Download - In the name of God
![Page 1: In the name of God](https://reader035.vdocuments.us/reader035/viewer/2022070401/568135c1550346895d9d2565/html5/thumbnails/1.jpg)
In the name of
God
![Page 2: In the name of God](https://reader035.vdocuments.us/reader035/viewer/2022070401/568135c1550346895d9d2565/html5/thumbnails/2.jpg)
Summer School
Influenza Unit,Pasteur Institute of Iran
summer 2011
![Page 3: In the name of God](https://reader035.vdocuments.us/reader035/viewer/2022070401/568135c1550346895d9d2565/html5/thumbnails/3.jpg)
SDS-PAGE Western Blotting
Summer School
![Page 4: In the name of God](https://reader035.vdocuments.us/reader035/viewer/2022070401/568135c1550346895d9d2565/html5/thumbnails/4.jpg)
کاربردها SDS-PAGEو
پروتئین • خلوص میزان بررسیپروتئین • مولکولی وزن تعیین•) بالتینگ ) وسترن پروتئین شناساییسولفیدی • دی باندهای حضور وتایید شناساییپروتئین • کمی مقدار تخمینپروتئینها • ای ترجمه از پس تغییرات تعیینغیره ......• و
Summer School
![Page 5: In the name of God](https://reader035.vdocuments.us/reader035/viewer/2022070401/568135c1550346895d9d2565/html5/thumbnails/5.jpg)
SDS-PAGESodium Dodecyl Sulphate _
Polyacryl Amide Gel Electrophoresis
Summer School
![Page 6: In the name of God](https://reader035.vdocuments.us/reader035/viewer/2022070401/568135c1550346895d9d2565/html5/thumbnails/6.jpg)
ElectrophoresisElectro + Phoresis
( باردار مولکولهای در پروتئینها(حرکتجداسازی به منجر که الکتریکی میدان
گردد می آنهاSummer School
![Page 7: In the name of God](https://reader035.vdocuments.us/reader035/viewer/2022070401/568135c1550346895d9d2565/html5/thumbnails/7.jpg)
الکتروفورز فرآیند بر موثر عوامل
مولکولها • فیزیکوشیمیایی خصوصیاتمولکولها • اطراف محیط شرایطالکتریکی • میدان های مولفه
Summer School
![Page 8: In the name of God](https://reader035.vdocuments.us/reader035/viewer/2022070401/568135c1550346895d9d2565/html5/thumbnails/8.jpg)
مولکولها فیزیکوشیمیایی خصوصیات
شکل •اندازه•بارالکتریکی•
Summer School
![Page 9: In the name of God](https://reader035.vdocuments.us/reader035/viewer/2022070401/568135c1550346895d9d2565/html5/thumbnails/9.jpg)
مولکول اطراف محیط شرایط
•) ( غلظت و نوع الکتروفورز محیط بستریاو) • بافری ،ظرفیت یونی قدرت ، نوع (pHبافر
محیط • حرارت درجه
Summer School
![Page 10: In the name of God](https://reader035.vdocuments.us/reader035/viewer/2022070401/568135c1550346895d9d2565/html5/thumbnails/10.jpg)
الکتروفورز بسترهای
اندود) • کاغذ،ورقه جامدسیلیکاژل، به شده
) وسلولز آلومینا• ( آکریل پلی جامد نیمه
) آگارز و آمیدمایع•
Summer School
![Page 11: In the name of God](https://reader035.vdocuments.us/reader035/viewer/2022070401/568135c1550346895d9d2565/html5/thumbnails/11.jpg)
PAGEPolyacryl Amid Gel Electerophoresis
Summer School
![Page 12: In the name of God](https://reader035.vdocuments.us/reader035/viewer/2022070401/568135c1550346895d9d2565/html5/thumbnails/12.jpg)
برای آمید آکریل بسترپلی چراشود؟ می استفاده پروتئینها
Summer School
![Page 13: In the name of God](https://reader035.vdocuments.us/reader035/viewer/2022070401/568135c1550346895d9d2565/html5/thumbnails/13.jpg)
آمید آکریل پلی ویژگیهای
دماها، • در شیمیایی نظر یونی pHاز وقدرتهای هااست پایدار مختلف
است • غیرفعال و بار بدون ترکیبیاست • شفافدارد • را منافذ از وسیعی دامنه ایجاد قابلیتهستند • خالص بسیار آن مونومرهای• ... غیره و
Summer School
![Page 14: In the name of God](https://reader035.vdocuments.us/reader035/viewer/2022070401/568135c1550346895d9d2565/html5/thumbnails/14.jpg)
