test de hormona peptido c.pdf

C-Peptide

For use on IMMULITE® 2000 systems

IMMULITE® 2000 C-Peptide

2 IMMULITE 2000 C-Peptide (PIEL2KPEP-3 {7}, 2008-07-29)

English

Intended Use: For in vitro diagnostic use with the IMMULITE 2000 Systems Analyzers — for the quantitative measurement of C-peptide in serum, heparinized plasma, or urine, as an aid in the diagnosis and treatment of patients with abnormal insulin secretion. Catalog Number: L2KPEP2 (200 tests), L2KPEP6 (600 tests) Test Code: PEP Color: Dark Blue

Summary and Explanation Human C-peptide is a 31 amino acid chain with a molecular mass of approximately 3,020 daltons. Metabolically inert, it originates in the pancreatic β-cells as a by-product of the enzymatic cleavage of proinsulin to insulin.1,2,5 In this process, insulin and C-peptide are split from the prohormone and secreted into the portal circulation in equimolar concentrations.4,5,7 It is this fact which underlies the clinical interest in plasma determinations of C-peptide. Within limits, C-peptide levels can serve as a valuable index to insulin secretion. Thus, low C-peptide levels are to be expected where insulin secretion is diminished, as in insulin-dependent diabetes, or suppressed, as a normal response to exogenous insulin; whereas elevated C-peptide levels may result from the increased β-cell activity observed in insulinomas. 3,4,6,9 Accordingly, in the differential diagnosis of hypoglycemia, C-peptide determinations can be used to supplement insulin measurements as an index to pancreatic activity in the classic 72-hour fasting test, and as the sole indicator of pancreatic activity where insulin itself is administered to check for suppressibility.1,8 In addition, covert self-administration of insulin can be virtually ruled out as the cause of hyperinsulinemia by the finding of an elevated C-peptide level.2,3,8,9 Circulating anti-insulin antibodies are commonly encountered in patients who have undergone insulin therapy. These would typically interfere with immunoassays

for insulin, making it impossible to use insulin measurements in this context to check on residual β-cell activity, even if treatment were temporarily suspended. C-peptide measurements have therefore been used as an alternative in this context, to yield information on the natural history of insulin-dependent diabetes, to indirectly monitor insulin secretion in the presence of anti-insulin antibodies, and to help settle on an appropriate course of treatment.3,6,7,10 C-peptide has also been measured as an additional means for evaluating glucose tolerance and glibenclamide-glucose tests.2,3,10

Principle of the Procedure IMMULITE 2000 C-Peptide is a solid-phase, two-site chemiluminescent immunometric assay. The solid phase (bead) is coated with monoclonal murine anti-C-peptide antibody. The liquid phase consists of alkaline phosphatase (bovine calf intestine) conjugated to monoclonal murine anti-C-peptide antibody in buffer. The patient sample and the reagent are incubated together with the coated bead for 30 minutes. During this time, C-peptide in the sample forms the antibody sandwich complex with monoclonal murine anti-C-peptide antibody on the bead and enzyme-conjugated monoclonal murine anti-C-peptide antibody in the reagent. Unbound patient sample and enzyme conjugate are then removed by centrifugal washes. Finally, chemiluminescent substrate is added to the reaction tube containing the bead and the signal is generated in proportion to the bound enzyme. Incubation Cycles: 1 × 30 minutes Time to first result: 35 minutes.

Specimen Collection

Serum and Heparinized Plasma: The patient should be fasting. Collect blood by venipuncture,12 avoiding hemolysis, into plain tubes (without anticoagulant) or heparinized tubes, noting the time of collection, and separate the serum or plasma from the cells.

IMMULITE 2000 C-Peptide (PIEL2KPEP-3 {7}, 2008-07-29) 3

The use of an ultracentrifuge is recommended to clear lipemic samples. Hemolyzed samples may indicate mistreatment of a specimen before receipt by the laboratory; hence the results should be interpreted with caution. EDTA plasma and sodium fluoride plasma are unsuitable for use. Centrifuging serum samples before a complete clot forms may result in the presence of fibrin. To prevent erroneous results due to the presence of fibrin, ensure that complete clot formation has taken place prior to centrifugation of samples. Some samples, particularly those from patients receiving anticoagulant therapy, may require increased clotting time. Blood collection tubes from different manufacturers may yield differing values, depending on materials and additives, including gel or physical barriers, clot activators and/or anticoagulants. IMMULITE 2000 C-Peptide has not been tested with all possible variations of tube types. Consult the section on Alternate Sample Types for details on tubes that have been tested. Storage: Assay within 2–3 hours, or store frozen at –20°C for 1 week.11

Urine – Collection and Storage: Collect a 24-hour urine, without preservative, keeping the specimen refrigerated at 2–8°C during collection. Record the total volume of the collection and retain a well-mixed aliquot for analysis. Before assay, clear the sample by centrifugation or filtration. Storage: For longer storage, aliquot and freeze: stable at –20°C for 30 days. Dilution Factor: At least 5. Using a dilution factor of 20 will bring normal urine samples within the assay’s reportable range. (For urine samples, select 5 or 20 in the Dilution Factor window.)

Volume Required: 25 µL serum, plasma, or urine sample.

Warnings and Precautions For in vitro diagnostic use. Reagents: Store at 2–8°C. Dispose of in accordance with applicable laws.

Follow universal precautions, and handle all components as if capable of transmitting infectious agents. Source materials derived from human blood were tested and found nonreactive for syphilis; for antibodies to HIV 1 and 2; for hepatitis B surface antigen; and for antibodies to hepatitis C. Sodium azide, at concentrations less than 0.1 g/dL, has been added as a preservative. On disposal, flush with large volumes of water to prevent the buildup of potentially explosive metal azides in lead and copper plumbing. Chemiluminescent Substrate: Avoid contamination and exposure to direct sunlight. (See insert.) Water: Use distilled or deionized water.

Materials Supplied Components are a matched set. Labels on the inside box are needed for the assay.

C-Peptide Bead Pack (L2PEP12) With barcode. 200 beads, coated with monoclonal murine anti-C-peptide. Stable at 2–8°C until expiration date. L2KPEP2: 1 pack. L2KPEP6: 3 packs.

C-Peptide Reagent Wedge (L2PEPA2) With barcode. 11.5 mL alkaline phosphatase (bovine calf intestine) conjugated to monoclonal murine anti-C-peptide in buffer. Stable at 2–8°C until expiration date. L2KPEP2: 1 wedge. L2KPEP6: 3 wedges Before use, tear off the top of the label at the perforations, without damaging the barcode. Remove the foil seal from the top of wedge; snap the sliding cover down into the ramps on the reagent lid.

C-Peptide Adjustors (LPEPL, LPEPH) Two vials (Low and High) of lyophilized C-peptide in buffered human albumin, with preservative. Reconstitute each vial with 4.0 mL distilled or deionized water. Let stand for 30 minutes. Mix by gentle swirling or inversion until the lyophilized material is fully dissolved. After reconstitution, aliquot and freeze. Stable at –20°C for 6 months. Discard aliquots after use. L2KPEP2: 1 set. L2KPEP6: 2 sets.


Before making an adjustment, place the appropriate Aliquot Labels (supplied with the kit) on test tubes so that the barcodes can be read by the on-board reader.

Kit Components Supplied Separately

C-Peptide Sample Diluent (L2PEZ) For the on-board dilution of urine samples and high serum/plasma samples. 25 mL of concentrated (ready-to-use), processed, C-peptide-free buffered human albumin, with preservative. Stable at 2–8°C for 30 days after opening, or for 6 months (aliquotted) at –20°C. Barcode labels are provided for use with the diluent. Before use, place an appropriate label on a 16 × 100 mm test tube, so that the barcode can be read by the on-board reader. L2PEZ: 3 labels. L2SUBM: Chemiluminescent Substrate L2PWSM: Probe Wash L2KPM: Probe Cleaning Kit LRXT: Reaction Tubes (disposable) L2ZT: 250 Sample Diluent Test Tubes (16 × 100 mm) L2ZC: 250 Sample Diluent Tube Caps PECM: Tri-level C-Peptide Control Module Also Required Distilled or deionized water; test tubes; controls.

Assay Procedure Note that for optimal performance, it is important to perform all routine maintenance procedures as defined in the IMMULITE 2000 Systems Operator's Manual. See the IMMULITE 2000 Systems Operator's Manual for: preparation, setup, dilutions, adjustment, assay and quality control procedures. Recommended Adjustment Interval: 2 weeks. Quality Control Samples: Use controls or serum pools with at least two levels (low and high) of C-peptide.

