente fecha de obtencioacuten de la muestra
hora y el procedimiento usado para la obtencioacuten de la muestra
c) Lavarse las manos con jaboacuten y abundante agua
d) Preparar una pieza de gasa con agua y una pequentildea cantidad de jaboacuten
Preparar dos piezas maacutes de gasa para el enjuague con agua tibia
e) Realizar la higiene de los genitales Retraer el prepucio antes de lavar el glande
con la gasa humedecida con jaboacuten Descartar la gasa
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f) Enjuagar el glande usando una gasa huacutemeda Repetir el procedimiento con otra
gasa
g) Secar la zona usando uno o maacutes piezas de gasa seca
h) Indicar al paciente que mantenga el prepucio retirado e inicie la miccioacuten
directamente en un recipiente (orina para descartar)
i) Despueacutes del chorro inicial colocar el frasco esteacuteril para colectar la muestra del
chorro medio
j) Obtenida la muestra tapar el frasco inmediatamente y limpiarle la superficie
k) Transportar el frasco con la muestra de orina inmediatamente al laboratorio
SIEMBRA PRIMARIA DE MUESTRA DE ORINA
Objetivo
Describir el procedimiento para la siembra primaria de muestra de orina
Campo de aplicacioacuten
Se aplica para el cultivo de muestra de orina en el diagnoacutestico bacterioloacutegico de
infecciones del tracto urinario
Materiales y equipos
a) Asa calibrada de platino o descartable de 0001 mL oacute 001 mL
b) Estufa de 35 ndash 37 degC
c) Mechero Bunsen o cabina de flujo laminar
d) Guantes de laacutetex
e) Contenedor de material contaminado
f) Pinza esteacuteril
g) Propipeta o pipetor automaacutetico
h) Medios de cultivo
ndash Placas con agar sangre de carnero (AS)
ndash Placas con agar Mc Conkey (McC)
Procedimiento
a) Mantener las muestras en refrigeracioacuten (4 degC) hasta su procesamiento por
cultivo
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b) Los cultivos deben realizarse en una cabina de bioseguridad o cerca del
mechero Bunsen
c) Las placas con AS y McC que se utilizaraacuten en el urocultivo deben estar a
temperatura ambiente Rotular las placas
d) Si el asa calibrada no es descartable esterilizar el asa de siembra flameacuteandola
en el mechero Bunsen hasta que se ponga rojo vivo Dejar enfriar el asa
e) Tomar el frasco con la muestra de orina abrir la tapa y flamear la boca del
frasco en el mechero Bunsen
f) Tomar la muestra de orina con el asa de siembra esteacuteril introducieacutendola y
sacaacutendola del frasco en forma vertical Tapar el frasco con la muestra
g) Inocular en el centro de la placa con AS a partir del cual se extiende la muestra
hacia delante y hacia atraacutes
h) Luego sin quemar el asa el inoacuteculo se disemina uniformemente con trazos
perpendiculares a la siembra inicial en toda la placa
i) Proceder de la misma forma para el agar Mc Conkey
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Lectura
a) Realizar la evaluacioacuten a las 24 horas si no hay crecimiento bacteriano dejar
incubar hasta las 48 horas
b) La evaluacioacuten consiste en realizar el recuento de colonias cuyo resultado se
multiplica por el factor de dilucioacuten para obtener las UFC por mL
Interpretacioacuten
a) En pacientes sin sonda vesical la cuenta significativa de bacterias en orina es
la presencia de maacutes de 105 UFC mL de un solo germen
b) Los recuentos intermedios (103 ndash 104 UFCmL) indican infeccioacuten si el
procedimiento de recoleccioacuten de orina fue realizado correctamente
c) Generalmente el aislamiento de tres o maacutes especies bacterianas indican que la
muestra se ha contaminado por recoleccioacuten inadecuada o demora en la siembra
d) En pacientes con sonda vesical cuentas bacterianas menores de 105 UFCmL
pueden tener significado asiacute tambieacuten se pueden encontrar bacteriurias
polimicrobianas hasta en casi 15 de enfermos
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e) En pacientes sin cateacuteter se puede comprobar si el procedimiento de obtencioacuten
de muestra fue realizado correctamente observando la frecuencia con la cual se
informan recuentos de colonias intermedias entre 103 ndash 104 UFCmL En
pacientes sin infecciones del tracto urinario el recuento es nulo o se reduce a
pocas colonias
IDENTIFICACION BACTERIANA
Lectura de cultivos en agar Mac Conkey
ndash En agar Mc Conkey Escherichia coli lactosa positiva forma colonias de borde
entero de color fucsia opacas de 2 mm ndash 3 mm de diaacutemetro usualmente
rodeadas de una zona opaca alrededor de la colonia (bilis precipitada) Las cepas
de E coli que son lactosa negativa dan colonias incoloras de 3 ndash 4 mm
ndash En agar Mc Conkey K pneumoniae forma colonias de borde entero de color
rosado a rosado oscuro de 3 ndash 4 mm de diaacutemetro y aspecto mucoide
ndash En agar Mc Conkey Enterobacter spp forma colonias de borde entero de color
rosado de 2 ndash 4 mm de diaacutemetro no tan mucoides como K pneumoniae
Las colonias con estas caracteriacutesticas son subcultivadas en medios diferenciales
PRUEBAS BIOQUIMICAS
TSI
Lectura
Es importante hacer la lectura entre las 18 ndash 24 horas para no obtener resultados
erroacuteneos La lectura se hace sobre la base de tres caracteriacutesticas Utilizacioacuten de
hidratos de carbono produccioacuten de gas y produccioacuten de aacutecido sulfhiacutedrico
Utilizacioacuten de hidratos de carbono
ndash Utilizacioacuten de lactosa Reaccioacuten aacutecida en el pico de flauta (color amarillo)
Abreviatura (A)
ndash Utilizacioacuten de glucosa Reaccioacuten aacutecida en la columna del medio (color amarillo)
Abreviatura (A)
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ndash No hay utilizacioacuten del carbohidrato Se puede observar una reaccioacuten alcalina
(color rojo) o que no hay cambio de color (permanece del mismo color que el
medio no inoculado) Abreviaturas (K) o (N) respectivamente
Nota Cuando el microorganismo tambieacuten produce H2S el precipitado negro
puede ocultar la acidez
Produccioacuten de gas de glucosa
ndash Se considera positivo Presencia de una sola burbuja de gas burbujas en el
medio divisioacuten del medio desplazamiento completo del medio del fondo del tubo
dejando un aacuterea clara o una ligera muesca del medio en el costado del tubo
ndash Se registra la lectura por medio de cruces (+)
Produccioacuten de aacutecido sulfhiacutedrico
ndash Se manifiesta por un color negro distribuido por toda la columna del medio de
cultivo o soacutelo en la parte superior
ndash Se registra la lectura por medio de cruces (+)
Resultados
Ejemplo de simbolizacioacuten e interpretacioacuten
KA ndash+ Significa alcalinidad en la inclinacioacuten y acidez en el fondo (fermentacioacuten de
glucosa) gas negativo y H2S positivo
NN ndash ndashSignifica que no hay utilizacioacuten de la lactosa y glucosa ni produccioacuten de
H2S
AGAR LISINA HIERRO
En este medio se determina simultaacuteneamente la produccioacuten de lisina
descarboxilasa y de la formacioacuten de aacutecido sulfhiacutedrico
Lectura
Es importante hacer la lectura entre las 18 ndash 24 horas si la lectura se realiza antes
podemos obtener resultados falsos positivos asiacute como falsos negativos si se lee
despueacutes de las 24 horas Realizar la lectura en la columna y en la superficie
inclinada y observar la formacioacuten de aacutecido sulfhiacutedrico el cual se evidencia por una
coloracioacuten negra
Nota Generalmente las cepas del grupo Proteus y Providencia desaminan la
lisina a aacutecido ndashcetocarboacutenico Este uacuteltimo forma compuestos pardo-rojizos en la
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regioacuten superficial del medio de cultivo con la sal de hierro y bajo la influencia del
oxiacutegeno
Recomendaciones
No incubar maacutes del tiempo necesario para no ocasionar una alcalinizacioacuten en la
superficie del medio y por lo tanto producir un viraje hacia el violeta
UTILIZACIOacuteN DE CITRATO
Para determinar si un microorganismo es capaz de utilizar citrato como uacutenica
fuente de carbono para su metabolismo
Procedimiento
a) Incubar a 35ndash37 degC de 24 horasndash 48 horas En algunos casos es necesario una
incubacioacuten hasta por 4 diacuteas
b) Ver el viraje de color
Resultados
a) Prueba positiva Crecimiento con un color azul intenso en el pico de flauta o
presencia de colonias en ausencia del color azul
b) Prueba negativa No se observa crecimiento ni cambio de color (verde)
Controles
Positivo Enterobacter cloacae
Negativo Escherichia coli
HIDROacuteLISIS DE LA UREA (PRODUCCIOacuteN DE UREASA)
Es uacutetil para determinar la capacidad de un organismo de degradar la urea
formando dos moleacuteculas de amoniaco por accioacuten de la enzima ureasa
Procedimiento
Realizar la lectura despueacutes de 18 horas ndash 24 horas de incubacioacuten observando el
viraje de color
Resultados
Prueba positiva Color rosado intenso en el pico de flauta o todo el agar
Puede haber una reaccioacuten positiva retardada despueacutes de 24 horas y hasta
6 diacuteas de incubacioacuten (algunas cepas de Klebsiella por ejemplo)
Prueba negativa No se produce cambio de color
Controles
Laboratorio Cliacutenico PAULINA ARROLLO PEREacuteZ
Negativo Escherichia coli
Positivo Klebsiella pneumoniae
MOTILIDAD (MEDIOS SIM O MIO O AGAR MOVILIDAD)
Para determinar si un organismo es moacutevil o inmoacutevil
Procedimiento
Incubar a 35 ndash 37 degC de 24 a 48 horas
Resultados
Positivo Los microorganismos migran de la liacutenea de siembra y se difunden en el
medio provocando turbidez Tambieacuten puede manifestarse semejando
ldquovellosidadesrdquo a lo largo del trazo de siembra
Negativo Se observa un crecimiento bacteriano acentuado siguiendo el trazo de
siembra y el medio circundante se mantiene claro
Controles
Control positivo Escherichia coli
Control negativo Klebsiella pneumoniae
h) Prueba de indol[6]
Es uacutetil para determinar la capacidad de un microorganismo de producir indol a
partir del aminoaacutecido triptoacutefano
Medios y reactivos
Caldo de triptoacutefano o de peptona o caldo de triptona
Reactivo de indol de Kovacs
Procedimiento
Retirar aseacutepticamente 2 mL de caldo de cutivo con 24 horas de incubacioacuten
Agregar 5 gotas de reactivo de Kovacs
Mover suavemente el tubo y realizar la lectura
Laboratorio Cliacutenico PAULINA ARROLLO PEREacuteZ
Laboratorio Cliacutenico PAULINA ARROLLO PEREacuteZ
Laboratorio Cliacutenico PAULINA ARROLLO PEREacuteZ
ANTIBIOGRAMA
Preparacioacuten del Agar Mueller Hinton
Preparar el medio a partir de la base deshidratada de acuerdo a las
indicaciones del fabricante
Autoclavar y dejar enfriar en bantildeo de agua hasta que alcance los 45degC - 50degC
Repartir el medio en placas petri (60 ml ndash 70 ml o 25 ml ndash 30 ml para placas de
150 mm o 100 mm de diaacutemetro interno respectivamente) de manera que el
grosor del agar en la placa sea de 4 mm
Realizar las pruebas de esterilidad para cada lote de Mueller Hinton incubando
una o dos placas de cada lote a 30degC ndash 35degC durante 24 horas o maacutes Estas
placas utilizadas deben ser luego descartadas
Preparacioacuten del estaacutendar (05 Mc Farland) para el inoacuteculo
Para estandarizar la densidad del inoacuteculo se usa una suspensioacuten de sulfato de
bario (05 de la escala de Mac Farland) como estaacutendar
Preparacioacuten del estaacutendar de turbidez
a Agregar 05 ml de una solucioacuten de BaCl2 0048 M (BaCl22H2O al 1175 PV)
a 995 mL de una solucioacuten de H2SO4 018 M (036 N) (1 VV) en constante
movimiento para mantener la suspensioacuten
b Verificar la densidad correcta del estaacutendar usando un fotocoloriacutemetro oacute
espectrofotoacutemetro cuya absorbancia a 625 nm es 008 a 010 para el estaacutendar 05
de Mc Farland
c Distribuir de 4 ml a 6 ml en tubos con tapa de rosca o tapoacuten de jebe similares a
los que se usaraacuten para preparar el inoacuteculo
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d Ajustar bien las tapas o tapones y conservarlos en la oscuridad a temperatura
ambiente y anotar la fecha de preparacioacuten
e Antes de ser usado agitar vigorosamente dicho estaacutendar de preferencia en un
agitador mecaacutenico
f Verificar mensualmente la densidad de los estaacutendares de sulfato de bario y
reemplazarlo cuando sea necesario
INOCULACIOacuteN
Preparacioacuten del inoacuteculo
Puede realizarse de dos formas
Meacutetodo de desarrollo previo
a Seleccionar cuatro a cinco colonias bien aisladas del mismo tipo morfoloacutegico
de un cultivo en placa
b Tocar la superficie de cada colonia con una asa de siembra y transferirlo a un
tubo que contiene de 4 a 5 mL de caldo apropiado (Ej Caldo Tripticasa soya)
c Incubar el caldo a una temperatura entre 35degC a 37degC hasta que alcance o
exceda la turbidez del estaacutendar 05 de la escala de Mc Farland (por lo general de
2 a 6 horas)
d Ajustar la turbidez del inoacuteculo con solucioacuten salina o caldo apropiado hasta el
tubo 05 de la escala de Mc Farland por comparacioacuten visual con el estaacutendar Para
realizar este paso correctamente usar una luz apropiada y mirar los tubos contra
un fondo blanco con liacuteneas negras como contraste
e La suspensioacuten preparada contendraacute aproximadamente 1 a 2 x 108 UFCmL
Meacutetodo directo de inoculacioacuten a partir de colonias aisladas
a De una placa de cultivo con agar no selectivo e incubada por 18 - 24 h
seleccionar colonias aisladas y preparar una suspensioacutem directa en solucioacuten
salina oacute caldo
b La suspensioacuten debe ser inmediatamente ajustada a la escala 05 de Mc
Farland
Inoculacioacuten de las Placas
Dentro de los 15 minutos siguientes al ajuste de la turbidez del inoacuteculo sumergir
un hisopo esteacuteril en la suspensioacuten rotar el hisopo varias veces presionando
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firmemente sobre la pared interior del tubo por encima del nivel del liacutequido para
remover el exceso de inoacuteculo
Inocular la superficie seca de la placa de Mueller Hinton estriando con el hisopo
en tres direcciones para asegurar una distribucioacuten uniforme del inoacuteculo Antes de
colocar los discos dejar secar la placa a temperatura ambiente durante 3 a 5
minutos para que cualquier exceso de humedad superficial sea absorbido
APLICACIOacuteN DE LOS DISCOS
Colocar los discos individuales o multidiscos sobre la superficie del agar con la
ayuda de una pinza esteacuteril o la punta de una aguja presionando suavemente sobre
cada disco para asegurar un contacto completo con la superficie del agar
Distribuir los discos uniformemente de modo que esteacuten a una distancia miacutenima de
25 mm uno del otro (el diaacutemetro de los discos seguacuten las normas de la
Organizacioacuten Mundial de la Salud (OMS) debe ser de 6 mm) No deben colocarse
maacutes de 12 discos en una placa de 150 mm ni maacutes de 6 en una placa de 100 mm
de diaacutemetro interno para evitar la superposicioacuten de las zonas de inhibicioacuten Un
disco no debe ser removido una vez que tomoacute contacto con la superficie del agar
debido a que algunos antibioacuteticos se difunden raacutepidamente
INCUBACIOacuteN
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Incubar lar placas en posicioacuten invertida a 35degC por 18 a 24 horas dentro de los 15
minutos posteriores a la aplicacioacuten de los discos
Despueacutes del tiempo recomendado de incubacioacuten examinar cada placa y medir los
diaacutemetros de los halos de inhibicioacuten alrededor de cada disco
LECTURA DE LAS PLACAS E INTERPRETACIOacuteN DE LOS RESULTADOS
Medir los diaacutemetros de las zonas de inhibicioacuten completa (incluyendo el diaacutemetro
del disco) usando
una regla o calibrador Se debe mantener iluminada la parte posterior de la placa
petri con una luz reflejada localizada a unos cuantos centiacutemetros sobre un fondo
negro Tener la precaucioacuten de observar la placa siguiendo una vertical directa para
evitar una lectura erroacutenea de las marcas de la regla por efecto de paralelismo En
los medios suplementados con sangre las zonas son medidas en la parte superior
de la superficie del agar y retirando la tapa Tener cuidado de no medir la zona de
la hemoacutelisis sino la de inhibicioacuten del crecimiento
El punto final debe tomarse como el aacuterea que no muestra un crecimiento obvio
visible que puede ser detectado mediante observacioacuten visual no incluyendo velo
de crecimiento o colonias muy pequentildeas que puedan ser detectadas solo con
mucha dificultad en el borde de la zona Sin embargo las colonias mayores
creciendo dentro de la zona clara deberaacuten ser subcultivadas reidentificadas y
reensayadas Algunos Proteus spp debido a su gran movilidad pueden presentar
un velo de invasioacuten o ldquoswarmingrdquo dentro de las zonas de inhibicioacuten de algunos
antibioacuteticos En estos casos el velo del swarming debe ser ignorado al momento
de medir los halos de inhibicioacuten
DISCOS DE SENSIBILIDAD ANTIBIOacuteTICA A INCLUIR EN EL ANTIBIOGRAMA
Grupo I
Ampicilina
Cefalotina
Ampicilina Sulbactam o Amoxicilina Aacutecido Clavulaacutenico
Cefuroxima
Cefotaxima o Ceftriaxona
Gentamicina
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Amikacina
Aacutecido Nalidiacutexico(1)
Norfloxacina(1)
Ciprofloxacina
Cotrimoxazol (TrimetoprimSulfametoxazol)
Nitrofurantoiacutena(1)
Grupo II
Cefoxitina
Aztreonam
Ceftazidima
Cefixima
CefoperazonaSulbactam
Cefepime o Cefpirome
Imipenem o Meropenem
Cloramfenicol
Ofloxacina (1)
(1) Disco utilizado exclusivamente para infecciones de las viacuteas urinarias
Resistencias Naturales
Las enterobacterias son resistentes a Penicilina Oxacilina Macroacutelidos
Clindamicina y Glicopeacuteptidos
Klebsiella spp es resistente a las Aminopenicilinas
Citrobacter freundii Enterobacter cloacae y Enterobacter aerogenes son
resistentes a las Aminopenicilinas AminopenicilinasInhibidores de
betalactamasas Cefalosporinas de primera generacioacuten y Cefuroxima
Serratia marcescens es resistente a las Aminopenicilinas
AminopenicilinasInhibidores de betalactamasas Cefalosporinas de primera
generacioacuten y Cefoxitina
Proteus mirabilis es resistente a Nitrofurantoiacutena
Proteus vulgaris es resistente a las Aminopenicilinas Cefalosporinas de primera
generacioacuten Cefuroxima y Nitrofurantoiacutena
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Morganella morganii es resistente a las Aminopenicilinas
AminopenicilinasInhibidores de betalactamasas Cefalosporinas de primera
generacioacuten Cefuroxima y Nitrofurantoiacutena
Providentia stuartii es resistente a las Aminopenicilinas
AminopenicilinasInhibidores de betalactamasas Cefalosporinas de primera
generacioacuten Gentamicina (bajo nivel) y Nitrofurantoiacutena
ANTIBIOTICOS Y DIAMETROS CRITICOS PARA ENTEROBACTERIAS
E PRACTICA 7
EXAMEN QUIMICO DE CALCULO RENAL
EXAMEN FISICO
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Se debe pesar el caacutelculo y anotar el dato obtenido Medir dos de los diaacutemetros y
tomar nota del aspecto general textura y color y despueacutes de seccionado el
aspecto general la prominencia y el color de los distintos estratos
Se secciona el caacutelculo con una sierra Se raspan las caras con una aguja Se
procede lo mismo con el nuacutecleo Cada una de las muestras obtenidas se trituran
por separado en un mortero
PROCESO
Se coloca una porcioacuten del polvo del caacutelculo en un crisol y se calienta al fuego Si
no hay ennegrecimiento ni se altera el tamantildeo original el caacutelculo estaraacute formado
por sustancias inorgaacutenicas Si en cambio se carboniza desapareciendo estaraacute
formado por sustancias orgaacutenicas Si se funde y se ennegrece este caacutelculo estaacute
formado por sulfamidasa
Una vez obtenidos los datos pueden seleccionarse las reacciones necesarias
para confirmarlos
REACCIONES QUIMICAS
Solucioacuten A
10mg del polvo en matraz y antildeadir 50 ml de ClH 5 Observar si se
produce efervescencia Calentar en bantildeo de agua hirviendo por 10 a 15 minutos y
filtrar en caliente El filtrado se distribuye en 8 tubos numerados y se introduce un
trocito de papel tornasol en cada uno
Solucioacuten B
Agitar con Cl3CH unos 10 mg del polvo Reposar en tubo tapado a
temperatura ambiente hasta que el insoluble haya precipitado Decantar la
solucioacuten clorofoacutermica y guardar igual que el sedimento por separado
Carbonato efervescencia al agregar el CIH por desprendimiento de CO 2
Amonio al tubo 1 de la solucioacuten A se le agrega solucioacuten de OHNa 10 gota a
gota y agitando hasta que el papel tornasol vire
Agregar 1 ml de reactivo de Nessler Un color amarillo oscuro oporto indica
positividad de la reaccioacuten
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El NH 3 formado por los grupos NH 4 en medio alcalino reacciona con el yoiduro
doble del reactivo de Nesler para dar yoduro amoacutenico dimercuacuterico precipitado
pardo anaranjado
Acido uacuterico Neutralizar el contenido del tubo 2 como se explicoacute antes
Agregar igual volumen de CNN Na 2 y 05 ml de reactivo de Folin para aacutecido
uacuterico Un color azul intenso indica presencia de aacutecido uacuterico
El aacutecido uacuterico reduce al aacutecido fosfotuacutengstico en medio alcalino dando color azul
intenso de azul de tungsteno y a su vez se oxida a alantoiacutena
Reactivo fosfotuacutengstico (Folin y Denis) Antes del uso diluir al 10 en agua
destilada
Oxalato de calcio Neutralizar el contenido del tubo 3 Agregar CH 3 COOH 10
hasta reaccioacuten aacutecida al tornasol Precipitado blanco que no se redisuelve por
agitacioacuten indica presencia de oxalato de calcio
Calcio Neutralizar el tubo 4 Acidificar con CH 3 COOH glacial Agregar 2 ml C 2
O 4 ( NH 4 ) 4 Precipitado blancodenso indica presencia de Ca ++
Fosfato Neutralizar el tubo 5 Agregar 1 ml de solucioacuten de molibdato Mezclar
antildeadir 05 ml de aacutecido aminonaftol sulfoacutenico (ANS) 025 Coloracioacuten azul que
aparece en 5 minutos indica fosfatos
El color azul se debe a los oacutexidos reducidos de molibdeno
Reactivos
1 ClH concentrado2 Solucioacuten de OHK 203 NO 3 H concentrado4 Mo O 4 (NH 4 ) 2 disolver 25 g de la droga en 50 ml de SO 4 H 2 10 N y
diluir a 100 ml con H2 O destilada5 Amoniacuteaco
Reactivo ANS En matraz x 250 ml poner 05 g de aacutecido aminonaftolsulfoacutenico y
agrgar 195 ml de bisulfito de sodio 15 y 5 ml de sulfito de sodio 20 Mezclar
bien hasta disolucioacuten Si no se disuelve en media hora agregar maacutes sulfito y
agitar El reactivo dura unas 2 semanas
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Magnesio Neutralizar el tubo 7 con OHNH 4 y antildeadir 1 ml de solucioacuten alcohoacutelica
de p ndash Nitrobenceno azorresorcinol Un cromoacutegeno rojo indica presencia de
magnesio
En medio alcalino se forma (OH) 2 Mg El colorante azo resulta absorbido por el
(OH) 2 Mg en medio alcalino
Xantina A un tercio del residuo de la solucioacuten B agregarle gotas de NO 3 H
concentrado
Se disuelve el residuo sin desprender gas Evaporar a sequedad en bantildeo Mariacutea
hirviente quedando un residuo amarillo Dejar enfriar y humedecer con gotas de
OHNa 10 Una coloracioacuten anaranjada que vira al rojo oscuro al calentar indica
presencia de xantina
La reaccioacuten es la xantoproteica Migracioacuten de los anillos fenilo existentes en la
tirosina fenilalanina y triptoacutefano que da un color amarillo de los productos de
nitrosustitucioacuten para virar al anaranjado tras la adicioacuten de un aacutelcali ( formacioacuten de
la sal)
Nota El reactivo de molibdato se puede preparar asiacute
Solucioacuten 1 SO 4 H 2 01 N
Medir 450 ml de SO4 H 2 concentrado y agregarlos a 1300 ml de agua
destilada
Solucioacuten 2
A 250 ml de SO 4 H 2 01 N antildeadir la solucioacuten de molibdato y llevar con
agua destilada a 250 ml Mezclar
Sulfamidas Neutralizar el uacuteltimo tubo Antildeadir 1 ml de NO 2 Na 05 preparado
recientemente Agitar y reposar por 3 minutos Antildeadir 5 ml de solucioacuten alcohoacutelica
de dimetil-alfa naftilamina 025 Un color rojizo indica presencia de sulfamidas
Finalmente procede hacer mencioacuten de ciertos procedimientos fiacutesicos como la
microscopia de polarizacioacuten difraccioacuten de rayos X cristalografiacutea
espectrofotometriacutea de rayos infrarrojos etc que permiten actualmente un
conocimiento maacutes confiable de la estructura de los caacutelculos
- Reactivos
-
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CEacuteLULAS EPITELIALES ESCAMOSAS Escasas a moderadas
CEacuteLULAS EPITELIALES REDONDAS No deben observarse
GLOacuteBULOS ROJOS No deben observarse
LEUCOCITOS 0-5 por campo
CILINDROS No deben observarse
FILAMENTOS MUCOIDES No deben observarse
CRISTALES Podriacutean observarse oxalatos uratos y fosfatos amorfos de escasa a
moderada cantidad
LEVADURAS No deben observarse
PARAacuteSITOS No deben observarse
BACTERIAS Escasas o no presentes
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PRACTICA 6
UROCULTIVO Y ANTIBIOGRAMA
OBTENCIOacuteN DE MUESTRA DE ORINA PARA CULTIVO
Condiciones generales
La orina es un excelente medio de cultivo para la proliferacioacuten bacteriana por esta
razoacuten la muestra debe ser procesada dentro de las 2 horas despueacutes de haber
sido obtenida o debe refrigerarse a 4 degC (maacuteximo 24 horas) hasta su
procesamiento
Generalmente el desarrollo de dos o maacutes tipos de colonias (en pacientes sin
sonda vesical) indican que la muestra se ha contaminado por recoleccioacuten
incorrecta o demora en la siembra
OBTENCIOacuteN DE MUESTRA DE ORINA DEL CHORRO MEDIO
Obtencioacuten de muestras de orina en pacientes mujeres Materiales y equipos
a) Guantes de laacutetex esteacuteriles
b) Cinco o maacutes piezas de gasa esteacuteril de tamantildeo adecuado pudiendo
ser de 4rdquo x 4rdquo
c) Jaboacuten
d) Agua tibia esteacuteril
e) Frasco esteacuteril de boca ancha para la muestra de orina
Procedimiento
a) Mantener la privacidad de la paciente
b) Rotular el frasco con el nombre de la paciente fecha de obtencioacuten de la
muestra hora y el procedimiento usado para la obtencioacuten de la muestra
c) Lavarse las manos con jaboacuten y abundante agua
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d) Preparar una pieza de gasa para la limpieza de los genitales externos
humedicieacutendola con agua y una pequentildea cantidad de jaboacuten Preparar dos piezas
maacutes de gasa para el enjuague con agua tibia
e) Separar los labios mayores con dos dedos de una mano y limpiar el aacuterea
expuesta pasando la gasa de adelante hacia atraacutes
f) Descartar la gasa
g) Con otra gasa humedecida enjuagar el aacuterea de adelante hacia atraacutes Repetir el
procedimiento con otra gasa
h) Finalmente secar el aacuterea de adelante hacia atraacutes con un trozo de gasa seca
i) Mantener separados los labios mayores mientras la paciente empieza a orinar
Luego del chorro inicial colocar el frasco esteacuteril para colectar el chorro medio
j) Al terminar la recoleccioacuten tapar el frasco inmediatamente y limpiarle la
superficie
k) Transportar el frasco con la muestra de orina inmediatamente
Obtencioacuten de muestra de orina en pacientes varones
Materiales
a) Guantes de laacutetex
b) Cinco o maacutes piezas de gasa esteacuteril
c) Jaboacuten
d) Agua tibia esteacuteril
e) Frasco esteacuteril de boca ancha para la obtencioacuten de la muestra
Procedimiento
a) Mantener la privacidad del paciente
b) Rotular el frasco con el nombre del paciente fecha de obtencioacuten de la muestra
hora y el procedimiento usado para la obtencioacuten de la muestra
c) Lavarse las manos con jaboacuten y abundante agua
d) Preparar una pieza de gasa con agua y una pequentildea cantidad de jaboacuten
Preparar dos piezas maacutes de gasa para el enjuague con agua tibia
e) Realizar la higiene de los genitales Retraer el prepucio antes de lavar el glande
con la gasa humedecida con jaboacuten Descartar la gasa
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f) Enjuagar el glande usando una gasa huacutemeda Repetir el procedimiento con otra
gasa
g) Secar la zona usando uno o maacutes piezas de gasa seca
h) Indicar al paciente que mantenga el prepucio retirado e inicie la miccioacuten
directamente en un recipiente (orina para descartar)
i) Despueacutes del chorro inicial colocar el frasco esteacuteril para colectar la muestra del
chorro medio
j) Obtenida la muestra tapar el frasco inmediatamente y limpiarle la superficie
k) Transportar el frasco con la muestra de orina inmediatamente al laboratorio
SIEMBRA PRIMARIA DE MUESTRA DE ORINA
Objetivo
Describir el procedimiento para la siembra primaria de muestra de orina
Campo de aplicacioacuten
Se aplica para el cultivo de muestra de orina en el diagnoacutestico bacterioloacutegico de
infecciones del tracto urinario
Materiales y equipos
a) Asa calibrada de platino o descartable de 0001 mL oacute 001 mL
b) Estufa de 35 ndash 37 degC
c) Mechero Bunsen o cabina de flujo laminar
d) Guantes de laacutetex
e) Contenedor de material contaminado
f) Pinza esteacuteril
g) Propipeta o pipetor automaacutetico
h) Medios de cultivo
ndash Placas con agar sangre de carnero (AS)
ndash Placas con agar Mc Conkey (McC)
Procedimiento
a) Mantener las muestras en refrigeracioacuten (4 degC) hasta su procesamiento por
cultivo
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b) Los cultivos deben realizarse en una cabina de bioseguridad o cerca del
mechero Bunsen
c) Las placas con AS y McC que se utilizaraacuten en el urocultivo deben estar a
temperatura ambiente Rotular las placas
d) Si el asa calibrada no es descartable esterilizar el asa de siembra flameacuteandola
en el mechero Bunsen hasta que se ponga rojo vivo Dejar enfriar el asa
e) Tomar el frasco con la muestra de orina abrir la tapa y flamear la boca del
frasco en el mechero Bunsen
f) Tomar la muestra de orina con el asa de siembra esteacuteril introducieacutendola y
sacaacutendola del frasco en forma vertical Tapar el frasco con la muestra
g) Inocular en el centro de la placa con AS a partir del cual se extiende la muestra
hacia delante y hacia atraacutes
h) Luego sin quemar el asa el inoacuteculo se disemina uniformemente con trazos
perpendiculares a la siembra inicial en toda la placa
i) Proceder de la misma forma para el agar Mc Conkey
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Lectura
a) Realizar la evaluacioacuten a las 24 horas si no hay crecimiento bacteriano dejar
incubar hasta las 48 horas
b) La evaluacioacuten consiste en realizar el recuento de colonias cuyo resultado se
multiplica por el factor de dilucioacuten para obtener las UFC por mL
Interpretacioacuten
a) En pacientes sin sonda vesical la cuenta significativa de bacterias en orina es
la presencia de maacutes de 105 UFC mL de un solo germen
b) Los recuentos intermedios (103 ndash 104 UFCmL) indican infeccioacuten si el
procedimiento de recoleccioacuten de orina fue realizado correctamente
c) Generalmente el aislamiento de tres o maacutes especies bacterianas indican que la
muestra se ha contaminado por recoleccioacuten inadecuada o demora en la siembra
d) En pacientes con sonda vesical cuentas bacterianas menores de 105 UFCmL
pueden tener significado asiacute tambieacuten se pueden encontrar bacteriurias
polimicrobianas hasta en casi 15 de enfermos
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e) En pacientes sin cateacuteter se puede comprobar si el procedimiento de obtencioacuten
de muestra fue realizado correctamente observando la frecuencia con la cual se
informan recuentos de colonias intermedias entre 103 ndash 104 UFCmL En
pacientes sin infecciones del tracto urinario el recuento es nulo o se reduce a
pocas colonias
IDENTIFICACION BACTERIANA
Lectura de cultivos en agar Mac Conkey
ndash En agar Mc Conkey Escherichia coli lactosa positiva forma colonias de borde
entero de color fucsia opacas de 2 mm ndash 3 mm de diaacutemetro usualmente
rodeadas de una zona opaca alrededor de la colonia (bilis precipitada) Las cepas
de E coli que son lactosa negativa dan colonias incoloras de 3 ndash 4 mm
ndash En agar Mc Conkey K pneumoniae forma colonias de borde entero de color
rosado a rosado oscuro de 3 ndash 4 mm de diaacutemetro y aspecto mucoide
ndash En agar Mc Conkey Enterobacter spp forma colonias de borde entero de color
rosado de 2 ndash 4 mm de diaacutemetro no tan mucoides como K pneumoniae
Las colonias con estas caracteriacutesticas son subcultivadas en medios diferenciales
PRUEBAS BIOQUIMICAS
TSI
Lectura
Es importante hacer la lectura entre las 18 ndash 24 horas para no obtener resultados
erroacuteneos La lectura se hace sobre la base de tres caracteriacutesticas Utilizacioacuten de
hidratos de carbono produccioacuten de gas y produccioacuten de aacutecido sulfhiacutedrico
Utilizacioacuten de hidratos de carbono
ndash Utilizacioacuten de lactosa Reaccioacuten aacutecida en el pico de flauta (color amarillo)
Abreviatura (A)
ndash Utilizacioacuten de glucosa Reaccioacuten aacutecida en la columna del medio (color amarillo)
Abreviatura (A)
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ndash No hay utilizacioacuten del carbohidrato Se puede observar una reaccioacuten alcalina
(color rojo) o que no hay cambio de color (permanece del mismo color que el
medio no inoculado) Abreviaturas (K) o (N) respectivamente
Nota Cuando el microorganismo tambieacuten produce H2S el precipitado negro
puede ocultar la acidez
Produccioacuten de gas de glucosa
ndash Se considera positivo Presencia de una sola burbuja de gas burbujas en el
medio divisioacuten del medio desplazamiento completo del medio del fondo del tubo
dejando un aacuterea clara o una ligera muesca del medio en el costado del tubo
ndash Se registra la lectura por medio de cruces (+)
Produccioacuten de aacutecido sulfhiacutedrico
ndash Se manifiesta por un color negro distribuido por toda la columna del medio de
cultivo o soacutelo en la parte superior
ndash Se registra la lectura por medio de cruces (+)
Resultados
Ejemplo de simbolizacioacuten e interpretacioacuten
KA ndash+ Significa alcalinidad en la inclinacioacuten y acidez en el fondo (fermentacioacuten de
glucosa) gas negativo y H2S positivo
NN ndash ndashSignifica que no hay utilizacioacuten de la lactosa y glucosa ni produccioacuten de
H2S
AGAR LISINA HIERRO
En este medio se determina simultaacuteneamente la produccioacuten de lisina
descarboxilasa y de la formacioacuten de aacutecido sulfhiacutedrico
Lectura
Es importante hacer la lectura entre las 18 ndash 24 horas si la lectura se realiza antes
podemos obtener resultados falsos positivos asiacute como falsos negativos si se lee
despueacutes de las 24 horas Realizar la lectura en la columna y en la superficie
inclinada y observar la formacioacuten de aacutecido sulfhiacutedrico el cual se evidencia por una
coloracioacuten negra
Nota Generalmente las cepas del grupo Proteus y Providencia desaminan la
lisina a aacutecido ndashcetocarboacutenico Este uacuteltimo forma compuestos pardo-rojizos en la
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regioacuten superficial del medio de cultivo con la sal de hierro y bajo la influencia del
oxiacutegeno
Recomendaciones
No incubar maacutes del tiempo necesario para no ocasionar una alcalinizacioacuten en la
superficie del medio y por lo tanto producir un viraje hacia el violeta
UTILIZACIOacuteN DE CITRATO
Para determinar si un microorganismo es capaz de utilizar citrato como uacutenica
fuente de carbono para su metabolismo
Procedimiento
a) Incubar a 35ndash37 degC de 24 horasndash 48 horas En algunos casos es necesario una
incubacioacuten hasta por 4 diacuteas
b) Ver el viraje de color
Resultados
a) Prueba positiva Crecimiento con un color azul intenso en el pico de flauta o
presencia de colonias en ausencia del color azul
b) Prueba negativa No se observa crecimiento ni cambio de color (verde)
Controles
Positivo Enterobacter cloacae
Negativo Escherichia coli
HIDROacuteLISIS DE LA UREA (PRODUCCIOacuteN DE UREASA)
Es uacutetil para determinar la capacidad de un organismo de degradar la urea
formando dos moleacuteculas de amoniaco por accioacuten de la enzima ureasa
Procedimiento
Realizar la lectura despueacutes de 18 horas ndash 24 horas de incubacioacuten observando el
viraje de color
Resultados
Prueba positiva Color rosado intenso en el pico de flauta o todo el agar
Puede haber una reaccioacuten positiva retardada despueacutes de 24 horas y hasta
6 diacuteas de incubacioacuten (algunas cepas de Klebsiella por ejemplo)
Prueba negativa No se produce cambio de color
Controles
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Negativo Escherichia coli
Positivo Klebsiella pneumoniae
MOTILIDAD (MEDIOS SIM O MIO O AGAR MOVILIDAD)
Para determinar si un organismo es moacutevil o inmoacutevil
Procedimiento
Incubar a 35 ndash 37 degC de 24 a 48 horas
Resultados
Positivo Los microorganismos migran de la liacutenea de siembra y se difunden en el
medio provocando turbidez Tambieacuten puede manifestarse semejando
ldquovellosidadesrdquo a lo largo del trazo de siembra
Negativo Se observa un crecimiento bacteriano acentuado siguiendo el trazo de
siembra y el medio circundante se mantiene claro
Controles
Control positivo Escherichia coli
Control negativo Klebsiella pneumoniae
h) Prueba de indol[6]
Es uacutetil para determinar la capacidad de un microorganismo de producir indol a
partir del aminoaacutecido triptoacutefano
Medios y reactivos
Caldo de triptoacutefano o de peptona o caldo de triptona
Reactivo de indol de Kovacs
Procedimiento
Retirar aseacutepticamente 2 mL de caldo de cutivo con 24 horas de incubacioacuten
Agregar 5 gotas de reactivo de Kovacs
Mover suavemente el tubo y realizar la lectura
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ANTIBIOGRAMA
Preparacioacuten del Agar Mueller Hinton
Preparar el medio a partir de la base deshidratada de acuerdo a las
indicaciones del fabricante
Autoclavar y dejar enfriar en bantildeo de agua hasta que alcance los 45degC - 50degC
Repartir el medio en placas petri (60 ml ndash 70 ml o 25 ml ndash 30 ml para placas de
150 mm o 100 mm de diaacutemetro interno respectivamente) de manera que el
grosor del agar en la placa sea de 4 mm
Realizar las pruebas de esterilidad para cada lote de Mueller Hinton incubando
una o dos placas de cada lote a 30degC ndash 35degC durante 24 horas o maacutes Estas
placas utilizadas deben ser luego descartadas
Preparacioacuten del estaacutendar (05 Mc Farland) para el inoacuteculo
Para estandarizar la densidad del inoacuteculo se usa una suspensioacuten de sulfato de
bario (05 de la escala de Mac Farland) como estaacutendar
Preparacioacuten del estaacutendar de turbidez
a Agregar 05 ml de una solucioacuten de BaCl2 0048 M (BaCl22H2O al 1175 PV)
a 995 mL de una solucioacuten de H2SO4 018 M (036 N) (1 VV) en constante
movimiento para mantener la suspensioacuten
b Verificar la densidad correcta del estaacutendar usando un fotocoloriacutemetro oacute
espectrofotoacutemetro cuya absorbancia a 625 nm es 008 a 010 para el estaacutendar 05
de Mc Farland
c Distribuir de 4 ml a 6 ml en tubos con tapa de rosca o tapoacuten de jebe similares a
los que se usaraacuten para preparar el inoacuteculo
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d Ajustar bien las tapas o tapones y conservarlos en la oscuridad a temperatura
ambiente y anotar la fecha de preparacioacuten
e Antes de ser usado agitar vigorosamente dicho estaacutendar de preferencia en un
agitador mecaacutenico
f Verificar mensualmente la densidad de los estaacutendares de sulfato de bario y
reemplazarlo cuando sea necesario
INOCULACIOacuteN
Preparacioacuten del inoacuteculo
Puede realizarse de dos formas
Meacutetodo de desarrollo previo
a Seleccionar cuatro a cinco colonias bien aisladas del mismo tipo morfoloacutegico
de un cultivo en placa
b Tocar la superficie de cada colonia con una asa de siembra y transferirlo a un
tubo que contiene de 4 a 5 mL de caldo apropiado (Ej Caldo Tripticasa soya)
c Incubar el caldo a una temperatura entre 35degC a 37degC hasta que alcance o
exceda la turbidez del estaacutendar 05 de la escala de Mc Farland (por lo general de
2 a 6 horas)
d Ajustar la turbidez del inoacuteculo con solucioacuten salina o caldo apropiado hasta el
tubo 05 de la escala de Mc Farland por comparacioacuten visual con el estaacutendar Para
realizar este paso correctamente usar una luz apropiada y mirar los tubos contra
un fondo blanco con liacuteneas negras como contraste
e La suspensioacuten preparada contendraacute aproximadamente 1 a 2 x 108 UFCmL
Meacutetodo directo de inoculacioacuten a partir de colonias aisladas
a De una placa de cultivo con agar no selectivo e incubada por 18 - 24 h
seleccionar colonias aisladas y preparar una suspensioacutem directa en solucioacuten
salina oacute caldo
b La suspensioacuten debe ser inmediatamente ajustada a la escala 05 de Mc
Farland
Inoculacioacuten de las Placas
Dentro de los 15 minutos siguientes al ajuste de la turbidez del inoacuteculo sumergir
un hisopo esteacuteril en la suspensioacuten rotar el hisopo varias veces presionando
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firmemente sobre la pared interior del tubo por encima del nivel del liacutequido para
remover el exceso de inoacuteculo
Inocular la superficie seca de la placa de Mueller Hinton estriando con el hisopo
en tres direcciones para asegurar una distribucioacuten uniforme del inoacuteculo Antes de
colocar los discos dejar secar la placa a temperatura ambiente durante 3 a 5
minutos para que cualquier exceso de humedad superficial sea absorbido
APLICACIOacuteN DE LOS DISCOS
Colocar los discos individuales o multidiscos sobre la superficie del agar con la
ayuda de una pinza esteacuteril o la punta de una aguja presionando suavemente sobre
cada disco para asegurar un contacto completo con la superficie del agar
Distribuir los discos uniformemente de modo que esteacuten a una distancia miacutenima de
25 mm uno del otro (el diaacutemetro de los discos seguacuten las normas de la
Organizacioacuten Mundial de la Salud (OMS) debe ser de 6 mm) No deben colocarse
maacutes de 12 discos en una placa de 150 mm ni maacutes de 6 en una placa de 100 mm
de diaacutemetro interno para evitar la superposicioacuten de las zonas de inhibicioacuten Un
disco no debe ser removido una vez que tomoacute contacto con la superficie del agar
debido a que algunos antibioacuteticos se difunden raacutepidamente
INCUBACIOacuteN
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Incubar lar placas en posicioacuten invertida a 35degC por 18 a 24 horas dentro de los 15
minutos posteriores a la aplicacioacuten de los discos
Despueacutes del tiempo recomendado de incubacioacuten examinar cada placa y medir los
diaacutemetros de los halos de inhibicioacuten alrededor de cada disco