پلی در دخیل اجزا و آمید آکریل پلی ژل ترکیبمریزاسیون
Summer School
![Page 15: In the name of God](https://reader035.vdocuments.us/reader035/viewer/2022070401/568135c1550346895d9d2565/html5/thumbnails/15.jpg)
آکریل پلی ژل پلیمریزاسیون واکنشآمید
شیمیایی • پلیمریزاسیون- آمونیوم) (TEMEDپرسولفات
پلیمریزاسیون •فوتوشیمیایی
- (TEMEDریبوفالوین)
![Page 16: In the name of God](https://reader035.vdocuments.us/reader035/viewer/2022070401/568135c1550346895d9d2565/html5/thumbnails/16.jpg)
پلیمریزاسیون بر موثر عوامل
•) کننده ) شروع آمونیوم پرسولفات•TEMED) کاتالیزور)•) مهارکننده ) هوا اکسیژن(ºC30-20دما )•
زمان ) • بهترین (20-60زمان دقیقه
![Page 17: In the name of God](https://reader035.vdocuments.us/reader035/viewer/2022070401/568135c1550346895d9d2565/html5/thumbnails/17.jpg)
آکریل پلی ژل فیزیکی خصوصیاتآمید
منافذ • اندازهاالستیسیتی•ژل • چگالیمکانیکی • قوام
ژل دهنده تشکیل جز دو غلظت از متاثر اینهااست آمید آکریل بیس و آمید آکریل یعنی
![Page 18: In the name of God](https://reader035.vdocuments.us/reader035/viewer/2022070401/568135c1550346895d9d2565/html5/thumbnails/18.jpg)
Optimal Resolution Range
Acrylamide Percentage Separating Resolution 15.0% Gel 15- 45 Kd 12.5% Gel 15- 60Kd 10.0% Gel 18- 75Kd 7.5% Gel 30-120Kd 5.0% Gel 60-212Kd
Summer School
![Page 19: In the name of God](https://reader035.vdocuments.us/reader035/viewer/2022070401/568135c1550346895d9d2565/html5/thumbnails/19.jpg)
) تانک) و نمونه ژلها، بافرها
نوع •یونی • قدرتزیاد - جریان برقراری در نمونه یونهای نقش تا باشد کم
باشدتوان - افزایش بافر یونی غلظت بردن باال
گرما و الکتریکی• ( تغییر برابر در مقاومت بافری (pHظرفیت•pH (می پروتئین در تغییراتی باعث نباشد مناسب اگر
) است مهم الکتروفورز در که گردد
Summer School
![Page 20: In the name of God](https://reader035.vdocuments.us/reader035/viewer/2022070401/568135c1550346895d9d2565/html5/thumbnails/20.jpg)
ژل در بافری سیستمهای
پیوسته•و یونی است pHترکیب ثابت ژل سراسر و ها قسمت تمام بافردر
•) قسمتی) چند ناپیوستهو یونی سراسر pHترکیب و ها قسمت تمام ژل بافردر( Stacking &Resolving) است یکدیگرمتفاوت با
Summer School
![Page 21: In the name of God](https://reader035.vdocuments.us/reader035/viewer/2022070401/568135c1550346895d9d2565/html5/thumbnails/21.jpg)
Stacking & Separating Gels
SDS-protein
Glycin
Cl
Stacking gel height =2 well height
Summer School
![Page 22: In the name of God](https://reader035.vdocuments.us/reader035/viewer/2022070401/568135c1550346895d9d2565/html5/thumbnails/22.jpg)
: ناپیوسته سیستم مزیت
و • نیست نمونه حجم از متاثر الکتروفورز کاراییروش این با رقیق های نمونه از باالیی حجم
باشند می تفکیک قابلکننده • متراکم یا باال ژل در حرکت طی در پروتئینها
(Stacking) صورت نازکی به های سپس الیه و آمده درجداکننده یا پایین ژل ( Separating =Resolving)در
شوند می تفکیک خود اجزای به
Summer School
![Page 23: In the name of God](https://reader035.vdocuments.us/reader035/viewer/2022070401/568135c1550346895d9d2565/html5/thumbnails/23.jpg)
نمونه (sample buffer)بافر
![Page 24: In the name of God](https://reader035.vdocuments.us/reader035/viewer/2022070401/568135c1550346895d9d2565/html5/thumbnails/24.jpg)
Sample buffer component
• SDS )Sodium Dodecyl Sulfate( detergent
– solubilizes and denatures proteins
– negative charge to proteins
• 2-ME reduce disulphid bounds
• Glycerol
• Bromophenol Blue
• Tris bufferSummer School
![Page 25: In the name of God](https://reader035.vdocuments.us/reader035/viewer/2022070401/568135c1550346895d9d2565/html5/thumbnails/25.jpg)
تانک بافر
چیست؟ تانک بافر در گالیسین نقش
