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Theophylline

IMMULITE® 2000 Theophylline

2 IMMULITE 2000 Theophylline (PIL2KTN-6, 2005-06-29)

English

Intended Use: For in vitro diagnostic usewith the IMMULITE 2000 Analyzer — forthe quantitative measurement oftheophylline in serum, as an aid inmonitoring the therapeutic administrationof this bronchodilator.Catalog Numbers: L2KTN2 (200 tests),L2KTN6 (600 tests)Test Code: THE Color: Light GreenCDC Analyte Identifier Code: 6104CDC Test System Identifier Code: 10418CLIA Complexity Category:Moderate

Summary and ExplanationTheophylline is a methylxanthinederivative which is widely used clinicallyfor its bronchodilator activity in thetreatment of respiratory conditions such asasthma. As a bronchodilator, theophyllineappears to exert its effect on the smoothmuscle of the bronchi. Theophylline is acompetitive inhibitor of the enzyme cyclicnucleotide phosphodiesterase, an enzymethat catalyzes the conversion of cyclicadenosine monophosphate (cAMP) to 5'-adenosine monophosphate (5'-AMP).1Mechanisms other thanphosphodiesterase inhibition have beensuggested to mediate the bronchodilatoreffect of theophylline.2 Othermethylxanthines which have measurablecrossreactivity — such as caffeine,theobromine, and 8-chlorotheophylline —occur in coffee, tea, soft drinks, chocolate,and certain over-the-counter medicationssuch as dimenhydrinate.

The importance of measuring theophyllineconcentrations is related to the relativelynarrow therapeutic index for theophyllineas well as the inter- and intra-patientvariability in the disposition of theophylline.There exists a window of concentrationsbelow which theophylline levels aresubtherapeutic, and above which there isan increased incidence of toxic sideeffects, such as gastrointestinaldisturbances, tachycardia, cardiacarrythmias, convulsions and coma.3,4,5

Patients with the same theophylline levelswill not necessarily experience the sametherapeutic or toxic effects. Variability inthe disposition of theophylline results inwidely varying serum concentrations inpatients receiving the same dose.6,7

Theophylline is excreted primarily viametabolism in the liver as 1-methyluricacid, 1,3-dimethyluric acid, andmethylxanthines.8 Factors which affectliver metabolism — such as smoking,extremes of age, concomitant drugtherapy, alcoholism, and diet — can leadto either subtherapeutic or toxictheophylline concentrations in a patientreceiving a dosage which would beeffective in the absence of theseconditions.

Another source of variation results fromthe specific dosage formulation employedand the route of administration.9 Thisvariation exists in part due to the lowsolubility characteristics of theophylline aswell as to the wide variety of sustained-release dosage formulations which areused. Intravenously, theophylline isadministered as aminophylline, which is acomplex of two theophylline moleculeswith one mole of ethyelenediamine toenhance solubility.Therapeutic levels are generally regardedto be between 10 and 20 µg/mL,10

although levels between 5 and 10 µg/mLmay still be effective in certainindividuals.11 Toxic levels are generallyconsidered to be greater than 20 µg/mL.Circulating theophylline levels generallyreach a plateau or steady state uponadministration of a fixed daily dosage. Aserum theophylline level should not beassumed to reflect the steady-stateconcentration unless a continuous fixeddosage has been administered for at least3 to 5 half-lives for theophylline.15

Although the average in vivo half-life fortheophylline in adults is 4.5 hours, it varieswidely in this population (3 to 9.5 hours)and is significantly shorter in children(mean 3.6 hours, range 1.5 to 9.5hours).10 The following diseases andconditions have been implicated in alteringthe pharmacokinetics of theophylline:congestive heart failure, respiratory viralinfections, liver disease, and renal

IMMULITE 2000 Theophylline (PIL2KTN-6, 2005-06-29) 3

disease.16 Concomitant use ordiscontinuation of the following drugs mayalso affect theophylline pharmacokinetics:cimetidine, barbiturates, erythromycin,troleandromycin, phenytoin andallopurinol.16,17 Consult the manufacturer'spackage insert for the theophylline drugproduct and the potentially interfering drugproduct for further information.

Principle of the ProcedureIMMULITE 2000 Theophylline is a solid-phase, enzyme-labeled, competitivechemiluminescent immunoassay.Incubation Cycles: 1 × 30 minutes.

Specimen CollectionThe time of collection is important. In orderto obtain theophylline samples whichaccurately reflect pharmacological levelsin the patient, guidelines should befollowed with respect to sampling timesand the interpretation of results. Samplesshould not be taken immediately followingdosage, during absorption and distributionof the drug. Following oral dosage withsolid formulation, samples should bedrawn 4 hours post-dose to allow forcomplete absorption and distribution.12

Following intravenous administration ororal administration with a liquidformulation, samples may be drawn 1 hourpost-dose.13 In premature infants givenrectal administration of aminophylline,samples may be drawn two hours post-dose.14 Consistent sampling times withrespect to dosing appropriate for eachclinical setting should be employed.The use of an ultracentrifuge isrecommended to clear lipemic samples.Hemolyzed samples may indicatemistreatment of a specimen before receiptby the laboratory; hence the results shouldbe interpreted with cautionCentrifuging serum samples before acomplete clot forms may result in thepresence of fibrin. To prevent erroneousresults due to the presence of fibrin,ensure that complete clot formation hastaken place prior to centrifugation ofsamples. Some samples, particularlythose from patients receivinganticoagulant therapy, may requireincreased clotting time.

Blood collection tubes from differentmanufacturers may yield differing values,depending on materials and additives,including gel or physical barriers, clotactivators and/or anticoagulants.IMMULITE 2000 Theophyllline has notbeen tested with all possible variations oftube types. Consult the section onAlternate Sample Types for details ontubes that have been tested.Volume Required: 50 µL serum.Storage: 7 days at 2–8°C or2 months at –20°C.SST Tubes: Manufacturer's studies haveshown that Becton Dickinson SST

vacutainer tubes may cause elevations invalues for therapeutic drug assays.Dilution of High Samples: All samplesexpected to have levels above the assay'scalibration range should be diluted beforeassay with an untreated patient sample.

Warnings and PrecautionsFor in vitro diagnostic use.Reagents: Store at 2–8°C. Dispose of inaccordance with applicable laws.

Follow universal precautions, and handle allcomponents as if capable of transmittinginfectious agents. Source materials derivedfrom human blood were tested and foundnonreactive for syphilis; for antibodies toHIV 1 and 2; for hepatitis B surface antigen;and for antibodies to hepatitis C.

Sodium azide, at concentrations less than0.1 g/dL, has been added as apreservative. On disposal, flush with largevolumes of water to prevent the buildup ofpotentially explosive metal azides in leadand copper plumbing.Chemiluminescent Substrate: Avoidcontamination and exposure to directsunlight. (See insert.)Water: Use distilled or deionized water.

Materials SuppliedComponents are a matched set. Labels onthe inside box are needed for the assay.

Theophylline Bead Pack (L2TN12)With barcode. 200 beads, coated withpolyclonal rabbit anti-theophyllineantibody. Stable at 2–8°C until expiration


date.L2KTN2: 1 pack. L2KTN6: 3 packs.

Theophylline Reagent Wedge (L2TNA2)With barcode. 11.5 mL of alkalinephosphatase (bovine calf intestine)conjugated to theophylline, in buffer.Stable at 2–8°C until expiration date.L2KTN2: 1 wedge. L2KTN6: 3 wedges.Before use, tear off the top of the label atthe perforations, without damaging thebarcode. Remove the foil seal from the topof wedge; snap the sliding cover down intothe ramps on the reagent lid.

Theophylline Adjustors (LTNL, LTNH)Two vials (Low and High), 4 mL each, oftheophylline in processed human serum,with preservative. Stable at 2–8°C for 30days after opening, or for 6 months(aliquotted) at –20°C.L2KTN2: 1 set. L2KTN6: 2 sets.Before making an adjustment, place theappropriate Aliquot Labels (supplied withthe kit) on test tubes so that the barcodescan be read by the on-board reader.

Kit ComponentsSupplied SeparatelyL2SUBM: Chemiluminescent SubstrateL2PWSM: Probe WashL2KPM: Probe Cleaning KitLRXT: Reaction Tubes (disposable)SDCM: Bi-level, multi-constituent controlAlso RequiredDistilled or deionized water; test tubes;controls.

Assay ProcedureNote that for optimal performance, it isimportant to perform all routinemaintenance procedures as defined in theIMMULITE 2000 Operator's Manual.See the IMMULITE 2000 Operator'sManual for: preparation, setup,adjustment, assay and quality controlprocedures.Recommended Adjustment Interval:2 weeks.

Quality Control Samples: Use controlsor sample pools with at least two levels(low and high) of theophylline.

Therapeutic RangeAs is indicated in the Summary andExplanation section, therapeutic levels aregenerally regarded to be between 10 and20 µg/mL,10 although levels between 5and 10 µg/mL may still be effective incertain individuals.11 Toxic levels aregenerally considered to be greater than20 µg/mL.

LimitationsA complete understanding of theinformation contained in this packageinsert is necessary for proper use of thisproduct.The specificity table should be consultedfor a list of substances which havemeasurable crossreactivity in this assay.Other medications and/or food not foundon this list may nevertheless crossreact inthe assay.The following should be considered in theinterpretation of the theophyllineconcentration:

• All concurrent medications taken bythe patient

• The time of sampling in relation to thedosing history

• Existing diseases or conditionsHeterophilic antibodies in human serumcan react with the immunoglobulinsincluded in the assay components causinginterference with in vitro immunoassays.[See Boscato LM, Stuart MC. Heterophilicantibodies: a problem for allimmunoassays. Clin Chem 1988:34:27-33.] Samples from patients routinelyexposed to animals or animal serumproducts can demonstrate this type ofinterference potentially causing ananomalous result. These reagents havebeen formulated to minimize the risk ofinterference; however, potentialinteractions between rare sera and testcomponents can occur. For diagnosticpurposes, the results obtained from thisassay should always be used incombination with the clinical examination,patient medical history, and other findings.

Performance DataSee Tables and Graphs for datarepresentative of the assay's performance.Results are expressed in µg/mL. (Unless


otherwise noted, all were generated onserum samples collected in tubes withoutgel barriers or clot-promoting additives.)Calibration Range: 1 – 60 µg/mLAnalytical Sensitivity: 0.3 µg/mLPrecision: Samples were processed induplicate over the course of 20 days, tworuns per day, for a total of 40 runs and 80replicates. (See "Precision" table.)Linearity: Samples were assayed undervarious dilutions. (See "Linearity" table forrepresentative data.)Recovery: Samples spiked 1 to 19 withthree theophylline solutions (125, 250 and500 µg/mL) were assayed. (See"Recovery" table for representative data.)Specificity: The antibody is highly specificfor theophylline. (See "Specificity" table.)

Method Comparison: The assay wascompared to DPC's IMMULITETheophylline assay on 155 patientsamples. (Concentration range:approximately 1 to 60 µg/mL. See graph.)By linear regression:(IML 2000) = 0.98 (IML) + 0.73 µg/mLr = 0.992

Means:27.0 µg/mL (IMMULITE 2000)26.7 µg/mL (IMMULITE)

Alternate Sample Types: To assess theeffect of alternate sample types, bloodwas collected from 40 volunteers intoplain, heparinized, EDTA and BectonDickinson SST® vacutainer tubes. Equalvolumes of the matched samples werespiked with various concentrations oftheophylline, to obtain values throughoutthe calibration range of the assay, andthen assayed by the IMMULITE 2000Theophylline procedure. By linearregression:(Heparin) = 0.86 (Serum) + 1.8 µg/mLr = 0.970

(EDTA) = 0.90 (Serum) + 2.5 µg/mLr = 0.964

(SST) = 1.09 (Serum) + 0.5 µg/mLr = 0.990

Means:28.8 µg/mL (Serum)26.5 µg/mL (Heparin)28.4 µg/mL (EDTA)31.8 µg/mL (SST)

Bilirubin: Presence of conjugated andunconjugated bilirubin in concentrations

up to 200 mg/L has no effect on results,within the precision of the assay.

