documento antibiograma

7/24/2019 Documento Antibiograma

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UNIVERSIDAD DE SAN CARLOS DE GUATEMALAFACULTAD DE CIENCIAS MDICASUNIDAD DE INMUNOLOGA Y MICROBIOLOGA MDICA

PRUEBAS DE SUSCEPTIBILIDAD IN VITRO A LOS ANTIMICROBIANOS

ANTIBIOGRAMA

De Bauer & Kirby

Dra. Carmen De Tercero

Dra. Sindy Suchini

Dra. Paola Lee

Dra. Miuril Lpez

Lic. Su Quan

INTRODUCCION:

La seleccin de un antimicrobiano para el tratamiento del paciente depende de numerosos

factores, entre estos se puede mencionar:

1.

Localizacin de la infeccin

2.

Factores de respuesta del hospedero:

a.

Estado inmunolgico

b.

Estado de la funcin renal y/o hepticac. Historia de reacciones alrgicas

d. Enfermedades concomitantes

3.

Caractersticas de absorcin del antimicrobiano y su va de excrecin

4.

Propiedades farmacocinticas y la posologa del antimicrobiano

5.

La sensibilidad local y los patrones de resistencia

6.

Los costos de adquisicin y la administracin del antimicrobiano

7.

La susceptibilidad del microorganismo frente al antimicrobiano

Debe tomarse en cuenta que en algunas especies de microorganismos, la resistencia

antimicrobiana es una propiedad innata y en otras la pueden adquirir.

GENERALIDADES:

Existen diversas categoras de pruebas utilizadas para determinar la actividad antimicrobiana:

1) Prueba de dilucin y prueba de difusin en disco: valora la actividad inhibidora frente a un

microorganismo determinado.


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2)

Pruebas que determinan la actividad letal de un antimicrobiano frente a un

microorganismo.

3) Pruebas que determinan la actividad -lactamasa en un determinado microorganismo,

como elemento pronstico de su susceptibilidad frente a algunos antibiticos -

lactmicos.

4)

Pruebas para determinar directa o indirectamente la cantidad de antimicrobiano en unlquido biolgico, habitualmente suero.

La conducta del mdico ante las bacterias en las pruebas antimicrobianas, suelen interpretarse

como:

SUSCEPTIBLES: La infeccin producida por un microorganismo puede tratarse

adecuadamente con la dosis del antimicrobiano recomendado para este tipo de infeccin

y de microorganismo infectante, excepto en aquellos casos en los que este

contraindicado por otras razones.

DE SUSCEPTIBILIDAD INTERMEDIA:La infeccin debida a un microorganismo puede ser

tratada mediante concentraciones alcanzables de determinados antimicrobianos cuando

se administran estos en dosis ms altas o cuando las infecciones se encuentran en

regiones del organismo donde se concentran los antimicrobianos (ej. La orina).

RESISTENTES: Supone que la infeccin producida por un microorganismos no responder

adecuadamente al antimicrobiano. No utilizando el mismo.

Muchos han sido los factores que han contribuido al incremento de cepas multiresistentes a

antimicrobianos y antibiticos, como su uso inadecuado, migracin nacional e internacional que

facilita la diseminacin, aglomeraciones de personas, entre otros. Las bacterias pueden ser

resistentes intrnsecamente a uno o ms agentes antimicrobianos y pueden adquirir la resistencia

por mutaciones, intercambio gentico horizontal (conjugacin, transduccin) por genes de

resistencia de otros organismos, as como por adaptaciones metablicas al frmaco.

SELECCIN DE ANTIMICROBIANOS:

La seleccin final de los antimicrobianos a utilizar para cada tipo de microorganismo, depender

del Laboratorio de Microbiologa conjuntamente con el Comit de Infecciosas de cada hospital.

Cuando hay un brote hospitalario de algn microorganismo que usualmente es susceptible al

antimicrobiano ideal y se muestra actualmente resistente. Se enva una notificacin al Centro de

referencia en Guatemala es el Laboratorio Nacional de Microbiologa (Barcenas, Guatemala)

quienes son los responsables de investigar la nueva cepa e indicar, segn caractersticas del

mismo, que antimicrobianos utilizar, los cuales deben cumplir los estndares que establece la El

Instituto de Estndares Clnicos y de Laboratorios (Clinical and Laboratory Standard Institute/CLSI/,

radicado en Pennsylvania, EUA).