![Page 26: In the name of God](https://reader035.vdocuments.us/reader035/viewer/2022070401/568135c1550346895d9d2565/html5/thumbnails/26.jpg)
SDS-PAGE
Summer School
![Page 27: In the name of God](https://reader035.vdocuments.us/reader035/viewer/2022070401/568135c1550346895d9d2565/html5/thumbnails/27.jpg)
SDS
Summer School
![Page 28: In the name of God](https://reader035.vdocuments.us/reader035/viewer/2022070401/568135c1550346895d9d2565/html5/thumbnails/28.jpg)
SDSجایگاه
بافرها • ترکیب در( Separatingو Stackingبافرژلها)-(Sample bufferبافرنمونه)-بافرتانک-
Summer School
![Page 29: In the name of God](https://reader035.vdocuments.us/reader035/viewer/2022070401/568135c1550346895d9d2565/html5/thumbnails/29.jpg)
پروتئین SDSاثر ساختار بر
![Page 30: In the name of God](https://reader035.vdocuments.us/reader035/viewer/2022070401/568135c1550346895d9d2565/html5/thumbnails/30.jpg)
Levels of Protein Organization
• Primary structure = linear chain of amino acids
• • Secondary structure = domains of repeating structures, such as β-pleated
• sheets and α-helices
• • Tertiary structure = 3-dimensional shape of a folded polypeptide, maintained by disulfide bonds, electrostatic interactions, hydrophobic effects
• • Quaternary structure = several polypeptide chains associated together to form a functional protein
Summer School
![Page 31: In the name of God](https://reader035.vdocuments.us/reader035/viewer/2022070401/568135c1550346895d9d2565/html5/thumbnails/31.jpg)
SDS-PAGEانواع
-Denature SDS-PAGE-Non Denature SDS-PAGE
Summer School
ویروس همآگلوتینین واحدهای زیردی پیوندهای ومکان آنفلوآنزا
آن ساختار در سولفیدی
![Page 32: In the name of God](https://reader035.vdocuments.us/reader035/viewer/2022070401/568135c1550346895d9d2565/html5/thumbnails/32.jpg)
کار ایمنی
آمید • آکریل بیس و آمید آکریل•TEMED•2-ME•SDSو ...•
Summer School
![Page 33: In the name of God](https://reader035.vdocuments.us/reader035/viewer/2022070401/568135c1550346895d9d2565/html5/thumbnails/33.jpg)
MSDS
Material Safety Data Sheet
Summer School
![Page 34: In the name of God](https://reader035.vdocuments.us/reader035/viewer/2022070401/568135c1550346895d9d2565/html5/thumbnails/34.jpg)
Biosafety ofAcrylamide & Acrylamide-Bis
Summer School
![Page 35: In the name of God](https://reader035.vdocuments.us/reader035/viewer/2022070401/568135c1550346895d9d2565/html5/thumbnails/35.jpg)
71.1: وزن مولكوليcH2=cHcoNH2 فرمول شيميايي :
جامد كريستالي وضعيت ظاهري:سفيد و بي بو
Summer School
![Page 36: In the name of God](https://reader035.vdocuments.us/reader035/viewer/2022070401/568135c1550346895d9d2565/html5/thumbnails/36.jpg)
گير ،سمي کننده آتش محيط وآلودهزيست
است • نوروتوكسين شدت به ماده اينمي • جذب سرعت به تنفس و پوست راه از
است. ممكن و دارد سوء اثر باروری بر شود . شود جنين در ناهنجاريهايي بروز سبب
است • سرطانزااز • عبارتند آميد آكريل با مسموميت عاليم
ضعف، شدن، سوزن سوزن گيجي، و منگي. ولرز تكلم اختالل رفتن، راه در تعادل عدم
Summer School
![Page 37: In the name of God](https://reader035.vdocuments.us/reader035/viewer/2022070401/568135c1550346895d9d2565/html5/thumbnails/37.jpg)
ایمنی اقدامات : اس�تفاده از عين�ك ب�ا حف�اظ كن�اري تم7اس ب7ا چش7م•
ال�زامي ا�س�ت. اين� م�اده در� ص�ورت تم�اس ب�ا �چش�م �مي تو�اند باعث �سوز�ش چشم� و ورم� ملتحمه شود.
� چش�م را ب�ه م�دت • � ب�از ك�رده و س�ريعا پل�ك چش�م را ك�امالص�ورت �مش�اهده 15 د�ر ده�ي�د. شستش�و �آب �ب�ا دقيق�ه
پزش�ك �مراجع�ه ب�ه داده �و اد�ام�ه را شس�تش�و ع�و�ارض نمائيد.
