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UNIVERSIDAD NACIONAL FEDERICO VILLARREAL FACULTAD DE ODONTOLOGÍA
EFICACIA EN LA CICATRIZACIÓN DEL APÓSITO CON ACEITE ESENCIAL DE MINTHOSTACHYS MOLLIS (muña) VERSUS EL APÓSITO QUIRÚRGICO CONVENCIONAL EN
GINGIVECTOMIAS EN ORYCTOLAGUS CUNICULUS (conejos)
TESIS
PARA OBTENER EL TÍTULO PROFESIONAL DE
CIRUJANO DENTISTA
Presentada por El Bachiller:
CASAS ALARCÓN, SAÚL
LIMA – PERÚ
2011
EFICACIA EN LA CICATRIZACIÓN DEL APÓSITO CON ACEITE ESENCIAL DE MINTHOSTACHYS MOLLIS (muña) VERSUS EL APÓSITO QUIRÚRGICO CONVENCIONAL EN
GINGIVECTOMIAS EN ORYCTOLAGUS CUNICULUS (conejos)
MIEMBROS DEL JURADO
Mg. C.D. PEDRO ROMERO CARLOS: PRESIDENTE
C.D. LUIS GONZÀLES GONZÁLES: SECRETARIO
Mg. C.D. MARIA ELENA MOSCOSO SÀNCHEZ: VOCAL
Mg. C.D. NEME PORTAL BUSTAMANTE: MIEMBRO DEL JURADO
C.D. ORISON PARDO MATOS: SUPLENTE
AGRADECIMIENTO
Al Dr. Cachay, al Dr. Chuna, al Dr. Mallma y al
Dr. Montes por su gran ayuda en la realización
del presente trabajo de investigación, que me
brindaron su total y completo apoyo de una
manera desinteresada e incondicional.
A mis amigas María Isabel y Milagros Felicia
por su colaboración y compañía constante, y
sobre todo por su demostración de amistad y
confianza.
A mis jurados por las sugerencias y aportes
brindados.
A todos los que me ayudaron de alguna u otra
manera el la realización del presente trabajo
de investigación.
DEDICATORIA
A Dios por cuidarme y guiarme
en todo momento, a mis padres
Alberto y Dolores, y a mis hermanos, y muy en
especial a mi hermana Romy por brindarme
su apoyo y confianza incondicional a lo
largo de toda mi vida.
ÍNDICE
TÍTULO
RESUMEN
ABSTRACT
Pág.
I. INTRODUCCIÓN…………………………………………… 1
II. HIPÓTESIS…………………………………………………. 27
III. OBJETIVOS………………………………………………… 28
IV. MATERIALES Y MÉTODOS……………………………… 29
V. RESULTADOS…………………………………………….. 37
VI. DISCUSIÓN………………………………………………… 44
VII. CONCLUSIONES…………………………………………. 47
VIII. RECOMENDACIONES…………………………………… 49
IX. REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS…………………….. 5o
X. ANEXOS……………………………………………………. 54
RESUMEN
El presente trabajo tuvo como objetivo evaluar el efecto del apósito con
aceite esencial de Minthostachys mollis (muña) en comparación con el
apósito quirúrgico convencional en gingivectomias de conejos
(Oryctolagus cuniculus). Siendo un estudio de tipo longitudinal,
prospectivo, comparativo y experimental. Se utilizaron 18 conejos
(Oryctolagus cunìculus) sometidos a gingivectomias divididos en tres
grupos: Grupo A tratados con apósito con aceite esencial de
Minthostachys mollis (muña). Grupo B con apósito quirúrgico
convencional y el grupo C control. Las gingivectomias se realizaron en la
región anterior maxilar y mandibular por cada conejo aproximadamente
de 3 por 2 mm de longitud. Los resultados obtenidos indican que el grupo
tratado con el apósito con aceite esencial de Minthostachys mollis (muña)
después de las gingivectomias presentaron menor grado de células PMN
(polimorfonucleares – neutrófilos) en comparación con el grupo que se
trato con apósito quirúrgico convencional y el control. A los 3 días y 7
días el grupo tratado con el apósito con aceite esencial de Minthostachys
mollis (muña) después de las gingivectomias presenta menor grado de
linfocitos y macrófagos; como también mayor grado de fibroblastos en
comparación con el grupo que se trato con apósito quirúrgico
convencional y el control. A la vez el grupo tratado con el apósito con
aceite esencial de Minthostachys mollis (muña) presenta mayor grado de
epitelizaciòn en comparación con el grupo que se trato con apósito
quirúrgico convencional y el control.
Con este estudio se ha demostrado la mayor eficacia del apósito con el
aceite esencial de Minthostachys mollis (muña) en comparación con el
apósito quirúrgico convencional en la cicatrización de gingivectomias.
Palabras clave: cicatrización, Minthostachys mollis (muña), flavonoides.
ABSTRACT
The aimed of this study was to evaluate the effect of essential oil dressing
Minthostachys mollis (muña) compared with conventional surgical
gingivectomy dressing in rabbits (Oryctolagus cuniculus). It is a
longitudinal, prospective and experimental study. We used 18 rabbits
underwent gingivectomy divided into three groups: Group A treated with
essential oil dressing Minthostachys mollis (muña). Group B with
conventional surgical dressing and the group C control. The gingivectomy
was performed in the anterior maxilla and mandible of each rabbit in about
3 to 2 mm in length. The results indicate that the group treated with the
essential oil dressing Minthostachys mollis (muña) after gingivectomy cells
had lower level of PMN (polymorphonuclear cells - neutrophils) compared
with the group that was treated with conventional surgical dressing and
also at y the control group . By the day 3 and 7, the group treated with
essential oil dressing Minthostachys mollis (muña) after gingivectomy
showed low levels of lymphocytes , macrophages, and fibroblasts.
Furthermore, greater results compared with the group that was treated
with dressing conventional surgical and control. While the group treated
with essential oil dressing Minthostachys mollis (Muña) has better degrees
of epithelialization compared with the group that was treated with
conventional surgical dressing and control.
This study has demonstrated the greater effectiveness of the dressing with
the essential oil of Minthostachys mollis (Muña) compared with
conventional surgical dressing in the healing of gingivectomy.
Key words: healing, Minthostachys mollis (Muna), flavonoids.
1
I. INTRODUCCIÓN
El retraso de la cicatrización de heridas de la mucosa bucal y la evolución
lenta y complicada de la misma son un gran problema para el cirujano
dentista muchos son los agentes que determinan que este proceso resulte
lento como los agentes locales y los generales. La inflamación lleva
también a un retraso en la cicatrización y cierre de la misma.
Varias investigaciones se han realizado en búsqueda de mejores
resultados ya sea a través de mejores sustancias o técnicas en el manejo
de las heridas quirúrgicas o infectadas a nivel de la mucosa bucal.
En estos casos el manejo terapéutico de rutina es asistir al uso adecuado
de antiinflamatorios químicos. Pero lo importante seria realizar una
técnica que nos lleve a observar mejores resultados en pacientes con
complicaciones.
Muchas han sido las técnicas que se han intentado y que se siguen
intentando, tales como rayos láser, la sangre de grado, uña de gato,
corticoides, etc.
La yodopovidona al 5 % constituye también un medicamento cicatrizante
y antiséptico quirúrgico muy utilizado en heridas de cavidad bucal. (31)
Dentro de los factores que influyen, podemos mencionar los factores
generales como, enfermedades sistémicas (diabetes, hipertensión,
anemia, etc.) y los factores locales que son los que más intervienen, como
los procesos infecciosos, pero a nivel local existen componentes; como el
tejido conectivo en especial por las fibras colágenas que se pueden
estimular para mejorar la cicatrización.
2
Desde la antigüedad las enfermedades bucales han hecho sufrir al
hombre, y como prueba de ello se sabe que la Odontología fue practicada
en las culturas Egipcia, Mesopotámica, Incaica y Maya. Incluso, se
conoce que los indios Norteamericanos tenían muy en alto el concepto de
una boca limpia, y con ese propósito masticaban gomas, resinas y ciertas
raíces de plantas para, de esa manera, mantener limpios sus dientes y
prevenir la caries.
El Minthostachys mollis o “muña”, es importante estudiarla ya que existen
estudios que han demostrado su propiedad bactericida y fungicida de
manera directa, y al ser preparados con otros compuestos estas
propiedades podrían variar.
La Minthostachys mollis (muña) contiene flavonoides; la mayoría de los
detectados responden a estructuras de flavonoles 3’- 4’ dihidroxilados en
el anillo B, glicosilados en posición C3. Los flavonoides retiran oxígeno
reactivo especialmente en forma de aniones superóxidos, radicales
hidroxilos, peróxidos lipídicos o hidroperóxidos. De esta manera bloquean
la acción deletérea de dichas sustancias sobre las células. Sus efectos
citoprotectores son, por ejemplo, bien potentes en fibroblastos de la piel
humana, queratinocitos, células endoteliales y ganglios sensoriales
cultivados en presencia de sulfoxina-butionina, un inhibidor irreversible de
la glutatión sintetasa. (1)
Por este motivo nos hemos planteado realizar un estudio para evaluar la
eficacia en la cicatrización del apósito con aceite esencial Minthostachys
mollis o “muña”, en comparación con el apósito quirúrgico convencional
(oxido de zinc más eugenol) en gingivectomias realizadas en conejos
3
(Oryctolagus cuniculus). Por tal motivo nos planteamos la siguiente
pregunta:
¿Cuál es la eficacia en la cicatrización del apósito con aceite esencial de
Minthostachys mollis o “muña”, en comparación con el apósito quirúrgico
convencional en gingivectomias realizadas en conejos (Oryctolagus
cuniculus)?
