Diagnóstico de la infección

por Trypanosoma cruzi

Bibiana Volta

Prevalencias

• América:

≈ 25 millones en

riesgo*

≈ 8 millones

infectados*

≈ 12 mil muertes por

año*

• Argentina:

≈ 1.600.000

infectados**

*WHO/TDR, 2012; ** OPS, 2006.

Epidemiología

• Endémica en el continente América

• Migraciones

Trypanosoma cruzi

Protozoo, hemoflagelado

Tripomastigote

Amastigote

Epimastigote

Ciclo de vida

Vías de transmisión

Mecanismos Condicionante Profilaxis

• Vectorial Existencia del vector Fumigación periódica

• Vertical Parasitemia materna Diagnóstico materno

• Transfusión / Trasplante de órganos

Donante infectado Serología

• Accidentes de laboratorio

Falta de bioseguridad Bioseguridad

• Oral Alimentos contaminados Control de losAlimentos

Fases y Formas Clínicas

• Fase Aguda: parásitos circulantes

• Fase Crónica: - Forma indeterminada (50 a 60%)

- Forma cardíaca (25 -30%)

- Formas digestiva (5-15%)

- Formas cerebrales (< 1%)

Evolución Parasitológica y Serológica en personas infectadas por Trypanosoma cruzi

- El diagnóstico de certeza es elhallazgo del agente infectante.

• El diagnóstico de certeza está dado por el hallazgo del agente infectante

Sensibilidad de los métodos parasitológicos y serológicos en los períodos agudo y crónico*

*Basso B & Moretti E. Disponible en: http://enfermedadchagas. com. ar/labdiag. pdf.

Métodos Parasitológicos

Indirecto

Directos

- Hemocultivo

- Xenodiagnóstico

- Strout

- Microhematocrito

- Nuevo Micrométodo

(Amplificación) (Concentración)

- ¿Gota Fresca/ Gota Gruesa ?

Hemocultivo: método parasitológico indirecto

La sangre heparinizada

se centrifuga a 2300 rpm/10min/4°C

para separar el plasma

Las células se inoculan en un tubo con 5 ml de medio LIT

con 10% de SBF y antibióticos

Los tubos se incuban en forma inclinada a 29°C

El desarrollo de parásitos se observa con

microscopio a los 30, 60, 90

y 120 días

Xenodiagnóstico: método parasitológico indirecto

Strout: método parasitológico directo

Microhematocrito: método parasitológico directo

• Freilij H, et al. J Clin Microb 1983;18(2):327-30

Nuevo Micrométodo: método parasitológico directo

• De Rissio et al; Medicina 1999; Vol 59 (3).

Métodos Serológicos

• Los resultados no se expresan en unidades concretas, sino relativas (“títulos”).

• El valor de corte es arbitrario (puede variar para distintas regiones geográficas).

• Presencia de reacciones cruzadas.

• Deben interpretarse siempre en términos de probabilidad y en el contexto de la epidemiología y la clínica.

• Se buscan anticuerpos o antígenos.

IFI (Inmunofluorescencia indirecta)

• IFI positiva

• Requiere un operador experimentado

• No permite procesar un elevado número de muestras

• Requiere un microscopio de fluorescencia

HAI (Hemaglutinación indirecta)

Reactivo No reactivo Discordante

• Sencillez operativa

• Permite procesar un elevado número de muestras

ELISA (Ensayo por Inmunoabsorción Ligado a Enzimas)

• Requiere espectrofotómetro

• Permite procesar un elevado número de muestras

• Es el método serológico con mayor sensibilidad

Duplas Serológicas

HAI-ELISA

HAI-IFI

ELISA-IFI

Sensibilidad: 98,0- 99,9%

Procedimientos con resultados obtenidos con dos tests convencionales para detección de la infección

por T. cruzi

P-P ID-NID-IDP-ID N-N

SueroPositivo

SueroNegativo

P-P ID-NID-IDP-ID N-N

SueroPositivo

SueroNegativo

REPETIR (ambos tests)

• Solicitar una nueva muestra • Derivar a un Centro de Referencia (donde se realizarán 3

tests serológicos en paralelo)

Chagas Congénito

Es la infección por Trypanosoma cruzi adquirida durante la gestación por vía transplacentaria o trabajo de parto

• En Argentina, se estima que la tasa de transmisión congénita varía entre el 6-9%.

• La transmisión congénita de T. cruzi no puede prevenirse.

• La embarazada infectada no puede recibir tratamiento (las drogas son teratogénicas ).

• La ley 26.281/07 establece que es obligatorio el seguimiento y estudio de todo niño de madre con infección crónica por T. cruzi hasta el año de vida.

---- Curva serológica típica de neonatos infectados---- Curva serológica típica de neonatos con pasaje

transplacentario

*Basso B & Moretti E. Disponible en: http://enfermedadchagas. com. ar/labdiag. pdf.

Bebés nacidos de madre con serología Positiva

1º Control:

1er mes

(Método

Parasitológico)

2º Control:

10mo Mes

(Serología)

Tratamiento

Negativo

Negativo

Fin del Seguimiento

Positivo

Positivo

Diagnóstico de la Infección congénita por T. Cruzi

Bancos de sangre

• La OMS/WHO* recomienda el empleo de 2 técnicas con principios diferentes.

• La combinación ideal parecería ser ELISA + HAI.

• HAI: Excelente especificidad pero sensibilidad menor dependiendo del kit usado (97%).

• ELISA: Sensibilidad cercana al 100%, aunque de menor especificidad.

• En Argentina, los Bancos de sangre estan regulados por la ley Nª 22.990 (Ley Nacional de Sangre). La ley está reglamentada por la resolución 797/2013 anexo I del Ministerio de Salud.

* WHO 2002. Control of Chaga’s disease.

¨Tamizaje¨:

Positivo cuando al menos una de las prueba es Reactiva

¨Confirmación¨: Positivo cuando las dos pruebas son Reactivas

A cada donación efectiva, debe realizársele las pruebas para la detección de anticuerpos anti T.cruzi, empleando dos pruebas ELISA (una con antígenos recombinantes; otra con lisado de parásitos)

Ley Nº 22.990 –Resolución MsaL 797/2013-anexo I

Test rapidos (Inmunocromatografías)

XInfección crónica

Infección aguda X

X

X

X

X

Métodos parasitológicos

directos

Donante y Receptor de órganos

Donantes de sangre

Monitoreo por Reactivación

X

Diagnóstico de la Infección por T. cruzi (resumen)

Métodos serológicos

Monitoreo de respuesta terapéutica X

Conclusiones-Diagnóstico

• Los mejores tests no son rapidos ni están siempre disponibles.

• Las pruebas rapidas no pueden usarse para el diagnósticode la enfermedad de Chagas.

• Dificultad en obtener 100% de sensibilidad y especificidad .

• El tipo de test debe adecuarse a los objetivos.

• No existe un test ideal.

Gracias por su atención