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Diagnóstico laboratorial das infecções fúngicas
Universidade Estadual do Sudoeste da BahiaProjeto de Extensão
Prof. Dr. Gildomar Lima Valasques Junior
Doutor em Biotecnologia
Jequié
2015
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Introdução
• Diagnóstico micológico:
– Exame microscópico
• Visualiza a morfologia
– Exame em cultivo
• Isola o micro-organismo para posterior identificação
– Necessária uma suspeita de diagnóstico
– Transporte adequado
– Meio e condições de cultivos adequados
– Podem apresentar-se como filamentosos ou leveduriforme
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• Aspectos gerais do laboratório
– Área de trabalho
• Etiquetas de biossegurança
• Riscos biológicos
• Evitar entrada de pessoas desautorizadas
• Evitar consumo de bebidas e alimentos
– Recursos humanos
• Qualificação para o trabalho
• Treinamento específico
Introdução
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• Aspectos gerais do laboratório
– Controle de qualidade
• Equipamentos com registro de uso
• Vidraria sempre lima e estéril
• Reagentes sempre dentro da validade e nos locais corretos
• Meios de cultura armazenados de maneira correta e validados quanto a esterilidade
• Livro de registro
• Cuidados com amostras biológicas
Introdução
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Procedimentos Laboratoriais
• Raspado de pelo, pele e unha
– Preparação para a coleta
• Identificar o recipiente
• Separar os materiais de uso:– Lâmina, bisturi, tesoura, álcool etc.
• Pele:– Assepsia com álcool a 70%
– Raspar os bordos inflamados
– Colher a amostra em 2 lâminas de microscopia ou placa de petri
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• Raspado de pelo, pele e unha
– Pele
• Método de porto– Adicionar fita colante transparente à lesão
– Pressionar levemente
– Retirar a fita
– Observar os aspectos das colônias ao microscópio
Procedimentos Laboratoriais
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• Raspado de pelo, pele e unha
– Unha
• Assepsia com álcool a 70%
• Cortar a unha até o limite da lesão
• Coletar o material subungueal com lâminas estéreis
• Encaminhar ao laboratório
Procedimentos Laboratoriais
Esculpidor de Lecron
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• Raspado de pelo, pele e unha
– Pêlo
• Não necessita assepsia
• Selecionar os pelos infectados (mínimo de 15)
• Remover com uma pinça estéril
• Colocar em recipiente limpo, seco e estéril
Procedimentos Laboratoriais
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• Semeadura para pele, unha e pêlo
– Usar Ágar sabouraud com clorafenicol inclinado
• Suspeita de pitiríase vesicolor acrescentar azeite de oliva
• Com uma pinça de platina em L Transferir o material para o tubo
• Incubar a 30°C por 4 semanas
Procedimentos Laboratoriais
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• Raspado de pelo, pele e unha
– Exame direto
• KOH 10-20% sobre uma lâmina de microscopia
• Depositar um fragmento do material e colocar a lamínula
• Aguardar a digestão (30min)
• Observar no microscópio (40X)– Hifas regulares e septadas
– Hifas escuras
– Organismos leveduriformes
– Nódulos compostos por fungos ligados ao pêlo
Procedimentos Laboratoriais
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• Raspado de pelo, pele e unha
– Cultura
• Positivo para Levedura
Procedimentos Laboratoriais
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• Raspado de pelo, pele e unha
– Cultura
• Positivo para fungo filamentoso
Procedimentos Laboratoriais
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• Materiais de fragmento
– Coleta
• Identificar o recipiente
• Biópsia realizada pelo médico
– Semeadura
• Meio de cultura específico para a suspeita a depender do local do material obtido
• Fragmentar o objeto com bisturi estéril
• Incubar a 30°C e observar por 4 a 12 semanas– Suspeita de Histoplasmose
Procedimentos Laboratoriais
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• Materiais de fragmento
– Exame direto
• Colocar uma gota de soro fisiológico na lâmina
• Esfregar um ou mais fragmentos na lâmina