Expected Values

Serum and Heparinized Plasma: Serum samples were collected from 136 fasting laboratory volunteers and analyzed by the IMMULITE 2000 C-Peptide procedure yielding a median of 2.2 ng/mL (0.7 nmol/L; 728 pmol/L) and a nonparametric central 95% reference range of 0.9 – 7.1 ng/mL (0.3 – 2.4 nmol/L; 298 – 2,350 pmol/L)

Urine: 24-hour urine samples were collected from 82 apparently healthy volunteers and analyzed by the IMMULITE 2000 C-Peptide procedure yielding a mean ± SD of 77 ± 59 µg/day, with a range of 3.6 to 253 µg/day, representing the central 95% of the observations. Consider these limits as guidelines only. Each laboratory should establish its own reference ranges.

Limitations Because metabolism of C-peptide differs from that of insulin, C-peptide levels are at best a semi-quantitative index of insulin secretion. The half-life of C-peptide in plasma has been estimated as approximately 30 minutes, compared to approximately 5 minutes for insulin. Because of the difference in half-life, C-peptide circulates in plasma at a level roughly five times that of insulin, even though the two molecules are secreted in an equimolar ratio. Again, the liver plays a major role in clearing insulin, whereas C-peptide is removed by degradation and elimination mainly through the kidneys. Hepatic and renal complications will therefore affect the circulating C-peptide/insulin ratio. Heterophilic antibodies in human serum/plasma can react with the immunoglobulins included in the assay components causing interference with in vitro immunoassays. [See Boscato LM, Stuart MC. Heterophilic antibodies: a problem for all immunoassays. Clin Chem 1988:34:27-33.] Samples from patients routinely exposed to animals or animal serum products can demonstrate this type of interference potentially causing an anomalous result. These reagents have


been formulated to minimize the risk of interference; however, potential interactions between rare sera and test components can occur. For diagnostic purposes, the results obtained from this assay should always be used in combination with the clinical examination, patient medical history, and other findings.

Performance Data See Tables and Graphs for data representative of the assay’s performance. Results are expressed in ng/mL. (Unless otherwise noted, all were generated on serum samples collected in tubes without gel barriers or clot-promoting additives.) Conversion Factors: ng/mL × 0.331 → nmol/L ng/mL × 331 → pmol/L Reportable Range: 0.1 – 20 ng/mL (0.03 – 6.6 nmol/L; 33 – 6,620 pmol/L). Standardized to WHO 1st IRP 84/510. Analytical Sensitivity: Limit of Blank (highest value expected for a sample with no analyte; determined in accordance with CLSI EP17-A 13): 0.05 ng/mL (0.02 nmol/L, 17 pmol/L) Limit of Detection (lowest detectable concentration; determined in accordance with CSLI EP17-A 13): 0.08 ng/mL (0.03 nmol/L, 27 pmol/L) Functional Sensitivity: (concentration with 20% coefficient of variation (CV) determined in accordance with CLSI EP17-A 13 and CLSI EP5-A2 14): 0.08 ng/mL (0.03 nmol/L, 27 pmol/L) High Dose Hook Effect: None up to 3,560 ng/mL Precision: Samples were assayed in duplicate over the course of 10 days, four runs per day, for a total of 40 runs and 80 replicates. (See “Precision” table.) Linearity: Serums samples were assayed under various dilutions. (See "Linearity" table for representative data.) Recovery: Serum samples spiked 1 to 19 with three C-peptide solutions (23, 50 and 107 ng/mL) were assayed. (See "Recovery" table for representative data.) Specificity: The antibody is highly specific for C-peptide. (See "Specificity" table.) Bilirubin: Presence of conjugated and unconjugated bilirubin in concentrations

up to 200 mg/L may cause a depression of values (See “Bilirubin” tables). Hemolysis: Presence of hemoglobin in concentrations up to 500 mg/dL has no effect on results, within the precision of the assay. Lipemia: Presence of triglycerides in concentrations up to 3,000 mg/dL has no effect on results, within the precision of the assay. Alternate Sample Type: To assess the effect of alternate sample types, blood was collected from volunteers into plain, heparinized plasma, Becton Dickinson SST® and PST® vacutainer tubes. Some samples were spiked with C-peptide to provide values throughout the reportable range of the assay. All samples were assayed by the IMMULITE 2000 C-Peptide procedure, with the following results. (Heparin) = 0.93 (Serum) + 0.67 ng/mL r = 0.99 n = 43

(PST) = 0.94 (Serum) + 0.45 ng/mL r = 0.99 n = 43

Means: 5.3 ng/mL (Serum) 5.6 ng/mL (Heparin) 5.4 ng/mL (PST)

(SST) = 0.99 (Plain tubes) + 0.15 ng/mL r = 0.99 n = 42

Means: 5.1 ng/mL (Serum) 5.2 ng/mL (SST)

Method Comparison–Serum: The assay was compared to IMMULITE 2000 C-Peptide (L2KPE) procedure on 89 serum samples. (Concentration range: approximately 1.2 – 6.9 ng/mL. See graph 1.) By linear regression: (IML 2000 L2KPEP) = 0.94 (IML 2000 L2KPE) – 0.30 ng/mL r = 0.923

Means: 2.9 ng/mL (IMMULITE 2000 L2KPEP) 3.4 ng/mL (IMMULITE 2000 L2KPE)

Method Comparison–Urine: The assay was compared to IMMULITE 2000 C-Peptide (L2KPE) procedure on 87 urine samples. (Concentration range: approximately 0.6 – 6.9 ng/mL. See graph 2.) By linear regression:


(IML 2000 L2KPEP) = 1.01 (IML 2000 L2KPE) – 0.33 ng/mL r = 0.969

Means: 3.3 ng/mL (IMMULITE 2000 L2KPEP) 3.6 ng/mL (IMMULITE 2000 L2KPE)

References 1) Beischer W. Proinsulin and C-peptide in humans. In: Fotherby K, Pal S, editors. Hormones in Normal and Abnormal Human Tissues. Vol 3. Berlin: Walter DeGruyter, 1983: 1-43. 2) Beyer J, Krause U, Cordes U. C-peptide: its biogenesis, structure, determination and clinical significance. Giornale Ital Chem Clin 1979;4 Suppl 1:9-22. 3) Bonser A, Garcia-Webb P. C-Peptide measurement: methods and clinical utility. CRC Crit Rev Clin Lab Sci 1984;19:297-352. 4) Gonen G, Rubenstein AH, Horwitz DL, Blix PM. Clinical significance of C-peptide. In: Baba S, Kaneko T, Yanaihara N, editors. Proinsulin, Insulin, C-Peptide. Amsterdam: Excerpta Medica, 1979: 246-53. 5) Horwitz D, et al. Proinsulin, insulin and C-peptide concentrations in human portal and peripheral blood. J Clin Invest 1975;55:1278-83. 6) Horwitz D, Kuzuya H, Rubenstein AH. Circulating serum C-peptide. N Engl J Med 1976;295:207-9. 7) Polonsky KS, Rubenstein AH. C-peptide as a measure of the secretion and hepatic extraction of insulin; pitfalls and limitations. Diabetes 1984;33:486-93. 8) Rendell M. Expanding clinical use of C-peptide radioimmunoassay. Acta Diabetol Lat 1983;20:105-13. 9) Rubenstein AH, Kuzuya H, Horwitz DL. Clinical significance of circulating C-peptide in diabetes mellitus and hypoglycemic disorders. Arch Intern Med 1977;137:625-32. 10) Turkington RW, Estkowski A, Link M. Secretion of insulin or connecting peptide; a predictor of insulin dependence of obese diabetics'. Arch Intern Med 1982;142:1102-5. 11) Data on file. 12) National Committee for Clinical Laboratory Standards. Procedures for the collection of diagnostic blood specimens by venipuncture; approved standard. 4th ed. NCCLS Document H3-A4, Wayne, PA: NCCLS, 1998. 13) CLSI. Protocols for the Determination of Limits of Detection and Limits of Quantitation; Approved Guideline. CLSI document EP17-A Vol. 24 (No. 34). CLSI, 940 West Valley Road, Suite 1400, Wayne, Pennsylvania 19087-1898, USA, 2004. 14) Evaluation of Precision Performance of Quantitative Measurement Methods; Approved Guideline-Second Edition. CLSI document EP5-A2. CLSI, 940 West Valley Road, Suite 1400 Wayne, Pennsylvania 19087-1898, USA 2004.

Technical Assistance For technical assistance, contact your National Distributor. www.siemens.com/diagnostics

The Quality System of Siemens Healthcare Diagnostics Products Ltd. is certified to ISO 13485:2003.

Tables and Graphs

Precision (ng/mL)

Within-Run1 Total2

Mean3 SD4 CV5 SD CV

1 0.60 0.01 1.7% 0.02 3.3%

2 1.5 0.03 2.0% 0.05 3.3%

3 3.1 0.07 2.3% 0.09 2.9%

4 5.2 0.11 2.1% 0.17 3.3%

5 11 0.20 1.8% 0.36 3.3%

6 13 0.30 2.3% 0.62 4.8%

Česky. 1V rámci stanovení, 2Celkem, 3Střední hodnota, 4Směrodatná odchylka, 5Variační koeficient. Ελληνικά. 1Κατά την ίδια περίοδο, 2Συνολικά, 3Μέσος όρος, 4SD, 5CV. Polski. 1W serii, 2Całość, 3Średnie, 4SD, 5CV.