El Perú presenta una riqueza y mega diversidad de plantas
medicinales nativas, que es uno de los pilares de la
etnofarmacología y la medicina tradicional, desde la época del
Incanato hasta la actualidad. Siendo estas utilizadas en forma
empírica por sus bondades terapéuticas en el cuidado y restauración de la
salud. (12)
Dentro de este contexto, los aceites esenciales (AE) son productos
naturales de gran valor e importancia económica. (25)
La bioactividad de los AE se investiga a partir de los efectos
farmacológicos que son producidos por sus metabolitos, los cuales
son obtenidos por diferentes técnicas fisicoquímicas a partir de las hojas.
(25)
Son pocas las plantas peruanas que han validado su uso tradicional,
una de estas es la Minthostachys mollis, conocida popularmente como
muña, la cual es usada para el tratamiento de dolencias de las vías
respiratorias y digestivas. (6)
La muña habita en los diferentes pisos ecológicos de nuestra serranía
crece entre 2500 y 3500 msnm, donde existe en abundancia. (29)
Es una planta hemicriptófila que durante el invierno (frío y seco)
4
desaparecen sus hojas para brotar nuevamente con las primeras lluvias
de la primavera. (21)
Diversos estudios han mostrado su efecto antibacteriano e insecticida ,
otros han explorado qué metabolitos están presentes en su aceite
esencial. (9)
Antes de considerar los procesos de reparación tisular, es importante
tener presente que la cicatrización, es el resultado de la regeneración de
los tejidos y del cierre de una herida; la cicatrización no es un fenómeno
aislado y su evolución está condicionada por una serie de factores
bioquímicos a nivel de la solución de continuidad que representa la lesión,
por unos cambios en las estructuras tisulares y por una serie de procesos
que determinan la formación de la cicatriz. (7)
El epitelio lesionado tiene una habilidad para regenerarse y restablecer la
integridad a través de un proceso de migración epitelial conocido con el
nombre de "inhibición por contacto". En general un borde libre de epitelio
continúa migrando (por proliferación de células germinales que empujan
el borde libre hacia delante) y se detiene en su migración al hacer
contacto con otro borde libre de epitelio. Este proceso se regula por la
actividad histoquímica de las células epiteliales que han perdido contacto
con otras células epiteliales a su alrededor. (8)
En aquellas heridas en las que únicamente se ha afectado la superficie
del epitelio (abrasiones), ocurre una migración del epitelio a través de una
matriz base de tejido conectivo. En heridas en las que el epitelio ha sido
lesionado en profundidad, éste migra si existe una base de tejido
conjuntivo, permaneciendo debajo de la superficie del coagulo de sangre
5
que esta desecado (la costra) hasta alcanzar el otro margen epitelial. Una
vez que la herida está totalmente epitelializada, la costra se afloja y se
desprende fácilmente. (4)
Un ejemplo clásico del proceso de inhibición por contacto ocurre cuando
se produce una apertura accidental hacia el seno maxilar. Si el epitelio de
la pared del seno como el de la mucosa bucal, son lesionados, comienza
una migración en ambas partes hasta hacer contacto entre sí, creando un
tracto epitelizado entre la cavidad bucal y el seno maxilar que se conoce
como fístula bucosinusal. (4)
Cicatrización
La cicatrización es un proceso natural que posee el cuerpo para
regenerar los tejidos de la dermis y epidermis en respuesta a una lesión,
siendo el resultado la regeneración de los tejidos y el cierre de una
herida. Su evolución esta a nivel de la solución de continuidad que
presenta la lesión, por unos cambios en las estructuras tisulares y por una
serie de procesos a nivel celular, que termina en la formación de cicatriz.
(3)
Tipos de cicatrización, según la unión de los bordes Los cirujanos usan los términos cicatrización por primera intención,
segunda intención y tercera intención para describir tres procesos
básicos en la cicatrización de las heridas. (5)
Cicatrización por primera intención
Los márgenes de la herida están en contacto (2), es decir, tiene los
planos cerrados, estando suturada o no, por lo tanto los bordes de la
6
herida en la cual no ha ocurrido pérdida de tejido son colocados en la
posición anatómica exacta en que se encontraban antes de la lesión. La
herida se repara con una mínima formación de cicatriz. Estrictamente
hablando la cicatrización por primera intención es únicamente una teoría
ideal, imposible de alcanzar clínicamente; no obstante, el término es
generalmente usado para señalar que los bordes de una herida son
reaproximados. Esta es la forma de cicatrización que se podría esperar
después de la extirpación de una lesión en una parte de la cavidad bucal
donde la flexibilidad de los tejidos es tal que la herida se puede unir o
suturar. (15). Este proceso de cicatrización requiere de una menor
epitelizaciòn, depósito de colágeno, contracción y remodelación. Por lo
tanto, la cicatrización ocurre mucho más rápido, con un bajo riesgo de
infección y con una menor formación de cicatriz que en las heridas que lo
hacen por segunda intención. Ejemplos de este tipo de reparación son:
reducción adecuada de fracturas de hueso, reposición de laceraciones,
colgajos y reanastómosis anatómica de los nervios. (5)
Cicatrización por segunda intención
La cicatrización por segunda intención ocurre cuando los bordes de la
herida no han sido afrontados, o bien cuando se ha producido después
de la sutura una dehiscencia de la misma dejando que se produzca un
cierre espontáneo. Aparece en este caso un tejido de granulación que no
es más que la proliferación conjuntiva y vascular. En este proceso la
epitelizaciòn se efectúa de una manera más lenta a través de dos vías:
centrípeto es decir, de los bordes de la herida hacia el centro partiendo de
7
los islotes epiteliales, y centrífugo de los islotes hacia la periferia. (15)
En contraste, la cicatrización por segunda intención significa que existe
pérdida de tejido por lo que hay una brecha entre los bordes de la herida,
esta cicatrización se da regularmente en tejidos poco flexibles, cuyos
bordes no se pueden aproximar, en este caso se requiere de la migración
de gran cantidad de epitelio, deposición de colágeno, contracción y
remodelación. Su evolución es muy lenta y genera una cicatriz de mayor
tamaño que en el caso de la cicatrización por primera intención existiendo
un mayor riesgo de infección en la herida, se habla de la cicatrización de
este tipo en el cual la herida “se granula hacia adentro” ya que el material
que llena el defecto se llama tejido de granulación. (15)
Este tipo de herida es el resultado de la biopsia de una lesión en una zona
de la cavidad bucal en la cual los tejidos no son flexibles y cuyos bordes
no se pueden aproximar. Es básicamente idéntico al de la cicatrización
por primera intención a excepción de que los fibroblastos y los capilares
tienen una mayor distancia para migrar, se forma más tejidos de
granulación y la necesidad de curación es lenta. (13,15)
Otros ejemplos de este tipo de cicatrización son la del alvéolo dentario
posterior a una exodoncia, fracturas pobremente reducidas y lesiones
muy aparatosas con pérdida de tejido. (5)
Cicatrización de tercera intención
Cuando la aproximación de los bordes se realiza varios días después que
se produjo la solución de continuidad, o la cicatrización ocurre cuando se
cierra una herida mediante una sutura después de un período de
8
cicatrización por segunda intención. El cierre se hace cuando se está
seguro de que se ha superado el riesgo de infección. (5)
Esta forma de cierre se efectúa sobre todo en las heridas contaminadas
en la que no es conveniente suturar de inmediato porque se propicia la
infección, cuando se considere que la contaminación está controlada y es
remota la probabilidad de infección es en este el momento indicado para
la realización de la sutura. (5)
En síntesis, independientemente de la aproximación o no de los bordes, el
proceso de reparación es igual, se puede resumir como la formación y
maduración del tejido de granulación con migración de los bordes
epiteliales, la diferencia radica en que por primera intención se acelera el
proceso en cuanto al tiempo de curación, al ser menor el espacio entre los
márgenes de la herida. (5)
La curación de una herida esta, en gran parte, influida por el estado
nutricional del enfermo, ya sea por desnutrición o por falta de asimilación.
La cicatrización es el resultado de la regeneración de los tejidos y del
cierre de una herida. Su evolución esta a nivel de la solución de
continuidad que presenta la lesión, por unos cambios en las estructuras
tisulares y por una serie de procesos a nivel tisular, que determina la
formación de la cicatriz. (23)
La rotura local de la relación intercelular y la pérdida del contacto suele
ser el primer efecto de una lesión a partir del cual se inicia el proceso de
curación siendo la respuesta inflamatoria la primera fase de todo proceso.