LECTURA DE LAS PLACAS E INTERPRETACIOacuteN DE LOS RESULTADOS
Medir los diaacutemetros de las zonas de inhibicioacuten completa (incluyendo el diaacutemetro
del disco) usando
una regla o calibrador Se debe mantener iluminada la parte posterior de la placa
petri con una luz reflejada localizada a unos cuantos centiacutemetros sobre un fondo
negro Tener la precaucioacuten de observar la placa siguiendo una vertical directa para
evitar una lectura erroacutenea de las marcas de la regla por efecto de paralelismo En
los medios suplementados con sangre las zonas son medidas en la parte superior
de la superficie del agar y retirando la tapa Tener cuidado de no medir la zona de
la hemoacutelisis sino la de inhibicioacuten del crecimiento
El punto final debe tomarse como el aacuterea que no muestra un crecimiento obvio
visible que puede ser detectado mediante observacioacuten visual no incluyendo velo
de crecimiento o colonias muy pequentildeas que puedan ser detectadas solo con
mucha dificultad en el borde de la zona Sin embargo las colonias mayores
creciendo dentro de la zona clara deberaacuten ser subcultivadas reidentificadas y
reensayadas Algunos Proteus spp debido a su gran movilidad pueden presentar
un velo de invasioacuten o ldquoswarmingrdquo dentro de las zonas de inhibicioacuten de algunos
antibioacuteticos En estos casos el velo del swarming debe ser ignorado al momento
de medir los halos de inhibicioacuten
DISCOS DE SENSIBILIDAD ANTIBIOacuteTICA A INCLUIR EN EL ANTIBIOGRAMA
Grupo I
Ampicilina
Cefalotina
Ampicilina Sulbactam o Amoxicilina Aacutecido Clavulaacutenico
Cefuroxima
Cefotaxima o Ceftriaxona
Gentamicina
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Amikacina
Aacutecido Nalidiacutexico(1)
Norfloxacina(1)
Ciprofloxacina
Cotrimoxazol (TrimetoprimSulfametoxazol)
Nitrofurantoiacutena(1)
Grupo II
Cefoxitina
Aztreonam
Ceftazidima
Cefixima
CefoperazonaSulbactam
Cefepime o Cefpirome
Imipenem o Meropenem
Cloramfenicol
Ofloxacina (1)
(1) Disco utilizado exclusivamente para infecciones de las viacuteas urinarias
Resistencias Naturales
Las enterobacterias son resistentes a Penicilina Oxacilina Macroacutelidos
Clindamicina y Glicopeacuteptidos
Klebsiella spp es resistente a las Aminopenicilinas
Citrobacter freundii Enterobacter cloacae y Enterobacter aerogenes son
resistentes a las Aminopenicilinas AminopenicilinasInhibidores de
betalactamasas Cefalosporinas de primera generacioacuten y Cefuroxima
Serratia marcescens es resistente a las Aminopenicilinas
AminopenicilinasInhibidores de betalactamasas Cefalosporinas de primera
generacioacuten y Cefoxitina
Proteus mirabilis es resistente a Nitrofurantoiacutena
Proteus vulgaris es resistente a las Aminopenicilinas Cefalosporinas de primera
generacioacuten Cefuroxima y Nitrofurantoiacutena
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Morganella morganii es resistente a las Aminopenicilinas
AminopenicilinasInhibidores de betalactamasas Cefalosporinas de primera
generacioacuten Cefuroxima y Nitrofurantoiacutena
Providentia stuartii es resistente a las Aminopenicilinas
AminopenicilinasInhibidores de betalactamasas Cefalosporinas de primera
generacioacuten Gentamicina (bajo nivel) y Nitrofurantoiacutena
ANTIBIOTICOS Y DIAMETROS CRITICOS PARA ENTEROBACTERIAS
E PRACTICA 7
EXAMEN QUIMICO DE CALCULO RENAL
EXAMEN FISICO
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Se debe pesar el caacutelculo y anotar el dato obtenido Medir dos de los diaacutemetros y
tomar nota del aspecto general textura y color y despueacutes de seccionado el
aspecto general la prominencia y el color de los distintos estratos
Se secciona el caacutelculo con una sierra Se raspan las caras con una aguja Se
procede lo mismo con el nuacutecleo Cada una de las muestras obtenidas se trituran
por separado en un mortero
PROCESO
Se coloca una porcioacuten del polvo del caacutelculo en un crisol y se calienta al fuego Si
no hay ennegrecimiento ni se altera el tamantildeo original el caacutelculo estaraacute formado
por sustancias inorgaacutenicas Si en cambio se carboniza desapareciendo estaraacute
formado por sustancias orgaacutenicas Si se funde y se ennegrece este caacutelculo estaacute
formado por sulfamidasa
Una vez obtenidos los datos pueden seleccionarse las reacciones necesarias
para confirmarlos
REACCIONES QUIMICAS
Solucioacuten A
10mg del polvo en matraz y antildeadir 50 ml de ClH 5 Observar si se
produce efervescencia Calentar en bantildeo de agua hirviendo por 10 a 15 minutos y
filtrar en caliente El filtrado se distribuye en 8 tubos numerados y se introduce un
trocito de papel tornasol en cada uno
Solucioacuten B
Agitar con Cl3CH unos 10 mg del polvo Reposar en tubo tapado a
temperatura ambiente hasta que el insoluble haya precipitado Decantar la
solucioacuten clorofoacutermica y guardar igual que el sedimento por separado
Carbonato efervescencia al agregar el CIH por desprendimiento de CO 2
Amonio al tubo 1 de la solucioacuten A se le agrega solucioacuten de OHNa 10 gota a
gota y agitando hasta que el papel tornasol vire
Agregar 1 ml de reactivo de Nessler Un color amarillo oscuro oporto indica
positividad de la reaccioacuten
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El NH 3 formado por los grupos NH 4 en medio alcalino reacciona con el yoiduro
doble del reactivo de Nesler para dar yoduro amoacutenico dimercuacuterico precipitado
pardo anaranjado
Acido uacuterico Neutralizar el contenido del tubo 2 como se explicoacute antes
Agregar igual volumen de CNN Na 2 y 05 ml de reactivo de Folin para aacutecido
uacuterico Un color azul intenso indica presencia de aacutecido uacuterico
El aacutecido uacuterico reduce al aacutecido fosfotuacutengstico en medio alcalino dando color azul
intenso de azul de tungsteno y a su vez se oxida a alantoiacutena
Reactivo fosfotuacutengstico (Folin y Denis) Antes del uso diluir al 10 en agua
destilada
Oxalato de calcio Neutralizar el contenido del tubo 3 Agregar CH 3 COOH 10
hasta reaccioacuten aacutecida al tornasol Precipitado blanco que no se redisuelve por
agitacioacuten indica presencia de oxalato de calcio
Calcio Neutralizar el tubo 4 Acidificar con CH 3 COOH glacial Agregar 2 ml C 2
O 4 ( NH 4 ) 4 Precipitado blancodenso indica presencia de Ca ++
Fosfato Neutralizar el tubo 5 Agregar 1 ml de solucioacuten de molibdato Mezclar
antildeadir 05 ml de aacutecido aminonaftol sulfoacutenico (ANS) 025 Coloracioacuten azul que
aparece en 5 minutos indica fosfatos
El color azul se debe a los oacutexidos reducidos de molibdeno
Reactivos
1 ClH concentrado2 Solucioacuten de OHK 203 NO 3 H concentrado4 Mo O 4 (NH 4 ) 2 disolver 25 g de la droga en 50 ml de SO 4 H 2 10 N y
diluir a 100 ml con H2 O destilada5 Amoniacuteaco
Reactivo ANS En matraz x 250 ml poner 05 g de aacutecido aminonaftolsulfoacutenico y
agrgar 195 ml de bisulfito de sodio 15 y 5 ml de sulfito de sodio 20 Mezclar
bien hasta disolucioacuten Si no se disuelve en media hora agregar maacutes sulfito y
agitar El reactivo dura unas 2 semanas
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Magnesio Neutralizar el tubo 7 con OHNH 4 y antildeadir 1 ml de solucioacuten alcohoacutelica
de p ndash Nitrobenceno azorresorcinol Un cromoacutegeno rojo indica presencia de
magnesio
En medio alcalino se forma (OH) 2 Mg El colorante azo resulta absorbido por el
(OH) 2 Mg en medio alcalino
Xantina A un tercio del residuo de la solucioacuten B agregarle gotas de NO 3 H
concentrado
Se disuelve el residuo sin desprender gas Evaporar a sequedad en bantildeo Mariacutea
hirviente quedando un residuo amarillo Dejar enfriar y humedecer con gotas de
OHNa 10 Una coloracioacuten anaranjada que vira al rojo oscuro al calentar indica
presencia de xantina
La reaccioacuten es la xantoproteica Migracioacuten de los anillos fenilo existentes en la
tirosina fenilalanina y triptoacutefano que da un color amarillo de los productos de
nitrosustitucioacuten para virar al anaranjado tras la adicioacuten de un aacutelcali ( formacioacuten de
la sal)
Nota El reactivo de molibdato se puede preparar asiacute
Solucioacuten 1 SO 4 H 2 01 N
Medir 450 ml de SO4 H 2 concentrado y agregarlos a 1300 ml de agua
destilada
Solucioacuten 2
A 250 ml de SO 4 H 2 01 N antildeadir la solucioacuten de molibdato y llevar con
agua destilada a 250 ml Mezclar
Sulfamidas Neutralizar el uacuteltimo tubo Antildeadir 1 ml de NO 2 Na 05 preparado
recientemente Agitar y reposar por 3 minutos Antildeadir 5 ml de solucioacuten alcohoacutelica
de dimetil-alfa naftilamina 025 Un color rojizo indica presencia de sulfamidas
Finalmente procede hacer mencioacuten de ciertos procedimientos fiacutesicos como la
microscopia de polarizacioacuten difraccioacuten de rayos X cristalografiacutea
espectrofotometriacutea de rayos infrarrojos etc que permiten actualmente un
conocimiento maacutes confiable de la estructura de los caacutelculos
- Reactivos
-
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PRACTICA 6
UROCULTIVO Y ANTIBIOGRAMA
OBTENCIOacuteN DE MUESTRA DE ORINA PARA CULTIVO
Condiciones generales
La orina es un excelente medio de cultivo para la proliferacioacuten bacteriana por esta
razoacuten la muestra debe ser procesada dentro de las 2 horas despueacutes de haber
sido obtenida o debe refrigerarse a 4 degC (maacuteximo 24 horas) hasta su
procesamiento
Generalmente el desarrollo de dos o maacutes tipos de colonias (en pacientes sin
sonda vesical) indican que la muestra se ha contaminado por recoleccioacuten
incorrecta o demora en la siembra
OBTENCIOacuteN DE MUESTRA DE ORINA DEL CHORRO MEDIO
Obtencioacuten de muestras de orina en pacientes mujeres Materiales y equipos
a) Guantes de laacutetex esteacuteriles
b) Cinco o maacutes piezas de gasa esteacuteril de tamantildeo adecuado pudiendo
ser de 4rdquo x 4rdquo
c) Jaboacuten
d) Agua tibia esteacuteril
e) Frasco esteacuteril de boca ancha para la muestra de orina
Procedimiento
a) Mantener la privacidad de la paciente
b) Rotular el frasco con el nombre de la paciente fecha de obtencioacuten de la
muestra hora y el procedimiento usado para la obtencioacuten de la muestra
c) Lavarse las manos con jaboacuten y abundante agua
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d) Preparar una pieza de gasa para la limpieza de los genitales externos
humedicieacutendola con agua y una pequentildea cantidad de jaboacuten Preparar dos piezas
maacutes de gasa para el enjuague con agua tibia
e) Separar los labios mayores con dos dedos de una mano y limpiar el aacuterea
expuesta pasando la gasa de adelante hacia atraacutes
f) Descartar la gasa
g) Con otra gasa humedecida enjuagar el aacuterea de adelante hacia atraacutes Repetir el
procedimiento con otra gasa
h) Finalmente secar el aacuterea de adelante hacia atraacutes con un trozo de gasa seca
i) Mantener separados los labios mayores mientras la paciente empieza a orinar
Luego del chorro inicial colocar el frasco esteacuteril para colectar el chorro medio
j) Al terminar la recoleccioacuten tapar el frasco inmediatamente y limpiarle la
superficie
k) Transportar el frasco con la muestra de orina inmediatamente
Obtencioacuten de muestra de orina en pacientes varones
Materiales
a) Guantes de laacutetex
b) Cinco o maacutes piezas de gasa esteacuteril
c) Jaboacuten
d) Agua tibia esteacuteril
e) Frasco esteacuteril de boca ancha para la obtencioacuten de la muestra
Procedimiento
a) Mantener la privacidad del paciente
b) Rotular el frasco con el nombre del paciente fecha de obtencioacuten de la muestra
hora y el procedimiento usado para la obtencioacuten de la muestra
c) Lavarse las manos con jaboacuten y abundante agua
d) Preparar una pieza de gasa con agua y una pequentildea cantidad de jaboacuten
Preparar dos piezas maacutes de gasa para el enjuague con agua tibia
e) Realizar la higiene de los genitales Retraer el prepucio antes de lavar el glande
con la gasa humedecida con jaboacuten Descartar la gasa
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f) Enjuagar el glande usando una gasa huacutemeda Repetir el procedimiento con otra
gasa
g) Secar la zona usando uno o maacutes piezas de gasa seca
h) Indicar al paciente que mantenga el prepucio retirado e inicie la miccioacuten
directamente en un recipiente (orina para descartar)
i) Despueacutes del chorro inicial colocar el frasco esteacuteril para colectar la muestra del
chorro medio
j) Obtenida la muestra tapar el frasco inmediatamente y limpiarle la superficie
k) Transportar el frasco con la muestra de orina inmediatamente al laboratorio
SIEMBRA PRIMARIA DE MUESTRA DE ORINA
Objetivo
Describir el procedimiento para la siembra primaria de muestra de orina
Campo de aplicacioacuten
Se aplica para el cultivo de muestra de orina en el diagnoacutestico bacterioloacutegico de
infecciones del tracto urinario
Materiales y equipos
a) Asa calibrada de platino o descartable de 0001 mL oacute 001 mL
b) Estufa de 35 ndash 37 degC
c) Mechero Bunsen o cabina de flujo laminar
d) Guantes de laacutetex
e) Contenedor de material contaminado
f) Pinza esteacuteril
g) Propipeta o pipetor automaacutetico
h) Medios de cultivo
ndash Placas con agar sangre de carnero (AS)
ndash Placas con agar Mc Conkey (McC)
Procedimiento
a) Mantener las muestras en refrigeracioacuten (4 degC) hasta su procesamiento por
cultivo
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b) Los cultivos deben realizarse en una cabina de bioseguridad o cerca del
mechero Bunsen
c) Las placas con AS y McC que se utilizaraacuten en el urocultivo deben estar a
temperatura ambiente Rotular las placas
d) Si el asa calibrada no es descartable esterilizar el asa de siembra flameacuteandola
en el mechero Bunsen hasta que se ponga rojo vivo Dejar enfriar el asa
e) Tomar el frasco con la muestra de orina abrir la tapa y flamear la boca del
frasco en el mechero Bunsen
f) Tomar la muestra de orina con el asa de siembra esteacuteril introducieacutendola y
sacaacutendola del frasco en forma vertical Tapar el frasco con la muestra
g) Inocular en el centro de la placa con AS a partir del cual se extiende la muestra
hacia delante y hacia atraacutes
h) Luego sin quemar el asa el inoacuteculo se disemina uniformemente con trazos
perpendiculares a la siembra inicial en toda la placa
i) Proceder de la misma forma para el agar Mc Conkey
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Lectura
a) Realizar la evaluacioacuten a las 24 horas si no hay crecimiento bacteriano dejar
incubar hasta las 48 horas
b) La evaluacioacuten consiste en realizar el recuento de colonias cuyo resultado se
multiplica por el factor de dilucioacuten para obtener las UFC por mL
Interpretacioacuten
a) En pacientes sin sonda vesical la cuenta significativa de bacterias en orina es
la presencia de maacutes de 105 UFC mL de un solo germen
b) Los recuentos intermedios (103 ndash 104 UFCmL) indican infeccioacuten si el
procedimiento de recoleccioacuten de orina fue realizado correctamente
c) Generalmente el aislamiento de tres o maacutes especies bacterianas indican que la
muestra se ha contaminado por recoleccioacuten inadecuada o demora en la siembra
d) En pacientes con sonda vesical cuentas bacterianas menores de 105 UFCmL
pueden tener significado asiacute tambieacuten se pueden encontrar bacteriurias
polimicrobianas hasta en casi 15 de enfermos
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e) En pacientes sin cateacuteter se puede comprobar si el procedimiento de obtencioacuten
de muestra fue realizado correctamente observando la frecuencia con la cual se
informan recuentos de colonias intermedias entre 103 ndash 104 UFCmL En
pacientes sin infecciones del tracto urinario el recuento es nulo o se reduce a
pocas colonias
IDENTIFICACION BACTERIANA
Lectura de cultivos en agar Mac Conkey
ndash En agar Mc Conkey Escherichia coli lactosa positiva forma colonias de borde
entero de color fucsia opacas de 2 mm ndash 3 mm de diaacutemetro usualmente
rodeadas de una zona opaca alrededor de la colonia (bilis precipitada) Las cepas
de E coli que son lactosa negativa dan colonias incoloras de 3 ndash 4 mm
ndash En agar Mc Conkey K pneumoniae forma colonias de borde entero de color
rosado a rosado oscuro de 3 ndash 4 mm de diaacutemetro y aspecto mucoide
ndash En agar Mc Conkey Enterobacter spp forma colonias de borde entero de color
rosado de 2 ndash 4 mm de diaacutemetro no tan mucoides como K pneumoniae
Las colonias con estas caracteriacutesticas son subcultivadas en medios diferenciales
PRUEBAS BIOQUIMICAS
TSI
Lectura
Es importante hacer la lectura entre las 18 ndash 24 horas para no obtener resultados
erroacuteneos La lectura se hace sobre la base de tres caracteriacutesticas Utilizacioacuten de
hidratos de carbono produccioacuten de gas y produccioacuten de aacutecido sulfhiacutedrico
Utilizacioacuten de hidratos de carbono
ndash Utilizacioacuten de lactosa Reaccioacuten aacutecida en el pico de flauta (color amarillo)
Abreviatura (A)
ndash Utilizacioacuten de glucosa Reaccioacuten aacutecida en la columna del medio (color amarillo)
Abreviatura (A)
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ndash No hay utilizacioacuten del carbohidrato Se puede observar una reaccioacuten alcalina
(color rojo) o que no hay cambio de color (permanece del mismo color que el
medio no inoculado) Abreviaturas (K) o (N) respectivamente
Nota Cuando el microorganismo tambieacuten produce H2S el precipitado negro
puede ocultar la acidez
Produccioacuten de gas de glucosa
ndash Se considera positivo Presencia de una sola burbuja de gas burbujas en el
medio divisioacuten del medio desplazamiento completo del medio del fondo del tubo
dejando un aacuterea clara o una ligera muesca del medio en el costado del tubo
ndash Se registra la lectura por medio de cruces (+)
Produccioacuten de aacutecido sulfhiacutedrico
ndash Se manifiesta por un color negro distribuido por toda la columna del medio de
cultivo o soacutelo en la parte superior
ndash Se registra la lectura por medio de cruces (+)
Resultados
Ejemplo de simbolizacioacuten e interpretacioacuten
KA ndash+ Significa alcalinidad en la inclinacioacuten y acidez en el fondo (fermentacioacuten de
glucosa) gas negativo y H2S positivo
NN ndash ndashSignifica que no hay utilizacioacuten de la lactosa y glucosa ni produccioacuten de
H2S
AGAR LISINA HIERRO
En este medio se determina simultaacuteneamente la produccioacuten de lisina
descarboxilasa y de la formacioacuten de aacutecido sulfhiacutedrico
Lectura
Es importante hacer la lectura entre las 18 ndash 24 horas si la lectura se realiza antes
podemos obtener resultados falsos positivos asiacute como falsos negativos si se lee
despueacutes de las 24 horas Realizar la lectura en la columna y en la superficie
inclinada y observar la formacioacuten de aacutecido sulfhiacutedrico el cual se evidencia por una
coloracioacuten negra
Nota Generalmente las cepas del grupo Proteus y Providencia desaminan la
lisina a aacutecido ndashcetocarboacutenico Este uacuteltimo forma compuestos pardo-rojizos en la
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regioacuten superficial del medio de cultivo con la sal de hierro y bajo la influencia del
oxiacutegeno
Recomendaciones
No incubar maacutes del tiempo necesario para no ocasionar una alcalinizacioacuten en la
superficie del medio y por lo tanto producir un viraje hacia el violeta
UTILIZACIOacuteN DE CITRATO
Para determinar si un microorganismo es capaz de utilizar citrato como uacutenica
fuente de carbono para su metabolismo
Procedimiento
a) Incubar a 35ndash37 degC de 24 horasndash 48 horas En algunos casos es necesario una
incubacioacuten hasta por 4 diacuteas
b) Ver el viraje de color
Resultados
a) Prueba positiva Crecimiento con un color azul intenso en el pico de flauta o
presencia de colonias en ausencia del color azul
b) Prueba negativa No se observa crecimiento ni cambio de color (verde)
Controles
Positivo Enterobacter cloacae
Negativo Escherichia coli
HIDROacuteLISIS DE LA UREA (PRODUCCIOacuteN DE UREASA)
Es uacutetil para determinar la capacidad de un organismo de degradar la urea
formando dos moleacuteculas de amoniaco por accioacuten de la enzima ureasa
Procedimiento
Realizar la lectura despueacutes de 18 horas ndash 24 horas de incubacioacuten observando el
viraje de color
Resultados
Prueba positiva Color rosado intenso en el pico de flauta o todo el agar
Puede haber una reaccioacuten positiva retardada despueacutes de 24 horas y hasta
6 diacuteas de incubacioacuten (algunas cepas de Klebsiella por ejemplo)
Prueba negativa No se produce cambio de color
Controles
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Negativo Escherichia coli
Positivo Klebsiella pneumoniae
MOTILIDAD (MEDIOS SIM O MIO O AGAR MOVILIDAD)
Para determinar si un organismo es moacutevil o inmoacutevil
Procedimiento
Incubar a 35 ndash 37 degC de 24 a 48 horas
Resultados
Positivo Los microorganismos migran de la liacutenea de siembra y se difunden en el
medio provocando turbidez Tambieacuten puede manifestarse semejando
ldquovellosidadesrdquo a lo largo del trazo de siembra
Negativo Se observa un crecimiento bacteriano acentuado siguiendo el trazo de
siembra y el medio circundante se mantiene claro
Controles
Control positivo Escherichia coli
Control negativo Klebsiella pneumoniae
h) Prueba de indol[6]
Es uacutetil para determinar la capacidad de un microorganismo de producir indol a
partir del aminoaacutecido triptoacutefano
Medios y reactivos
Caldo de triptoacutefano o de peptona o caldo de triptona
Reactivo de indol de Kovacs
Procedimiento
Retirar aseacutepticamente 2 mL de caldo de cutivo con 24 horas de incubacioacuten
Agregar 5 gotas de reactivo de Kovacs
Mover suavemente el tubo y realizar la lectura
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ANTIBIOGRAMA
Preparacioacuten del Agar Mueller Hinton
Preparar el medio a partir de la base deshidratada de acuerdo a las
indicaciones del fabricante
Autoclavar y dejar enfriar en bantildeo de agua hasta que alcance los 45degC - 50degC
Repartir el medio en placas petri (60 ml ndash 70 ml o 25 ml ndash 30 ml para placas de
150 mm o 100 mm de diaacutemetro interno respectivamente) de manera que el
grosor del agar en la placa sea de 4 mm
Realizar las pruebas de esterilidad para cada lote de Mueller Hinton incubando
una o dos placas de cada lote a 30degC ndash 35degC durante 24 horas o maacutes Estas
placas utilizadas deben ser luego descartadas
Preparacioacuten del estaacutendar (05 Mc Farland) para el inoacuteculo
Para estandarizar la densidad del inoacuteculo se usa una suspensioacuten de sulfato de
bario (05 de la escala de Mac Farland) como estaacutendar
Preparacioacuten del estaacutendar de turbidez
a Agregar 05 ml de una solucioacuten de BaCl2 0048 M (BaCl22H2O al 1175 PV)
a 995 mL de una solucioacuten de H2SO4 018 M (036 N) (1 VV) en constante
movimiento para mantener la suspensioacuten
b Verificar la densidad correcta del estaacutendar usando un fotocoloriacutemetro oacute
espectrofotoacutemetro cuya absorbancia a 625 nm es 008 a 010 para el estaacutendar 05
de Mc Farland
c Distribuir de 4 ml a 6 ml en tubos con tapa de rosca o tapoacuten de jebe similares a
los que se usaraacuten para preparar el inoacuteculo
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d Ajustar bien las tapas o tapones y conservarlos en la oscuridad a temperatura
ambiente y anotar la fecha de preparacioacuten
e Antes de ser usado agitar vigorosamente dicho estaacutendar de preferencia en un
agitador mecaacutenico
f Verificar mensualmente la densidad de los estaacutendares de sulfato de bario y
reemplazarlo cuando sea necesario
INOCULACIOacuteN
Preparacioacuten del inoacuteculo
Puede realizarse de dos formas
Meacutetodo de desarrollo previo
a Seleccionar cuatro a cinco colonias bien aisladas del mismo tipo morfoloacutegico
de un cultivo en placa
b Tocar la superficie de cada colonia con una asa de siembra y transferirlo a un
tubo que contiene de 4 a 5 mL de caldo apropiado (Ej Caldo Tripticasa soya)
c Incubar el caldo a una temperatura entre 35degC a 37degC hasta que alcance o
exceda la turbidez del estaacutendar 05 de la escala de Mc Farland (por lo general de
2 a 6 horas)
d Ajustar la turbidez del inoacuteculo con solucioacuten salina o caldo apropiado hasta el
tubo 05 de la escala de Mc Farland por comparacioacuten visual con el estaacutendar Para
realizar este paso correctamente usar una luz apropiada y mirar los tubos contra
un fondo blanco con liacuteneas negras como contraste
e La suspensioacuten preparada contendraacute aproximadamente 1 a 2 x 108 UFCmL
Meacutetodo directo de inoculacioacuten a partir de colonias aisladas
a De una placa de cultivo con agar no selectivo e incubada por 18 - 24 h
seleccionar colonias aisladas y preparar una suspensioacutem directa en solucioacuten
salina oacute caldo
b La suspensioacuten debe ser inmediatamente ajustada a la escala 05 de Mc
Farland
Inoculacioacuten de las Placas
Dentro de los 15 minutos siguientes al ajuste de la turbidez del inoacuteculo sumergir
un hisopo esteacuteril en la suspensioacuten rotar el hisopo varias veces presionando
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firmemente sobre la pared interior del tubo por encima del nivel del liacutequido para
remover el exceso de inoacuteculo
Inocular la superficie seca de la placa de Mueller Hinton estriando con el hisopo
en tres direcciones para asegurar una distribucioacuten uniforme del inoacuteculo Antes de
colocar los discos dejar secar la placa a temperatura ambiente durante 3 a 5
minutos para que cualquier exceso de humedad superficial sea absorbido
APLICACIOacuteN DE LOS DISCOS
Colocar los discos individuales o multidiscos sobre la superficie del agar con la
ayuda de una pinza esteacuteril o la punta de una aguja presionando suavemente sobre
cada disco para asegurar un contacto completo con la superficie del agar
Distribuir los discos uniformemente de modo que esteacuten a una distancia miacutenima de
25 mm uno del otro (el diaacutemetro de los discos seguacuten las normas de la
Organizacioacuten Mundial de la Salud (OMS) debe ser de 6 mm) No deben colocarse
maacutes de 12 discos en una placa de 150 mm ni maacutes de 6 en una placa de 100 mm
de diaacutemetro interno para evitar la superposicioacuten de las zonas de inhibicioacuten Un
disco no debe ser removido una vez que tomoacute contacto con la superficie del agar
debido a que algunos antibioacuteticos se difunden raacutepidamente
INCUBACIOacuteN
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Incubar lar placas en posicioacuten invertida a 35degC por 18 a 24 horas dentro de los 15
minutos posteriores a la aplicacioacuten de los discos
Despueacutes del tiempo recomendado de incubacioacuten examinar cada placa y medir los
diaacutemetros de los halos de inhibicioacuten alrededor de cada disco
LECTURA DE LAS PLACAS E INTERPRETACIOacuteN DE LOS RESULTADOS
Medir los diaacutemetros de las zonas de inhibicioacuten completa (incluyendo el diaacutemetro
del disco) usando
una regla o calibrador Se debe mantener iluminada la parte posterior de la placa
petri con una luz reflejada localizada a unos cuantos centiacutemetros sobre un fondo
negro Tener la precaucioacuten de observar la placa siguiendo una vertical directa para
evitar una lectura erroacutenea de las marcas de la regla por efecto de paralelismo En
los medios suplementados con sangre las zonas son medidas en la parte superior
de la superficie del agar y retirando la tapa Tener cuidado de no medir la zona de
la hemoacutelisis sino la de inhibicioacuten del crecimiento
El punto final debe tomarse como el aacuterea que no muestra un crecimiento obvio
visible que puede ser detectado mediante observacioacuten visual no incluyendo velo
de crecimiento o colonias muy pequentildeas que puedan ser detectadas solo con
mucha dificultad en el borde de la zona Sin embargo las colonias mayores
creciendo dentro de la zona clara deberaacuten ser subcultivadas reidentificadas y
reensayadas Algunos Proteus spp debido a su gran movilidad pueden presentar
un velo de invasioacuten o ldquoswarmingrdquo dentro de las zonas de inhibicioacuten de algunos
antibioacuteticos En estos casos el velo del swarming debe ser ignorado al momento
de medir los halos de inhibicioacuten
DISCOS DE SENSIBILIDAD ANTIBIOacuteTICA A INCLUIR EN EL ANTIBIOGRAMA
Grupo I
Ampicilina
Cefalotina
Ampicilina Sulbactam o Amoxicilina Aacutecido Clavulaacutenico
Cefuroxima
Cefotaxima o Ceftriaxona
Gentamicina
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Amikacina
Aacutecido Nalidiacutexico(1)
Norfloxacina(1)
Ciprofloxacina
Cotrimoxazol (TrimetoprimSulfametoxazol)
Nitrofurantoiacutena(1)
Grupo II
Cefoxitina
Aztreonam
Ceftazidima
Cefixima
CefoperazonaSulbactam
Cefepime o Cefpirome
Imipenem o Meropenem
Cloramfenicol
Ofloxacina (1)
(1) Disco utilizado exclusivamente para infecciones de las viacuteas urinarias
Resistencias Naturales
Las enterobacterias son resistentes a Penicilina Oxacilina Macroacutelidos
Clindamicina y Glicopeacuteptidos
Klebsiella spp es resistente a las Aminopenicilinas
Citrobacter freundii Enterobacter cloacae y Enterobacter aerogenes son
resistentes a las Aminopenicilinas AminopenicilinasInhibidores de
betalactamasas Cefalosporinas de primera generacioacuten y Cefuroxima
Serratia marcescens es resistente a las Aminopenicilinas
AminopenicilinasInhibidores de betalactamasas Cefalosporinas de primera
generacioacuten y Cefoxitina
Proteus mirabilis es resistente a Nitrofurantoiacutena
Proteus vulgaris es resistente a las Aminopenicilinas Cefalosporinas de primera
generacioacuten Cefuroxima y Nitrofurantoiacutena
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Morganella morganii es resistente a las Aminopenicilinas
AminopenicilinasInhibidores de betalactamasas Cefalosporinas de primera
generacioacuten Cefuroxima y Nitrofurantoiacutena
Providentia stuartii es resistente a las Aminopenicilinas
AminopenicilinasInhibidores de betalactamasas Cefalosporinas de primera
generacioacuten Gentamicina (bajo nivel) y Nitrofurantoiacutena
ANTIBIOTICOS Y DIAMETROS CRITICOS PARA ENTEROBACTERIAS
E PRACTICA 7
EXAMEN QUIMICO DE CALCULO RENAL
EXAMEN FISICO
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Se debe pesar el caacutelculo y anotar el dato obtenido Medir dos de los diaacutemetros y
tomar nota del aspecto general textura y color y despueacutes de seccionado el
aspecto general la prominencia y el color de los distintos estratos
Se secciona el caacutelculo con una sierra Se raspan las caras con una aguja Se
procede lo mismo con el nuacutecleo Cada una de las muestras obtenidas se trituran
por separado en un mortero
PROCESO
Se coloca una porcioacuten del polvo del caacutelculo en un crisol y se calienta al fuego Si
no hay ennegrecimiento ni se altera el tamantildeo original el caacutelculo estaraacute formado
por sustancias inorgaacutenicas Si en cambio se carboniza desapareciendo estaraacute
formado por sustancias orgaacutenicas Si se funde y se ennegrece este caacutelculo estaacute
formado por sulfamidasa
Una vez obtenidos los datos pueden seleccionarse las reacciones necesarias
para confirmarlos
REACCIONES QUIMICAS
Solucioacuten A
10mg del polvo en matraz y antildeadir 50 ml de ClH 5 Observar si se
produce efervescencia Calentar en bantildeo de agua hirviendo por 10 a 15 minutos y
filtrar en caliente El filtrado se distribuye en 8 tubos numerados y se introduce un
trocito de papel tornasol en cada uno
Solucioacuten B
Agitar con Cl3CH unos 10 mg del polvo Reposar en tubo tapado a
temperatura ambiente hasta que el insoluble haya precipitado Decantar la
solucioacuten clorofoacutermica y guardar igual que el sedimento por separado
Carbonato efervescencia al agregar el CIH por desprendimiento de CO 2
Amonio al tubo 1 de la solucioacuten A se le agrega solucioacuten de OHNa 10 gota a
gota y agitando hasta que el papel tornasol vire
Agregar 1 ml de reactivo de Nessler Un color amarillo oscuro oporto indica
positividad de la reaccioacuten
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El NH 3 formado por los grupos NH 4 en medio alcalino reacciona con el yoiduro
doble del reactivo de Nesler para dar yoduro amoacutenico dimercuacuterico precipitado
pardo anaranjado
Acido uacuterico Neutralizar el contenido del tubo 2 como se explicoacute antes
Agregar igual volumen de CNN Na 2 y 05 ml de reactivo de Folin para aacutecido
uacuterico Un color azul intenso indica presencia de aacutecido uacuterico
El aacutecido uacuterico reduce al aacutecido fosfotuacutengstico en medio alcalino dando color azul
intenso de azul de tungsteno y a su vez se oxida a alantoiacutena
Reactivo fosfotuacutengstico (Folin y Denis) Antes del uso diluir al 10 en agua
destilada
Oxalato de calcio Neutralizar el contenido del tubo 3 Agregar CH 3 COOH 10
hasta reaccioacuten aacutecida al tornasol Precipitado blanco que no se redisuelve por
agitacioacuten indica presencia de oxalato de calcio
Calcio Neutralizar el tubo 4 Acidificar con CH 3 COOH glacial Agregar 2 ml C 2
O 4 ( NH 4 ) 4 Precipitado blancodenso indica presencia de Ca ++
Fosfato Neutralizar el tubo 5 Agregar 1 ml de solucioacuten de molibdato Mezclar
antildeadir 05 ml de aacutecido aminonaftol sulfoacutenico (ANS) 025 Coloracioacuten azul que
aparece en 5 minutos indica fosfatos
El color azul se debe a los oacutexidos reducidos de molibdeno
Reactivos
1 ClH concentrado2 Solucioacuten de OHK 203 NO 3 H concentrado4 Mo O 4 (NH 4 ) 2 disolver 25 g de la droga en 50 ml de SO 4 H 2 10 N y
diluir a 100 ml con H2 O destilada5 Amoniacuteaco
Reactivo ANS En matraz x 250 ml poner 05 g de aacutecido aminonaftolsulfoacutenico y
agrgar 195 ml de bisulfito de sodio 15 y 5 ml de sulfito de sodio 20 Mezclar
bien hasta disolucioacuten Si no se disuelve en media hora agregar maacutes sulfito y
agitar El reactivo dura unas 2 semanas
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Magnesio Neutralizar el tubo 7 con OHNH 4 y antildeadir 1 ml de solucioacuten alcohoacutelica
de p ndash Nitrobenceno azorresorcinol Un cromoacutegeno rojo indica presencia de
magnesio
En medio alcalino se forma (OH) 2 Mg El colorante azo resulta absorbido por el
(OH) 2 Mg en medio alcalino
Xantina A un tercio del residuo de la solucioacuten B agregarle gotas de NO 3 H
concentrado
Se disuelve el residuo sin desprender gas Evaporar a sequedad en bantildeo Mariacutea
hirviente quedando un residuo amarillo Dejar enfriar y humedecer con gotas de
OHNa 10 Una coloracioacuten anaranjada que vira al rojo oscuro al calentar indica
presencia de xantina
La reaccioacuten es la xantoproteica Migracioacuten de los anillos fenilo existentes en la
tirosina fenilalanina y triptoacutefano que da un color amarillo de los productos de
nitrosustitucioacuten para virar al anaranjado tras la adicioacuten de un aacutelcali ( formacioacuten de
la sal)
Nota El reactivo de molibdato se puede preparar asiacute
Solucioacuten 1 SO 4 H 2 01 N
Medir 450 ml de SO4 H 2 concentrado y agregarlos a 1300 ml de agua
destilada
Solucioacuten 2
A 250 ml de SO 4 H 2 01 N antildeadir la solucioacuten de molibdato y llevar con
agua destilada a 250 ml Mezclar
Sulfamidas Neutralizar el uacuteltimo tubo Antildeadir 1 ml de NO 2 Na 05 preparado
recientemente Agitar y reposar por 3 minutos Antildeadir 5 ml de solucioacuten alcohoacutelica
de dimetil-alfa naftilamina 025 Un color rojizo indica presencia de sulfamidas
Finalmente procede hacer mencioacuten de ciertos procedimientos fiacutesicos como la
microscopia de polarizacioacuten difraccioacuten de rayos X cristalografiacutea
espectrofotometriacutea de rayos infrarrojos etc que permiten actualmente un
conocimiento maacutes confiable de la estructura de los caacutelculos
- Reactivos
-
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d) Preparar una pieza de gasa para la limpieza de los genitales externos
humedicieacutendola con agua y una pequentildea cantidad de jaboacuten Preparar dos piezas
maacutes de gasa para el enjuague con agua tibia
e) Separar los labios mayores con dos dedos de una mano y limpiar el aacuterea
expuesta pasando la gasa de adelante hacia atraacutes
f) Descartar la gasa
g) Con otra gasa humedecida enjuagar el aacuterea de adelante hacia atraacutes Repetir el
procedimiento con otra gasa
h) Finalmente secar el aacuterea de adelante hacia atraacutes con un trozo de gasa seca
i) Mantener separados los labios mayores mientras la paciente empieza a orinar
Luego del chorro inicial colocar el frasco esteacuteril para colectar el chorro medio
j) Al terminar la recoleccioacuten tapar el frasco inmediatamente y limpiarle la
superficie
k) Transportar el frasco con la muestra de orina inmediatamente
Obtencioacuten de muestra de orina en pacientes varones
Materiales
a) Guantes de laacutetex
b) Cinco o maacutes piezas de gasa esteacuteril
c) Jaboacuten
d) Agua tibia esteacuteril
e) Frasco esteacuteril de boca ancha para la obtencioacuten de la muestra
Procedimiento
a) Mantener la privacidad del paciente
b) Rotular el frasco con el nombre del paciente fecha de obtencioacuten de la muestra
hora y el procedimiento usado para la obtencioacuten de la muestra
c) Lavarse las manos con jaboacuten y abundante agua
d) Preparar una pieza de gasa con agua y una pequentildea cantidad de jaboacuten
Preparar dos piezas maacutes de gasa para el enjuague con agua tibia
e) Realizar la higiene de los genitales Retraer el prepucio antes de lavar el glande
con la gasa humedecida con jaboacuten Descartar la gasa
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f) Enjuagar el glande usando una gasa huacutemeda Repetir el procedimiento con otra
gasa
g) Secar la zona usando uno o maacutes piezas de gasa seca
h) Indicar al paciente que mantenga el prepucio retirado e inicie la miccioacuten
directamente en un recipiente (orina para descartar)
i) Despueacutes del chorro inicial colocar el frasco esteacuteril para colectar la muestra del
chorro medio
j) Obtenida la muestra tapar el frasco inmediatamente y limpiarle la superficie
k) Transportar el frasco con la muestra de orina inmediatamente al laboratorio
SIEMBRA PRIMARIA DE MUESTRA DE ORINA
Objetivo
Describir el procedimiento para la siembra primaria de muestra de orina
Campo de aplicacioacuten
Se aplica para el cultivo de muestra de orina en el diagnoacutestico bacterioloacutegico de
infecciones del tracto urinario
Materiales y equipos
a) Asa calibrada de platino o descartable de 0001 mL oacute 001 mL
b) Estufa de 35 ndash 37 degC
c) Mechero Bunsen o cabina de flujo laminar
d) Guantes de laacutetex
e) Contenedor de material contaminado
f) Pinza esteacuteril
g) Propipeta o pipetor automaacutetico
h) Medios de cultivo
ndash Placas con agar sangre de carnero (AS)
ndash Placas con agar Mc Conkey (McC)
Procedimiento
a) Mantener las muestras en refrigeracioacuten (4 degC) hasta su procesamiento por
cultivo
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b) Los cultivos deben realizarse en una cabina de bioseguridad o cerca del
mechero Bunsen
c) Las placas con AS y McC que se utilizaraacuten en el urocultivo deben estar a
temperatura ambiente Rotular las placas
d) Si el asa calibrada no es descartable esterilizar el asa de siembra flameacuteandola
en el mechero Bunsen hasta que se ponga rojo vivo Dejar enfriar el asa
e) Tomar el frasco con la muestra de orina abrir la tapa y flamear la boca del
frasco en el mechero Bunsen
f) Tomar la muestra de orina con el asa de siembra esteacuteril introducieacutendola y
sacaacutendola del frasco en forma vertical Tapar el frasco con la muestra
g) Inocular en el centro de la placa con AS a partir del cual se extiende la muestra
hacia delante y hacia atraacutes
h) Luego sin quemar el asa el inoacuteculo se disemina uniformemente con trazos
perpendiculares a la siembra inicial en toda la placa
i) Proceder de la misma forma para el agar Mc Conkey
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Lectura
a) Realizar la evaluacioacuten a las 24 horas si no hay crecimiento bacteriano dejar
incubar hasta las 48 horas
b) La evaluacioacuten consiste en realizar el recuento de colonias cuyo resultado se
multiplica por el factor de dilucioacuten para obtener las UFC por mL
Interpretacioacuten
a) En pacientes sin sonda vesical la cuenta significativa de bacterias en orina es
la presencia de maacutes de 105 UFC mL de un solo germen
b) Los recuentos intermedios (103 ndash 104 UFCmL) indican infeccioacuten si el
procedimiento de recoleccioacuten de orina fue realizado correctamente
c) Generalmente el aislamiento de tres o maacutes especies bacterianas indican que la
muestra se ha contaminado por recoleccioacuten inadecuada o demora en la siembra
d) En pacientes con sonda vesical cuentas bacterianas menores de 105 UFCmL
pueden tener significado asiacute tambieacuten se pueden encontrar bacteriurias
polimicrobianas hasta en casi 15 de enfermos
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e) En pacientes sin cateacuteter se puede comprobar si el procedimiento de obtencioacuten
de muestra fue realizado correctamente observando la frecuencia con la cual se
informan recuentos de colonias intermedias entre 103 ndash 104 UFCmL En
pacientes sin infecciones del tracto urinario el recuento es nulo o se reduce a
pocas colonias
IDENTIFICACION BACTERIANA
Lectura de cultivos en agar Mac Conkey
ndash En agar Mc Conkey Escherichia coli lactosa positiva forma colonias de borde
entero de color fucsia opacas de 2 mm ndash 3 mm de diaacutemetro usualmente
rodeadas de una zona opaca alrededor de la colonia (bilis precipitada) Las cepas
de E coli que son lactosa negativa dan colonias incoloras de 3 ndash 4 mm
ndash En agar Mc Conkey K pneumoniae forma colonias de borde entero de color
rosado a rosado oscuro de 3 ndash 4 mm de diaacutemetro y aspecto mucoide
ndash En agar Mc Conkey Enterobacter spp forma colonias de borde entero de color
rosado de 2 ndash 4 mm de diaacutemetro no tan mucoides como K pneumoniae
Las colonias con estas caracteriacutesticas son subcultivadas en medios diferenciales
PRUEBAS BIOQUIMICAS
TSI
Lectura
Es importante hacer la lectura entre las 18 ndash 24 horas para no obtener resultados
erroacuteneos La lectura se hace sobre la base de tres caracteriacutesticas Utilizacioacuten de
hidratos de carbono produccioacuten de gas y produccioacuten de aacutecido sulfhiacutedrico
Utilizacioacuten de hidratos de carbono
ndash Utilizacioacuten de lactosa Reaccioacuten aacutecida en el pico de flauta (color amarillo)
Abreviatura (A)
ndash Utilizacioacuten de glucosa Reaccioacuten aacutecida en la columna del medio (color amarillo)
Abreviatura (A)
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ndash No hay utilizacioacuten del carbohidrato Se puede observar una reaccioacuten alcalina
(color rojo) o que no hay cambio de color (permanece del mismo color que el
