III. MATERIALES Y METÓDOS

3.1. MATERIALES DE VIDRIO, METAL Y OTROS

3.1.1. Tubos de ensayo de 11x 130 mm.

3.1.2. Gradillas.

3.1.3. Pipetas graduadas de 1, 5, 10 ml.

3.1.4. Micro pipetas (capilares).

3.1.5. Fiolas de 100 ml.

3.1.6. Probetas de 50 ml.

3.1.7. Beakers de 50 ml y 100 ml.

3.1.8. Buretas.

3.1.9. Luna reloj.

3.1.10. Papel watman N° 3

3.2. EQUIPOS

3.2.1. Ph metro.

3.2.2. Estufa

3.3. REACTIVOS

3.3.1. Aminoácidos preparados por separado.

3.3.2. Standares de aminoácidos.

3.3.3. Solventes:

- Ac. Acético 0.1 N.

- Fenol: agua (80:20)

- Butanol: acético (glacial): agua: Piridina.

- NaOH 0.1 y 0.01 N.

- Reactivos Nihidrina para relevado.

3.4. MÉTODOS

Preparación del papel

Cromatográfico

Colocando los AA en

Papel Cromatográfico

Remojando en el ácido HCl,

Luego lo puesimos en la estufa

Para secarlo

Con la ayuda de los capilares se agrego

0.2 ul de Triptófano, Arginina,

Acido Aspártico

Colocando el papel

FLUJOGRAMA CUANTIFICACIÓN Y SEPARACIÓN

En la cámara

Realizando el secado

Analizando los

Resultados de la

Coloración

IV. RESULTADOS

Resultados obtenidos en la corrida con el papel Cromatografico

8.5 cm distancia recorrida de la

Triptófano

1.9 cm distancia recorrida de

Arginina

2.2 cm distancia recorrida de la Acido aspártico

17.2 cm

Relación entre la distancia recorrida por la muestra en relación al recorrido del solvente

Rf1 = d1 ; Rf2 = d2 ; Rf3 = d3

fs fs fs

TABLA N° 1

Rf del AA Triptófano: Rf del AA Arginina: Rf del AA Acido Aspártico:

Rf1 = _8.5 17.2

Rf1 = 0.49

Rf2 = _1.9 17.2

Rf2 = 0.11

Rf3 =_2.2_ 17.2

Rf3 = 0.12

TABLA N° 2

Distancia Final 17.2 cm

Distancia recorrida del triptófano 8.5 cm

Distancia recorrida de la arginina 1.9 cm

Distancia recorrida del ácido aspártico 2.2 cm

Cálculos obtenidos para sacar las concentraciones:

Datos:

CC1 = 1mg/ml

Para T2:

C1 x V1 = C2 x V2

(1mg/ml)x(0.1ml) = C2(1.5ml)

C2 = 0.1mg

1.5ml

C2 = 0.067mg/ml

Para T3:

C1 x V1 = C2 x V2

(1mg/ml)x(0.2ml) = C2(1.5ml)

C2 = 0.2mg

1.5ml

C2 = 0.133mg/ml

Para T4:

C1 x V1 = C2 x V2

(1mg/ml)x(0.3ml) = C2(1.5ml)

C2 = 0.3mg

1.5ml

C2 = 0.200mg/ml

Para T5:

C1 x V1 = C2 x V2

(1mg/ml)x(0.5ml) = C2(1.5ml)

C2 = 0.5mg

1.5ml

C2 = 0.333mg/ml

Abs2 = 1.129

Abs3 = 0.992

Abs4 = 0.790

Abs5 = 0.645

Para T6:

Fc = CC2 + CC3 + CC4 + CC5

Abs2 Abs3 Abs4 Abs5

Fc = 0.067 + 0.133 + 0.200 + 0.124

1.129 0.992 0.790 0.645

Fc = 0.636

0.3 ----> V,x

1.5 ----> V,f

0.3 = 0.2 Fd

1.5

TUBO PROBLEMA

CCTX = Fc (AbsX) Fd

CCT2 = 0.636 x (1.129) x 0.2

CCT2 =0.14

CCT3 = 0.636 x (0.992) x 0.2

CCT3 = 0.13

CCT4 = 0.636 x (0.790) x 0.2

CCT4 = 0.10

CCT5 = 0.636 x (0.645) x 0.2

CCT5 = 0.08

TABLA DE RESULTADOS ABSORVANCIA / CONCENTRACIÓN

ABSORVANCIA CONCETRACIÓNAbs2 = 1.129 CCT2 = 0.14Abs3 = 0.992 CCT3 = 0.13Abs4 = 0.790 CCT4 = 0.10Abs5 = 0.645 CCT5 = 0.08

GRAFICO (Curva patron)

0.07 0.08 0.09 0.1 0.11 0.12 0.13 0.14 0.150

0.1

0.2

0.3

0.4

0.5

0.6

0.7

0.8

0.9

1

1.1

1.2

CONCENTRACIONES

ABSORBANCIA

V. DISCUSIONES

5.1. Según Grandón J. (2007), nos indica que el Triptófano es un aminoácido que capta un tipo de proteína, uso el proceso de cromatografía muy utilizados en los laboratorios y realizo el análisis cualitativo, el rango que indica se encuentra entre 0.40 hasta 0.55. Asimismo en la práctica de cromatografía hecha en el laboratorio nos dio un resultado positivo ya que el valor que optamos fue 0.49 y está dentro del rango del autor.

5.2. Según Nelson D. (2002), nos indica que la Arginina es un aminoácido que capta un tipo de proteína, uso el proceso de cromatografía muy utilizados en los laboratorios y realizo el análisis cualitativo, el rango que indica se encuentra entre 0.09 hasta 0.15. Asimismo en la práctica de cromatografía hecha en el laboratorio nos dio un resultado positivo ya que el valor que optamos fue 0.11 y está dentro del rango del autor.

5.3. Según Del Pozo R. (2005), nos indica que el Ácido Aspártico es un aminoácido que capta un tipo de proteína, uso el proceso de cromatografía muy utilizados en los laboratorios y realizo el análisis cualitativo, el rango que indica se encuentra entre 0.09 hasta 0.15. Asimismo en la práctica de cromatografía hecha en el laboratorio nos dio un resultado positivo ya que el valor que optamos fue 0.12 y está dentro del rango del autor.

5.4. Según Skoog W. (2000), nos indica que al realizar al realizar practica de aminoácidos, y saber sus valores de absorbancia deben saber calcular, disolver, ya que el espectrofotómetro solo lee colores claros y les da un aproximado en número. Asimismo en la práctica de cromatografía al realizar con nuestras 5 muestras lo llevamos a leer en el espectrofotómetro y nos arrojó unas cifras aceptables.

6. BIBLIOGRAFIA

6.1. Grandón J. (2007), guía de trabajos practicos, carrera de Medicina, Universidad La Católica De Concepción, BIOQUIMICA. Pg 45 – 48.

6.2. Nelson D. (2002), Lenhinger Principio de Bioquímica, tercera edición, edición omega. Pg 34 – 38.

6.3. Del Pozo R. (2005), texto guía de bioquímica Medicina, vulemen 1, Universidad Nacional De San Marcos. Pg 50 – 53.

6.4. Skoog W. (2000), Química Analítica, séptima edición, editorial Mc Graw-Hill. Pg 94 – 96.