Specificity

Compound1 Amount Added2% Cross- reactivity3

Insulin 200 µIU/mL ND

Glucagon 15,000 ng/mL ND

Secretin 15,000 ng/mL ND

Proinsulin 10 ng/mL 10%

ND: not detectable.4

Česky. 1Sloučenina, 2Přidané množství, 3% Zkřížená reaktivita, 4ND: nezjistitelné. Ελληνικά. 1Μείγμα, 2Προστέθηκαν, 3% Διασταυρ.Αντίδραση, 4ND: Μη ανιχνεύσιμη ποσότητα. Polski. 1Składnik, 2Ilość dodana, 3% reaktywności krzyżowej, 4Nieoznaczlne.

Linearity (ng/mL)

Dilution1 Observed2 Expected3 %O/E4

1 8 in 85 1.3 ─ ─

4 in 8 0.63 0.67 94%

2 in 8 0.31 0.33 94%

1 in 8 0.15 0.17 88%

2 8 in 8 2.9 ─ ─

4 in 8 1.3 1.4 93%

2 in 8 0.66 0.72 92%

1 in 8 0.33 0.36 92%


Dilution1 Observed2 Expected3 %O/E4

3 8 in 8 4.2

4 in 8 2.1 2.1 100%

2 in 8 0.98 1.1 89%

1 in 8 0.48 0.52 92%

4 8 in 8 5.2 ─ ─

4 in 8 2.4 2.6 92%

2 in 8 1.1 1.3 85%

1 in 8 0.56 0.65 86%

5 8 in 8 7.5 ─ ─

4 in 8 3.6 3.80 95%

2 in 8 1.7 1.9 89%

1 in 8 0.81 0.94 86%

6 8 in 8 15 ─ ─

4 in 8 7.2 7.3 99%

2 in 8 3.3 3.7 89%

1 in 8 1.6 1.8 89%

7 8 in 8 > 15 ─ ─

6 in 8 >15 ─ ─

5 in 8 14 ─ ─

4 in 8 11 11 100%

2 in 8 5.4 5.6 96%

1 in 8 2.5 2.8 89%

Česky. 1Ředění, 2Naměřená, 3Očekávaná, 4% Naměřená / Očekávaná, 58 v 8. Ελληνικά. 1Αραίωση, 2 Παρατηρούμενη (O), 3Αναμενόμενη (E), 4% O/E, 58 στα 8. Polski. 1Rozcieńczenie, 2Zmierzone (Z), 3Oczekiwane (O), 4% Z/O, 58 w 8.

Bilirubin (Conjugated1)

Unspiked2 100 mg/L 200 mg/L

1 1.4 1.2 1.2

2 4.8 4.0 4.0

3 6.7 5.9 5.7

4 10 8.8 8.6

5 12 10 10

6 14 12 12

Česky. 1Konjugovaný, 2Bez přídavku. Ελληνικά. 1Δεσμευμένη (άμεση), 2Χωρίς εμπλουτισμό. Polski. 1Związana, 2Wyjściowa.

Bilirubin (Unconjugated1)

Unspiked2 100 mg/L 200 mg/L

1 1.4 1.2 1.2

2 4.8 3.8 3.9

3 6.7 5.8 5.7

4 10 8.7 8.7

5 12 9.8 10

6 14 12 12

Česky. 1Nekonjugovaný, 2Bez přídavku. Ελληνικά. 1Αδέσμευτη (έμμεση), 2Χωρίς εμπλουτισμό. Polski. 1Niezwiązana, 2Wyjściowa.

Recovery (ng/mL)

Solution1 Observed2 Expected3 %O/E4

1 — 0.45 — —

A 1.7 1.6 106%

B 3.1 3.0 103%

C 6.0 5.8 103%

2 — 1.0 — —

A 2.1 2.1 100%

B 3.5 3.5 100%

C 6.5 6.3 103%

3 — 1.7 — —

A 3.0 2.7 111%

B 4.6 4.1 112%

C 7.5 7.0 107%

4 — 2.4 — —

A 3.6 3.4 106%

B 4.8 4.8 100%

C 7.1 7.6 93%

5 — 3.8 — —

A 4.9 4.7 104%

B 6.1 6.1 100%

C 8.5 9.0 94%

6 — 5.2

A 6.3 6.0 105%

B 7.8 7.4 105%

C 11 10 110%

Česky. 1Roztok, 2Naměřená, 3Očekávaná, 4Naměřená / Očekávaná. Ελληνικά. 1Διάλυμα, 2Παρατηρούμενη (O), 3Αναμενόμενη (E), 4% O/E. Polski. 1Roztwór, 2Zmierzone (Z), 3Oczekiwane (O), 4% Z/O.


Method Comparison: Serum

0

3

6

9

0 3 6 9

IMMULITE 2000 C-Peptide (L2KPE), ng mL

IMM

ULI

TE 2

000

C-P

eptid

e (L

2KPE

P)

(IML 2000 L2KPEP) = 0.94 (IML 2000 L2KPE) ─ 0.30 ng/mL r = 0.923

English. C-Peptide. Česky. C-Peptid. Ελληνικά. C-Πεπτίδιο. Polski. C-Peptyd.

Method Comparison: Urine

0

2

4

6

8

0 2 4 6 8

IMMULITE 2000 C-Peptide (L2KPE), ng/mL

IMM

ULI

TE 2

000

C-P

eptid

e (L

2KPE

P)

(IML 2000 L2KPEP) = 1.01 (IML 2000 L2KPE) ─ 0.33 ng/mL r = 0.969

English. C-Peptide. Česky. C-Peptid. Ελληνικά. C-Πεπτίδιο. Polski. C-Peptyd.

Česky

IMMULITE 2000 C-Peptid Použití: Pro in vitro diagnostické použití na analyzátorech IMMULITE 2000 — ke kvantitativnímu stanovení koncentrace C-peptidu v séru, heparinizované plazmě nebo moči, jakožto pomůcky v diagnostice

a léčbě pacientů s abnormální sekrecí inzulínu. Katalogové číslo: L2KPEP2 (200 testů), L2KPEP6 (600 testů) Kód metody: PEP Barva: Tmavě modrá

Shrnutí a vysvětlení Lidský C-peptid představuje řetězec 31 aminokyselin s molekulovou hmotností přibližně 3 020 daltonů. Je metabolicky inertní a uvolňuje se v beta buňkách pankreatu jako vedlejší produkt enzymatického štěpení proinzulínu na inzulín.1,2,5 V tomto procesu se inzulín a C-peptid odštěpí z prohormonu a jsou vyloučeny do portální cirkulace v ekvimolární koncentraci.4,5,7 Tato skutečnost je důvodem klinického zájmu o stanovení C-peptidu v plazmě. S určitým omezením může koncentrace C-peptidu sloužit jako cenný ukazatel sekrece inzulínu. Proto je nízkou hladinu C-peptidu možné očekávat tam, kde je sekrece inzulínu oslabená (jako např. u diabetes závislém na inzulínu) nebo potlačená, jako např. při normální reakci na exogenní inzulín. Naopak zvýšená hladina C-peptidu může být důsledkem zvýšené aktivity beta buněk, která byla pozorována při inzulinomech. 3,4,6,9 Obdobně, při diferenciální diagnostice hypoglykémie je možné stanovení C-peptidu použít jako doplněk měření inzulínu, jakožto indexu aktivity pankreatu v klasickém 72-hodinovém testu nalačno a jako výhradní indikátor aktivity pankreatu při podávání samotného inzulínu za účelem kontroly supresibility.1,8 Navíc, nálezem zvýšené hladiny C-peptidu můžeme jako příčinu hyperinzulinémie v podstatě vyloučit skryté samopodávání inzulínu.2,3,8,9 Cirkulující protilátky proti inzulínu se běžně objevují u pacientů, kteří prodělali inzulínovou léčbu. Tyto protilátky typicky interferují se stanovením inzulínu. Proto měření inzulínu pro kontrolu reziduální aktivity beta buněk není vhodné, i kdyby léčba byla dočasně přerušena. Stanovení C-peptidu se proto v daném kontextu používá jako alternativa ke zjištění informací o přirozeném vývoji diabetes závislém na inzulínu, k nepřímému sledování sekrece inzulínu za přítomnosti protilátek proti inzulínu a jako pomůcka


usnadňující určení vhodného postupu léčby.3,6,7,10 Stanovení C-peptidu rovněž umožňuje doplňující hodnocení glukózové tolerance a glibenklamid-glukózových testů.2,3,10

Princip Stanovení Stanovení C-Peptid na analyzátorech IMMULITE 2000 je oboustranná chemiluminiscenční imunometrická metoda na pevné fázi. Pevná fáze (kulička) je potažena monoklonální myší protilátkou proti C-peptidu. Kapalná fáze obsahuje alkalickou fosfatázu (z telecího střeva) konjugovanou s myší monoklonální protilátkou proti C-peptidu v pufru. Vzorek pacienta a reagencie jsou inkubovány společně s potaženou kuličkou po dobu 30 minut. Během této doby C-peptid ze vzorku vytvoří sendvičový complex s monoklonální myší protilátkou proti C-peptidu na kuličce a enzymovým konjugátem monoklonální myší protilátky proti C-peptidu v reagencii. Nenavázaný vzorek a enzymový konjugát jsou odstraněny centrifugačním mytím. Nakonec je k testovací jednotce obsahující kuličku přidán chemiluminiscenční substrát a generovaný signál je úměrný navázanému enzymu. Inkubační cykly: 1 × 30 minut. Čas do prvního výsledku: 35 minut.