medio no inoculado) Abreviaturas (K) o (N) respectivamente
Nota Cuando el microorganismo tambieacuten produce H2S el precipitado negro
puede ocultar la acidez
Produccioacuten de gas de glucosa
ndash Se considera positivo Presencia de una sola burbuja de gas burbujas en el
medio divisioacuten del medio desplazamiento completo del medio del fondo del tubo
dejando un aacuterea clara o una ligera muesca del medio en el costado del tubo
ndash Se registra la lectura por medio de cruces (+)
Produccioacuten de aacutecido sulfhiacutedrico
ndash Se manifiesta por un color negro distribuido por toda la columna del medio de
cultivo o soacutelo en la parte superior
ndash Se registra la lectura por medio de cruces (+)
Resultados
Ejemplo de simbolizacioacuten e interpretacioacuten
KA ndash+ Significa alcalinidad en la inclinacioacuten y acidez en el fondo (fermentacioacuten de
glucosa) gas negativo y H2S positivo
NN ndash ndashSignifica que no hay utilizacioacuten de la lactosa y glucosa ni produccioacuten de
H2S
AGAR LISINA HIERRO
En este medio se determina simultaacuteneamente la produccioacuten de lisina
descarboxilasa y de la formacioacuten de aacutecido sulfhiacutedrico
Lectura
Es importante hacer la lectura entre las 18 ndash 24 horas si la lectura se realiza antes
podemos obtener resultados falsos positivos asiacute como falsos negativos si se lee
despueacutes de las 24 horas Realizar la lectura en la columna y en la superficie
inclinada y observar la formacioacuten de aacutecido sulfhiacutedrico el cual se evidencia por una
coloracioacuten negra
Nota Generalmente las cepas del grupo Proteus y Providencia desaminan la
lisina a aacutecido ndashcetocarboacutenico Este uacuteltimo forma compuestos pardo-rojizos en la
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regioacuten superficial del medio de cultivo con la sal de hierro y bajo la influencia del
oxiacutegeno
Recomendaciones
No incubar maacutes del tiempo necesario para no ocasionar una alcalinizacioacuten en la
superficie del medio y por lo tanto producir un viraje hacia el violeta
UTILIZACIOacuteN DE CITRATO
Para determinar si un microorganismo es capaz de utilizar citrato como uacutenica
fuente de carbono para su metabolismo
Procedimiento
a) Incubar a 35ndash37 degC de 24 horasndash 48 horas En algunos casos es necesario una
incubacioacuten hasta por 4 diacuteas
b) Ver el viraje de color
Resultados
a) Prueba positiva Crecimiento con un color azul intenso en el pico de flauta o
presencia de colonias en ausencia del color azul
b) Prueba negativa No se observa crecimiento ni cambio de color (verde)
Controles
Positivo Enterobacter cloacae
Negativo Escherichia coli
HIDROacuteLISIS DE LA UREA (PRODUCCIOacuteN DE UREASA)
Es uacutetil para determinar la capacidad de un organismo de degradar la urea
formando dos moleacuteculas de amoniaco por accioacuten de la enzima ureasa
Procedimiento
Realizar la lectura despueacutes de 18 horas ndash 24 horas de incubacioacuten observando el
viraje de color
Resultados
Prueba positiva Color rosado intenso en el pico de flauta o todo el agar
Puede haber una reaccioacuten positiva retardada despueacutes de 24 horas y hasta
6 diacuteas de incubacioacuten (algunas cepas de Klebsiella por ejemplo)
Prueba negativa No se produce cambio de color
Controles
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Negativo Escherichia coli
Positivo Klebsiella pneumoniae
MOTILIDAD (MEDIOS SIM O MIO O AGAR MOVILIDAD)
Para determinar si un organismo es moacutevil o inmoacutevil
Procedimiento
Incubar a 35 ndash 37 degC de 24 a 48 horas
Resultados
Positivo Los microorganismos migran de la liacutenea de siembra y se difunden en el
medio provocando turbidez Tambieacuten puede manifestarse semejando
ldquovellosidadesrdquo a lo largo del trazo de siembra
Negativo Se observa un crecimiento bacteriano acentuado siguiendo el trazo de
siembra y el medio circundante se mantiene claro
Controles
Control positivo Escherichia coli
Control negativo Klebsiella pneumoniae
h) Prueba de indol[6]
Es uacutetil para determinar la capacidad de un microorganismo de producir indol a
partir del aminoaacutecido triptoacutefano
Medios y reactivos
Caldo de triptoacutefano o de peptona o caldo de triptona
Reactivo de indol de Kovacs
Procedimiento
Retirar aseacutepticamente 2 mL de caldo de cutivo con 24 horas de incubacioacuten
Agregar 5 gotas de reactivo de Kovacs
Mover suavemente el tubo y realizar la lectura
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ANTIBIOGRAMA
Preparacioacuten del Agar Mueller Hinton
Preparar el medio a partir de la base deshidratada de acuerdo a las
indicaciones del fabricante
Autoclavar y dejar enfriar en bantildeo de agua hasta que alcance los 45degC - 50degC
Repartir el medio en placas petri (60 ml ndash 70 ml o 25 ml ndash 30 ml para placas de
150 mm o 100 mm de diaacutemetro interno respectivamente) de manera que el
grosor del agar en la placa sea de 4 mm
Realizar las pruebas de esterilidad para cada lote de Mueller Hinton incubando
una o dos placas de cada lote a 30degC ndash 35degC durante 24 horas o maacutes Estas
placas utilizadas deben ser luego descartadas
Preparacioacuten del estaacutendar (05 Mc Farland) para el inoacuteculo
Para estandarizar la densidad del inoacuteculo se usa una suspensioacuten de sulfato de
bario (05 de la escala de Mac Farland) como estaacutendar
Preparacioacuten del estaacutendar de turbidez
a Agregar 05 ml de una solucioacuten de BaCl2 0048 M (BaCl22H2O al 1175 PV)
a 995 mL de una solucioacuten de H2SO4 018 M (036 N) (1 VV) en constante
movimiento para mantener la suspensioacuten
b Verificar la densidad correcta del estaacutendar usando un fotocoloriacutemetro oacute
espectrofotoacutemetro cuya absorbancia a 625 nm es 008 a 010 para el estaacutendar 05
de Mc Farland
c Distribuir de 4 ml a 6 ml en tubos con tapa de rosca o tapoacuten de jebe similares a
los que se usaraacuten para preparar el inoacuteculo
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d Ajustar bien las tapas o tapones y conservarlos en la oscuridad a temperatura
ambiente y anotar la fecha de preparacioacuten
e Antes de ser usado agitar vigorosamente dicho estaacutendar de preferencia en un
agitador mecaacutenico
f Verificar mensualmente la densidad de los estaacutendares de sulfato de bario y
reemplazarlo cuando sea necesario
INOCULACIOacuteN
Preparacioacuten del inoacuteculo
Puede realizarse de dos formas
Meacutetodo de desarrollo previo
a Seleccionar cuatro a cinco colonias bien aisladas del mismo tipo morfoloacutegico
de un cultivo en placa
b Tocar la superficie de cada colonia con una asa de siembra y transferirlo a un
tubo que contiene de 4 a 5 mL de caldo apropiado (Ej Caldo Tripticasa soya)
c Incubar el caldo a una temperatura entre 35degC a 37degC hasta que alcance o
exceda la turbidez del estaacutendar 05 de la escala de Mc Farland (por lo general de
2 a 6 horas)
d Ajustar la turbidez del inoacuteculo con solucioacuten salina o caldo apropiado hasta el
tubo 05 de la escala de Mc Farland por comparacioacuten visual con el estaacutendar Para
realizar este paso correctamente usar una luz apropiada y mirar los tubos contra
un fondo blanco con liacuteneas negras como contraste
e La suspensioacuten preparada contendraacute aproximadamente 1 a 2 x 108 UFCmL
Meacutetodo directo de inoculacioacuten a partir de colonias aisladas
a De una placa de cultivo con agar no selectivo e incubada por 18 - 24 h
seleccionar colonias aisladas y preparar una suspensioacutem directa en solucioacuten
salina oacute caldo
b La suspensioacuten debe ser inmediatamente ajustada a la escala 05 de Mc
Farland
Inoculacioacuten de las Placas
Dentro de los 15 minutos siguientes al ajuste de la turbidez del inoacuteculo sumergir
un hisopo esteacuteril en la suspensioacuten rotar el hisopo varias veces presionando
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firmemente sobre la pared interior del tubo por encima del nivel del liacutequido para
remover el exceso de inoacuteculo
Inocular la superficie seca de la placa de Mueller Hinton estriando con el hisopo
en tres direcciones para asegurar una distribucioacuten uniforme del inoacuteculo Antes de
colocar los discos dejar secar la placa a temperatura ambiente durante 3 a 5
minutos para que cualquier exceso de humedad superficial sea absorbido
APLICACIOacuteN DE LOS DISCOS
Colocar los discos individuales o multidiscos sobre la superficie del agar con la
ayuda de una pinza esteacuteril o la punta de una aguja presionando suavemente sobre
cada disco para asegurar un contacto completo con la superficie del agar
Distribuir los discos uniformemente de modo que esteacuten a una distancia miacutenima de
25 mm uno del otro (el diaacutemetro de los discos seguacuten las normas de la
Organizacioacuten Mundial de la Salud (OMS) debe ser de 6 mm) No deben colocarse
maacutes de 12 discos en una placa de 150 mm ni maacutes de 6 en una placa de 100 mm
de diaacutemetro interno para evitar la superposicioacuten de las zonas de inhibicioacuten Un
disco no debe ser removido una vez que tomoacute contacto con la superficie del agar
debido a que algunos antibioacuteticos se difunden raacutepidamente
INCUBACIOacuteN
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Incubar lar placas en posicioacuten invertida a 35degC por 18 a 24 horas dentro de los 15
minutos posteriores a la aplicacioacuten de los discos
Despueacutes del tiempo recomendado de incubacioacuten examinar cada placa y medir los
diaacutemetros de los halos de inhibicioacuten alrededor de cada disco
LECTURA DE LAS PLACAS E INTERPRETACIOacuteN DE LOS RESULTADOS
Medir los diaacutemetros de las zonas de inhibicioacuten completa (incluyendo el diaacutemetro
del disco) usando
una regla o calibrador Se debe mantener iluminada la parte posterior de la placa
petri con una luz reflejada localizada a unos cuantos centiacutemetros sobre un fondo
negro Tener la precaucioacuten de observar la placa siguiendo una vertical directa para
evitar una lectura erroacutenea de las marcas de la regla por efecto de paralelismo En
los medios suplementados con sangre las zonas son medidas en la parte superior
de la superficie del agar y retirando la tapa Tener cuidado de no medir la zona de
la hemoacutelisis sino la de inhibicioacuten del crecimiento
El punto final debe tomarse como el aacuterea que no muestra un crecimiento obvio
visible que puede ser detectado mediante observacioacuten visual no incluyendo velo
de crecimiento o colonias muy pequentildeas que puedan ser detectadas solo con
mucha dificultad en el borde de la zona Sin embargo las colonias mayores
creciendo dentro de la zona clara deberaacuten ser subcultivadas reidentificadas y
reensayadas Algunos Proteus spp debido a su gran movilidad pueden presentar
un velo de invasioacuten o ldquoswarmingrdquo dentro de las zonas de inhibicioacuten de algunos
antibioacuteticos En estos casos el velo del swarming debe ser ignorado al momento
de medir los halos de inhibicioacuten
DISCOS DE SENSIBILIDAD ANTIBIOacuteTICA A INCLUIR EN EL ANTIBIOGRAMA
Grupo I
Ampicilina
Cefalotina
Ampicilina Sulbactam o Amoxicilina Aacutecido Clavulaacutenico
Cefuroxima
Cefotaxima o Ceftriaxona
Gentamicina
Laboratorio Cliacutenico PAULINA ARROLLO PEREacuteZ
Amikacina
Aacutecido Nalidiacutexico(1)
Norfloxacina(1)
Ciprofloxacina
Cotrimoxazol (TrimetoprimSulfametoxazol)
Nitrofurantoiacutena(1)
Grupo II
Cefoxitina
Aztreonam
Ceftazidima
Cefixima
CefoperazonaSulbactam
Cefepime o Cefpirome
Imipenem o Meropenem
Cloramfenicol
Ofloxacina (1)
(1) Disco utilizado exclusivamente para infecciones de las viacuteas urinarias
Resistencias Naturales
Las enterobacterias son resistentes a Penicilina Oxacilina Macroacutelidos
Clindamicina y Glicopeacuteptidos
Klebsiella spp es resistente a las Aminopenicilinas
Citrobacter freundii Enterobacter cloacae y Enterobacter aerogenes son
resistentes a las Aminopenicilinas AminopenicilinasInhibidores de
betalactamasas Cefalosporinas de primera generacioacuten y Cefuroxima
Serratia marcescens es resistente a las Aminopenicilinas
AminopenicilinasInhibidores de betalactamasas Cefalosporinas de primera
generacioacuten y Cefoxitina
Proteus mirabilis es resistente a Nitrofurantoiacutena
Proteus vulgaris es resistente a las Aminopenicilinas Cefalosporinas de primera
generacioacuten Cefuroxima y Nitrofurantoiacutena
Laboratorio Cliacutenico PAULINA ARROLLO PEREacuteZ
Morganella morganii es resistente a las Aminopenicilinas
AminopenicilinasInhibidores de betalactamasas Cefalosporinas de primera
generacioacuten Cefuroxima y Nitrofurantoiacutena
Providentia stuartii es resistente a las Aminopenicilinas
AminopenicilinasInhibidores de betalactamasas Cefalosporinas de primera
generacioacuten Gentamicina (bajo nivel) y Nitrofurantoiacutena
ANTIBIOTICOS Y DIAMETROS CRITICOS PARA ENTEROBACTERIAS
E PRACTICA 7
EXAMEN QUIMICO DE CALCULO RENAL
EXAMEN FISICO
Laboratorio Cliacutenico PAULINA ARROLLO PEREacuteZ
Se debe pesar el caacutelculo y anotar el dato obtenido Medir dos de los diaacutemetros y
tomar nota del aspecto general textura y color y despueacutes de seccionado el
aspecto general la prominencia y el color de los distintos estratos
Se secciona el caacutelculo con una sierra Se raspan las caras con una aguja Se
procede lo mismo con el nuacutecleo Cada una de las muestras obtenidas se trituran
por separado en un mortero
PROCESO
Se coloca una porcioacuten del polvo del caacutelculo en un crisol y se calienta al fuego Si
no hay ennegrecimiento ni se altera el tamantildeo original el caacutelculo estaraacute formado
por sustancias inorgaacutenicas Si en cambio se carboniza desapareciendo estaraacute
formado por sustancias orgaacutenicas Si se funde y se ennegrece este caacutelculo estaacute
formado por sulfamidasa
Una vez obtenidos los datos pueden seleccionarse las reacciones necesarias
para confirmarlos
REACCIONES QUIMICAS
Solucioacuten A
10mg del polvo en matraz y antildeadir 50 ml de ClH 5 Observar si se
produce efervescencia Calentar en bantildeo de agua hirviendo por 10 a 15 minutos y
filtrar en caliente El filtrado se distribuye en 8 tubos numerados y se introduce un
trocito de papel tornasol en cada uno
Solucioacuten B
Agitar con Cl3CH unos 10 mg del polvo Reposar en tubo tapado a
temperatura ambiente hasta que el insoluble haya precipitado Decantar la
solucioacuten clorofoacutermica y guardar igual que el sedimento por separado
Carbonato efervescencia al agregar el CIH por desprendimiento de CO 2
Amonio al tubo 1 de la solucioacuten A se le agrega solucioacuten de OHNa 10 gota a
gota y agitando hasta que el papel tornasol vire
Agregar 1 ml de reactivo de Nessler Un color amarillo oscuro oporto indica
positividad de la reaccioacuten
Laboratorio Cliacutenico PAULINA ARROLLO PEREacuteZ
El NH 3 formado por los grupos NH 4 en medio alcalino reacciona con el yoiduro
doble del reactivo de Nesler para dar yoduro amoacutenico dimercuacuterico precipitado
pardo anaranjado
Acido uacuterico Neutralizar el contenido del tubo 2 como se explicoacute antes
Agregar igual volumen de CNN Na 2 y 05 ml de reactivo de Folin para aacutecido
uacuterico Un color azul intenso indica presencia de aacutecido uacuterico
El aacutecido uacuterico reduce al aacutecido fosfotuacutengstico en medio alcalino dando color azul
intenso de azul de tungsteno y a su vez se oxida a alantoiacutena
Reactivo fosfotuacutengstico (Folin y Denis) Antes del uso diluir al 10 en agua
destilada
Oxalato de calcio Neutralizar el contenido del tubo 3 Agregar CH 3 COOH 10
hasta reaccioacuten aacutecida al tornasol Precipitado blanco que no se redisuelve por
agitacioacuten indica presencia de oxalato de calcio
Calcio Neutralizar el tubo 4 Acidificar con CH 3 COOH glacial Agregar 2 ml C 2
O 4 ( NH 4 ) 4 Precipitado blancodenso indica presencia de Ca ++
Fosfato Neutralizar el tubo 5 Agregar 1 ml de solucioacuten de molibdato Mezclar
antildeadir 05 ml de aacutecido aminonaftol sulfoacutenico (ANS) 025 Coloracioacuten azul que
aparece en 5 minutos indica fosfatos
El color azul se debe a los oacutexidos reducidos de molibdeno
Reactivos
1 ClH concentrado2 Solucioacuten de OHK 203 NO 3 H concentrado4 Mo O 4 (NH 4 ) 2 disolver 25 g de la droga en 50 ml de SO 4 H 2 10 N y
diluir a 100 ml con H2 O destilada5 Amoniacuteaco
Reactivo ANS En matraz x 250 ml poner 05 g de aacutecido aminonaftolsulfoacutenico y
agrgar 195 ml de bisulfito de sodio 15 y 5 ml de sulfito de sodio 20 Mezclar
bien hasta disolucioacuten Si no se disuelve en media hora agregar maacutes sulfito y
agitar El reactivo dura unas 2 semanas
Laboratorio Cliacutenico PAULINA ARROLLO PEREacuteZ
Magnesio Neutralizar el tubo 7 con OHNH 4 y antildeadir 1 ml de solucioacuten alcohoacutelica
de p ndash Nitrobenceno azorresorcinol Un cromoacutegeno rojo indica presencia de
magnesio
En medio alcalino se forma (OH) 2 Mg El colorante azo resulta absorbido por el
(OH) 2 Mg en medio alcalino
Xantina A un tercio del residuo de la solucioacuten B agregarle gotas de NO 3 H
concentrado
Se disuelve el residuo sin desprender gas Evaporar a sequedad en bantildeo Mariacutea
hirviente quedando un residuo amarillo Dejar enfriar y humedecer con gotas de
OHNa 10 Una coloracioacuten anaranjada que vira al rojo oscuro al calentar indica
presencia de xantina
La reaccioacuten es la xantoproteica Migracioacuten de los anillos fenilo existentes en la
tirosina fenilalanina y triptoacutefano que da un color amarillo de los productos de
nitrosustitucioacuten para virar al anaranjado tras la adicioacuten de un aacutelcali ( formacioacuten de
la sal)
Nota El reactivo de molibdato se puede preparar asiacute
Solucioacuten 1 SO 4 H 2 01 N
Medir 450 ml de SO4 H 2 concentrado y agregarlos a 1300 ml de agua
destilada
Solucioacuten 2
A 250 ml de SO 4 H 2 01 N antildeadir la solucioacuten de molibdato y llevar con
agua destilada a 250 ml Mezclar
Sulfamidas Neutralizar el uacuteltimo tubo Antildeadir 1 ml de NO 2 Na 05 preparado
recientemente Agitar y reposar por 3 minutos Antildeadir 5 ml de solucioacuten alcohoacutelica
de dimetil-alfa naftilamina 025 Un color rojizo indica presencia de sulfamidas
Finalmente procede hacer mencioacuten de ciertos procedimientos fiacutesicos como la
microscopia de polarizacioacuten difraccioacuten de rayos X cristalografiacutea
espectrofotometriacutea de rayos infrarrojos etc que permiten actualmente un
conocimiento maacutes confiable de la estructura de los caacutelculos
- Reactivos
-
Laboratorio Cliacutenico PAULINA ARROLLO PEREacuteZ
f) Enjuagar el glande usando una gasa huacutemeda Repetir el procedimiento con otra
gasa
g) Secar la zona usando uno o maacutes piezas de gasa seca
h) Indicar al paciente que mantenga el prepucio retirado e inicie la miccioacuten
directamente en un recipiente (orina para descartar)
i) Despueacutes del chorro inicial colocar el frasco esteacuteril para colectar la muestra del
chorro medio
j) Obtenida la muestra tapar el frasco inmediatamente y limpiarle la superficie
k) Transportar el frasco con la muestra de orina inmediatamente al laboratorio
SIEMBRA PRIMARIA DE MUESTRA DE ORINA
Objetivo
Describir el procedimiento para la siembra primaria de muestra de orina
Campo de aplicacioacuten
Se aplica para el cultivo de muestra de orina en el diagnoacutestico bacterioloacutegico de
infecciones del tracto urinario
Materiales y equipos
a) Asa calibrada de platino o descartable de 0001 mL oacute 001 mL
b) Estufa de 35 ndash 37 degC
c) Mechero Bunsen o cabina de flujo laminar
d) Guantes de laacutetex
e) Contenedor de material contaminado
f) Pinza esteacuteril
g) Propipeta o pipetor automaacutetico
h) Medios de cultivo
ndash Placas con agar sangre de carnero (AS)
ndash Placas con agar Mc Conkey (McC)
Procedimiento
a) Mantener las muestras en refrigeracioacuten (4 degC) hasta su procesamiento por
cultivo
Laboratorio Cliacutenico PAULINA ARROLLO PEREacuteZ
b) Los cultivos deben realizarse en una cabina de bioseguridad o cerca del
mechero Bunsen
c) Las placas con AS y McC que se utilizaraacuten en el urocultivo deben estar a
temperatura ambiente Rotular las placas
d) Si el asa calibrada no es descartable esterilizar el asa de siembra flameacuteandola
en el mechero Bunsen hasta que se ponga rojo vivo Dejar enfriar el asa
e) Tomar el frasco con la muestra de orina abrir la tapa y flamear la boca del
frasco en el mechero Bunsen
f) Tomar la muestra de orina con el asa de siembra esteacuteril introducieacutendola y
sacaacutendola del frasco en forma vertical Tapar el frasco con la muestra
g) Inocular en el centro de la placa con AS a partir del cual se extiende la muestra
hacia delante y hacia atraacutes
h) Luego sin quemar el asa el inoacuteculo se disemina uniformemente con trazos
perpendiculares a la siembra inicial en toda la placa
i) Proceder de la misma forma para el agar Mc Conkey
Laboratorio Cliacutenico PAULINA ARROLLO PEREacuteZ
Lectura
a) Realizar la evaluacioacuten a las 24 horas si no hay crecimiento bacteriano dejar
incubar hasta las 48 horas
b) La evaluacioacuten consiste en realizar el recuento de colonias cuyo resultado se
multiplica por el factor de dilucioacuten para obtener las UFC por mL
Interpretacioacuten
a) En pacientes sin sonda vesical la cuenta significativa de bacterias en orina es
la presencia de maacutes de 105 UFC mL de un solo germen
b) Los recuentos intermedios (103 ndash 104 UFCmL) indican infeccioacuten si el
procedimiento de recoleccioacuten de orina fue realizado correctamente
c) Generalmente el aislamiento de tres o maacutes especies bacterianas indican que la
muestra se ha contaminado por recoleccioacuten inadecuada o demora en la siembra
d) En pacientes con sonda vesical cuentas bacterianas menores de 105 UFCmL
pueden tener significado asiacute tambieacuten se pueden encontrar bacteriurias
polimicrobianas hasta en casi 15 de enfermos
Laboratorio Cliacutenico PAULINA ARROLLO PEREacuteZ
e) En pacientes sin cateacuteter se puede comprobar si el procedimiento de obtencioacuten
de muestra fue realizado correctamente observando la frecuencia con la cual se
informan recuentos de colonias intermedias entre 103 ndash 104 UFCmL En
pacientes sin infecciones del tracto urinario el recuento es nulo o se reduce a
pocas colonias
IDENTIFICACION BACTERIANA
Lectura de cultivos en agar Mac Conkey
ndash En agar Mc Conkey Escherichia coli lactosa positiva forma colonias de borde
entero de color fucsia opacas de 2 mm ndash 3 mm de diaacutemetro usualmente
rodeadas de una zona opaca alrededor de la colonia (bilis precipitada) Las cepas
de E coli que son lactosa negativa dan colonias incoloras de 3 ndash 4 mm
ndash En agar Mc Conkey K pneumoniae forma colonias de borde entero de color
rosado a rosado oscuro de 3 ndash 4 mm de diaacutemetro y aspecto mucoide
ndash En agar Mc Conkey Enterobacter spp forma colonias de borde entero de color
rosado de 2 ndash 4 mm de diaacutemetro no tan mucoides como K pneumoniae
Las colonias con estas caracteriacutesticas son subcultivadas en medios diferenciales
PRUEBAS BIOQUIMICAS
TSI
Lectura
Es importante hacer la lectura entre las 18 ndash 24 horas para no obtener resultados
erroacuteneos La lectura se hace sobre la base de tres caracteriacutesticas Utilizacioacuten de
hidratos de carbono produccioacuten de gas y produccioacuten de aacutecido sulfhiacutedrico
Utilizacioacuten de hidratos de carbono
ndash Utilizacioacuten de lactosa Reaccioacuten aacutecida en el pico de flauta (color amarillo)
Abreviatura (A)
ndash Utilizacioacuten de glucosa Reaccioacuten aacutecida en la columna del medio (color amarillo)
Abreviatura (A)
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ndash No hay utilizacioacuten del carbohidrato Se puede observar una reaccioacuten alcalina
(color rojo) o que no hay cambio de color (permanece del mismo color que el
medio no inoculado) Abreviaturas (K) o (N) respectivamente
Nota Cuando el microorganismo tambieacuten produce H2S el precipitado negro
puede ocultar la acidez
Produccioacuten de gas de glucosa
ndash Se considera positivo Presencia de una sola burbuja de gas burbujas en el
medio divisioacuten del medio desplazamiento completo del medio del fondo del tubo
dejando un aacuterea clara o una ligera muesca del medio en el costado del tubo
ndash Se registra la lectura por medio de cruces (+)
Produccioacuten de aacutecido sulfhiacutedrico
ndash Se manifiesta por un color negro distribuido por toda la columna del medio de
cultivo o soacutelo en la parte superior
ndash Se registra la lectura por medio de cruces (+)
Resultados
Ejemplo de simbolizacioacuten e interpretacioacuten
KA ndash+ Significa alcalinidad en la inclinacioacuten y acidez en el fondo (fermentacioacuten de
glucosa) gas negativo y H2S positivo
NN ndash ndashSignifica que no hay utilizacioacuten de la lactosa y glucosa ni produccioacuten de
H2S
AGAR LISINA HIERRO
En este medio se determina simultaacuteneamente la produccioacuten de lisina
descarboxilasa y de la formacioacuten de aacutecido sulfhiacutedrico
Lectura
Es importante hacer la lectura entre las 18 ndash 24 horas si la lectura se realiza antes
podemos obtener resultados falsos positivos asiacute como falsos negativos si se lee
despueacutes de las 24 horas Realizar la lectura en la columna y en la superficie
inclinada y observar la formacioacuten de aacutecido sulfhiacutedrico el cual se evidencia por una
coloracioacuten negra
Nota Generalmente las cepas del grupo Proteus y Providencia desaminan la
lisina a aacutecido ndashcetocarboacutenico Este uacuteltimo forma compuestos pardo-rojizos en la
Laboratorio Cliacutenico PAULINA ARROLLO PEREacuteZ
regioacuten superficial del medio de cultivo con la sal de hierro y bajo la influencia del
oxiacutegeno
Recomendaciones
No incubar maacutes del tiempo necesario para no ocasionar una alcalinizacioacuten en la
superficie del medio y por lo tanto producir un viraje hacia el violeta
UTILIZACIOacuteN DE CITRATO
Para determinar si un microorganismo es capaz de utilizar citrato como uacutenica
fuente de carbono para su metabolismo
Procedimiento
a) Incubar a 35ndash37 degC de 24 horasndash 48 horas En algunos casos es necesario una
incubacioacuten hasta por 4 diacuteas
b) Ver el viraje de color
Resultados
a) Prueba positiva Crecimiento con un color azul intenso en el pico de flauta o
presencia de colonias en ausencia del color azul
b) Prueba negativa No se observa crecimiento ni cambio de color (verde)
Controles
Positivo Enterobacter cloacae
Negativo Escherichia coli
HIDROacuteLISIS DE LA UREA (PRODUCCIOacuteN DE UREASA)
Es uacutetil para determinar la capacidad de un organismo de degradar la urea
formando dos moleacuteculas de amoniaco por accioacuten de la enzima ureasa
Procedimiento
Realizar la lectura despueacutes de 18 horas ndash 24 horas de incubacioacuten observando el
viraje de color
Resultados
Prueba positiva Color rosado intenso en el pico de flauta o todo el agar
Puede haber una reaccioacuten positiva retardada despueacutes de 24 horas y hasta
6 diacuteas de incubacioacuten (algunas cepas de Klebsiella por ejemplo)
Prueba negativa No se produce cambio de color
Controles
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Negativo Escherichia coli
Positivo Klebsiella pneumoniae
MOTILIDAD (MEDIOS SIM O MIO O AGAR MOVILIDAD)
Para determinar si un organismo es moacutevil o inmoacutevil
Procedimiento
Incubar a 35 ndash 37 degC de 24 a 48 horas
Resultados
Positivo Los microorganismos migran de la liacutenea de siembra y se difunden en el
medio provocando turbidez Tambieacuten puede manifestarse semejando
ldquovellosidadesrdquo a lo largo del trazo de siembra
Negativo Se observa un crecimiento bacteriano acentuado siguiendo el trazo de
siembra y el medio circundante se mantiene claro
Controles
Control positivo Escherichia coli
Control negativo Klebsiella pneumoniae
h) Prueba de indol[6]
Es uacutetil para determinar la capacidad de un microorganismo de producir indol a
partir del aminoaacutecido triptoacutefano
Medios y reactivos
Caldo de triptoacutefano o de peptona o caldo de triptona
Reactivo de indol de Kovacs
Procedimiento
Retirar aseacutepticamente 2 mL de caldo de cutivo con 24 horas de incubacioacuten
Agregar 5 gotas de reactivo de Kovacs
Mover suavemente el tubo y realizar la lectura
Laboratorio Cliacutenico PAULINA ARROLLO PEREacuteZ
Laboratorio Cliacutenico PAULINA ARROLLO PEREacuteZ
Laboratorio Cliacutenico PAULINA ARROLLO PEREacuteZ
ANTIBIOGRAMA
Preparacioacuten del Agar Mueller Hinton
Preparar el medio a partir de la base deshidratada de acuerdo a las
indicaciones del fabricante
Autoclavar y dejar enfriar en bantildeo de agua hasta que alcance los 45degC - 50degC
Repartir el medio en placas petri (60 ml ndash 70 ml o 25 ml ndash 30 ml para placas de
150 mm o 100 mm de diaacutemetro interno respectivamente) de manera que el
grosor del agar en la placa sea de 4 mm
Realizar las pruebas de esterilidad para cada lote de Mueller Hinton incubando
una o dos placas de cada lote a 30degC ndash 35degC durante 24 horas o maacutes Estas
placas utilizadas deben ser luego descartadas
Preparacioacuten del estaacutendar (05 Mc Farland) para el inoacuteculo
Para estandarizar la densidad del inoacuteculo se usa una suspensioacuten de sulfato de
bario (05 de la escala de Mac Farland) como estaacutendar
Preparacioacuten del estaacutendar de turbidez
a Agregar 05 ml de una solucioacuten de BaCl2 0048 M (BaCl22H2O al 1175 PV)
a 995 mL de una solucioacuten de H2SO4 018 M (036 N) (1 VV) en constante
movimiento para mantener la suspensioacuten
b Verificar la densidad correcta del estaacutendar usando un fotocoloriacutemetro oacute
espectrofotoacutemetro cuya absorbancia a 625 nm es 008 a 010 para el estaacutendar 05
de Mc Farland
c Distribuir de 4 ml a 6 ml en tubos con tapa de rosca o tapoacuten de jebe similares a
los que se usaraacuten para preparar el inoacuteculo
Laboratorio Cliacutenico PAULINA ARROLLO PEREacuteZ
d Ajustar bien las tapas o tapones y conservarlos en la oscuridad a temperatura
ambiente y anotar la fecha de preparacioacuten
e Antes de ser usado agitar vigorosamente dicho estaacutendar de preferencia en un
agitador mecaacutenico
f Verificar mensualmente la densidad de los estaacutendares de sulfato de bario y
reemplazarlo cuando sea necesario
INOCULACIOacuteN
Preparacioacuten del inoacuteculo
Puede realizarse de dos formas
Meacutetodo de desarrollo previo
a Seleccionar cuatro a cinco colonias bien aisladas del mismo tipo morfoloacutegico
de un cultivo en placa
b Tocar la superficie de cada colonia con una asa de siembra y transferirlo a un
tubo que contiene de 4 a 5 mL de caldo apropiado (Ej Caldo Tripticasa soya)
c Incubar el caldo a una temperatura entre 35degC a 37degC hasta que alcance o
exceda la turbidez del estaacutendar 05 de la escala de Mc Farland (por lo general de
2 a 6 horas)
d Ajustar la turbidez del inoacuteculo con solucioacuten salina o caldo apropiado hasta el
tubo 05 de la escala de Mc Farland por comparacioacuten visual con el estaacutendar Para
realizar este paso correctamente usar una luz apropiada y mirar los tubos contra
un fondo blanco con liacuteneas negras como contraste
e La suspensioacuten preparada contendraacute aproximadamente 1 a 2 x 108 UFCmL
Meacutetodo directo de inoculacioacuten a partir de colonias aisladas
a De una placa de cultivo con agar no selectivo e incubada por 18 - 24 h
seleccionar colonias aisladas y preparar una suspensioacutem directa en solucioacuten
salina oacute caldo
b La suspensioacuten debe ser inmediatamente ajustada a la escala 05 de Mc
Farland
Inoculacioacuten de las Placas
Dentro de los 15 minutos siguientes al ajuste de la turbidez del inoacuteculo sumergir
un hisopo esteacuteril en la suspensioacuten rotar el hisopo varias veces presionando
Laboratorio Cliacutenico PAULINA ARROLLO PEREacuteZ
firmemente sobre la pared interior del tubo por encima del nivel del liacutequido para
remover el exceso de inoacuteculo
Inocular la superficie seca de la placa de Mueller Hinton estriando con el hisopo
en tres direcciones para asegurar una distribucioacuten uniforme del inoacuteculo Antes de
colocar los discos dejar secar la placa a temperatura ambiente durante 3 a 5
minutos para que cualquier exceso de humedad superficial sea absorbido
APLICACIOacuteN DE LOS DISCOS
Colocar los discos individuales o multidiscos sobre la superficie del agar con la
ayuda de una pinza esteacuteril o la punta de una aguja presionando suavemente sobre
cada disco para asegurar un contacto completo con la superficie del agar
Distribuir los discos uniformemente de modo que esteacuten a una distancia miacutenima de
25 mm uno del otro (el diaacutemetro de los discos seguacuten las normas de la
Organizacioacuten Mundial de la Salud (OMS) debe ser de 6 mm) No deben colocarse
maacutes de 12 discos en una placa de 150 mm ni maacutes de 6 en una placa de 100 mm
de diaacutemetro interno para evitar la superposicioacuten de las zonas de inhibicioacuten Un
disco no debe ser removido una vez que tomoacute contacto con la superficie del agar
debido a que algunos antibioacuteticos se difunden raacutepidamente
INCUBACIOacuteN
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Incubar lar placas en posicioacuten invertida a 35degC por 18 a 24 horas dentro de los 15
minutos posteriores a la aplicacioacuten de los discos
Despueacutes del tiempo recomendado de incubacioacuten examinar cada placa y medir los
diaacutemetros de los halos de inhibicioacuten alrededor de cada disco
LECTURA DE LAS PLACAS E INTERPRETACIOacuteN DE LOS RESULTADOS
Medir los diaacutemetros de las zonas de inhibicioacuten completa (incluyendo el diaacutemetro
del disco) usando
una regla o calibrador Se debe mantener iluminada la parte posterior de la placa
petri con una luz reflejada localizada a unos cuantos centiacutemetros sobre un fondo
negro Tener la precaucioacuten de observar la placa siguiendo una vertical directa para
evitar una lectura erroacutenea de las marcas de la regla por efecto de paralelismo En
los medios suplementados con sangre las zonas son medidas en la parte superior
de la superficie del agar y retirando la tapa Tener cuidado de no medir la zona de
la hemoacutelisis sino la de inhibicioacuten del crecimiento
El punto final debe tomarse como el aacuterea que no muestra un crecimiento obvio
visible que puede ser detectado mediante observacioacuten visual no incluyendo velo
de crecimiento o colonias muy pequentildeas que puedan ser detectadas solo con
mucha dificultad en el borde de la zona Sin embargo las colonias mayores
creciendo dentro de la zona clara deberaacuten ser subcultivadas reidentificadas y
reensayadas Algunos Proteus spp debido a su gran movilidad pueden presentar
un velo de invasioacuten o ldquoswarmingrdquo dentro de las zonas de inhibicioacuten de algunos
antibioacuteticos En estos casos el velo del swarming debe ser ignorado al momento
de medir los halos de inhibicioacuten
DISCOS DE SENSIBILIDAD ANTIBIOacuteTICA A INCLUIR EN EL ANTIBIOGRAMA
Grupo I
Ampicilina
Cefalotina
Ampicilina Sulbactam o Amoxicilina Aacutecido Clavulaacutenico
Cefuroxima
Cefotaxima o Ceftriaxona
Gentamicina
Laboratorio Cliacutenico PAULINA ARROLLO PEREacuteZ
Amikacina
Aacutecido Nalidiacutexico(1)
Norfloxacina(1)
Ciprofloxacina
Cotrimoxazol (TrimetoprimSulfametoxazol)
Nitrofurantoiacutena(1)
Grupo II
Cefoxitina
Aztreonam
Ceftazidima
Cefixima
CefoperazonaSulbactam
Cefepime o Cefpirome
Imipenem o Meropenem
Cloramfenicol
Ofloxacina (1)
(1) Disco utilizado exclusivamente para infecciones de las viacuteas urinarias
Resistencias Naturales
Las enterobacterias son resistentes a Penicilina Oxacilina Macroacutelidos
Clindamicina y Glicopeacuteptidos
Klebsiella spp es resistente a las Aminopenicilinas
Citrobacter freundii Enterobacter cloacae y Enterobacter aerogenes son
resistentes a las Aminopenicilinas AminopenicilinasInhibidores de
betalactamasas Cefalosporinas de primera generacioacuten y Cefuroxima
Serratia marcescens es resistente a las Aminopenicilinas
AminopenicilinasInhibidores de betalactamasas Cefalosporinas de primera
generacioacuten y Cefoxitina
Proteus mirabilis es resistente a Nitrofurantoiacutena
Proteus vulgaris es resistente a las Aminopenicilinas Cefalosporinas de primera
generacioacuten Cefuroxima y Nitrofurantoiacutena
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Morganella morganii es resistente a las Aminopenicilinas
AminopenicilinasInhibidores de betalactamasas Cefalosporinas de primera
generacioacuten Cefuroxima y Nitrofurantoiacutena
Providentia stuartii es resistente a las Aminopenicilinas
AminopenicilinasInhibidores de betalactamasas Cefalosporinas de primera
generacioacuten Gentamicina (bajo nivel) y Nitrofurantoiacutena
ANTIBIOTICOS Y DIAMETROS CRITICOS PARA ENTEROBACTERIAS
E PRACTICA 7
EXAMEN QUIMICO DE CALCULO RENAL
EXAMEN FISICO
Laboratorio Cliacutenico PAULINA ARROLLO PEREacuteZ
Se debe pesar el caacutelculo y anotar el dato obtenido Medir dos de los diaacutemetros y
tomar nota del aspecto general textura y color y despueacutes de seccionado el
aspecto general la prominencia y el color de los distintos estratos
Se secciona el caacutelculo con una sierra Se raspan las caras con una aguja Se
procede lo mismo con el nuacutecleo Cada una de las muestras obtenidas se trituran
por separado en un mortero
PROCESO
Se coloca una porcioacuten del polvo del caacutelculo en un crisol y se calienta al fuego Si
no hay ennegrecimiento ni se altera el tamantildeo original el caacutelculo estaraacute formado
por sustancias inorgaacutenicas Si en cambio se carboniza desapareciendo estaraacute
formado por sustancias orgaacutenicas Si se funde y se ennegrece este caacutelculo estaacute
formado por sulfamidasa
Una vez obtenidos los datos pueden seleccionarse las reacciones necesarias
para confirmarlos
REACCIONES QUIMICAS
Solucioacuten A
10mg del polvo en matraz y antildeadir 50 ml de ClH 5 Observar si se
produce efervescencia Calentar en bantildeo de agua hirviendo por 10 a 15 minutos y
filtrar en caliente El filtrado se distribuye en 8 tubos numerados y se introduce un
trocito de papel tornasol en cada uno
Solucioacuten B
Agitar con Cl3CH unos 10 mg del polvo Reposar en tubo tapado a
temperatura ambiente hasta que el insoluble haya precipitado Decantar la
solucioacuten clorofoacutermica y guardar igual que el sedimento por separado
Carbonato efervescencia al agregar el CIH por desprendimiento de CO 2
Amonio al tubo 1 de la solucioacuten A se le agrega solucioacuten de OHNa 10 gota a
gota y agitando hasta que el papel tornasol vire
Agregar 1 ml de reactivo de Nessler Un color amarillo oscuro oporto indica
positividad de la reaccioacuten
Laboratorio Cliacutenico PAULINA ARROLLO PEREacuteZ
El NH 3 formado por los grupos NH 4 en medio alcalino reacciona con el yoiduro
doble del reactivo de Nesler para dar yoduro amoacutenico dimercuacuterico precipitado
pardo anaranjado
Acido uacuterico Neutralizar el contenido del tubo 2 como se explicoacute antes
Agregar igual volumen de CNN Na 2 y 05 ml de reactivo de Folin para aacutecido
uacuterico Un color azul intenso indica presencia de aacutecido uacuterico
El aacutecido uacuterico reduce al aacutecido fosfotuacutengstico en medio alcalino dando color azul
intenso de azul de tungsteno y a su vez se oxida a alantoiacutena
Reactivo fosfotuacutengstico (Folin y Denis) Antes del uso diluir al 10 en agua
destilada
Oxalato de calcio Neutralizar el contenido del tubo 3 Agregar CH 3 COOH 10
hasta reaccioacuten aacutecida al tornasol Precipitado blanco que no se redisuelve por
agitacioacuten indica presencia de oxalato de calcio
Calcio Neutralizar el tubo 4 Acidificar con CH 3 COOH glacial Agregar 2 ml C 2
O 4 ( NH 4 ) 4 Precipitado blancodenso indica presencia de Ca ++
Fosfato Neutralizar el tubo 5 Agregar 1 ml de solucioacuten de molibdato Mezclar
antildeadir 05 ml de aacutecido aminonaftol sulfoacutenico (ANS) 025 Coloracioacuten azul que
aparece en 5 minutos indica fosfatos
El color azul se debe a los oacutexidos reducidos de molibdeno
Reactivos
1 ClH concentrado2 Solucioacuten de OHK 203 NO 3 H concentrado4 Mo O 4 (NH 4 ) 2 disolver 25 g de la droga en 50 ml de SO 4 H 2 10 N y
diluir a 100 ml con H2 O destilada5 Amoniacuteaco
Reactivo ANS En matraz x 250 ml poner 05 g de aacutecido aminonaftolsulfoacutenico y
agrgar 195 ml de bisulfito de sodio 15 y 5 ml de sulfito de sodio 20 Mezclar
bien hasta disolucioacuten Si no se disuelve en media hora agregar maacutes sulfito y
agitar El reactivo dura unas 2 semanas
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Magnesio Neutralizar el tubo 7 con OHNH 4 y antildeadir 1 ml de solucioacuten alcohoacutelica
de p ndash Nitrobenceno azorresorcinol Un cromoacutegeno rojo indica presencia de
magnesio
En medio alcalino se forma (OH) 2 Mg El colorante azo resulta absorbido por el
(OH) 2 Mg en medio alcalino
Xantina A un tercio del residuo de la solucioacuten B agregarle gotas de NO 3 H
concentrado
Se disuelve el residuo sin desprender gas Evaporar a sequedad en bantildeo Mariacutea
hirviente quedando un residuo amarillo Dejar enfriar y humedecer con gotas de
OHNa 10 Una coloracioacuten anaranjada que vira al rojo oscuro al calentar indica
presencia de xantina
La reaccioacuten es la xantoproteica Migracioacuten de los anillos fenilo existentes en la
tirosina fenilalanina y triptoacutefano que da un color amarillo de los productos de
nitrosustitucioacuten para virar al anaranjado tras la adicioacuten de un aacutelcali ( formacioacuten de
la sal)
Nota El reactivo de molibdato se puede preparar asiacute
Solucioacuten 1 SO 4 H 2 01 N
Medir 450 ml de SO4 H 2 concentrado y agregarlos a 1300 ml de agua
destilada
Solucioacuten 2
A 250 ml de SO 4 H 2 01 N antildeadir la solucioacuten de molibdato y llevar con
agua destilada a 250 ml Mezclar
Sulfamidas Neutralizar el uacuteltimo tubo Antildeadir 1 ml de NO 2 Na 05 preparado
recientemente Agitar y reposar por 3 minutos Antildeadir 5 ml de solucioacuten alcohoacutelica
de dimetil-alfa naftilamina 025 Un color rojizo indica presencia de sulfamidas
Finalmente procede hacer mencioacuten de ciertos procedimientos fiacutesicos como la
microscopia de polarizacioacuten difraccioacuten de rayos X cristalografiacutea
espectrofotometriacutea de rayos infrarrojos etc que permiten actualmente un
conocimiento maacutes confiable de la estructura de los caacutelculos
- Reactivos
-
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b) Los cultivos deben realizarse en una cabina de bioseguridad o cerca del
mechero Bunsen
c) Las placas con AS y McC que se utilizaraacuten en el urocultivo deben estar a
temperatura ambiente Rotular las placas
d) Si el asa calibrada no es descartable esterilizar el asa de siembra flameacuteandola
en el mechero Bunsen hasta que se ponga rojo vivo Dejar enfriar el asa
