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Presentación de una ficha bibliográfica en postgrado de DermatologíaTRANSCRIPT
Una vía alternativa de inflamación de la piel en psoriasis inducida por imiquimod, en ausencia de la
señalización del receptor A IL-17
Dra. Adriana De La Torre
El Malki K et al.A n Alternative Pathway of Imiquimod-Induced Psoriasis-Like Skin Inflammation in the Absence of Interleukin-17 Receptor A Signaling. J Invest Dermatol 2013; 133: 441-451
Introducción
• Enfermedad crónica inflamatoria más común en la piel
• Afecta 2-3 % población mundial
• Compleja interacción factores genéticos y ambientales: estrés
• Artritis psoriásica y comorbilidades: Sindrome metabólico, aumento de la resistencia a la insulina y riesgo cardiovascular
• Péptidos antimicrobianos endógenos: catelicidinas y β-defensinas sobreexpresados en psoriasis
• capaces de desencadenar autoinmunidad mediante activación de células dendríticas plasmacitoides de la piel
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Psoriasis:
Introducción
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• Eje IL-23/IL-17 involucrado en psoriasis
• Células Th17 claves en la patogénesis de psoriasis
• Piel de ratones: signos clínicos de psoriasis inyección intradérmica de IL-17
Psoriasis:
Introducción
Introducción
• Mimetiza en ratones modelo de psoriasis• Ligando del receptor toll-like 7/8• Potente activador de la respuesta inmune• En humanos predispuestos: lesiones eritematosas
semejantes a la psoriasis• En ratones: aplicación tópica causa lesiones
psoriasiformes, hiperqueratosis, acantosis y eritema
• Infiltración de neutrófilos, células mononucleares, células TCD4, células Th17, células dendríticas
• Células T γδ, tipo de linfocitos, en dermis humana, y epidermis murina, secreta IL17A, luego de la inyección de IL-23, morfología dendrítica,
• Papel importante en el desarrollo de psoriasis
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Imiquimod:
Materiales y métodos 1. Detección de IL-17RA
• RNA obtenido del bazo de ratones extraído por Rneasy Mini kit:• tipo salvaje (WT)C57BL/6 , controles• IL-17RAFl, • IL-17RAdel
• Transcriptasa reversa obteniendo DNAc• DNA complementario amplificado con primers
específicos para receptor A de IL-17A• Glyceraldehydo-3-fosfato deshidrogenasa como
referencia génica2. IMQ induce psoriasis: Ratones 8 semanas IL-17RAdel y controles (WT),
afeitados y se aplica IMQ 5 % y crema placebo,en oreja (5 mg) y espalda (55 mg), por 4-9 días
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Materiales y métodos
3. Inyecciones intradérmicas de IL-23:20 μl de búfer fosfato salino con 500 ηg de IL-
23 recombinante en orejas por 8 días Se midió el grosor de la oreja antes y después
de la inyección a partir del día 0, diariamente A los 8 días sacrificados
4. PASI modificado en ratones: eritema, descamación, grosor de la piel en
psoriasis inducida por IMQ
5. Citometría de flujo: Células obtenidas de ganglios linfáticos y bazo para medir CD11b, GR1, F4/80, CD3, CD4, receptor FITC de células T γδCélulas lavadas y permeabilizadas para medir intracelular: IL-17A, IL-6, IL-22, IFN-γEl Malki K et al.A n Alternative Pathway of Imiquimod-Induced Psoriasis-Like Skin Inflammation in the Absence of Interleukin-17 Receptor A Signaling. J Invest Dermatol 2013; 133: 441-451
Materiales y métodos
6. PCR-transcriptasa reversa RNA total aislado de la piel por mini kit RneasyDNA complementario obtenido
7. Histología: Inmunofluorescencia de criosecciones de 10 μm Ac usados: F4/80, mieloperoxidasa, CD4 e IL-17A
8. Análisis estadístico:T de Student no pareada de dos colas Análisis unidireccional de varianza. Valores P<0.001, P<0.01, and P<0.05
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Objetivos
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Investigar el impacto de la señalización de la IL-17A en psoriasis a través de la generación de ratones con delección del receptor A
para IL-17A (IL-17RAdel) con aplicación de IMQ
Resultados
Ratones IL-17RAdel muestran forma más leve de psoriasis inducida por IMQ en comparación con los ratones controles
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a. Construcción de la cepa IL-17RAdel
b. IL-17RAdel ratones (carril 3) no expresan IL-17RA ARNm.