Odebírání vzorků

Sérum a heparinizovaná plazma: Pacient musí být nalačno. Krev odeberte venepunkcí12 (zamezte hemolýze) do obyčejných zkumavek (bez prostředků proti srážlivosti) nebo heparinizovaných zkumavek, poznamenejte čas odběru a oddělte sérum nebo plazmu od buněk. K úpravě lipemických vzorků se doporučuje použití ultracentrifugy. Hemolyzované vzorky můžou být známkou nesprávného zacházení s preparátem ještě před přijetím do laboratoře; proto by výsledky měly být interpretovány s obezřetností. Nepoužívejte EDTA nebo fluorid sodnou plazmu. Centrifugace vzorků séra ještě před úplným vysrážením může mít za následek

přítomnost fibrinu. Chybným výsledkům způsobeným přítomností fibrinu lze zamezit úplným vysrážením vzorků před jejich centrifugací. U některých vzorků, zejména od pacientů podstupujících antikoagulační léčbu, může srážlivost vyžadovat více času. Použití zkumavek pro odběr krve od různých výrobců může přinášet rozličné hodnoty v závislosti na materiálech a přísadách včetně gelových nebo fyzických bariér, aktivátorů sraženin a/nebo antikoagulačních činidel. Stanovení C-Peptidu na analyzátorech IMMULITE 2000 nebylo testováno se všemi možnými variantami jednotlivých typů zkumavek. Informace o testovaných zkumavkách najdete v části o alternativních typech vzorků. Skladování: Stanovení proveďte do 2–3 hodin nebo skladujte zmrazené při teplotě –20°C 1 týden.11

Moč – odběr a skladování: V průběhu 24 hodin sbírejte moč, uchovávejte ji přitom v chladu při teplotě 2–8°C, nepřidávejte žádný konzervační prostředek. Zapište celkový objem a důkladně promíchané alikvotní vzorky uchovejte pro analýzu. Před stanovením vzorky upravte centrifugací nebo filtrací. Skladování: Při delším skladování rozdělte na alikvotní části a zmrazte: stabilní 30 dní při teplotě –20°C. Faktor ředění: Alespoň 5. Při použití faktoru ředění 20 se vzorky normální moči dostanou do měřicí rozsahu. (Pro vzorky moči zvolte 5 nebo 20 v okýnku “Dilution Factor”.)

Potřebný objem vzorku: 25 µl séra, plazmy nebo moči.

Upozornění a bezpečnostní opatření Určeno pro in vitro diagnostické použití.

Reagencie: Skladujte při teplotě 2–8°C. Likvidujte v souladu s platnými předpisy.

Řiďte se obecnými pravidly bezpečnosti práce a se všemi komponenty nakládejte, jako by byly potenciálně infekční. Zdrojové materiály získané z lidské krve byly testovány a shledány nereaktivní na syfylis, na protilátky proti HIV 1 a 2, na


povrchový antigen hepatitidy typu B (HbsAg), a na protilátky proti hepatitidě typu C.

Jako konzervační látka byl přidán azid sodný v koncentracích menších než 1 g/l. Při likvidaci vypláchněte velkým množstvím vody, aby se zamezilo nahromadění potenciálně výbušných azidů kovů v olověném a měděném potrubí.

Chemiluminiscenční substrát: Vyvarujte se kontaminace a nevystavujte přímému slunečnímu světlu. (Viz připojený letáček.)

Voda: Použijte destilovanou nebo deionizovanou vodu.

Dodaný materiál Komponenty představují ucelenou sadu. Pro stanovení jsou zapotřebí štítky s čárovým kódem na krabici.

C-Peptide zásobník s kuličkami (L2PEP12) Opatřeno čárovým kódem. 200 kuliček potažených monoklonální myší protilátkou proti C-peptidu. Stabilní při teplotě 2–8°C do expirace. L2KPEP2: 1 balení. L2KPEP6: 3 balení.

C-Peptide Reagencie (L2PEPA2) Opatřeno čárovým kódem. 11,5 mL alkalické fosfatázy (z telecího střeva) konjugované s monoklonální myší protilátkou proti C-peptidu v pufru. Stabilní při teplotě 2–8°C do expirace. L2KPEP2: 1 nádobka. L2KPEP6: 3 nádobky. Před použitím utrhněte vršek štítku v perforovaném místě, ale nepoškoďte čárový kód. Z vrchu nádobky odstraňte uzavírací fólii; posuvný uzávěr zaklapněte do ramp na víčku reagencie.

C-Peptide Kalibrátory (LPEPL, LPEPH) Dvě ampulky s vysokou a nízkou koncentrací lyofilizovaného C-peptidu v pufrovaném roztoku lidského albuminu, s konzervačním přípravkem. Rekonstituujte každou ampulku přidáním 4,0 ml destilované nebo deionizované vody. Nechejte stát 30 minut. Míchejte jemným kroužením nebo překlápěním až do úplného rozpuštění lyofilizovaného materiálu. Po rekonstituci rozdělte na alikvoty a zmrazte. Stabilní 6 měsíců při

teplotě –20°C. Po použití alikvoty zlikvidujte. L2KPEP2: 1 sada. L2KPEP6: 2 sady. Před adjustací nalepte na testovací zkumavky příslušné alikvotní štítky (dodané se soupravou) tak, aby zabudovaný snímač mohl přečíst čárové kódy.

Materiál dodávaný zvlášť

C-Peptide Diluent Vzorků (L2PEZ) Určen k automatickému ředění vzorků moči a koncentrovaných vzorků séra nebo plazmy analyzátorem. 25 ml koncentrovaného (připraveného k použití) zpracovaného pufrovaného roztoku lidského albuminu bez C-peptidu, s konzervačním prostředkem. Stabilní 30 dní po otevření při teplotě 2–8°C nebo rozdělené na alikvotní části 6 měsíců při –20°C. Štítky s čárovými kódy jsou určeny pro diluent. Před použitím nalepte příslušný štítek na testovací zkumavku 16 × 100 mm tak, aby zabudovaný snímač mohl přečíst čárové kódy. L2PEZ: 3 štítky. L2SUBM: Chemiluminescenční substrát L2PWSM: Promývací roztok L2KPM: Čistící roztok na jehly LRXT: Reakční zkumavky (na jedno použití) L2ZT: 250 Testovací zkumavky na diluent vzorků (16 × 100 mm) L2ZC: 250 Uzávěrů na testovací zkumavky na diluent vzorků PECM: Trojúrovňový kontrolní modul C-peptidu Dále potřebujete: Destilovanou nebo deionizovanou vodu; testovací zkumavky, kontroly.

Postup stanovení K dosažení optimálního výkonu je důležité provádět veškerou pravidelnou údržbu stanovenou v manuálu k analyzátorům IMMULITE 2000. V manuálu k analyzátorům IMMULITE 2000 najdete postupy: přípravy, nastavení, ředění, adjustace, stanovení vzorků a kontrol.


Doporučený interval mezi adjustacemi: 2 týdny. Vzorky ke kontrole kvality: Použijte kontroly nebo směsné vzorky s alespoň dvěma koncentracemi (vysokou a nízkou) C-peptidu.

Očekávané hodnoty

Sérum a heparinizovaná plazma: Vzorky séra byly odebrány 136 dobrovolníkům na lačno a následně analyzovány metodou C-Peptide na analyzátorech IMMULITE 2000. Medián byl 2,2 ng/ml (0,7 nmol/l; 728 pmol/l) a neparametrické referenční rozmezí středních 95% bylo 0,9 – 7,1 ng/ml (0,3 – 2,4 nmol/l; 298 – 2 350 pmol/l)

Moč: 24-hodinové vzorky moče byly odebrány od 82 zjevně zdravých dobrovolníků a analyzovány metodou IMMULITE 2000 C-Peptid s výsledou střední hodnotou a směrodatnou odchylkou 77 ± 59 µg/den, s rozmezím 3,6 do 253 µg/den, které představuje středních 95% naměřených hodnot. Uvedené hranice považujte pouze za orientační. Každá laboratoř by si měla stanovit svoje vlastní referenční rozmezí.