e) Tomar el frasco con la muestra de orina abrir la tapa y flamear la boca del
frasco en el mechero Bunsen
f) Tomar la muestra de orina con el asa de siembra esteacuteril introducieacutendola y
sacaacutendola del frasco en forma vertical Tapar el frasco con la muestra
g) Inocular en el centro de la placa con AS a partir del cual se extiende la muestra
hacia delante y hacia atraacutes
h) Luego sin quemar el asa el inoacuteculo se disemina uniformemente con trazos
perpendiculares a la siembra inicial en toda la placa
i) Proceder de la misma forma para el agar Mc Conkey
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Lectura
a) Realizar la evaluacioacuten a las 24 horas si no hay crecimiento bacteriano dejar
incubar hasta las 48 horas
b) La evaluacioacuten consiste en realizar el recuento de colonias cuyo resultado se
multiplica por el factor de dilucioacuten para obtener las UFC por mL
Interpretacioacuten
a) En pacientes sin sonda vesical la cuenta significativa de bacterias en orina es
la presencia de maacutes de 105 UFC mL de un solo germen
b) Los recuentos intermedios (103 ndash 104 UFCmL) indican infeccioacuten si el
procedimiento de recoleccioacuten de orina fue realizado correctamente
c) Generalmente el aislamiento de tres o maacutes especies bacterianas indican que la
muestra se ha contaminado por recoleccioacuten inadecuada o demora en la siembra
d) En pacientes con sonda vesical cuentas bacterianas menores de 105 UFCmL
pueden tener significado asiacute tambieacuten se pueden encontrar bacteriurias
polimicrobianas hasta en casi 15 de enfermos
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e) En pacientes sin cateacuteter se puede comprobar si el procedimiento de obtencioacuten
de muestra fue realizado correctamente observando la frecuencia con la cual se
informan recuentos de colonias intermedias entre 103 ndash 104 UFCmL En
pacientes sin infecciones del tracto urinario el recuento es nulo o se reduce a
pocas colonias
IDENTIFICACION BACTERIANA
Lectura de cultivos en agar Mac Conkey
ndash En agar Mc Conkey Escherichia coli lactosa positiva forma colonias de borde
entero de color fucsia opacas de 2 mm ndash 3 mm de diaacutemetro usualmente
rodeadas de una zona opaca alrededor de la colonia (bilis precipitada) Las cepas
de E coli que son lactosa negativa dan colonias incoloras de 3 ndash 4 mm
ndash En agar Mc Conkey K pneumoniae forma colonias de borde entero de color
rosado a rosado oscuro de 3 ndash 4 mm de diaacutemetro y aspecto mucoide
ndash En agar Mc Conkey Enterobacter spp forma colonias de borde entero de color
rosado de 2 ndash 4 mm de diaacutemetro no tan mucoides como K pneumoniae
Las colonias con estas caracteriacutesticas son subcultivadas en medios diferenciales
PRUEBAS BIOQUIMICAS
TSI
Lectura
Es importante hacer la lectura entre las 18 ndash 24 horas para no obtener resultados
erroacuteneos La lectura se hace sobre la base de tres caracteriacutesticas Utilizacioacuten de
hidratos de carbono produccioacuten de gas y produccioacuten de aacutecido sulfhiacutedrico
Utilizacioacuten de hidratos de carbono
ndash Utilizacioacuten de lactosa Reaccioacuten aacutecida en el pico de flauta (color amarillo)
Abreviatura (A)
ndash Utilizacioacuten de glucosa Reaccioacuten aacutecida en la columna del medio (color amarillo)
Abreviatura (A)
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ndash No hay utilizacioacuten del carbohidrato Se puede observar una reaccioacuten alcalina
(color rojo) o que no hay cambio de color (permanece del mismo color que el
medio no inoculado) Abreviaturas (K) o (N) respectivamente
Nota Cuando el microorganismo tambieacuten produce H2S el precipitado negro
puede ocultar la acidez
Produccioacuten de gas de glucosa
ndash Se considera positivo Presencia de una sola burbuja de gas burbujas en el
medio divisioacuten del medio desplazamiento completo del medio del fondo del tubo
dejando un aacuterea clara o una ligera muesca del medio en el costado del tubo
ndash Se registra la lectura por medio de cruces (+)
Produccioacuten de aacutecido sulfhiacutedrico
ndash Se manifiesta por un color negro distribuido por toda la columna del medio de
cultivo o soacutelo en la parte superior
ndash Se registra la lectura por medio de cruces (+)
Resultados
Ejemplo de simbolizacioacuten e interpretacioacuten
KA ndash+ Significa alcalinidad en la inclinacioacuten y acidez en el fondo (fermentacioacuten de
glucosa) gas negativo y H2S positivo
NN ndash ndashSignifica que no hay utilizacioacuten de la lactosa y glucosa ni produccioacuten de
H2S
AGAR LISINA HIERRO
En este medio se determina simultaacuteneamente la produccioacuten de lisina
descarboxilasa y de la formacioacuten de aacutecido sulfhiacutedrico
Lectura
Es importante hacer la lectura entre las 18 ndash 24 horas si la lectura se realiza antes
podemos obtener resultados falsos positivos asiacute como falsos negativos si se lee
despueacutes de las 24 horas Realizar la lectura en la columna y en la superficie
inclinada y observar la formacioacuten de aacutecido sulfhiacutedrico el cual se evidencia por una
coloracioacuten negra
Nota Generalmente las cepas del grupo Proteus y Providencia desaminan la
lisina a aacutecido ndashcetocarboacutenico Este uacuteltimo forma compuestos pardo-rojizos en la
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regioacuten superficial del medio de cultivo con la sal de hierro y bajo la influencia del
oxiacutegeno
Recomendaciones
No incubar maacutes del tiempo necesario para no ocasionar una alcalinizacioacuten en la
superficie del medio y por lo tanto producir un viraje hacia el violeta
UTILIZACIOacuteN DE CITRATO
Para determinar si un microorganismo es capaz de utilizar citrato como uacutenica
fuente de carbono para su metabolismo
Procedimiento
a) Incubar a 35ndash37 degC de 24 horasndash 48 horas En algunos casos es necesario una
incubacioacuten hasta por 4 diacuteas
b) Ver el viraje de color
Resultados
a) Prueba positiva Crecimiento con un color azul intenso en el pico de flauta o
presencia de colonias en ausencia del color azul
b) Prueba negativa No se observa crecimiento ni cambio de color (verde)
Controles
Positivo Enterobacter cloacae
Negativo Escherichia coli
HIDROacuteLISIS DE LA UREA (PRODUCCIOacuteN DE UREASA)
Es uacutetil para determinar la capacidad de un organismo de degradar la urea
formando dos moleacuteculas de amoniaco por accioacuten de la enzima ureasa
Procedimiento
Realizar la lectura despueacutes de 18 horas ndash 24 horas de incubacioacuten observando el
viraje de color
Resultados
Prueba positiva Color rosado intenso en el pico de flauta o todo el agar
Puede haber una reaccioacuten positiva retardada despueacutes de 24 horas y hasta
6 diacuteas de incubacioacuten (algunas cepas de Klebsiella por ejemplo)
Prueba negativa No se produce cambio de color
Controles
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Negativo Escherichia coli
Positivo Klebsiella pneumoniae
MOTILIDAD (MEDIOS SIM O MIO O AGAR MOVILIDAD)
Para determinar si un organismo es moacutevil o inmoacutevil
Procedimiento
Incubar a 35 ndash 37 degC de 24 a 48 horas
Resultados
Positivo Los microorganismos migran de la liacutenea de siembra y se difunden en el
medio provocando turbidez Tambieacuten puede manifestarse semejando
ldquovellosidadesrdquo a lo largo del trazo de siembra
Negativo Se observa un crecimiento bacteriano acentuado siguiendo el trazo de
siembra y el medio circundante se mantiene claro
Controles
Control positivo Escherichia coli
Control negativo Klebsiella pneumoniae
h) Prueba de indol[6]
Es uacutetil para determinar la capacidad de un microorganismo de producir indol a
partir del aminoaacutecido triptoacutefano
Medios y reactivos
Caldo de triptoacutefano o de peptona o caldo de triptona
Reactivo de indol de Kovacs
Procedimiento
Retirar aseacutepticamente 2 mL de caldo de cutivo con 24 horas de incubacioacuten
Agregar 5 gotas de reactivo de Kovacs
Mover suavemente el tubo y realizar la lectura
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ANTIBIOGRAMA
Preparacioacuten del Agar Mueller Hinton
Preparar el medio a partir de la base deshidratada de acuerdo a las
indicaciones del fabricante
Autoclavar y dejar enfriar en bantildeo de agua hasta que alcance los 45degC - 50degC
Repartir el medio en placas petri (60 ml ndash 70 ml o 25 ml ndash 30 ml para placas de
150 mm o 100 mm de diaacutemetro interno respectivamente) de manera que el
grosor del agar en la placa sea de 4 mm
Realizar las pruebas de esterilidad para cada lote de Mueller Hinton incubando
una o dos placas de cada lote a 30degC ndash 35degC durante 24 horas o maacutes Estas
placas utilizadas deben ser luego descartadas
Preparacioacuten del estaacutendar (05 Mc Farland) para el inoacuteculo
Para estandarizar la densidad del inoacuteculo se usa una suspensioacuten de sulfato de
bario (05 de la escala de Mac Farland) como estaacutendar
Preparacioacuten del estaacutendar de turbidez
a Agregar 05 ml de una solucioacuten de BaCl2 0048 M (BaCl22H2O al 1175 PV)
a 995 mL de una solucioacuten de H2SO4 018 M (036 N) (1 VV) en constante
movimiento para mantener la suspensioacuten
b Verificar la densidad correcta del estaacutendar usando un fotocoloriacutemetro oacute
espectrofotoacutemetro cuya absorbancia a 625 nm es 008 a 010 para el estaacutendar 05
de Mc Farland
c Distribuir de 4 ml a 6 ml en tubos con tapa de rosca o tapoacuten de jebe similares a
los que se usaraacuten para preparar el inoacuteculo
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d Ajustar bien las tapas o tapones y conservarlos en la oscuridad a temperatura
ambiente y anotar la fecha de preparacioacuten
e Antes de ser usado agitar vigorosamente dicho estaacutendar de preferencia en un
agitador mecaacutenico
f Verificar mensualmente la densidad de los estaacutendares de sulfato de bario y
reemplazarlo cuando sea necesario
INOCULACIOacuteN
Preparacioacuten del inoacuteculo
Puede realizarse de dos formas
Meacutetodo de desarrollo previo
a Seleccionar cuatro a cinco colonias bien aisladas del mismo tipo morfoloacutegico
de un cultivo en placa
b Tocar la superficie de cada colonia con una asa de siembra y transferirlo a un
tubo que contiene de 4 a 5 mL de caldo apropiado (Ej Caldo Tripticasa soya)
c Incubar el caldo a una temperatura entre 35degC a 37degC hasta que alcance o
exceda la turbidez del estaacutendar 05 de la escala de Mc Farland (por lo general de
2 a 6 horas)
d Ajustar la turbidez del inoacuteculo con solucioacuten salina o caldo apropiado hasta el
tubo 05 de la escala de Mc Farland por comparacioacuten visual con el estaacutendar Para
realizar este paso correctamente usar una luz apropiada y mirar los tubos contra
un fondo blanco con liacuteneas negras como contraste
e La suspensioacuten preparada contendraacute aproximadamente 1 a 2 x 108 UFCmL
Meacutetodo directo de inoculacioacuten a partir de colonias aisladas
a De una placa de cultivo con agar no selectivo e incubada por 18 - 24 h
seleccionar colonias aisladas y preparar una suspensioacutem directa en solucioacuten
salina oacute caldo
b La suspensioacuten debe ser inmediatamente ajustada a la escala 05 de Mc
Farland
Inoculacioacuten de las Placas
Dentro de los 15 minutos siguientes al ajuste de la turbidez del inoacuteculo sumergir
un hisopo esteacuteril en la suspensioacuten rotar el hisopo varias veces presionando
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firmemente sobre la pared interior del tubo por encima del nivel del liacutequido para
remover el exceso de inoacuteculo
Inocular la superficie seca de la placa de Mueller Hinton estriando con el hisopo
en tres direcciones para asegurar una distribucioacuten uniforme del inoacuteculo Antes de
colocar los discos dejar secar la placa a temperatura ambiente durante 3 a 5
minutos para que cualquier exceso de humedad superficial sea absorbido
APLICACIOacuteN DE LOS DISCOS
Colocar los discos individuales o multidiscos sobre la superficie del agar con la
ayuda de una pinza esteacuteril o la punta de una aguja presionando suavemente sobre
cada disco para asegurar un contacto completo con la superficie del agar
Distribuir los discos uniformemente de modo que esteacuten a una distancia miacutenima de
25 mm uno del otro (el diaacutemetro de los discos seguacuten las normas de la
Organizacioacuten Mundial de la Salud (OMS) debe ser de 6 mm) No deben colocarse
maacutes de 12 discos en una placa de 150 mm ni maacutes de 6 en una placa de 100 mm
de diaacutemetro interno para evitar la superposicioacuten de las zonas de inhibicioacuten Un
disco no debe ser removido una vez que tomoacute contacto con la superficie del agar
debido a que algunos antibioacuteticos se difunden raacutepidamente
INCUBACIOacuteN
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Incubar lar placas en posicioacuten invertida a 35degC por 18 a 24 horas dentro de los 15
minutos posteriores a la aplicacioacuten de los discos
Despueacutes del tiempo recomendado de incubacioacuten examinar cada placa y medir los
diaacutemetros de los halos de inhibicioacuten alrededor de cada disco
LECTURA DE LAS PLACAS E INTERPRETACIOacuteN DE LOS RESULTADOS
Medir los diaacutemetros de las zonas de inhibicioacuten completa (incluyendo el diaacutemetro
del disco) usando
una regla o calibrador Se debe mantener iluminada la parte posterior de la placa
petri con una luz reflejada localizada a unos cuantos centiacutemetros sobre un fondo
negro Tener la precaucioacuten de observar la placa siguiendo una vertical directa para
evitar una lectura erroacutenea de las marcas de la regla por efecto de paralelismo En
los medios suplementados con sangre las zonas son medidas en la parte superior
de la superficie del agar y retirando la tapa Tener cuidado de no medir la zona de
la hemoacutelisis sino la de inhibicioacuten del crecimiento
El punto final debe tomarse como el aacuterea que no muestra un crecimiento obvio
visible que puede ser detectado mediante observacioacuten visual no incluyendo velo
de crecimiento o colonias muy pequentildeas que puedan ser detectadas solo con
mucha dificultad en el borde de la zona Sin embargo las colonias mayores
creciendo dentro de la zona clara deberaacuten ser subcultivadas reidentificadas y
reensayadas Algunos Proteus spp debido a su gran movilidad pueden presentar
un velo de invasioacuten o ldquoswarmingrdquo dentro de las zonas de inhibicioacuten de algunos
antibioacuteticos En estos casos el velo del swarming debe ser ignorado al momento
de medir los halos de inhibicioacuten
DISCOS DE SENSIBILIDAD ANTIBIOacuteTICA A INCLUIR EN EL ANTIBIOGRAMA
Grupo I
Ampicilina
Cefalotina
Ampicilina Sulbactam o Amoxicilina Aacutecido Clavulaacutenico
Cefuroxima
Cefotaxima o Ceftriaxona
Gentamicina
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Amikacina
Aacutecido Nalidiacutexico(1)
Norfloxacina(1)
Ciprofloxacina
Cotrimoxazol (TrimetoprimSulfametoxazol)
Nitrofurantoiacutena(1)
Grupo II
Cefoxitina
Aztreonam
Ceftazidima
Cefixima
CefoperazonaSulbactam
Cefepime o Cefpirome
Imipenem o Meropenem
Cloramfenicol
Ofloxacina (1)
(1) Disco utilizado exclusivamente para infecciones de las viacuteas urinarias
Resistencias Naturales
Las enterobacterias son resistentes a Penicilina Oxacilina Macroacutelidos
Clindamicina y Glicopeacuteptidos
Klebsiella spp es resistente a las Aminopenicilinas
Citrobacter freundii Enterobacter cloacae y Enterobacter aerogenes son
resistentes a las Aminopenicilinas AminopenicilinasInhibidores de
betalactamasas Cefalosporinas de primera generacioacuten y Cefuroxima
Serratia marcescens es resistente a las Aminopenicilinas
AminopenicilinasInhibidores de betalactamasas Cefalosporinas de primera
generacioacuten y Cefoxitina
Proteus mirabilis es resistente a Nitrofurantoiacutena
Proteus vulgaris es resistente a las Aminopenicilinas Cefalosporinas de primera
generacioacuten Cefuroxima y Nitrofurantoiacutena
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Morganella morganii es resistente a las Aminopenicilinas
AminopenicilinasInhibidores de betalactamasas Cefalosporinas de primera
generacioacuten Cefuroxima y Nitrofurantoiacutena
Providentia stuartii es resistente a las Aminopenicilinas
AminopenicilinasInhibidores de betalactamasas Cefalosporinas de primera
generacioacuten Gentamicina (bajo nivel) y Nitrofurantoiacutena
ANTIBIOTICOS Y DIAMETROS CRITICOS PARA ENTEROBACTERIAS
E PRACTICA 7
EXAMEN QUIMICO DE CALCULO RENAL
EXAMEN FISICO
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Se debe pesar el caacutelculo y anotar el dato obtenido Medir dos de los diaacutemetros y
tomar nota del aspecto general textura y color y despueacutes de seccionado el
aspecto general la prominencia y el color de los distintos estratos
Se secciona el caacutelculo con una sierra Se raspan las caras con una aguja Se
procede lo mismo con el nuacutecleo Cada una de las muestras obtenidas se trituran
por separado en un mortero
PROCESO
Se coloca una porcioacuten del polvo del caacutelculo en un crisol y se calienta al fuego Si
no hay ennegrecimiento ni se altera el tamantildeo original el caacutelculo estaraacute formado
por sustancias inorgaacutenicas Si en cambio se carboniza desapareciendo estaraacute
formado por sustancias orgaacutenicas Si se funde y se ennegrece este caacutelculo estaacute
formado por sulfamidasa
Una vez obtenidos los datos pueden seleccionarse las reacciones necesarias
para confirmarlos
REACCIONES QUIMICAS
Solucioacuten A
10mg del polvo en matraz y antildeadir 50 ml de ClH 5 Observar si se
produce efervescencia Calentar en bantildeo de agua hirviendo por 10 a 15 minutos y
filtrar en caliente El filtrado se distribuye en 8 tubos numerados y se introduce un
trocito de papel tornasol en cada uno
Solucioacuten B
Agitar con Cl3CH unos 10 mg del polvo Reposar en tubo tapado a
temperatura ambiente hasta que el insoluble haya precipitado Decantar la
solucioacuten clorofoacutermica y guardar igual que el sedimento por separado
Carbonato efervescencia al agregar el CIH por desprendimiento de CO 2
Amonio al tubo 1 de la solucioacuten A se le agrega solucioacuten de OHNa 10 gota a
gota y agitando hasta que el papel tornasol vire
Agregar 1 ml de reactivo de Nessler Un color amarillo oscuro oporto indica
positividad de la reaccioacuten
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El NH 3 formado por los grupos NH 4 en medio alcalino reacciona con el yoiduro
doble del reactivo de Nesler para dar yoduro amoacutenico dimercuacuterico precipitado
pardo anaranjado
Acido uacuterico Neutralizar el contenido del tubo 2 como se explicoacute antes
Agregar igual volumen de CNN Na 2 y 05 ml de reactivo de Folin para aacutecido
uacuterico Un color azul intenso indica presencia de aacutecido uacuterico
El aacutecido uacuterico reduce al aacutecido fosfotuacutengstico en medio alcalino dando color azul
intenso de azul de tungsteno y a su vez se oxida a alantoiacutena
Reactivo fosfotuacutengstico (Folin y Denis) Antes del uso diluir al 10 en agua
destilada
Oxalato de calcio Neutralizar el contenido del tubo 3 Agregar CH 3 COOH 10
hasta reaccioacuten aacutecida al tornasol Precipitado blanco que no se redisuelve por
agitacioacuten indica presencia de oxalato de calcio
Calcio Neutralizar el tubo 4 Acidificar con CH 3 COOH glacial Agregar 2 ml C 2
O 4 ( NH 4 ) 4 Precipitado blancodenso indica presencia de Ca ++
Fosfato Neutralizar el tubo 5 Agregar 1 ml de solucioacuten de molibdato Mezclar
antildeadir 05 ml de aacutecido aminonaftol sulfoacutenico (ANS) 025 Coloracioacuten azul que
aparece en 5 minutos indica fosfatos
El color azul se debe a los oacutexidos reducidos de molibdeno
Reactivos
1 ClH concentrado2 Solucioacuten de OHK 203 NO 3 H concentrado4 Mo O 4 (NH 4 ) 2 disolver 25 g de la droga en 50 ml de SO 4 H 2 10 N y
diluir a 100 ml con H2 O destilada5 Amoniacuteaco
Reactivo ANS En matraz x 250 ml poner 05 g de aacutecido aminonaftolsulfoacutenico y
agrgar 195 ml de bisulfito de sodio 15 y 5 ml de sulfito de sodio 20 Mezclar
bien hasta disolucioacuten Si no se disuelve en media hora agregar maacutes sulfito y
agitar El reactivo dura unas 2 semanas
Laboratorio Cliacutenico PAULINA ARROLLO PEREacuteZ
Magnesio Neutralizar el tubo 7 con OHNH 4 y antildeadir 1 ml de solucioacuten alcohoacutelica
de p ndash Nitrobenceno azorresorcinol Un cromoacutegeno rojo indica presencia de
magnesio
En medio alcalino se forma (OH) 2 Mg El colorante azo resulta absorbido por el
(OH) 2 Mg en medio alcalino
Xantina A un tercio del residuo de la solucioacuten B agregarle gotas de NO 3 H
concentrado
Se disuelve el residuo sin desprender gas Evaporar a sequedad en bantildeo Mariacutea
hirviente quedando un residuo amarillo Dejar enfriar y humedecer con gotas de
OHNa 10 Una coloracioacuten anaranjada que vira al rojo oscuro al calentar indica
presencia de xantina
La reaccioacuten es la xantoproteica Migracioacuten de los anillos fenilo existentes en la
tirosina fenilalanina y triptoacutefano que da un color amarillo de los productos de
nitrosustitucioacuten para virar al anaranjado tras la adicioacuten de un aacutelcali ( formacioacuten de
la sal)
Nota El reactivo de molibdato se puede preparar asiacute
Solucioacuten 1 SO 4 H 2 01 N
Medir 450 ml de SO4 H 2 concentrado y agregarlos a 1300 ml de agua
destilada
Solucioacuten 2
A 250 ml de SO 4 H 2 01 N antildeadir la solucioacuten de molibdato y llevar con
agua destilada a 250 ml Mezclar
Sulfamidas Neutralizar el uacuteltimo tubo Antildeadir 1 ml de NO 2 Na 05 preparado
recientemente Agitar y reposar por 3 minutos Antildeadir 5 ml de solucioacuten alcohoacutelica
de dimetil-alfa naftilamina 025 Un color rojizo indica presencia de sulfamidas
Finalmente procede hacer mencioacuten de ciertos procedimientos fiacutesicos como la
microscopia de polarizacioacuten difraccioacuten de rayos X cristalografiacutea
espectrofotometriacutea de rayos infrarrojos etc que permiten actualmente un
conocimiento maacutes confiable de la estructura de los caacutelculos
- Reactivos
-
Laboratorio Cliacutenico PAULINA ARROLLO PEREacuteZ
Lectura
a) Realizar la evaluacioacuten a las 24 horas si no hay crecimiento bacteriano dejar
incubar hasta las 48 horas
b) La evaluacioacuten consiste en realizar el recuento de colonias cuyo resultado se
multiplica por el factor de dilucioacuten para obtener las UFC por mL
Interpretacioacuten
a) En pacientes sin sonda vesical la cuenta significativa de bacterias en orina es
la presencia de maacutes de 105 UFC mL de un solo germen
b) Los recuentos intermedios (103 ndash 104 UFCmL) indican infeccioacuten si el
procedimiento de recoleccioacuten de orina fue realizado correctamente
c) Generalmente el aislamiento de tres o maacutes especies bacterianas indican que la
muestra se ha contaminado por recoleccioacuten inadecuada o demora en la siembra
d) En pacientes con sonda vesical cuentas bacterianas menores de 105 UFCmL
pueden tener significado asiacute tambieacuten se pueden encontrar bacteriurias
polimicrobianas hasta en casi 15 de enfermos
Laboratorio Cliacutenico PAULINA ARROLLO PEREacuteZ
e) En pacientes sin cateacuteter se puede comprobar si el procedimiento de obtencioacuten
de muestra fue realizado correctamente observando la frecuencia con la cual se
informan recuentos de colonias intermedias entre 103 ndash 104 UFCmL En
pacientes sin infecciones del tracto urinario el recuento es nulo o se reduce a
pocas colonias
IDENTIFICACION BACTERIANA
Lectura de cultivos en agar Mac Conkey
ndash En agar Mc Conkey Escherichia coli lactosa positiva forma colonias de borde
entero de color fucsia opacas de 2 mm ndash 3 mm de diaacutemetro usualmente
rodeadas de una zona opaca alrededor de la colonia (bilis precipitada) Las cepas
de E coli que son lactosa negativa dan colonias incoloras de 3 ndash 4 mm
ndash En agar Mc Conkey K pneumoniae forma colonias de borde entero de color
rosado a rosado oscuro de 3 ndash 4 mm de diaacutemetro y aspecto mucoide
ndash En agar Mc Conkey Enterobacter spp forma colonias de borde entero de color
rosado de 2 ndash 4 mm de diaacutemetro no tan mucoides como K pneumoniae
Las colonias con estas caracteriacutesticas son subcultivadas en medios diferenciales
PRUEBAS BIOQUIMICAS
TSI
Lectura
Es importante hacer la lectura entre las 18 ndash 24 horas para no obtener resultados
erroacuteneos La lectura se hace sobre la base de tres caracteriacutesticas Utilizacioacuten de
hidratos de carbono produccioacuten de gas y produccioacuten de aacutecido sulfhiacutedrico
Utilizacioacuten de hidratos de carbono
ndash Utilizacioacuten de lactosa Reaccioacuten aacutecida en el pico de flauta (color amarillo)
Abreviatura (A)
ndash Utilizacioacuten de glucosa Reaccioacuten aacutecida en la columna del medio (color amarillo)
Abreviatura (A)
Laboratorio Cliacutenico PAULINA ARROLLO PEREacuteZ
ndash No hay utilizacioacuten del carbohidrato Se puede observar una reaccioacuten alcalina
(color rojo) o que no hay cambio de color (permanece del mismo color que el
medio no inoculado) Abreviaturas (K) o (N) respectivamente
Nota Cuando el microorganismo tambieacuten produce H2S el precipitado negro
puede ocultar la acidez
Produccioacuten de gas de glucosa
ndash Se considera positivo Presencia de una sola burbuja de gas burbujas en el
medio divisioacuten del medio desplazamiento completo del medio del fondo del tubo
dejando un aacuterea clara o una ligera muesca del medio en el costado del tubo
ndash Se registra la lectura por medio de cruces (+)
Produccioacuten de aacutecido sulfhiacutedrico
ndash Se manifiesta por un color negro distribuido por toda la columna del medio de
cultivo o soacutelo en la parte superior
ndash Se registra la lectura por medio de cruces (+)
Resultados
Ejemplo de simbolizacioacuten e interpretacioacuten
KA ndash+ Significa alcalinidad en la inclinacioacuten y acidez en el fondo (fermentacioacuten de
glucosa) gas negativo y H2S positivo
NN ndash ndashSignifica que no hay utilizacioacuten de la lactosa y glucosa ni produccioacuten de
H2S
AGAR LISINA HIERRO
En este medio se determina simultaacuteneamente la produccioacuten de lisina
descarboxilasa y de la formacioacuten de aacutecido sulfhiacutedrico
Lectura
Es importante hacer la lectura entre las 18 ndash 24 horas si la lectura se realiza antes
podemos obtener resultados falsos positivos asiacute como falsos negativos si se lee
despueacutes de las 24 horas Realizar la lectura en la columna y en la superficie
inclinada y observar la formacioacuten de aacutecido sulfhiacutedrico el cual se evidencia por una
coloracioacuten negra
Nota Generalmente las cepas del grupo Proteus y Providencia desaminan la
lisina a aacutecido ndashcetocarboacutenico Este uacuteltimo forma compuestos pardo-rojizos en la
Laboratorio Cliacutenico PAULINA ARROLLO PEREacuteZ
regioacuten superficial del medio de cultivo con la sal de hierro y bajo la influencia del
oxiacutegeno
Recomendaciones
No incubar maacutes del tiempo necesario para no ocasionar una alcalinizacioacuten en la
superficie del medio y por lo tanto producir un viraje hacia el violeta
UTILIZACIOacuteN DE CITRATO
Para determinar si un microorganismo es capaz de utilizar citrato como uacutenica
fuente de carbono para su metabolismo
Procedimiento
a) Incubar a 35ndash37 degC de 24 horasndash 48 horas En algunos casos es necesario una
incubacioacuten hasta por 4 diacuteas
b) Ver el viraje de color
Resultados
a) Prueba positiva Crecimiento con un color azul intenso en el pico de flauta o
presencia de colonias en ausencia del color azul
b) Prueba negativa No se observa crecimiento ni cambio de color (verde)
Controles
Positivo Enterobacter cloacae
Negativo Escherichia coli
HIDROacuteLISIS DE LA UREA (PRODUCCIOacuteN DE UREASA)
Es uacutetil para determinar la capacidad de un organismo de degradar la urea
formando dos moleacuteculas de amoniaco por accioacuten de la enzima ureasa
Procedimiento
Realizar la lectura despueacutes de 18 horas ndash 24 horas de incubacioacuten observando el
viraje de color
Resultados
Prueba positiva Color rosado intenso en el pico de flauta o todo el agar
Puede haber una reaccioacuten positiva retardada despueacutes de 24 horas y hasta
6 diacuteas de incubacioacuten (algunas cepas de Klebsiella por ejemplo)
Prueba negativa No se produce cambio de color
Controles
Laboratorio Cliacutenico PAULINA ARROLLO PEREacuteZ
Negativo Escherichia coli
Positivo Klebsiella pneumoniae
MOTILIDAD (MEDIOS SIM O MIO O AGAR MOVILIDAD)
Para determinar si un organismo es moacutevil o inmoacutevil
Procedimiento
Incubar a 35 ndash 37 degC de 24 a 48 horas
Resultados
Positivo Los microorganismos migran de la liacutenea de siembra y se difunden en el
medio provocando turbidez Tambieacuten puede manifestarse semejando
ldquovellosidadesrdquo a lo largo del trazo de siembra
Negativo Se observa un crecimiento bacteriano acentuado siguiendo el trazo de
siembra y el medio circundante se mantiene claro
Controles
Control positivo Escherichia coli
Control negativo Klebsiella pneumoniae
h) Prueba de indol[6]
Es uacutetil para determinar la capacidad de un microorganismo de producir indol a
partir del aminoaacutecido triptoacutefano
Medios y reactivos
Caldo de triptoacutefano o de peptona o caldo de triptona
Reactivo de indol de Kovacs
Procedimiento
Retirar aseacutepticamente 2 mL de caldo de cutivo con 24 horas de incubacioacuten
Agregar 5 gotas de reactivo de Kovacs
Mover suavemente el tubo y realizar la lectura
Laboratorio Cliacutenico PAULINA ARROLLO PEREacuteZ
Laboratorio Cliacutenico PAULINA ARROLLO PEREacuteZ
Laboratorio Cliacutenico PAULINA ARROLLO PEREacuteZ
ANTIBIOGRAMA
Preparacioacuten del Agar Mueller Hinton
Preparar el medio a partir de la base deshidratada de acuerdo a las
indicaciones del fabricante
Autoclavar y dejar enfriar en bantildeo de agua hasta que alcance los 45degC - 50degC
Repartir el medio en placas petri (60 ml ndash 70 ml o 25 ml ndash 30 ml para placas de
150 mm o 100 mm de diaacutemetro interno respectivamente) de manera que el
grosor del agar en la placa sea de 4 mm
Realizar las pruebas de esterilidad para cada lote de Mueller Hinton incubando
una o dos placas de cada lote a 30degC ndash 35degC durante 24 horas o maacutes Estas
placas utilizadas deben ser luego descartadas
Preparacioacuten del estaacutendar (05 Mc Farland) para el inoacuteculo
Para estandarizar la densidad del inoacuteculo se usa una suspensioacuten de sulfato de
bario (05 de la escala de Mac Farland) como estaacutendar
Preparacioacuten del estaacutendar de turbidez
a Agregar 05 ml de una solucioacuten de BaCl2 0048 M (BaCl22H2O al 1175 PV)
a 995 mL de una solucioacuten de H2SO4 018 M (036 N) (1 VV) en constante
movimiento para mantener la suspensioacuten
b Verificar la densidad correcta del estaacutendar usando un fotocoloriacutemetro oacute
espectrofotoacutemetro cuya absorbancia a 625 nm es 008 a 010 para el estaacutendar 05
de Mc Farland
c Distribuir de 4 ml a 6 ml en tubos con tapa de rosca o tapoacuten de jebe similares a
los que se usaraacuten para preparar el inoacuteculo
Laboratorio Cliacutenico PAULINA ARROLLO PEREacuteZ
d Ajustar bien las tapas o tapones y conservarlos en la oscuridad a temperatura
ambiente y anotar la fecha de preparacioacuten
e Antes de ser usado agitar vigorosamente dicho estaacutendar de preferencia en un
agitador mecaacutenico
f Verificar mensualmente la densidad de los estaacutendares de sulfato de bario y
reemplazarlo cuando sea necesario
INOCULACIOacuteN
Preparacioacuten del inoacuteculo
Puede realizarse de dos formas
Meacutetodo de desarrollo previo
a Seleccionar cuatro a cinco colonias bien aisladas del mismo tipo morfoloacutegico
de un cultivo en placa
b Tocar la superficie de cada colonia con una asa de siembra y transferirlo a un
tubo que contiene de 4 a 5 mL de caldo apropiado (Ej Caldo Tripticasa soya)
c Incubar el caldo a una temperatura entre 35degC a 37degC hasta que alcance o
exceda la turbidez del estaacutendar 05 de la escala de Mc Farland (por lo general de
2 a 6 horas)
d Ajustar la turbidez del inoacuteculo con solucioacuten salina o caldo apropiado hasta el
tubo 05 de la escala de Mc Farland por comparacioacuten visual con el estaacutendar Para
realizar este paso correctamente usar una luz apropiada y mirar los tubos contra
un fondo blanco con liacuteneas negras como contraste
e La suspensioacuten preparada contendraacute aproximadamente 1 a 2 x 108 UFCmL
Meacutetodo directo de inoculacioacuten a partir de colonias aisladas
a De una placa de cultivo con agar no selectivo e incubada por 18 - 24 h
seleccionar colonias aisladas y preparar una suspensioacutem directa en solucioacuten
salina oacute caldo
b La suspensioacuten debe ser inmediatamente ajustada a la escala 05 de Mc
Farland
Inoculacioacuten de las Placas
Dentro de los 15 minutos siguientes al ajuste de la turbidez del inoacuteculo sumergir
un hisopo esteacuteril en la suspensioacuten rotar el hisopo varias veces presionando
Laboratorio Cliacutenico PAULINA ARROLLO PEREacuteZ
firmemente sobre la pared interior del tubo por encima del nivel del liacutequido para
remover el exceso de inoacuteculo
Inocular la superficie seca de la placa de Mueller Hinton estriando con el hisopo
en tres direcciones para asegurar una distribucioacuten uniforme del inoacuteculo Antes de
colocar los discos dejar secar la placa a temperatura ambiente durante 3 a 5
minutos para que cualquier exceso de humedad superficial sea absorbido
APLICACIOacuteN DE LOS DISCOS
Colocar los discos individuales o multidiscos sobre la superficie del agar con la
ayuda de una pinza esteacuteril o la punta de una aguja presionando suavemente sobre
cada disco para asegurar un contacto completo con la superficie del agar
Distribuir los discos uniformemente de modo que esteacuten a una distancia miacutenima de
25 mm uno del otro (el diaacutemetro de los discos seguacuten las normas de la
Organizacioacuten Mundial de la Salud (OMS) debe ser de 6 mm) No deben colocarse
maacutes de 12 discos en una placa de 150 mm ni maacutes de 6 en una placa de 100 mm
de diaacutemetro interno para evitar la superposicioacuten de las zonas de inhibicioacuten Un
disco no debe ser removido una vez que tomoacute contacto con la superficie del agar
debido a que algunos antibioacuteticos se difunden raacutepidamente
INCUBACIOacuteN
Laboratorio Cliacutenico PAULINA ARROLLO PEREacuteZ
Incubar lar placas en posicioacuten invertida a 35degC por 18 a 24 horas dentro de los 15
minutos posteriores a la aplicacioacuten de los discos
Despueacutes del tiempo recomendado de incubacioacuten examinar cada placa y medir los
diaacutemetros de los halos de inhibicioacuten alrededor de cada disco
LECTURA DE LAS PLACAS E INTERPRETACIOacuteN DE LOS RESULTADOS
Medir los diaacutemetros de las zonas de inhibicioacuten completa (incluyendo el diaacutemetro
del disco) usando
una regla o calibrador Se debe mantener iluminada la parte posterior de la placa
petri con una luz reflejada localizada a unos cuantos centiacutemetros sobre un fondo
negro Tener la precaucioacuten de observar la placa siguiendo una vertical directa para
evitar una lectura erroacutenea de las marcas de la regla por efecto de paralelismo En
los medios suplementados con sangre las zonas son medidas en la parte superior
de la superficie del agar y retirando la tapa Tener cuidado de no medir la zona de
la hemoacutelisis sino la de inhibicioacuten del crecimiento
El punto final debe tomarse como el aacuterea que no muestra un crecimiento obvio
visible que puede ser detectado mediante observacioacuten visual no incluyendo velo
de crecimiento o colonias muy pequentildeas que puedan ser detectadas solo con
mucha dificultad en el borde de la zona Sin embargo las colonias mayores
creciendo dentro de la zona clara deberaacuten ser subcultivadas reidentificadas y
reensayadas Algunos Proteus spp debido a su gran movilidad pueden presentar
un velo de invasioacuten o ldquoswarmingrdquo dentro de las zonas de inhibicioacuten de algunos
antibioacuteticos En estos casos el velo del swarming debe ser ignorado al momento
de medir los halos de inhibicioacuten
DISCOS DE SENSIBILIDAD ANTIBIOacuteTICA A INCLUIR EN EL ANTIBIOGRAMA
Grupo I
Ampicilina
Cefalotina
Ampicilina Sulbactam o Amoxicilina Aacutecido Clavulaacutenico
Cefuroxima
Cefotaxima o Ceftriaxona
Gentamicina
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Amikacina
Aacutecido Nalidiacutexico(1)
Norfloxacina(1)
Ciprofloxacina
Cotrimoxazol (TrimetoprimSulfametoxazol)
Nitrofurantoiacutena(1)
Grupo II
Cefoxitina
Aztreonam
Ceftazidima
Cefixima
CefoperazonaSulbactam
Cefepime o Cefpirome
Imipenem o Meropenem
Cloramfenicol
Ofloxacina (1)
(1) Disco utilizado exclusivamente para infecciones de las viacuteas urinarias
Resistencias Naturales
Las enterobacterias son resistentes a Penicilina Oxacilina Macroacutelidos
Clindamicina y Glicopeacuteptidos
Klebsiella spp es resistente a las Aminopenicilinas
Citrobacter freundii Enterobacter cloacae y Enterobacter aerogenes son
resistentes a las Aminopenicilinas AminopenicilinasInhibidores de
betalactamasas Cefalosporinas de primera generacioacuten y Cefuroxima
Serratia marcescens es resistente a las Aminopenicilinas
AminopenicilinasInhibidores de betalactamasas Cefalosporinas de primera
generacioacuten y Cefoxitina
Proteus mirabilis es resistente a Nitrofurantoiacutena
Proteus vulgaris es resistente a las Aminopenicilinas Cefalosporinas de primera
generacioacuten Cefuroxima y Nitrofurantoiacutena
Laboratorio Cliacutenico PAULINA ARROLLO PEREacuteZ
Morganella morganii es resistente a las Aminopenicilinas
AminopenicilinasInhibidores de betalactamasas Cefalosporinas de primera
generacioacuten Cefuroxima y Nitrofurantoiacutena
Providentia stuartii es resistente a las Aminopenicilinas
AminopenicilinasInhibidores de betalactamasas Cefalosporinas de primera
generacioacuten Gentamicina (bajo nivel) y Nitrofurantoiacutena
ANTIBIOTICOS Y DIAMETROS CRITICOS PARA ENTEROBACTERIAS
E PRACTICA 7
EXAMEN QUIMICO DE CALCULO RENAL
EXAMEN FISICO
Laboratorio Cliacutenico PAULINA ARROLLO PEREacuteZ
Se debe pesar el caacutelculo y anotar el dato obtenido Medir dos de los diaacutemetros y
tomar nota del aspecto general textura y color y despueacutes de seccionado el
aspecto general la prominencia y el color de los distintos estratos
Se secciona el caacutelculo con una sierra Se raspan las caras con una aguja Se
procede lo mismo con el nuacutecleo Cada una de las muestras obtenidas se trituran
por separado en un mortero
PROCESO
Se coloca una porcioacuten del polvo del caacutelculo en un crisol y se calienta al fuego Si
no hay ennegrecimiento ni se altera el tamantildeo original el caacutelculo estaraacute formado
por sustancias inorgaacutenicas Si en cambio se carboniza desapareciendo estaraacute
formado por sustancias orgaacutenicas Si se funde y se ennegrece este caacutelculo estaacute
formado por sulfamidasa
Una vez obtenidos los datos pueden seleccionarse las reacciones necesarias
para confirmarlos
REACCIONES QUIMICAS
Solucioacuten A
10mg del polvo en matraz y antildeadir 50 ml de ClH 5 Observar si se
produce efervescencia Calentar en bantildeo de agua hirviendo por 10 a 15 minutos y
filtrar en caliente El filtrado se distribuye en 8 tubos numerados y se introduce un
trocito de papel tornasol en cada uno
Solucioacuten B
Agitar con Cl3CH unos 10 mg del polvo Reposar en tubo tapado a
temperatura ambiente hasta que el insoluble haya precipitado Decantar la
solucioacuten clorofoacutermica y guardar igual que el sedimento por separado
Carbonato efervescencia al agregar el CIH por desprendimiento de CO 2
Amonio al tubo 1 de la solucioacuten A se le agrega solucioacuten de OHNa 10 gota a
gota y agitando hasta que el papel tornasol vire
Agregar 1 ml de reactivo de Nessler Un color amarillo oscuro oporto indica
positividad de la reaccioacuten
Laboratorio Cliacutenico PAULINA ARROLLO PEREacuteZ
El NH 3 formado por los grupos NH 4 en medio alcalino reacciona con el yoiduro
doble del reactivo de Nesler para dar yoduro amoacutenico dimercuacuterico precipitado
pardo anaranjado
Acido uacuterico Neutralizar el contenido del tubo 2 como se explicoacute antes
Agregar igual volumen de CNN Na 2 y 05 ml de reactivo de Folin para aacutecido
uacuterico Un color azul intenso indica presencia de aacutecido uacuterico
El aacutecido uacuterico reduce al aacutecido fosfotuacutengstico en medio alcalino dando color azul
intenso de azul de tungsteno y a su vez se oxida a alantoiacutena
Reactivo fosfotuacutengstico (Folin y Denis) Antes del uso diluir al 10 en agua
destilada
Oxalato de calcio Neutralizar el contenido del tubo 3 Agregar CH 3 COOH 10
hasta reaccioacuten aacutecida al tornasol Precipitado blanco que no se redisuelve por
agitacioacuten indica presencia de oxalato de calcio
Calcio Neutralizar el tubo 4 Acidificar con CH 3 COOH glacial Agregar 2 ml C 2
O 4 ( NH 4 ) 4 Precipitado blancodenso indica presencia de Ca ++
Fosfato Neutralizar el tubo 5 Agregar 1 ml de solucioacuten de molibdato Mezclar
antildeadir 05 ml de aacutecido aminonaftol sulfoacutenico (ANS) 025 Coloracioacuten azul que
aparece en 5 minutos indica fosfatos
El color azul se debe a los oacutexidos reducidos de molibdeno
Reactivos
1 ClH concentrado2 Solucioacuten de OHK 203 NO 3 H concentrado4 Mo O 4 (NH 4 ) 2 disolver 25 g de la droga en 50 ml de SO 4 H 2 10 N y
diluir a 100 ml con H2 O destilada5 Amoniacuteaco
Reactivo ANS En matraz x 250 ml poner 05 g de aacutecido aminonaftolsulfoacutenico y
agrgar 195 ml de bisulfito de sodio 15 y 5 ml de sulfito de sodio 20 Mezclar
bien hasta disolucioacuten Si no se disuelve en media hora agregar maacutes sulfito y
agitar El reactivo dura unas 2 semanas
Laboratorio Cliacutenico PAULINA ARROLLO PEREacuteZ
Magnesio Neutralizar el tubo 7 con OHNH 4 y antildeadir 1 ml de solucioacuten alcohoacutelica
de p ndash Nitrobenceno azorresorcinol Un cromoacutegeno rojo indica presencia de
magnesio
En medio alcalino se forma (OH) 2 Mg El colorante azo resulta absorbido por el
(OH) 2 Mg en medio alcalino
Xantina A un tercio del residuo de la solucioacuten B agregarle gotas de NO 3 H
concentrado
Se disuelve el residuo sin desprender gas Evaporar a sequedad en bantildeo Mariacutea
hirviente quedando un residuo amarillo Dejar enfriar y humedecer con gotas de
OHNa 10 Una coloracioacuten anaranjada que vira al rojo oscuro al calentar indica
presencia de xantina
La reaccioacuten es la xantoproteica Migracioacuten de los anillos fenilo existentes en la
tirosina fenilalanina y triptoacutefano que da un color amarillo de los productos de
nitrosustitucioacuten para virar al anaranjado tras la adicioacuten de un aacutelcali ( formacioacuten de
la sal)
Nota El reactivo de molibdato se puede preparar asiacute
Solucioacuten 1 SO 4 H 2 01 N