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Los antimicrobianos recomendados por la CLSI, se agrupan en cuatro grupos:

GRUPO A: Se encuentran aquellos antimicrobianos que se han de ensayar y que deben

ser informados de forma rutinaria.

GRUPO B: Est constituido por antimicrobianos que pueden ser valorados de forma

rutinaria, solamente se informarn si los del grupo A no son activos, no son apropiados

para un lugar determinado de la infeccin, o si se constata un fallo teraputico con el

grupo A.

GRUPO C: Estn incluidos los antimicrobianos que sern estudiados cuando aparezcan

problemas especficos de resistencia, por ejemplo, brotes epidmicos, en pacientes con

alergia a otros antibiticos o en infecciones inusuales.

GRUPO D: Antimicrobianos utilizados en infecciones del tracto urinario.

Dentro de estos grupos y para un determinado microorganismo existe una batera de antibiticos

a probar. Por ejemplo, las enterobacterias


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Dependiendo del mecanismo de accin se resume en dos grandes grupos de antimicrobianos (ver

fig. No. 1):

Bactericidas: Ejercen una accin letal e irreversible sobre el microorganismo.

Fosfomicina, Vancomicina, B-Lactmicos, Aminoglucsidos, Rifampicina, Acido

Nalidxico, Quinolonas, Nitrofurantoinas.

Bacteriostticos: Inhiben el crecimiento pero no matan al microorganismo, permitiendo

que las propias defensas del hospedero pueden eliminar a las bacterias. Tetraciclina,

Cloranfenicol, Sulfonamidas, Trimetoprim, Lincomicina, Clindamicina, Macrlidos.

Fig. No. 1: Sitios de accin de los antimicrobianos en los microorganismos


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ANTIBIOGRAMA:

El Instituto de Estndares Clnicos y de Laboratorios, define el antibiograma como: un perfilgeneral de los resultados de la susceptibilidad antimicrobiana de una especie microbiana frente auna batera de agentes antimicrobianos.

En general, se entiende por antibiograma el resultado de las pruebas de susceptibilidad invitrollevadas a cabo para conocer el comportamiento de un microorganismo frente adeterminados antimicrobianos, cuyos resultados se expresan en trminos de "sensibilidad" y"resistencia".

Las formas bsicas de medir cuantitativamente la actividad in vitrode los antimicrobianos son:

Concentracin mnima inhibitoria (MIC):

Es la base de la medida de la susceptibilidad de una bacteria a un determinado

antimicrobiano.

Se define como la menor concentracin de una gama de diluciones del antimicrobiano

que provoca una inhibicin de cualquier crecimiento bacteriano visible.

Es el valor fundamental de referencia que permite establecer una escala de actividad

del antimicrobiano frente a diferentes especies bacterianas.

Concentracin mnima bactericida (MBC):

Es la concentracin ms baja del antimicrobiano que es capaz de matar el 99.9% del

inculo original en un periodo de tiempo determinado.

MTODOS DE ANLISIS DE LA SENSIBILIDAD ANTIMICROBIANA

Podemos distinguir diferentes tipos de mtodos en funcin de la tcnica utilizada y de la

informacin que dan (Tabla No. 2).

METODO TECNICA INFORMACIN

CUALITATIVO ANTIBIOGRAMA DIFUSION DE MICRODISCOS (KIRBY-BAUER) RESISTENCIAVALOR INTERMEDIO

SENSIBILIDADSEMICUANTITATIVO GRADIENTE ANTIBIOTICO (E-TEST) APROXIMACION A

CONCENTRACION MINHIBITORIA (CMI)

CUANTITATIVO 1.

DILUCION DE CALDO:

MACRODILUCION EN TUBO

MICRODILUCION EN PLACA2.

DILUCION EN AGAR3.

SISTEMA DE AUTOMATIZADOS (Vitek:::)

DETERMINACION DE LA CMI

Tabla No. 2:MTODOS DE ANLISIS DE LA SENSIBILIDAD ANTIMICROBIANA.


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Tabla tomada del Instructivo de Laboratorio de Resistencia Bacteriana, de la

Dra. Dbora Esmaralda Aldana MD, PhD

METODO DE DIFUSION EN AGAR:

Consiste en el mtodo de difusin con discos descrito por Bauer y Kirby, al que se le han realizado

sustanciales modificaciones posteriores segn criterios del CLSI, estos resultados obedecen a unproceso de simple interpretacin por medio de puntos de corte de los halos de inhibicinaparecidos en el medio de cultivo.