Omezení Protože metabolizmus C-peptidu se od metabolizmu inzulínu liší, jsou hodnoty C-peptidu nanejvýš semikvantitativním indexem sekrece inzulínu. Poločas rozpadu C-peptidu v plazmě se odhaduje na přibližně 30 minut ve srovnání s 5 minutami pro inzulín. Kvůli tomuto rozdílu v poločasu rozpadu cirkuluje v plazmě zhruba 5-násobně víc C-peptidu než inzulínu, i když jsou obě molekuly vylučovány v ekvimolárním poměru. V metabolizmu inzulínu hrají významnou roli játra, zatímco C-peptid je odbouráván zejména v ledvinách. Hepatické a renální komplikace proto ovlivňují poměr C-peptidu a inzulínu v cirkulaci. Heterofilní protilátky v lidském séru můžou reagovat s imunoglobuliny obsaženými v komponentech soupravy a způsobit interference s in vitro imunologickým stanovením. [Viz Boscato LM, Stuart MC. Heterophilic antibodies: a problem for all immunoassays. Clin Chem 1988:34:27-

33.] Vzorky pacientů rutinně vystavených kontaktu se zvířaty nebo produkty zvířecího séra můžou vykázat tento typ interference a potenciálně způsobit anomální výsledky. Tyto reagencie byly vyvinuty tak, aby bylo riziko interference minimalizováno; nicméně případné interakce mezi ojedinělými séry a komponenty testu se můžou vyskytnout. Pro diagnostické účely by se výsledky tohoto stanovení měly vždy používat v kombinaci s klinickými zkouškami, zdravotní historií pacienta a ostatními nálezy.

Znaky metody Reprezentativní výsledky stanovení najdete v části Tabulky a grafy. Výsledky se udávají v ng/ml. (Pokud není uvedeno jinak, všechny výsledky byly získány na vzorcích séra odebraných do zkumavek bez gelových bariér nebo přísad podporujících srážlivost.) Konverzní faktory: ng/ml × 0,331 → nmol/l ng/ml × 331 → pmol/l Rozsah měření: 0,1 – 20 ng/ml (0,03 – 6,6 nmol/l; 33 – 6 620 pmol/l) Standardizováno dle WHO 1st IRP 84/510. Analytická citlivost: Limit blanku (nejvyšší hodnota blanku očekávaná od vzorku bez analytu, stanoveno v souladu s CLSI EP17-A 13): 0,05 ng/ml (0,02 nmol/l, 17 pmol/l) Limit detekce (nejnižší detekovatelná koncentrace, stanovená v souladu s CSLI EP17-A13): 0,08 ng/ml (0,03 nmol/l, 27 pmol/l) Funkční citlivost: (koncentrace s 20% variačním koeficientem (CV) stanovená v souladu s CLSI EP17-A13 a CLSI EP5-A214): 0,08 ng/ml (0,03 nmol/l, 27 pmol/l) High-dose Hook Effect: Do 3 560 ng/ml žádný. Přesnost: Vzorky séra byly stanovovány ve dvou opakováních v průběhu 10 dní, čtyři série denně, celkově 40 sérií a 80 opakování. (Viz tabulka “Precision”.) Linearita: Stanovení vzorků bylo provedeno při rozličném ředění. (Reprezentativní hodnoty najdete v tabulce “Linearity“.)


Zpětná Výtěžnost: Vzorky séra byly naředěny 1 :19 třemi roztoky C-peptidu (23, 50 a 107 ng/ml). (Reprezentativní hodnoty najdete v tabulce “Recovery“.) Specificita: Protilátka je silně specifická vůči C-peptidu. (Viz tabulka "Specificity".) Bilirubin: Přítomnost konjugovaného a nekonjugovaného bilirubinu v koncentracích do 200 mg/l může způsobit snížení hodnot (viz tabulka „Bilirubin“). Hemolýza: Přítomnost hemoglobinu v koncentracích do 500 mg/dl nemá v rámci přesnosti stanovení žádný vliv na výsledky. Lipémie: Přítomnost triglyceridů v koncentracích do 3 000 mg/dl nemá v rámci přesnosti stanovení žádný vliv na výsledky. Alternativní typ vzorku: K posouzení vlivu alternativního typu vzorku byla odebrána krev od dobrovolníků do obyčejných zkumavek, heparinové plazmy, Becton Dickinson SST® a PST® vacutainer zkumavek. Některé vzorky byly obohaceny přídavkem C-peptidu k dosažení koncentrací spadajících do kalibračního rozsahu metody. Všechny vzorky byly analyzovány metodou IMMULITE 2000 C-Peptide, s následujícími výsledky. (Heparin) = 0,93 (Sérum) + 0,67 ng/ml r = 0,99 n = 43

(PST) = 0,94 (Sérum) + 0,45 ng/ml r = 0,99 n = 43

Střední hodnoty: 5,3 ng/ml (Sérum) 5,6 ng/ml (Heparin) 5,4 ng/ml (PST)

(SST) = 0,99 (obyč. zkumavky) + 0,15 ng/ml r = 0,99 n = 42

Střední hodnoty: 5,1 ng/ml (Sérum) 5,2 ng/ml (SST)

Srovnání metod –Sérum: Stanovení bylo porovnáno s metodou IMMULITE 2000 C-Peptid (L2KPE) na 89 vzorcích séra. (koncentrační rozsah přibližně 1,2 – 6,9 ng/ml. Viz graf 1.) Lineární regresí: (IML 2000 L2KPEP) = 0,94 (IML 2000 L2KPE) – 0,30 ng/ml r = 0,923

Střední hodnoty: 2,9 ng/ml (IMMULITE 2000 L2KPEP) 3,4 ng/ml (IMMULITE 2000 L2KPE)

Srovnání metod – Moč: Stanovení bylo srovnáno s metodou IMMULITE 2000 C-Peptide (L2KPE) na 87 vzorcích moči. (Koncentrační rozsah přibližně od 0,6 – 6,9 ng/ml. Viz graf 2.) Lineární regresí: (IML 2000 L2KPEP) = 1,01 (IML 2000 L2KPE) – 0,33 ng/ml r = 0,969

Střední hodnoty: 3,3 ng/ml (IMMULITE 2000 L2KPEP) 3,6 ng/ml (IMMULITE 2000 L2KPE)

Technická Podpora Pro technickou podporu kontaktujte vašeho národního distributora. www.siemens.com/diagnostics

Systém kontroly jakosti společnosti Siemens Healthcare Diagnostics Products Ltd. je certifikovaný podle ISO 13485:2003.

Ελληνικά

IMMULITE 2000 C-Πεπτίδιο Ενδεδειγμένη χρήση: Για in vitro διαγνωστική χρήση με τα συστήματα αναλυτών IMMULITE 2000 — για τον ποσοτικό προσδιορισμό της C-πεπτιδίου στον ορό, στο ηπαρινισμένο πλάσμα ή στα ούρα, ως βοήθημα στη διάγνωση και θεραπεία των ασθενών με μη φυσιολογική έκκριση ινσουλίνης. Αριθμός Καταλόγου: L2KPEP2 (200 εξετάσεις), L2KPEP6 (600 εξετάσεις)

Κωδικός ανάλυσης: PEP Χρώμα: Σκούρο μπλε

Περίληψη και Επεξήγηση Το ανθρώπινο C-πεπτίδιο είναι μια αλυσίδα 31 αμινοξέων με μοριακό βάρος περίπου 3 020 daltons. Μεταβολικά αδρανές, παράγεται στα β-κύτταρα του παγκρέατος σαν παραπροϊόν της ενζυμικής πέψης της προϊνσουλίνης σε ινσουλίνη.1,2,5 Σ’ αυτή τη διαδικασία η ινσουλίνη και το C-πεπτίδιο διαχωρίζονται από την προορμόνη και εκκρίνονται στην πυλαία κυκλοφορία σε ισομοριακές συγκεντρώσεις.4,5,7 Αυτό είναι το γεγονός που υπογραμμίζει το κλινικό