�اظتي تم77اس ب77ا پوس77ت•��تكش حف��تفاده از دس�: اس. ب�ه�تر اس�ت از دو �جفت دس�تكش من�اس�ب ال�ز�امي ا�س�ت
� وارد �ا�س�تفاده �ش�و�د. اي�ن م�اد�ه از� طر�ي�ق ز�خم �ب�از س�ري�عا�پو�س�ته �پو�س�ته ب�اعث م�اده �ا�ين ب�ا ب�دن مي ش�ود�.تم�اس
شدن پوست مي شوددر ص�ورت تم�اس محل�ول ي�ا پ�ودر آكري�ل آمي�د ب�ا پوس�ت، •
� دقيق�ه 15مح�ل� تم�اس� را �ب�ا آب ف�راوان �و ص�ابون ب�ه م�دت �و مس ئ�ول ايمني را �در جريا�ن قرا�ر ده�يد �.ش�ستش�و داده
Summer School
![Page 38: In the name of God](https://reader035.vdocuments.us/reader035/viewer/2022070401/568135c1550346895d9d2565/html5/thumbnails/38.jpg)
اقدامات ایمنی در موارد زیر
: در ص�ورتكه ف�رد حجم زي�ادي بلعي7دن-خوردن•�ا�ز� م�اده را� ب�لعي�ده �باش�د ف�رد �را �وادا�ر ب�ه� اس�تف�راغ كن�ي�د �اين �ك�ا�ر� ب�ا ق�ر�ار د�ادن� ان�گش�ت ي�ا قاش�ق �د�ر �پزش�ك �� ب�ه پش�ت� زب�ان� ا�مك�ان� پ�ذي�ر �اس�ت.� ف�ور�امرا�جع�ه �كني�د.� ت�ذ�كر ب�ه� ف�رد�ي� ك�ه هوش�يار ن�يس�ت
هرگز از راه خوراكي چيزي ندهيد.: از طري�ق استنش�اق بس�يار س�مي اس�ت. تنفس •
�ر تنف�س ��د. اگ��ل كني��ازه م�نتق��وا�ي ت��ه ه��ر�د را� ب�فقطع شده� بو�د به� وي �تنفس مصنوعي �بدهيد
![Page 39: In the name of God](https://reader035.vdocuments.us/reader035/viewer/2022070401/568135c1550346895d9d2565/html5/thumbnails/39.jpg)
نگهداری و ذخیره سازی
در محيطي با تهويه مناسب و خنك نگهداري •شود.
در صورت بروز حريق از كپسول هاي پودر •خشك شيميايي ؛ دي اكسيد كربن يا آب جهت
استفاده نماييداطفاء حريق
Summer School
![Page 40: In the name of God](https://reader035.vdocuments.us/reader035/viewer/2022070401/568135c1550346895d9d2565/html5/thumbnails/40.jpg)
اثرات زيست محيطي و رفع آلودگي�ت •��ط زيس��ان و محي��راي آبزي��اده ب�اين م
آنها بسيار خطرناك است. در حيوان�ات ب�اعث ايج�اد توم�ور در ري�ه؛•
مي شود .و ... آدرنال ،غده تيروئيد
Summer School
![Page 41: In the name of God](https://reader035.vdocuments.us/reader035/viewer/2022070401/568135c1550346895d9d2565/html5/thumbnails/41.jpg)
دفع پسماندهاي آكريل آميد:•اد زائ�د آكري�ل آمي�د ش�امل ژل و حول�ه كاغ�ذي آل�وده باي�د در ي�ك م�و
ك�يسه ز�يپ دار قرار� داده شود �و براي� سوزا�ندن ارسال �گردد.رفع آلودگي سطوح :•
: آل�ودگي را ب�ا م�واد خن�ثي آل�ودگی در ص7ورت كم ب7ودن حجم- م�ث�ل خ�اك�؛ش�ن�؛� ما�س�ه� و �ي�ا �ه�ر �م�ا�د�ه ج�اذ�بي �ك�ه ب�ا �آن �واكنش نم�ي ده�د جم�ع آوري� ن�ما�يي�د) �از خ�اك �ار�ه اس�ت�فاده �نكني�د�(. س�پ�س مح�ل
�% و� ب�ع�د �ب�ا م�حل�و�ل س�ديم 1/6آ�ل�ود�ه �را �ب�ا م�ح�ل�ول �س�دي�م پ�ر �س�ولفا�ت�دقيق�ه ب�ا� حجم زي�اد %30� پوش�ا�ن�ده �و بع�د �از �1/6ب�ت�ا بي س�ولفات
آب شستشو دهيد.آل7ودگیدر ص7ورت زي7اد ب7ودن حجم- : اف�راد را ب�ا زدن عالمت
.��نش�ت م�اده� ش�يميايي ازخط�ر ب�ر ر�وي �درب آزمايش�گاه مط�ل�ع كني�د � آ�زمايش�گاه ج�لوگ�یر�ی کنی�د ؛ تهو�ي�ه مناس�ب را رو�ش�ن نم�و�ده و ف�ور�ا
�نم�ودن �آب م�ي تو�اني�د غ�لظت� بخ�ارات آن را �ر�ا �ت�رك �كني�د�. ب�ا� اس�پريدر هوا كم كنيد.