Hemolysis: Presence of hemoglobin inconcentrations up to 512 mg/dL has noeffect on results, within the precision of theassay.

Lipemia: Presence of tryglycerides inconcentrations up to 3,000 mg/dL has noeffect on results, within the precision of theassay.

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Technical AssistanceIn the United States, contact DPC'sTechnical Services department.Tel: 800.372.1782 or 973.927.2828Fax: 973.927.4101. Outside the UnitedStates, contact your National Distributor.Manufactured by EURO/DPC Ltd. under aQuality System registered to ISO 13485:2003.

Tables and Graphs

Precision (µg/mL)

Within-Run1 Total2

Mean3 SD4 CV5 SD CV

1 0.99 0.12 12.1% 0.13 13.4%

2 5.32 0.47 8.9% 0.42 7.9%

3 12.2 0.73 6.0% 0.72 6.0%

4 22.0 1.86 8.5% 1.88 8.5%

5 47.4 1.95 4.1% 2.81 5.9%

Linearity (µg/mL)

Dilution1 Observed2 Expected3 %O/E4

1 8 in 85 8.53 — —

4 in 8 4.72 4.27 111%

2 in 8 2.07 2.13 97%

1 in 8 1.28 1.07 120%

2 8 in 8 12.0 — —

4 in 8 6.20 6.0 103%

2 in 8 3.05 3.0 102%

1 in 8 1.40 1.5 94%

3 8 in 8 25.3 — —

4 in 8 12.3 12.7 97%

2 in 8 6.69 6.33 106%

1 in 8 3.12 3.16 99%

4 8 in 8 39.7 — —

4 in 8 19.9 19.9 100%

2 in 8 9.58 9.93 96%

1 in 8 5.70 4.96 115%

5 8 in 8 38.5 — —

4 in 8 19.3 19.3 100%

2 in 8 9.40 9.63 98%

1 in 8 5.52 4.81 115%

Recovery (µg/mL)

Solution1 Observed2 Expected3 %O/E4

1 — 1.60 — —

A 7.94 7.77 102%

B 13.9 14.0 99%

C 24.4 26.5 92%

2 — 2.62 — —

A 9.10 8.74 104%

B 14.9 15.0 99%

C 26.1 27.5 95%

3 — 5.71 — —

A 11.5 11.7 98%

B 17.1 17.9 96%

C 27.9 30.4 92%

4 — 10.3 — —

A 15.1 16.0 94%

B 23.4 22.3 105%

C 33.2 34.8 95%

5 — 17.9 — —

A 22.6 23.3 97%

B 28.9 29.5 98%

C 38.2 42.0 91%

Specificity

Compound1µg/mLAdded2

Apparentµg/mL3

% Cross-reactivity4

Caffeine 1,000 3.62 0.4%

Acetamidophenol 1 ND ND

3,7 Dimethyluric 1 ND ND

1-Methylxanthine 1 ND ND

1-Methyluric Acid 1 ND ND

3-Methyluric Acid 1 ND ND

1,3,7-TrimethyluricAcid 1 ND ND

Phenobarbital 1 ND ND

Theobromine 1 ND ND

ND: not detectable5


Method Comparison

0

10

20

30

40

50

60

70

0 10 20 30 40 50 60 70

IMMULITE Theophylline, µg/mL

IMM

ULIT

E 20

00 T

heop

hylli

ne

(IML 2000) = 0.98 (IML) + 0.73 µg/mLr = 0.992

Deutsch. Precision: 1Intra-Assay, 2Gesamt,3Mittelwert, 4S (Standardabweichung), 5CV(Variationskoeffizient). Linearity: 1Verdünnung,2Beobachtet (B), 3Erwartet (E), 4% B/E, 58 in 8.Recovery: 1Lösung, 2Beobachtet (B), 3Erwartet(E), 4% B/E. Specificity: 1Verbindung,2zugesetzte Menge, 3Gemessene Konzentration,4% Kreuzreaktivität, 5NN: Nicht nachweisbar.Method Comparison: Theophylline:Theophyllin.

Español. Precision: 1Intraensayo, 2Total,3Media, 4DS, 5CV. Linearity: 1 Dilución,2Observado (O), 3Esperado (E), 4%O/E, 58 en 8.Recovery: 1Solución, 2Observado (O),3Esperado (E), 4%O/E. Specificity:1Compuesto, 2Cantidad añadida, 3Concentraciónaparente, 4% Reacción cruzada, 5ND: nodetectable. Method Comparison: Theophylline:Teofilina.

Français. Precision: 1Intraessai, 2Total,3Moyenne, 4SD, 5CV. Linearity: 1Dilution,2Observé (O), 3Attendu (A), 4%O/A, 58 dans 8.Recovery: 1Solution, 2Observé (O), 3Attendu(A), 4%O/A. Specificity: 1Composé, 2ajouté,3Concentration apparente, 4Réaction croisée %.5ND: non détectable. Method Comparison:Theophylline: Théophylline.

Italiano. Precision: 1Intra-serie, 2Totale, 3Media,4SD (Deviazione Standard), 5CV (Coefficiente diVariazione). Linearity: 1Diluizione, 2Osservato(O), 3Atteso (A), 4%O/A, 58 in 8. Recovery:1Soluzione, 2Osservato (O), 3Atteso (A), 4%O/A.Specificity: 1Composto, 2quantità aggiunta,3Concentrazione apparente, 4Percentuale diCrossreattività, 5ND: non determinabile. MethodComparison: Theophylline: Teofillina.

Português. Precision: 1Entre-ensaios, 2Total,3Média, 4Desvio padrão, 5Coeficiente devariação. Linearity: 1Diluição, 2Observado (O),3Esperado (E), 4%O/E, 58 em 8. Recovery:1Solução, 2Observado (O), 3Esperado (E),

4%O/E. Specificity: 1Composto, 2Quantidadeadicionada, 3Apparent Concentration,4Percentagem de reacção cruzada, 5ND: nãodetectável. Method Comparison: Theophylline:Teofilina.

Deutsch

IMMULITE 2000 TheophyllinAnwendung: Zur in vitro Diagnostik unterVerwendung des IMMULITE 2000Systems — für die quantitativeBestimmung von Theophyllin im Serum,als Hilfsmittel in der Therapieüberwachungdieses Brochodilatators.

Artikelnummern: L2KTN2 (200 Tests),L2KTN6 (600 Tests)Testcode: THE Farbe: hellgrün

Klinische RelevanzTheophyllin ist ein Methylxanthin-Derivat,das aufgrund seiner bronchodilatorischenEigenschaften in der Klinik häufig in derTherapie respiratorischer Erkrankungen,z.B. Asthma, eingesetzt wird. AlsBronchospasmolytikum entfaltet es seineAktivität hauptsächlich an der glattenMuskulatur der Bronchien. Theophyllin istein kompetitiver Inhibitor derPhosphodiesterase, das die Konversionvon cAMP zu 5'-AMP katalysiert.1 Für denbronchodilatorischen Effekt sind allerdingsandere Mechanismen als diePhosphodiesterase-Hemmungverantwortlich.2 Andere Methylxanthine mitmessbarer Kreuzreaktivität sind Coffein,Theobromin und 8-Chlorotheophyllin, diein Kaffee, Tee, Softdrinks und in einigenfreiverkäuflichen Medikamenten (z.B.Dimenhydrinat) vorkommmen.Sowohl der relativ enge therapeutischeBereich als auch eine hohe Intra- undInter-Patienten Variabilität machen dieMessung des Theophyllins zurTherapiekontrolle unumgänglich.Unterhalb des optimalen Bereichs sind dieTheophyllin Konzentrationensubtherapeutisch, oberhalb ist mittoxischen Nebenwirkungen wiegastrointestinalen Beschwerden,Tachykardie, Herzrhythmusstörungen,Krämpfen und Koma zu rechnen.3,4,5


Patienten mit identischen TheophyllinSpiegeln zeigen nicht notwendigerweisedie gleichen therapeutischen bzw.toxischen Effekte. Trotz gleicherapplizierter Theophyllindosis können dieSerumkonzentrationen von Patient zuPatient sehr unterschiedlich sein.6,7

Theophyllin wird hauptsächlch in derLeber zu 1-Methyl-Harnsäure, 1,3-Dimethyl-Harnsäure und Methylxanthinenmetabolisiert.8 Faktoren, die denLebermetabolismus beeinflussen — wieRauchen, sehr alte Patienten, begleitendeArzneimitteltherapie, Alkoholismus, Diät -können zu subtherapeutischen odertoxischen Theophyllin Konzentrationenführen. Ohne diese Faktoren würde dieDosierung durchaus effektiv sein.

Darreichungsform und Applikationsart desMedikaments beeinflussen ebenfallsSerumkonzentration und Wirkung, einmaldurch die schlechte Löslichkeit desTheophyllins zum anderen durch eineVielzahl retardierter Formen bedingt.9Intravenös wird Theophyllin alsAminophyllin appliziert. Hierbei handelt essich um einen Komplex aus 2Theophyllinmolekülen mit einem MolekülEthylendiamin wodurch die Löslichkeitverbessert wird.Der therapeutische Bereich wurdezwischen 10–20 µg/ml ermittelt,10 wobeiauch Spiegel zwischen 5–10 µg/ml beibestimmten Patienten effektiv sind.11 Über20 µg/ml kann man generell von toxischenKonzentrationen ausgehen.Durch Gabe einer fixen täglichen Dosiserreichen die zirkulierenden TheophyllinKonzentrationen ein Plateau oder „SteadyState“. Erst nach der kontinuierlichenGabe über 3–5 Halbwertzeiten kann die„Steady-State“ Theophyllin Konzentrationsicher ermittelt werden.15 Die mittlere in-vivo Halbwertzeit für Theophyllin beträgtbeim Erwachsenen 4,5 Stunden bei einerbreiten Variation von 3 bis 9,5 Stunden.Bei Kindern liegt die Halbwertzeit deutlichniedriger (Mittelwert 3,6 Stunden, Bereich1,5 bis 9,5 Stunden).10 FolgendeErkrankungen können diePharmakokinetik des Theophyllinsbeeinflussen: Stauungsherz, virale Infektedes Respirationstraktes, Leber- undNierenerkrankungen.16 Die gleichzeitigeEinnahme oder das Absetzen folgenderMedikamente können die Pharmakokinetikdes Theophyllins ebenfalls beeinflussen:

Cimetidin, Barbiturate, Erythromycin,Troleandromycin, Phenytoin undAllopurinol.16,17 Nähere Hinweise sind denGebrauchsinformationen der TheophyllinArzneimttel oder der evtl. störendenArzneimittel zu entnehmen.

MethodikDer IMMULITE 2000 Theophyllin ist einFestphasen, Enzym-markierter,kompetitiver ChemilumineszenzImmunoassay.Inkubationszyklen: 1 × 30 min.

ProbengewinnungDer Zeitpunkt der Probenentnahme,insbesondere der Abstand zur letztenDosisgabe ist wichtig und bei derInterpretation der Werte zu berück-sichtigen. Um Theophyllin-Proben zuerhalten, die akkurat den pharma-kologischen Spiegel reflektieren, sollteneinige Richtlinien beachtet werden. DieProben dürfen nicht direkt nachDosisgabe oder während der Adsorptions-bzw. Distributionsphase entnommenwerden. Nach oraler Gabe in Tabletten-form sollten die Probenentnahme 4Stunden nach der Einnahme erfolgen,damit die vollständige Absorption undVerteilung des Wirkstoffs abgeschlossenist.12 Nach intravenöser oder oralerApplikation in flüssiger Form sollten dieProben 1 Stunde nach Applikationentnommen werden.13 Nach rektalerApplikation von Aminophyllin bei frühreifenKindern soll die Probenentnahme 2Stunden nach Gabe erfolgen.14

Gleichmäßige Abnahmezeiten unterBerücksichtigung der für die jeweiligeklinische Fragestellung relevantenDosierung sollten eingehalten werden.Der Einsatz einer Ultrazentrifuge wird zurKlärung von lipämischen Probenempfohlen.