(15). Se sabe que las células inflamatorias regulan la separación de la
matriz del tejido conjuntivo. En los órganos y tejidos humanos que han
9
perdido la capacidad de regenerar sus propias células, la cicatrización se
hace gran parte por síntesis de tejido conectivo para suplir defectos o unir
bordes de la herida. Este proceso comienza con la formación de tejido de
granulación donde los fibroblastos forman el elemento celular más
importante hasta que la cicatrización se complete, junto con un lecho
capilar para un buen aporte sanguíneo. (26)
En toda lesión tisular sin importar su naturaleza sea incisiones de origen
traumático, por quemaduras, heridas limpias o infectadas la respuesta
tiene un mismo esquema fundamental, pero con variantes particulares
inherentes al tipo de traumatismo y al tipo de tejido lesionado. (4)
Etapas en la cicatrización de las heridas
Independientemente de la causa que originó la lesión, en la herida se
inicia un proceso, el cual tiene como fin último trabajar para devolver la
integridad al tejido afectado. Como se indicó anteriormente, este proceso
se llama cicatrización el cual se divide típicamente en tres fases:
inflamatoria, proliferativa y de remodelación. Las plaquetas con su
liberación de citoquinas y factores de crecimiento son esenciales en cada
fase. (7)
Etapa de inflamación o del sustrato
La inflamación comienza inmediatamente después de que el tejido es
lesionado y en ausencia de factores que la prolonguen, dura
aproximadamente de 3 a 5 días. Existen dos fases en la inflamación:
vascular y celular. La fase vascular ocurre cuando empieza la inflamación,
10
inicialmente con una vasoconstricción debido a la ruptura celular, con la
finalidad de disminuir la pérdida de sangre en el área de la lesión, y a su
vez promover la coagulación sanguínea. Pocos minutos después, la
histamina y las prostaglandinas E1 y E2, elaboradas por los leucocitos
causan vasodilatación y aumento de la permeabilidad al crear pequeñas
aberturas entre las células endoteliales, lo cual permite el escape de
plasma y leucocitos que migran hacia los espacios intersticiales,
facilitando la dilución de los contaminantes y generando una colección de
fluidos que es conocido como edema. (8)
Los signos propios de la inflamación son eritema, edema, dolor, calor (30
a.C – 38 d.C) y pérdida de la función. El calor y el eritema son causados
por la vasodilatación; el edema es producido por la trasudación de
líquidos; el dolor y la pérdida de la función son causadas por la histamina,
quininas y prostaglandinas liberadas por los leucocitos, así como por la
presión del edema. (5)
La fase celular de la inflamación es disparada por la activación del
sistema de complemento, un grupo de enzimas plasmáticas. Existen
diversos tipos de enzimas pero las más importantes son el C3 y C5, las
cuales actúan como factores químicos, haciendo que los leucocitos
polimorfonucleares (neutrófilos) se agrupen y modifiquen en el lado de la
lesión (marginación) y luego migren a través de las paredes de las células
endoteliales (diapédesis). De la misma manera, ayudan a la opsonización
de las bacterias facilitando su fagocitosis y provocando su lisis al insertar
perforinas formadoras de poros en las membranas de bacterias y células
extrañas. (4,18)
11
Una vez en contacto con el material extraño (por ejemplo una bacteria) los
neutrófilos liberan el contenido de sus lisosomas (degranulación). Las
enzimas lisosómicas (formadas fundamentalmente por proteasas y
proteínas antimicrobianas llamadas defensinas) trabajan para destruir las
bacterias y otros materiales extraños y para digerir tejido necrótico. Este
proceso es también ayudado por los monocitos, quienes de la sangre
penetran en los tejidos transformándose en macrófagos tisulares, los
cuales fagocitan cuerpos extraños y tejidos necróticos. (5,19)
Con el tiempo aparecen dos grupos de linfocitos: B y T. Los linfocitos B
son responsables de la inmunidad humoral. Se encargan, además, de
reconocer el material antigénico y producir anticuerpos a partir de las
células plasmáticas. Participan en la formación de células de memoria
para identificar materiales extraños e interactúan con el complemento
para lisar células invasoras. Por su parte, los linfocitos T aparecen en tres
grupos: los T ayudadores los cuales estimulan a las células B para su
proliferación y diferenciación; los T supresores que trabajan para regular a
los T ayudadores en su función; y los T citotóxicos, que lisan células que
se presentan como extrañas. Durante la inflamación, pequeñas
cantidades de fibrina son depositadas para permitir a la herida resistir
ciertas fuerzas de tensión. (23) Debido a los cambios bioquímicos y
celulares que abarca esta fase se puede dividir en tres sub fases:
humoral, enzimática y celular, así como también en respuesta vascular,
respuesta hemostática y respuesta celular. (23)
En el transcurso del primer día después de afrontar los bordes de la
herida, es decir, después de 24 horas, los fenómenos de la inflamación se
12
producen por una serie de mediadores que pueden ser de origen
exógeno, por ejemplo: los productos liberados por gérmenes que pueden
aumentar la permeabilidad capilar y atraer los leucocitos en la zona
lesionada, o de origen endógeno ósea provenientes del plasma. (23)
Al mismo tiempo los primeros cambios celulares que se producen son
depósitos de elementos formes de la sangre y del plasma en la superficie
de sección de la herida con formación de coágulos; la fibrina y las
plaquetas se separan de los elementos formes emigrando estas últimas
hacia las paredes de la herida, para adherirse a los capilares lesionados y
propiciar la formación de microtrombos. El sistema de coagulación que es
la reacción más temprana y que interviene en esta fase inicial constituye
un estimulador rápido de la herida, de la conversión de fibrinógeno a
fibrina que proporciona un elemento estimulante a los macrófagos y de los
pequeños pépticos que son sustancias quimiotàcticas de los leucocitos,
los cuales se liberan durante la polimerización de la fibrina. (23)
La respuesta inflamatoria está condicionada por una serie de mediadores
químicos como la histamina y serotonina y una diversidad de enzimas
hidrolìticas liberadas por linfocitos, macrófagos y monocitos, solo ejercen
sus efectos cuando ocurre una lesión que los libera al liquido tisular
convirtiéndolos en los primeros mediadores cuyo efecto es transitorio, la
histamina produce una breve fase de constricción arteriolar, y luego una
vasodilatación local y un aumento de la permeabilidad capilar. La
serotonina contribuye al aumento de la permeabilidad capilar, es liberada
en el momento de la adhesión plaquetaria a la pared vascular lesionada
esto contribuye a la vasoconstricción y a la formación de microtrombos
13
destinado a producir una hemostasia local. (23)
Por otro lado las enzimas intracelulares como el monofosfato cíclico de
adenosina y el monofosfato cíclico de guanosina participan en la
liberación de mediadores como la histamina. El monofosfato cíclico de
adenosina también favorece la liberación de enzimas lisosomicas
específicas que ayudan en la reparación de las heridas. A través del
monofosfato cíclico de guanosina hay una vinculación entre los agentes
vasoactivos que provocan los cambios en la permeabilidad muscular, y
las enzimas que producen los cambios tisulares y los procesos de
reparación. (23)
La respuesta celular comienza después de 12 a 16 horas de que la herida
se produjo, las primeras células inflamatorias que aparecen son los
leucocitos polimorfonucleares, sin los cuales no hay un control eficaz de la
sepsis de la herida. Los leucocitos contienen gránulos citoplasmáticos que
quizás constituyan una fuente de enzimas y, además, participan en la
fagocitosis, aunque no es su principal actividad; sin embargo, la actividad
fibrinolìtica está relacionada directamente con la desintegración de los
granulocitos. (15)
Luego aparecen los linfocitos los cuales son productores de anticuerpos
específicos. Los linfocitos T segregan linfoquina capaces de regular el
crecimiento y la actividad de los fibroblastos y la síntesis de colágeno.
Estos linfocitos pueden inhibir la migración de los fibroblastos y la síntesis
de las proteínas por la vía de los mediadores solubles. Asimismo debe
existir un equilibrio en la regulación de las linfoquinas, el que puede llevar
a una cicatrización débil o, a la inversa, a una fibrosis excesiva (15)
14
Los macrófagos y sus lisosomas contienen grandes cantidades de
enzimas hidrolìticas, las cuales son esenciales en la digestión, transporte
del material de desbridamiento de la herida, así como liberadores de
citocinas o factores de crecimiento que participan en la regulación de la
fibrosis, la cicatrización de las heridas crónicas y en las injurias cutáneas,
la angiogenia y la osteogenia, estimulan la mitosis y la migración de
células hacia la herida e influyen en la fibroplasia.