Medir 450 ml de SO4 H 2 concentrado y agregarlos a 1300 ml de agua
destilada
Solucioacuten 2
A 250 ml de SO 4 H 2 01 N antildeadir la solucioacuten de molibdato y llevar con
agua destilada a 250 ml Mezclar
Sulfamidas Neutralizar el uacuteltimo tubo Antildeadir 1 ml de NO 2 Na 05 preparado
recientemente Agitar y reposar por 3 minutos Antildeadir 5 ml de solucioacuten alcohoacutelica
de dimetil-alfa naftilamina 025 Un color rojizo indica presencia de sulfamidas
Finalmente procede hacer mencioacuten de ciertos procedimientos fiacutesicos como la
microscopia de polarizacioacuten difraccioacuten de rayos X cristalografiacutea
espectrofotometriacutea de rayos infrarrojos etc que permiten actualmente un
conocimiento maacutes confiable de la estructura de los caacutelculos
- Reactivos
-
Laboratorio Cliacutenico PAULINA ARROLLO PEREacuteZ
e) En pacientes sin cateacuteter se puede comprobar si el procedimiento de obtencioacuten
de muestra fue realizado correctamente observando la frecuencia con la cual se
informan recuentos de colonias intermedias entre 103 ndash 104 UFCmL En
pacientes sin infecciones del tracto urinario el recuento es nulo o se reduce a
pocas colonias
IDENTIFICACION BACTERIANA
Lectura de cultivos en agar Mac Conkey
ndash En agar Mc Conkey Escherichia coli lactosa positiva forma colonias de borde
entero de color fucsia opacas de 2 mm ndash 3 mm de diaacutemetro usualmente
rodeadas de una zona opaca alrededor de la colonia (bilis precipitada) Las cepas
de E coli que son lactosa negativa dan colonias incoloras de 3 ndash 4 mm
ndash En agar Mc Conkey K pneumoniae forma colonias de borde entero de color
rosado a rosado oscuro de 3 ndash 4 mm de diaacutemetro y aspecto mucoide
ndash En agar Mc Conkey Enterobacter spp forma colonias de borde entero de color
rosado de 2 ndash 4 mm de diaacutemetro no tan mucoides como K pneumoniae
Las colonias con estas caracteriacutesticas son subcultivadas en medios diferenciales
PRUEBAS BIOQUIMICAS
TSI
Lectura
Es importante hacer la lectura entre las 18 ndash 24 horas para no obtener resultados
erroacuteneos La lectura se hace sobre la base de tres caracteriacutesticas Utilizacioacuten de
hidratos de carbono produccioacuten de gas y produccioacuten de aacutecido sulfhiacutedrico
Utilizacioacuten de hidratos de carbono
ndash Utilizacioacuten de lactosa Reaccioacuten aacutecida en el pico de flauta (color amarillo)
Abreviatura (A)
ndash Utilizacioacuten de glucosa Reaccioacuten aacutecida en la columna del medio (color amarillo)
Abreviatura (A)
Laboratorio Cliacutenico PAULINA ARROLLO PEREacuteZ
ndash No hay utilizacioacuten del carbohidrato Se puede observar una reaccioacuten alcalina
(color rojo) o que no hay cambio de color (permanece del mismo color que el
medio no inoculado) Abreviaturas (K) o (N) respectivamente
Nota Cuando el microorganismo tambieacuten produce H2S el precipitado negro
puede ocultar la acidez
Produccioacuten de gas de glucosa
ndash Se considera positivo Presencia de una sola burbuja de gas burbujas en el
medio divisioacuten del medio desplazamiento completo del medio del fondo del tubo
dejando un aacuterea clara o una ligera muesca del medio en el costado del tubo
ndash Se registra la lectura por medio de cruces (+)
Produccioacuten de aacutecido sulfhiacutedrico
ndash Se manifiesta por un color negro distribuido por toda la columna del medio de
cultivo o soacutelo en la parte superior
ndash Se registra la lectura por medio de cruces (+)
Resultados
Ejemplo de simbolizacioacuten e interpretacioacuten
KA ndash+ Significa alcalinidad en la inclinacioacuten y acidez en el fondo (fermentacioacuten de
glucosa) gas negativo y H2S positivo
NN ndash ndashSignifica que no hay utilizacioacuten de la lactosa y glucosa ni produccioacuten de
H2S
AGAR LISINA HIERRO
En este medio se determina simultaacuteneamente la produccioacuten de lisina
descarboxilasa y de la formacioacuten de aacutecido sulfhiacutedrico
Lectura
Es importante hacer la lectura entre las 18 ndash 24 horas si la lectura se realiza antes
podemos obtener resultados falsos positivos asiacute como falsos negativos si se lee
despueacutes de las 24 horas Realizar la lectura en la columna y en la superficie
inclinada y observar la formacioacuten de aacutecido sulfhiacutedrico el cual se evidencia por una
coloracioacuten negra
Nota Generalmente las cepas del grupo Proteus y Providencia desaminan la
lisina a aacutecido ndashcetocarboacutenico Este uacuteltimo forma compuestos pardo-rojizos en la
Laboratorio Cliacutenico PAULINA ARROLLO PEREacuteZ
regioacuten superficial del medio de cultivo con la sal de hierro y bajo la influencia del
oxiacutegeno
Recomendaciones
No incubar maacutes del tiempo necesario para no ocasionar una alcalinizacioacuten en la
superficie del medio y por lo tanto producir un viraje hacia el violeta
UTILIZACIOacuteN DE CITRATO
Para determinar si un microorganismo es capaz de utilizar citrato como uacutenica
fuente de carbono para su metabolismo
Procedimiento
a) Incubar a 35ndash37 degC de 24 horasndash 48 horas En algunos casos es necesario una
incubacioacuten hasta por 4 diacuteas
b) Ver el viraje de color
Resultados
a) Prueba positiva Crecimiento con un color azul intenso en el pico de flauta o
presencia de colonias en ausencia del color azul
b) Prueba negativa No se observa crecimiento ni cambio de color (verde)
Controles
Positivo Enterobacter cloacae
Negativo Escherichia coli
HIDROacuteLISIS DE LA UREA (PRODUCCIOacuteN DE UREASA)
Es uacutetil para determinar la capacidad de un organismo de degradar la urea
formando dos moleacuteculas de amoniaco por accioacuten de la enzima ureasa
Procedimiento
Realizar la lectura despueacutes de 18 horas ndash 24 horas de incubacioacuten observando el
viraje de color
Resultados
Prueba positiva Color rosado intenso en el pico de flauta o todo el agar
Puede haber una reaccioacuten positiva retardada despueacutes de 24 horas y hasta
6 diacuteas de incubacioacuten (algunas cepas de Klebsiella por ejemplo)
Prueba negativa No se produce cambio de color
Controles
Laboratorio Cliacutenico PAULINA ARROLLO PEREacuteZ
Negativo Escherichia coli
Positivo Klebsiella pneumoniae
MOTILIDAD (MEDIOS SIM O MIO O AGAR MOVILIDAD)
Para determinar si un organismo es moacutevil o inmoacutevil
Procedimiento
Incubar a 35 ndash 37 degC de 24 a 48 horas
Resultados
Positivo Los microorganismos migran de la liacutenea de siembra y se difunden en el
medio provocando turbidez Tambieacuten puede manifestarse semejando
ldquovellosidadesrdquo a lo largo del trazo de siembra
Negativo Se observa un crecimiento bacteriano acentuado siguiendo el trazo de
siembra y el medio circundante se mantiene claro
Controles
Control positivo Escherichia coli
Control negativo Klebsiella pneumoniae
h) Prueba de indol[6]
Es uacutetil para determinar la capacidad de un microorganismo de producir indol a
partir del aminoaacutecido triptoacutefano
Medios y reactivos
Caldo de triptoacutefano o de peptona o caldo de triptona
Reactivo de indol de Kovacs
Procedimiento
Retirar aseacutepticamente 2 mL de caldo de cutivo con 24 horas de incubacioacuten
Agregar 5 gotas de reactivo de Kovacs
Mover suavemente el tubo y realizar la lectura
Laboratorio Cliacutenico PAULINA ARROLLO PEREacuteZ
Laboratorio Cliacutenico PAULINA ARROLLO PEREacuteZ
Laboratorio Cliacutenico PAULINA ARROLLO PEREacuteZ
ANTIBIOGRAMA
Preparacioacuten del Agar Mueller Hinton
Preparar el medio a partir de la base deshidratada de acuerdo a las
indicaciones del fabricante
Autoclavar y dejar enfriar en bantildeo de agua hasta que alcance los 45degC - 50degC
Repartir el medio en placas petri (60 ml ndash 70 ml o 25 ml ndash 30 ml para placas de
150 mm o 100 mm de diaacutemetro interno respectivamente) de manera que el
grosor del agar en la placa sea de 4 mm
Realizar las pruebas de esterilidad para cada lote de Mueller Hinton incubando
una o dos placas de cada lote a 30degC ndash 35degC durante 24 horas o maacutes Estas
placas utilizadas deben ser luego descartadas
Preparacioacuten del estaacutendar (05 Mc Farland) para el inoacuteculo
Para estandarizar la densidad del inoacuteculo se usa una suspensioacuten de sulfato de
bario (05 de la escala de Mac Farland) como estaacutendar
Preparacioacuten del estaacutendar de turbidez
a Agregar 05 ml de una solucioacuten de BaCl2 0048 M (BaCl22H2O al 1175 PV)
a 995 mL de una solucioacuten de H2SO4 018 M (036 N) (1 VV) en constante
movimiento para mantener la suspensioacuten
b Verificar la densidad correcta del estaacutendar usando un fotocoloriacutemetro oacute
espectrofotoacutemetro cuya absorbancia a 625 nm es 008 a 010 para el estaacutendar 05
de Mc Farland
c Distribuir de 4 ml a 6 ml en tubos con tapa de rosca o tapoacuten de jebe similares a
los que se usaraacuten para preparar el inoacuteculo
Laboratorio Cliacutenico PAULINA ARROLLO PEREacuteZ
d Ajustar bien las tapas o tapones y conservarlos en la oscuridad a temperatura
ambiente y anotar la fecha de preparacioacuten
e Antes de ser usado agitar vigorosamente dicho estaacutendar de preferencia en un
agitador mecaacutenico
f Verificar mensualmente la densidad de los estaacutendares de sulfato de bario y
reemplazarlo cuando sea necesario
INOCULACIOacuteN
Preparacioacuten del inoacuteculo
Puede realizarse de dos formas
Meacutetodo de desarrollo previo
a Seleccionar cuatro a cinco colonias bien aisladas del mismo tipo morfoloacutegico
de un cultivo en placa
b Tocar la superficie de cada colonia con una asa de siembra y transferirlo a un
tubo que contiene de 4 a 5 mL de caldo apropiado (Ej Caldo Tripticasa soya)
c Incubar el caldo a una temperatura entre 35degC a 37degC hasta que alcance o
exceda la turbidez del estaacutendar 05 de la escala de Mc Farland (por lo general de
2 a 6 horas)
d Ajustar la turbidez del inoacuteculo con solucioacuten salina o caldo apropiado hasta el
tubo 05 de la escala de Mc Farland por comparacioacuten visual con el estaacutendar Para
realizar este paso correctamente usar una luz apropiada y mirar los tubos contra
un fondo blanco con liacuteneas negras como contraste
e La suspensioacuten preparada contendraacute aproximadamente 1 a 2 x 108 UFCmL
Meacutetodo directo de inoculacioacuten a partir de colonias aisladas
a De una placa de cultivo con agar no selectivo e incubada por 18 - 24 h
seleccionar colonias aisladas y preparar una suspensioacutem directa en solucioacuten
salina oacute caldo
b La suspensioacuten debe ser inmediatamente ajustada a la escala 05 de Mc
Farland
Inoculacioacuten de las Placas
Dentro de los 15 minutos siguientes al ajuste de la turbidez del inoacuteculo sumergir
un hisopo esteacuteril en la suspensioacuten rotar el hisopo varias veces presionando
Laboratorio Cliacutenico PAULINA ARROLLO PEREacuteZ
firmemente sobre la pared interior del tubo por encima del nivel del liacutequido para
remover el exceso de inoacuteculo
Inocular la superficie seca de la placa de Mueller Hinton estriando con el hisopo
en tres direcciones para asegurar una distribucioacuten uniforme del inoacuteculo Antes de
colocar los discos dejar secar la placa a temperatura ambiente durante 3 a 5
minutos para que cualquier exceso de humedad superficial sea absorbido
APLICACIOacuteN DE LOS DISCOS
Colocar los discos individuales o multidiscos sobre la superficie del agar con la
ayuda de una pinza esteacuteril o la punta de una aguja presionando suavemente sobre
cada disco para asegurar un contacto completo con la superficie del agar
Distribuir los discos uniformemente de modo que esteacuten a una distancia miacutenima de
25 mm uno del otro (el diaacutemetro de los discos seguacuten las normas de la
Organizacioacuten Mundial de la Salud (OMS) debe ser de 6 mm) No deben colocarse
maacutes de 12 discos en una placa de 150 mm ni maacutes de 6 en una placa de 100 mm
de diaacutemetro interno para evitar la superposicioacuten de las zonas de inhibicioacuten Un
disco no debe ser removido una vez que tomoacute contacto con la superficie del agar
debido a que algunos antibioacuteticos se difunden raacutepidamente
INCUBACIOacuteN
Laboratorio Cliacutenico PAULINA ARROLLO PEREacuteZ
Incubar lar placas en posicioacuten invertida a 35degC por 18 a 24 horas dentro de los 15
minutos posteriores a la aplicacioacuten de los discos
Despueacutes del tiempo recomendado de incubacioacuten examinar cada placa y medir los
diaacutemetros de los halos de inhibicioacuten alrededor de cada disco
LECTURA DE LAS PLACAS E INTERPRETACIOacuteN DE LOS RESULTADOS
Medir los diaacutemetros de las zonas de inhibicioacuten completa (incluyendo el diaacutemetro
del disco) usando
una regla o calibrador Se debe mantener iluminada la parte posterior de la placa
petri con una luz reflejada localizada a unos cuantos centiacutemetros sobre un fondo
negro Tener la precaucioacuten de observar la placa siguiendo una vertical directa para
evitar una lectura erroacutenea de las marcas de la regla por efecto de paralelismo En
los medios suplementados con sangre las zonas son medidas en la parte superior
de la superficie del agar y retirando la tapa Tener cuidado de no medir la zona de
la hemoacutelisis sino la de inhibicioacuten del crecimiento
El punto final debe tomarse como el aacuterea que no muestra un crecimiento obvio
visible que puede ser detectado mediante observacioacuten visual no incluyendo velo
de crecimiento o colonias muy pequentildeas que puedan ser detectadas solo con
mucha dificultad en el borde de la zona Sin embargo las colonias mayores
creciendo dentro de la zona clara deberaacuten ser subcultivadas reidentificadas y
reensayadas Algunos Proteus spp debido a su gran movilidad pueden presentar
un velo de invasioacuten o ldquoswarmingrdquo dentro de las zonas de inhibicioacuten de algunos
antibioacuteticos En estos casos el velo del swarming debe ser ignorado al momento
de medir los halos de inhibicioacuten
DISCOS DE SENSIBILIDAD ANTIBIOacuteTICA A INCLUIR EN EL ANTIBIOGRAMA
Grupo I
Ampicilina
Cefalotina
Ampicilina Sulbactam o Amoxicilina Aacutecido Clavulaacutenico
Cefuroxima
Cefotaxima o Ceftriaxona
Gentamicina
Laboratorio Cliacutenico PAULINA ARROLLO PEREacuteZ
Amikacina
Aacutecido Nalidiacutexico(1)
Norfloxacina(1)
Ciprofloxacina
Cotrimoxazol (TrimetoprimSulfametoxazol)
Nitrofurantoiacutena(1)
Grupo II
Cefoxitina
Aztreonam
Ceftazidima
Cefixima
CefoperazonaSulbactam
Cefepime o Cefpirome
Imipenem o Meropenem
Cloramfenicol
Ofloxacina (1)
(1) Disco utilizado exclusivamente para infecciones de las viacuteas urinarias
Resistencias Naturales
Las enterobacterias son resistentes a Penicilina Oxacilina Macroacutelidos
Clindamicina y Glicopeacuteptidos
Klebsiella spp es resistente a las Aminopenicilinas
Citrobacter freundii Enterobacter cloacae y Enterobacter aerogenes son
resistentes a las Aminopenicilinas AminopenicilinasInhibidores de
betalactamasas Cefalosporinas de primera generacioacuten y Cefuroxima
Serratia marcescens es resistente a las Aminopenicilinas
AminopenicilinasInhibidores de betalactamasas Cefalosporinas de primera
generacioacuten y Cefoxitina
Proteus mirabilis es resistente a Nitrofurantoiacutena
Proteus vulgaris es resistente a las Aminopenicilinas Cefalosporinas de primera
generacioacuten Cefuroxima y Nitrofurantoiacutena
Laboratorio Cliacutenico PAULINA ARROLLO PEREacuteZ
Morganella morganii es resistente a las Aminopenicilinas
AminopenicilinasInhibidores de betalactamasas Cefalosporinas de primera
generacioacuten Cefuroxima y Nitrofurantoiacutena
Providentia stuartii es resistente a las Aminopenicilinas
AminopenicilinasInhibidores de betalactamasas Cefalosporinas de primera
generacioacuten Gentamicina (bajo nivel) y Nitrofurantoiacutena
ANTIBIOTICOS Y DIAMETROS CRITICOS PARA ENTEROBACTERIAS
E PRACTICA 7
EXAMEN QUIMICO DE CALCULO RENAL
EXAMEN FISICO
Laboratorio Cliacutenico PAULINA ARROLLO PEREacuteZ
Se debe pesar el caacutelculo y anotar el dato obtenido Medir dos de los diaacutemetros y
tomar nota del aspecto general textura y color y despueacutes de seccionado el
aspecto general la prominencia y el color de los distintos estratos
Se secciona el caacutelculo con una sierra Se raspan las caras con una aguja Se
procede lo mismo con el nuacutecleo Cada una de las muestras obtenidas se trituran
por separado en un mortero
PROCESO
Se coloca una porcioacuten del polvo del caacutelculo en un crisol y se calienta al fuego Si
no hay ennegrecimiento ni se altera el tamantildeo original el caacutelculo estaraacute formado
por sustancias inorgaacutenicas Si en cambio se carboniza desapareciendo estaraacute
formado por sustancias orgaacutenicas Si se funde y se ennegrece este caacutelculo estaacute
formado por sulfamidasa
Una vez obtenidos los datos pueden seleccionarse las reacciones necesarias
para confirmarlos
REACCIONES QUIMICAS
Solucioacuten A
10mg del polvo en matraz y antildeadir 50 ml de ClH 5 Observar si se
produce efervescencia Calentar en bantildeo de agua hirviendo por 10 a 15 minutos y
filtrar en caliente El filtrado se distribuye en 8 tubos numerados y se introduce un
trocito de papel tornasol en cada uno
Solucioacuten B
Agitar con Cl3CH unos 10 mg del polvo Reposar en tubo tapado a
temperatura ambiente hasta que el insoluble haya precipitado Decantar la
solucioacuten clorofoacutermica y guardar igual que el sedimento por separado
Carbonato efervescencia al agregar el CIH por desprendimiento de CO 2
Amonio al tubo 1 de la solucioacuten A se le agrega solucioacuten de OHNa 10 gota a
gota y agitando hasta que el papel tornasol vire
Agregar 1 ml de reactivo de Nessler Un color amarillo oscuro oporto indica
positividad de la reaccioacuten
Laboratorio Cliacutenico PAULINA ARROLLO PEREacuteZ
El NH 3 formado por los grupos NH 4 en medio alcalino reacciona con el yoiduro
doble del reactivo de Nesler para dar yoduro amoacutenico dimercuacuterico precipitado
pardo anaranjado
Acido uacuterico Neutralizar el contenido del tubo 2 como se explicoacute antes
Agregar igual volumen de CNN Na 2 y 05 ml de reactivo de Folin para aacutecido
uacuterico Un color azul intenso indica presencia de aacutecido uacuterico
El aacutecido uacuterico reduce al aacutecido fosfotuacutengstico en medio alcalino dando color azul
intenso de azul de tungsteno y a su vez se oxida a alantoiacutena
Reactivo fosfotuacutengstico (Folin y Denis) Antes del uso diluir al 10 en agua
destilada
Oxalato de calcio Neutralizar el contenido del tubo 3 Agregar CH 3 COOH 10
hasta reaccioacuten aacutecida al tornasol Precipitado blanco que no se redisuelve por
agitacioacuten indica presencia de oxalato de calcio
Calcio Neutralizar el tubo 4 Acidificar con CH 3 COOH glacial Agregar 2 ml C 2
O 4 ( NH 4 ) 4 Precipitado blancodenso indica presencia de Ca ++
Fosfato Neutralizar el tubo 5 Agregar 1 ml de solucioacuten de molibdato Mezclar
antildeadir 05 ml de aacutecido aminonaftol sulfoacutenico (ANS) 025 Coloracioacuten azul que
aparece en 5 minutos indica fosfatos
El color azul se debe a los oacutexidos reducidos de molibdeno
Reactivos
1 ClH concentrado2 Solucioacuten de OHK 203 NO 3 H concentrado4 Mo O 4 (NH 4 ) 2 disolver 25 g de la droga en 50 ml de SO 4 H 2 10 N y
diluir a 100 ml con H2 O destilada5 Amoniacuteaco
Reactivo ANS En matraz x 250 ml poner 05 g de aacutecido aminonaftolsulfoacutenico y
agrgar 195 ml de bisulfito de sodio 15 y 5 ml de sulfito de sodio 20 Mezclar
bien hasta disolucioacuten Si no se disuelve en media hora agregar maacutes sulfito y
agitar El reactivo dura unas 2 semanas
Laboratorio Cliacutenico PAULINA ARROLLO PEREacuteZ
Magnesio Neutralizar el tubo 7 con OHNH 4 y antildeadir 1 ml de solucioacuten alcohoacutelica
de p ndash Nitrobenceno azorresorcinol Un cromoacutegeno rojo indica presencia de
magnesio
En medio alcalino se forma (OH) 2 Mg El colorante azo resulta absorbido por el
(OH) 2 Mg en medio alcalino
Xantina A un tercio del residuo de la solucioacuten B agregarle gotas de NO 3 H
concentrado
Se disuelve el residuo sin desprender gas Evaporar a sequedad en bantildeo Mariacutea
hirviente quedando un residuo amarillo Dejar enfriar y humedecer con gotas de
OHNa 10 Una coloracioacuten anaranjada que vira al rojo oscuro al calentar indica
presencia de xantina
La reaccioacuten es la xantoproteica Migracioacuten de los anillos fenilo existentes en la
tirosina fenilalanina y triptoacutefano que da un color amarillo de los productos de
nitrosustitucioacuten para virar al anaranjado tras la adicioacuten de un aacutelcali ( formacioacuten de
la sal)
Nota El reactivo de molibdato se puede preparar asiacute
Solucioacuten 1 SO 4 H 2 01 N
Medir 450 ml de SO4 H 2 concentrado y agregarlos a 1300 ml de agua
destilada
Solucioacuten 2
A 250 ml de SO 4 H 2 01 N antildeadir la solucioacuten de molibdato y llevar con
agua destilada a 250 ml Mezclar
Sulfamidas Neutralizar el uacuteltimo tubo Antildeadir 1 ml de NO 2 Na 05 preparado
recientemente Agitar y reposar por 3 minutos Antildeadir 5 ml de solucioacuten alcohoacutelica
de dimetil-alfa naftilamina 025 Un color rojizo indica presencia de sulfamidas
Finalmente procede hacer mencioacuten de ciertos procedimientos fiacutesicos como la
microscopia de polarizacioacuten difraccioacuten de rayos X cristalografiacutea
espectrofotometriacutea de rayos infrarrojos etc que permiten actualmente un
conocimiento maacutes confiable de la estructura de los caacutelculos
- Reactivos
-
Laboratorio Cliacutenico PAULINA ARROLLO PEREacuteZ
ndash No hay utilizacioacuten del carbohidrato Se puede observar una reaccioacuten alcalina
(color rojo) o que no hay cambio de color (permanece del mismo color que el
medio no inoculado) Abreviaturas (K) o (N) respectivamente
Nota Cuando el microorganismo tambieacuten produce H2S el precipitado negro
puede ocultar la acidez
Produccioacuten de gas de glucosa
ndash Se considera positivo Presencia de una sola burbuja de gas burbujas en el
medio divisioacuten del medio desplazamiento completo del medio del fondo del tubo
dejando un aacuterea clara o una ligera muesca del medio en el costado del tubo
ndash Se registra la lectura por medio de cruces (+)
Produccioacuten de aacutecido sulfhiacutedrico
ndash Se manifiesta por un color negro distribuido por toda la columna del medio de
cultivo o soacutelo en la parte superior
ndash Se registra la lectura por medio de cruces (+)
Resultados
Ejemplo de simbolizacioacuten e interpretacioacuten
KA ndash+ Significa alcalinidad en la inclinacioacuten y acidez en el fondo (fermentacioacuten de
glucosa) gas negativo y H2S positivo
NN ndash ndashSignifica que no hay utilizacioacuten de la lactosa y glucosa ni produccioacuten de
H2S
AGAR LISINA HIERRO
En este medio se determina simultaacuteneamente la produccioacuten de lisina
descarboxilasa y de la formacioacuten de aacutecido sulfhiacutedrico
Lectura
Es importante hacer la lectura entre las 18 ndash 24 horas si la lectura se realiza antes
podemos obtener resultados falsos positivos asiacute como falsos negativos si se lee
despueacutes de las 24 horas Realizar la lectura en la columna y en la superficie
inclinada y observar la formacioacuten de aacutecido sulfhiacutedrico el cual se evidencia por una
coloracioacuten negra
Nota Generalmente las cepas del grupo Proteus y Providencia desaminan la
lisina a aacutecido ndashcetocarboacutenico Este uacuteltimo forma compuestos pardo-rojizos en la
Laboratorio Cliacutenico PAULINA ARROLLO PEREacuteZ
regioacuten superficial del medio de cultivo con la sal de hierro y bajo la influencia del
oxiacutegeno
Recomendaciones
No incubar maacutes del tiempo necesario para no ocasionar una alcalinizacioacuten en la
superficie del medio y por lo tanto producir un viraje hacia el violeta
UTILIZACIOacuteN DE CITRATO
Para determinar si un microorganismo es capaz de utilizar citrato como uacutenica
fuente de carbono para su metabolismo
Procedimiento
a) Incubar a 35ndash37 degC de 24 horasndash 48 horas En algunos casos es necesario una
incubacioacuten hasta por 4 diacuteas
b) Ver el viraje de color
Resultados
a) Prueba positiva Crecimiento con un color azul intenso en el pico de flauta o
presencia de colonias en ausencia del color azul
b) Prueba negativa No se observa crecimiento ni cambio de color (verde)
Controles
Positivo Enterobacter cloacae
Negativo Escherichia coli
HIDROacuteLISIS DE LA UREA (PRODUCCIOacuteN DE UREASA)
Es uacutetil para determinar la capacidad de un organismo de degradar la urea
formando dos moleacuteculas de amoniaco por accioacuten de la enzima ureasa
Procedimiento
Realizar la lectura despueacutes de 18 horas ndash 24 horas de incubacioacuten observando el
viraje de color
Resultados
Prueba positiva Color rosado intenso en el pico de flauta o todo el agar
Puede haber una reaccioacuten positiva retardada despueacutes de 24 horas y hasta
6 diacuteas de incubacioacuten (algunas cepas de Klebsiella por ejemplo)
Prueba negativa No se produce cambio de color
Controles
Laboratorio Cliacutenico PAULINA ARROLLO PEREacuteZ
Negativo Escherichia coli
Positivo Klebsiella pneumoniae
MOTILIDAD (MEDIOS SIM O MIO O AGAR MOVILIDAD)
Para determinar si un organismo es moacutevil o inmoacutevil
Procedimiento
Incubar a 35 ndash 37 degC de 24 a 48 horas
Resultados
Positivo Los microorganismos migran de la liacutenea de siembra y se difunden en el
medio provocando turbidez Tambieacuten puede manifestarse semejando
ldquovellosidadesrdquo a lo largo del trazo de siembra
Negativo Se observa un crecimiento bacteriano acentuado siguiendo el trazo de
siembra y el medio circundante se mantiene claro
Controles
Control positivo Escherichia coli
Control negativo Klebsiella pneumoniae
h) Prueba de indol[6]
Es uacutetil para determinar la capacidad de un microorganismo de producir indol a
partir del aminoaacutecido triptoacutefano
Medios y reactivos
Caldo de triptoacutefano o de peptona o caldo de triptona
Reactivo de indol de Kovacs
Procedimiento
Retirar aseacutepticamente 2 mL de caldo de cutivo con 24 horas de incubacioacuten
Agregar 5 gotas de reactivo de Kovacs
Mover suavemente el tubo y realizar la lectura
Laboratorio Cliacutenico PAULINA ARROLLO PEREacuteZ
Laboratorio Cliacutenico PAULINA ARROLLO PEREacuteZ
Laboratorio Cliacutenico PAULINA ARROLLO PEREacuteZ
ANTIBIOGRAMA
Preparacioacuten del Agar Mueller Hinton
Preparar el medio a partir de la base deshidratada de acuerdo a las
indicaciones del fabricante
Autoclavar y dejar enfriar en bantildeo de agua hasta que alcance los 45degC - 50degC
Repartir el medio en placas petri (60 ml ndash 70 ml o 25 ml ndash 30 ml para placas de
150 mm o 100 mm de diaacutemetro interno respectivamente) de manera que el
grosor del agar en la placa sea de 4 mm
Realizar las pruebas de esterilidad para cada lote de Mueller Hinton incubando
una o dos placas de cada lote a 30degC ndash 35degC durante 24 horas o maacutes Estas
placas utilizadas deben ser luego descartadas
Preparacioacuten del estaacutendar (05 Mc Farland) para el inoacuteculo
Para estandarizar la densidad del inoacuteculo se usa una suspensioacuten de sulfato de
bario (05 de la escala de Mac Farland) como estaacutendar
Preparacioacuten del estaacutendar de turbidez
a Agregar 05 ml de una solucioacuten de BaCl2 0048 M (BaCl22H2O al 1175 PV)
a 995 mL de una solucioacuten de H2SO4 018 M (036 N) (1 VV) en constante
movimiento para mantener la suspensioacuten
b Verificar la densidad correcta del estaacutendar usando un fotocoloriacutemetro oacute
espectrofotoacutemetro cuya absorbancia a 625 nm es 008 a 010 para el estaacutendar 05
de Mc Farland
c Distribuir de 4 ml a 6 ml en tubos con tapa de rosca o tapoacuten de jebe similares a
los que se usaraacuten para preparar el inoacuteculo
Laboratorio Cliacutenico PAULINA ARROLLO PEREacuteZ
d Ajustar bien las tapas o tapones y conservarlos en la oscuridad a temperatura
ambiente y anotar la fecha de preparacioacuten
e Antes de ser usado agitar vigorosamente dicho estaacutendar de preferencia en un
agitador mecaacutenico
f Verificar mensualmente la densidad de los estaacutendares de sulfato de bario y
reemplazarlo cuando sea necesario
INOCULACIOacuteN
Preparacioacuten del inoacuteculo
Puede realizarse de dos formas
Meacutetodo de desarrollo previo
a Seleccionar cuatro a cinco colonias bien aisladas del mismo tipo morfoloacutegico
de un cultivo en placa
b Tocar la superficie de cada colonia con una asa de siembra y transferirlo a un
tubo que contiene de 4 a 5 mL de caldo apropiado (Ej Caldo Tripticasa soya)
c Incubar el caldo a una temperatura entre 35degC a 37degC hasta que alcance o
exceda la turbidez del estaacutendar 05 de la escala de Mc Farland (por lo general de
2 a 6 horas)
d Ajustar la turbidez del inoacuteculo con solucioacuten salina o caldo apropiado hasta el
tubo 05 de la escala de Mc Farland por comparacioacuten visual con el estaacutendar Para
realizar este paso correctamente usar una luz apropiada y mirar los tubos contra
un fondo blanco con liacuteneas negras como contraste
e La suspensioacuten preparada contendraacute aproximadamente 1 a 2 x 108 UFCmL
Meacutetodo directo de inoculacioacuten a partir de colonias aisladas
a De una placa de cultivo con agar no selectivo e incubada por 18 - 24 h
seleccionar colonias aisladas y preparar una suspensioacutem directa en solucioacuten
salina oacute caldo
b La suspensioacuten debe ser inmediatamente ajustada a la escala 05 de Mc
Farland
Inoculacioacuten de las Placas
Dentro de los 15 minutos siguientes al ajuste de la turbidez del inoacuteculo sumergir
un hisopo esteacuteril en la suspensioacuten rotar el hisopo varias veces presionando
Laboratorio Cliacutenico PAULINA ARROLLO PEREacuteZ
firmemente sobre la pared interior del tubo por encima del nivel del liacutequido para
remover el exceso de inoacuteculo
Inocular la superficie seca de la placa de Mueller Hinton estriando con el hisopo
en tres direcciones para asegurar una distribucioacuten uniforme del inoacuteculo Antes de
colocar los discos dejar secar la placa a temperatura ambiente durante 3 a 5
minutos para que cualquier exceso de humedad superficial sea absorbido
APLICACIOacuteN DE LOS DISCOS
Colocar los discos individuales o multidiscos sobre la superficie del agar con la
ayuda de una pinza esteacuteril o la punta de una aguja presionando suavemente sobre
cada disco para asegurar un contacto completo con la superficie del agar
Distribuir los discos uniformemente de modo que esteacuten a una distancia miacutenima de
25 mm uno del otro (el diaacutemetro de los discos seguacuten las normas de la
Organizacioacuten Mundial de la Salud (OMS) debe ser de 6 mm) No deben colocarse
maacutes de 12 discos en una placa de 150 mm ni maacutes de 6 en una placa de 100 mm
de diaacutemetro interno para evitar la superposicioacuten de las zonas de inhibicioacuten Un
disco no debe ser removido una vez que tomoacute contacto con la superficie del agar
debido a que algunos antibioacuteticos se difunden raacutepidamente
INCUBACIOacuteN
Laboratorio Cliacutenico PAULINA ARROLLO PEREacuteZ
Incubar lar placas en posicioacuten invertida a 35degC por 18 a 24 horas dentro de los 15
minutos posteriores a la aplicacioacuten de los discos
Despueacutes del tiempo recomendado de incubacioacuten examinar cada placa y medir los
diaacutemetros de los halos de inhibicioacuten alrededor de cada disco
LECTURA DE LAS PLACAS E INTERPRETACIOacuteN DE LOS RESULTADOS
Medir los diaacutemetros de las zonas de inhibicioacuten completa (incluyendo el diaacutemetro
del disco) usando
una regla o calibrador Se debe mantener iluminada la parte posterior de la placa
petri con una luz reflejada localizada a unos cuantos centiacutemetros sobre un fondo
negro Tener la precaucioacuten de observar la placa siguiendo una vertical directa para
evitar una lectura erroacutenea de las marcas de la regla por efecto de paralelismo En
los medios suplementados con sangre las zonas son medidas en la parte superior
de la superficie del agar y retirando la tapa Tener cuidado de no medir la zona de
la hemoacutelisis sino la de inhibicioacuten del crecimiento
El punto final debe tomarse como el aacuterea que no muestra un crecimiento obvio
visible que puede ser detectado mediante observacioacuten visual no incluyendo velo
de crecimiento o colonias muy pequentildeas que puedan ser detectadas solo con
mucha dificultad en el borde de la zona Sin embargo las colonias mayores
creciendo dentro de la zona clara deberaacuten ser subcultivadas reidentificadas y
reensayadas Algunos Proteus spp debido a su gran movilidad pueden presentar
un velo de invasioacuten o ldquoswarmingrdquo dentro de las zonas de inhibicioacuten de algunos
antibioacuteticos En estos casos el velo del swarming debe ser ignorado al momento
de medir los halos de inhibicioacuten
DISCOS DE SENSIBILIDAD ANTIBIOacuteTICA A INCLUIR EN EL ANTIBIOGRAMA
Grupo I
Ampicilina
Cefalotina
Ampicilina Sulbactam o Amoxicilina Aacutecido Clavulaacutenico
Cefuroxima
Cefotaxima o Ceftriaxona
Gentamicina
Laboratorio Cliacutenico PAULINA ARROLLO PEREacuteZ
Amikacina
Aacutecido Nalidiacutexico(1)
Norfloxacina(1)
Ciprofloxacina
Cotrimoxazol (TrimetoprimSulfametoxazol)
Nitrofurantoiacutena(1)
Grupo II
Cefoxitina
Aztreonam
Ceftazidima
Cefixima
CefoperazonaSulbactam
Cefepime o Cefpirome
Imipenem o Meropenem
Cloramfenicol
Ofloxacina (1)
(1) Disco utilizado exclusivamente para infecciones de las viacuteas urinarias
Resistencias Naturales
Las enterobacterias son resistentes a Penicilina Oxacilina Macroacutelidos
Clindamicina y Glicopeacuteptidos
Klebsiella spp es resistente a las Aminopenicilinas
Citrobacter freundii Enterobacter cloacae y Enterobacter aerogenes son
resistentes a las Aminopenicilinas AminopenicilinasInhibidores de
betalactamasas Cefalosporinas de primera generacioacuten y Cefuroxima
Serratia marcescens es resistente a las Aminopenicilinas
AminopenicilinasInhibidores de betalactamasas Cefalosporinas de primera
generacioacuten y Cefoxitina
Proteus mirabilis es resistente a Nitrofurantoiacutena
Proteus vulgaris es resistente a las Aminopenicilinas Cefalosporinas de primera
generacioacuten Cefuroxima y Nitrofurantoiacutena
Laboratorio Cliacutenico PAULINA ARROLLO PEREacuteZ
Morganella morganii es resistente a las Aminopenicilinas
AminopenicilinasInhibidores de betalactamasas Cefalosporinas de primera
generacioacuten Cefuroxima y Nitrofurantoiacutena
Providentia stuartii es resistente a las Aminopenicilinas
AminopenicilinasInhibidores de betalactamasas Cefalosporinas de primera
generacioacuten Gentamicina (bajo nivel) y Nitrofurantoiacutena
ANTIBIOTICOS Y DIAMETROS CRITICOS PARA ENTEROBACTERIAS
E PRACTICA 7
EXAMEN QUIMICO DE CALCULO RENAL
EXAMEN FISICO
Laboratorio Cliacutenico PAULINA ARROLLO PEREacuteZ
Se debe pesar el caacutelculo y anotar el dato obtenido Medir dos de los diaacutemetros y
tomar nota del aspecto general textura y color y despueacutes de seccionado el
aspecto general la prominencia y el color de los distintos estratos
Se secciona el caacutelculo con una sierra Se raspan las caras con una aguja Se
procede lo mismo con el nuacutecleo Cada una de las muestras obtenidas se trituran
por separado en un mortero
PROCESO
Se coloca una porcioacuten del polvo del caacutelculo en un crisol y se calienta al fuego Si
no hay ennegrecimiento ni se altera el tamantildeo original el caacutelculo estaraacute formado
por sustancias inorgaacutenicas Si en cambio se carboniza desapareciendo estaraacute
formado por sustancias orgaacutenicas Si se funde y se ennegrece este caacutelculo estaacute
formado por sulfamidasa
Una vez obtenidos los datos pueden seleccionarse las reacciones necesarias
para confirmarlos
REACCIONES QUIMICAS
Solucioacuten A
10mg del polvo en matraz y antildeadir 50 ml de ClH 5 Observar si se
produce efervescencia Calentar en bantildeo de agua hirviendo por 10 a 15 minutos y
filtrar en caliente El filtrado se distribuye en 8 tubos numerados y se introduce un
trocito de papel tornasol en cada uno
Solucioacuten B
Agitar con Cl3CH unos 10 mg del polvo Reposar en tubo tapado a
temperatura ambiente hasta que el insoluble haya precipitado Decantar la
solucioacuten clorofoacutermica y guardar igual que el sedimento por separado
Carbonato efervescencia al agregar el CIH por desprendimiento de CO 2
Amonio al tubo 1 de la solucioacuten A se le agrega solucioacuten de OHNa 10 gota a
gota y agitando hasta que el papel tornasol vire
Agregar 1 ml de reactivo de Nessler Un color amarillo oscuro oporto indica
positividad de la reaccioacuten
Laboratorio Cliacutenico PAULINA ARROLLO PEREacuteZ
El NH 3 formado por los grupos NH 4 en medio alcalino reacciona con el yoiduro
doble del reactivo de Nesler para dar yoduro amoacutenico dimercuacuterico precipitado
pardo anaranjado
Acido uacuterico Neutralizar el contenido del tubo 2 como se explicoacute antes
Agregar igual volumen de CNN Na 2 y 05 ml de reactivo de Folin para aacutecido
uacuterico Un color azul intenso indica presencia de aacutecido uacuterico
El aacutecido uacuterico reduce al aacutecido fosfotuacutengstico en medio alcalino dando color azul
intenso de azul de tungsteno y a su vez se oxida a alantoiacutena
Reactivo fosfotuacutengstico (Folin y Denis) Antes del uso diluir al 10 en agua
destilada
Oxalato de calcio Neutralizar el contenido del tubo 3 Agregar CH 3 COOH 10
hasta reaccioacuten aacutecida al tornasol Precipitado blanco que no se redisuelve por
agitacioacuten indica presencia de oxalato de calcio
Calcio Neutralizar el tubo 4 Acidificar con CH 3 COOH glacial Agregar 2 ml C 2
O 4 ( NH 4 ) 4 Precipitado blancodenso indica presencia de Ca ++
Fosfato Neutralizar el tubo 5 Agregar 1 ml de solucioacuten de molibdato Mezclar
antildeadir 05 ml de aacutecido aminonaftol sulfoacutenico (ANS) 025 Coloracioacuten azul que
aparece en 5 minutos indica fosfatos
El color azul se debe a los oacutexidos reducidos de molibdeno
Reactivos
1 ClH concentrado2 Solucioacuten de OHK 203 NO 3 H concentrado4 Mo O 4 (NH 4 ) 2 disolver 25 g de la droga en 50 ml de SO 4 H 2 10 N y
diluir a 100 ml con H2 O destilada5 Amoniacuteaco
Reactivo ANS En matraz x 250 ml poner 05 g de aacutecido aminonaftolsulfoacutenico y
agrgar 195 ml de bisulfito de sodio 15 y 5 ml de sulfito de sodio 20 Mezclar
bien hasta disolucioacuten Si no se disuelve en media hora agregar maacutes sulfito y
agitar El reactivo dura unas 2 semanas
Laboratorio Cliacutenico PAULINA ARROLLO PEREacuteZ
Magnesio Neutralizar el tubo 7 con OHNH 4 y antildeadir 1 ml de solucioacuten alcohoacutelica
de p ndash Nitrobenceno azorresorcinol Un cromoacutegeno rojo indica presencia de
magnesio
En medio alcalino se forma (OH) 2 Mg El colorante azo resulta absorbido por el
(OH) 2 Mg en medio alcalino
Xantina A un tercio del residuo de la solucioacuten B agregarle gotas de NO 3 H
concentrado
Se disuelve el residuo sin desprender gas Evaporar a sequedad en bantildeo Mariacutea
hirviente quedando un residuo amarillo Dejar enfriar y humedecer con gotas de
OHNa 10 Una coloracioacuten anaranjada que vira al rojo oscuro al calentar indica
presencia de xantina
La reaccioacuten es la xantoproteica Migracioacuten de los anillos fenilo existentes en la
tirosina fenilalanina y triptoacutefano que da un color amarillo de los productos de
nitrosustitucioacuten para virar al anaranjado tras la adicioacuten de un aacutelcali ( formacioacuten de
la sal)
Nota El reactivo de molibdato se puede preparar asiacute
Solucioacuten 1 SO 4 H 2 01 N
Medir 450 ml de SO4 H 2 concentrado y agregarlos a 1300 ml de agua
destilada
Solucioacuten 2
A 250 ml de SO 4 H 2 01 N antildeadir la solucioacuten de molibdato y llevar con
agua destilada a 250 ml Mezclar
Sulfamidas Neutralizar el uacuteltimo tubo Antildeadir 1 ml de NO 2 Na 05 preparado
recientemente Agitar y reposar por 3 minutos Antildeadir 5 ml de solucioacuten alcohoacutelica
de dimetil-alfa naftilamina 025 Un color rojizo indica presencia de sulfamidas
Finalmente procede hacer mencioacuten de ciertos procedimientos fiacutesicos como la
microscopia de polarizacioacuten difraccioacuten de rayos X cristalografiacutea
espectrofotometriacutea de rayos infrarrojos etc que permiten actualmente un
conocimiento maacutes confiable de la estructura de los caacutelculos
- Reactivos
-
Laboratorio Cliacutenico PAULINA ARROLLO PEREacuteZ
regioacuten superficial del medio de cultivo con la sal de hierro y bajo la influencia del
oxiacutegeno
Recomendaciones
No incubar maacutes del tiempo necesario para no ocasionar una alcalinizacioacuten en la
superficie del medio y por lo tanto producir un viraje hacia el violeta
UTILIZACIOacuteN DE CITRATO
Para determinar si un microorganismo es capaz de utilizar citrato como uacutenica
fuente de carbono para su metabolismo
Procedimiento
a) Incubar a 35ndash37 degC de 24 horasndash 48 horas En algunos casos es necesario una
incubacioacuten hasta por 4 diacuteas
b) Ver el viraje de color
Resultados
a) Prueba positiva Crecimiento con un color azul intenso en el pico de flauta o
presencia de colonias en ausencia del color azul
b) Prueba negativa No se observa crecimiento ni cambio de color (verde)
Controles
Positivo Enterobacter cloacae
Negativo Escherichia coli
HIDROacuteLISIS DE LA UREA (PRODUCCIOacuteN DE UREASA)
Es uacutetil para determinar la capacidad de un organismo de degradar la urea
formando dos moleacuteculas de amoniaco por accioacuten de la enzima ureasa
Procedimiento
Realizar la lectura despueacutes de 18 horas ndash 24 horas de incubacioacuten observando el
viraje de color
Resultados
Prueba positiva Color rosado intenso en el pico de flauta o todo el agar
Puede haber una reaccioacuten positiva retardada despueacutes de 24 horas y hasta
6 diacuteas de incubacioacuten (algunas cepas de Klebsiella por ejemplo)
Prueba negativa No se produce cambio de color
Controles
Laboratorio Cliacutenico PAULINA ARROLLO PEREacuteZ
Negativo Escherichia coli
Positivo Klebsiella pneumoniae
MOTILIDAD (MEDIOS SIM O MIO O AGAR MOVILIDAD)
Para determinar si un organismo es moacutevil o inmoacutevil
Procedimiento
Incubar a 35 ndash 37 degC de 24 a 48 horas
Resultados
Positivo Los microorganismos migran de la liacutenea de siembra y se difunden en el
medio provocando turbidez Tambieacuten puede manifestarse semejando
ldquovellosidadesrdquo a lo largo del trazo de siembra
Negativo Se observa un crecimiento bacteriano acentuado siguiendo el trazo de
siembra y el medio circundante se mantiene claro
Controles
Control positivo Escherichia coli
Control negativo Klebsiella pneumoniae
h) Prueba de indol[6]
Es uacutetil para determinar la capacidad de un microorganismo de producir indol a
partir del aminoaacutecido triptoacutefano
Medios y reactivos
Caldo de triptoacutefano o de peptona o caldo de triptona
Reactivo de indol de Kovacs
Procedimiento
Retirar aseacutepticamente 2 mL de caldo de cutivo con 24 horas de incubacioacuten
Agregar 5 gotas de reactivo de Kovacs
Mover suavemente el tubo y realizar la lectura