ενδιαφέρον για τον προσδιορισμό του C-πεπτιδίου στο πλάσμα. Μέσα σε όρια, τα επίπεδα του C-πεπτιδίου μπορούν να λειτουργήσουν σαν χρήσιμος οδηγός για την έκκριση της ινσουλίνης. Έτσι, χαμηλά επίπεδα C-πεπτιδίου αναμένονται όταν η έκκριση της ινσουλίνης ελαττώνεται, όπως στον ινσουλινοεξαρτώμενο διαβήτη ή σταματά, σαν φυσιολογική αντίδραση στην εξωγενή ινσουλίνη, ενώ αυξημένα επίπεδα C-πεπτιδίου μπορεί να οφείλονται στην αυξημένη δραστηριότητα των β-κυττάρων που παρατηρείται στις ινσουλιναιμίες. 3,4,6,9 Με τον ίδιο τρόπο, στη διαφορική διάγνωση της υπογλυκαιμίας, οι προσδιορισμοί του C-πεπτιδίου μπορούν να χρησιμοποιηθούν σαν συμπληρωματικές μετρήσεις της ινσουλίνης σαν ένδειξη για την παγκρεατική δραστηριότητα στον κλασικό έλεγχο των 72-ωρών νηστείας και σαν το μοναδικό δείκτη της παγκρεατικής δραστηριότητας όταν η ινσουλίνη από μόνη της χρησιμοποιείται για τον έλεγχο της καταστολής.1,8 Επιπλέον, συγκεκαλυμμένη αυτό-χρήση ινσουλίνης μπορεί να πρακτικά να αποκλειστεί σαν την αιτία της υπερινσουλιναιμίας από το εύρημα αυξημένου επιπέδου C-πεπτιδίου.2,3,8,9 Αντισώματα αντι-ινσουλίνης στην κυκλοφορία παρατηρούνται συχνά σε ασθενείς που είχαν υποστεί θεραπεία ινσουλίνης. Αυτό μπορεί δυνητικά να επηρεάσει τις μεθόδους ανοσοανίχνευσης της ινσουλίνης, κάνοντας αδύνατο να χρησιμοποιήσει κανείς τις μετρήσεις της ινσουλίνης στο να ελέγξει την υπόλοιπη δράση β-κυττάρων, ακόμη κι αν η θεραπεία προσωρινά αναστάλθηκε. Οι μετρήσεις του C-πεπτιδίου έχουν χρησιμοποιηθεί παρόλ’ αυτά σαν εναλλακτική μέθοδος γι’ αυτό το σκοπό, στο να αντλήσει κανείς πληροφορίες για τη φυσική ιστορία του ινσουλινοεξαρτώμενου διαβήτη, να ελέγξει έμμεσα την έκκριση της ινσουλίνης στην παρουσία αντισωμάτων αντί-ινσουλίνης και να βοηθήσει στο να καθοριστεί η κατάλληλη θεραπευτική αγωγή.3,6,7,10 Το C-πεπτίδιο έχει επίσης υπολογιστεί σαν ένα εναλλακτικό μέσο για την εκτίμηση της ανοχής της γλυκόζης και των ελέγχων γλυβενκλαμίδης-γλυκόζης.2,3,10

Αρχή της Διαδικασίας Η μέθοδος IMMULITE 2000 C-πεπτιδίου είναι μια ξηρής φάσης, δύο θέσεων χημειοφωταυγής ανοσομετρική ανάλυση. Η στερεά φάση (σφαιρίδιο) είναι επικαλυμμένη με μονοκλωνικό αντίσωμα ποντικού αντί-C-πεπτιδίου. Η υγρή φάση αποτελείται από αλκαλική φωσφατάση (από βόειο έντερο) συνδεδεμένη σε μονοκλωνικό αντίσωμα ποντικού αντί-C-πεπτιδίου σε ρυθμιστικό διάλυμα. Το δείγμα ασθενούς και το αντιδραστήριο επωάζονται μαζί με το επικαλυμμένο σφαιρίδιο για 30 λεπτά. Μέσα σε αυτό το χρόνο, το C-πεπτίδιο του δείγματος σχηματίζει το σύμπλεγμα αντισωμάτων σάντουϊτς με το μονοκλωνικό αντίσωμα ποντικού αντί-C-πεπτιδίου στο σφαιρίδιο και το συνδεδεμένο με ένζυμο μονοκλωνικό αντίσωμα ποντικού αντί-C-πεπτιδίου στο αντιδραστήριο. Το μη προσδεδεμένο δείγμα και το συνδεδεμένο ένζυμο στη συνέχεια απομακρύνονται με φυγοκεντρικές εκπλύσεις. Τελικά, το χημειοφωταυγές υπόστρωμα προστίθεται στο σωλήνα αντίδρασης που περιέχει το σφαιρίδιο και το σήμα παράγεται σε αναλογία με το προσδεδεμένο ένζυμο. Κύκλοι επώασης: 1 × 30 λεπτά. Χρόνος για το πρώτο αποτέλεσμα: 35 λεπτά.

Συλλογή Δείγματος

Ορός και Ηπαρινισμένο Πλάσμα: Ο ασθενής πρέπει να είναι νηστικός. Συλλέξτε το αίμα με φλεβοκέντηση,12 αποφεύγοντας την αιμόλυση, σε απλούς σωλήνες (χωρίς αντιπηκτικό) ή ηπαρινισμένους σωλήνες, σημειώνοντας την ώρα της συλλογής και διαχωρίστε τον ορό ή το πλάσμα από τα κύτταρα. Συνίσταται η χρήση της υπερφυγοκέντρου για να καθαριστούν λιπιδαιμικά δείγματα. Αιμολυμένα δείγματα μπορεί να υποδηλώνουν κακή μεταχείριση του δείγματος πριν την παραλαβή του από το εργαστήριο και τα αποτελέσματα πρέπει να ερμηνεύονται με προσοχή. Πλάσμα με EDTA και πλάσμα με φθοριούχο νάτριο είναι ακατάλληλα για χρήση. Η φυγοκέντρηση των δειγμάτων πριν την πλήρη πήξη μπορεί να έχει ως αποτέλεσμα την παρουσία θρόμβων. Για


να αποφευχθούν λανθασμένα αποτελέσματα εξαιτίας της παρουσίας θρόμβων, βεβαιωθείτε ότι πριν την φυγοκέντρηση το αίμα έπηξε πλήρως. Κάποια δείγματα, ιδιαιτέρως αυτά των ασθενών που λαμβάνουν αντιπηκτική θεραπεία, ίσως χρειάζονται εκτεταμένο χρόνο πήξης. Οι σωλήνες συγκέντρωσης αίματος από διαφορετικές εταιρείες μπορεί να φέρουν διάφορες τιμές, ανάλογα με τα υλικά και τα συμπληρώματα, συμπεριλαμβανομένων των με τζελ ή φυσικών σωληναρίων, των ενεργοποιητών πήξεως και/ή των αντιπηκτικών. Η IMMULITE 2000 C-πεπτιδίου δεν έχει δοκιμαστεί με όλους τους τύπους σωληναρίων. Συμβουλευτείτε την παράγραφο για τους εναλλακτικούς τύπους δειγμάτων για λεπτομέρειες σχετικά με τα σωληνάρια που έχουν δοκιμαστεί. Φύλαξη: Ανάλυση μέσα σε 2–3 ώρες ή κατάψυξη στους –20°C για 1 εβδομάδα.11

Συλλογή και Φύλαξη Ούρων: Συλλέξτε ούρα 24-ωρών, χωρίς συντηρητικό, διατηρώντας το δείγμα παγωμένο στους 2–8°C κατά τη συλλογή. Καταγράψτε το συνολικό όγκο της συλλογής και διατηρήστε ένα καλά αναμεμειγμένο δείγμα για ανάλυση. Πριν την ανάλυση, καθαρίστε το δείγμα με φυγοκέντρηση ή διήθηση. Φύλαξη: Για μεγαλύτερη διάρκεια διαλύστε και καταψύξτε: σταθερά στους –20°C για 30 ημέρες. Συντελεστής Αραίωσης: Τουλάχιστον 5. Χρήση συντελεστή αραίωσης 20 θα φέρει τα φυσιολογικά δείγματα ούρων εντός το εύρος μέτρησης της εξέτασης. (Για δείγματα ούρων, επιλέξτε 5 ή 20 στο παράθυρο Dilution Factor.)

Απαιτούμενος Όγκος: 25 µL ορού, πλάσματος ή δείγματος ούρων.

Προειδοποιήσεις και Προφυλάξεις Για διαγνωστική in vitro χρήση

Αντιδραστήρια : Αποθηκεύετε στους 2–8°C. Καταστρέψτε σύμφωνα με την τοπική νομοθεσία.

Ακολουθείτε τις κοινές οδηγίες και μεταχειρίζεστε όλα τα συστατικά σαν να ήταν φορείς λοιμωδών ασθενειών. Τα ανθρώπινου αίματος προέλευσης υλικά που χρησιμοποιούνται στην παρασκευή αυτού του κιτ εξετάστηκαν για σύφιλη, για αντισώματα έναντι Human Immunodeficiency Virus (HIV) 1 και 2, για ηπατίτιδας B αντιγόνο επιφανείας, και για αντισώματα ηπατίτιδας C και βρέθηκαν αρνητικά.