Summer School
![Page 42: In the name of God](https://reader035.vdocuments.us/reader035/viewer/2022070401/568135c1550346895d9d2565/html5/thumbnails/42.jpg)
• � براي محل�ول س�ازي و ت�وزين پ�ودر آكري�ل آمي�د باي�د حتم�ااز �هود شيم�يايي�، دستكش و �ماسك استف�اده �کنید.
در ص�ورت ريختن ژل، م�يز ك�ار را ب�ا حول�ه كاغ�ذي، كاغ�ذ •خشك كن يا اليه جذب كننده ديگر بپوشانيد.
سيس�تم • ج�انبي ل�وازم س�اير و ه�ا شيش�ه ه�ا، گيره � بشوييد. الكتروفورز را بعد از استفاده كامال
ژل اس�تفاده ش�ده و اض�افي را بع�د از بس�تن كام�ل، ب�ا •ا�س�تفا�ده از دس�تكش� در كيس�ه ا�ي جداگان�ه ق�رارداده و � بس�ته ش�ده �د�ور بريزي�د)آكري�ل آمي�د بص�ور�ت ژل �ك�امال
اثر سمي كمتري دارد.(به�تر اس�ت بج�اي پ�ودر آكري�ل آمي�د، محل�ول ه�اي آم�اده •
خريداري و مصرف شود. Summer School
![Page 43: In the name of God](https://reader035.vdocuments.us/reader035/viewer/2022070401/568135c1550346895d9d2565/html5/thumbnails/43.jpg)
اين م�اده ب�اعث آس�يب ب�ه چش�م، پوس�ت و سيس�تم گوارش�ي •
و ب�ه سي�س�تم� عص�بي� مرك�ز�ي ميگ�رد�د. هم�چ�نین مي �توان�د
محي�طي آس�يب رس�اند�ه و �در ص�ورت تم�اس� ط�والن�ي م�دت
ب�ا �تجم�ع �در �ا�رگ�ا�ن �ه�اي م�ختل�ف ب�د�ن س�الم�ت� ف�ر�د ر�ا� ب�ه� خط�ر
.اندازد
![Page 44: In the name of God](https://reader035.vdocuments.us/reader035/viewer/2022070401/568135c1550346895d9d2565/html5/thumbnails/44.jpg)
اقدامات ایمنی
در تم�اس ب�ا چش�م وپوس�ت و تنفس مانن�د آكري�ل آمي�د رفت�ار مي ك�نيم •مح�ل آل�ودگي را ب�ا آب و دس�تمال تم�يز ك�رده و آن را در س�طل زبال�ه •
م�خص�و�ص بر�ي�زي�د.� در �ص�ورت� ري�ختن �مق�ادير ز�ي�اد �از �اين محل�ول ب�ه آن �آن� آ�ب نريزي�د و� ب�راي� تم�ي�ز �ك�رد�ن� مح�ل �ا�ز م�س�ئول �دس�ت� ن�زد�ه� و روي
.�ايمني� كمك �بگيريددر مواق�ع اس�تفاده از دس�تكش و ماس�ك و لب�اس مخص�وص اس�تفاده •
.شود
شخصي • :محافظت
به�تر اس�ت ك�اربر در موق�ع اس�تفاده در ات�اقي ب�ا تهوي�ه مناس�ب ك�ه در آن ذ�رات� معل�ق پ�راكن�ده �از� اين م�ا�ده� ب�ه ا�س�تان�ه خط�ر� ن�مي رس�ند ك�ار
كند در اين ات�اق مي بايس�تي وس�ايل ايم�ني ب�راي شستش�و چش�م و ب�دن
وجود داشته باشد
Summer School
![Page 45: In the name of God](https://reader035.vdocuments.us/reader035/viewer/2022070401/568135c1550346895d9d2565/html5/thumbnails/45.jpg)
نگهداري بیس آکریل آمید
اين م�اده مي بايس�تي در محي�ط ب�ا تهوي�ه خ�وب
درج�ه س�انتی گ�راد نگه�داري 25و دم�ای زي�ر
شود
![Page 46: In the name of God](https://reader035.vdocuments.us/reader035/viewer/2022070401/568135c1550346895d9d2565/html5/thumbnails/46.jpg)
TEMED
Summer School
![Page 47: In the name of God](https://reader035.vdocuments.us/reader035/viewer/2022070401/568135c1550346895d9d2565/html5/thumbnails/47.jpg)
TEMED
Tetramethylethylenediamineنام شيميايي:
آميني شديدمشخصات ظاهري: محلول شفاف ، بي رنگ با بوي
- در حالت مايع و بخار به شدت آتش گيراست.