Laboratorio Cliacutenico PAULINA ARROLLO PEREacuteZ
Laboratorio Cliacutenico PAULINA ARROLLO PEREacuteZ
Laboratorio Cliacutenico PAULINA ARROLLO PEREacuteZ
ANTIBIOGRAMA
Preparacioacuten del Agar Mueller Hinton
Preparar el medio a partir de la base deshidratada de acuerdo a las
indicaciones del fabricante
Autoclavar y dejar enfriar en bantildeo de agua hasta que alcance los 45degC - 50degC
Repartir el medio en placas petri (60 ml ndash 70 ml o 25 ml ndash 30 ml para placas de
150 mm o 100 mm de diaacutemetro interno respectivamente) de manera que el
grosor del agar en la placa sea de 4 mm
Realizar las pruebas de esterilidad para cada lote de Mueller Hinton incubando
una o dos placas de cada lote a 30degC ndash 35degC durante 24 horas o maacutes Estas
placas utilizadas deben ser luego descartadas
Preparacioacuten del estaacutendar (05 Mc Farland) para el inoacuteculo
Para estandarizar la densidad del inoacuteculo se usa una suspensioacuten de sulfato de
bario (05 de la escala de Mac Farland) como estaacutendar
Preparacioacuten del estaacutendar de turbidez
a Agregar 05 ml de una solucioacuten de BaCl2 0048 M (BaCl22H2O al 1175 PV)
a 995 mL de una solucioacuten de H2SO4 018 M (036 N) (1 VV) en constante
movimiento para mantener la suspensioacuten
b Verificar la densidad correcta del estaacutendar usando un fotocoloriacutemetro oacute
espectrofotoacutemetro cuya absorbancia a 625 nm es 008 a 010 para el estaacutendar 05
de Mc Farland
c Distribuir de 4 ml a 6 ml en tubos con tapa de rosca o tapoacuten de jebe similares a
los que se usaraacuten para preparar el inoacuteculo
Laboratorio Cliacutenico PAULINA ARROLLO PEREacuteZ
d Ajustar bien las tapas o tapones y conservarlos en la oscuridad a temperatura
ambiente y anotar la fecha de preparacioacuten
e Antes de ser usado agitar vigorosamente dicho estaacutendar de preferencia en un
agitador mecaacutenico
f Verificar mensualmente la densidad de los estaacutendares de sulfato de bario y
reemplazarlo cuando sea necesario
INOCULACIOacuteN
Preparacioacuten del inoacuteculo
Puede realizarse de dos formas
Meacutetodo de desarrollo previo
a Seleccionar cuatro a cinco colonias bien aisladas del mismo tipo morfoloacutegico
de un cultivo en placa
b Tocar la superficie de cada colonia con una asa de siembra y transferirlo a un
tubo que contiene de 4 a 5 mL de caldo apropiado (Ej Caldo Tripticasa soya)
c Incubar el caldo a una temperatura entre 35degC a 37degC hasta que alcance o
exceda la turbidez del estaacutendar 05 de la escala de Mc Farland (por lo general de
2 a 6 horas)
d Ajustar la turbidez del inoacuteculo con solucioacuten salina o caldo apropiado hasta el
tubo 05 de la escala de Mc Farland por comparacioacuten visual con el estaacutendar Para
realizar este paso correctamente usar una luz apropiada y mirar los tubos contra
un fondo blanco con liacuteneas negras como contraste
e La suspensioacuten preparada contendraacute aproximadamente 1 a 2 x 108 UFCmL
Meacutetodo directo de inoculacioacuten a partir de colonias aisladas
a De una placa de cultivo con agar no selectivo e incubada por 18 - 24 h
seleccionar colonias aisladas y preparar una suspensioacutem directa en solucioacuten
salina oacute caldo
b La suspensioacuten debe ser inmediatamente ajustada a la escala 05 de Mc
Farland
Inoculacioacuten de las Placas
Dentro de los 15 minutos siguientes al ajuste de la turbidez del inoacuteculo sumergir
un hisopo esteacuteril en la suspensioacuten rotar el hisopo varias veces presionando
Laboratorio Cliacutenico PAULINA ARROLLO PEREacuteZ
firmemente sobre la pared interior del tubo por encima del nivel del liacutequido para
remover el exceso de inoacuteculo
Inocular la superficie seca de la placa de Mueller Hinton estriando con el hisopo
en tres direcciones para asegurar una distribucioacuten uniforme del inoacuteculo Antes de
colocar los discos dejar secar la placa a temperatura ambiente durante 3 a 5
minutos para que cualquier exceso de humedad superficial sea absorbido
APLICACIOacuteN DE LOS DISCOS
Colocar los discos individuales o multidiscos sobre la superficie del agar con la
ayuda de una pinza esteacuteril o la punta de una aguja presionando suavemente sobre
cada disco para asegurar un contacto completo con la superficie del agar
Distribuir los discos uniformemente de modo que esteacuten a una distancia miacutenima de
25 mm uno del otro (el diaacutemetro de los discos seguacuten las normas de la
Organizacioacuten Mundial de la Salud (OMS) debe ser de 6 mm) No deben colocarse
maacutes de 12 discos en una placa de 150 mm ni maacutes de 6 en una placa de 100 mm
de diaacutemetro interno para evitar la superposicioacuten de las zonas de inhibicioacuten Un
disco no debe ser removido una vez que tomoacute contacto con la superficie del agar
debido a que algunos antibioacuteticos se difunden raacutepidamente
INCUBACIOacuteN
Laboratorio Cliacutenico PAULINA ARROLLO PEREacuteZ
Incubar lar placas en posicioacuten invertida a 35degC por 18 a 24 horas dentro de los 15
minutos posteriores a la aplicacioacuten de los discos
Despueacutes del tiempo recomendado de incubacioacuten examinar cada placa y medir los
diaacutemetros de los halos de inhibicioacuten alrededor de cada disco
LECTURA DE LAS PLACAS E INTERPRETACIOacuteN DE LOS RESULTADOS
Medir los diaacutemetros de las zonas de inhibicioacuten completa (incluyendo el diaacutemetro
del disco) usando
una regla o calibrador Se debe mantener iluminada la parte posterior de la placa
petri con una luz reflejada localizada a unos cuantos centiacutemetros sobre un fondo
negro Tener la precaucioacuten de observar la placa siguiendo una vertical directa para
evitar una lectura erroacutenea de las marcas de la regla por efecto de paralelismo En
los medios suplementados con sangre las zonas son medidas en la parte superior
de la superficie del agar y retirando la tapa Tener cuidado de no medir la zona de
la hemoacutelisis sino la de inhibicioacuten del crecimiento
El punto final debe tomarse como el aacuterea que no muestra un crecimiento obvio
visible que puede ser detectado mediante observacioacuten visual no incluyendo velo
de crecimiento o colonias muy pequentildeas que puedan ser detectadas solo con
mucha dificultad en el borde de la zona Sin embargo las colonias mayores
creciendo dentro de la zona clara deberaacuten ser subcultivadas reidentificadas y
reensayadas Algunos Proteus spp debido a su gran movilidad pueden presentar
un velo de invasioacuten o ldquoswarmingrdquo dentro de las zonas de inhibicioacuten de algunos
antibioacuteticos En estos casos el velo del swarming debe ser ignorado al momento
de medir los halos de inhibicioacuten
DISCOS DE SENSIBILIDAD ANTIBIOacuteTICA A INCLUIR EN EL ANTIBIOGRAMA
Grupo I
Ampicilina
Cefalotina
Ampicilina Sulbactam o Amoxicilina Aacutecido Clavulaacutenico
Cefuroxima
Cefotaxima o Ceftriaxona
Gentamicina
Laboratorio Cliacutenico PAULINA ARROLLO PEREacuteZ
Amikacina
Aacutecido Nalidiacutexico(1)
Norfloxacina(1)
Ciprofloxacina
Cotrimoxazol (TrimetoprimSulfametoxazol)
Nitrofurantoiacutena(1)
Grupo II
Cefoxitina
Aztreonam
Ceftazidima
Cefixima
CefoperazonaSulbactam
Cefepime o Cefpirome
Imipenem o Meropenem
Cloramfenicol
Ofloxacina (1)
(1) Disco utilizado exclusivamente para infecciones de las viacuteas urinarias
Resistencias Naturales
Las enterobacterias son resistentes a Penicilina Oxacilina Macroacutelidos
Clindamicina y Glicopeacuteptidos
Klebsiella spp es resistente a las Aminopenicilinas
Citrobacter freundii Enterobacter cloacae y Enterobacter aerogenes son
resistentes a las Aminopenicilinas AminopenicilinasInhibidores de
betalactamasas Cefalosporinas de primera generacioacuten y Cefuroxima
Serratia marcescens es resistente a las Aminopenicilinas
AminopenicilinasInhibidores de betalactamasas Cefalosporinas de primera
generacioacuten y Cefoxitina
Proteus mirabilis es resistente a Nitrofurantoiacutena
Proteus vulgaris es resistente a las Aminopenicilinas Cefalosporinas de primera
generacioacuten Cefuroxima y Nitrofurantoiacutena
Laboratorio Cliacutenico PAULINA ARROLLO PEREacuteZ
Morganella morganii es resistente a las Aminopenicilinas
AminopenicilinasInhibidores de betalactamasas Cefalosporinas de primera
generacioacuten Cefuroxima y Nitrofurantoiacutena
Providentia stuartii es resistente a las Aminopenicilinas
AminopenicilinasInhibidores de betalactamasas Cefalosporinas de primera
generacioacuten Gentamicina (bajo nivel) y Nitrofurantoiacutena
ANTIBIOTICOS Y DIAMETROS CRITICOS PARA ENTEROBACTERIAS
E PRACTICA 7
EXAMEN QUIMICO DE CALCULO RENAL
EXAMEN FISICO
Laboratorio Cliacutenico PAULINA ARROLLO PEREacuteZ
Se debe pesar el caacutelculo y anotar el dato obtenido Medir dos de los diaacutemetros y
tomar nota del aspecto general textura y color y despueacutes de seccionado el
aspecto general la prominencia y el color de los distintos estratos
Se secciona el caacutelculo con una sierra Se raspan las caras con una aguja Se
procede lo mismo con el nuacutecleo Cada una de las muestras obtenidas se trituran
por separado en un mortero
PROCESO
Se coloca una porcioacuten del polvo del caacutelculo en un crisol y se calienta al fuego Si
no hay ennegrecimiento ni se altera el tamantildeo original el caacutelculo estaraacute formado
por sustancias inorgaacutenicas Si en cambio se carboniza desapareciendo estaraacute
formado por sustancias orgaacutenicas Si se funde y se ennegrece este caacutelculo estaacute
formado por sulfamidasa
Una vez obtenidos los datos pueden seleccionarse las reacciones necesarias
para confirmarlos
REACCIONES QUIMICAS
Solucioacuten A
10mg del polvo en matraz y antildeadir 50 ml de ClH 5 Observar si se
produce efervescencia Calentar en bantildeo de agua hirviendo por 10 a 15 minutos y
filtrar en caliente El filtrado se distribuye en 8 tubos numerados y se introduce un
trocito de papel tornasol en cada uno
Solucioacuten B
Agitar con Cl3CH unos 10 mg del polvo Reposar en tubo tapado a
temperatura ambiente hasta que el insoluble haya precipitado Decantar la
solucioacuten clorofoacutermica y guardar igual que el sedimento por separado
Carbonato efervescencia al agregar el CIH por desprendimiento de CO 2
Amonio al tubo 1 de la solucioacuten A se le agrega solucioacuten de OHNa 10 gota a
gota y agitando hasta que el papel tornasol vire
Agregar 1 ml de reactivo de Nessler Un color amarillo oscuro oporto indica
positividad de la reaccioacuten
Laboratorio Cliacutenico PAULINA ARROLLO PEREacuteZ
El NH 3 formado por los grupos NH 4 en medio alcalino reacciona con el yoiduro
doble del reactivo de Nesler para dar yoduro amoacutenico dimercuacuterico precipitado
pardo anaranjado
Acido uacuterico Neutralizar el contenido del tubo 2 como se explicoacute antes
Agregar igual volumen de CNN Na 2 y 05 ml de reactivo de Folin para aacutecido
uacuterico Un color azul intenso indica presencia de aacutecido uacuterico
El aacutecido uacuterico reduce al aacutecido fosfotuacutengstico en medio alcalino dando color azul
intenso de azul de tungsteno y a su vez se oxida a alantoiacutena
Reactivo fosfotuacutengstico (Folin y Denis) Antes del uso diluir al 10 en agua
destilada
Oxalato de calcio Neutralizar el contenido del tubo 3 Agregar CH 3 COOH 10
hasta reaccioacuten aacutecida al tornasol Precipitado blanco que no se redisuelve por
agitacioacuten indica presencia de oxalato de calcio
Calcio Neutralizar el tubo 4 Acidificar con CH 3 COOH glacial Agregar 2 ml C 2
O 4 ( NH 4 ) 4 Precipitado blancodenso indica presencia de Ca ++
Fosfato Neutralizar el tubo 5 Agregar 1 ml de solucioacuten de molibdato Mezclar
antildeadir 05 ml de aacutecido aminonaftol sulfoacutenico (ANS) 025 Coloracioacuten azul que
aparece en 5 minutos indica fosfatos
El color azul se debe a los oacutexidos reducidos de molibdeno
Reactivos
1 ClH concentrado2 Solucioacuten de OHK 203 NO 3 H concentrado4 Mo O 4 (NH 4 ) 2 disolver 25 g de la droga en 50 ml de SO 4 H 2 10 N y
diluir a 100 ml con H2 O destilada5 Amoniacuteaco
Reactivo ANS En matraz x 250 ml poner 05 g de aacutecido aminonaftolsulfoacutenico y
agrgar 195 ml de bisulfito de sodio 15 y 5 ml de sulfito de sodio 20 Mezclar
bien hasta disolucioacuten Si no se disuelve en media hora agregar maacutes sulfito y
agitar El reactivo dura unas 2 semanas
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Magnesio Neutralizar el tubo 7 con OHNH 4 y antildeadir 1 ml de solucioacuten alcohoacutelica
de p ndash Nitrobenceno azorresorcinol Un cromoacutegeno rojo indica presencia de
magnesio
En medio alcalino se forma (OH) 2 Mg El colorante azo resulta absorbido por el
(OH) 2 Mg en medio alcalino
Xantina A un tercio del residuo de la solucioacuten B agregarle gotas de NO 3 H
concentrado
Se disuelve el residuo sin desprender gas Evaporar a sequedad en bantildeo Mariacutea
hirviente quedando un residuo amarillo Dejar enfriar y humedecer con gotas de
OHNa 10 Una coloracioacuten anaranjada que vira al rojo oscuro al calentar indica
presencia de xantina
La reaccioacuten es la xantoproteica Migracioacuten de los anillos fenilo existentes en la
tirosina fenilalanina y triptoacutefano que da un color amarillo de los productos de
nitrosustitucioacuten para virar al anaranjado tras la adicioacuten de un aacutelcali ( formacioacuten de
la sal)
Nota El reactivo de molibdato se puede preparar asiacute
Solucioacuten 1 SO 4 H 2 01 N
Medir 450 ml de SO4 H 2 concentrado y agregarlos a 1300 ml de agua
destilada
Solucioacuten 2
A 250 ml de SO 4 H 2 01 N antildeadir la solucioacuten de molibdato y llevar con
agua destilada a 250 ml Mezclar
Sulfamidas Neutralizar el uacuteltimo tubo Antildeadir 1 ml de NO 2 Na 05 preparado
recientemente Agitar y reposar por 3 minutos Antildeadir 5 ml de solucioacuten alcohoacutelica
de dimetil-alfa naftilamina 025 Un color rojizo indica presencia de sulfamidas
Finalmente procede hacer mencioacuten de ciertos procedimientos fiacutesicos como la
microscopia de polarizacioacuten difraccioacuten de rayos X cristalografiacutea
espectrofotometriacutea de rayos infrarrojos etc que permiten actualmente un
conocimiento maacutes confiable de la estructura de los caacutelculos
- Reactivos
-
Laboratorio Cliacutenico PAULINA ARROLLO PEREacuteZ
Negativo Escherichia coli
Positivo Klebsiella pneumoniae
MOTILIDAD (MEDIOS SIM O MIO O AGAR MOVILIDAD)
Para determinar si un organismo es moacutevil o inmoacutevil
Procedimiento
Incubar a 35 ndash 37 degC de 24 a 48 horas
Resultados
Positivo Los microorganismos migran de la liacutenea de siembra y se difunden en el
medio provocando turbidez Tambieacuten puede manifestarse semejando
ldquovellosidadesrdquo a lo largo del trazo de siembra
Negativo Se observa un crecimiento bacteriano acentuado siguiendo el trazo de
siembra y el medio circundante se mantiene claro
Controles
Control positivo Escherichia coli
Control negativo Klebsiella pneumoniae
h) Prueba de indol[6]
Es uacutetil para determinar la capacidad de un microorganismo de producir indol a
partir del aminoaacutecido triptoacutefano
Medios y reactivos
Caldo de triptoacutefano o de peptona o caldo de triptona
Reactivo de indol de Kovacs
Procedimiento
Retirar aseacutepticamente 2 mL de caldo de cutivo con 24 horas de incubacioacuten
Agregar 5 gotas de reactivo de Kovacs
Mover suavemente el tubo y realizar la lectura
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ANTIBIOGRAMA
Preparacioacuten del Agar Mueller Hinton
Preparar el medio a partir de la base deshidratada de acuerdo a las
indicaciones del fabricante
Autoclavar y dejar enfriar en bantildeo de agua hasta que alcance los 45degC - 50degC
Repartir el medio en placas petri (60 ml ndash 70 ml o 25 ml ndash 30 ml para placas de
150 mm o 100 mm de diaacutemetro interno respectivamente) de manera que el
grosor del agar en la placa sea de 4 mm
Realizar las pruebas de esterilidad para cada lote de Mueller Hinton incubando
una o dos placas de cada lote a 30degC ndash 35degC durante 24 horas o maacutes Estas
placas utilizadas deben ser luego descartadas
Preparacioacuten del estaacutendar (05 Mc Farland) para el inoacuteculo
Para estandarizar la densidad del inoacuteculo se usa una suspensioacuten de sulfato de
bario (05 de la escala de Mac Farland) como estaacutendar
Preparacioacuten del estaacutendar de turbidez
a Agregar 05 ml de una solucioacuten de BaCl2 0048 M (BaCl22H2O al 1175 PV)
a 995 mL de una solucioacuten de H2SO4 018 M (036 N) (1 VV) en constante
movimiento para mantener la suspensioacuten
b Verificar la densidad correcta del estaacutendar usando un fotocoloriacutemetro oacute
espectrofotoacutemetro cuya absorbancia a 625 nm es 008 a 010 para el estaacutendar 05
de Mc Farland
c Distribuir de 4 ml a 6 ml en tubos con tapa de rosca o tapoacuten de jebe similares a
los que se usaraacuten para preparar el inoacuteculo
Laboratorio Cliacutenico PAULINA ARROLLO PEREacuteZ
d Ajustar bien las tapas o tapones y conservarlos en la oscuridad a temperatura
ambiente y anotar la fecha de preparacioacuten
e Antes de ser usado agitar vigorosamente dicho estaacutendar de preferencia en un
agitador mecaacutenico
f Verificar mensualmente la densidad de los estaacutendares de sulfato de bario y
reemplazarlo cuando sea necesario
INOCULACIOacuteN
Preparacioacuten del inoacuteculo
Puede realizarse de dos formas
Meacutetodo de desarrollo previo
a Seleccionar cuatro a cinco colonias bien aisladas del mismo tipo morfoloacutegico
de un cultivo en placa
b Tocar la superficie de cada colonia con una asa de siembra y transferirlo a un
tubo que contiene de 4 a 5 mL de caldo apropiado (Ej Caldo Tripticasa soya)
c Incubar el caldo a una temperatura entre 35degC a 37degC hasta que alcance o
exceda la turbidez del estaacutendar 05 de la escala de Mc Farland (por lo general de
2 a 6 horas)
d Ajustar la turbidez del inoacuteculo con solucioacuten salina o caldo apropiado hasta el
tubo 05 de la escala de Mc Farland por comparacioacuten visual con el estaacutendar Para
realizar este paso correctamente usar una luz apropiada y mirar los tubos contra
un fondo blanco con liacuteneas negras como contraste
e La suspensioacuten preparada contendraacute aproximadamente 1 a 2 x 108 UFCmL
Meacutetodo directo de inoculacioacuten a partir de colonias aisladas
a De una placa de cultivo con agar no selectivo e incubada por 18 - 24 h
seleccionar colonias aisladas y preparar una suspensioacutem directa en solucioacuten
salina oacute caldo
b La suspensioacuten debe ser inmediatamente ajustada a la escala 05 de Mc
Farland
Inoculacioacuten de las Placas
Dentro de los 15 minutos siguientes al ajuste de la turbidez del inoacuteculo sumergir
un hisopo esteacuteril en la suspensioacuten rotar el hisopo varias veces presionando
Laboratorio Cliacutenico PAULINA ARROLLO PEREacuteZ
firmemente sobre la pared interior del tubo por encima del nivel del liacutequido para
remover el exceso de inoacuteculo
Inocular la superficie seca de la placa de Mueller Hinton estriando con el hisopo
en tres direcciones para asegurar una distribucioacuten uniforme del inoacuteculo Antes de
colocar los discos dejar secar la placa a temperatura ambiente durante 3 a 5
minutos para que cualquier exceso de humedad superficial sea absorbido
APLICACIOacuteN DE LOS DISCOS
Colocar los discos individuales o multidiscos sobre la superficie del agar con la
ayuda de una pinza esteacuteril o la punta de una aguja presionando suavemente sobre
cada disco para asegurar un contacto completo con la superficie del agar
Distribuir los discos uniformemente de modo que esteacuten a una distancia miacutenima de
25 mm uno del otro (el diaacutemetro de los discos seguacuten las normas de la
Organizacioacuten Mundial de la Salud (OMS) debe ser de 6 mm) No deben colocarse
maacutes de 12 discos en una placa de 150 mm ni maacutes de 6 en una placa de 100 mm
de diaacutemetro interno para evitar la superposicioacuten de las zonas de inhibicioacuten Un
disco no debe ser removido una vez que tomoacute contacto con la superficie del agar
debido a que algunos antibioacuteticos se difunden raacutepidamente
INCUBACIOacuteN
Laboratorio Cliacutenico PAULINA ARROLLO PEREacuteZ
Incubar lar placas en posicioacuten invertida a 35degC por 18 a 24 horas dentro de los 15
minutos posteriores a la aplicacioacuten de los discos
Despueacutes del tiempo recomendado de incubacioacuten examinar cada placa y medir los
diaacutemetros de los halos de inhibicioacuten alrededor de cada disco
LECTURA DE LAS PLACAS E INTERPRETACIOacuteN DE LOS RESULTADOS
Medir los diaacutemetros de las zonas de inhibicioacuten completa (incluyendo el diaacutemetro
del disco) usando
una regla o calibrador Se debe mantener iluminada la parte posterior de la placa
petri con una luz reflejada localizada a unos cuantos centiacutemetros sobre un fondo
negro Tener la precaucioacuten de observar la placa siguiendo una vertical directa para
evitar una lectura erroacutenea de las marcas de la regla por efecto de paralelismo En
los medios suplementados con sangre las zonas son medidas en la parte superior
de la superficie del agar y retirando la tapa Tener cuidado de no medir la zona de
la hemoacutelisis sino la de inhibicioacuten del crecimiento
El punto final debe tomarse como el aacuterea que no muestra un crecimiento obvio
visible que puede ser detectado mediante observacioacuten visual no incluyendo velo
de crecimiento o colonias muy pequentildeas que puedan ser detectadas solo con
mucha dificultad en el borde de la zona Sin embargo las colonias mayores
creciendo dentro de la zona clara deberaacuten ser subcultivadas reidentificadas y
reensayadas Algunos Proteus spp debido a su gran movilidad pueden presentar
un velo de invasioacuten o ldquoswarmingrdquo dentro de las zonas de inhibicioacuten de algunos
antibioacuteticos En estos casos el velo del swarming debe ser ignorado al momento
de medir los halos de inhibicioacuten
DISCOS DE SENSIBILIDAD ANTIBIOacuteTICA A INCLUIR EN EL ANTIBIOGRAMA
Grupo I
Ampicilina
Cefalotina
Ampicilina Sulbactam o Amoxicilina Aacutecido Clavulaacutenico
Cefuroxima
Cefotaxima o Ceftriaxona
Gentamicina
Laboratorio Cliacutenico PAULINA ARROLLO PEREacuteZ
Amikacina
Aacutecido Nalidiacutexico(1)
Norfloxacina(1)
Ciprofloxacina
Cotrimoxazol (TrimetoprimSulfametoxazol)
Nitrofurantoiacutena(1)
Grupo II
Cefoxitina
Aztreonam
Ceftazidima
Cefixima
CefoperazonaSulbactam
Cefepime o Cefpirome
Imipenem o Meropenem
Cloramfenicol
Ofloxacina (1)
(1) Disco utilizado exclusivamente para infecciones de las viacuteas urinarias
Resistencias Naturales
Las enterobacterias son resistentes a Penicilina Oxacilina Macroacutelidos
Clindamicina y Glicopeacuteptidos
Klebsiella spp es resistente a las Aminopenicilinas
Citrobacter freundii Enterobacter cloacae y Enterobacter aerogenes son
resistentes a las Aminopenicilinas AminopenicilinasInhibidores de
betalactamasas Cefalosporinas de primera generacioacuten y Cefuroxima
Serratia marcescens es resistente a las Aminopenicilinas
AminopenicilinasInhibidores de betalactamasas Cefalosporinas de primera
generacioacuten y Cefoxitina
Proteus mirabilis es resistente a Nitrofurantoiacutena
Proteus vulgaris es resistente a las Aminopenicilinas Cefalosporinas de primera
generacioacuten Cefuroxima y Nitrofurantoiacutena
Laboratorio Cliacutenico PAULINA ARROLLO PEREacuteZ
Morganella morganii es resistente a las Aminopenicilinas
AminopenicilinasInhibidores de betalactamasas Cefalosporinas de primera
generacioacuten Cefuroxima y Nitrofurantoiacutena
Providentia stuartii es resistente a las Aminopenicilinas
AminopenicilinasInhibidores de betalactamasas Cefalosporinas de primera
generacioacuten Gentamicina (bajo nivel) y Nitrofurantoiacutena
ANTIBIOTICOS Y DIAMETROS CRITICOS PARA ENTEROBACTERIAS
E PRACTICA 7
EXAMEN QUIMICO DE CALCULO RENAL
EXAMEN FISICO
Laboratorio Cliacutenico PAULINA ARROLLO PEREacuteZ
Se debe pesar el caacutelculo y anotar el dato obtenido Medir dos de los diaacutemetros y
tomar nota del aspecto general textura y color y despueacutes de seccionado el
aspecto general la prominencia y el color de los distintos estratos
Se secciona el caacutelculo con una sierra Se raspan las caras con una aguja Se
procede lo mismo con el nuacutecleo Cada una de las muestras obtenidas se trituran
por separado en un mortero
PROCESO
Se coloca una porcioacuten del polvo del caacutelculo en un crisol y se calienta al fuego Si
no hay ennegrecimiento ni se altera el tamantildeo original el caacutelculo estaraacute formado
por sustancias inorgaacutenicas Si en cambio se carboniza desapareciendo estaraacute
formado por sustancias orgaacutenicas Si se funde y se ennegrece este caacutelculo estaacute
formado por sulfamidasa
Una vez obtenidos los datos pueden seleccionarse las reacciones necesarias
para confirmarlos
REACCIONES QUIMICAS
Solucioacuten A
10mg del polvo en matraz y antildeadir 50 ml de ClH 5 Observar si se
produce efervescencia Calentar en bantildeo de agua hirviendo por 10 a 15 minutos y
filtrar en caliente El filtrado se distribuye en 8 tubos numerados y se introduce un
trocito de papel tornasol en cada uno
Solucioacuten B
Agitar con Cl3CH unos 10 mg del polvo Reposar en tubo tapado a
temperatura ambiente hasta que el insoluble haya precipitado Decantar la
solucioacuten clorofoacutermica y guardar igual que el sedimento por separado
Carbonato efervescencia al agregar el CIH por desprendimiento de CO 2
Amonio al tubo 1 de la solucioacuten A se le agrega solucioacuten de OHNa 10 gota a
gota y agitando hasta que el papel tornasol vire
Agregar 1 ml de reactivo de Nessler Un color amarillo oscuro oporto indica
positividad de la reaccioacuten
Laboratorio Cliacutenico PAULINA ARROLLO PEREacuteZ
El NH 3 formado por los grupos NH 4 en medio alcalino reacciona con el yoiduro
doble del reactivo de Nesler para dar yoduro amoacutenico dimercuacuterico precipitado
pardo anaranjado
Acido uacuterico Neutralizar el contenido del tubo 2 como se explicoacute antes
Agregar igual volumen de CNN Na 2 y 05 ml de reactivo de Folin para aacutecido
uacuterico Un color azul intenso indica presencia de aacutecido uacuterico
El aacutecido uacuterico reduce al aacutecido fosfotuacutengstico en medio alcalino dando color azul
intenso de azul de tungsteno y a su vez se oxida a alantoiacutena
Reactivo fosfotuacutengstico (Folin y Denis) Antes del uso diluir al 10 en agua
destilada
Oxalato de calcio Neutralizar el contenido del tubo 3 Agregar CH 3 COOH 10
hasta reaccioacuten aacutecida al tornasol Precipitado blanco que no se redisuelve por
agitacioacuten indica presencia de oxalato de calcio
Calcio Neutralizar el tubo 4 Acidificar con CH 3 COOH glacial Agregar 2 ml C 2
O 4 ( NH 4 ) 4 Precipitado blancodenso indica presencia de Ca ++
Fosfato Neutralizar el tubo 5 Agregar 1 ml de solucioacuten de molibdato Mezclar
antildeadir 05 ml de aacutecido aminonaftol sulfoacutenico (ANS) 025 Coloracioacuten azul que
aparece en 5 minutos indica fosfatos
El color azul se debe a los oacutexidos reducidos de molibdeno
Reactivos
1 ClH concentrado2 Solucioacuten de OHK 203 NO 3 H concentrado4 Mo O 4 (NH 4 ) 2 disolver 25 g de la droga en 50 ml de SO 4 H 2 10 N y
diluir a 100 ml con H2 O destilada5 Amoniacuteaco
Reactivo ANS En matraz x 250 ml poner 05 g de aacutecido aminonaftolsulfoacutenico y
agrgar 195 ml de bisulfito de sodio 15 y 5 ml de sulfito de sodio 20 Mezclar
bien hasta disolucioacuten Si no se disuelve en media hora agregar maacutes sulfito y
agitar El reactivo dura unas 2 semanas
Laboratorio Cliacutenico PAULINA ARROLLO PEREacuteZ
Magnesio Neutralizar el tubo 7 con OHNH 4 y antildeadir 1 ml de solucioacuten alcohoacutelica
de p ndash Nitrobenceno azorresorcinol Un cromoacutegeno rojo indica presencia de
magnesio
En medio alcalino se forma (OH) 2 Mg El colorante azo resulta absorbido por el
(OH) 2 Mg en medio alcalino
Xantina A un tercio del residuo de la solucioacuten B agregarle gotas de NO 3 H
concentrado
Se disuelve el residuo sin desprender gas Evaporar a sequedad en bantildeo Mariacutea
hirviente quedando un residuo amarillo Dejar enfriar y humedecer con gotas de
OHNa 10 Una coloracioacuten anaranjada que vira al rojo oscuro al calentar indica
presencia de xantina
La reaccioacuten es la xantoproteica Migracioacuten de los anillos fenilo existentes en la
tirosina fenilalanina y triptoacutefano que da un color amarillo de los productos de
nitrosustitucioacuten para virar al anaranjado tras la adicioacuten de un aacutelcali ( formacioacuten de
la sal)
Nota El reactivo de molibdato se puede preparar asiacute
Solucioacuten 1 SO 4 H 2 01 N
Medir 450 ml de SO4 H 2 concentrado y agregarlos a 1300 ml de agua
destilada
Solucioacuten 2
A 250 ml de SO 4 H 2 01 N antildeadir la solucioacuten de molibdato y llevar con
agua destilada a 250 ml Mezclar
Sulfamidas Neutralizar el uacuteltimo tubo Antildeadir 1 ml de NO 2 Na 05 preparado
recientemente Agitar y reposar por 3 minutos Antildeadir 5 ml de solucioacuten alcohoacutelica
de dimetil-alfa naftilamina 025 Un color rojizo indica presencia de sulfamidas
Finalmente procede hacer mencioacuten de ciertos procedimientos fiacutesicos como la
microscopia de polarizacioacuten difraccioacuten de rayos X cristalografiacutea
espectrofotometriacutea de rayos infrarrojos etc que permiten actualmente un
conocimiento maacutes confiable de la estructura de los caacutelculos
- Reactivos
-
Laboratorio Cliacutenico PAULINA ARROLLO PEREacuteZ
Laboratorio Cliacutenico PAULINA ARROLLO PEREacuteZ
Laboratorio Cliacutenico PAULINA ARROLLO PEREacuteZ
ANTIBIOGRAMA
Preparacioacuten del Agar Mueller Hinton
Preparar el medio a partir de la base deshidratada de acuerdo a las
indicaciones del fabricante
Autoclavar y dejar enfriar en bantildeo de agua hasta que alcance los 45degC - 50degC
Repartir el medio en placas petri (60 ml ndash 70 ml o 25 ml ndash 30 ml para placas de
150 mm o 100 mm de diaacutemetro interno respectivamente) de manera que el
grosor del agar en la placa sea de 4 mm
Realizar las pruebas de esterilidad para cada lote de Mueller Hinton incubando
una o dos placas de cada lote a 30degC ndash 35degC durante 24 horas o maacutes Estas
placas utilizadas deben ser luego descartadas
Preparacioacuten del estaacutendar (05 Mc Farland) para el inoacuteculo
Para estandarizar la densidad del inoacuteculo se usa una suspensioacuten de sulfato de
bario (05 de la escala de Mac Farland) como estaacutendar
Preparacioacuten del estaacutendar de turbidez
a Agregar 05 ml de una solucioacuten de BaCl2 0048 M (BaCl22H2O al 1175 PV)
a 995 mL de una solucioacuten de H2SO4 018 M (036 N) (1 VV) en constante
movimiento para mantener la suspensioacuten
b Verificar la densidad correcta del estaacutendar usando un fotocoloriacutemetro oacute
espectrofotoacutemetro cuya absorbancia a 625 nm es 008 a 010 para el estaacutendar 05
de Mc Farland
c Distribuir de 4 ml a 6 ml en tubos con tapa de rosca o tapoacuten de jebe similares a
los que se usaraacuten para preparar el inoacuteculo
Laboratorio Cliacutenico PAULINA ARROLLO PEREacuteZ
d Ajustar bien las tapas o tapones y conservarlos en la oscuridad a temperatura
ambiente y anotar la fecha de preparacioacuten
e Antes de ser usado agitar vigorosamente dicho estaacutendar de preferencia en un
agitador mecaacutenico
f Verificar mensualmente la densidad de los estaacutendares de sulfato de bario y
reemplazarlo cuando sea necesario
INOCULACIOacuteN
Preparacioacuten del inoacuteculo
Puede realizarse de dos formas
Meacutetodo de desarrollo previo
a Seleccionar cuatro a cinco colonias bien aisladas del mismo tipo morfoloacutegico
de un cultivo en placa
b Tocar la superficie de cada colonia con una asa de siembra y transferirlo a un
tubo que contiene de 4 a 5 mL de caldo apropiado (Ej Caldo Tripticasa soya)
c Incubar el caldo a una temperatura entre 35degC a 37degC hasta que alcance o
exceda la turbidez del estaacutendar 05 de la escala de Mc Farland (por lo general de
2 a 6 horas)
d Ajustar la turbidez del inoacuteculo con solucioacuten salina o caldo apropiado hasta el
tubo 05 de la escala de Mc Farland por comparacioacuten visual con el estaacutendar Para
realizar este paso correctamente usar una luz apropiada y mirar los tubos contra
un fondo blanco con liacuteneas negras como contraste
e La suspensioacuten preparada contendraacute aproximadamente 1 a 2 x 108 UFCmL
Meacutetodo directo de inoculacioacuten a partir de colonias aisladas
a De una placa de cultivo con agar no selectivo e incubada por 18 - 24 h
seleccionar colonias aisladas y preparar una suspensioacutem directa en solucioacuten
salina oacute caldo
b La suspensioacuten debe ser inmediatamente ajustada a la escala 05 de Mc
Farland
Inoculacioacuten de las Placas
Dentro de los 15 minutos siguientes al ajuste de la turbidez del inoacuteculo sumergir
un hisopo esteacuteril en la suspensioacuten rotar el hisopo varias veces presionando
Laboratorio Cliacutenico PAULINA ARROLLO PEREacuteZ
firmemente sobre la pared interior del tubo por encima del nivel del liacutequido para
remover el exceso de inoacuteculo
Inocular la superficie seca de la placa de Mueller Hinton estriando con el hisopo
en tres direcciones para asegurar una distribucioacuten uniforme del inoacuteculo Antes de
colocar los discos dejar secar la placa a temperatura ambiente durante 3 a 5
minutos para que cualquier exceso de humedad superficial sea absorbido
APLICACIOacuteN DE LOS DISCOS
Colocar los discos individuales o multidiscos sobre la superficie del agar con la
ayuda de una pinza esteacuteril o la punta de una aguja presionando suavemente sobre
cada disco para asegurar un contacto completo con la superficie del agar
Distribuir los discos uniformemente de modo que esteacuten a una distancia miacutenima de
25 mm uno del otro (el diaacutemetro de los discos seguacuten las normas de la
Organizacioacuten Mundial de la Salud (OMS) debe ser de 6 mm) No deben colocarse
maacutes de 12 discos en una placa de 150 mm ni maacutes de 6 en una placa de 100 mm
de diaacutemetro interno para evitar la superposicioacuten de las zonas de inhibicioacuten Un
disco no debe ser removido una vez que tomoacute contacto con la superficie del agar
debido a que algunos antibioacuteticos se difunden raacutepidamente
INCUBACIOacuteN
Laboratorio Cliacutenico PAULINA ARROLLO PEREacuteZ
Incubar lar placas en posicioacuten invertida a 35degC por 18 a 24 horas dentro de los 15
minutos posteriores a la aplicacioacuten de los discos
Despueacutes del tiempo recomendado de incubacioacuten examinar cada placa y medir los
diaacutemetros de los halos de inhibicioacuten alrededor de cada disco
LECTURA DE LAS PLACAS E INTERPRETACIOacuteN DE LOS RESULTADOS
Medir los diaacutemetros de las zonas de inhibicioacuten completa (incluyendo el diaacutemetro
del disco) usando
una regla o calibrador Se debe mantener iluminada la parte posterior de la placa
petri con una luz reflejada localizada a unos cuantos centiacutemetros sobre un fondo
negro Tener la precaucioacuten de observar la placa siguiendo una vertical directa para
evitar una lectura erroacutenea de las marcas de la regla por efecto de paralelismo En
los medios suplementados con sangre las zonas son medidas en la parte superior
de la superficie del agar y retirando la tapa Tener cuidado de no medir la zona de
la hemoacutelisis sino la de inhibicioacuten del crecimiento
El punto final debe tomarse como el aacuterea que no muestra un crecimiento obvio
visible que puede ser detectado mediante observacioacuten visual no incluyendo velo
de crecimiento o colonias muy pequentildeas que puedan ser detectadas solo con
mucha dificultad en el borde de la zona Sin embargo las colonias mayores
creciendo dentro de la zona clara deberaacuten ser subcultivadas reidentificadas y
reensayadas Algunos Proteus spp debido a su gran movilidad pueden presentar
un velo de invasioacuten o ldquoswarmingrdquo dentro de las zonas de inhibicioacuten de algunos
antibioacuteticos En estos casos el velo del swarming debe ser ignorado al momento
de medir los halos de inhibicioacuten
DISCOS DE SENSIBILIDAD ANTIBIOacuteTICA A INCLUIR EN EL ANTIBIOGRAMA
Grupo I
Ampicilina
Cefalotina
Ampicilina Sulbactam o Amoxicilina Aacutecido Clavulaacutenico
Cefuroxima
Cefotaxima o Ceftriaxona
Gentamicina
Laboratorio Cliacutenico PAULINA ARROLLO PEREacuteZ
Amikacina
Aacutecido Nalidiacutexico(1)
Norfloxacina(1)
Ciprofloxacina
Cotrimoxazol (TrimetoprimSulfametoxazol)
Nitrofurantoiacutena(1)
Grupo II
Cefoxitina
Aztreonam
Ceftazidima
Cefixima
CefoperazonaSulbactam
Cefepime o Cefpirome
Imipenem o Meropenem
Cloramfenicol
Ofloxacina (1)
(1) Disco utilizado exclusivamente para infecciones de las viacuteas urinarias
Resistencias Naturales
Las enterobacterias son resistentes a Penicilina Oxacilina Macroacutelidos
Clindamicina y Glicopeacuteptidos
Klebsiella spp es resistente a las Aminopenicilinas
Citrobacter freundii Enterobacter cloacae y Enterobacter aerogenes son
resistentes a las Aminopenicilinas AminopenicilinasInhibidores de
betalactamasas Cefalosporinas de primera generacioacuten y Cefuroxima
Serratia marcescens es resistente a las Aminopenicilinas
AminopenicilinasInhibidores de betalactamasas Cefalosporinas de primera
generacioacuten y Cefoxitina
Proteus mirabilis es resistente a Nitrofurantoiacutena
Proteus vulgaris es resistente a las Aminopenicilinas Cefalosporinas de primera
generacioacuten Cefuroxima y Nitrofurantoiacutena
Laboratorio Cliacutenico PAULINA ARROLLO PEREacuteZ
Morganella morganii es resistente a las Aminopenicilinas
AminopenicilinasInhibidores de betalactamasas Cefalosporinas de primera
generacioacuten Cefuroxima y Nitrofurantoiacutena
Providentia stuartii es resistente a las Aminopenicilinas
AminopenicilinasInhibidores de betalactamasas Cefalosporinas de primera
generacioacuten Gentamicina (bajo nivel) y Nitrofurantoiacutena
ANTIBIOTICOS Y DIAMETROS CRITICOS PARA ENTEROBACTERIAS
E PRACTICA 7
EXAMEN QUIMICO DE CALCULO RENAL
EXAMEN FISICO
Laboratorio Cliacutenico PAULINA ARROLLO PEREacuteZ
Se debe pesar el caacutelculo y anotar el dato obtenido Medir dos de los diaacutemetros y
tomar nota del aspecto general textura y color y despueacutes de seccionado el
aspecto general la prominencia y el color de los distintos estratos
Se secciona el caacutelculo con una sierra Se raspan las caras con una aguja Se
procede lo mismo con el nuacutecleo Cada una de las muestras obtenidas se trituran
por separado en un mortero
PROCESO
Se coloca una porcioacuten del polvo del caacutelculo en un crisol y se calienta al fuego Si
no hay ennegrecimiento ni se altera el tamantildeo original el caacutelculo estaraacute formado
por sustancias inorgaacutenicas Si en cambio se carboniza desapareciendo estaraacute
formado por sustancias orgaacutenicas Si se funde y se ennegrece este caacutelculo estaacute
formado por sulfamidasa
Una vez obtenidos los datos pueden seleccionarse las reacciones necesarias
para confirmarlos
REACCIONES QUIMICAS
Solucioacuten A
10mg del polvo en matraz y antildeadir 50 ml de ClH 5 Observar si se
produce efervescencia Calentar en bantildeo de agua hirviendo por 10 a 15 minutos y
filtrar en caliente El filtrado se distribuye en 8 tubos numerados y se introduce un
trocito de papel tornasol en cada uno
Solucioacuten B
Agitar con Cl3CH unos 10 mg del polvo Reposar en tubo tapado a
temperatura ambiente hasta que el insoluble haya precipitado Decantar la
solucioacuten clorofoacutermica y guardar igual que el sedimento por separado
Carbonato efervescencia al agregar el CIH por desprendimiento de CO 2
Amonio al tubo 1 de la solucioacuten A se le agrega solucioacuten de OHNa 10 gota a
gota y agitando hasta que el papel tornasol vire
Agregar 1 ml de reactivo de Nessler Un color amarillo oscuro oporto indica
positividad de la reaccioacuten
Laboratorio Cliacutenico PAULINA ARROLLO PEREacuteZ
El NH 3 formado por los grupos NH 4 en medio alcalino reacciona con el yoiduro
doble del reactivo de Nesler para dar yoduro amoacutenico dimercuacuterico precipitado
pardo anaranjado
Acido uacuterico Neutralizar el contenido del tubo 2 como se explicoacute antes
Agregar igual volumen de CNN Na 2 y 05 ml de reactivo de Folin para aacutecido
uacuterico Un color azul intenso indica presencia de aacutecido uacuterico
El aacutecido uacuterico reduce al aacutecido fosfotuacutengstico en medio alcalino dando color azul
intenso de azul de tungsteno y a su vez se oxida a alantoiacutena
Reactivo fosfotuacutengstico (Folin y Denis) Antes del uso diluir al 10 en agua
destilada
Oxalato de calcio Neutralizar el contenido del tubo 3 Agregar CH 3 COOH 10
hasta reaccioacuten aacutecida al tornasol Precipitado blanco que no se redisuelve por
agitacioacuten indica presencia de oxalato de calcio
Calcio Neutralizar el tubo 4 Acidificar con CH 3 COOH glacial Agregar 2 ml C 2
O 4 ( NH 4 ) 4 Precipitado blancodenso indica presencia de Ca ++
Fosfato Neutralizar el tubo 5 Agregar 1 ml de solucioacuten de molibdato Mezclar
antildeadir 05 ml de aacutecido aminonaftol sulfoacutenico (ANS) 025 Coloracioacuten azul que
aparece en 5 minutos indica fosfatos
El color azul se debe a los oacutexidos reducidos de molibdeno
Reactivos
1 ClH concentrado2 Solucioacuten de OHK 203 NO 3 H concentrado4 Mo O 4 (NH 4 ) 2 disolver 25 g de la droga en 50 ml de SO 4 H 2 10 N y
diluir a 100 ml con H2 O destilada5 Amoniacuteaco
Reactivo ANS En matraz x 250 ml poner 05 g de aacutecido aminonaftolsulfoacutenico y
agrgar 195 ml de bisulfito de sodio 15 y 5 ml de sulfito de sodio 20 Mezclar
bien hasta disolucioacuten Si no se disuelve en media hora agregar maacutes sulfito y
agitar El reactivo dura unas 2 semanas
Laboratorio Cliacutenico PAULINA ARROLLO PEREacuteZ
Magnesio Neutralizar el tubo 7 con OHNH 4 y antildeadir 1 ml de solucioacuten alcohoacutelica
de p ndash Nitrobenceno azorresorcinol Un cromoacutegeno rojo indica presencia de
magnesio
En medio alcalino se forma (OH) 2 Mg El colorante azo resulta absorbido por el
(OH) 2 Mg en medio alcalino
Xantina A un tercio del residuo de la solucioacuten B agregarle gotas de NO 3 H
concentrado
Se disuelve el residuo sin desprender gas Evaporar a sequedad en bantildeo Mariacutea
hirviente quedando un residuo amarillo Dejar enfriar y humedecer con gotas de
OHNa 10 Una coloracioacuten anaranjada que vira al rojo oscuro al calentar indica
presencia de xantina
La reaccioacuten es la xantoproteica Migracioacuten de los anillos fenilo existentes en la
tirosina fenilalanina y triptoacutefano que da un color amarillo de los productos de
nitrosustitucioacuten para virar al anaranjado tras la adicioacuten de un aacutelcali ( formacioacuten de
la sal)
Nota El reactivo de molibdato se puede preparar asiacute
Solucioacuten 1 SO 4 H 2 01 N
Medir 450 ml de SO4 H 2 concentrado y agregarlos a 1300 ml de agua
destilada
Solucioacuten 2
A 250 ml de SO 4 H 2 01 N antildeadir la solucioacuten de molibdato y llevar con
agua destilada a 250 ml Mezclar