Finalmente las células plasmáticas producen anticuerpos específicos
contra bacterias y antígenos provenientes de cuerpos extraños. (15)
Los macrófagos que migran y se establecen al final de la fase inflamatoria
parecen desempeñar un papel muy importante al estimular la actividad de
síntesis de los fibroblastos. (15)
Etapa fibroblástica o proliferativa
Los fibroblastos comienzan con el depósito de grandes cantidades de
fibrina y tropocolágeno, así como otras sustancias iniciando la fase
fibroblástica en la reparación de la herida. Las sustancias consisten en
diversos polisacáridos, los cuales actúan como fijadores de las fibras de
colágeno. La fibrina forma una red que permite a los nuevos capilares
atravesar la herida de un borde a otro. Los fibroblastos se originan
localmente y a través de las células mesenquimáticas pluripotenciales,
éstas comienzan con la producción de tropocolágeno al tercer o cuarto
día después de la lesión. Los fibroblastos también secretan fibronectina,
una proteína a la cual se le han encontrado diversas funciones, entre
estas se encuentran ayudar a estabilizar la fibrina; permite el
15
reconocimiento del material extraño que debe ser removido por el sistema
inmunológico; participar como factor quimiotáctico de los fibroblastos, y
ayudar a guiar a los macrófagos en su actividad fagocitaría a lo largo de la
red de fibrina. La etapa fibroblástica continúa con el incremento y el
aumento de nuevas células. La fibrinólisis ocurre causada por la plasmina,
que aparece en los nuevos capilares y remueve la red de fibrina
innecesariamente elaborada. (5)
Los fibroblastos depositan el tropocolágeno, precursor del colágeno
comenzando por debajo y atravesando la herida. Inicialmente el colágeno
es producido en exceso y puesto de una manera poco organizada, esta
sobreabundancia de colágeno es necesaria para darle cierta fuerza al
área de la herida. Debido a la deficiente orientación de las fibras de
colágeno la herida no es capaz de resistir fuerzas de tensión durante esta
fase, la cual dura de 2 a 3 semanas. Si la herida es sometida a alguna
tensión al comienzo de la fase fibroblástica, se tiende a maltratar la línea
de la lesión. No obstante, si es sometida a una tensión cerca del final de
esta etapa, ocurre una unión entre el viejo colágeno y el nuevo colágeno
formado a nivel de la lesión. Clínicamente al final de este período la
herida se presenta dura, debido al excesivo acumulo de colágeno y
eritematosa por el alto grado de vascularización. La herida alcanza entre
70% y 80% de la resistencia a la tensión respecto al tejido antes de ser
lesionado. (4)
En el depósito de tejido conjuntivo participa de manera predominante el
fibroblasto, célula de aparición repentina en el sitio de la lesión y que
16
sintetiza colágeno responsable de la resistencia en el tejido cicatrizal,
secreta mucopolisacáridos que contribuye a la orientación de las fibras
colágenas, a la remodelación de la herida al transformarse en colágeno
maduro y desaparecer como célula. Después de su secreción por la
célula, las fibras colágenas se alinean inmediatamente y de manera
adyacente a los márgenes de la célula. La colágena entrecruzada
proporciona mejor resistencia que la que está sometida a un continuo
proceso de síntesis y lisis. (5)
Los aminoácidos se incorporan a las proteínas por diferentes vías para
formar precursores de colágeno que participan en la cicatrización. La fase
proliferativa comprende del quinto al vigésimo día del proceso de
cicatrización, y se caracteriza por una rápida fibroplastia que sustentan el
fibroblasto y el colágeno.
Aproximadamente hacia el quinto día, el espacio incisional, rico en
botones capilares provenientes de ambos lados de la herida, está lleno de
tejido conectivo con fibroblastos para crear conductos vasculares
continuos, es este estadio de cicatrización de la herida la vascularización
es máxima.
En la segunda semana de la cicatrización hay acumulo continuo de
colágeno y proliferación de fibroblastos en el tejido conectivo escindido, el
infiltrado leucocitario y el edema que se incrementaron disminuye
progresivamente. En este momento palidece la cicatrización al parecer
por una creciente acumulación de colágeno acompañada por una lenta
desaparición de los conductos vasculares. (4)
El incremento de colágeno intensifica la presión mecánica sobre los
17
conductos vasculares, después de algunos días puede observarse que
disminuye la vascularización. (4)
Etapa de remodelación o regenerativa
La remodelación constituye la etapa final del proceso de cicatrización, es
también conocida con el término de "maduración de la herida". Durante
esta fase muchas fibras de colágeno que fueron depositadas de manera
desordenada son destruidas y remplazadas por nuevas fibras, las cuales
se orientan de una manera más efectiva para soportar las fuerzas de
tensión en el área de la herida. Entretanto, la resistencia de la herida
aumenta lentamente, pero no en la magnitud en que se produjo durante la
fase fibroblástica. La fuerza de la herida nunca alcanza el 80% u 85% de
la resistencia que el tejido tenia previa a la lesión. Algunas fibras de
colágeno son removidas para dar suavidad a la cicatriz. Como el
metabolismo de la lesión se reduce, la vascularidad también disminuye y
por ende el enrojecimiento de la herida. La elasticidad en ciertos tejidos
como la piel y ligamentos no se recuperan durante la cicatrización, lo que
genera pérdida de flexibilidad a lo largo de la cicatriz. (4)
Por último, cerca del final de la etapa fibroblástica y al inicio de la
remodelación la herida se contrae. En muchos casos, la contracción juega
un papel importante en la reparación de la herida. Durante este período,
los bordes migran hacia el centro. En una herida en la cual sus bordes no
fueron colocados adecuadamente, la contracción disminuye el tamaño de
la misma, beneficiando al tejido. (5)
No obstante la contracción puede causar problemas, tal es el caso de las
18
quemaduras cutáneas de tercer grado, en las que se produce deformidad
y se debilita la piel. Otra desventaja de la contracción se ve en individuos
que sufren cortes curvos en su piel, en estos frecuentemente se produce
una eversión al ser aproximados los bordes. (4)
La epitelizaciòn aporta cierto grado de resistencia a la cicatriz, pero su
propósito es cubrir en forma hermética la superficie de la herida, puede
observarse la migración de células epiteliales a partir de los bordes para
unirse en la línea media y formar un puente; por lo general, ello coincide
en el tiempo con la aparición del tejido de granulación y entre ambos
procesos cubren el defecto en perfecta concordancia. (5)
La sangre y los líquidos corporales contienen fibronectina y vitronectina
que favorecen la migración de células epiteliales, más aún diversos
factores de crecimiento (citocinas) estimulan la migración y mitosis de
queratinocitos para recubrir la pérdida de espesor parcial en mucosa. (14)
Debe hacerse mención de los miofibroblastos, células de tipo fibroblasto
que poseen componentes de músculo liso en el citoplasma, estos
miofibroblastos reaccionan ante agonistas y antagonistas farmacológicos
del músculo liso y su influencia parece ser importante en esta etapa de la
cicatrización. (13)
Hacia el final de la primera semana la herida está cubierta de una
epidermis de espesor casi normal y la hendidura subepitelial está llena de
tejido conectivo vascularizado, que empieza a depositar fibras de
colágeno. (13)
Factores que interfieren en la cicatrización
El cirujano bucal puede crear las condiciones que favorezcan o no el
19
proceso normal de cicatrización. Adhiriéndose a los principios quirúrgicos
de restablecer la continuidad de los tejidos, minimizando el tamaño de la
herida y restaurando posteriormente la función, se facilita el proceso de
cicatrización. Se debe recordar que las heridas de piel, músculos,
ligamentos y mucosa bucal nunca sanan sin dejar cicatriz. El cirujano
debe dirigir sus esfuerzos a reducir la pérdida de la función y a lograr, en
la medida de lo posible, una mínima cicatriz. (7). Los factores que
interfieren en el normal proceso de cicatrización de las heridas pueden ser
clasificados en dos categorías: factores locales, los cuales son fácilmente
controlables por el cirujano bucal, y factores generales, más complejos y
difíciles de reconocer, ya que muchas veces pueden actuar de una forma
desconocida. A continuación se definen cada uno de ellos:
Factores Locales
Entre los factores locales podemos señalar los siguientes:
Cuerpos extraños
Es cualquier entidad que el organismo detecte como extraño, o el sistema
inmunológico del huésped lo vea como ajeno, tal es el caso de bacterias y
el hilo de sutura. Los cuerpos extraños pueden provocar tres problemas:
primero facilita la proliferación de las bacterias, causando infección y
daños en el huésped; en segundo lugar elementos no bacterianos pueden
interferir en la respuesta de defensa del huésped y permitir la infección; el
tercer problema es que actúan como antígenos generando respuestas
Inmunológicas que provocan una prolongada inflamación. (8,14)
Tejido necrótico
El tejido necrótico puede causar dos problemas. En primer lugar, sirve de
20
barrera que interfiere en la acción reparativa de las células. La inflamación
aumenta debido a que los leucocitos deben eliminar los restos de tejido
mediante un proceso de fagocitosis y lisis. El segundo problema que
puede generar es que el tejido necrótico constituye un nicho importante
para la proliferación de bacterias. Este puede contener sangre que se
acumula en la herida (hematoma) por lo que constituye una excelente
fuente de nutrientes para el crecimiento de las bacterias. (7, 20, 22)
Isquemia.
La isquemia de la herida interfiere en su cicatrización por diversas causas.
La isquemia de los tejidos promueve la necrosis. Ésta también provoca
una reducción en la migración de los anticuerpos, leucocitos, antibióticos,
entre otros, incrementando las probabilidades de una infección, así mismo
reduce el aporte de oxígeno y los nutrientes necesarios para la reparación
de la herida. Entre las posibles causas de isquemia podemos indicar:
diseño incorrecto del colgajo, presión externa sobre la herida, presión
interna sobre la herida (hematoma), anemias, ubicación incorrecta de las
suturas, entre otros. (3, 22)
Tensión
La tensión sobre una herida es un factor que impide su cicatrización. Si la
sutura es colocada con una excesiva tensión, va a estrangular los tejidos,
produciendo isquemia. Si la sutura es removida antes de tiempo, existe el
riesgo de la reapertura de la herida lo que produciría una cicatriz mucho
mayor. Si la sutura es removida tardíamente se corre el riesgo de dejar
marcas desfigurativas cuando la epitelialización sigue la vía de las sutura.
