variantes de pcr
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VARIANTES DE PCR
- PCR Standard- PCR Anidada (Nested)- PCR Múltiple (Multiplex)- PCR con transcriptasa inversa (RT-PCR)- PCR en tiempo real (PCR cuantitativa) Q-RT-PCR- PCR in situ- PCR especifica de alelo- PCR asimétrica- PCR inversa- PCR hot-start- PCR tail- PCR touchdown- PCR de rango largo- PCR de fidelidad alta- PCR de metilación especifica
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PCR Estándar
Tres Fases:• Desnaturalización• Alineamiento• Extensión
Componentes:• Hembra Templado• Cebadores• Nucleótidos• ADN polimerasa• Iones de Magnesio• Tampón de la reacción
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PCR Anidada (Nested)Dos rondas de reacción:1ra amplifica un segmento mas largo2da amplifica un segmento mas corto (mas especifico)Trabaja con dos pares de cebadores
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PCR Múltiple (Multiplex)
Simultáneamente amplifica 2 o mas secuencias diferentesUsa al menos dos pares de cebadores distintos
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PCR con transcriptasa inversa (RT-PCR)
A partir de muestra de ARN, con proceso de transcripcióninversa (Transcriptasa Reversa)Se crea una cADN y esta es que se amplifica con PCR
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PCR en tiempo real (PCR cuantitativa) Q-RT-PCR
Se conoce cantidad de producto después de cada cicloPor lo tanto se puede determinar cuanto contenía muestra inicialUsan pruebas como TacMan, SYBR Green, Beacons osondas de hibridización
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PCR in situ
- Puede darse dentro de célula o en soporte mecánico- Combina PCR con la hibridización en sitio- Muy útil para evaluar progreso de enfermedades- Preparación de muestra de célula o tejido (fijación) es paso muy critico dentro del proceso
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PCR especifica de alelo
- Como técnica de diagnostico o clonación- Enfocada en variaciones en un solo alelo (de dos o mas muestras)
PCR asimétrica
- Diseñada para amplificar preferiblemente una cadena de ADN en lugar de otra
PCR inversa- Cebadores en lugar de convergir divergen desde sus inicios- Uso cuando se conoce solo parte de secuencia
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PCR hot-start- Acción de ADN polimerasa esta inhibida en temperaturas de ambiente por anticuerpos o químicamente para disminuir reacciones no especificas
PCR tail- Se denomina cuando se intenta aislar una secuencia desconocida cual continua después de una secuencia conocida- Variante de asimétrica pero basada en temperatura
PCR touchdown
- Variante usada cuando se desconoces secuencias exactas de extremos por amplificar, alguna base dudosa en el cebador- Gradualmente se baja temperatura durante hibridación
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PCR de rango largo
- Se denomina método cuando se trabaja con mas de 4kb- Son kit especiales optimizados para fragmentos grandes
PCR de fidelidad alta
- Basada en enzimas diferentes del ADN polimerasa, las cuales proveen actividad de remoción de bases incorporadas incorrectamente
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PCR de metilación especifica
- Para identificar patrones de metilación en islas CG- Muestra tratada y no tratada, dos pares de cebadores
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- PCR Digital- Secuenciación (PCR modificada)- RAPD (Random Amplification of Polimorfic DNA) Uso de varios cebadores para amplificar varios segmentos de ADN (se obtiene patrón único característico)- RACE (Rapid amplification of cDNA ends)- PCR especifica de intersecuencia (ISSR) Uso en huellas genéticas- PCR de extensión solapada (Mutagenesis)- PCR de ensamblaje- LAMP PCR (Loop mediated isotermal amplificación)- PCR con otras enzimas (ej. helicasa)- …
OTROS TIPOS DE PCR
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- Diagnóstico
- Genética Forense
- Epidemiología
- Genética de Clonación
- Paternidad
- Biotecnología
APLICACIONES DE PCR