Sulfamidas Neutralizar el uacuteltimo tubo Antildeadir 1 ml de NO 2 Na 05 preparado
recientemente Agitar y reposar por 3 minutos Antildeadir 5 ml de solucioacuten alcohoacutelica
de dimetil-alfa naftilamina 025 Un color rojizo indica presencia de sulfamidas
Finalmente procede hacer mencioacuten de ciertos procedimientos fiacutesicos como la
microscopia de polarizacioacuten difraccioacuten de rayos X cristalografiacutea
espectrofotometriacutea de rayos infrarrojos etc que permiten actualmente un
conocimiento maacutes confiable de la estructura de los caacutelculos
- Reactivos
-
Laboratorio Cliacutenico PAULINA ARROLLO PEREacuteZ
Laboratorio Cliacutenico PAULINA ARROLLO PEREacuteZ
ANTIBIOGRAMA
Preparacioacuten del Agar Mueller Hinton
Preparar el medio a partir de la base deshidratada de acuerdo a las
indicaciones del fabricante
Autoclavar y dejar enfriar en bantildeo de agua hasta que alcance los 45degC - 50degC
Repartir el medio en placas petri (60 ml ndash 70 ml o 25 ml ndash 30 ml para placas de
150 mm o 100 mm de diaacutemetro interno respectivamente) de manera que el
grosor del agar en la placa sea de 4 mm
Realizar las pruebas de esterilidad para cada lote de Mueller Hinton incubando
una o dos placas de cada lote a 30degC ndash 35degC durante 24 horas o maacutes Estas
placas utilizadas deben ser luego descartadas
Preparacioacuten del estaacutendar (05 Mc Farland) para el inoacuteculo
Para estandarizar la densidad del inoacuteculo se usa una suspensioacuten de sulfato de
bario (05 de la escala de Mac Farland) como estaacutendar
Preparacioacuten del estaacutendar de turbidez
a Agregar 05 ml de una solucioacuten de BaCl2 0048 M (BaCl22H2O al 1175 PV)
a 995 mL de una solucioacuten de H2SO4 018 M (036 N) (1 VV) en constante
movimiento para mantener la suspensioacuten
b Verificar la densidad correcta del estaacutendar usando un fotocoloriacutemetro oacute
espectrofotoacutemetro cuya absorbancia a 625 nm es 008 a 010 para el estaacutendar 05
de Mc Farland
c Distribuir de 4 ml a 6 ml en tubos con tapa de rosca o tapoacuten de jebe similares a
los que se usaraacuten para preparar el inoacuteculo
Laboratorio Cliacutenico PAULINA ARROLLO PEREacuteZ
d Ajustar bien las tapas o tapones y conservarlos en la oscuridad a temperatura
ambiente y anotar la fecha de preparacioacuten
e Antes de ser usado agitar vigorosamente dicho estaacutendar de preferencia en un
agitador mecaacutenico
f Verificar mensualmente la densidad de los estaacutendares de sulfato de bario y
reemplazarlo cuando sea necesario
INOCULACIOacuteN
Preparacioacuten del inoacuteculo
Puede realizarse de dos formas
Meacutetodo de desarrollo previo
a Seleccionar cuatro a cinco colonias bien aisladas del mismo tipo morfoloacutegico
de un cultivo en placa
b Tocar la superficie de cada colonia con una asa de siembra y transferirlo a un
tubo que contiene de 4 a 5 mL de caldo apropiado (Ej Caldo Tripticasa soya)
c Incubar el caldo a una temperatura entre 35degC a 37degC hasta que alcance o
exceda la turbidez del estaacutendar 05 de la escala de Mc Farland (por lo general de
2 a 6 horas)
d Ajustar la turbidez del inoacuteculo con solucioacuten salina o caldo apropiado hasta el
tubo 05 de la escala de Mc Farland por comparacioacuten visual con el estaacutendar Para
realizar este paso correctamente usar una luz apropiada y mirar los tubos contra
un fondo blanco con liacuteneas negras como contraste
e La suspensioacuten preparada contendraacute aproximadamente 1 a 2 x 108 UFCmL
Meacutetodo directo de inoculacioacuten a partir de colonias aisladas
a De una placa de cultivo con agar no selectivo e incubada por 18 - 24 h
seleccionar colonias aisladas y preparar una suspensioacutem directa en solucioacuten
salina oacute caldo
b La suspensioacuten debe ser inmediatamente ajustada a la escala 05 de Mc
Farland
Inoculacioacuten de las Placas
Dentro de los 15 minutos siguientes al ajuste de la turbidez del inoacuteculo sumergir
un hisopo esteacuteril en la suspensioacuten rotar el hisopo varias veces presionando
Laboratorio Cliacutenico PAULINA ARROLLO PEREacuteZ
firmemente sobre la pared interior del tubo por encima del nivel del liacutequido para
remover el exceso de inoacuteculo
Inocular la superficie seca de la placa de Mueller Hinton estriando con el hisopo
en tres direcciones para asegurar una distribucioacuten uniforme del inoacuteculo Antes de
colocar los discos dejar secar la placa a temperatura ambiente durante 3 a 5
minutos para que cualquier exceso de humedad superficial sea absorbido
APLICACIOacuteN DE LOS DISCOS
Colocar los discos individuales o multidiscos sobre la superficie del agar con la
ayuda de una pinza esteacuteril o la punta de una aguja presionando suavemente sobre
cada disco para asegurar un contacto completo con la superficie del agar
Distribuir los discos uniformemente de modo que esteacuten a una distancia miacutenima de
25 mm uno del otro (el diaacutemetro de los discos seguacuten las normas de la
Organizacioacuten Mundial de la Salud (OMS) debe ser de 6 mm) No deben colocarse
maacutes de 12 discos en una placa de 150 mm ni maacutes de 6 en una placa de 100 mm
de diaacutemetro interno para evitar la superposicioacuten de las zonas de inhibicioacuten Un
disco no debe ser removido una vez que tomoacute contacto con la superficie del agar
debido a que algunos antibioacuteticos se difunden raacutepidamente
INCUBACIOacuteN
Laboratorio Cliacutenico PAULINA ARROLLO PEREacuteZ
Incubar lar placas en posicioacuten invertida a 35degC por 18 a 24 horas dentro de los 15
minutos posteriores a la aplicacioacuten de los discos
Despueacutes del tiempo recomendado de incubacioacuten examinar cada placa y medir los
diaacutemetros de los halos de inhibicioacuten alrededor de cada disco
LECTURA DE LAS PLACAS E INTERPRETACIOacuteN DE LOS RESULTADOS
Medir los diaacutemetros de las zonas de inhibicioacuten completa (incluyendo el diaacutemetro
del disco) usando
una regla o calibrador Se debe mantener iluminada la parte posterior de la placa
petri con una luz reflejada localizada a unos cuantos centiacutemetros sobre un fondo
negro Tener la precaucioacuten de observar la placa siguiendo una vertical directa para
evitar una lectura erroacutenea de las marcas de la regla por efecto de paralelismo En
los medios suplementados con sangre las zonas son medidas en la parte superior
de la superficie del agar y retirando la tapa Tener cuidado de no medir la zona de
la hemoacutelisis sino la de inhibicioacuten del crecimiento
El punto final debe tomarse como el aacuterea que no muestra un crecimiento obvio
visible que puede ser detectado mediante observacioacuten visual no incluyendo velo
de crecimiento o colonias muy pequentildeas que puedan ser detectadas solo con
mucha dificultad en el borde de la zona Sin embargo las colonias mayores
creciendo dentro de la zona clara deberaacuten ser subcultivadas reidentificadas y
reensayadas Algunos Proteus spp debido a su gran movilidad pueden presentar
un velo de invasioacuten o ldquoswarmingrdquo dentro de las zonas de inhibicioacuten de algunos
antibioacuteticos En estos casos el velo del swarming debe ser ignorado al momento
de medir los halos de inhibicioacuten
DISCOS DE SENSIBILIDAD ANTIBIOacuteTICA A INCLUIR EN EL ANTIBIOGRAMA
Grupo I
Ampicilina
Cefalotina
Ampicilina Sulbactam o Amoxicilina Aacutecido Clavulaacutenico
Cefuroxima
Cefotaxima o Ceftriaxona
Gentamicina
Laboratorio Cliacutenico PAULINA ARROLLO PEREacuteZ
Amikacina
Aacutecido Nalidiacutexico(1)
Norfloxacina(1)
Ciprofloxacina
Cotrimoxazol (TrimetoprimSulfametoxazol)
Nitrofurantoiacutena(1)
Grupo II
Cefoxitina
Aztreonam
Ceftazidima
Cefixima
CefoperazonaSulbactam
Cefepime o Cefpirome
Imipenem o Meropenem
Cloramfenicol
Ofloxacina (1)
(1) Disco utilizado exclusivamente para infecciones de las viacuteas urinarias
Resistencias Naturales
Las enterobacterias son resistentes a Penicilina Oxacilina Macroacutelidos
Clindamicina y Glicopeacuteptidos
Klebsiella spp es resistente a las Aminopenicilinas
Citrobacter freundii Enterobacter cloacae y Enterobacter aerogenes son
resistentes a las Aminopenicilinas AminopenicilinasInhibidores de
betalactamasas Cefalosporinas de primera generacioacuten y Cefuroxima
Serratia marcescens es resistente a las Aminopenicilinas
AminopenicilinasInhibidores de betalactamasas Cefalosporinas de primera
generacioacuten y Cefoxitina
Proteus mirabilis es resistente a Nitrofurantoiacutena
Proteus vulgaris es resistente a las Aminopenicilinas Cefalosporinas de primera
generacioacuten Cefuroxima y Nitrofurantoiacutena
Laboratorio Cliacutenico PAULINA ARROLLO PEREacuteZ
Morganella morganii es resistente a las Aminopenicilinas
AminopenicilinasInhibidores de betalactamasas Cefalosporinas de primera
generacioacuten Cefuroxima y Nitrofurantoiacutena
Providentia stuartii es resistente a las Aminopenicilinas
AminopenicilinasInhibidores de betalactamasas Cefalosporinas de primera
generacioacuten Gentamicina (bajo nivel) y Nitrofurantoiacutena
ANTIBIOTICOS Y DIAMETROS CRITICOS PARA ENTEROBACTERIAS
E PRACTICA 7
EXAMEN QUIMICO DE CALCULO RENAL
EXAMEN FISICO
Laboratorio Cliacutenico PAULINA ARROLLO PEREacuteZ
Se debe pesar el caacutelculo y anotar el dato obtenido Medir dos de los diaacutemetros y
tomar nota del aspecto general textura y color y despueacutes de seccionado el
aspecto general la prominencia y el color de los distintos estratos
Se secciona el caacutelculo con una sierra Se raspan las caras con una aguja Se
procede lo mismo con el nuacutecleo Cada una de las muestras obtenidas se trituran
por separado en un mortero
PROCESO
Se coloca una porcioacuten del polvo del caacutelculo en un crisol y se calienta al fuego Si
no hay ennegrecimiento ni se altera el tamantildeo original el caacutelculo estaraacute formado
por sustancias inorgaacutenicas Si en cambio se carboniza desapareciendo estaraacute
formado por sustancias orgaacutenicas Si se funde y se ennegrece este caacutelculo estaacute
formado por sulfamidasa
Una vez obtenidos los datos pueden seleccionarse las reacciones necesarias
para confirmarlos
REACCIONES QUIMICAS
Solucioacuten A
10mg del polvo en matraz y antildeadir 50 ml de ClH 5 Observar si se
produce efervescencia Calentar en bantildeo de agua hirviendo por 10 a 15 minutos y
filtrar en caliente El filtrado se distribuye en 8 tubos numerados y se introduce un
trocito de papel tornasol en cada uno
Solucioacuten B
Agitar con Cl3CH unos 10 mg del polvo Reposar en tubo tapado a
temperatura ambiente hasta que el insoluble haya precipitado Decantar la
solucioacuten clorofoacutermica y guardar igual que el sedimento por separado
Carbonato efervescencia al agregar el CIH por desprendimiento de CO 2
Amonio al tubo 1 de la solucioacuten A se le agrega solucioacuten de OHNa 10 gota a
gota y agitando hasta que el papel tornasol vire
Agregar 1 ml de reactivo de Nessler Un color amarillo oscuro oporto indica
positividad de la reaccioacuten
Laboratorio Cliacutenico PAULINA ARROLLO PEREacuteZ
El NH 3 formado por los grupos NH 4 en medio alcalino reacciona con el yoiduro
doble del reactivo de Nesler para dar yoduro amoacutenico dimercuacuterico precipitado
pardo anaranjado
Acido uacuterico Neutralizar el contenido del tubo 2 como se explicoacute antes
Agregar igual volumen de CNN Na 2 y 05 ml de reactivo de Folin para aacutecido
uacuterico Un color azul intenso indica presencia de aacutecido uacuterico
El aacutecido uacuterico reduce al aacutecido fosfotuacutengstico en medio alcalino dando color azul
intenso de azul de tungsteno y a su vez se oxida a alantoiacutena
Reactivo fosfotuacutengstico (Folin y Denis) Antes del uso diluir al 10 en agua
destilada
Oxalato de calcio Neutralizar el contenido del tubo 3 Agregar CH 3 COOH 10
hasta reaccioacuten aacutecida al tornasol Precipitado blanco que no se redisuelve por
agitacioacuten indica presencia de oxalato de calcio
Calcio Neutralizar el tubo 4 Acidificar con CH 3 COOH glacial Agregar 2 ml C 2
O 4 ( NH 4 ) 4 Precipitado blancodenso indica presencia de Ca ++
Fosfato Neutralizar el tubo 5 Agregar 1 ml de solucioacuten de molibdato Mezclar
antildeadir 05 ml de aacutecido aminonaftol sulfoacutenico (ANS) 025 Coloracioacuten azul que
aparece en 5 minutos indica fosfatos
El color azul se debe a los oacutexidos reducidos de molibdeno
Reactivos
1 ClH concentrado2 Solucioacuten de OHK 203 NO 3 H concentrado4 Mo O 4 (NH 4 ) 2 disolver 25 g de la droga en 50 ml de SO 4 H 2 10 N y
diluir a 100 ml con H2 O destilada5 Amoniacuteaco
Reactivo ANS En matraz x 250 ml poner 05 g de aacutecido aminonaftolsulfoacutenico y
agrgar 195 ml de bisulfito de sodio 15 y 5 ml de sulfito de sodio 20 Mezclar
bien hasta disolucioacuten Si no se disuelve en media hora agregar maacutes sulfito y
agitar El reactivo dura unas 2 semanas
Laboratorio Cliacutenico PAULINA ARROLLO PEREacuteZ
Magnesio Neutralizar el tubo 7 con OHNH 4 y antildeadir 1 ml de solucioacuten alcohoacutelica
de p ndash Nitrobenceno azorresorcinol Un cromoacutegeno rojo indica presencia de
magnesio
En medio alcalino se forma (OH) 2 Mg El colorante azo resulta absorbido por el
(OH) 2 Mg en medio alcalino
Xantina A un tercio del residuo de la solucioacuten B agregarle gotas de NO 3 H
concentrado
Se disuelve el residuo sin desprender gas Evaporar a sequedad en bantildeo Mariacutea
hirviente quedando un residuo amarillo Dejar enfriar y humedecer con gotas de
OHNa 10 Una coloracioacuten anaranjada que vira al rojo oscuro al calentar indica
presencia de xantina
La reaccioacuten es la xantoproteica Migracioacuten de los anillos fenilo existentes en la
tirosina fenilalanina y triptoacutefano que da un color amarillo de los productos de
nitrosustitucioacuten para virar al anaranjado tras la adicioacuten de un aacutelcali ( formacioacuten de
la sal)
Nota El reactivo de molibdato se puede preparar asiacute
Solucioacuten 1 SO 4 H 2 01 N
Medir 450 ml de SO4 H 2 concentrado y agregarlos a 1300 ml de agua
destilada
Solucioacuten 2
A 250 ml de SO 4 H 2 01 N antildeadir la solucioacuten de molibdato y llevar con
agua destilada a 250 ml Mezclar
Sulfamidas Neutralizar el uacuteltimo tubo Antildeadir 1 ml de NO 2 Na 05 preparado
recientemente Agitar y reposar por 3 minutos Antildeadir 5 ml de solucioacuten alcohoacutelica
de dimetil-alfa naftilamina 025 Un color rojizo indica presencia de sulfamidas
Finalmente procede hacer mencioacuten de ciertos procedimientos fiacutesicos como la
microscopia de polarizacioacuten difraccioacuten de rayos X cristalografiacutea
espectrofotometriacutea de rayos infrarrojos etc que permiten actualmente un
conocimiento maacutes confiable de la estructura de los caacutelculos
- Reactivos
-
Laboratorio Cliacutenico PAULINA ARROLLO PEREacuteZ
ANTIBIOGRAMA
Preparacioacuten del Agar Mueller Hinton
Preparar el medio a partir de la base deshidratada de acuerdo a las
indicaciones del fabricante
Autoclavar y dejar enfriar en bantildeo de agua hasta que alcance los 45degC - 50degC
Repartir el medio en placas petri (60 ml ndash 70 ml o 25 ml ndash 30 ml para placas de
150 mm o 100 mm de diaacutemetro interno respectivamente) de manera que el
grosor del agar en la placa sea de 4 mm
Realizar las pruebas de esterilidad para cada lote de Mueller Hinton incubando
una o dos placas de cada lote a 30degC ndash 35degC durante 24 horas o maacutes Estas
placas utilizadas deben ser luego descartadas
Preparacioacuten del estaacutendar (05 Mc Farland) para el inoacuteculo
Para estandarizar la densidad del inoacuteculo se usa una suspensioacuten de sulfato de
bario (05 de la escala de Mac Farland) como estaacutendar
Preparacioacuten del estaacutendar de turbidez
a Agregar 05 ml de una solucioacuten de BaCl2 0048 M (BaCl22H2O al 1175 PV)
a 995 mL de una solucioacuten de H2SO4 018 M (036 N) (1 VV) en constante
movimiento para mantener la suspensioacuten
b Verificar la densidad correcta del estaacutendar usando un fotocoloriacutemetro oacute
espectrofotoacutemetro cuya absorbancia a 625 nm es 008 a 010 para el estaacutendar 05
de Mc Farland
c Distribuir de 4 ml a 6 ml en tubos con tapa de rosca o tapoacuten de jebe similares a
los que se usaraacuten para preparar el inoacuteculo
Laboratorio Cliacutenico PAULINA ARROLLO PEREacuteZ
d Ajustar bien las tapas o tapones y conservarlos en la oscuridad a temperatura
ambiente y anotar la fecha de preparacioacuten
e Antes de ser usado agitar vigorosamente dicho estaacutendar de preferencia en un
agitador mecaacutenico
f Verificar mensualmente la densidad de los estaacutendares de sulfato de bario y
reemplazarlo cuando sea necesario
INOCULACIOacuteN
Preparacioacuten del inoacuteculo
Puede realizarse de dos formas
Meacutetodo de desarrollo previo
a Seleccionar cuatro a cinco colonias bien aisladas del mismo tipo morfoloacutegico
de un cultivo en placa
b Tocar la superficie de cada colonia con una asa de siembra y transferirlo a un
tubo que contiene de 4 a 5 mL de caldo apropiado (Ej Caldo Tripticasa soya)
c Incubar el caldo a una temperatura entre 35degC a 37degC hasta que alcance o
exceda la turbidez del estaacutendar 05 de la escala de Mc Farland (por lo general de
2 a 6 horas)
d Ajustar la turbidez del inoacuteculo con solucioacuten salina o caldo apropiado hasta el
tubo 05 de la escala de Mc Farland por comparacioacuten visual con el estaacutendar Para
realizar este paso correctamente usar una luz apropiada y mirar los tubos contra
un fondo blanco con liacuteneas negras como contraste
e La suspensioacuten preparada contendraacute aproximadamente 1 a 2 x 108 UFCmL
Meacutetodo directo de inoculacioacuten a partir de colonias aisladas
a De una placa de cultivo con agar no selectivo e incubada por 18 - 24 h
seleccionar colonias aisladas y preparar una suspensioacutem directa en solucioacuten
salina oacute caldo
b La suspensioacuten debe ser inmediatamente ajustada a la escala 05 de Mc
Farland
Inoculacioacuten de las Placas
Dentro de los 15 minutos siguientes al ajuste de la turbidez del inoacuteculo sumergir
un hisopo esteacuteril en la suspensioacuten rotar el hisopo varias veces presionando
Laboratorio Cliacutenico PAULINA ARROLLO PEREacuteZ
firmemente sobre la pared interior del tubo por encima del nivel del liacutequido para
remover el exceso de inoacuteculo
Inocular la superficie seca de la placa de Mueller Hinton estriando con el hisopo
en tres direcciones para asegurar una distribucioacuten uniforme del inoacuteculo Antes de
colocar los discos dejar secar la placa a temperatura ambiente durante 3 a 5
minutos para que cualquier exceso de humedad superficial sea absorbido
APLICACIOacuteN DE LOS DISCOS
Colocar los discos individuales o multidiscos sobre la superficie del agar con la
ayuda de una pinza esteacuteril o la punta de una aguja presionando suavemente sobre
cada disco para asegurar un contacto completo con la superficie del agar
Distribuir los discos uniformemente de modo que esteacuten a una distancia miacutenima de
25 mm uno del otro (el diaacutemetro de los discos seguacuten las normas de la
Organizacioacuten Mundial de la Salud (OMS) debe ser de 6 mm) No deben colocarse
maacutes de 12 discos en una placa de 150 mm ni maacutes de 6 en una placa de 100 mm
de diaacutemetro interno para evitar la superposicioacuten de las zonas de inhibicioacuten Un
disco no debe ser removido una vez que tomoacute contacto con la superficie del agar
debido a que algunos antibioacuteticos se difunden raacutepidamente
INCUBACIOacuteN
Laboratorio Cliacutenico PAULINA ARROLLO PEREacuteZ
Incubar lar placas en posicioacuten invertida a 35degC por 18 a 24 horas dentro de los 15
minutos posteriores a la aplicacioacuten de los discos
Despueacutes del tiempo recomendado de incubacioacuten examinar cada placa y medir los
diaacutemetros de los halos de inhibicioacuten alrededor de cada disco
LECTURA DE LAS PLACAS E INTERPRETACIOacuteN DE LOS RESULTADOS
Medir los diaacutemetros de las zonas de inhibicioacuten completa (incluyendo el diaacutemetro
del disco) usando
una regla o calibrador Se debe mantener iluminada la parte posterior de la placa
petri con una luz reflejada localizada a unos cuantos centiacutemetros sobre un fondo
negro Tener la precaucioacuten de observar la placa siguiendo una vertical directa para
evitar una lectura erroacutenea de las marcas de la regla por efecto de paralelismo En
los medios suplementados con sangre las zonas son medidas en la parte superior
de la superficie del agar y retirando la tapa Tener cuidado de no medir la zona de
la hemoacutelisis sino la de inhibicioacuten del crecimiento
El punto final debe tomarse como el aacuterea que no muestra un crecimiento obvio
visible que puede ser detectado mediante observacioacuten visual no incluyendo velo
de crecimiento o colonias muy pequentildeas que puedan ser detectadas solo con
mucha dificultad en el borde de la zona Sin embargo las colonias mayores
creciendo dentro de la zona clara deberaacuten ser subcultivadas reidentificadas y
reensayadas Algunos Proteus spp debido a su gran movilidad pueden presentar
un velo de invasioacuten o ldquoswarmingrdquo dentro de las zonas de inhibicioacuten de algunos
antibioacuteticos En estos casos el velo del swarming debe ser ignorado al momento
de medir los halos de inhibicioacuten
DISCOS DE SENSIBILIDAD ANTIBIOacuteTICA A INCLUIR EN EL ANTIBIOGRAMA
Grupo I
Ampicilina
Cefalotina
Ampicilina Sulbactam o Amoxicilina Aacutecido Clavulaacutenico
Cefuroxima
Cefotaxima o Ceftriaxona
Gentamicina
Laboratorio Cliacutenico PAULINA ARROLLO PEREacuteZ
Amikacina
Aacutecido Nalidiacutexico(1)
Norfloxacina(1)
Ciprofloxacina
Cotrimoxazol (TrimetoprimSulfametoxazol)
Nitrofurantoiacutena(1)
Grupo II
Cefoxitina
Aztreonam
Ceftazidima
Cefixima
CefoperazonaSulbactam
Cefepime o Cefpirome
Imipenem o Meropenem
Cloramfenicol
Ofloxacina (1)
(1) Disco utilizado exclusivamente para infecciones de las viacuteas urinarias
Resistencias Naturales
Las enterobacterias son resistentes a Penicilina Oxacilina Macroacutelidos
Clindamicina y Glicopeacuteptidos
Klebsiella spp es resistente a las Aminopenicilinas
Citrobacter freundii Enterobacter cloacae y Enterobacter aerogenes son
resistentes a las Aminopenicilinas AminopenicilinasInhibidores de
betalactamasas Cefalosporinas de primera generacioacuten y Cefuroxima
Serratia marcescens es resistente a las Aminopenicilinas
AminopenicilinasInhibidores de betalactamasas Cefalosporinas de primera
generacioacuten y Cefoxitina
Proteus mirabilis es resistente a Nitrofurantoiacutena
Proteus vulgaris es resistente a las Aminopenicilinas Cefalosporinas de primera
generacioacuten Cefuroxima y Nitrofurantoiacutena
Laboratorio Cliacutenico PAULINA ARROLLO PEREacuteZ
Morganella morganii es resistente a las Aminopenicilinas
AminopenicilinasInhibidores de betalactamasas Cefalosporinas de primera
generacioacuten Cefuroxima y Nitrofurantoiacutena
Providentia stuartii es resistente a las Aminopenicilinas
AminopenicilinasInhibidores de betalactamasas Cefalosporinas de primera
generacioacuten Gentamicina (bajo nivel) y Nitrofurantoiacutena
ANTIBIOTICOS Y DIAMETROS CRITICOS PARA ENTEROBACTERIAS
E PRACTICA 7
EXAMEN QUIMICO DE CALCULO RENAL
EXAMEN FISICO
Laboratorio Cliacutenico PAULINA ARROLLO PEREacuteZ
Se debe pesar el caacutelculo y anotar el dato obtenido Medir dos de los diaacutemetros y
tomar nota del aspecto general textura y color y despueacutes de seccionado el
aspecto general la prominencia y el color de los distintos estratos
Se secciona el caacutelculo con una sierra Se raspan las caras con una aguja Se
procede lo mismo con el nuacutecleo Cada una de las muestras obtenidas se trituran
por separado en un mortero
PROCESO
Se coloca una porcioacuten del polvo del caacutelculo en un crisol y se calienta al fuego Si
no hay ennegrecimiento ni se altera el tamantildeo original el caacutelculo estaraacute formado
por sustancias inorgaacutenicas Si en cambio se carboniza desapareciendo estaraacute
formado por sustancias orgaacutenicas Si se funde y se ennegrece este caacutelculo estaacute
formado por sulfamidasa
Una vez obtenidos los datos pueden seleccionarse las reacciones necesarias
para confirmarlos
REACCIONES QUIMICAS
Solucioacuten A
10mg del polvo en matraz y antildeadir 50 ml de ClH 5 Observar si se
produce efervescencia Calentar en bantildeo de agua hirviendo por 10 a 15 minutos y
filtrar en caliente El filtrado se distribuye en 8 tubos numerados y se introduce un
trocito de papel tornasol en cada uno
Solucioacuten B
Agitar con Cl3CH unos 10 mg del polvo Reposar en tubo tapado a
temperatura ambiente hasta que el insoluble haya precipitado Decantar la
solucioacuten clorofoacutermica y guardar igual que el sedimento por separado
Carbonato efervescencia al agregar el CIH por desprendimiento de CO 2
Amonio al tubo 1 de la solucioacuten A se le agrega solucioacuten de OHNa 10 gota a
gota y agitando hasta que el papel tornasol vire
Agregar 1 ml de reactivo de Nessler Un color amarillo oscuro oporto indica
positividad de la reaccioacuten
Laboratorio Cliacutenico PAULINA ARROLLO PEREacuteZ
El NH 3 formado por los grupos NH 4 en medio alcalino reacciona con el yoiduro
doble del reactivo de Nesler para dar yoduro amoacutenico dimercuacuterico precipitado
pardo anaranjado
Acido uacuterico Neutralizar el contenido del tubo 2 como se explicoacute antes
Agregar igual volumen de CNN Na 2 y 05 ml de reactivo de Folin para aacutecido
uacuterico Un color azul intenso indica presencia de aacutecido uacuterico
El aacutecido uacuterico reduce al aacutecido fosfotuacutengstico en medio alcalino dando color azul
intenso de azul de tungsteno y a su vez se oxida a alantoiacutena
Reactivo fosfotuacutengstico (Folin y Denis) Antes del uso diluir al 10 en agua
destilada
Oxalato de calcio Neutralizar el contenido del tubo 3 Agregar CH 3 COOH 10
hasta reaccioacuten aacutecida al tornasol Precipitado blanco que no se redisuelve por
agitacioacuten indica presencia de oxalato de calcio
Calcio Neutralizar el tubo 4 Acidificar con CH 3 COOH glacial Agregar 2 ml C 2
O 4 ( NH 4 ) 4 Precipitado blancodenso indica presencia de Ca ++
Fosfato Neutralizar el tubo 5 Agregar 1 ml de solucioacuten de molibdato Mezclar
antildeadir 05 ml de aacutecido aminonaftol sulfoacutenico (ANS) 025 Coloracioacuten azul que
aparece en 5 minutos indica fosfatos
El color azul se debe a los oacutexidos reducidos de molibdeno
Reactivos
1 ClH concentrado2 Solucioacuten de OHK 203 NO 3 H concentrado4 Mo O 4 (NH 4 ) 2 disolver 25 g de la droga en 50 ml de SO 4 H 2 10 N y
diluir a 100 ml con H2 O destilada5 Amoniacuteaco
Reactivo ANS En matraz x 250 ml poner 05 g de aacutecido aminonaftolsulfoacutenico y
agrgar 195 ml de bisulfito de sodio 15 y 5 ml de sulfito de sodio 20 Mezclar
bien hasta disolucioacuten Si no se disuelve en media hora agregar maacutes sulfito y
agitar El reactivo dura unas 2 semanas
Laboratorio Cliacutenico PAULINA ARROLLO PEREacuteZ
Magnesio Neutralizar el tubo 7 con OHNH 4 y antildeadir 1 ml de solucioacuten alcohoacutelica
de p ndash Nitrobenceno azorresorcinol Un cromoacutegeno rojo indica presencia de
magnesio
En medio alcalino se forma (OH) 2 Mg El colorante azo resulta absorbido por el
(OH) 2 Mg en medio alcalino
Xantina A un tercio del residuo de la solucioacuten B agregarle gotas de NO 3 H
concentrado
Se disuelve el residuo sin desprender gas Evaporar a sequedad en bantildeo Mariacutea
hirviente quedando un residuo amarillo Dejar enfriar y humedecer con gotas de
OHNa 10 Una coloracioacuten anaranjada que vira al rojo oscuro al calentar indica
presencia de xantina
La reaccioacuten es la xantoproteica Migracioacuten de los anillos fenilo existentes en la
tirosina fenilalanina y triptoacutefano que da un color amarillo de los productos de
nitrosustitucioacuten para virar al anaranjado tras la adicioacuten de un aacutelcali ( formacioacuten de
la sal)
Nota El reactivo de molibdato se puede preparar asiacute
Solucioacuten 1 SO 4 H 2 01 N
Medir 450 ml de SO4 H 2 concentrado y agregarlos a 1300 ml de agua
destilada
Solucioacuten 2
A 250 ml de SO 4 H 2 01 N antildeadir la solucioacuten de molibdato y llevar con
agua destilada a 250 ml Mezclar
Sulfamidas Neutralizar el uacuteltimo tubo Antildeadir 1 ml de NO 2 Na 05 preparado
recientemente Agitar y reposar por 3 minutos Antildeadir 5 ml de solucioacuten alcohoacutelica
de dimetil-alfa naftilamina 025 Un color rojizo indica presencia de sulfamidas
Finalmente procede hacer mencioacuten de ciertos procedimientos fiacutesicos como la
microscopia de polarizacioacuten difraccioacuten de rayos X cristalografiacutea
espectrofotometriacutea de rayos infrarrojos etc que permiten actualmente un
conocimiento maacutes confiable de la estructura de los caacutelculos
- Reactivos
-
Laboratorio Cliacutenico PAULINA ARROLLO PEREacuteZ
d Ajustar bien las tapas o tapones y conservarlos en la oscuridad a temperatura
ambiente y anotar la fecha de preparacioacuten
e Antes de ser usado agitar vigorosamente dicho estaacutendar de preferencia en un
agitador mecaacutenico
f Verificar mensualmente la densidad de los estaacutendares de sulfato de bario y
reemplazarlo cuando sea necesario
INOCULACIOacuteN
Preparacioacuten del inoacuteculo
Puede realizarse de dos formas
Meacutetodo de desarrollo previo
a Seleccionar cuatro a cinco colonias bien aisladas del mismo tipo morfoloacutegico
de un cultivo en placa
b Tocar la superficie de cada colonia con una asa de siembra y transferirlo a un
tubo que contiene de 4 a 5 mL de caldo apropiado (Ej Caldo Tripticasa soya)
c Incubar el caldo a una temperatura entre 35degC a 37degC hasta que alcance o
exceda la turbidez del estaacutendar 05 de la escala de Mc Farland (por lo general de
2 a 6 horas)
d Ajustar la turbidez del inoacuteculo con solucioacuten salina o caldo apropiado hasta el
tubo 05 de la escala de Mc Farland por comparacioacuten visual con el estaacutendar Para
realizar este paso correctamente usar una luz apropiada y mirar los tubos contra
un fondo blanco con liacuteneas negras como contraste
e La suspensioacuten preparada contendraacute aproximadamente 1 a 2 x 108 UFCmL
Meacutetodo directo de inoculacioacuten a partir de colonias aisladas
a De una placa de cultivo con agar no selectivo e incubada por 18 - 24 h
seleccionar colonias aisladas y preparar una suspensioacutem directa en solucioacuten
salina oacute caldo
b La suspensioacuten debe ser inmediatamente ajustada a la escala 05 de Mc
Farland
Inoculacioacuten de las Placas
Dentro de los 15 minutos siguientes al ajuste de la turbidez del inoacuteculo sumergir
un hisopo esteacuteril en la suspensioacuten rotar el hisopo varias veces presionando
Laboratorio Cliacutenico PAULINA ARROLLO PEREacuteZ
firmemente sobre la pared interior del tubo por encima del nivel del liacutequido para
remover el exceso de inoacuteculo
Inocular la superficie seca de la placa de Mueller Hinton estriando con el hisopo
en tres direcciones para asegurar una distribucioacuten uniforme del inoacuteculo Antes de
colocar los discos dejar secar la placa a temperatura ambiente durante 3 a 5
minutos para que cualquier exceso de humedad superficial sea absorbido
APLICACIOacuteN DE LOS DISCOS
Colocar los discos individuales o multidiscos sobre la superficie del agar con la
ayuda de una pinza esteacuteril o la punta de una aguja presionando suavemente sobre
cada disco para asegurar un contacto completo con la superficie del agar
Distribuir los discos uniformemente de modo que esteacuten a una distancia miacutenima de
25 mm uno del otro (el diaacutemetro de los discos seguacuten las normas de la
Organizacioacuten Mundial de la Salud (OMS) debe ser de 6 mm) No deben colocarse
maacutes de 12 discos en una placa de 150 mm ni maacutes de 6 en una placa de 100 mm
de diaacutemetro interno para evitar la superposicioacuten de las zonas de inhibicioacuten Un
disco no debe ser removido una vez que tomoacute contacto con la superficie del agar
debido a que algunos antibioacuteticos se difunden raacutepidamente
INCUBACIOacuteN
Laboratorio Cliacutenico PAULINA ARROLLO PEREacuteZ
Incubar lar placas en posicioacuten invertida a 35degC por 18 a 24 horas dentro de los 15
minutos posteriores a la aplicacioacuten de los discos
Despueacutes del tiempo recomendado de incubacioacuten examinar cada placa y medir los
diaacutemetros de los halos de inhibicioacuten alrededor de cada disco
LECTURA DE LAS PLACAS E INTERPRETACIOacuteN DE LOS RESULTADOS
Medir los diaacutemetros de las zonas de inhibicioacuten completa (incluyendo el diaacutemetro
del disco) usando
una regla o calibrador Se debe mantener iluminada la parte posterior de la placa
petri con una luz reflejada localizada a unos cuantos centiacutemetros sobre un fondo
negro Tener la precaucioacuten de observar la placa siguiendo una vertical directa para
evitar una lectura erroacutenea de las marcas de la regla por efecto de paralelismo En
los medios suplementados con sangre las zonas son medidas en la parte superior
de la superficie del agar y retirando la tapa Tener cuidado de no medir la zona de
la hemoacutelisis sino la de inhibicioacuten del crecimiento
El punto final debe tomarse como el aacuterea que no muestra un crecimiento obvio
visible que puede ser detectado mediante observacioacuten visual no incluyendo velo
de crecimiento o colonias muy pequentildeas que puedan ser detectadas solo con
mucha dificultad en el borde de la zona Sin embargo las colonias mayores
creciendo dentro de la zona clara deberaacuten ser subcultivadas reidentificadas y
reensayadas Algunos Proteus spp debido a su gran movilidad pueden presentar
un velo de invasioacuten o ldquoswarmingrdquo dentro de las zonas de inhibicioacuten de algunos
antibioacuteticos En estos casos el velo del swarming debe ser ignorado al momento
de medir los halos de inhibicioacuten
DISCOS DE SENSIBILIDAD ANTIBIOacuteTICA A INCLUIR EN EL ANTIBIOGRAMA
Grupo I
Ampicilina
Cefalotina
Ampicilina Sulbactam o Amoxicilina Aacutecido Clavulaacutenico
Cefuroxima
Cefotaxima o Ceftriaxona
Gentamicina
Laboratorio Cliacutenico PAULINA ARROLLO PEREacuteZ
Amikacina
Aacutecido Nalidiacutexico(1)
Norfloxacina(1)
Ciprofloxacina
Cotrimoxazol (TrimetoprimSulfametoxazol)
Nitrofurantoiacutena(1)
Grupo II
Cefoxitina
Aztreonam
Ceftazidima
Cefixima
CefoperazonaSulbactam
Cefepime o Cefpirome
Imipenem o Meropenem
Cloramfenicol
Ofloxacina (1)
(1) Disco utilizado exclusivamente para infecciones de las viacuteas urinarias
Resistencias Naturales
Las enterobacterias son resistentes a Penicilina Oxacilina Macroacutelidos
Clindamicina y Glicopeacuteptidos
Klebsiella spp es resistente a las Aminopenicilinas
Citrobacter freundii Enterobacter cloacae y Enterobacter aerogenes son
resistentes a las Aminopenicilinas AminopenicilinasInhibidores de
betalactamasas Cefalosporinas de primera generacioacuten y Cefuroxima
Serratia marcescens es resistente a las Aminopenicilinas
AminopenicilinasInhibidores de betalactamasas Cefalosporinas de primera
generacioacuten y Cefoxitina
Proteus mirabilis es resistente a Nitrofurantoiacutena
Proteus vulgaris es resistente a las Aminopenicilinas Cefalosporinas de primera
generacioacuten Cefuroxima y Nitrofurantoiacutena
Laboratorio Cliacutenico PAULINA ARROLLO PEREacuteZ
Morganella morganii es resistente a las Aminopenicilinas
AminopenicilinasInhibidores de betalactamasas Cefalosporinas de primera
generacioacuten Cefuroxima y Nitrofurantoiacutena
Providentia stuartii es resistente a las Aminopenicilinas
AminopenicilinasInhibidores de betalactamasas Cefalosporinas de primera
generacioacuten Gentamicina (bajo nivel) y Nitrofurantoiacutena
ANTIBIOTICOS Y DIAMETROS CRITICOS PARA ENTEROBACTERIAS
E PRACTICA 7
EXAMEN QUIMICO DE CALCULO RENAL
EXAMEN FISICO
Laboratorio Cliacutenico PAULINA ARROLLO PEREacuteZ
Se debe pesar el caacutelculo y anotar el dato obtenido Medir dos de los diaacutemetros y
tomar nota del aspecto general textura y color y despueacutes de seccionado el
aspecto general la prominencia y el color de los distintos estratos
Se secciona el caacutelculo con una sierra Se raspan las caras con una aguja Se
procede lo mismo con el nuacutecleo Cada una de las muestras obtenidas se trituran
por separado en un mortero
PROCESO
Se coloca una porcioacuten del polvo del caacutelculo en un crisol y se calienta al fuego Si
no hay ennegrecimiento ni se altera el tamantildeo original el caacutelculo estaraacute formado
por sustancias inorgaacutenicas Si en cambio se carboniza desapareciendo estaraacute
formado por sustancias orgaacutenicas Si se funde y se ennegrece este caacutelculo estaacute
formado por sulfamidasa
Una vez obtenidos los datos pueden seleccionarse las reacciones necesarias
para confirmarlos
REACCIONES QUIMICAS
Solucioacuten A
10mg del polvo en matraz y antildeadir 50 ml de ClH 5 Observar si se
produce efervescencia Calentar en bantildeo de agua hirviendo por 10 a 15 minutos y
filtrar en caliente El filtrado se distribuye en 8 tubos numerados y se introduce un
trocito de papel tornasol en cada uno
Solucioacuten B
Agitar con Cl3CH unos 10 mg del polvo Reposar en tubo tapado a
temperatura ambiente hasta que el insoluble haya precipitado Decantar la
solucioacuten clorofoacutermica y guardar igual que el sedimento por separado
Carbonato efervescencia al agregar el CIH por desprendimiento de CO 2
Amonio al tubo 1 de la solucioacuten A se le agrega solucioacuten de OHNa 10 gota a
gota y agitando hasta que el papel tornasol vire
Agregar 1 ml de reactivo de Nessler Un color amarillo oscuro oporto indica
positividad de la reaccioacuten
Laboratorio Cliacutenico PAULINA ARROLLO PEREacuteZ
El NH 3 formado por los grupos NH 4 en medio alcalino reacciona con el yoiduro
doble del reactivo de Nesler para dar yoduro amoacutenico dimercuacuterico precipitado
pardo anaranjado
Acido uacuterico Neutralizar el contenido del tubo 2 como se explicoacute antes
Agregar igual volumen de CNN Na 2 y 05 ml de reactivo de Folin para aacutecido
uacuterico Un color azul intenso indica presencia de aacutecido uacuterico
El aacutecido uacuterico reduce al aacutecido fosfotuacutengstico en medio alcalino dando color azul
intenso de azul de tungsteno y a su vez se oxida a alantoiacutena
Reactivo fosfotuacutengstico (Folin y Denis) Antes del uso diluir al 10 en agua
destilada
Oxalato de calcio Neutralizar el contenido del tubo 3 Agregar CH 3 COOH 10
hasta reaccioacuten aacutecida al tornasol Precipitado blanco que no se redisuelve por
agitacioacuten indica presencia de oxalato de calcio
Calcio Neutralizar el tubo 4 Acidificar con CH 3 COOH glacial Agregar 2 ml C 2
O 4 ( NH 4 ) 4 Precipitado blancodenso indica presencia de Ca ++
Fosfato Neutralizar el tubo 5 Agregar 1 ml de solucioacuten de molibdato Mezclar
antildeadir 05 ml de aacutecido aminonaftol sulfoacutenico (ANS) 025 Coloracioacuten azul que
aparece en 5 minutos indica fosfatos
El color azul se debe a los oacutexidos reducidos de molibdeno
Reactivos
1 ClH concentrado2 Solucioacuten de OHK 203 NO 3 H concentrado4 Mo O 4 (NH 4 ) 2 disolver 25 g de la droga en 50 ml de SO 4 H 2 10 N y
diluir a 100 ml con H2 O destilada5 Amoniacuteaco
Reactivo ANS En matraz x 250 ml poner 05 g de aacutecido aminonaftolsulfoacutenico y
agrgar 195 ml de bisulfito de sodio 15 y 5 ml de sulfito de sodio 20 Mezclar
bien hasta disolucioacuten Si no se disuelve en media hora agregar maacutes sulfito y
agitar El reactivo dura unas 2 semanas
Laboratorio Cliacutenico PAULINA ARROLLO PEREacuteZ
Magnesio Neutralizar el tubo 7 con OHNH 4 y antildeadir 1 ml de solucioacuten alcohoacutelica
de p ndash Nitrobenceno azorresorcinol Un cromoacutegeno rojo indica presencia de
magnesio
En medio alcalino se forma (OH) 2 Mg El colorante azo resulta absorbido por el
(OH) 2 Mg en medio alcalino
Xantina A un tercio del residuo de la solucioacuten B agregarle gotas de NO 3 H
concentrado
Se disuelve el residuo sin desprender gas Evaporar a sequedad en bantildeo Mariacutea
hirviente quedando un residuo amarillo Dejar enfriar y humedecer con gotas de
OHNa 10 Una coloracioacuten anaranjada que vira al rojo oscuro al calentar indica
presencia de xantina
La reaccioacuten es la xantoproteica Migracioacuten de los anillos fenilo existentes en la
tirosina fenilalanina y triptoacutefano que da un color amarillo de los productos de
nitrosustitucioacuten para virar al anaranjado tras la adicioacuten de un aacutelcali ( formacioacuten de
la sal)
Nota El reactivo de molibdato se puede preparar asiacute
Solucioacuten 1 SO 4 H 2 01 N
Medir 450 ml de SO4 H 2 concentrado y agregarlos a 1300 ml de agua
destilada
Solucioacuten 2
A 250 ml de SO 4 H 2 01 N antildeadir la solucioacuten de molibdato y llevar con
agua destilada a 250 ml Mezclar
Sulfamidas Neutralizar el uacuteltimo tubo Antildeadir 1 ml de NO 2 Na 05 preparado
recientemente Agitar y reposar por 3 minutos Antildeadir 5 ml de solucioacuten alcohoacutelica
de dimetil-alfa naftilamina 025 Un color rojizo indica presencia de sulfamidas
Finalmente procede hacer mencioacuten de ciertos procedimientos fiacutesicos como la
microscopia de polarizacioacuten difraccioacuten de rayos X cristalografiacutea
espectrofotometriacutea de rayos infrarrojos etc que permiten actualmente un
conocimiento maacutes confiable de la estructura de los caacutelculos
- Reactivos
-
Laboratorio Cliacutenico PAULINA ARROLLO PEREacuteZ
firmemente sobre la pared interior del tubo por encima del nivel del liacutequido para
remover el exceso de inoacuteculo
Inocular la superficie seca de la placa de Mueller Hinton estriando con el hisopo
en tres direcciones para asegurar una distribucioacuten uniforme del inoacuteculo Antes de
colocar los discos dejar secar la placa a temperatura ambiente durante 3 a 5
minutos para que cualquier exceso de humedad superficial sea absorbido
APLICACIOacuteN DE LOS DISCOS
Colocar los discos individuales o multidiscos sobre la superficie del agar con la
ayuda de una pinza esteacuteril o la punta de una aguja presionando suavemente sobre
cada disco para asegurar un contacto completo con la superficie del agar
Distribuir los discos uniformemente de modo que esteacuten a una distancia miacutenima de
25 mm uno del otro (el diaacutemetro de los discos seguacuten las normas de la
Organizacioacuten Mundial de la Salud (OMS) debe ser de 6 mm) No deben colocarse
maacutes de 12 discos en una placa de 150 mm ni maacutes de 6 en una placa de 100 mm
de diaacutemetro interno para evitar la superposicioacuten de las zonas de inhibicioacuten Un
disco no debe ser removido una vez que tomoacute contacto con la superficie del agar
debido a que algunos antibioacuteticos se difunden raacutepidamente
INCUBACIOacuteN
Laboratorio Cliacutenico PAULINA ARROLLO PEREacuteZ
Incubar lar placas en posicioacuten invertida a 35degC por 18 a 24 horas dentro de los 15
minutos posteriores a la aplicacioacuten de los discos
Despueacutes del tiempo recomendado de incubacioacuten examinar cada placa y medir los