Bei hämolysierten Proben besteht dieMöglichkeit einer unsachgemäßenHandhabung vor Eintreffen im Labor,daher sind die Ergebnisse mit Vorsicht zuinterpretierenDie Zentrifugation der Serumproben vordem völligen Abschluss der Gerinnungkann zu Fibringerinnseln führen. Umfehlerhaften Analysenergebnissen infolgevon Gerinnseln vorzubeugen, ist


sicherzustellen, dass die Gerinnung vorder Zentrifugation der Proben vollständigabgeschlossen ist. Insbesondere Probenvon Patienten unter Antikoagulantien-therapie können eine verlängerteGerinnungszeit aufweisen.Blutentnahmeröhrchen von verschiedenenHerstellern können differierende Werteverursachen. Dies hängt von denverwendeten Materialien und Additiven(Gel oder physische Trennbarrieren,Gerinnungsaktivatoren und /oderAntikoagulantien) ab. IMMULITE 2000Theophyllin sind nicht mit allen möglichenRöhrchenvariationen ausgetestet worden.Details der getesteten Röhrchenarten sinddem Kapitel "Alternative Probenarten" zuentnehmen.Erforderliche Menge: 50 µl Serum.Lagerung: 7 Tage bei 2–8°C oder2 Monate bei –20°C.

SST-Röhrchen: Studien des Herstellershaben gezeigt, dass die Verwendung vonBecton Dickinson SST® VacutainerGeltrennröhrchen zu erhöhten Werten inArzneimittelassays führen kann.Verdünnung von Proben hoherKonzentration: Proben, deren erwarteteErgebnisse größer als der Messbereichsein können, sollten vor dem Einsetzenmit einer unbehandelten Patientenprobeverdünnt werden.

Hinweise undVorsichtsmaßnahmenZur In-vitro-Diagnostik.Reagenzien: Bei 2–8°C lagern. UnterEinhaltung der geltenden gesetzlichenVorschriften entsorgen.

Die generell geltendenVorsichtsmaßnahmen sind einzuhalten undalle Komponenten als potenziell infektiös zubehandeln. Alle aus menschlichem Blutgewonnenen Materialien wurden aufSyphilis, Antikörper gegen HIV-1 und HIV-2, Hepatitis-B-Oberflächenantigen undHepatitis-C-Antikörper untersucht undnegativ befundet.Bestimmten Komponenten wurdeNatriumazid (<0,1 g/dl) hinzugefügt. Umdie Bildung von explosiven Metallaziden inBlei- und Kupferrohren zu vermeiden,sollten die Reagenzien nur zusammen mit

großen Wassermengen in die Kanalisationgespült werden.

Chemilumineszenz-Substrat:Kontamination und direkteSonneneinstrahlung vermeiden. SiehePackungsbeilage.

Wasser: Destilliertes oder deionisiertesWasser verwenden.

Im Lieferumfang enthalten:Die Bestandteile sind aufeinanderabgestimmt. Die Aufkleber auf derInnenverpackung werden zurTestdurchführung gebraucht.

Theophyllin Kugel-Container (L2TN12)Barcodiert. 200 Kugeln, beschichtet mitTheophyllin-Antikörpern (polyklonal,Kaninchen). Bei 2–8°C bis zumAblaufdatum haltbar.L2KTN2: 1 Container. L2KTN6: 3 Container.

Theophyllin Reagenzbehälter (L2TNA2)Barcodiert. 11,5 ml alkalischePhosphatase konjugiert mit Theophyllin inPuffer. Bei 2–8°C bis zum Verfallsdatumhaltbar.L2KTN2: 1 Behälter. L2KTN6: 3 Behälter.

Vor Gebrauch den Aufkleber an derPerforation abreißen, ohne dabei dieBarcodierung zu beschädigen. Die Folievon der Oberseite des Containersentfernen. Die Folie von der Oberseite desContainers entfernen. Den Schiebedeckelnach unten in die Führung desReagenziendeckels einrasten lassen.

Theophyllin Kalibratoren (LTNL, LTNH)Zwei Fläschchen (niedrig und hoch) à4 ml, mit Theophyllin in prozessiertemhumanem Serum, mit Konservierungs-stoffen. Nach dem Öffnen 30 Tage bei2–8°C, sonst 6 Monate (aliquotiert) bei–20°C haltbar.L2KTN2: 1 Set. L2KTN6: 2 Sets.Vor der Kalibrierung die entsprechendenAufkleber (dem Kit beiliegend) aufGlasröhrchen kleben, so daß dieBarcodes vom Barcodereader desSystems gelesen werden können.


Separat erhältliche Testsystem-KomponentenL2SUBM: Chemilumineszenz-SubstratmodulL2PWSM: WaschmodulL2KPM: ReinigungsmodulLRXT: (Einmal-) ReaktionsgefäßeSDCM: Arzneimittel-Kontrollmodul in dreiKonzentrationen

Ebenfalls benötigtDestilliertes bzw. deionisiertes Wasser;Teströhrchen; Kontrollen.

TestdurchführungFür eine optimale Funktion des Gerätes istunbedingt zu beachten, dass dieWartungen, wie im IMMULITE 2000-Handbuch beschrieben, regelmäßigdurchgeführt werden.Hinweise zur Vorbereitung, täglichenInbetriebnahme des Systems, derKalibrierung sowie Verfahren zur Test-und Qualitätskontrolle entnehmen Sie bittedem IMMULITE 2000-Handbuch.

Empfohlenes Kalibrationsintervall:2 Wochen.Qualitätskontrollseren: Kontrollen oderPoolseren mit Theophyllin in mindestenszwei Konzentrationen (niedrig und hoch)verwenden.

Therapeutischer BereichWie im Kapitel “Klinische Relevanz”beschrieben, liegen therapeutischeSpiegel zwischen 10 und 20 µg/ml,10

obwohl auch schon Konzentrationenzwischen 5 und 10 µg/ml11 bei einzelnenIndividuen therapeutisch wirksam sind. Alstoxische Spiegel werden generell Werte> 20 µg/ml angesehen.

Grenzen der MethodeZur ordnungsgemäßen Verwendungdieses Produkts ist es erforderlich, dassdie Informationen in dieserPackungsbeilage vollständig verstandenwerden.Bitte entnehmen Sie der Spezifitätstabellejene Substanzen, die eine messbareKreuzreaktivität in diesem Testsystemaufweisen. Es kann jedoch nichtausgeschlossen werden, dass auchandere, in dieser Auflistung nicht

enthaltene Medikamente und/oderLebensmittel zu einer Kreuzreaktivität imAssay führen.Die folgenden Punkte sollten bei derInterpretation der Theopyhllin-Konzentration berücksichtigt werden:

• Alle vom Patienten gleichzeitigeingenommenen Medikamente

• Zeitpunkt der Probenentnahme imVerhältnis zum Dosierungsverlauf

• Bestehende Krankheiten bzw.Zustandsbilder

Heterophile Antikörper in Humanserenkönnen mit Immunglobulinen aus denAssaykomponenten reagieren undInterferenzerscheinungen innerhalb des invitro Immunoassays verursachen. (Clin.Chem. 1988:34:27-33) Proben vonPatienten, die häufig mit Tier- bzw.Tierserumprodukten zu tun haben, könnendie erwähnten Interferenzen verursachenund zu anomalen Resultaten führen. Dieverwendeten Reagenzien sind sokonzipiert, dass das Risiko einerInterferenz mit den zu messenden Probenminimiert ist. Dennoch können potentiellInteraktionen zwischen seltenen Serenund den Testkomponenten auftreten. Zudiagnostischen Zwecken sollten die mitdem Assay erhaltenen Ergebnisse immerin Kombination mit der klinischenUntersuchung, der Patientenanamneseund anderen Befunden gesehen werden.

LeistungsdatenSiehe Tabellen und Grafiken mitrepräsentativen Daten für den Assay. DieErgebnisse sind als (µg/mL ausgedrückt.(Alle Daten wurden - sofern nicht andersangegeben - aus Serumproben inRöhrchen ohne Gelbarrieren odergerinnungsfördernde Zusätze gewonnen.)Messbereich: 1 – 60 µg/mlAnalytische Sensitivität: 0,3 µg/ml

Präzision: Proben wurden innerhalb von20 Tagen mit jeweils zwei Testansätzen inDoppelbestimmung gemessen (insgesamt40 Bestimmungen und 80Einzelmessungen). (Siehe Tabelle„Precision“.)Linearität: Proben wurden inverschiedenen Verdünnungen getestet.(Repräsentative Daten entnehmen Siebitte der Tabelle „Linearity“.)


Wiederfindung: Proben wurden mit dreiTheophyllin-Lösungen (125, 250 und500 µg/ml) im Verhältnis 1:19 versetzt.(Repräsentative Daten entnehmen Siebitte der Tabelle „Recovery“.)

Spezifität: Hochspezifischer Theophyllin-Antikörper. (siehe Tabelle „Specificity“.)Methodenvergleich: Der Assay wurdeanhand von 155 Patientenproben mit demIMMULITE Theophyllin Assay von DPCverglichen. (Konzentrationsbereich: ca.1 – 60 µg/ml. Siehe Grafik.) Durch lineareRegression:(IML 2000) = 0,98 (IML) + 0,73 µg/mlr = 0,992

Mittelwerte:27,0 µg/ml (IMMULITE 2000)26,7 µg/ml (IMMULITE)

Alternativer Probentyp: Um den Einflussvon alternativen Probentypen zuüberprüfen, wurde 40 Freiwilligen Blut inRöhrchen ohne Zusatz, Heparin-Röhrchen, EDTA-Röhrchen und in BectonDickinson SST® Vacutainer-Röhrchenentnommen. Gleiche Volumen derselbenProbe wurden mit verschiedenenKonzentrationen an Theophyllin versetzt,um Werte über den gesamtenKalibrationsbereich des Assays zuerhalten, und wurden anschließend mitdem IMMULITE 2000 Theophyllin Assaybestimmt. Durch lineare Regression:(Heparin) = 0,86 (Serum) + 1,8 µg/mlr = 0,970

(EDTA) = 0,90 (Serum) + 2,5 µg/mlr = 0,964

(SST) = 1,09 (Serum) + 0,5 µg/mlr = 0,990

Mittelwerte:28,8 µg/ml (Serum)26,5 µg/ml (Heparin)28,4 µg/ml (EDTA)31,8 µg/ml (SST)

Bilirubin: Konjugiertes undunkonjugiertes Bilirubin hat inKonzentrationen bis zu 200 mg/l keinenEinfluss auf die Messung, der größer alsdie Impräzision des Assays selbst ist.Hämolyse: Hämoglobin hat inKonzentrationen bis zu 512 mg/dl keinenEinfluss auf die Ergebnisse, der größer alsdie Impräzision des Assays selbst ist.Lipämie: Triglyceride haben inKonzentrationen bis zu 3 000 mg/dlkeinen Einfluss auf die Ergebnisse, der

größer als die Impräzision des Assaysselbst ist.

AnwendungsberatungBei Rückfragen wenden Sie sich bitte anIhre DPC Niederlassung.Hergestellt von Euro/DPC Ltd. unter demQualitätssystem ISO 13485:2003.

Español

IMMULITE 2000 TeofilinaUtilidad del análisis: Para el diagnósticoin vitro con el Analizador IMMULITE 2000— para la medición cuantitativa deteofilina en suero. Está estrictamenteindicado para diagnóstico in vitro, comoayuda en la monitorización de laadministración terapéutica de estebroncodilatador.