- در صورت تنفس يا بلعيدن سوزاننده است.
در مدت طوالني نوعي تاري ديد ایجاد می کند.TEMED- تماس با مقادير كم
بوده است به سرعت به فضاي آزاد TEMED اگر فردي كه در معرض بخار
منتقل شود اين تاثير موقتي خواهد بود.
Summer School
![Page 48: In the name of God](https://reader035.vdocuments.us/reader035/viewer/2022070401/568135c1550346895d9d2565/html5/thumbnails/48.jpg)
SDS-PAGEاجرای
Summer School
![Page 49: In the name of God](https://reader035.vdocuments.us/reader035/viewer/2022070401/568135c1550346895d9d2565/html5/thumbnails/49.jpg)
الکتروفورز عملی اجرای مراحلSDS-PAGE
آماده سازی ژل•آماده سازی نمونه•سوارکردن ژل •نمونه گذاری•راندن نمونه در ژل•تثبیت و رنگ آمیزی نمونه ها•نگهداری ژل• تحلیل نتایج•
Summer School
![Page 50: In the name of God](https://reader035.vdocuments.us/reader035/viewer/2022070401/568135c1550346895d9d2565/html5/thumbnails/50.jpg)
ژل سازی آماده
Summer School
![Page 51: In the name of God](https://reader035.vdocuments.us/reader035/viewer/2022070401/568135c1550346895d9d2565/html5/thumbnails/51.jpg)
قالب سازی آماده
Summer School
![Page 52: In the name of God](https://reader035.vdocuments.us/reader035/viewer/2022070401/568135c1550346895d9d2565/html5/thumbnails/52.jpg)
(resolving) اول ژل ریختن
Summer School
![Page 53: In the name of God](https://reader035.vdocuments.us/reader035/viewer/2022070401/568135c1550346895d9d2565/html5/thumbnails/53.jpg)
دوم ژل (Stacking)ریختن
Summer School
![Page 54: In the name of God](https://reader035.vdocuments.us/reader035/viewer/2022070401/568135c1550346895d9d2565/html5/thumbnails/54.jpg)
(Comb) شانه قراردادن
Summer School
![Page 55: In the name of God](https://reader035.vdocuments.us/reader035/viewer/2022070401/568135c1550346895d9d2565/html5/thumbnails/55.jpg)
تانک در ژل قالب قراردادن
Summer School
![Page 56: In the name of God](https://reader035.vdocuments.us/reader035/viewer/2022070401/568135c1550346895d9d2565/html5/thumbnails/56.jpg)
گذاری نمونه و نمونه سازی آماده
Summer School
![Page 57: In the name of God](https://reader035.vdocuments.us/reader035/viewer/2022070401/568135c1550346895d9d2565/html5/thumbnails/57.jpg)
Summer School
![Page 58: In the name of God](https://reader035.vdocuments.us/reader035/viewer/2022070401/568135c1550346895d9d2565/html5/thumbnails/58.jpg)
SDS-Protein
Glycine < SDS-Protein < Cl
Electrophoretic Migration of Glycine, SDS-Protein and chloride in electrical field
Summer School
![Page 59: In the name of God](https://reader035.vdocuments.us/reader035/viewer/2022070401/568135c1550346895d9d2565/html5/thumbnails/59.jpg)
How does an SDS-PAGE gel work?