• Colocar a lamínula
• Observar no microscópio (40X)– Organismos leveduriformes
– Hifas septadas de cor castanha ou marron
– Hifas claras sem septo
Procedimentos Laboratoriais
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• Materiais de fragmento
– Coloração de gram
• Levedura é gram positivo
Procedimentos Laboratoriais
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• Materiais de fragmento
– Realizar cultura
• Positivo para leveduras– Morfologia característica
• Positivo para fungo filamentoso– Morfologia característica
Procedimentos Laboratoriais
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• Fungo de Líquor
– Coleta:
• Realizado pelo clínico
– Semeadura
• Cultivo em ágar niger para identificação de criptococos
• Teste de fenoloxidase
Procedimentos Laboratoriais
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• Fungo de Líquor
– Semeadura
• Técnica de filtração em membrana
Procedimentos Laboratoriais
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• Fungo de Líquor
– Exame direto
• Usado quando a disponibilidade de material é baixa
• Nigrosina– Numa lâmina colocar 1g de nigrosina
– Adicionar uma porção do sedimento do líquor
– Colocar a lamínula
» Positivo para leveduras semelhantes a cryotococcus sp
» Negativo
Procedimentos Laboratoriais
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• Fungo de Líquor
– Semeadura
• Teste de urease
Procedimentos Laboratoriais
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• Fungos de materiais líquidos
– Coleta:
• Punção de líquido (Pleural, ascítico, pericárdio, sinovial) ou aspirado gástrico
• Colocar em frasco estéril
– Semeadura
• Meio Ágar Sabouraud e BHI inclinado
• Centrifugar o material
• Fazer estrias com o precipitado
• Incubar por 30 dias a 30°C
Procedimentos Laboratoriais
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• Fungos de materiais líquidos
– Exame direto
• Colocar 1 gota do sedimento
• Colocar a lamínula
• Aumentar em 40X– Aspectos das leveduras
– Aspectos morfológicos das hifas
• Usar Nigrosina se suspeita de Criptococose
• Coloração de gram– Leveduras gram positiva
Procedimentos Laboratoriais
![Page 23: Diagnóstico laboratorial das infecções fúngicas](https://reader031.vdocuments.us/reader031/viewer/2022021418/58943e5b1a28ab875f8baaa4/html5/thumbnails/23.jpg)
• Fungos de materiais líquidos
– Cultura
• Positivo para levedura
• Positivo para fungo filamentoso
Procedimentos Laboratoriais
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• Fungos de abscessos e secreções
– Coleta
• Punção de abscessos fechados
• Local já exposto– Lavar com soro fisiológico estéril
– Coletar com alça microbiológica descartável
– Coletar o material e passar pra solução salina estéril
– Refrigerar a 4°C por no máximo 4h
Procedimentos Laboratoriais
![Page 25: Diagnóstico laboratorial das infecções fúngicas](https://reader031.vdocuments.us/reader031/viewer/2022021418/58943e5b1a28ab875f8baaa4/html5/thumbnails/25.jpg)
• Fungos de abscessos e secreções
– Coleta
• Secreção de conduto auditivo externo
• Secreções oculares
• Secreções de nariz e seios paranasais
• Secreções vaginais
Procedimentos Laboratoriais
![Page 26: Diagnóstico laboratorial das infecções fúngicas](https://reader031.vdocuments.us/reader031/viewer/2022021418/58943e5b1a28ab875f8baaa4/html5/thumbnails/26.jpg)
• Fungos de abscessos e secreções
– Semeadura
• Ágar Sabouraud e Ágar BHI
– Materiais fluidos
• Centrifugar
• Realizar estrias com o precipitado
• Incubar por 4 semanas a 30°C
– Materiais mucóides (pús)
• Digerir com acetil-cisteína
• Aguardar 30min a 24h para digestão
• Proceder a semeadura
Procedimentos Laboratoriais
![Page 27: Diagnóstico laboratorial das infecções fúngicas](https://reader031.vdocuments.us/reader031/viewer/2022021418/58943e5b1a28ab875f8baaa4/html5/thumbnails/27.jpg)
• Fungos de abscessos e secreções
– Cultura
• Positivo para Levedura– Comumente Candida
• Positivo para fungos filamentosos– Comumente aspergillus ou zigomicetos
Procedimentos Laboratoriais
![Page 28: Diagnóstico laboratorial das infecções fúngicas](https://reader031.vdocuments.us/reader031/viewer/2022021418/58943e5b1a28ab875f8baaa4/html5/thumbnails/28.jpg)