Referencia: L2KTN2 (200 tests),L2KTN6 (600 tests)Código del Test: THE Código de Color: Verde claro

Resumen y Explicación delTestLa Teofilina es un derivado de lametilxantina muy utilizado clínicamentepor su actividad como broncodilatador enel tratamiento de ciertos procesosrespiratorios como el asma. Comobroncodilatador, la teofilina ejerce suefecto en la musculatura lisa de losbronquios. La Teofilina es un inhibidorcompetitivo de la enzima ciclo nucleotidofosfodiesterasa, enzima que cataliza laconversión ciclo adenosina monofosfato(cAMP) a 5'-adenosina monofosfato (5'-AMP).1 Se han sugerido otrosmecanismos mediadores de efectobroncodilatador aparte de la inhibición dela actividad fosfodiesterasa de laTeofilina.2 Otras metilxantinas frente a lasque se ha encontrado actividad cruzada— como la cafeína, teobromina, y 8-cloroteofilina — encontradas en el café,te, bebidas refrescantes, chocolate, yalgunos medicamentos comodimentidrinato.La importancia de la valoración de laconcentración de teofilina está


estrechamente relacionada con su indiceterapeutico así como la variabilidad inter-e intra-paciente en el tratamiento conteofilina. Existe una ventana deconcentraciones por debajo de la cual losniveles de teofilina son subterapeuticos ypor encima causan efectos tóxicos, comoproblemas gastrointestinales, taquicardia,arritmias, convulsiones y coma.3,4,5

Pacientes con los mismos niveles deteofilina, no necesariamente experimentanlos mismos síntomas, ni los mismosefectos terapeuticos o tóxicos. Lavariabilidad de los resultados en ladispensación de la teofilina varían laconcentración en suero de los pacientesrecibiendo la misma dosis.6,7 Teofilina esexcretada principalmente via hepáticametabolizando ácido 1-metilurico, 1,3-dimetilurico y metillxantinas.8 Factoresque afectan el metabolismo hepático —como tabaquísmo, edad avanzada,efectos secundarios de drogasterapeuticas, alcoholismo y dieta —pueden causar efectos subterapeuticos otóxicos de las concentraciones deteofillina en determinado paciente, lascuales podrían ser efectivas en ausenciade estas condiciones.Otro mecanismo en la variación de losresultados a partir del empleo de unadosis específica es la vía deadministración.9 Esta variabilidad vienedada en parte por la baja solibilidad de lateofilina y la variación de los escipientesutilizados para administrar la dosis. Deforma intravenosa, la teofillina esadministrada como aminofillina, la cual esun complejo de dos moléculas de teofilinacon con una molécula de etilen-diaminatque mejora su solubilidad.Los niveles terapeuticos generalmente seencuentran entre 10 y 20 µg/ml,10 Nivelesentre 5 y 10 µg/ml pueden aún serefectivos en ciertos individuos.11 Nivelespor encima de 20 µg/ml son generalmenteconsiderados tóxicos.Los niveles circulantes de teofilinageneralmente alcanzan una meseta oestadío mantenido en la administraciónfijada de una dosis diaria. Un único nivelen suero de teofilina no servirá paraasumir esta meseta de concentración a noser, que la dosis fijada se hubieseadministrado por al menos entre 3 a 5veces la vida media de la teofilina.15

Aunque la media de la vida media de lateofilina in vivo en adultos es de 4,5horas, puede variar en la población entre(3 a 9,5 horas) y es significativamentemenor en niños (media 3,6 horas, rango1,5 a 9,5 horas).10 Se ha visto lainplicación en las siguientes situaciones yenfermedades en la alteración de lafarmacocinética de la teofilina: fallocardiaco congestivo, infecciones viralesrespiratorias, enfermedad hepática, yenfermedad renal.16 Efectos secundariospor el uso o descontinuación de lossiguientes medicamentos pueden tambiénafectar a la farmacocinética de la teofilina:cimetidina, barbituricos, eritromicina,troleandromicina, fenitoína alopurinol.16,17

Consulte en el protocolo del fabricante delmedicamento de teofilina para masinformación sobre potencialesinterferencias de otros medicamentos.

Principio del análisisEl ensayo IMMULITE 2000 Teofilina es uninmunoensayo competitivoquimioluminscente en fase sólida.Ciclos de incubación: 1 × 30 minutos.

Recogida de la muestraEl momento de recogida es importante.Para obtener muestras que reflejen deforma exacta los niveles farmacológicosde teofilina en el paciente, deben seguirseunas directrices sobre los momentos demuestreo e interpretación de resultados.No se deberán tomar muestras pocodespués de la administración, ni durantela absorción y distribución del fármaco.Tras la administración por vía oral conformas sólidas, deberían tomarsemuestras 4 horas después, para permitiruna absorción y distribución completa.12

Tras la administración intravenosa, u oralcon formulaciones líquidas, las muestraspueden obtenerse una hora después.13 Enniños prematuros, a los que se administraaminofilina por vía rectal, las muestraspueden obtenerse dos horas después.14

Deberían emplearse momentos de tomade muestras en relación con la dosis paracada paciente.Se recomienda el uso de unaultracentrífuga para aclarar las muestraslipémicas.

Las muestras hemolizadas podrían indicaruna mala manipulación de la muestra


antes de ser recibida por el laboratorio; eneste caso, los resultados debeninterpretarse con precaución.La centrifugacion de las muestras desuero antes de que se forme el coagulopuede ocasionar la presencia de fibrina.Para evitar resultados erroneos debidos ala presencia de fibrina, asegurarse que seha formado el coagulo completamenteantes de centrifugar las muestras.Algunas muestras, particularmenteaquellas de pacientes sometidos a terapiaanticoagulante, pueden requerir mayortiempo de coagulacion.Los tubos para recoger sangre dedistintos fabricantes pueden producirvalores diferentes, dependiendo delmaterial del tubo y de los aditivos,incluyendo barreras de gel o barrerasfísicas, activadores de la coagulación y/oanticoagulantes. El Teofilina IMMULITE2000 no ha sido analizado con todos losdistintos tipos de tubos. Para obtenerdetalles sobre los tipos tubos que se hananalizado, consulte la sección de Tipos deMuestras Alternativos.Volumen requerido: 50 µl serum.

Storage: 2–8°C durante 7 días, o2 meses a –20°C.Tubos SST: Los estudios del fabricantehan mostrado que los tubos vacutainerBecton Dickinson SST pueden causarelevaciones de los valores en ensayos dedrogas terapéuticas.Dilución de Muestras: Las muestras conniveles de superiores al rango decalibración deben ser diluidasmanualmente antes del ensayo con unamuestra de paciente sin tratar.

Advertencias y precaucionesPara uso diagnóstico in vitro.Reactivos: Mantener a 2–8°C. Desecharde acuerdo a la legislación en vigor.

Siga las precauciones universales ymanipule todos los componentes como sifueran capaces de transmitir agentesinfecciosos. Los materiales derivados desangre humana han sido analizados y sonnegativos para sífilis; para anticuerposfrente al HIV 1 y 2; para el antígeno desuperficie de hepatitis B y para losanticuerpos de hepatitis C.

Se ha usado Azida sodica, enconcentraciones menores de 0,1 g/dl,como conservante. Para su eliminacion,lavar con grandes cantidades de aguapara evitar la constitucion de residuos deazidas metalicas, potencialmenteexplosivas, en las cañerías de cobre yplomo.

Sustrato quimioluminiscente: Evite lacontaminación y exposición a la luzdirecta del sol. (Ver el prospecto.)Agua: Usar agua destilada o desionizada.

Materiales suministradosLos componentes representan un juegocompleto. Las etiquetas incluidas en lacaja son necesarias para el ensayo.

Cartucho de bolas de Teofilina(L2TN12)Con código de barras. 200 bolas dereacción, recubiertas con anticuerpopoliclonal de conejo anti-teofilina. Establea 2–8°C hasta la fecha de caducidad.L2KTN2: 1 cartucho L2KTN6: 3 cartuchos

Vial de Reactivo de Teofilina (L2TNA2)Con código de barras. 11,5 ml defosfatasa alcalina (intestino de ternera)conjugada a teofilina en solución tampón.Estable a 2–8°C hasta la fecha decaducidad.L2KTN2: 1 vial. L2KTN6: 3 viales.

Antes de usar, cortar la parte superior dela etiqueta en la perforación, sin dañar elcódigo de barras. Quitar el precinto delorificio del vial; encajar la cubiertadeslizante en las rampas de la tapa delreactivo.

Ajustadores de Teofilina (LTNL, LTNH)Dos viales (Bajo y Alto), de 4,0 ml cadauno, de teofilina procesada en suerohumano. Estable a 2–8°C durante 30 díasuna vez abierto, o durante 6 meses(alicuotados) a –20°C.L2KTN2: 1 juego. L2KTN6: 2 juegos.Antes de hacer un ajuste, colocar lasetiquetas a las alícuotas apropiadas(suministradas con el kit) sobre tubos deensayo, de forma tal que los códigos debarras puedan ser leídos por el lector.


Componentes del kit que sesuministran por separadoL2SUBM: Substrato quimioluminiscenteL2PWSM: Lavado de sondaL2KPM: Kit de limpieza de sondaLRXT: Tubos de reacción (desechables)SDCM: Dos niveles, control que contieneteofilina con base de suero humano.También necesariosAgua destilada o desionizada; tubos deensayo; controles.

EnsayoNótese que para una óptima ejecución, esimportante realizar los procedimientos demantenimiento rutinario definidos en elmanual del operador IMMULITE 2000.

Consulte el Manual del operador deIMMULITE 2000 para: la preparación,instalación, ajuste, ensayo yprocedimientos de control de calidad.

Intervalo de ajuste recomendado:2 semanas.Muestras de Control de Calidad: Usecontroles o pools de sueros con al menosdos niveles (bajo y alto) de teofilina.

Intervalo TerapéuticoComo se indica en la sección Resumen yExplicación del test, los nivelesterapéuticos suelen estar comprendidosentre 10 y 20 µg/ml,10 aunque nivelesentre 5 y 10 µg/ml pueden ser efectivosen determinados individuos.11 Los nivelestóxicos son generalmente superiores a20 µg/ml.

LimitacionesEs necesario un entendimiento completode la información contenida en esteprotocolo para el correcto uso de esteproducto.

Debe consultarse la tabla de especificidadpara ver una lista de sustancias quepueden mostrar una reactividad cruzadamensurable en este ensayo. Otrasmedicaciones y/o medicamentos que nose encuentren en esta lista pueden, sinembargo, dar una reactividad cruzada enel ensayo.Deben considerarse los siguientes puntosen la interpretación de la concentración degentamicina:

• Todas las medicaciones que elpaciente esté tomando en esemomento

• El tiempo de la muestra en relacióncon la historia de dosificación

• Enfermedades o condicionesexistentes

Los anticuerpos heterofílicos en el suerohumano pueden reaccionar con lasinmunoglobulinas de los componentes delensayo provocando interferencias con losinmunoanálisis in vitro. [Ver Boscato LM,Stuart MC. Heterophilic antibodies: aproblem for all immunoassays. Clin Chem1988:34:27-33.] Las muestras de lospacientes que frecuentemente estánexpuestos a animales o a productosséricos animales pueden presentar estetipo de interferencia que potencialmenteocasione un resultado anómalo. Estosreactivos han sido formulados paraminimizar el riesgo de interferencia, noobstante, pueden darse interaccionesanómalas entre sueros conflictivos y loscomponentes del ensayo. Con fines dediagnóstico, los resultados obtenidos coneste ensayo siempre deben ser usados encombinación con el examen clínico, lahistoria médica del paciente y cualquierotro dato clínico relevante.

Características analíticasPara ver resultados representativos de lascualidades del ensayo, consulte las tablasy los gráficos. Los resultados se expresanen µg/ml. (A no ser que se indique locontrario, todos los resultados fuerongenerados en muestras de suerorecogidas en tubos sin geles oactivadores de la coagulación.)Intervalo de calibración: 1 – 60 µg/mlSensibilidad analítico: 0,3 µg/ml

Precisión: Las muestras fueronprocesadas por duplicado durante 20 días,en dos tandas de trabajo por día, para untotal de 40 tandas y 80 replicados. (Véasela tabla "Precision".)Linealidad: Las muestras fueronanalizadas con varias diluciones. (Véasela tabla "Linearity" para resultadosrepresentativos.)Recuperación: Se ensayaron muestras 1a 19 sobrecargadas con tres solucionesde teofilina (125, 250 y 500 µg/ml). (Ver la


tabla "Recovery" para resultadosrepresentativos).