(8)
21
También podemos tomar en consideración como factores locales que
interfieren en la cicatrización los siguientes: infecciones, irradiación previa
sobre la piel, mala orientación y manipulación brusca de los bordes de la
herida, entre otros. (7)
Factores Generales
Entre los factores generales que pueden interferir en el proceso normal de
cicatrización, tenemos los siguientes:
• Déficit proteico y vitamínico, los cuales pueden obstaculizar la
síntesis de colágeno y de fibroblastos.
• Radiación terapéutica, en estos casos existe alteración del riego
sanguíneo de los maxilares y por ende reducción del potencial
óseo para la reparación.
• Vejez, con la edad la respuesta del organismo se reduce producto
de alteraciones en la actividad celular y capacidad regeneradora.
• Trastornos metabólicos (diabetes, hipercalcemia), se relaciona con
la cicatrización tisular deficiente y con la disminución en su
respuesta a la infección. (8)
• Trastornos medicamentosos (antimetabólicos, inmunosupresores) y
hormonales.
Además de los factores que acabamos de señalar, la localización de la
herida y el tamaño de ésta juegan un papel importante debido a que, en
un área con mayor aporte vascular el proceso de cicatrización será mucho
más efectivo, de la misma forma una herida amplia tarda más en
recuperarse que una de menor tamaño. (5)
22
La Minthostachys mollis (muña) es una planta nativa usada por los
pobladores de las diferentes localidades de la serranía como saborizantes
de los alimentos, propiedades medicinales digestivas, eliminación de la
flema del pecho y curación de tumores etc. (21)
El aceite esencial de este género tiene acción parasiticida y acaricida
debido a algunos principios químicos activos como pulegona, mentona,
cíñelo, existentes en la planta. (28)
En cuanto a su composición química los aceites esenciales están
constituidos por compuestos predominantemente hidrocarbonatos
llamados terpenos y sesqui terpenos y actúan como soporte de los
compuestos oxigenados, como alcoholes, aldehídos, cetonas y èsteres a
los cuales se debe preponderantemente su aroma. (24)
Estudios están demostrando el increíble poder curativo de los aceites
esenciales, debido a que crean un ambiente en el que no pueden vivir las
bacterias, hongos y virus. (25)
En el Perú se han evaluado la actividad antimicrobiana del aceite esencial
de la Minthostachys mollis (muña) utilizando la metodología de
incorporación en agar, copos de algodón, excavación en placas de agar y
por discos de papel. El aceite esencial obtenido por destilación de arrastre
a vapor fue evaluado sobre tres bacterias enteropatógenas: Escherichia
coli, Salmonella entérica, ser tiphy shiguella dysentereae concluyendo que
el método de incorporación en agar es el más adecuado y que los tres
microorganismos fueron sensibles al aceite esencial. (24)
Ahora bien, es extremadamente difícil mantener en el tiempo, por
métodos mecánicos, el estándar apropiado de placa dental.
23
Consecuentemente y debido a las limitaciones individuales para su
remoción, se han agregado agentes antimicrobianos a los enjuagues
bucales con la finalidad de hacer más efectivos los modos de limpieza
tradicional. (16,31)
Al respecto, se ha evaluado el efecto de antibióticos tópicos, compuestos
oxigenados, compuestos cuaternarios de amoníaco, compuestos
fenólicos, extractos de plantas, bis-bisguanidas, flúor y combinaciones
antimicrobianas. (25)
Salmón en 1994 estudió los aspectos fíitoquímicos, toxicológicos,
antimicrobianos y bromatológicos de Minthostachys mollis (muña). No
obtuvo halos de inhibición a ninguna concentración y en ninguna cepa.
(Càndida albicans ATCC 10231, Eschenchia coli ATCC 8739 y
Staphylococus aureus ATCC 6538) por lo que no pudo determinar
fehacientemente su actividad antimicrobiana.
Poblete, E. en 1998 demostró que el aceite esencial de muña tiene efecto
contra Phytophtora infestans, Fusarium solanaceum y Erwinea carotovora
que son patógenos de la papa.
Inga & Guerra en 2000, demostraron mediante un estudio las
propiedades bactericidas / bacteriostáticas del aceite esencial de
Minthostachys mollis frente a Staphylococus aureus ATCC 25923, B.
cereus MC, Salmonella typhi, S. sonnei MC, Escherichia coli ATCC.
25922 y K. pneumoniae ATCC 10031. Además de la acción fungistático /
fungicida para Fusarium moniliforme y Aspergiüus níge.
24
En el estudio de Primo & col en 2001 se estudia, a Minthostachys
verticillata "Peperina", observándose buena actividad antibacteriana
contra S. aureus, B. cereus, E. coli, P. Mirabillis y antiviral contra el virus
Herpes Simplex Tipo 1 y el virus de la Pseudorrabia, aunque con escasa
actividad contra P. aeruginosa.
Salmon (1994) & Ornachea (1979) demostraron que la Minthostachys
mollis contiene flavonoides y la mayoría de los detectados responden a
estructuras de flavonoles 3’-4’ dihidroxilados en el anillo B, glicosilados en
posición C3. Los antecedentes de flavonoides del género informan ya
sobre este tipo de derivados en otras especies aunque también lo hacen
sobre derivados glicosilados de la misma aglicona, pero en posición C7,
detectados en menor proporción en esta oportunidad, en lo que a flavonas
se refiere, se detectó y en escasa concentración, una sola de ellas, la
diosmetina.
Martínez (2002). Demostró que además combaten la inflamación y las
alergias y aumentan la efectividad de las células natural killer del sistema
inmunológico. De hecho, se ha demostrado que los flavonoides
pertenecientes a plantas medicinales de Tafi del Valle, Tucumán
(Argentina), tienen actividad antimicrobiana. Muchos de estos efectos
antiinflamatorios y antialérgicos podrían explicarse a través de su acción
inhibidora sobre el factor de transcripción nuclear kappa B, activador de
muchas citocinas proinflamatorias. También ejercerían su acción
antiinflamatoria al inhibir las actividades enzimáticas del metabolismo del
ácido araquidónico por la vía de la 5-lipooxigenasa, así como por su
25
actividad antiproteolítica al inhibir algunas proteasas de la matriz. (17)
Así, la genísteina bloquea el desarrollo de tumores al prevenir la
formación de nuevos vasos impidiendo con ello la llegada del oxígeno y
nutrientes a las células neotumorales. (30)
Acción antioxidante de los flavonoides. La capacidad de los polifenoles
vegetales para actuar como antioxidantes en los sistemas biológicos fue
ya reconocida en los años treinta; sin embargo, el mecanismo
antioxidante fue ignorado en gran medida hasta hace poco tiempo. El
creciente interés en los flavonoides se debe a la apreciación de su amplia
actividad farmacológica. Pueden unirse a los polímeros biológicos, tales
como enzimas, transportadores de hormonas, y ADN; quelar iones
metálicos transitorios, tales como Fe2+, Cu2+ , Zn2+, catalizar el
transporte de electrones, y depurar radicales libres . Debido a este hecho
se han descrito efectos protectores en patologías tales como diabetes
mellitus, cáncer, cardiopatías, infecciones víricas, úlcera estomacal y
duodenal, e inflamaciones. Otras actividades que merecen ser
destacadas son sus acciones antivirales y antialérgicas, así como sus
propiedades antitrombótica y antiinflamatorias. Siguiendo estos criterios,
el flavonoide quercitina es el que mejor reúne los requisitos para ejercer
una efectiva función antioxidante. Su capacidad antioxidante medida
como es de 4,7 mM, lo que resulta 5 veces mayor al demostrado por las
vitaminas E y C y tiene una hidrosolubilidad similar a la de la vitamina E.
La función antioxidante de la quercitina muestra efectos sinérgicos con la
vitamina C.
26
Los flavonoides retiran oxígeno reactivo especialmente en forma de
aniones superóxidos, radicales hidroxilos, peróxidos lipídicos o
hidroperóxidos. De esta manera bloquean la acción deletérea de dichas
sustancias sobre las células. Sus efectos citoprotectores son, por ejemplo,
bien potentes en fibroblastos de la piel humana, queratinocitos, células
endoteliales y ganglios sensoriales cultivados en presencia de sulfoxina-
butionina, un inhibidor irreversible de la glutatión sintetasa. (10,30)
27
II. HIPÓTESIS
Sabiendo que el Minthostachys mollis (muña) tiene propiedades
antiinflamatorias, antibacterianas y antifúngicas por tener los principios
activos de flavonoides; es probable que el efecto cicatrizal del aceite
esencial de Minthostachys mollis sea más eficaz que el del apósito
quirúrgico convencional en gingivectomias realizadas en conejos
(Oryctolagus cuniculus).