• Fungos de secreções do Trato respiratório
– Coleta
• Catarro (pouca representatividade clínica)
• Broncoscopia
• Aspiração traqueal
• Escarro– Realizar higiene bucal
– Gargarejar com água fervida
– Recolher o escarro em frasco estéril
– Evitar contaminação com a saliva
Procedimentos Laboratoriais
![Page 29: Diagnóstico laboratorial das infecções fúngicas](https://reader031.vdocuments.us/reader031/viewer/2022021418/58943e5b1a28ab875f8baaa4/html5/thumbnails/29.jpg)
• Fungos de secreções do Trato respiratório
– Semeadura
• Ágar sabouraud
• Ágar BHI
• Materiais fluidos devem ser centrifugados
• Semear o sedimento em estrias
• Incubar por 14 dias a 12 semanas a 30°C
– Exame direto
• 1 gota de solução fisiológica na lâmina
• Colocar a lamínula
• Observar no microscópio
Procedimentos Laboratoriais
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• Fungos de secreções do Trato respiratório
• Exame direto com KOH 20%/DMSO– 1 gota na lâmina
– 1 gota do material
– Colocar a lamínula
– Esperar 30min
– Observar no microscópio (40X)
• Visualização com Nitrogrosina– Criptococose
• Coloração de gram– Gram positivo
• Cultura– Levedura (Candida ou criptococcus) ou Fungo
Aspergillus
Procedimentos Laboratoriais
![Page 31: Diagnóstico laboratorial das infecções fúngicas](https://reader031.vdocuments.us/reader031/viewer/2022021418/58943e5b1a28ab875f8baaa4/html5/thumbnails/31.jpg)
• Fungos na urina
– Coleta
• Sondagem ou citoscopia
• Coleta de jato de urina médio– Processamento rápido da amostra
– Semeadura
• Meio ágar sabouraud em placa de petri
• Semeadura por esgotamento alça calibrada
• Infecção– Acima de 1000UFC/mL
Procedimentos Laboratoriais
![Page 32: Diagnóstico laboratorial das infecções fúngicas](https://reader031.vdocuments.us/reader031/viewer/2022021418/58943e5b1a28ab875f8baaa4/html5/thumbnails/32.jpg)
• Fungos de urina
– Exame direto
• Colocar 1gota de solução fisiológica sobre a lâmina
• Colocar 1 ou 2 gotas do sedimento
• Colocar a lamínula
• Observar no microscópio
– Coloração de nigrosina
• Suspeita de criptococose
– Coloração de gram
• Leveduras são gram positivo
Procedimentos Laboratoriais
![Page 33: Diagnóstico laboratorial das infecções fúngicas](https://reader031.vdocuments.us/reader031/viewer/2022021418/58943e5b1a28ab875f8baaa4/html5/thumbnails/33.jpg)
• Fungos de urina
– Cultura
• Candida e criptococcus são os mais isolados
• Raro encontrar fungos filamentosos
Ágar niger
Procedimentos Laboratoriais
![Page 34: Diagnóstico laboratorial das infecções fúngicas](https://reader031.vdocuments.us/reader031/viewer/2022021418/58943e5b1a28ab875f8baaa4/html5/thumbnails/34.jpg)
![Page 35: Diagnóstico laboratorial das infecções fúngicas](https://reader031.vdocuments.us/reader031/viewer/2022021418/58943e5b1a28ab875f8baaa4/html5/thumbnails/35.jpg)
Aspergillus
![Page 36: Diagnóstico laboratorial das infecções fúngicas](https://reader031.vdocuments.us/reader031/viewer/2022021418/58943e5b1a28ab875f8baaa4/html5/thumbnails/36.jpg)
Trichophyton
![Page 37: Diagnóstico laboratorial das infecções fúngicas](https://reader031.vdocuments.us/reader031/viewer/2022021418/58943e5b1a28ab875f8baaa4/html5/thumbnails/37.jpg)
Criptococcus
![Page 38: Diagnóstico laboratorial das infecções fúngicas](https://reader031.vdocuments.us/reader031/viewer/2022021418/58943e5b1a28ab875f8baaa4/html5/thumbnails/38.jpg)
Candida
![Page 39: Diagnóstico laboratorial das infecções fúngicas](https://reader031.vdocuments.us/reader031/viewer/2022021418/58943e5b1a28ab875f8baaa4/html5/thumbnails/39.jpg)
Rhysopus
![Page 40: Diagnóstico laboratorial das infecções fúngicas](https://reader031.vdocuments.us/reader031/viewer/2022021418/58943e5b1a28ab875f8baaa4/html5/thumbnails/40.jpg)
Fusarium
![Page 41: Diagnóstico laboratorial das infecções fúngicas](https://reader031.vdocuments.us/reader031/viewer/2022021418/58943e5b1a28ab875f8baaa4/html5/thumbnails/41.jpg)
Diagnóstico laboratorial das infecções fúngicas
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Prof. Dr. Gildomar Lima Valasques Junior
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Jequié
2015