Especificidad: El anticuerpo es altamenteespecífico para teofilina. (Véase la tabla"Specificity".)Comparación de los métodos: Secomparó el ensayo con un kit de Teofilina155 muestras. (Intervalo deconcentración: aproximadamente de 1 a60 µg/ml. Véase Gráfico 1.) Por regresiónlineal:(IML 2000) = 0,98 (IML) + 0,73 µg/mlr = 0,992

Medias:27,0 µg/ml (IMMULITE 2000)26,7 µg/ml (IMMULITE)

Tipos de Muestra Alternativa: Paraverificar el efecto del uso de tiposalternativos de muestras, se recogiósangre de 40 voluntarios en tubosvacutainer Becton Dickinson SST® vacíoso heparinizados. Se cargaron volúmenesiguales de las muestras con variasconcentraciones de teofilina, para obtenervalores distintos a lo largo de la curva decalibración de la técnica, y se ensayaronposteriormente con el kit de Teofilina deIMMULITE 2000. Por regresión lineal:(Heparina) = 0,86 (Suero) + 1,8 µg/mlr = 0,970

(EDTA) = 0,90 (Suero) + 2,5 µg/mlr = 0,964

(SST) = 1,09 (Suero) + 0,5 µg/mlr = 0,990

Medias:28,8 µg/ml (Suero)26,5 µg/ml (Heparina)28,4 µg/ml (EDTA)31,8 µg/ml (SST)

Bilirrubina: La presencia de bilirrubinaconjugada y libre en concentracioneshasta 200 mg/l no tiene efecto en elensayo, en lo concerniente a la precisióndel ensayo.Hemólisis: La presencia de hemoglobina,en concentraciones hasta 512 mg/dl,notienen ningún efecto sobre los resultadosen términos de precisión.Lipemia: La presencia de triglicéridos, enconcentraciones hasta 3 000mg/dl, notienen ningún efecto sobre los resultadosen términos de precisión.

Asistencia técnicaPóngase en contacto con el distribuidornacional.Fabricado por EURO/DPC Ltd. bajo un Sistemade Calidad acorde con la ISO 13485:2003.

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IMMULITE 2000 ThéophyllineDomaine d'utilisation: Réservé à unusage diagnostic in vitro avec l'analyseurImmulite 2000 pour la mesure quantitativede la théophylline dans le sérum. Ce testconstitue une aide au suivi del'administration thérapeutique de cebronchodilatateur.Référence catalogue :L2KTN2 (200 tests), L2KTN6 (600 tests)Code : THE Code couleur : vert clair

IntroductionLa Théophylline est un dérivé de laméthylxanthine largement utilisée enclinique pour son action bronchodilatatricedans le traitement des maladiesrespiratoires tel que l'asthme. Commebronchodilatateur, la Théophylline exerceson action sur les muscles lisses desbronches. La Théophylline est uninhibiteur compétitif de laphosphodiestérase nucléotidique quicatalyse la conversion de l'adénosinemonophosphate (cAMP) en 5'-adénosinemonophosphate (5'-AMP).1 D'autresmécanismes d'action ont été évoquéspour expliquer le rôle bronchodilatateur dela Théophylline.2 Des méthylxanthinesayant une réactivité croisée mesurable,comme la théobromine, la caféine et la 8-chlorothéophilline, sont présentes dans lethé, le café, le chocolat et certainesboissons, enfin certaines médications ontun effet contraire comme ledimenhydrinate.L'importance de la mesure de laconcentration sérique de la Théophyllinevient du fait que la zone thérapeutique estrelativement étroite et que labiodisponibilité de la Théophylline estvariable d'un sujet à l'autre et parfois chezun même patient. Il existe une fenêtrepour les concentrations en dessous de


laquelle les taux de Théophylline sontinefficaces et au-dessus de laquellel'incidence d'effets toxiques secondairessurviennent tels que perturbations gastro-intestinales, tachycardie, arythmiecardiaque, convulsions et coma.3,4,5

Des patients avec les mêmes taux deThéophylline n'auront pas nécessairementles mêmes effets thérapeutiques outoxiques. Cette variabilité dans labiodisponibilité de la Théophylline résultede la grande variabilité des concentrationssériques de Théophylline chez despatients recevant pourtant la mêmeposologie.6,7 La Théophylline estmétabolisée en premier lieu au niveauhépatique où elle est transformée enacide 1-méthylurique, en acide 1,3-diméthylurique et en méthylxanthines.8Tout facteur affectant le métabolismehépatique comme le tabac, levieillissement, l'alcool, certainsmédicaments, l'alimentation, peuventconduire à des concentrations deThéophylline inefficaces ou toxiques chezdes patients pour lesquels la dose reçueserait parfaitement adéquate en dehors deces conditions.

Une autre source de variabilité vient de laforme thérapeutique employée et de lavoie d'administration utilisée.9 Cettevariabilité est principalement due à la trèsfaible solubilité de la Théophylline et à lagrande variété de formes retards qui sontutilisées. En intraveineux, la Théophyllineest administrée sous formed'aminophylline qui est un complexe dedeux molécules de Théophyllineassociées à une mole d'éthylènediaminefavorisant la solubilité.La zone thérapeutique est généralementcomprise entre 10 et 20 µg/ml,10 mais destaux de 5 à 10 µg/ml peuvent être encoreefficaces chez certains patients.11 Leseffets toxiques surviennent généralementpour les taux supérieurs à 20 µg/ml.

Les taux circulants de Théophyllineatteignent généralement un plateau ourestent stables lorsque l'administration dela dose quotidienne est fixe. Uneconcentration sérique de Théophylline nedoit pas être considérée comme le refletd'un état stable tant qu'une posologie fixeet continuelle n'a pas été administréependant au moins 3 à 5 fois la demi-vie dela Théophylline.15 En moyenne la demi-

vie, in vivo, de la Théophylline chez unadulte est de 4,5 heures, mais cela peutvarier de 3 à 9,5 heures. Cette demi-vieest plus courte chez les enfants et est enmoyenne de 3,6 heures, variant de 1.5 à9.5 heures.10 Certaines maladies etconditions peuvent altérer lapharmacocinétique de la Théophylline :l'insuffisance cardiaque, les infectionsvirales respiratoires, les maladieshépatiques, et les atteintes rénales.16 Parailleurs l'utilisation de certainsmédicaments peut également affecter lapharmacocinétique de la Théophylline : lacimétidine, les barbituriques,l'érythromycine, la Trileandromycine, laphénytoïne et l'allopurinol. Il estnécessaire de consulter la notice dufabricant de la forme de Théophillineemployée, pour plus d'informations, afinde s'enquérir des possibilitésd'intéractions médicamenteuses.

Principe du testIMMULITE 2000 Théophylline est unimmunodosage chimiluminescent parcompétition, enzymatique, en phasesolide.Cycles d'incubation : 1 × 30 minutes.

Recueil des échantillonsLe choix du moment du prélèvement estimportant. Pour obtenir des échantillonsqui reflètent précisément le niveau deconcentration pharmacologique enthéophylline chez un patient, des règlesprécises doivent être suivies en ce quiconcerne l'heure de prélèvement etl'interprétation des résultats. Lesprélèvements ne doivent pas être réalisésimmédiatement après la prise dumédicament ni pendant la phased'absorption et de distribution. Lesprélèvements doivent être effectuésquatre heures après la prise par voie oralesous forme solide pour permettre uneabsorption et une distribution complètes.12

En cas d'administration par voieintraveineuse ou par voie orale sous formeliquide, attendre une heure avant leprélèvement.13 Les nouveau-nésprématurés, pour qui l'administrationd'aminophylline est faite par voie rectale,peuvent être prélevés au bout de deuxheures.14 Les heures de prélèvement enfonction de l'heure d'administration de la


Théophylline doivent être respectées danschaque contexte clinique.

Il est recommandé de clarifier leséchantillons hyperlipémiques parultracentrifugation.Des échantillons hémolysés peuvent êtrerévélateurs d’une préparation inadéquatedu prélèvement avant son envoi aulaboratoire ; il faudra donc interpréter lesrésultats avec prudence.

La centrifugation des échantillonssériques avant la formation complète ducaillot peut entraîner la présence defibrine. Pour éviter les résultats erronésdûs à la présence de fibrine, s'assurer dela formation complète du caillot avant decentrifuger les échantillons. Certainséchantillons, en particulier ceux provenantde patients sous anti-coagulants, peuventnécessiter un temps plus long pour laformation du caillot.

Des tubes pour prélèvements sanguinsprovenant de fabricants différents peuventdonner des résultats différents, selon lesmatériaux et additifs utilisés, y comprisgels ou barrières physiques, activateursde la coagulation et/ou anticoagulants. Lecoffret Théophylline IMMULITE 2000 n'apas été testé sur tous les types de tubespossibles. Veuillez consulter le chapitreintitulé Autres Types d'Échantillons pourplus de renseignements sur les tubes quiont été évalués.Volume nécessaire : 50 µl de sérum.Conservation: 7 jours à +2–8°C ou2 mois à –20°C.

Tubes SST: Des études de fabricants ontmontré que les tubes vacutainers BectonDickinson SST peuvent causer uneélévation des valeurs pour les dosagesdes médicaments.

Dilution des échantillons élevés: Tousles échantillons suspectés d'avoir desconcentrations supérieures au domainede mesure du dosage doivent être diluésavant le dosage avec un échantillon depatient non traité.

Précautions d'emploiRéservé à un usage diagnostique in vitro.Réactifs : Conserver les réactifs à +2°/+8 °C. Éliminer les déchets conformémentaux lois en vigueur.

Respecter les précautions d'emploi etmanipuler tous les composants du coffretcomme des produits potentiellementinfectieux. Les réactifs dérivés de produitshumains et utilisés dans ce coffret ont subiun test sérologique pour la Syphilis et destests de dépistage pour les anticorps anti-VIH1 et 2, anti-VHC et pour l'antigène desurface de l'hépatite B, qui se sont tousavérés négatifs.De l'azide de sodium à des concentrationsinférieures à 0,1 g/dl a été ajouté commeconservateur ; lors de l'élimination,l'évacuer avec de grandes quantités d'eaupour éviter une accumulation d'azidesmétalliques explosifs dans lescanalisations.Substrat chimiluminescent : Éviter toutecontamination et l'exposition directe à lalumière solaire (voir la fiche technique).

Eau : utiliser de l'eau distillée oudésionisée.

Matériel fourniLes composants de la trousse ne peuventêtre utilisés que conjointement. Lesétiquettes à l'intérieur du coffret sontnécessaires au dosage.

Cartouche de billes Théophylline(L2TN12)Avec code-barre. 200 billes, revêtuesd'anticorps polyclonal de lapin anti-théophylline. Stable à +2/ +8 °C jusqu'à ladate de péremption.L2KTN2: 1 cartouche. L2KTN6: 3 cartouches.

Cartouche à réactif Théophylline(L2TNA2)Avec code-barre. 11,5 ml de théophyllineconjuguée à de la phosphatase alcaline(intestins de veaux) dans un tampon.Stable à +2/ +8 °C jusqu'à la date depéremption.L2KTN2: 1 cartouche. L2KTN6: 3 cartouches.

Avant l'emploi, retirer la partie supérieurede l'étiquette au niveau des perforationsen ayant soin de ne pas endommager lecode-barres. Retirer le film protecteursitué sur la partie supérieure de lacartouche-réactif ; insérer le couverclecoulissant entre les glissières sur ledessus de la cartouche-réactif.


Ajusteurs Théophylline (LTNL, LTNH)Deux flacons (bas et haut), 4 ml chacun,de théophylline dans du sérum humainprétraité, avec conservateur. Stable à +2–8°C pendant 30 jours après ouverture, ou6 mois (aliquoté) à –20°C.L2KTN2: 1 jeu. L2KTN6: 2 jeux.Avant de procéder à un ajustement, placerles étiquettes correspondantes à l'aliquot(fournies avec le coffret) sur des tubes enverre de sorte que les code-barres soientlisibles par le lecteur.

Composants du coffret fournisséparémentL2SUBM : Substrat chimiluminescentL2PWSM : Solution de lavageL2KPM : Coffret de décontamination del'aiguille de prélèvementLRXT : Godets réactionnels (jetables)SDCM: Contrôle multiparamétrique à deuxniveaux.

Egalement requisEau distillée ou désionisée ; tubes ;Contrôles.

Protocole de dosageNoter que pour des performancesoptimales, il est important de réalisertoutes les procédures de maintenance deroutine selon les instructions du Manueld'Utilisation IMMULITE 2000.