• Negatively charged proteins move to positive electrode
• Smaller proteins move faster
• Proteins separate by size
Summer School
![Page 60: In the name of God](https://reader035.vdocuments.us/reader035/viewer/2022070401/568135c1550346895d9d2565/html5/thumbnails/60.jpg)
آمیزی رنگ
Summer School
![Page 61: In the name of God](https://reader035.vdocuments.us/reader035/viewer/2022070401/568135c1550346895d9d2565/html5/thumbnails/61.jpg)
SDS-PAGE آمیزی رنگ انواع
پذیر • برگشتایمیدازول با آمیزی رنگ
ناپذیر • برگشت - Coomassie staining - Silver staining
![Page 62: In the name of God](https://reader035.vdocuments.us/reader035/viewer/2022070401/568135c1550346895d9d2565/html5/thumbnails/62.jpg)
ژل نگهداری
Summer School
![Page 63: In the name of God](https://reader035.vdocuments.us/reader035/viewer/2022070401/568135c1550346895d9d2565/html5/thumbnails/63.jpg)
نتایج آنالیز
Summer School
![Page 64: In the name of God](https://reader035.vdocuments.us/reader035/viewer/2022070401/568135c1550346895d9d2565/html5/thumbnails/64.jpg)
Dot & Western-Blotting
Summer School
![Page 65: In the name of God](https://reader035.vdocuments.us/reader035/viewer/2022070401/568135c1550346895d9d2565/html5/thumbnails/65.jpg)
Western-Blotting
اساس: • که است ایمونوشیمیایی تکنیک تعریفباشد می بادی وآنتی ژن آنتی واکنش آن
کاربرد:•تحقیقات-تشخیص-
Summer School
![Page 66: In the name of God](https://reader035.vdocuments.us/reader035/viewer/2022070401/568135c1550346895d9d2565/html5/thumbnails/66.jpg)
Blotting
) ( پلی ژل از پروتئینها مولکولها انتقالغشا به آمید آکریل
Summer School
![Page 67: In the name of God](https://reader035.vdocuments.us/reader035/viewer/2022070401/568135c1550346895d9d2565/html5/thumbnails/67.jpg)
Kind of Blotting
• Kind of Molecule- Western Blotting(protein)- Eastern Blotting(lipid)- Southern Blotting(DNA)- Northern Blotting(RNA)
Summer School
![Page 68: In the name of God](https://reader035.vdocuments.us/reader035/viewer/2022070401/568135c1550346895d9d2565/html5/thumbnails/68.jpg)
غشا به مولکول انتقال راههای
مستقیم••) ژل ) از مستقیم غیر
![Page 69: In the name of God](https://reader035.vdocuments.us/reader035/viewer/2022070401/568135c1550346895d9d2565/html5/thumbnails/69.jpg)
غشا به ژل از مولکولها انتقال راههای
برق • جریان از استفاده ( Electro Blotting)با
از • استفاده برق بدون Non Electro)جریانBlotting )
انتشار-موئینگی - خاصیتخال - کمک (Vacum)با
Summer School
![Page 70: In the name of God](https://reader035.vdocuments.us/reader035/viewer/2022070401/568135c1550346895d9d2565/html5/thumbnails/70.jpg)
برق جریان با انتقال روشهایتانک • در (Wet/Tank transfer)انتقال
بافر حاوی
خشک انتقال• (Semidry transfer)نیمه
Summer School
![Page 71: In the name of God](https://reader035.vdocuments.us/reader035/viewer/2022070401/568135c1550346895d9d2565/html5/thumbnails/71.jpg)
تانک در (Wet/Tank transfer)انتقالبافر حاوی
![Page 72: In the name of God](https://reader035.vdocuments.us/reader035/viewer/2022070401/568135c1550346895d9d2565/html5/thumbnails/72.jpg)
Semidry transformationانتقال نیمه خشک
Summer School
![Page 73: In the name of God](https://reader035.vdocuments.us/reader035/viewer/2022070401/568135c1550346895d9d2565/html5/thumbnails/73.jpg)
الکترود دو بین ژل و غشا گرفتن قرار ترتیبWestern-Blotting
![Page 74: In the name of God](https://reader035.vdocuments.us/reader035/viewer/2022070401/568135c1550346895d9d2565/html5/thumbnails/74.jpg)
W. Blotting Procedure
Summer School
![Page 75: In the name of God](https://reader035.vdocuments.us/reader035/viewer/2022070401/568135c1550346895d9d2565/html5/thumbnails/75.jpg)
Western-Blottingمراحل
الکتروفورز از استفاده با پروتئینها مخلوط از پروتئین SDS-PAGEتفکیک
غشا روی بر پروتئین (Transferring)انتقال غشا کردن (Blocking)مسدود