En dcadas pasadas la interpretacin de estos resultados resultaba muy fcil, ya que solo bastabautilizar el antimicrobiano al cual el antibiograma sealaba como sensible.

En la actualidad este proceso se ha complejizado sobremanera debido al incremento de laresistencia bacteriana, a punto de partida de un sinnmero de mecanismos creados por losmicroorganismos para eludir el efecto de los antimicrobianos y su diseminacin entre la poblacinmicrobiana, que hacen que no siempre se puedan tomar en cuenta los resultados del

antibiograma sin un previo anlisis.

Fundamentos tericos de la prueba de difusin en discos de Kirby-Bauer

La prueba de difusin en disco se basa en la capacidad de muchos agentes antimicrobianos dedifundir en el agar creando un gradiente continuo de concentracin. Si el disco que contiene elantibitico se deposita sobre una placa recin inoculada, se producir la inhibicin delcrecimiento. Esta rea, al ser proporcional a la CMI (concentracin inhibitoria minima) permitirla distincin de cepas susceptibles, resistentes o intermedias.

Puntos de control:

a)

Concentracin del inculo. La concentracin ideal del inoculo se espera que se encuentreidealmente a una concentracin de 108 de microorganismos. Esto se realiza segn losestndares de Mc Farfland; donde la concentracin ideal del inculo corresponde a unadilucin de turbidez que puede ir de 0.5 a 10, (estos estndares son creados al mezclarsoluciones de cloruro de bario al 1% con cido sulfrico al 1% en volmenesespecficos), para asegurar la densidad correcta (ver fig. No. 2).

Fig. No. 2: Estndares de Mc Farfland


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b)

Medio. El medio adecuado para realizar la prueba es el Agar de Mueller-Hinton (MH) (verfig. No. 3). Para determinadas bacterias con requerimientos nutricionales especficos sepuede utilizar el MH-sangre o el MH-chocolate. Se incuban las placas durante 16-24 horasa 35C y al cabo de este tiempo se estudia el crecimiento en ellas.

Fig. No. 3: Agar de Mueller-Hinton

c)

Concentracin de los discos de antibitico. Para cada antimicrobiano hay fijadas unasconcentraciones estndar, segn los estndares de CLSI (Instituto de Estndares Clnicos yde Laboratorio). La variacin de estas concentraciones implica variar los criterios deinterpretacin. (Ver fig. No. 4)

Figura No. 4: Concentracin de los Discos de Antibiticos


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Figura No. 5: Tabla de susceptibilidad y resistencia antimicrobianos en Agar de Muller-Hinton

Realizacin de la Prueba:

Cuando se han aislado las colonias de un organismo que ha sido identificado como patgeno

potencial, debe de realizarse lo siguiente:

1.

Seleccionar las colonias

2.

Preparar una suspensin del inculo

3.

Estandarizar las suspensin del inculo4.

Inocular la placa

5.

Colocar discos de antimicrobianos

6. Incubar la placa

7. Medir las zonashalo- de inhibicin

8. Interpretar los resultados

NOTA: VER VIDEOPRUEBAS DE SUSCEPTIBILIDAD IN VITRO A LOS ANTIMICROBIANOS


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BIBLIOGRAFIA

1.

Instructivo de Laboratorio de Resistencia Bacteriana (Mtodo de Bauer y Kirby). AldanaDbora Esmeralda. Unidad Didctica de Inmunologa y Microbiologa. Universidad de San

Carlos de Guatemala.

2.

Mecanismo de resistencia a antimicrobianos en bacterias. Gerardo Becerra, Arturo

Plascencia, Antonio Luvanos, Miguel Domnguez, Ivn Hernndez. Enfermedades

Infecciosas y Microbiologa, vol. 29, nm. 2, abril-junio 2009

3.

Manual de Laboratorio para la Identificacin y Prueba de Susceptibilidad a los

Antimicrobianos de Patgenos Bacterianos de Importancia para la Salud Pblica en el

Mundo en Desarrollo. Perilla Mindy J., Ajello Gloria et al. Organizacin Mundial de laSalud 2004

4.

Actualizacin En Resistencia Bacteriana Y Normas CLSI. Ovalle Mara Victoria. CLSI

(Instituto de Estndares Clnicos y de Laboratorio). 2010

5.

Pruebas de sensibilidad in vitro a los antimicrobianos. Henry Bernand John. El

Laboratorio en el Diagnstico Clnico. Editorial Marban. 2007

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