Se reporter au manuel d'utilisation del'IMMULITE 2000 pour : la préparation, ledémarrage du système, les ajustements,le dosage et les procédures de contrôlede qualité.Intervalle d'ajustement recommandé :2 semaines.Echantillons pour le Contrôle deQualité: Utiliser des pools de contrôles oude sérums avec au moins deux niveaux(bas et haut) de théophylline.

Concentrations ThérapeutiquesComme il est indiqué dans l'introduction,les concentrations thérapeutiques sontgénéralement comprises entre 10 et20 µg/ml,10 bien que des niveaux entre 5et 10 µg/ml puissent être efficaces chezcertaines personnes.11 Généralement, onconsidère une concentration toxiquecomme supérieure à 20 µg/ml.

LimitesUne compréhension complète du contenude cette fiche technique est nécessairepour une utilisation correcte de ceparamètre.Le tableau de spécificité doit être consultéafin de prendre connaissance dessubstances pouvant donner des réactionscroisées. D'autres médicaments et / oudes aliments non listés dans ce tableaupeuvent néanmoins donner des réactionscroisées avec ce test.Avant d'interpréter tout résultat lors d'undosage de Théophylline, il est nécessairede considérer les points suivants :

• La prise concomitante d'autresmédicaments

• L'heure du prélèvement en fonction dela posologie, du début et de la duréedu traitement.

• Les maladies en cours existantes etcertaines conditions de vie.

Les anticorps hétérophiles du sérumhumain peuvent réagir avec lesimmunoglobulines faisant partie descomposants du coffret et interférer avecles immunodosages in vitro. [Voir BoscatoLM, Stuart MC. Heterophilic antibodies: aproblem for all immunoassays. Clin Chem1988:34:27-33.] Les échantillonsprovenant de patients fréquemmentexposés aux animaux ou aux produitssériques d'origine animale peuventprésenter ce type d'interférence pouvantpotentiellement donner un résultatanormal. Ces réactifs ont été mis au pointafin de minimiser le risque d'interférence,cependant des intéractions potentiellesentre des sérums rares et les composantsdu test peuvent se produire. Dans un butdiagnostique, les résultats obtenus avecce dosage doivent toujours être utilisés enassociation avec un examen clinique,l'histoire médicale du patient et d'autresrésultats.

Performances du testConsulter les tableaux et graphiques pourobtenir les données représentatives desperformances de ce test. Les résultatssont donnés en µg/ml. (En l'absenced'indication contraire, tous les résultats ontété obtenus sur des échantillons sériquesrecueillis en tubes, sans gel ni activateurde la coagulation.)


Domaine de mesure : 1 – 60 µg/mlSensibilité analytique : 0,3 µg/mlPrécision : les échantillons sont dosés enduplicate sur une période qui s'étend sur 20jours, avec deux séries par jours, soit 40séries et 80 replicate au total. (Voir letableau « Precision ».)

Test de dilution : Des échantillons ontété dosés à différentes concentrations.(Voir le tableau « Linearity » pour desdonnées représentatives.)

Test de récupération : Des échantillonschargés dans un rapport de 1 à 19 avectrois solutions de théophylline (125, 250 et500 µg/ml) ont été dosés. (Voir le tableau« Recovery » pour des donnéesreprésentatives.)Spécificité : L'anticorps utilisé esthautement spécifique de la théophylline.(Voir le tableau « Specificity ».)

Comparaison de méthodes: Ce test aété comparé au dosage IMMULITEThéophylline de DPC sur 155 échantilonsde patients (intervalle de concentrations :environ de 1 à 60 µg/ml. Voir graphique.)Par régression linéaire :(IML 2000) = 0,98 (IML) + 0,73 µg/mlr = 0,992

Moyennes :27,0 µg/ml (IMMULITE 2000)26,7 µg/ml (IMMULITE)

Autres types d'échantillons: Pour définirles effets d' Autres types d'échantillons, dusang de 40 volontaires a été prélevé surtubes vacutainers secs, héparinés, EDTAet Becton Dickinson SST®. Des volumeségaux des ces divers échantillons ont étéchargés avec différentes concentrationsde théophyllines afin d'obtenir des valeurscomprises dans le domaine de mesure dudosage et ont ensuite été dosés avec laprocédure IMMULITE 2000 Théophylline.Par régression linéaire :(Héparine) = 0,86 (Sérum) + 1,8 µg/mlr = 0,970

(EDTA) = 0,90 (Sérum) + 2,5 µg/mlr = 0,964

(SST) = 1,09 (Sérum) + 0,5 µg/mlr = 0,990

Moyennes :28,8 µg/ml (Sérum)26,5 µg/ml (Héparine)28,4 µg/ml (EDTA)31,8 µg/ml (SST)

Bilirubine : La présence de bilirubine,conjuguée ou non, n'a aucun effet sur ledosage ni sur sa précision si laconcentration ne dépasse pas 200 mg/l.Hémolyse : La présence d'hémoglobinene présente aucun effet sur les résultats nisur la précision du dosage si laconcentration ne dépasse pas 512 mg/dl.Lipémie : La présence de tryglycérides neprésente aucun effet sur les résultats nisur la precision du dosage si laconcentration ne dépasse pas3 000 mg/dl.

Assistance techniqueContacter votre distributeur national. EnFrance distribué par DPC France 90 bdNational 92257 La Garenne-Colombes.Fabriqué par EURO/DPC Ltd. dans le cadred’un Système Qualité enregistré sousISO 13485:2003.

Italiano

IMMULITE 2000 TheophyllineUso: Ad uso diagnostico in vitro conl'Analizzatore IMMULITE 2000 – per lamisurazione quantitativa della teofillina nelsiero, quale ausilio nel monitoraggio dellasomministrazione terapeutica di questobroncodilatatore.Codice: L2KTN2 (200 test),L2KTN6 (600 test)Codice: THE Colore: verde chiaro

Riassunto e spiegazione delTestLa Teofillina è un derivato dellametilxantina largamente utilizzata a livelloclinico per la sua attività broncodilatatricenel trattamento delle affezioni respiratoriequali l'asma. Quale broncodilatatore, lateofillina esercita il proprio effetto suimuscoli lisci dei bronchi. La teofillina è uninibitore competitivo della fosfodiesterasinucleotidica ciclica degli enzimi, unenzima che catalizza la conversione delmonofosfato di adenosina ciclica (cAMP)in 5'-monofosfato di adenosina (5'-AMP). 1E' stato riscontrato che meccanismi diversidall'inibizione della fosfodiesterasimediano l'effetto broncodilatatore della


teofillina. 2 Altre metilxantine chepresentano crossreattività misurabili –quali la caffeina, la teobromina e la 8-cloroteofillina – si ritrovano nel caffè, neltè, nelle bevande analcoliche, nelcioccolato ed in alcune medicine che sipossono acquistare senza ricetta medicaquali il dimenidrinate.

L'importanza di misurare le concentrazionidi teofillina è legato all'indice terapeuticorelativamente ridotto per la teofillinacosiccome l'inter e l'intra variabilitàpaziente nella disposizione della teofillina.Esiste una finestra di concentrazioni al disotto della quale i livelli di teofillina sonosubterapeutici ed al di sopra dei quali vi èun'aumento nell'incidenza degli effetticollaterali tossici, quali disturbigastrointestinali, tachicardia, aritmiecardiache, convulsioni e coma.3,4,5

Pazienti con gli stessi livelli di teofillinanon necessariamente avranno gli stessieffetti terapeutici o tossici. La variabilitànella disposizione della teofillina provocaun ampia variazione nelle concentrazionidi siero in pazienti che ricevono la stessadose.6,7 La teofillina viene secretaprincipalmente attraverso il metabolismonel fegato come 1-acido metilurico, 1,3-acido dimetilurico e metilxantine.8 Fattoriche intaccano il metabolismo del fegato –quali fumo, eccessi legati all'età, terapiafarmacologica concomitante, alcolismo edieta – possono determinareconcentrazioni di teofillina subterapeuticheo tossiche in un paziente sottoposto ad undosaggio efficace se non fossero presentiqueste condizioni concomitanti.Un'altra sorgente di risultati variabili dauna formulazione di un dosaggio specificoche utilizza una route disomministrazione.9 Questa variazioneesiste in parte dovuta alle bassecaratteristiche di solubilità della teofillinacosiccome alla vasta gamma di dosaggi arilascio sostenuto che vengono utilizzati.La teofillina è somministrata perendovenosa come aminofillina, uncomplesso di due molecole di teofillinacon una mole di etielenediamina peraumentare la solubilità.I livelli terapeutici sono generalmente tra10 e 20 µg/mL10 benché i livelli tra 5 e10 µg/mL possano essere efficaci in alcuniindividui.11 Livelli tossici sono

generalmente considerati sI superiori a20 µg/mL.

I livelli di teofillina nel circolo raggiungonogeneralmente un plateau o uno statocostante in seguito a somministrazione diun dosaggio giornaliero fisso. Un livello diteofillina sierica non dovrebbe riflettere laconcentrazione costante se non nel casoin cui una dose fissa sia statasomministrata per almeno 3–5 emi-vitedella teofillina.15 Benché l'emi-vita mediain vivo per la teofillina negli adulti sia di 4,5ore, varia molto in questa popolazione(dalle 3 alle 9,5 ore) ed èsignificativamente più corta nei bambini(media 3,6 ore, range da 1,5 a 9,5 ore).10

Le malattie e condizioni cliniche di cui diseguito sono state implicatenell'alterazione della farmacocinetica dellateofillina: congestione cardiaca, infezionivirali respiratorie, malattie epatiche, erenali.16 L'utilizzo concomitante ol'interruzione nella somministrazione deiseguenti farmaci può interessare lafarmacocinetica della teofillina: cimetidina,barbiturici, eritromicina, troleandromicina,fenitoina e allopurinolo.16,17 Consultare lametodica della preparazione farmaceuticadella teofillina e i corrispondenti farmaciche potrebbero interferire per ulterioriinformazioni.

Principio del procedimentoIl dosaggio IMMULITE 2000 Teofillina è undosaggio immunometrico inchemiluminescenza marcato con enzimain fase solida.Cicli d'incubazione: 1 × 30 minuti.

Raccolta dei campioniL'ora del prelievo è importante. Perottenere campioni di teofillina cheriflettano accuratamente i livellifarmacologici nel paziente, debbonoessere seguite linee guida in relazione aitempi per il prelievo ed all'interpretazionedei risultati. Il prelievo non deve essereeffettuato subito dopo la somministrazionedella dose, durante l'assorbimento e ladistribuzione del farmaco. Se il farmacoassunto per via orale è sotto forma dipastiglie, i campioni devono essereprelevati 4 ore post-dose per consentireun assorbimento ed una distribuzionecompleti.12 Se il farmaco vienesomministrato per endovenosa o per via


orale in forma liquida, i campioni possonoessere prelevati 1 ora post-dose.13 Neineonati prematuri cui è statasomministrata aminofillina per via rettale, icampioni possono essere prelevati 2 orepost-dose.14 Occorre rispettarescrupolosamente questi tempi di prelievoa seconda della via di somministrazione edella tipologia di farmaco somministrata.Si consiglia l'utilizzo di un'ultracentrifugaper schiarire i campioni lipemici.I campioni emolizzati posson indicare iltrattamento non idoneo del campioneprima dell’arrivo al laboratorio; per questomotivo, i risultati devono essereinterpretati con prudenza.La centrifugazione dei campioni del sieroprima che la coagulazione sia completapuò produrre fibrina. Per evitare risultatierrati dovuti alla presenza di fibrina,assicurarsi che il processo dicoagulazione sia completo prima dicentrifugare i campioni. Alcuni campioni,in modo particolare quelli di pazientisottoposti a terapia con anticoagulanti,possono richiedere tempi di coagulazionepiù lunghi.