28
III. OBJETIVOS
3.1 OBJETIVO GENERAL
Evaluar el efecto del apósito con aceite esencial de Minthostachys
mollis (muña) en comparación con el apósito quirúrgico convencional
(oxido de zinc más eugenol) en la cicatrización de gingivectomias
realizadas en conejos (Oryctolagus cuniculus).
3.2 OBJETIVOS ESPECIFICOS
• Evaluar el efecto cicatrizal (a nivel celular, fibroso y de
epitelizaciòn) del apósito con aceite esencial de Minthostachys
mollis (muña), en gingivectomias realizadas en conejos
(Oryctolagus cuniculus) a 1,3 y 7 días.
• Evaluar el efecto cicatrizal (a nivel celular, fibroso y de
epitelizaciòn) del apósito quirúrgico convencional (oxido de zinc
más eugenol) en gingivectomias realizadas en conejos
(Oryctolagus cuniculus) a 1,3 y 7 días.
• Comparar los resultados en los grupos de estudio.
29
IV. MATERIALES Y MÉTODOS
4.1 TIPO DE ESTUDIO
Longitudinal, prospectivo, comparativo, experimental.
4.2 POBLACIÓN
Conejos (Oryctolagus cuniculus) sometidos a gingivectomias.
4.3 CRITERIO DE INCLUSIÒN
- Conejos sanos.
- De ambos sexos.
- de 3 a 4 meses de edad.
4.4 MUESTRA
TAMAÑO: El tamaño de la muestra se determino mediante el criterio No
probabilístico. Por conveniencia. Por ser un trabajo experimental. Se
utilizaron 18 conejos (Oryctolagus cuniculus) los cuales fueron divididos
de la siguiente manera:
1.-Grupo experimental (con muña)
Estuvo conformado por las gingivectomias tratadas con aceite esencial de
Minthostachys mollis (muña), se trabajaron 6 conejos dos gingivectomias
por cada conejo y se sacrificaron 2 conejos a 1, 3 y 7 días.
2.-Grupo con apósito convencional
Estuvo conformado por las gingivectomias tratadas con apósito quirúrgico
convencional (oxido de zinc más eugenol) se trabajaron 6 conejos dos
gingivectomias por cada conejo y se sacrificaron 2 conejos a 1, 3 y 7
días.
30
3.-Grupo control
Estuvo conformado por las gingivectomias no tratadas con ninguna
sustancia, se trabajaron 6 conejos dos gingivectomias por cada conejo y
se sacrificaron 2 conejos a 1, 3 y 7 días.
4.5 VARIABLES
Variable Independiente:
o Apósito con aceite esencial de Minthostachys mollis (muña).
o Apósito quirúrgico convencional (eugenol mas oxido de zinc).
Variable dependiente:
o Efecto cicatrizal (a nivel celular, fibroso y epitelizaciòn).
4.6 OPERACIONALIZACIÒN DE LAS VARIABLES
Dimensión Indicador Escala Valor
Respuesta
Histopatológica.
- Células :PMN
linfocitos,
macrófagos,
Fibroblastos,
epitelialización.
Ordinal
0: ausente.
1: pocos.
2: regular.
3: aumentados.
31
4.7 PROCEDIMIENTO
1.- OBTENCIÒN DEL ACEITE ESENCIAL DE Minthostachys mollis
(muña).
-RECOLECCIÓN: Se realizó en el caserío de HUANCHAY, ubicada en la
provincia de HUARAZ entre los 78º 39´ 30´´ longitud oeste y los 7º 40´30´´
latitud sur, a 2800 msnm en el departamento de ANCASH; recolectándose
15 Kg de hojas jóvenes y en buen estado de plantas que se hallan en las
riveras de los ríos y de las acequias ya que son plantas silvestres que
crecen en zonas donde hay permanente humedad.
-LIMPIEZA: Una vez recolectadas las hojas se procedió a lavarlas
dejando caer chorros de agua repetidas veces. Separando las hojas que
se hallan en mal estado para su posterior eliminación y dejando solo las
que se hallan en buen estado. Se secan e introducen en sobres de papel
y fueron llevadas al consultor para su clasificación taxonómica y
certificación botánica.
-SECADO: Las hojas se almacenaron en un ambiente oscuro
impidiendo la exposición directa a los rayos solares, colocando las
hojas dispersas para disminuir la humedad gradualmente por 7 días.
-OBTENCION DEL ACEITE ESENCIAL: Se realizó en el laboratorio de
farmacognosia de la Facultad de Farmacia y Bioquímica de la UNMSM.
Utilizando el Método de destilación de Arrastre a Vapor, ya que es el
método más preciso para la obtención de aceites esenciales y que tiene
por finalidad separar los principios volátiles contenidas en una mezcla
32
compleja de compuestos no volátiles, este método es el más utilizado por
que los aceites esenciales son insolubles o poco solubles en agua y es
más fácil la separación ya que se realiza por diferencia de densidades y a
la vez también el costo de operación es bajo.
Para la obtención del aceite esencial se realizaron los siguientes pasos:
- Se colocaron las hojas en un lugar bajo sombra con una adecuada
ventilación por un lapso de 4 días con buena ventilación libre de
humedad y de contaminación.
- Las hojas y tallos se cortaron manualmente con la finalidad de que la
parte cortada se exponga mayormente al contacto con el vapor
durante el proceso de destilación.
- El procedimiento en si se realizó colocando los 15 kilos de la planta en
la pera de decantación en dos tiempos en el balón se colocó dos litros
de agua, posteriormente se calentó el agua hasta que hierva y el vapor
atraviese las hojas de la planta que se hallan en la pera y finalmente
se pudo apreciar el paso del vapor de agua con el aceite a través del
refrigerante siendo recolectado en un vaso de precipitación.
- En el vaso de precipitación por diferencia de densidades el aceite
pudo ser separado con una bureta.
- Finalmente para su conservación se colocó en un frasco color ámbar y
en refrigeración a 4° C.
-PARTE QUIRÚRGICA
SELECCIÓN Y DISTRIBUCIÓN DE LOS CONEJOS: Los especímenes de
experimentación correspondieron a 18 conejos todos fueron evaluados
clínicamente por un médico veterinario, controlando el peso y tamaño
33
para determinar su estado de salud. Los animales se distribuyeron en
jaulas de 1x1m siendo cada grupo de 6 conejos (lagomorfos) .Su
alimentación fue a base de conejina (aproximadamente 200 gr por conejo
al día) y agua.
Los animales de laboratorio a utilizar fueron 18 conejos de raza California,
hembras y machos de 3 meses de edad aproximadamente, con un peso
promedio que oscilo entre 2.0 Kg mas menos 200 gr, se dividieron en 3
grupos de 6 especímenes cada grupo en forma aleatoria simple. Estos
grupos correspondieron a los tiempos de estudio de 1 día, 3 días y 7 días,
respectivamente.
Se elaboro una hoja de datos donde se indico el peso, la dosis de cada
una de las drogas usadas, la vía y las observaciones; además de una
hoja de datos para el área quirúrgica donde se realizó las gingivectomias
y el tipo de grupo al que pertenece.
Protocolo Quirúrgico
El procedimiento quirúrgico se realizó en la Unidad de Cirugía
Experimental de la UPSJB.
- Se peso a los animales, se calculo la dosis de acuerdo al peso, lo
sedamos y luego los anestesiamos.
- Se les realizó una marca, para luego proceder a realizar la cirugía
después de ello se procedió al llenado de la hoja de datos y
finalmente se les ubicó a los animales dentro de sus respectivas
jaulas.
- Las gingivectomias se realizaron en la región anterior maxilar y
34
mandibular por cada conejo de aproximadamente 3 por 2 mm.
- Se colocó el apósito de acuerdo al grupo al que pertenecía.
Secuencia completa
Los animales fueron pesados, para luego anestesiar a los especímenes
por vía intraperitoneal. Se les administro 0,2 ml de Promazil, 0,6 ml de
Xilacina y 0,8 ml de Ketamina con jeringa de tuberculina.
Se les diferencio escribiendo su número en el dorso de ambas orejas con
plumón indeleble. Se realizó el lavado del área adyacente a la zona
quirúrgica, primero con jabón líquido, luego con yodopovidona y por ultimo
con suero fisiológico. Previamente se coloco una gasa estéril de comisura
a comisura para evitar alguna aspiración.
1. Grupo experimental (con muña)
Estuvo conformado por las gingivectomias tratadas con apósito de aceite
esencial de Minthostachys mollis (muña), se trabajaron 6 conejos dos
gingivectomias por cada conejo y se sacrificaron 2 conejos a 1, 3 y 7
días.
2.-Grupo con apósito convencional
Estuvo conformado por las gingivectomias tratadas con apósito quirúrgico
convencional (oxido de zinc más eugenol) se trabajaron 6 conejos dos
gingivectomias por cada conejo y se sacrificaron 2 conejos a 1, 3 y 7
días.
3.-Grupo control
Estuvo conformado por las gingivectomias no tratadas con ninguna
sustancia se trabajaron 6 conejos dos gingivectomias por cada conejo y
35
se sacrificaron 2 conejos a 1, 3 y 7 días.
