DNAרקומביננטי

ושיבוט רקומביננטי DNAהכנה

ברירה בסמני שימוש

בפלסמיד הברירה .pBR322סימניהמקנים • גנים שני זה לפלסמיד

סוגי לשני לעמידותו ampicillinאנטיביוטיקה tetracyclin .

באתר DNAה • הוחדר הזר. Sallהחיתוך

לחיידקים • הוחדר הפלסמיד.) טרנפורמציה)

הפלסמיד • את שקיבלו חיידקיםה עמידים DNAללא היו הזר

. האנטיביוטיקה סוגי לשניהפלסמיד • את שקיבלו חיידקים

ה עמידים DNAעם היו הזרנגד ampicillinכנגד ולא

tetracyclin.

המכילה בצלחת הזריעה X-galוסובסטרט ampicillinתוצאות(bromo-chloro-indolyl-galactopyranoside).

מקנה צבע כחול מקנה צבע כחול lacZlacZ פרוק סובסטרט זה ע"י האנזים פרוק סובסטרט זה ע"י האנזים •למושבה.למושבה.

חיידקים עם פלסמיד רקומביננטי

חיידקים ללא פלסמיד רקומביננטי

DNAבקטריופאג'ים משמשים כנשאים של

גלאי בעזרת המושבה probeזיהוי

גידול חיידקים

הרקומביננטיים בצלחת

פטרי.

יצירת הדפס של המושבות

ע"ג נייר

ליזיס של החיידקים ודנטורציה של ה

DNA.

הוספת הגלאי

אינקובציה של הגלאי

ושטיפה.

חשיפה לנייר צילום.

מקום מושבות שפלטו קרינה

הדפס של המושבות

המכילות את הפלסמיד עם הרצף המבוקש

תוצר בעזרת גן זיהוי גם לאחר שמוצאים את החיידקים שקיבלו את הפלסמיד •

הרקומביננטי, יש עוד מקום לבדוק האם הגן מתבטא בחיידק? תהליך זה יכול להיעשות ע"י זיהוי התוצרים.•

תיאור השיטה: יוצרים הדפס של המושבות •

ע"ג נייר ניטורצולוז. החלבונים נספחים לנייר.

מדגירים את הנייר עם נוגדן •כנגד החלבון.

שטיפה.• מדגירים עם נוגדן שניוני •

מסומן רדיואקטיבית. שטיפה.• בדיקה באוטורדיוגרפיה.•

רנטורציה – דנטורציה של תהליךDNAשל

בגלאי לזיהוי ProbeשימושDNA

Radioactiveprobe (DNA)

Mix with single-stranded DNA fromvarious bacterial(or phage) clones

Base pairingindicates thegene of interest

Single-strandedDNA

של הכלאהגרעין חומצות