Provette per il prelievo di sangue diproduttori diversi possono dare valoridifferenti, a seconda dei materiali e degliadditivi usati, incluso gel o barriere fisiche,attivatori di coaguli e/o anticoagulanti.L'IMMULITE 2000 Teofillina non é statoverificato con tutte le possibili variazioni ditipi di provette. Consultare la sezioneriguardante Campioni Alternativi perdettagli sulle provette testate.Volume richiesto: 50 µL di siero.Conservazione: 7 giorni a 2–8°C o2 mesi a –20°C.

Provette SST: Studi effettuati dalproduttore hanno evidenziato che leprovette Becton Dickinson SST

vacutainer possono provocare aumenti neivalori nei dosaggi della sostanzaDiluizione dei Campioni Elevati: Tutti icampioni con livelli attesi al di sopra delrange di calibrazione del dosaggio devonoessere diluiti prima di essere dosati con uncampione del paziente non trattato.

Avvertenze e precauzioniPer uso diagnostico in vitro.

Reagenti: Conservare a 2–8°C. Eliminaresecondo le normative di legge vigenti.

Seguire le precauzioni universali, emaneggiare tutti i componenti come sefossero capaci di trasmettere agentiinfettivi. Sono stati analizzati i materiali disorgente dal sangue umano e sono statitrovati non reattivi per sifilide; per anticorpiad HIV 1 e 2; per l'antigeno superficialedell'epatite B; e per anticorpi all'epatite C.E' stata aggiunta Sodio Azide aconcentrazioni inferiori a 0,1 g/dL comeconservante. Al momentodell'eliminazione, irrorare con molta acquaper evitare la formazione di azidimetalliche potenzialmente esplosive nelletubature di piombo e di rame.

Sottostrato chemiluminescente: Evitarela contaminazione e l'esposizione alla lucedel sole diretta. (Vedere l'inserimento).Acqua: Utilizzare solo acqua distillata odeionizzata.

Materiali fornitiI componenti costituiscono un unico set.Le etichette all'interno della confezionesono necessarie per eseguire i dosaggi.

Contenitore di Sferette Teofillina(L2TN12)Con codice a barre. 200 biglie coattatecon un anticorpo policlonale di coniglioanti-teofillina. Stabile a 2–8°C fino alladata di scadenzaL2KTN2: 1 confezione. L2KTN6: 3 confezioni.

Porta Reagente Teofillina (L2TNA2)Con codice a barre. 11,5 mL di fosfatasialcalina (intestino di vitello) coniugata conteofillina, in un tampone. Stabile a 2–8°Cfino alla data di scadenza.L2KTN2: 1 porta reagente. L2KTN6: 3 porta reagenti.Prima dell'utilizzo rimuovere la partesuperiore dell'etichetta lungo laperforazione senza danneggiare il codicea barre. Togliere il foglio protettivo dallaparte superiore del flacone. Far scattarenella corretta posizione il coperchioscorrevole lungo le guide del coperchiodel reagente.


Aggiustatori Teofillina (LTNL, LTNH)Due flaconi (Basso ed Alto), 4 mLciascuno, di teofillina in siero umanoprocessato, con conservanti. Stabile a 2–8°C per 30 giorni dopo l'apertura, o per 6mesi (aliquotato) a –20°C.L2KTN2: 1 set. L2KTN6: 2 set.Prima di ricalibrare collocare le etichettegiuste (fornite col kit) sulle provette dellealiquote cosicché i codici a barre possanoessere registrati dal lettore.

I componenti dei kit sonoforniti separatamenteL2SUBM: Substrato ChemiluminescenteL2PWSM: Tampone di lavaggio dell'AgoL2KPM: Kit di Pulizia dell'AgoLRXT: Tubi di Reazione (monouso)SDCM: Bi-level, multi-constituent control

Materiali richiestiAcqua distillata o deionizzata; Provette;controlli.

Procedura del DosaggioAttenzione: per avere prestazioni ottimali,è importante effettuare le procedure dimanutenzione di routine cosiccomedefinito nel Manuale dell'Operatoredell'IMMULITE 2000.

Vedere il manuale dell'operatoreIMMULITE 2000 per: la preparazione, lamessa a punto, la regolazione, la prova edi procedimenti per il controllo della qualità.

Intervallo di Calibrazione Consigliato:2 settimane.Campioni per il Controllo di Qualità:Utilizzare controlli o pool di sieri conalmeno due livelli (basso ed alto) diteofillina.

Range TerapeuticoCome indicato nella sezione Riassunto eSpiegazione, i livelli terapeutici sonogeneralmente tra 10 e 20 µg/mL,10 benchélivelli tra 5 e 10 µg/mL possano essereancora efficaci in alcuni soggetti.11 Livellitossici sono generalmente considerati al disopra di 20 µg/mL.

LimitazioniPer un utilizzo idoneo del prodotto ènecessaria una piena comprensione diquesta metodica.

La tabella della specificità deve essereconsultata per la lista di sostanze chepresentano una crossreattività misurabilenel dosaggio. Sostanze e/o cibi che non siritrovano nella lista possono tuttaviacrossreagire nel dosaggio.Quanto segue deve essere tenuto inconsiderazione nell'interpretazione dellaconcentrazione di teofillina:

• Tutte le medicine assunte inconcomitanza dal paziente

• Il momento del prelievo in relazionealle assunzioni del farmaco nel tempo.

• Patologie esistenti.Gli anticorpi eterofili presenti nel sieroumano possono reagire con leimmunoglobuline presenti nellecomponenti del dosaggio provocandoun'interferenza con i dosaggi in vitro. [VediBoscato LM, Stuart MC. Heterophilicantibodies: a problem for allimmunoassays. Clin Chem 1988:34:27-33.] Campioni di pazienti routinariamenteesposti agli animali o a prodotti derivati dasiero di animali possono presentarequesto tipo di interferenza causapotenziale di risultati anomali. Questireagenti sono stati formulati perminimizzare il rischio di interferenze,tuttavia, possono verificarsi interazionipotenziali tra sieri rari e componenti deltest. A scopo diagnostico, i risultati ottenutida questo dosaggio devono sempreessere utilizzati unitamente all'esameclinico, all'anamnesi del paziente e adaltre indagini di laboratorio.

Dati sulle prestazioniVedere le tabelle e le grafiche per i datirappresentativi delle prestazioni dellaprova. I risultati sono espressi in µg/mL.(Se non è notato altrimenti, tutti i risultatisono stati generati nei campioni di sieroraccolti in tubi senza barriere di gelatina oadditivi che promuovono la coagulazione.)Gamma di calibrazione: 1 – 60 µg/mLSensibilità analitica: 0,3 µg/mL

Precisione: I campioni sono stati elaboratiin doppio da 20 giorni, due esecuzioni algiorno, per un totale di 40 esecuzioni e 80ripetizioni. (Vedere la tabella "Precision".)

Linearità: I campioni sono stati provatisotto varie diluzioni. (Vedere la tabella“Linearity” per i dati rappresentativi.)


Recupero: Sono stati dosati campioni1:19 cui sono state aggiunte tre soluzionidi Teofillina (125, 250 e 500 µg/mL). (Veditabella “Recovery” per datirappresentativi).

Specificità: L'anticorpo è molto specificoper Teofillina. (Vedere la tabella"Specificity".)Comparazione di Metodi: Il dosaggio èstato comparato al dosaggio DPCIMMULITE Teofillina su 155 campioni dipazienti (Range di concentrazione: circada 1 a 60 µg/mL. Vedi grafico.) Medianteregressione lineare:(IML 2000) = 0,98 (IML) + 0,73 µg/mLr = 0,992

Valore medio:27,0 µg/mL (IMMULITE 2000)26,7 µg/mL (IMMULITE)

Tipi di Campione Alternativi: Perverificare l'effetto di Tipi di CampioneAlternativi, è stato prelevato del sangueda 40 volontari in provette semplici,eparinizzata vacutainer EDTA e andBecton Dickinson SST® Eguali volumi deicampioni mescolati sono stati diluiti convarie concentrazioni di teofillina, perottenere valori lungo il range dicalibrazione del dosaggio e quindi ridosaticon il dosaggio IMMULITE 2000 Teofillina.Mediante regressione lineare:(Eparina) = 0,86 (Siero) + 1,8 µg/mLr = 0,970

(EDTA) = 0,90 (Siero) + 2,5 µg/mLr = 0,964

(SST) = 1,09 (Siero) + 0,5 µg/mLr = 0,990

Valore medio:28,8 µg/mL (Siero)26,5 µg/mL (Eparina)28,4 µg/mL (EDTA)31,8 µg/mL (SST)

Bilirubina: La presenza di bilirubinaconiugata e non coniugata inconcentrazioni fino a 200 mg/L non hanessun effetto entro il range di precisionedel dosaggio.Emolisi: La presenza di emoglobina inconcentrazioni fino a 512 mg/dL non hanessun effetto sui risultati entro il range diprecisione del dosaggio.Lipemia: La presenza di trigliceridi inconcentrazioni fino a 3 000 mg/dL non hanessun effetto sui risultati, entro il range diprecisione del dosaggio.

Assistenza tecnicaContattare il distributore nazionale.Prodotto dalla EURO/DPC Ltd. nell’ambito di unSistema di Qualità Certificato ISO 13485:2003.

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IMMULITE 2000 TheophyllineUtilização: Para o doseamentoquantitativo da teofilina em soro, nodiagnóstico in vitro, em conjunto com oanalisador IMMULITE 2000, como auxíliona monitorização da administraçãoterapêutica deste broncodilatador.Números de catálogo:L2KTN2 (200 testes),L2KTN6 (600 testes)Test Code: THE Cor: Verde claro

Sumário e explicação do testeA Teofilina é um derivado de metilxantinaque é amplamente usado clinicamentepela sua acção broncodilatadora notratamento de condições respiratóriascomo asma. Como broncodilatador, ateofilina parece exercer o seu efeito nomúsculo liso dos brônquios. A teofilina éum inibidor competitivo da enzima cíclicanucleotídica fosfodiesterase, uma enzimaque cataliza a conversão de monofosfatode adenosina cíclica (cAMP) em 5'-monofosfato de adenosina (5'-AMP).1Outros mecanismos além da inibição defosfodiesterase têm sido sugeridos paramediar o efeito broncodilatador dateofilina.2 Outras metilxantinas quepossuem uma reactividade cruzadamensurável — tais como cafeína,teobromina, e 8-cloroteofilina — estãopresentes em café, chá, refrigerantes,chocolate, e certos medicamentos devenda livre como dimenidrinato.

A importância do doseamento dasconcentrações de teofilina estárelacionada com o índice terapêuticorelativamente limitado para teofilina assimcomo a variabilidade entre cada doente ede doente para doente na resposta àTeofilina. Existe uma “ janela” deconcentrações, abaixo da qual os níveisde teofilina são sub terapêuticos, e acimada qual existe uma incidência crescente


de efeitos colaterais tóxicos, tal comodistúrbios gastrointestinais, taquicardia,arritmias cardíacas, convulsões ecoma.3,4,5

Doentes com os mesmos níveis deteofilina não experimentarãonecessariamente os mesmos efeitosterapêuticos ou tóxicos. A variabilidade nadisposição de teofilina resulta em amplasvariações de concentrações de soro emdoentes a receber a mesma dose.6,7 Ateofilina é excretada primariamenteatravés do metabolismo no fígado como1-ácido metilúrico, 1,3-ácido dimetilúrico,e metilxantinas.8 Factores que afectam ometabolismo do fígado — como tabaco,idades extremas, terapia de drogasconcomitantes, alcoolismo, e dieta —pode levar a concentrações subterapêuticas ou tóxicas de teofilina numdoente a receber uma dosagem que seriaefectiva na ausência destas condições.