Técnica Histológica
Todas las muestras fueron sometidas a los mismos procedimientos,
primero se fijaron con formol neutro al 10%, luego se descalcifico con
ácido nítrico durante 5 días, se efectuó la deshidratación con alcoholes en
diferentes concentraciones de menor a mayor de 75% a 95%. Luego se
realizó el clareamiento en xilol para luego realizar el baño de parafina. Se
realizó la microtomia (3 um por lámina). Las láminas histológicas se
realizaron con coloración de Hematoxilina eosina y hematoxilina férrica.
La evaluación microscópica
Se obtuvieron 36 cortes histológicos, 12 por cada uno de los grupos de
evaluación.
Seguidamente se efectuó la lectura de las láminas histológicas en el
Laboratorio de Histología de la Facultad de Odontología de la Universidad
Nacional Federico Villareal.
Se realizó el estudio de los cortes con un microscopio de luz (Olympus) a
10x y 40x de aumento para todas las lecturas, basadas en el proceso de
cicatrización de acuerdo a los objetivos de estudio.
Se realizaron las microfotografías de las láminas histológicas con una
cámara digital en el laboratorio de Histología.
La evaluación del proceso de cicatrización fue realizada por un patólogo
utilizando el método ciego para las lecturas de las muestras.
4.8 PROCESAMIENTO DE DATOS
Los datos fueron recopilados en una ficha de tabulación y después
36
analizados, y presentados en tablas y figuras del programa Microsoft
Office Excel 2007.
4.9 PLAN DE ANÁLISIS
Obtenida la información ordenada, se analizaron mediante la prueba de
Kruskal Wallis para determinar la relación del grado de presencia de
cada una de las células que participan en la cicatrización en relación al
tiempo y al tipo de tratamiento.
37
V. RESULTADOS
1.- En la tabla y figura No 1; se observa el promedio del grado de células
PMN (polimorfonucleares – neutrófilos) de acuerdo al tratamiento a 1día;
el grupo tratado con el apósito de aceite esencial de Minthostachys
mollis (muña) presenta un grado de 1.8; el grupo tratado con apósito
quirúrgico convencional de 2.8 y el grupo control de 3. Al utilizar la
prueba de Kruskal Wallis con la cual se obtuvo un resultado
estadísticamente significativo (p<0,05).
2.- En la tabla y figura No 2; se observa el promedio del grado de
linfocitos de acuerdo al tratamiento a los 3 días; el grupo tratado con el
apósito de aceite esencial de Minthostachys mollis (muña) presenta un
grado de 1.3; el grupo tratado con apósito quirúrgico convencional de 2.3
y el grupo control de 2.8. Mientras que a los 7 días el grupo tratado con el
apósito de aceite esencial de Minthostachys mollis (muña) presenta un
grado de 1.8; el grupo tratado con apósito quirúrgico convencional de 2.8
y el grupo control de 3. Al utilizar la prueba de Kruskal Wallis se obtuvo
un resultado el cual es estadísticamente significativo a los 3 y 7 días
(p<0.05).
3.- En la tabla y figura No 3; se observa el promedio del grado de
macrófagos de acuerdo al tratamiento a los 3 días el grupo tratado con el
apósito de aceite esencial de Minthostachys mollis (muña) presenta un
grado de 0.8; el grupo tratado con apósito quirúrgico convencional de 1.3
y el grupo control de 2.3. Mientras que a los 7 días el grupo tratado con el
apósito de aceite esencial de Minthostachys mollis (muña) presenta un
38
grado de 1.3; el grupo tratado con apósito quirúrgico convencional de 2.3
y el grupo control de 2.8. Al utilizar la prueba de Kruskal Wallis se obtuvo
un resultado el cual es estadísticamente significativo a los 3 y 7 días
(p<0.05).
4.- En la tabla y figura No 4; se observa el promedio del grado de
fibroblastos de acuerdo al tratamiento a los 3 días el grupo tratado con el
apósito de aceite esencial de Minthostachys mollis (muña) presenta un
grado de 2; el grupo tratado con apósito quirúrgico convencional de 1.8 y
el grupo control de 1.3. Mientras que a los 7 días el grupo tratado con el
apósito de aceite esencial de Minthostachys mollis (muña) presenta un
grado de 2.8; el grupo tratado con apósito quirúrgico convencional de 2 y
el grupo control de 2. Al utilizar la prueba de Kruskal Wallis se obtuvo un
resultado el cual es estadísticamente no significativo a los 3 y 7 días
(p>0.05).
5.- En la tabla y figura No 5; se observa el promedio del grado de
epitelizaciòn de acuerdo al tratamiento a los 7 días el grupo tratado con el
apósito de aceite esencial de Minthostachys mollis (muña) presenta un
grado de 1.3; el grupo tratado con apósito quirúrgico convencional de 0.8
y el grupo control de 0.3. Al utilizar la prueba de Kruskal Wallis se obtuvo
un resultado el cual es estadísticamente significativo a los 7 días
(p<0,05).
39
TABLA No1
PROMEDIO DEL GRADO DE PMN DE ACUERDO AL TRATAMIENTO A LAS 24 HORAS.
GRUPO No Media Mediana Rango
Minthostachys mollis 4 1,8 2 3,8
Apósito Qx. Convencional 4 2,8 3 8,7
Control 4 3 3 11,5
P=0,022
FIGURA No 1.
40
TABLA No 2
PROMEDIO DEL GRADO DE LINFOCITOS EN CADA GRUPO DE TRATAMIENTO DE ACUERDO AL TIEMPO.
GRUPO No Media Mediana Rango
3 días
Minthostachys mollis 4 1,3 1 4,2
Apósito Qx. convencional 4 2,3 2 8,7
Control 4 2,8 3 11,1
7 días
Minthostachys mollis 4 1,8 2 3,6
Apósito Qx. convencional 4 2,8 3 8,9
Control 4 3 3 11,5
p=0,047 p= 0,017
FIGURA No 2
41
TABLA No 3
PROMEDIO DEL GRADO DE MACRÓFAGOS EN CADA GRUPO DE TRATAMIENTO DE ACUERDO AL TIEMPO.
GRUPO No Media Mediana Rango
3 días
Minthostachys mollis 4 0,8 1 3,9
Apósito Qx. convencional 4 1,3 1 7,7
Control 4 2,3 2 12,4
7 días
Minthostachys mollis 4 1,3 1 3,5
Apósito Qx. convencional 4 2,3 2 8,6
Control 4 2,8 3 11,9
p=0,011 p= 0,011
FIGURA No 3
42
TABLA No 4
PROMEDIO DEL GRADO DE FIBROBLASTOS EN CADA GRUPO DE TRATAMIENTO DE ACUERDO AL TIEMPO.
GRUPO No Media Mediana Rango
3 días
Minthostachys mollis 4 2 2 10,5
Apósito Qx. convencional 4 1,8 2 9
Control 4 1,3 1 4,5
7 días
Minthostachys mollis 4 2,8 3 11,6
Apósito Qx. convencional 4 2 2 6,4
Control 4 2 2 6
p=0,087 p= 0,087
FIGURA No4
43
TABLA No 5
PROMEDIO DEL GRADO DE EPITELIZACIÒN EN CADA GRUPO DE TRATAMIENTO DE ACUERDO AL TIEMPO.
GRUPO No Media Mediana Rango
7 días
Minthostachys mollis 4 1,3 1 11,8
Apósito Qx. convencional 4 0,8 1 7,4
Control 4 0,3 0 4,8
p=0,044
FIGURA No 5
44
VI. DISCUSIÓN
El presente trabajo tuvo como objetivo evaluar el efecto del apósito con
aceite esencial de Minthostachys mollis (muña) en comparación con el
apósito quirúrgico convencional (oxido de zinc más eugenol) en
gingivectomias realizadas en conejos (Oryctolagus cuniculus).
Los resultados demostraron una mejoría en la cicatrización, en especial al
provocar menor reacción inflamatoria debido a los flavonoides que es el
principio activo presenta en el aceite esencial de Minthostachys mollis
(muña) y que han sido validados por muchos estudios. Se observa menor
presencia de células PMN (polimorfonucleares – neutrófilos), macrófagos
y linfocitos en comparación con el apósito quirúrgico convencional (oxido
de zinc más eugenol) de manera estadísticamente significativa .Esto se
debe a la presencia de flavonoides así como lo demuestra el estudio de
Primo (2001).
A su vez otro estudio también menciona el efecto antibacteriano del
Minthostachys mollis como el trabajo de Inga y Guerra en el 2000,
quienes demostraron mediante un estudio las propiedades bactericidas /
bacteriostáticas del aceite esencial de Minthostachys mollis frente a
Staphylococus aureus ATCC 25923, B. cereus MC, Salmonella typhi, S.
sonnei MC, Escherichia coli ATCC. 25922 y K. pneumoniae ATCC 10031.
Además de la acción fungistático / fungicida para Fusarium moniliforme y
Aspergiüus níge.
El efecto antibacteriano también es sobre bacterias facultativas así lo
demuestra el estudio de Primo & col en 2001 que estudia, a
45
Minthostachys verticillata "Peperina", observándose buena actividad
antibacteriana contra S. aureus, B. cereus, E. coli P. Mirabillis y antiviral
contra el virus Herpes Simplex Tipo 1 y el virus de la Pseudorrabia,
aunque con escasa actividad contra P. aeruginosa.