Αζιδιο του Νατρίου έχει προστεθεί σε συγκέντρωση μικρότερη του 0,1 g/dL,σαν συντηρητικό. Κατά την απόθεση, ξεπλύνετε με πολύ νερό προκειμένου να εμποδίσετε την δημιουργία εκρηκτικών αζιδίων στους χάλκινους ή μολύβδινους σωλήνες αποχέτευσης.

Υπόστρωμα χημειοφωταύγειας: Το υπόστρωμα χημειοφωταύγειας είναι φωτοευαίσθητο και δεν πρέπει να εκτίθεται σε απευθείας ηλιακό φως. Δεν πρέπει να μολυνθεί. Προσφύγετε στο ένθετο για λεπτομέρειες.

Νερό: Χρησιμοποιείτε δισαπεσταγμένο ή απιονισμένο νερό.

Υλικά που διατίθενται Τα συστατικά είναι μια ολοκληρωμένη ενότητα. Οι ετικέτες στο εσωτερικό κουτί είναι απαραίτητες για την ανάλυση.

Συσκευασία σφαιριδίων C-Πεπτιδίου (L2PEP12) Με γραμμογράφηση. 200 σφαιρίδια καλυμμένα με μονοκλωνικά αντί – C-πεπτιδίου αντισώματα ποντικού. Φυλάσσεται στους 2–8°C μέχρι την ημερομηνία λήξεως που αναγράφεται στην συσκευασία. L2KPEP2: 1 συσκευασία. L2KPEP6: 3 συσκευασίες.

Δοχείο Αντιδραστηρίων C-Πεπτιδίου (L2PEPA2) Με γραμμογράφηση. 11,5 mL αλκαλική φωσφατάση (από βόειο έντερο) συνδεδεμένη σε μονοκλωνικό αντίσωμα ποντικού αντί-C-πεπτιδίου σε ρυθμιστικό διάλυμα. Φυλάσσεται στους 2–8°C μέχρι την ημερομηνία λήξεως που αναγράφεται στην συσκευασία. L2KPEP2: 1 δοχείο. L2KPEP6: 3 δοχεία. Πριν τη χρήση, σχίστε την πάνω ετικέτα, χωρίς να καταστρέψετε το barcode.


Αφαιρέστε (ξεκολλήστε) προσεκτικά το κάλυμμα από την επάνω επιφάνεια του δοχείου, και πιέστε το κάλυμμα κάτω προς τους κεκλιμένους οδηγούς-ράγες.

Ρυθμιστές C-Πεπτιδίου (LPEPL, LPEPH) 2 φιαλίδια (χαμηλό και υψηλό) λυοφιλιμένου C-πεπτιδίου σε διάλυμα ανθρώπινης αλβουμίνης, με συντηρητικό. Κάντε ανασύσταση κάθε φιαλίδιου με 4,0 mL απεσταγμένου ή απιονισμένου νερού. Αφήστε τα για 30 λεπτά. Αναδεύστε με ελαφρά περιστροφή ή αναστροφή μέχρι το λυοφιλιμένο υλικό διαλυθεί πλήρως. Μετά την ανασύσταση, διαμοιράστε και ψύξτε. Σταθερά στους –20°C για 6 μήνες μετά την ανασύσταση. Πετάξτε τους ρυθμιστές μετά τη χρήση. L2KPEP2: 1 σετ. L2KPEP6: 2 σετ. Πριν κάνετε τη ρύθμιση, τοποθετείστε τις κατάλληλες ετικέτες (παρέχονται με το kit) σε δοκιμαστικούς σωλήνες, έτσι, ώστε τα barcodes να μπορούν να διαβαστούν από το κατάλληλο σύστημα.

Συστατικά του Kit που παρέχονται ξεχωριστά

Αραιωτικό δείγματος C-Πεπτιδίου (L2PEZ) Για την επί του αναλυτή αραίωση δειγμάτων ούρων και των υψηλών δειγμάτων ορού/πλάσματος. 25 mL συμπυκνωμένου (έτοιμου προς χρήση), επεξεργασμένου, διαλύματος ανθρώπινης αλβουμίνης ελεύθερου C-πεπτιδίου, με συντηρητικό. Σταθερά στους 2–8°C για 30 μέρες μετά το άνοιγμα ή 6 μήνες (διαχωρισμένα) στους –20°C. Ετικέτες με γραμμικό κώδικα παρέχονται για χρήση με το αραιωτικό. Πριν τη χρήση, τοποθετήστε την απαιτούμενη ετικέτα σε σωλήνα εξέτασης 16 × 100 mm, έτσι ώστε ο γραμμικός κώδικας να μπορεί να διαβαστεί από το σύστημα ανάγνωσης του αναλυτή. L2PEZ: 3 ετικέτες.

L2SUBM: Χημειοφωταυγές υπόστρωμα L2PWSM: Έμπλυμα του ανιχνευτή L2KPM: Kit καθαρισμού του ανιχνευτή LRXT: Σωλήνες εξέτασης μιας χρήσης L2ZT: 250 δοκιμαστικοί σωλήνες για αραίωση του δείγματος (16 × 100 mm) L2ZC: 250 καπάκια για σωλήνες αραίωσης του δείγματος

PECM: Μονάδα Τριών Επιπέδων Ορών Ελέγχου C-Πεπτιδίου Χρειάζονται επίσης: Δισαπεσταγμένο ή απιονισμένο νερό, δείγματα ελέγχου ποιότητας, γυάλινα σωληνάρια.

Διαδικασία της Ανάλυσης Σημειώστε ότι για το βέλτιστο αποτέλεσμα, είναι σημαντικό να ακολουθηθούν όλες οι τυπικές διαδικασίες όπως ορίζονται στο εγχειρίδιο χρήστη συστημάτων IMMULITE 2000. Βλέπε το εγχειρίδιο χρήστη συστημάτων IMMULITE 2000 για: προετοιμασία, στήσιμο, αραιώσεις, ρυθμίσεις, ανάλυση και διαδικασίες ποιοτικού έλέγχου. Χρονικό διάστημα επαναρύθμισης της καμπύλης: 2 εβδομάδες. Δείγματα Ελέγχου Ποιότητας: Χρησιμοποιήστε ορούς ελέγχου ή δεξαμενές ορών τουλάχιστον δύο επιπέδων (ψηλό και χαμηλό) C-πεπτιδίου.

Αναμενόμενες τιμές

Ορός και Ηπαρινισμένο Πλάσμα: Δείγματα ορού που συλλέχθηκαν από 136 νηστικούς εθελοντές εργαστηρίων και αναλύθηκαν με τη μέθοδο IMMULITE 2000 C-Peptide έδωσαν μέση τιμή 2,2 ng/mL (0,7 nmol/L; 728 pmol/L) και ένα μη παραμετρικό κεντρικό 95% εύρος αναφοράς 0,9 – 7,1 ng/mL (0,3 – 2,4 nmol/L; 298 – 2 350 pmol/L)

Ούρα: Δείγματα ούρων 24-ωρών που συλλέχθηκαν από 82 προφανώς υγιείς εθελοντές και αναλύθηκαν με τη μέθοδο IMMULITE 2000 C-Peptide έδωσαν μέση τιμή ± SD 77 ± 59 µg/day, με εύρος από 3,6 έως 253 µg/day, αντιπροσωπεύοντας το κεντρικό 95% των μετρήσεων. Εκλάβετε αυτά τα όρια σαν οδηγούς μόνο. Κάθε εργαστήριο πρέπει να καθορίσει τα δικά του εύρη αναφοράς.

Περιορισμοί Επειδή ο μεταβολισμός του C-πεπτιδίου διαφέρει από αυτόν της ινσουλίνης, τα επίπεδα του C-πεπτιδίου είναι ένας άριστος ημιποσοτικός δείκτης της έκκρισης ινσουλίνης. Ο χρόνος ημιζωής


του C-πεπτιδίου στο πλάσμα έχει προσδιοριστεί στα 30 λεπτά περίπου, ενώ ο αντίστοιχος της ινσουλίνης είναι περίπου 5 λεπτά. Εξαιτίας της διαφοράς στο χρόνο ημιζωής, το C-πεπτιδίο κυκλοφορεί στο πλάσμα σε περίπου πενταπλάσια επίπεδα από αυτά της ινσουλίνης, παρόλο που τα δύο αυτά μόρια εκκρίνονται σε ισομοριακό λόγο. Πάλι, το ήπαρ παίζει κύριο ρόλο στην κάθαρση της ινσουλίνης, ενώ το C-πεπτιδίο απομακρύνεται με αποικοδόμηση και αποβολή κυρίως μέσω των νεφρών. Γι’ αυτό ηπατκές και νευρικές δυσλειτουργίες θα επηρεάσουν το λόγο C-πεπτιδίου/ινσουλίνη στην κυκλοφορία. Τα ετεροφιλικά αντισώματα που περιέχονται στον ανθρώπινο ορό μπορεί να αντιδράσουν με τις ανοσοσφαιρίνες που περιλαμβάνονται στα συστατικά της εξέτασης έχοντας ως αποτέλεσμα την παρεμβολή τους στις ανοσομετρικές εξετάσεις in vitro. [Βλ. Boscato LM, Stuart MC. Heterophilic antibodies: a problem for all immunoassays. Clin Chem 1988:34:27-33.] Δείγματα από ανθρώπους που εκτίθενται συχνά σε ζώα ή σε προϊόντα ορού ζώων μπορεί να έχουν τέτοια παρεμβολή και ως εκ τούτου λανθασμένο αποτέλεσμα. Τα αντιδραστήρια σχεδιάστηκαν έτσι ώστε να ελαχιστοποιείται αυτός ο κίνδυνος; παρόλα αυτά, ενδεχόμενες αλληλεπιδράσεις μεταξύ κάποιων σπάνιων ορών και των συστατικών της εξέτασης μπορεί να συμβούν. Για διαγνωστικούς σκοπούς, τα αποτελέσματα αυτής της εξέτασης πρέπει πάντοτε να συνδυάζονται με την κλινική εξέταση, το ιστορικό του ασθενούς και άλλα ευρήματα.