Resultados
Diferencias estadísticamente significativas en eritema y PASI acumulativo. Descamación y engrosamiento cutáneo luego del día 4 no
habían diferencias estadísticamente significativas El Malki K et al.A n Alternative Pathway of Imiquimod-Induced Psoriasis-Like Skin Inflammation in the Absence of Interleukin-17 Receptor A Signaling. J Invest Dermatol 2013; 133: 441-451
d. Puntuación diaria de descamación, engrosamiento cutáneo y eritema en ambas cepas
Resultados
No hay diferencias estadísticamente significativas en engrosamiento epidérmico en ambas cepas WT e IL-17RAdel tratadas con Imiquimod
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e. Cuantificación microscópica (H/E) de hiperplasia epidérmica a los 5 días de IMQ
f. Orejas de cepas WT e IL-17RAdel con 20 ml PBS o con 500 ηg IL-23
Aumento significativo del grosor epidérmico de orejas al inyectar IL-23 en ratones
WT e IL-17RAdel
Resultados
Aumento de células CD11b+ en ratones IL-17RAdel y WT tratados con IMQ
No hay diferencias estadísticamente significativas en cuanto al infiltrado de neutrófilos entre cepas IL-17RAdel y WT
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Porcentaje de células adquiridas in vivo y número de células
Invasión de granulocitos, neutrófilos y macrófagos a la piel tratada con imiquimod
CD11+: monocitos macrófagosGR1+: neutrófilos
Resultados
Invasión de granulocitos neutrófilos y monocitos (rojo) en piel de ratones IL-17RAdel y WT tratados con IMQ
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Inmunofluorescencia de criosecciones de la espalda de IL-17RAdel y ratones controles luego de 9 días de placebo e IMQ
MPO:Neutrófilos
F4/80:Macrófagos
Resultados
Aumento de IL-17A, disminución de IL-23p19 y GM-CSF estadísticamente significativo en piel de ratones IL-17RAdel
Expresión de citoquinas por PCR-RT en la espalda de ratones IL-17RAdel y ratones controles tratada con imiquimod
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Resultados
Aumento de la producción de IL-6 por las células TCD4+ en la piel tratada con IMQ de ratones IL-17Adel y WT
Expresión de IL-6
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Resultados
Aumento de producción de IL-22 en células T de orejas tratadas con IMQ de ratones IL-17Adel y WT
Expresión de IL-22
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Discusión
Delección completa del receptor para IL-17A (IL-17RAdel ratones) + IMQ desencadena más lentamente psoriasis, y menos severa
Sin embargo psoriasis puede desarrollarse sin señalización de IL-17 cantidades elevadas de citoquinas: IL-6, IL-22, y la
quimioquina CXCL2, secretadas por células T αβ y γδ
Modelo murino de Psoriasis-like inducida por IMQ Reproduce hallazgos clínicos de psoriasis humana Inmunológicamente: microabscesos de neutrófilos y la
infiltración de células T γδ y células Th17 (van der Fits et al., 2009)
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Discusión
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Puntuación PASI de ratones IL-17RAdel es menor en comparación con grupo control al tratarlos con IMQ, a pesar de no existir diferencias en el engrosamiento cutáneo entre ambas cepas
Kelly et al. (2005), infiltrado macrofágico en ratones IL-17RA KO infectados con Toxoplasma gondii era menor pero no abolido totalmente
Concuerda con hallazgos de este estudio, leve psoriasis en ratones IL-17RAdel con migración de neutrófilos y macrófagos al sitio de la inflamación
Discusión
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En ausencia de señalización IL-17, otras citoquinas secretadas por células T γδ y células
TH17, como IL-6 e IL-22
IL-6 induce la activación de neutrófilos in vivo/ in vitro IL-6 aumenta proliferación de queratinocitos,
diferenciación de monocitos a macrófagos y contribuye al reclutamiento de neutrófilos
Aumento IL-6 en piel de ratones IL-17RAdel en comparación con ratones WT(controles) + IMQ apoya IL-6 en el desarrollo de la enfermedad en ausencia de señalización IL-17
Discusión
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En pacientes con psoriasis, aumento de células T γδ en la piel afectada, producen grandes cantidades de IL-17A
IL-23 estimula a células T γδ promueven la inflamación secretando IL-17, y también producen IL-22
IL-22 actúa sobre los queratinocitos: activación y la hiperproliferación. Queratinocitos activados producen citocinas
proinflamatorias, quimiocinas, y también péptidos antimicrobianos, capaces de reclutar células inmunes en la piel inflamada
Discusión
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Opciones terapéuticas para psoriasis: Anti IL-6R (Tocilizumab) anti IL-12/IL-23 (Ustekinumab) Anticuerpo monoclonal contra IL-17A (Secukinumab)
• Aplicación tópica de imiquimod en piel de ratones induce inflamación con hallazgos encontrados en psoriasis
• Inflamación inducida por Imiquimod aparece en ausencia de la señalización IL-17
• Además del clásico eje IL-23/IL-17, existen otras vías eficientes para reclutamiento de neutrófilos e inflamación, activadas en ausencia de IL-17
• Desarrollo de fármacos antipsoriásicos dirigidos a la vía
de señalización IL-17, IL-23, IL-6
Conclusiones
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