Outra fonte de variações resulta daformulação específica da dosagemempregue e a via de administração.9 Estavariação existe em parte devido à baixasolubilidade da teofilina e à amplavariação de formulações de dosagem delibertação gradativa que são usadas.Intravenosamente, a teofilina éadministrada como aminofilina, que é umcomplexo de duas móleculas de teofilinacom uma mole de etilenodiamina paraaumentar a solubilidade.Os níveis terapêuticos são geralmenteestabelecidos entre 10 e 20 µg/mL,10

embora níveis entre 5 e 10 µg/mL aindapossam ser efectivos em certosindivíduos.11 Níveis tóxicos sãogeralmente estabelecidos acima de20 µg/mL.Os níveis circulantes de teofilinageralmente alcançam um plateau ou nívelestável com a administração de uma dosediária fixa. Um nível de teofilina em soronão deve ser considerado como reflexoda concentração do estado estável a nãoser que uma dosagem fixa contínua tenhasido administrada por pelo menos de 3 a5 semi-vidas para teofilina.15 Embora amédia in vivo da semi-vida para teofilinaem adultos seja de 4,5 horas, variaenormemente nesta população (3 a 9,5horas) e é significativamente mais curtaem crianças (média de 3,6 horas,variando de 1,5 a 9,5 horas).10 As

seguintes condições e doenças foramimplicadas na alteração dafarmacocinética da teofilina: insuficiênciacardíaca congestiva, infecção viralrespiratória, doença do fígado, einsuficiência renal.16 O uso concomitanteou paragem das seguintes drogas podetambém afectar as farmacocinéticas dateofilina: cimetidina, barbitúricos,eirtromicina, troleandromicina, fenitoína ealpurinol.16,17 Consulte a informaçãocontida na embalagem do fabricante paraos produtos com teofilina e o produto dedroga potencialmente interferente parainformações adicionais.

Princípio do ProcedimentoIMMULITE 2000 Theophylline é umimunoensaio enzimático competitivo defase sólida por quimioluminescência.Ciclos de incubação: 1 × 30 minutos.

ColheitaA hora da colheita é importante. A fim deobter amostras de teofilina que reflictamcom precisão os níveis farmacológicos nodoente, devem ser seguidas directrizes noque diz respeito às horas de colheita einterpretação dos resultados. As amostrasnão devem ser colhidas imediatamenteapós a dosagem, durante a absorção edistribuição da droga. No caso deformulação oral, as amostras devem sercolhidas 4 horas após a dose para permitira completa absorção e distribuição.12 Nocaso de administração intravenosa ouadministração oral com uma formulaçãolíquida, as amostras podem ser colhidas 1hora após a dosagem.13 Em recém-nascidos prematuros que receberamadministração rectal de aminofilina,amostras podem ser colhidas 2 horasapós a dosagem.14 Devem ser feitascolheitas de amostras seriadascompatíveis com a dosagem apropriadapara cada situação clínica.Recomenda-se o uso de uma ultracentrífuga para clarear amostraslipémicas.Amostras hemolisadas podem indicartratamento incorrecto de uma amostraantes do envio para o laboratório; portantoos resultados devem ser interpretadoscom cuidado.


A centrifugação de amostras de soroantes da formação completa do coágulopode resultar na presença de fibrina. Paraprevenir resultados errados devido àpresença de fibrina, certifique-se que aformação do coágulo foi completa antesda centrifugação das amostras. Algumasamostras, em especial as de doentes querecebem terapia anticoagulante podemrequerer um maior tempo de formação docoágulo.

Os tubos para colheita sanguínea dediferentes fabricantes, podem originardiferentes valores, dependendo dosmateriais e aditivos, incluíndo gel oubarreiras fisicas, activadores do coáguloe/ou anti coagulantes. IMMULITE 2000Teofilina não foram ainda testados comtodas as possiveis variações originadaspelos tipos de tubos. Consultar a secçãoTipos de Amostras Alternativas para obterdetalhes sobre os tubos que foramtestados.Volume de Amostra: 50 µL soro.Estabilidade: 7 dias a 2–8°C, ou2 meses a –20°C.Tubos SST: Estudos do fabricante temmostrado que os tubos de vacuo BectonDickinson SST podem causar subida nosvalores dos ensaios para drogasterapêuticas.

Diluição de Amostras Elevadas: Todasas amostras para que se esperam valoresacima da gama de calibração do ensaiodevem ser diluidas antes do ensaio comuma amostra de doente não tratada.

PrecauçõesPara uso de diagnóstico in vitro.Reagentes: Manter a 2–8°C. Eliminar deacordo com as leis aplicáveis.Manipule com as devidas precauçõestodos os materiais capazes de transmitirdoenças infecciosas. As matérias primas,obtidas de soro humano, foram testadas,revelando resultados negativos para asífilis, para os anticorpos do vírus daimunodeficiência humana (HIV) 1 e 2; parao antigénio de superfície da hepatite B(HBsAg) e para os anticorpos do vírus dahepatite C.Azida de sódio foi adicionada comoconservante; para evitar acumulações deazidas metálicas explosivas em

canalizações de cobre e alumínio, osreagentes devem ser rejeitados no esgotoapenas se estiverem diluídos e foremlavados com grandes volumes de água.Substrato quimioluminescente: Evitecontaminação e exposição à luz directa(ver bula do substrato).Água: Utilize água destilada oudesionizada.

Materiais FornecidosOs componentes formam um conjunto unoe indivisível. Os códigos de barras nointerior das caixas são necessárias para oensaio.

Embalagem de pérolas de Teofilina(L2TN12)Com código de barras. 200 pérolas,revestidas com anticorpo policlonal decoelho anti-teofilina. Estável até a data devalidade a 2–8°C.L2KTN2: 1 embalagem.L2KTN6: 3 embalagens.

Embalagem de Reagente de Teofilina(L2TNA2)Com código de barras. 11,5 mL defosfatase alcalina (intestino de bezerro)conjugada com teofilina em tampão.Estável até a data de validade a 2–8°C.L2KTN2: 1 embalagem. L2KTN6: 3 embalagens.

Antes de utilizar, retire a etiqueta deprotecção da tampa deslizante; levante atampa, remova o remanescente daetiqueta com o cuidado de não danificar ocódigo de barras. Remova o selo dealumínio do topo da embalagem, encaixea tampa deslizante nas ranhuras everifique se a tampa desliza.

Ajustes Teofilina (LTNL, LTNH)Contém dois frascos (nível alto e baixo)cada com 4 mL de teofilina em sorohumano processado, com conservante.Estável, após a abertura, durante 30 diasa 2–8°C, ou por 6 meses (aliquotado) a–20°C.L2KTN2: 1 conjunto. L2KTN6: 2 conjuntos.Antes de realizar qualquer ajuste, coloqueas etiquetas da alíquota apropriadas(fornecidas com o "kit") nos tubos deamostra de forma a que os códigos de


barras possam ser lidos pelo dispositivode leitura do aparelho.

Componentes do kit fornecidosseparadamenteL2SUBM: Substrato quiomioluminescenteL2PWSM: Solução de lavagemL2KPM: Kit de limpeza do pipetadorLRXT: Tubos de reacção (descartáveis)SDCM: Controlo multi-paramétrico comdois niveis.

Também necessárioÁgua destilada ou desionizada; tubos deamostra; controlos.

Procedimento de doseamentoTêr em atenção que para obter umdesempenho óptimo, é importanteefectuar todos os procedimentos demanutenção de rotina conforme definidono Manual de Operador doIMMULITE 2000.

Consulte o Manual do Operador deIMMULITE 2000 para para instruçõessobre preparação, ajuste, doseamento eprocedimentos de controlo de qualidade.

Intervalo entre ajustes aconselhável:2 semanas.Quality Control Samples: Use controlosou misturas de amostras com pelo menosdois niveis de teofilina (baixo e alto).

Valor TerapêuticoComo indicado na secção de Sumário eExplicação do Teste, os níveis terapêuticossão geralmente estabelecidos entre 10 e20 µg/mL,10 embora níveis entre 5 e10 µg/mL ainda possam ser efectivos emcertos indivíduos.11 Níveis tóxicos sãogeralmente estabelecidos acima de20 µg/mL.

LimitaçõesA total compreensão da informaçãocontida nesta bula é necessária para ouso adequado deste produto.A tabela de especificidade deve serconsultada para a lista de substânciasque apresentam reactividade cruzadamensurável neste doseamento. Outrosmedicamentos e/ou alimentos nãoencontrados nesta lista podem mesmo

assim apresentar reactividade cruzada nodoseamento.

Para a interpretação das concentraçõesde teofilina deve ter-se em consideração oseguinte:

• Todas as medicações tomadas pelodoente.

• Tempo de colheita em relacção àhistória de dosagem.

• Doenças existentes.Os anticorpos heterófilicos no sorohumano podem reagir com asimunoglobulinas presentes no ensaio,causando interferência com osimunoensaios in vitro. [Ver Boscato LM,Stuart MC. Heterophilic antibodies: aproblem for all immunoassays. Clin Chem1988:34:27-33.] Amostras de doentesexpostas em rotina a produtos ou sorosde animais podem demonstrar este tipode interferência, potencial causador deresultados anómalos. Estes reagentesforam formulados para minimizar o riscode interferência, contudo podem ocorrerpotenciais interacções entre soros (raros)e componentes do teste. Para fins dediagnóstico, os resultados obtidos nesteensaio devem ser sempre analisados emcombinação com o exame clínico, históriade medicação do doente e outrosachados que possam correlacionar.

Características do EnsaioConsulte Tabelas e Gráficos para dadosrepresentativos do desempenho dodoseamento. Os resultados sãoapresentados em µg/mL. (Salvoreferência em contrário, todos os dadosprovêm de amostras de soro colhidas emtubos sem anticoagulantes, barreiras degel ou aditivos promotores dacoagulação.)Calibração: 1 – 60 µg/mLSensibilidade Analítica: 0,3 µg/mL

Precisão: Amostras foram processadasem duplicado num período de 20 dias, doisensaios por dia, perfazendo um total de 40ensaios e 80 réplicas. (Consulte a tabela"Precision".)Linearidade: As amostras foramdoseadas sob várias diluições. (Consultea tabela "Linearity" para dadosrepresentativos.)


Recuperação: As amostras foramadicionadas na relação de 1 para 19 comtrês soluções (125, 250 e 500 µg/mL)antes do doseamento. (Ver tabela de"Recovery" para dados representativos.)

Especificidade: O doseamento éespecífico para teofilina. (Ver tabela de"Specificity".)Comparação de Métodos: Odoseamento foi comparado aoIMMULITE Theophylline da DPC em 155amostras de doentes. (Zona de trabalho:aproximadamente 1 a 60 µg/mL. Consulteo gráfico.) Regressão linear:(IML 2000) = 0,98 (IML) + 0,73 µg/mLr = 0,992

Médias:27,0 µg/mL (IMMULITE 2000)26,7 µg/mL (IMMULITE)

Tipo de amostra alternativa: Paradeterminar se outro tipo de amostras alemde soro podem ser usadas, foram colhidasamostras de sangue de 40 voluntários emtubos secos, com EDTA, heparinizados ede vácuo Becton Dickinson SST®. Asamostras foram adicionadas com váriasconcentrações de teofilina para seobterem resultados ao longo da gama decalibração do ensaio. Todas as amostrasforam analizadas com o IMMULITE 2000Theophylline. Regressão linear:(Heparina) = 0,86 (Soro) + 1,8 µg/mLr = 0,970

(EDTA) = 0,90 (Soro) + 2,5 µg/mLr = 0,964

(SST) = 1,09 (Soro) + 0,5 µg/mLr = 0,990

Médias:28,8 µg/mL (Soro)26,5 µg/mL (Heparina)28,4 µg/mL (EDTA)31,8 µg/mL (SST)

Bilirrubina: A presença de bilirubinaconjugada e não conjugada emconcentrações até 200 mg/L não temefeito no procedimento dentro da precisãodo ensaio.Hemólise: A presença de hemoglobinaem concentrações até 512 mg/dL não temefeito em resultados, dentro da precisãodo ensaio.Lipémia: A presença de trigliceridos emconcentrações até 3 000 mg/dL nãoafecta o resultado, dentro da precisão doensaio.

Assistência TécnicaPor favor contacte o seu DistribuidorNacional.Fabricado pela EURO/DPC Ltd. de acordo como Sistema de Qualidade registado segundo anorma ISO 13485:2003.

Glyn RhonwyLlanberis, Gwynedd LL55 4ELUnited Kingdom

Diagnostic Products CorporationCorporate Offices5210 Pacific Concourse DriveLos Angeles, CA 90045-6900USA2005-06-29PIL2KTN – 6

theophylline - diagnostic products corporationtheophylline is a methylxanthine derivative which is...

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