) غشا ) در پروتئینها اختصاصی تشخیص منظور به لیگاند بادی آنتی با نمودن مجاور
Blotآشکارسازی
Summer School
![Page 76: In the name of God](https://reader035.vdocuments.us/reader035/viewer/2022070401/568135c1550346895d9d2565/html5/thumbnails/76.jpg)
Summer School
تفکیک پروتئین از مخلوط پروتئینها با استفاده از SDS-PAGEالکتروفورز
![Page 77: In the name of God](https://reader035.vdocuments.us/reader035/viewer/2022070401/568135c1550346895d9d2565/html5/thumbnails/77.jpg)
غشا به پروتئین انتقال
Summer School
![Page 78: In the name of God](https://reader035.vdocuments.us/reader035/viewer/2022070401/568135c1550346895d9d2565/html5/thumbnails/78.jpg)
(Membrane)غشا
Summer School
![Page 79: In the name of God](https://reader035.vdocuments.us/reader035/viewer/2022070401/568135c1550346895d9d2565/html5/thumbnails/79.jpg)
غشا (membrane)انواعنیتروسلولز-سلولز - اتیل آمینو اتیل دیسلولز - متیل کربوکسی-PVDF) فلوراید) دی وینیلیدن پلی-DBM) متیل) اکسی آزوبنزل دی-DPT) تیواتر) فنیل آزو دینایلون--Summer School
![Page 80: In the name of God](https://reader035.vdocuments.us/reader035/viewer/2022070401/568135c1550346895d9d2565/html5/thumbnails/80.jpg)
غشا انتخاب بر موثر عوامل
بالتینگ • هدفقیمت•
Summer School
![Page 81: In the name of God](https://reader035.vdocuments.us/reader035/viewer/2022070401/568135c1550346895d9d2565/html5/thumbnails/81.jpg)
سلولز نیترو ویژگیهای
منافذ • میکرومتر 0/45تا 0/05اندازهپروتئین • به اتصال باالی ظرفیتقیمت • ارزان
![Page 82: In the name of God](https://reader035.vdocuments.us/reader035/viewer/2022070401/568135c1550346895d9d2565/html5/thumbnails/82.jpg)
انتقال (Transfer Buffer)بافر
Summer School
![Page 83: In the name of God](https://reader035.vdocuments.us/reader035/viewer/2022070401/568135c1550346895d9d2565/html5/thumbnails/83.jpg)
انتقال بافر موثربرانتخاب عوامل
)برای گلیکوپروتئینها از بافر بورات سدیم نوع پروتئین •استفاده می شود(
نوع غشا•نوع الکتروفورز• CAPSمانند تعیین توالی پروتئین که از بافر هدف بالتینگ)•
(استفاده می گردد
Summer School
![Page 84: In the name of God](https://reader035.vdocuments.us/reader035/viewer/2022070401/568135c1550346895d9d2565/html5/thumbnails/84.jpg)
غشا به انتقال تایید راههای
یا ) • سلولز نیترو غشا آمیزی ( PVDFرنگ- - ( بلک آمیدو اس، پانسو مانند پذیر درصد(0/01برگشت- ( آمیدوبلک آبی، کووماسی ناپذیر (0/5برگشت اسیدی درصد
تجاری • خاص پروتئینی مارکرهای از استفاده
Summer School
![Page 85: In the name of God](https://reader035.vdocuments.us/reader035/viewer/2022070401/568135c1550346895d9d2565/html5/thumbnails/85.jpg)
غشا به انتقال از بعد مراحل سایر
Summer School
![Page 86: In the name of God](https://reader035.vdocuments.us/reader035/viewer/2022070401/568135c1550346895d9d2565/html5/thumbnails/86.jpg)
Membrane Blocking(Quenching)
Blocker must be inert protein(BSA, hemoglobin, Skim milk,Gelatin,…)
Summer School
![Page 87: In the name of God](https://reader035.vdocuments.us/reader035/viewer/2022070401/568135c1550346895d9d2565/html5/thumbnails/87.jpg)
تشخیص اختصاصی پروتئینها در غشا با استفاده ازلیگاندها
مستقیم • تشخیصغیرمستقیم • تشخیص
) ثانویه ) لیگاند به متصل ها رادیواکتیو،فلورسانس،آنزیم مواد از استفاده با
: لیگاندها انواعمی ) - قرار استفاده مورد پژوهشی یا تشخیصی اهداف با که بادیها آنتی
گیرند(لکتینها-و ...-
Summer School
![Page 88: In the name of God](https://reader035.vdocuments.us/reader035/viewer/2022070401/568135c1550346895d9d2565/html5/thumbnails/88.jpg)
) بالتینگ) وسترن ایمونوبالتینگ
Summer School
![Page 89: In the name of God](https://reader035.vdocuments.us/reader035/viewer/2022070401/568135c1550346895d9d2565/html5/thumbnails/89.jpg)
Blot Detection & Evaluation
Summer School
![Page 90: In the name of God](https://reader035.vdocuments.us/reader035/viewer/2022070401/568135c1550346895d9d2565/html5/thumbnails/90.jpg)
Thanks