La epitelizaciòn también fue favorable al utilizar el aceite esencia de muña
esto por el efecto citoprotector que nos brindan los flavonoides presentes
en el aceite esto también es demostrados con el estudio realizado por
Martínez (2002), quien menciona que los flavonoides retiran oxígeno
reactivo especialmente en forma de aniones superóxidos, radicales
hidroxilos, peróxidos lipídicos o hidroperóxidos. De esta manera bloquean
la acción deletérea de dichas sustancias sobre las células. Sus efectos
citoprotectores son, por ejemplo, bien potentes en fibroblastos de la piel
humana, queratinocitos, células endoteliales y ganglios sensoriales
cultivados en presencia de sulfoxina-butionina, un inhibidor irreversible de
la glutatión sintetasa. (10, 17)
El aceite esencial inactiva a las bacterias presentes en la primera fase de
la cicatrización de tal manera que el efecto antibacteriano fue eficaz esto
esta demostrado con nuestros resultados en la cual hay menos cantidad
de células PMN (polimorfonucleares) ,linfocitos y macrófagos ;estos datos
están contrastados también con Martínez (2002) quien menciona que los
flavonoides además combaten la inflamación y las alergias y aumentan la
efectividad de las células natural killer del sistema inmunológico. De
hecho, se ha demostrado que los flavonoides pertenecientes a plantas
medicinales de Tafi del Valle, Tucumán (Argentina), tienen actividad
antimicrobiana. Muchos de estos efectos antiinflamatorios y antialérgicos
46
podrían explicarse a través de su acción inhibidora sobre el factor de
transcripción nuclear kappa B, activador de muchas citocinas
proinflamatorias. También ejercerían su acción antiinflamatoria al inhibir
las actividades enzimáticas del metabolismo del ácido araquidónico por la
vía de la 5-lipooxigenasa, así como por su actividad antiproteolítica al
inhibir algunas proteasas de la matriz.
Algunos estudios están dando mayor fuerza al uso de aceites esenciales
mucho más aquellos en los que el principal principio activo son los
flavonoides así como el estudio de Salmon (1994) & Ornachea(1979)
después de realizar sus estudios sobre Minthostachys mollis (muña) en
cuanto a su composición química encontraron que los aceites esenciales
están constituidos por compuestos predominantemente hidrocarbonatos
llamados terpenos y sesqui terpenos y actúan como soporte de los
compuestos oxigenados, como alcoholes, aldehídos, cetonas y esteres a
los cuales se debe preponderantemente su aroma .Estudios están
demostrando el increíble poder curativo de los aceites esenciales, debido
a que crean un ambiente en el que no pueden vivir las bacterias, hongos y
virus, ya que contiene flavonoides y la mayoría de los detectados
responden a estructuras de flavonoles 3’-4’ dihidroxilados en el anillo B,
glicosilados en posición C3.
47
VII. CONCLUSIONES
• Al primer día el grupo tratado con apósito, con aceite esencial de
Minthostachys mollis (muña) después de las gingivectomias presenta
menor grado de células PMN (polimorfonucleares - neutrófilos) en
comparación con el grupo que se trato con apósito quirúrgico
convencional (oxido de zinc más eugenol) y el control.
• A los 3 días y 7 días el grupo tratado con apósito, con aceite esencial
de Minthostachys mollis (muña) después de las gingivectomias
presenta menor grado de linfocitos en comparación con el grupo que
se trato con apósito quirúrgico convencional (oxido de zinc más
eugenol) y el control.
• A los 3 días y 7 días el grupo tratado con apósito, con aceite esencial
de Minthostachys mollis (muña) después de las gingivectomias
presenta menor grado de macrófagos en comparación con el grupo
que se trato con apósito quirúrgico convencional (oxido de zinc más
eugenol) y el control.
• A los 3 días y 7 días el grupo tratado con apósito, con aceite esencial
de Minthostachys mollis (muña) después de las gingivectomias
presenta mayor grado de fibroblastos en comparación con el grupo
que se trato con apósito quirúrgico convencional (oxido de zinc más
eugenol) y el control.
• A los 7 días el grupo tratado con apósito, con aceite esencial de
Minthostachys mollis (muña) después de las gingivectomias presenta
mayor grado de epitelizaciòn en comparación con el grupo que se
48
trato con apósito quirúrgico convencional (oxido de zinc más eugenol)
y el control.
49
VIII. RECOMENDACIONES
• Realizar estudios experimentales en la que se utilice el aceite
esencial de Minthostachys Mollis (muña) en cirugías mayores de la
cavidad bucal.
• Evaluar el efecto antimicótico del aceite esencial de Minthostachys
Mollis (muña) en estomatitis subprotesis.
• Aplicar el aceite esencial de Minthostachys mollis (muña) en
pacientes con gingivitis severa.
• Recomendar también el uso de Minthostachys mollis (muña) como
enjuagatorio diario en personas con gingivitis y que tengan
enfermedades sistémicas como la diabetes.
50
IX. REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS.
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54
X. ANEXOS
55
ANEXO 1.
FICHA DE RECOLECCION DE DATOS.
GRUPO CON MINTHOSTACHYS MOLLIS
GRUPO CON APOSITO CONVENCIONAL
GRUPO CONTROL
Ficha de Identificación.-
- Espécimen No.-......................................
- Peso.- .......................................
- Color.-........................................................
Fecha de intervención............................Hora.............................
Fecha de Sacrificio...............................Hora..............................
Tiempo de duración del trabajo Quirúrgico:....................
Curso clínico Post operatorio:
Positivo.
Negativo.
¿Por qué?...................................................................
Herida PMN Linf. Macrófagos fibroblastos EPITELIZACIÒN
No 1
No2
56
FOTOGRAFIA No1.
Equipo de anestesia y sedación
FOTOGRAFIA No 2.
Equipo de cirugía utilizado en el experimento
57
FOTOGRAFIA No 3.
Preparación de la anestesia y sedante
FOTOGRAFIA No 4.
Anestesia intraperitoneal del conejo con ayuda del veterinario
58
FOTOGRAFIA No 5.
Localización de la zona de gingivectomia del maxilar superior e
inferior
FOTOGRAFIA No 6.
Realización de la gingivectomia en el maxilar superior
59
FOTOGRAFIA No 7.
Realización de la gingivectomía en el maxilar inferior
FOTOGRAFIA No 8.
Preparación del apósito con aceite esencial de Minthostachys mollis
60
FOTOGRAFIA No 9.
Colocación del apósito con aceite esencial de Minthostachys mollis
FOTOGRAFIA No 10.
Preparación del apósito quirúrgico convencional
61
FOTOGRAFIA No 11.
Colocación del apósito quirúrgico convencional
FOTOGRAFIA No 12.
Introducción del bloque en formol
62
FOTOGRAFIA No 13.
Evaluación del bloque para la preparación de láminas
FOTOGRAFIA No 14.
Evaluación de las láminas histológicas
63
FOTOGRAFIA No 15.
Clasificación de las láminas histológicas por grupo
FOTOGRAFIA No 16.
Observación de las láminas histológicas
64
MICROFOTOGRAFIA No 1.
Presencia de PMN en el grupo de control a un aumento de 100x a las
24 horas.
MICROFOTOGRAFIA No 2.
Presencia de PMN en el grupo con Minthostachys mollis a un
aumento de 400x. a las 24 horas.
65
MICROFOTOGRAFIA No 3.
Presencia de PMN en el grupo con apósito quirúrgico convencional a
un aumento de 100x a las 24 horas.
MICROFOTOGRAFIA No 4.
Presencia de linfocitos y macrófagos en el grupo de control a un
aumento de 400x a los 3 días.
66
MICROFOTOGRAFIA No 5.
Presencia de linfocitos y macrófagos en el grupo con apósito con
Minthostachys mollis a un aumento de 100x a los tres días.
MICROFOTOGRAFIA No 6.
Presencia de linfocitos y macrófagos en el grupo con cemento
quirúrgico convencional a un aumento de 100x a los 7 días.
67
MICROFOTOGRAFIA No 7.
Presencia de fibroblastos en el grupo con cemento quirúrgico
convencional a un aumento de 100x a los 7 días.
MICROFOTOGRAFIA No 8.
Presencia de fibroblastos en el grupo con Minthostachys mollis a un
aumento de 400x a los 7 días.
68
MICROFOTOGRAFIA No 9.
Presencia de fibroblastos y fibras colágenas en el grupo con
Minthostachys mollis a un aumento de 400x a los 7 días.
MICROFOTOGRAFIA No 10.
Presencia de epitelizaciòn en el grupo con Minthostachys mollis a
un aumento de 100x a los 7 días.
69
MICROFOTOGRAFIA No 11.
Presencia de fibras colágenas desordenadas a los 7 días en el
grupo de control a un aumento de 100x.
MICROFOTOGRAFIA No 12.
Presencia de fibroblastos en el grupo con apósito con
Minthostachys mollis a un aumento de 400x a los 7 días.
70
MICROFOTOGRAFIA No 13.
Presencia de epitelizaciòn en el grupo con Minthostachys mollis a
un aumento de 400x a los 7 días.