diaacutemetros de los halos de inhibicioacuten alrededor de cada disco
LECTURA DE LAS PLACAS E INTERPRETACIOacuteN DE LOS RESULTADOS
Medir los diaacutemetros de las zonas de inhibicioacuten completa (incluyendo el diaacutemetro
del disco) usando
una regla o calibrador Se debe mantener iluminada la parte posterior de la placa
petri con una luz reflejada localizada a unos cuantos centiacutemetros sobre un fondo
negro Tener la precaucioacuten de observar la placa siguiendo una vertical directa para
evitar una lectura erroacutenea de las marcas de la regla por efecto de paralelismo En
los medios suplementados con sangre las zonas son medidas en la parte superior
de la superficie del agar y retirando la tapa Tener cuidado de no medir la zona de
la hemoacutelisis sino la de inhibicioacuten del crecimiento
El punto final debe tomarse como el aacuterea que no muestra un crecimiento obvio
visible que puede ser detectado mediante observacioacuten visual no incluyendo velo
de crecimiento o colonias muy pequentildeas que puedan ser detectadas solo con
mucha dificultad en el borde de la zona Sin embargo las colonias mayores
creciendo dentro de la zona clara deberaacuten ser subcultivadas reidentificadas y
reensayadas Algunos Proteus spp debido a su gran movilidad pueden presentar
un velo de invasioacuten o ldquoswarmingrdquo dentro de las zonas de inhibicioacuten de algunos
antibioacuteticos En estos casos el velo del swarming debe ser ignorado al momento
de medir los halos de inhibicioacuten
DISCOS DE SENSIBILIDAD ANTIBIOacuteTICA A INCLUIR EN EL ANTIBIOGRAMA
Grupo I
Ampicilina
Cefalotina
Ampicilina Sulbactam o Amoxicilina Aacutecido Clavulaacutenico
Cefuroxima
Cefotaxima o Ceftriaxona
Gentamicina
Laboratorio Cliacutenico PAULINA ARROLLO PEREacuteZ
Amikacina
Aacutecido Nalidiacutexico(1)
Norfloxacina(1)
Ciprofloxacina
Cotrimoxazol (TrimetoprimSulfametoxazol)
Nitrofurantoiacutena(1)
Grupo II
Cefoxitina
Aztreonam
Ceftazidima
Cefixima
CefoperazonaSulbactam
Cefepime o Cefpirome
Imipenem o Meropenem
Cloramfenicol
Ofloxacina (1)
(1) Disco utilizado exclusivamente para infecciones de las viacuteas urinarias
Resistencias Naturales
Las enterobacterias son resistentes a Penicilina Oxacilina Macroacutelidos
Clindamicina y Glicopeacuteptidos
Klebsiella spp es resistente a las Aminopenicilinas
Citrobacter freundii Enterobacter cloacae y Enterobacter aerogenes son
resistentes a las Aminopenicilinas AminopenicilinasInhibidores de
betalactamasas Cefalosporinas de primera generacioacuten y Cefuroxima
Serratia marcescens es resistente a las Aminopenicilinas
AminopenicilinasInhibidores de betalactamasas Cefalosporinas de primera
generacioacuten y Cefoxitina
Proteus mirabilis es resistente a Nitrofurantoiacutena
Proteus vulgaris es resistente a las Aminopenicilinas Cefalosporinas de primera
generacioacuten Cefuroxima y Nitrofurantoiacutena
Laboratorio Cliacutenico PAULINA ARROLLO PEREacuteZ
Morganella morganii es resistente a las Aminopenicilinas
AminopenicilinasInhibidores de betalactamasas Cefalosporinas de primera
generacioacuten Cefuroxima y Nitrofurantoiacutena
Providentia stuartii es resistente a las Aminopenicilinas
AminopenicilinasInhibidores de betalactamasas Cefalosporinas de primera
generacioacuten Gentamicina (bajo nivel) y Nitrofurantoiacutena
ANTIBIOTICOS Y DIAMETROS CRITICOS PARA ENTEROBACTERIAS
E PRACTICA 7
EXAMEN QUIMICO DE CALCULO RENAL
EXAMEN FISICO
Laboratorio Cliacutenico PAULINA ARROLLO PEREacuteZ
Se debe pesar el caacutelculo y anotar el dato obtenido Medir dos de los diaacutemetros y
tomar nota del aspecto general textura y color y despueacutes de seccionado el
aspecto general la prominencia y el color de los distintos estratos
Se secciona el caacutelculo con una sierra Se raspan las caras con una aguja Se
procede lo mismo con el nuacutecleo Cada una de las muestras obtenidas se trituran
por separado en un mortero
PROCESO
Se coloca una porcioacuten del polvo del caacutelculo en un crisol y se calienta al fuego Si
no hay ennegrecimiento ni se altera el tamantildeo original el caacutelculo estaraacute formado
por sustancias inorgaacutenicas Si en cambio se carboniza desapareciendo estaraacute
formado por sustancias orgaacutenicas Si se funde y se ennegrece este caacutelculo estaacute
formado por sulfamidasa
Una vez obtenidos los datos pueden seleccionarse las reacciones necesarias
para confirmarlos
REACCIONES QUIMICAS
Solucioacuten A
10mg del polvo en matraz y antildeadir 50 ml de ClH 5 Observar si se
produce efervescencia Calentar en bantildeo de agua hirviendo por 10 a 15 minutos y
filtrar en caliente El filtrado se distribuye en 8 tubos numerados y se introduce un
trocito de papel tornasol en cada uno
Solucioacuten B
Agitar con Cl3CH unos 10 mg del polvo Reposar en tubo tapado a
temperatura ambiente hasta que el insoluble haya precipitado Decantar la
solucioacuten clorofoacutermica y guardar igual que el sedimento por separado
Carbonato efervescencia al agregar el CIH por desprendimiento de CO 2
Amonio al tubo 1 de la solucioacuten A se le agrega solucioacuten de OHNa 10 gota a
gota y agitando hasta que el papel tornasol vire
Agregar 1 ml de reactivo de Nessler Un color amarillo oscuro oporto indica
positividad de la reaccioacuten
Laboratorio Cliacutenico PAULINA ARROLLO PEREacuteZ
El NH 3 formado por los grupos NH 4 en medio alcalino reacciona con el yoiduro
doble del reactivo de Nesler para dar yoduro amoacutenico dimercuacuterico precipitado
pardo anaranjado
Acido uacuterico Neutralizar el contenido del tubo 2 como se explicoacute antes
Agregar igual volumen de CNN Na 2 y 05 ml de reactivo de Folin para aacutecido
uacuterico Un color azul intenso indica presencia de aacutecido uacuterico
El aacutecido uacuterico reduce al aacutecido fosfotuacutengstico en medio alcalino dando color azul
intenso de azul de tungsteno y a su vez se oxida a alantoiacutena
Reactivo fosfotuacutengstico (Folin y Denis) Antes del uso diluir al 10 en agua
destilada
Oxalato de calcio Neutralizar el contenido del tubo 3 Agregar CH 3 COOH 10
hasta reaccioacuten aacutecida al tornasol Precipitado blanco que no se redisuelve por
agitacioacuten indica presencia de oxalato de calcio
Calcio Neutralizar el tubo 4 Acidificar con CH 3 COOH glacial Agregar 2 ml C 2
O 4 ( NH 4 ) 4 Precipitado blancodenso indica presencia de Ca ++
Fosfato Neutralizar el tubo 5 Agregar 1 ml de solucioacuten de molibdato Mezclar
antildeadir 05 ml de aacutecido aminonaftol sulfoacutenico (ANS) 025 Coloracioacuten azul que
aparece en 5 minutos indica fosfatos
El color azul se debe a los oacutexidos reducidos de molibdeno
Reactivos
1 ClH concentrado2 Solucioacuten de OHK 203 NO 3 H concentrado4 Mo O 4 (NH 4 ) 2 disolver 25 g de la droga en 50 ml de SO 4 H 2 10 N y
diluir a 100 ml con H2 O destilada5 Amoniacuteaco
Reactivo ANS En matraz x 250 ml poner 05 g de aacutecido aminonaftolsulfoacutenico y
agrgar 195 ml de bisulfito de sodio 15 y 5 ml de sulfito de sodio 20 Mezclar
bien hasta disolucioacuten Si no se disuelve en media hora agregar maacutes sulfito y
agitar El reactivo dura unas 2 semanas
Laboratorio Cliacutenico PAULINA ARROLLO PEREacuteZ
Magnesio Neutralizar el tubo 7 con OHNH 4 y antildeadir 1 ml de solucioacuten alcohoacutelica
de p ndash Nitrobenceno azorresorcinol Un cromoacutegeno rojo indica presencia de
magnesio
En medio alcalino se forma (OH) 2 Mg El colorante azo resulta absorbido por el
(OH) 2 Mg en medio alcalino
Xantina A un tercio del residuo de la solucioacuten B agregarle gotas de NO 3 H
concentrado
Se disuelve el residuo sin desprender gas Evaporar a sequedad en bantildeo Mariacutea
hirviente quedando un residuo amarillo Dejar enfriar y humedecer con gotas de
OHNa 10 Una coloracioacuten anaranjada que vira al rojo oscuro al calentar indica
presencia de xantina
La reaccioacuten es la xantoproteica Migracioacuten de los anillos fenilo existentes en la
tirosina fenilalanina y triptoacutefano que da un color amarillo de los productos de
nitrosustitucioacuten para virar al anaranjado tras la adicioacuten de un aacutelcali ( formacioacuten de
la sal)
Nota El reactivo de molibdato se puede preparar asiacute
Solucioacuten 1 SO 4 H 2 01 N
Medir 450 ml de SO4 H 2 concentrado y agregarlos a 1300 ml de agua
destilada
Solucioacuten 2
A 250 ml de SO 4 H 2 01 N antildeadir la solucioacuten de molibdato y llevar con
agua destilada a 250 ml Mezclar
Sulfamidas Neutralizar el uacuteltimo tubo Antildeadir 1 ml de NO 2 Na 05 preparado
recientemente Agitar y reposar por 3 minutos Antildeadir 5 ml de solucioacuten alcohoacutelica
de dimetil-alfa naftilamina 025 Un color rojizo indica presencia de sulfamidas
Finalmente procede hacer mencioacuten de ciertos procedimientos fiacutesicos como la
microscopia de polarizacioacuten difraccioacuten de rayos X cristalografiacutea
espectrofotometriacutea de rayos infrarrojos etc que permiten actualmente un
conocimiento maacutes confiable de la estructura de los caacutelculos
- Reactivos
-
Laboratorio Cliacutenico PAULINA ARROLLO PEREacuteZ
Incubar lar placas en posicioacuten invertida a 35degC por 18 a 24 horas dentro de los 15
minutos posteriores a la aplicacioacuten de los discos
Despueacutes del tiempo recomendado de incubacioacuten examinar cada placa y medir los
diaacutemetros de los halos de inhibicioacuten alrededor de cada disco
LECTURA DE LAS PLACAS E INTERPRETACIOacuteN DE LOS RESULTADOS
Medir los diaacutemetros de las zonas de inhibicioacuten completa (incluyendo el diaacutemetro
del disco) usando
una regla o calibrador Se debe mantener iluminada la parte posterior de la placa
petri con una luz reflejada localizada a unos cuantos centiacutemetros sobre un fondo
negro Tener la precaucioacuten de observar la placa siguiendo una vertical directa para
evitar una lectura erroacutenea de las marcas de la regla por efecto de paralelismo En
los medios suplementados con sangre las zonas son medidas en la parte superior
de la superficie del agar y retirando la tapa Tener cuidado de no medir la zona de
la hemoacutelisis sino la de inhibicioacuten del crecimiento
El punto final debe tomarse como el aacuterea que no muestra un crecimiento obvio
visible que puede ser detectado mediante observacioacuten visual no incluyendo velo
de crecimiento o colonias muy pequentildeas que puedan ser detectadas solo con
mucha dificultad en el borde de la zona Sin embargo las colonias mayores
creciendo dentro de la zona clara deberaacuten ser subcultivadas reidentificadas y
reensayadas Algunos Proteus spp debido a su gran movilidad pueden presentar
un velo de invasioacuten o ldquoswarmingrdquo dentro de las zonas de inhibicioacuten de algunos
antibioacuteticos En estos casos el velo del swarming debe ser ignorado al momento
de medir los halos de inhibicioacuten
DISCOS DE SENSIBILIDAD ANTIBIOacuteTICA A INCLUIR EN EL ANTIBIOGRAMA
Grupo I
Ampicilina
Cefalotina
Ampicilina Sulbactam o Amoxicilina Aacutecido Clavulaacutenico
Cefuroxima
Cefotaxima o Ceftriaxona
Gentamicina
Laboratorio Cliacutenico PAULINA ARROLLO PEREacuteZ
Amikacina
Aacutecido Nalidiacutexico(1)
Norfloxacina(1)
Ciprofloxacina
Cotrimoxazol (TrimetoprimSulfametoxazol)
Nitrofurantoiacutena(1)
Grupo II
Cefoxitina
Aztreonam
Ceftazidima
Cefixima
CefoperazonaSulbactam
Cefepime o Cefpirome
Imipenem o Meropenem
Cloramfenicol
Ofloxacina (1)
(1) Disco utilizado exclusivamente para infecciones de las viacuteas urinarias
Resistencias Naturales
Las enterobacterias son resistentes a Penicilina Oxacilina Macroacutelidos
Clindamicina y Glicopeacuteptidos
Klebsiella spp es resistente a las Aminopenicilinas
Citrobacter freundii Enterobacter cloacae y Enterobacter aerogenes son
resistentes a las Aminopenicilinas AminopenicilinasInhibidores de
betalactamasas Cefalosporinas de primera generacioacuten y Cefuroxima
Serratia marcescens es resistente a las Aminopenicilinas
AminopenicilinasInhibidores de betalactamasas Cefalosporinas de primera
generacioacuten y Cefoxitina
Proteus mirabilis es resistente a Nitrofurantoiacutena
Proteus vulgaris es resistente a las Aminopenicilinas Cefalosporinas de primera
generacioacuten Cefuroxima y Nitrofurantoiacutena
Laboratorio Cliacutenico PAULINA ARROLLO PEREacuteZ
Morganella morganii es resistente a las Aminopenicilinas
AminopenicilinasInhibidores de betalactamasas Cefalosporinas de primera
generacioacuten Cefuroxima y Nitrofurantoiacutena
Providentia stuartii es resistente a las Aminopenicilinas
AminopenicilinasInhibidores de betalactamasas Cefalosporinas de primera
generacioacuten Gentamicina (bajo nivel) y Nitrofurantoiacutena
ANTIBIOTICOS Y DIAMETROS CRITICOS PARA ENTEROBACTERIAS
E PRACTICA 7
EXAMEN QUIMICO DE CALCULO RENAL
EXAMEN FISICO
Laboratorio Cliacutenico PAULINA ARROLLO PEREacuteZ
Se debe pesar el caacutelculo y anotar el dato obtenido Medir dos de los diaacutemetros y
tomar nota del aspecto general textura y color y despueacutes de seccionado el
aspecto general la prominencia y el color de los distintos estratos
Se secciona el caacutelculo con una sierra Se raspan las caras con una aguja Se
procede lo mismo con el nuacutecleo Cada una de las muestras obtenidas se trituran
por separado en un mortero
PROCESO
Se coloca una porcioacuten del polvo del caacutelculo en un crisol y se calienta al fuego Si
no hay ennegrecimiento ni se altera el tamantildeo original el caacutelculo estaraacute formado
por sustancias inorgaacutenicas Si en cambio se carboniza desapareciendo estaraacute
formado por sustancias orgaacutenicas Si se funde y se ennegrece este caacutelculo estaacute
formado por sulfamidasa
Una vez obtenidos los datos pueden seleccionarse las reacciones necesarias
para confirmarlos
REACCIONES QUIMICAS
Solucioacuten A
10mg del polvo en matraz y antildeadir 50 ml de ClH 5 Observar si se
produce efervescencia Calentar en bantildeo de agua hirviendo por 10 a 15 minutos y
filtrar en caliente El filtrado se distribuye en 8 tubos numerados y se introduce un
trocito de papel tornasol en cada uno
Solucioacuten B
Agitar con Cl3CH unos 10 mg del polvo Reposar en tubo tapado a
temperatura ambiente hasta que el insoluble haya precipitado Decantar la
solucioacuten clorofoacutermica y guardar igual que el sedimento por separado
Carbonato efervescencia al agregar el CIH por desprendimiento de CO 2
Amonio al tubo 1 de la solucioacuten A se le agrega solucioacuten de OHNa 10 gota a
gota y agitando hasta que el papel tornasol vire
Agregar 1 ml de reactivo de Nessler Un color amarillo oscuro oporto indica
positividad de la reaccioacuten
Laboratorio Cliacutenico PAULINA ARROLLO PEREacuteZ
El NH 3 formado por los grupos NH 4 en medio alcalino reacciona con el yoiduro
doble del reactivo de Nesler para dar yoduro amoacutenico dimercuacuterico precipitado
pardo anaranjado
Acido uacuterico Neutralizar el contenido del tubo 2 como se explicoacute antes
Agregar igual volumen de CNN Na 2 y 05 ml de reactivo de Folin para aacutecido
uacuterico Un color azul intenso indica presencia de aacutecido uacuterico
El aacutecido uacuterico reduce al aacutecido fosfotuacutengstico en medio alcalino dando color azul
intenso de azul de tungsteno y a su vez se oxida a alantoiacutena
Reactivo fosfotuacutengstico (Folin y Denis) Antes del uso diluir al 10 en agua
destilada
Oxalato de calcio Neutralizar el contenido del tubo 3 Agregar CH 3 COOH 10
hasta reaccioacuten aacutecida al tornasol Precipitado blanco que no se redisuelve por
agitacioacuten indica presencia de oxalato de calcio
Calcio Neutralizar el tubo 4 Acidificar con CH 3 COOH glacial Agregar 2 ml C 2
O 4 ( NH 4 ) 4 Precipitado blancodenso indica presencia de Ca ++
Fosfato Neutralizar el tubo 5 Agregar 1 ml de solucioacuten de molibdato Mezclar
antildeadir 05 ml de aacutecido aminonaftol sulfoacutenico (ANS) 025 Coloracioacuten azul que
aparece en 5 minutos indica fosfatos
El color azul se debe a los oacutexidos reducidos de molibdeno
Reactivos
1 ClH concentrado2 Solucioacuten de OHK 203 NO 3 H concentrado4 Mo O 4 (NH 4 ) 2 disolver 25 g de la droga en 50 ml de SO 4 H 2 10 N y
diluir a 100 ml con H2 O destilada5 Amoniacuteaco
Reactivo ANS En matraz x 250 ml poner 05 g de aacutecido aminonaftolsulfoacutenico y
agrgar 195 ml de bisulfito de sodio 15 y 5 ml de sulfito de sodio 20 Mezclar
bien hasta disolucioacuten Si no se disuelve en media hora agregar maacutes sulfito y
agitar El reactivo dura unas 2 semanas
Laboratorio Cliacutenico PAULINA ARROLLO PEREacuteZ
Magnesio Neutralizar el tubo 7 con OHNH 4 y antildeadir 1 ml de solucioacuten alcohoacutelica
de p ndash Nitrobenceno azorresorcinol Un cromoacutegeno rojo indica presencia de
magnesio
En medio alcalino se forma (OH) 2 Mg El colorante azo resulta absorbido por el
(OH) 2 Mg en medio alcalino
Xantina A un tercio del residuo de la solucioacuten B agregarle gotas de NO 3 H
concentrado
Se disuelve el residuo sin desprender gas Evaporar a sequedad en bantildeo Mariacutea
hirviente quedando un residuo amarillo Dejar enfriar y humedecer con gotas de
OHNa 10 Una coloracioacuten anaranjada que vira al rojo oscuro al calentar indica
presencia de xantina
La reaccioacuten es la xantoproteica Migracioacuten de los anillos fenilo existentes en la
tirosina fenilalanina y triptoacutefano que da un color amarillo de los productos de
nitrosustitucioacuten para virar al anaranjado tras la adicioacuten de un aacutelcali ( formacioacuten de
la sal)
Nota El reactivo de molibdato se puede preparar asiacute
Solucioacuten 1 SO 4 H 2 01 N
Medir 450 ml de SO4 H 2 concentrado y agregarlos a 1300 ml de agua
destilada
Solucioacuten 2
A 250 ml de SO 4 H 2 01 N antildeadir la solucioacuten de molibdato y llevar con
agua destilada a 250 ml Mezclar
Sulfamidas Neutralizar el uacuteltimo tubo Antildeadir 1 ml de NO 2 Na 05 preparado
recientemente Agitar y reposar por 3 minutos Antildeadir 5 ml de solucioacuten alcohoacutelica
de dimetil-alfa naftilamina 025 Un color rojizo indica presencia de sulfamidas
Finalmente procede hacer mencioacuten de ciertos procedimientos fiacutesicos como la
microscopia de polarizacioacuten difraccioacuten de rayos X cristalografiacutea
espectrofotometriacutea de rayos infrarrojos etc que permiten actualmente un
conocimiento maacutes confiable de la estructura de los caacutelculos
- Reactivos
-
Laboratorio Cliacutenico PAULINA ARROLLO PEREacuteZ
Amikacina
Aacutecido Nalidiacutexico(1)
Norfloxacina(1)
Ciprofloxacina
Cotrimoxazol (TrimetoprimSulfametoxazol)
Nitrofurantoiacutena(1)
Grupo II
Cefoxitina
Aztreonam
Ceftazidima
Cefixima
CefoperazonaSulbactam
Cefepime o Cefpirome
Imipenem o Meropenem
Cloramfenicol
Ofloxacina (1)
(1) Disco utilizado exclusivamente para infecciones de las viacuteas urinarias
Resistencias Naturales
Las enterobacterias son resistentes a Penicilina Oxacilina Macroacutelidos
Clindamicina y Glicopeacuteptidos
Klebsiella spp es resistente a las Aminopenicilinas
Citrobacter freundii Enterobacter cloacae y Enterobacter aerogenes son
resistentes a las Aminopenicilinas AminopenicilinasInhibidores de
betalactamasas Cefalosporinas de primera generacioacuten y Cefuroxima
Serratia marcescens es resistente a las Aminopenicilinas
AminopenicilinasInhibidores de betalactamasas Cefalosporinas de primera
generacioacuten y Cefoxitina
Proteus mirabilis es resistente a Nitrofurantoiacutena
Proteus vulgaris es resistente a las Aminopenicilinas Cefalosporinas de primera
generacioacuten Cefuroxima y Nitrofurantoiacutena
Laboratorio Cliacutenico PAULINA ARROLLO PEREacuteZ
Morganella morganii es resistente a las Aminopenicilinas
AminopenicilinasInhibidores de betalactamasas Cefalosporinas de primera
generacioacuten Cefuroxima y Nitrofurantoiacutena
Providentia stuartii es resistente a las Aminopenicilinas
AminopenicilinasInhibidores de betalactamasas Cefalosporinas de primera
generacioacuten Gentamicina (bajo nivel) y Nitrofurantoiacutena
ANTIBIOTICOS Y DIAMETROS CRITICOS PARA ENTEROBACTERIAS
E PRACTICA 7
EXAMEN QUIMICO DE CALCULO RENAL
EXAMEN FISICO
Laboratorio Cliacutenico PAULINA ARROLLO PEREacuteZ
Se debe pesar el caacutelculo y anotar el dato obtenido Medir dos de los diaacutemetros y
tomar nota del aspecto general textura y color y despueacutes de seccionado el
aspecto general la prominencia y el color de los distintos estratos
Se secciona el caacutelculo con una sierra Se raspan las caras con una aguja Se
procede lo mismo con el nuacutecleo Cada una de las muestras obtenidas se trituran
por separado en un mortero
PROCESO
Se coloca una porcioacuten del polvo del caacutelculo en un crisol y se calienta al fuego Si
no hay ennegrecimiento ni se altera el tamantildeo original el caacutelculo estaraacute formado
por sustancias inorgaacutenicas Si en cambio se carboniza desapareciendo estaraacute
formado por sustancias orgaacutenicas Si se funde y se ennegrece este caacutelculo estaacute
formado por sulfamidasa
Una vez obtenidos los datos pueden seleccionarse las reacciones necesarias
para confirmarlos
REACCIONES QUIMICAS
Solucioacuten A
10mg del polvo en matraz y antildeadir 50 ml de ClH 5 Observar si se
produce efervescencia Calentar en bantildeo de agua hirviendo por 10 a 15 minutos y
filtrar en caliente El filtrado se distribuye en 8 tubos numerados y se introduce un
trocito de papel tornasol en cada uno
Solucioacuten B
Agitar con Cl3CH unos 10 mg del polvo Reposar en tubo tapado a
temperatura ambiente hasta que el insoluble haya precipitado Decantar la
solucioacuten clorofoacutermica y guardar igual que el sedimento por separado
Carbonato efervescencia al agregar el CIH por desprendimiento de CO 2
Amonio al tubo 1 de la solucioacuten A se le agrega solucioacuten de OHNa 10 gota a
gota y agitando hasta que el papel tornasol vire
Agregar 1 ml de reactivo de Nessler Un color amarillo oscuro oporto indica
positividad de la reaccioacuten
Laboratorio Cliacutenico PAULINA ARROLLO PEREacuteZ
El NH 3 formado por los grupos NH 4 en medio alcalino reacciona con el yoiduro
doble del reactivo de Nesler para dar yoduro amoacutenico dimercuacuterico precipitado
pardo anaranjado
Acido uacuterico Neutralizar el contenido del tubo 2 como se explicoacute antes
Agregar igual volumen de CNN Na 2 y 05 ml de reactivo de Folin para aacutecido
uacuterico Un color azul intenso indica presencia de aacutecido uacuterico
El aacutecido uacuterico reduce al aacutecido fosfotuacutengstico en medio alcalino dando color azul
intenso de azul de tungsteno y a su vez se oxida a alantoiacutena
Reactivo fosfotuacutengstico (Folin y Denis) Antes del uso diluir al 10 en agua
destilada
Oxalato de calcio Neutralizar el contenido del tubo 3 Agregar CH 3 COOH 10
hasta reaccioacuten aacutecida al tornasol Precipitado blanco que no se redisuelve por
agitacioacuten indica presencia de oxalato de calcio
Calcio Neutralizar el tubo 4 Acidificar con CH 3 COOH glacial Agregar 2 ml C 2
O 4 ( NH 4 ) 4 Precipitado blancodenso indica presencia de Ca ++
Fosfato Neutralizar el tubo 5 Agregar 1 ml de solucioacuten de molibdato Mezclar
antildeadir 05 ml de aacutecido aminonaftol sulfoacutenico (ANS) 025 Coloracioacuten azul que
aparece en 5 minutos indica fosfatos
El color azul se debe a los oacutexidos reducidos de molibdeno
Reactivos
1 ClH concentrado2 Solucioacuten de OHK 203 NO 3 H concentrado4 Mo O 4 (NH 4 ) 2 disolver 25 g de la droga en 50 ml de SO 4 H 2 10 N y
diluir a 100 ml con H2 O destilada5 Amoniacuteaco
Reactivo ANS En matraz x 250 ml poner 05 g de aacutecido aminonaftolsulfoacutenico y
agrgar 195 ml de bisulfito de sodio 15 y 5 ml de sulfito de sodio 20 Mezclar
bien hasta disolucioacuten Si no se disuelve en media hora agregar maacutes sulfito y
agitar El reactivo dura unas 2 semanas
Laboratorio Cliacutenico PAULINA ARROLLO PEREacuteZ
Magnesio Neutralizar el tubo 7 con OHNH 4 y antildeadir 1 ml de solucioacuten alcohoacutelica
de p ndash Nitrobenceno azorresorcinol Un cromoacutegeno rojo indica presencia de
magnesio
En medio alcalino se forma (OH) 2 Mg El colorante azo resulta absorbido por el
(OH) 2 Mg en medio alcalino
Xantina A un tercio del residuo de la solucioacuten B agregarle gotas de NO 3 H
concentrado
Se disuelve el residuo sin desprender gas Evaporar a sequedad en bantildeo Mariacutea
hirviente quedando un residuo amarillo Dejar enfriar y humedecer con gotas de
OHNa 10 Una coloracioacuten anaranjada que vira al rojo oscuro al calentar indica
presencia de xantina
La reaccioacuten es la xantoproteica Migracioacuten de los anillos fenilo existentes en la
tirosina fenilalanina y triptoacutefano que da un color amarillo de los productos de
nitrosustitucioacuten para virar al anaranjado tras la adicioacuten de un aacutelcali ( formacioacuten de
la sal)
Nota El reactivo de molibdato se puede preparar asiacute
Solucioacuten 1 SO 4 H 2 01 N
Medir 450 ml de SO4 H 2 concentrado y agregarlos a 1300 ml de agua
destilada
Solucioacuten 2
A 250 ml de SO 4 H 2 01 N antildeadir la solucioacuten de molibdato y llevar con
agua destilada a 250 ml Mezclar
Sulfamidas Neutralizar el uacuteltimo tubo Antildeadir 1 ml de NO 2 Na 05 preparado
recientemente Agitar y reposar por 3 minutos Antildeadir 5 ml de solucioacuten alcohoacutelica
de dimetil-alfa naftilamina 025 Un color rojizo indica presencia de sulfamidas
Finalmente procede hacer mencioacuten de ciertos procedimientos fiacutesicos como la
microscopia de polarizacioacuten difraccioacuten de rayos X cristalografiacutea
espectrofotometriacutea de rayos infrarrojos etc que permiten actualmente un
conocimiento maacutes confiable de la estructura de los caacutelculos
- Reactivos
-
Laboratorio Cliacutenico PAULINA ARROLLO PEREacuteZ
Morganella morganii es resistente a las Aminopenicilinas
AminopenicilinasInhibidores de betalactamasas Cefalosporinas de primera
generacioacuten Cefuroxima y Nitrofurantoiacutena
Providentia stuartii es resistente a las Aminopenicilinas
AminopenicilinasInhibidores de betalactamasas Cefalosporinas de primera
generacioacuten Gentamicina (bajo nivel) y Nitrofurantoiacutena
ANTIBIOTICOS Y DIAMETROS CRITICOS PARA ENTEROBACTERIAS
E PRACTICA 7
EXAMEN QUIMICO DE CALCULO RENAL
EXAMEN FISICO
Laboratorio Cliacutenico PAULINA ARROLLO PEREacuteZ
Se debe pesar el caacutelculo y anotar el dato obtenido Medir dos de los diaacutemetros y
tomar nota del aspecto general textura y color y despueacutes de seccionado el
aspecto general la prominencia y el color de los distintos estratos
Se secciona el caacutelculo con una sierra Se raspan las caras con una aguja Se
procede lo mismo con el nuacutecleo Cada una de las muestras obtenidas se trituran
por separado en un mortero
PROCESO
Se coloca una porcioacuten del polvo del caacutelculo en un crisol y se calienta al fuego Si
no hay ennegrecimiento ni se altera el tamantildeo original el caacutelculo estaraacute formado
por sustancias inorgaacutenicas Si en cambio se carboniza desapareciendo estaraacute
formado por sustancias orgaacutenicas Si se funde y se ennegrece este caacutelculo estaacute
formado por sulfamidasa
Una vez obtenidos los datos pueden seleccionarse las reacciones necesarias
para confirmarlos
REACCIONES QUIMICAS
Solucioacuten A
10mg del polvo en matraz y antildeadir 50 ml de ClH 5 Observar si se
produce efervescencia Calentar en bantildeo de agua hirviendo por 10 a 15 minutos y
filtrar en caliente El filtrado se distribuye en 8 tubos numerados y se introduce un
trocito de papel tornasol en cada uno
Solucioacuten B
Agitar con Cl3CH unos 10 mg del polvo Reposar en tubo tapado a
temperatura ambiente hasta que el insoluble haya precipitado Decantar la
solucioacuten clorofoacutermica y guardar igual que el sedimento por separado
Carbonato efervescencia al agregar el CIH por desprendimiento de CO 2
Amonio al tubo 1 de la solucioacuten A se le agrega solucioacuten de OHNa 10 gota a
gota y agitando hasta que el papel tornasol vire
Agregar 1 ml de reactivo de Nessler Un color amarillo oscuro oporto indica
positividad de la reaccioacuten
Laboratorio Cliacutenico PAULINA ARROLLO PEREacuteZ
El NH 3 formado por los grupos NH 4 en medio alcalino reacciona con el yoiduro
doble del reactivo de Nesler para dar yoduro amoacutenico dimercuacuterico precipitado
pardo anaranjado
Acido uacuterico Neutralizar el contenido del tubo 2 como se explicoacute antes
Agregar igual volumen de CNN Na 2 y 05 ml de reactivo de Folin para aacutecido
uacuterico Un color azul intenso indica presencia de aacutecido uacuterico
El aacutecido uacuterico reduce al aacutecido fosfotuacutengstico en medio alcalino dando color azul
intenso de azul de tungsteno y a su vez se oxida a alantoiacutena
Reactivo fosfotuacutengstico (Folin y Denis) Antes del uso diluir al 10 en agua
destilada
Oxalato de calcio Neutralizar el contenido del tubo 3 Agregar CH 3 COOH 10
hasta reaccioacuten aacutecida al tornasol Precipitado blanco que no se redisuelve por
agitacioacuten indica presencia de oxalato de calcio
Calcio Neutralizar el tubo 4 Acidificar con CH 3 COOH glacial Agregar 2 ml C 2
O 4 ( NH 4 ) 4 Precipitado blancodenso indica presencia de Ca ++
Fosfato Neutralizar el tubo 5 Agregar 1 ml de solucioacuten de molibdato Mezclar
antildeadir 05 ml de aacutecido aminonaftol sulfoacutenico (ANS) 025 Coloracioacuten azul que
aparece en 5 minutos indica fosfatos
El color azul se debe a los oacutexidos reducidos de molibdeno
Reactivos
1 ClH concentrado2 Solucioacuten de OHK 203 NO 3 H concentrado4 Mo O 4 (NH 4 ) 2 disolver 25 g de la droga en 50 ml de SO 4 H 2 10 N y
diluir a 100 ml con H2 O destilada5 Amoniacuteaco
Reactivo ANS En matraz x 250 ml poner 05 g de aacutecido aminonaftolsulfoacutenico y
agrgar 195 ml de bisulfito de sodio 15 y 5 ml de sulfito de sodio 20 Mezclar
bien hasta disolucioacuten Si no se disuelve en media hora agregar maacutes sulfito y
agitar El reactivo dura unas 2 semanas
Laboratorio Cliacutenico PAULINA ARROLLO PEREacuteZ
Magnesio Neutralizar el tubo 7 con OHNH 4 y antildeadir 1 ml de solucioacuten alcohoacutelica
de p ndash Nitrobenceno azorresorcinol Un cromoacutegeno rojo indica presencia de
magnesio
En medio alcalino se forma (OH) 2 Mg El colorante azo resulta absorbido por el
(OH) 2 Mg en medio alcalino
Xantina A un tercio del residuo de la solucioacuten B agregarle gotas de NO 3 H
concentrado
Se disuelve el residuo sin desprender gas Evaporar a sequedad en bantildeo Mariacutea
hirviente quedando un residuo amarillo Dejar enfriar y humedecer con gotas de
OHNa 10 Una coloracioacuten anaranjada que vira al rojo oscuro al calentar indica
presencia de xantina
La reaccioacuten es la xantoproteica Migracioacuten de los anillos fenilo existentes en la
tirosina fenilalanina y triptoacutefano que da un color amarillo de los productos de
nitrosustitucioacuten para virar al anaranjado tras la adicioacuten de un aacutelcali ( formacioacuten de
la sal)
Nota El reactivo de molibdato se puede preparar asiacute
Solucioacuten 1 SO 4 H 2 01 N
Medir 450 ml de SO4 H 2 concentrado y agregarlos a 1300 ml de agua
destilada
Solucioacuten 2
A 250 ml de SO 4 H 2 01 N antildeadir la solucioacuten de molibdato y llevar con
agua destilada a 250 ml Mezclar
Sulfamidas Neutralizar el uacuteltimo tubo Antildeadir 1 ml de NO 2 Na 05 preparado
recientemente Agitar y reposar por 3 minutos Antildeadir 5 ml de solucioacuten alcohoacutelica
de dimetil-alfa naftilamina 025 Un color rojizo indica presencia de sulfamidas
Finalmente procede hacer mencioacuten de ciertos procedimientos fiacutesicos como la
microscopia de polarizacioacuten difraccioacuten de rayos X cristalografiacutea
espectrofotometriacutea de rayos infrarrojos etc que permiten actualmente un
conocimiento maacutes confiable de la estructura de los caacutelculos
- Reactivos
-
Laboratorio Cliacutenico PAULINA ARROLLO PEREacuteZ
Se debe pesar el caacutelculo y anotar el dato obtenido Medir dos de los diaacutemetros y
tomar nota del aspecto general textura y color y despueacutes de seccionado el
aspecto general la prominencia y el color de los distintos estratos
Se secciona el caacutelculo con una sierra Se raspan las caras con una aguja Se
procede lo mismo con el nuacutecleo Cada una de las muestras obtenidas se trituran
por separado en un mortero
PROCESO
Se coloca una porcioacuten del polvo del caacutelculo en un crisol y se calienta al fuego Si
no hay ennegrecimiento ni se altera el tamantildeo original el caacutelculo estaraacute formado
por sustancias inorgaacutenicas Si en cambio se carboniza desapareciendo estaraacute
formado por sustancias orgaacutenicas Si se funde y se ennegrece este caacutelculo estaacute
formado por sulfamidasa
Una vez obtenidos los datos pueden seleccionarse las reacciones necesarias
para confirmarlos
REACCIONES QUIMICAS
Solucioacuten A
10mg del polvo en matraz y antildeadir 50 ml de ClH 5 Observar si se
produce efervescencia Calentar en bantildeo de agua hirviendo por 10 a 15 minutos y
filtrar en caliente El filtrado se distribuye en 8 tubos numerados y se introduce un
trocito de papel tornasol en cada uno
Solucioacuten B
Agitar con Cl3CH unos 10 mg del polvo Reposar en tubo tapado a
temperatura ambiente hasta que el insoluble haya precipitado Decantar la
solucioacuten clorofoacutermica y guardar igual que el sedimento por separado
Carbonato efervescencia al agregar el CIH por desprendimiento de CO 2
Amonio al tubo 1 de la solucioacuten A se le agrega solucioacuten de OHNa 10 gota a
gota y agitando hasta que el papel tornasol vire
Agregar 1 ml de reactivo de Nessler Un color amarillo oscuro oporto indica
positividad de la reaccioacuten
Laboratorio Cliacutenico PAULINA ARROLLO PEREacuteZ
El NH 3 formado por los grupos NH 4 en medio alcalino reacciona con el yoiduro
doble del reactivo de Nesler para dar yoduro amoacutenico dimercuacuterico precipitado
pardo anaranjado
Acido uacuterico Neutralizar el contenido del tubo 2 como se explicoacute antes
Agregar igual volumen de CNN Na 2 y 05 ml de reactivo de Folin para aacutecido
uacuterico Un color azul intenso indica presencia de aacutecido uacuterico
El aacutecido uacuterico reduce al aacutecido fosfotuacutengstico en medio alcalino dando color azul
intenso de azul de tungsteno y a su vez se oxida a alantoiacutena
Reactivo fosfotuacutengstico (Folin y Denis) Antes del uso diluir al 10 en agua
destilada
Oxalato de calcio Neutralizar el contenido del tubo 3 Agregar CH 3 COOH 10
hasta reaccioacuten aacutecida al tornasol Precipitado blanco que no se redisuelve por
agitacioacuten indica presencia de oxalato de calcio
Calcio Neutralizar el tubo 4 Acidificar con CH 3 COOH glacial Agregar 2 ml C 2
O 4 ( NH 4 ) 4 Precipitado blancodenso indica presencia de Ca ++
Fosfato Neutralizar el tubo 5 Agregar 1 ml de solucioacuten de molibdato Mezclar
antildeadir 05 ml de aacutecido aminonaftol sulfoacutenico (ANS) 025 Coloracioacuten azul que
aparece en 5 minutos indica fosfatos
El color azul se debe a los oacutexidos reducidos de molibdeno
Reactivos
1 ClH concentrado2 Solucioacuten de OHK 203 NO 3 H concentrado4 Mo O 4 (NH 4 ) 2 disolver 25 g de la droga en 50 ml de SO 4 H 2 10 N y
diluir a 100 ml con H2 O destilada5 Amoniacuteaco
Reactivo ANS En matraz x 250 ml poner 05 g de aacutecido aminonaftolsulfoacutenico y
agrgar 195 ml de bisulfito de sodio 15 y 5 ml de sulfito de sodio 20 Mezclar
bien hasta disolucioacuten Si no se disuelve en media hora agregar maacutes sulfito y
agitar El reactivo dura unas 2 semanas
Laboratorio Cliacutenico PAULINA ARROLLO PEREacuteZ
Magnesio Neutralizar el tubo 7 con OHNH 4 y antildeadir 1 ml de solucioacuten alcohoacutelica
de p ndash Nitrobenceno azorresorcinol Un cromoacutegeno rojo indica presencia de
magnesio
En medio alcalino se forma (OH) 2 Mg El colorante azo resulta absorbido por el
(OH) 2 Mg en medio alcalino
Xantina A un tercio del residuo de la solucioacuten B agregarle gotas de NO 3 H
concentrado
Se disuelve el residuo sin desprender gas Evaporar a sequedad en bantildeo Mariacutea
hirviente quedando un residuo amarillo Dejar enfriar y humedecer con gotas de
OHNa 10 Una coloracioacuten anaranjada que vira al rojo oscuro al calentar indica
presencia de xantina
La reaccioacuten es la xantoproteica Migracioacuten de los anillos fenilo existentes en la
tirosina fenilalanina y triptoacutefano que da un color amarillo de los productos de
nitrosustitucioacuten para virar al anaranjado tras la adicioacuten de un aacutelcali ( formacioacuten de
la sal)
Nota El reactivo de molibdato se puede preparar asiacute
Solucioacuten 1 SO 4 H 2 01 N
Medir 450 ml de SO4 H 2 concentrado y agregarlos a 1300 ml de agua
destilada
Solucioacuten 2
A 250 ml de SO 4 H 2 01 N antildeadir la solucioacuten de molibdato y llevar con
agua destilada a 250 ml Mezclar
Sulfamidas Neutralizar el uacuteltimo tubo Antildeadir 1 ml de NO 2 Na 05 preparado
recientemente Agitar y reposar por 3 minutos Antildeadir 5 ml de solucioacuten alcohoacutelica
de dimetil-alfa naftilamina 025 Un color rojizo indica presencia de sulfamidas
Finalmente procede hacer mencioacuten de ciertos procedimientos fiacutesicos como la
microscopia de polarizacioacuten difraccioacuten de rayos X cristalografiacutea
espectrofotometriacutea de rayos infrarrojos etc que permiten actualmente un
conocimiento maacutes confiable de la estructura de los caacutelculos
- Reactivos
-
Laboratorio Cliacutenico PAULINA ARROLLO PEREacuteZ
El NH 3 formado por los grupos NH 4 en medio alcalino reacciona con el yoiduro
doble del reactivo de Nesler para dar yoduro amoacutenico dimercuacuterico precipitado
pardo anaranjado
Acido uacuterico Neutralizar el contenido del tubo 2 como se explicoacute antes
Agregar igual volumen de CNN Na 2 y 05 ml de reactivo de Folin para aacutecido
uacuterico Un color azul intenso indica presencia de aacutecido uacuterico
El aacutecido uacuterico reduce al aacutecido fosfotuacutengstico en medio alcalino dando color azul
intenso de azul de tungsteno y a su vez se oxida a alantoiacutena
Reactivo fosfotuacutengstico (Folin y Denis) Antes del uso diluir al 10 en agua
destilada
Oxalato de calcio Neutralizar el contenido del tubo 3 Agregar CH 3 COOH 10
hasta reaccioacuten aacutecida al tornasol Precipitado blanco que no se redisuelve por
agitacioacuten indica presencia de oxalato de calcio
Calcio Neutralizar el tubo 4 Acidificar con CH 3 COOH glacial Agregar 2 ml C 2
O 4 ( NH 4 ) 4 Precipitado blancodenso indica presencia de Ca ++
Fosfato Neutralizar el tubo 5 Agregar 1 ml de solucioacuten de molibdato Mezclar
antildeadir 05 ml de aacutecido aminonaftol sulfoacutenico (ANS) 025 Coloracioacuten azul que
aparece en 5 minutos indica fosfatos
El color azul se debe a los oacutexidos reducidos de molibdeno
Reactivos
1 ClH concentrado2 Solucioacuten de OHK 203 NO 3 H concentrado4 Mo O 4 (NH 4 ) 2 disolver 25 g de la droga en 50 ml de SO 4 H 2 10 N y
diluir a 100 ml con H2 O destilada5 Amoniacuteaco
Reactivo ANS En matraz x 250 ml poner 05 g de aacutecido aminonaftolsulfoacutenico y
agrgar 195 ml de bisulfito de sodio 15 y 5 ml de sulfito de sodio 20 Mezclar
bien hasta disolucioacuten Si no se disuelve en media hora agregar maacutes sulfito y
agitar El reactivo dura unas 2 semanas
Laboratorio Cliacutenico PAULINA ARROLLO PEREacuteZ
Magnesio Neutralizar el tubo 7 con OHNH 4 y antildeadir 1 ml de solucioacuten alcohoacutelica
de p ndash Nitrobenceno azorresorcinol Un cromoacutegeno rojo indica presencia de
magnesio
En medio alcalino se forma (OH) 2 Mg El colorante azo resulta absorbido por el
(OH) 2 Mg en medio alcalino
Xantina A un tercio del residuo de la solucioacuten B agregarle gotas de NO 3 H
concentrado
Se disuelve el residuo sin desprender gas Evaporar a sequedad en bantildeo Mariacutea
hirviente quedando un residuo amarillo Dejar enfriar y humedecer con gotas de
OHNa 10 Una coloracioacuten anaranjada que vira al rojo oscuro al calentar indica
presencia de xantina
La reaccioacuten es la xantoproteica Migracioacuten de los anillos fenilo existentes en la
tirosina fenilalanina y triptoacutefano que da un color amarillo de los productos de
nitrosustitucioacuten para virar al anaranjado tras la adicioacuten de un aacutelcali ( formacioacuten de
la sal)
Nota El reactivo de molibdato se puede preparar asiacute
Solucioacuten 1 SO 4 H 2 01 N
Medir 450 ml de SO4 H 2 concentrado y agregarlos a 1300 ml de agua
destilada
Solucioacuten 2
A 250 ml de SO 4 H 2 01 N antildeadir la solucioacuten de molibdato y llevar con
agua destilada a 250 ml Mezclar
Sulfamidas Neutralizar el uacuteltimo tubo Antildeadir 1 ml de NO 2 Na 05 preparado
recientemente Agitar y reposar por 3 minutos Antildeadir 5 ml de solucioacuten alcohoacutelica
de dimetil-alfa naftilamina 025 Un color rojizo indica presencia de sulfamidas
Finalmente procede hacer mencioacuten de ciertos procedimientos fiacutesicos como la
microscopia de polarizacioacuten difraccioacuten de rayos X cristalografiacutea
espectrofotometriacutea de rayos infrarrojos etc que permiten actualmente un
conocimiento maacutes confiable de la estructura de los caacutelculos
- Reactivos
-
Laboratorio Cliacutenico PAULINA ARROLLO PEREacuteZ
Magnesio Neutralizar el tubo 7 con OHNH 4 y antildeadir 1 ml de solucioacuten alcohoacutelica
de p ndash Nitrobenceno azorresorcinol Un cromoacutegeno rojo indica presencia de
magnesio
En medio alcalino se forma (OH) 2 Mg El colorante azo resulta absorbido por el
(OH) 2 Mg en medio alcalino
Xantina A un tercio del residuo de la solucioacuten B agregarle gotas de NO 3 H
concentrado
Se disuelve el residuo sin desprender gas Evaporar a sequedad en bantildeo Mariacutea
hirviente quedando un residuo amarillo Dejar enfriar y humedecer con gotas de
OHNa 10 Una coloracioacuten anaranjada que vira al rojo oscuro al calentar indica
presencia de xantina
La reaccioacuten es la xantoproteica Migracioacuten de los anillos fenilo existentes en la
tirosina fenilalanina y triptoacutefano que da un color amarillo de los productos de
nitrosustitucioacuten para virar al anaranjado tras la adicioacuten de un aacutelcali ( formacioacuten de
la sal)
Nota El reactivo de molibdato se puede preparar asiacute
Solucioacuten 1 SO 4 H 2 01 N
Medir 450 ml de SO4 H 2 concentrado y agregarlos a 1300 ml de agua
destilada
Solucioacuten 2
A 250 ml de SO 4 H 2 01 N antildeadir la solucioacuten de molibdato y llevar con
agua destilada a 250 ml Mezclar
Sulfamidas Neutralizar el uacuteltimo tubo Antildeadir 1 ml de NO 2 Na 05 preparado
recientemente Agitar y reposar por 3 minutos Antildeadir 5 ml de solucioacuten alcohoacutelica
de dimetil-alfa naftilamina 025 Un color rojizo indica presencia de sulfamidas
Finalmente procede hacer mencioacuten de ciertos procedimientos fiacutesicos como la
microscopia de polarizacioacuten difraccioacuten de rayos X cristalografiacutea
espectrofotometriacutea de rayos infrarrojos etc que permiten actualmente un
conocimiento maacutes confiable de la estructura de los caacutelculos
- Reactivos
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