Απόδοση Δείτε παρακάτω τους πίνακες και τα γραφικά που αναπαριστούν την απόδοση της εξέτασης. Τα αποτελέσματα εκφράζονται σε ng/mL. (Εκτός αν κάτι σημειώνεται διαφορετικά, όλα πραγματοποιήθηκαν σε δείγματα ορών που συλλέχθηκαν σε σωλήνες χωρίς παρεμποδιστές πηκτών ή προσθετικών που προκαλούν θρόμβους.) Συντελεστές Μετατροπής: ng/mL × 0,331 → nmol/L ng/mL × 331 → pmol/L Εύρος μέτρησης: 0,1 – 20 ng/ml (0,03 – 6,6 nmol/l; 33 – 6 620 pmol/l)

Τυποποιημένο με το WHO 1st IRP 84/510. Αναλυτική ευαισθησία: Όριο του τυφλού (η υψηλότερη αναμενόμενη τιμή για δείγμα χωρίς αναλύτη που προσδιορίζεται σύμφωνα με την CLSI EP17-A13): 0,05 ng/mL (0,02 nmol/L, 17 pmol/L) Όρια της ανίχνευσης (χαμηλότερη ανιχνεύσιμη συγκέντρωση που προσδιορίζεται σύμφωνα με την CLSI EP17-A13): 0,08 ng/mL (0,03 nmol/L, 27 pmol/L) Λειτουργική Ευαισθησία: (συγκέντρωση με 20% συντελεστή διασποράς (CV) που προσδιορίζεται σύμφωνα με τις CLSI EP17-A13 και CLSI EP5-A214): 0,08 ng/mL (0,03 nmol/L, 27 pmol/L) Επίδραση Φαινομένου Hook: Δεν εμφανίζεται μέχρι τις 3 560 ng/mL. Ακρίβεια: Τα δείγματα αναλύθηκαν εις διπλούν για 10 ημέρες, με τέσσερα τρεξίματα την ημέρα για ένα σύνολο 40 τρεξιμάτων και 80 επαναλήψεων. (Βλ. Πίνακα ‘Precision”) Γραμμικότητα: Δείγματα ορού αναλύθηκαν με διάφορες αραιώσεις. (Βλ. Πίνακα “Linearity”). Ανάκτηση: Κάποια δείγματα (1 με 19) εμπλουτίστηκαν με τρία διαλύματα C-πεπτιδίου (23, 50 και 107 ng/mL) και αναλύθηκαν. (Βλ. Πίνακα “Recovery” για τα αντιπροσωπευτικά δείγματα). Ειδικότητα: Το αντίσωμα εμφανίζει υψηλή ειδικότητα για το C-πεπτίδιο. (Βλ. πίνακα "Specificity".) Χολερυθρίνη: Παρουσία δεσμευμένης και αδέσμευτης χολερυθρίνης σε συγκεντρώσεις πάνω από 200 mg/L μπορεί να προκαλέσουν πτώση των τιμών. (Βλ. Πίνακα “Bilirubin”). Αιμόλυση: Παρουσία αιμοσφαιρίνης σε συγκεντρώσεις μέχρι 500 mg/dL δεν επιδρά στα αποτελέσματα της εξέτασης, μέσα στα όρια ακρίβειας της ανάλυσης. Λιπιδαιμία: Παρουσία τριγλυκεριδίων σε συγκεντρώσεις μέχρι 3 000 mg/dL δεν επιδρά στα αποτελέσματα της εξέτασης, μέσα στα όρια ακρίβειας της ανάλυσης. Εναλλακτικοί Τύποι Δείγματος: Για να αξιολογηθεί η επίδραση διαφορετικών τύπων δείγματος, συλλέχθηκε αίμα από εθελοντές σε απλούς σωλήνες, σε


σωλήνες με ηπαρινισμένο πλάσμα, σε πλαστικούς σωλήνες κενού Becton Dickinson SST® και PST®. Σε ορισμένα δείγματα προστέθηκαν συγκεντρώσεις C-πεπτιδίου ώστε να επιτευχθούν τιμές μέσα σε ολόκληρο το εύρος αναφοράς της μεθόδου. Όλα τα δείγματα αναλύθηκαν με τη μέθοδο IMMULITE 2000 C-Peptide, με τα ακόλουθα αποτελέσματα: (Ηπαρίνη) = 0,93 (Ορός) + 0,67 ng/mL r = 0,99 n = 43

(PST) = 0,94 (Ορός) + 0,45 ng/mL r = 0,99 n = 43

Μέσοι όροι: 5,3 ng/mL (Ορός) 5,6 ng/mL (Ηπαρίνη) 5,4 ng/mL (PST)

(SST) = 0,99 (Απλοί σωλήνες) + 0,15 ng/mL r = 0,99 n = 42

Μέσοι όροι: 5,1 ng/mL (Ορός) 5,2 ng/mL (SST)

Σύγκριση Μεθόδου–Ορός: Η μέθοδος συγκρίθηκε με τη μέθοδο IMMULITE 2000 C-Peptide (L2KPE) σε 89 δείγματα ορού. (Εύρος συγκέντρωσης: περίπου 1,2 – 6,9 ng/mL. Δείτε γράφημα 1.) Με γραμμική παλινδρόμηση: (IML 2000 L2KPEP) = 0,94 (IML 2000 L2KPE) – 0,30 ng/mL r = 0,923

Μέσοι όροι: 2,9 ng/mL (IMMULITE 2000 L2KPEP) 3,4 ng/mL (IMMULITE 2000 L2KPE)

Σύγκριση Μεθόδου–Ούρα: Η μέθοδος συγκρίθηκε με τη μέθοδο IMMULITE 2000 C-Peptide (L2KPE) σε 87 δείγματα ούρων. (Εύρος συγκέντρωσης: περίπου 0,6 – 6,9 ng/mL. Δείτε γράφημα 2.) Με γραμμική παλινδρόμηση: (IML 2000 L2KPEP) = 1,01 (IML 2000 L2KPE) – 0,33 ng/mL r = 0,969

Μέσοι όροι: 3,3 ng/mL (IMMULITE 2000 L2KPEP) 3,6 ng/mL (IMMULITE 2000 L2KPE)

Τεχνική Υποστήριξη Για τεχνική υποστήριξη αποταθείτε στον αντιπρόσωπο της χώρας σας. www.siemens.com/diagnostics

Το Σύστημα Ποιότητας της Siemens Healthcare Diagnostics Products Ltd. είναι επικυρωμένο με ISO 13485:2003.

Polski

IMMULITE 2000 C-Peptyd Przeznaczenie: Test diagnostyczny in vitro dla analizatorów systemów IMMULITE 2000 — do ilościowego oznaczenia poziomu C-peptydu w surowicy, osoczu heparynowym lub moczu, przydatny do diagnozowania i leczenia chorych z nieprawidłowym wydzielaniem insuliny. Numery katalogowe: L2KPEP2 (200 testów), L2KPEP6 (600 testów) Kod Testu: PEP Kolor: Ciemnoniebieski

Wprowadzenie Ludzki C-peptyd ma postać łańcucha zbudowanego z 31 aminokwasów i masę około 3 020 D. Nieczynny metabolicznie, powstaje w komórkach β trzustki jako produkt uboczny enzymatycznego rozszczepienia proinsuliny do insuliny.1,2,5 W trakcie tego procesu insulina i C-peptyd zostają oddzielone od prohormonu i wydzielone do krążenia wrotnego w równomolowych stężeniach,4,5,7 co decyduje o klinicznej przydatności oznaczenia C-peptydu w osoczu. W pewnych granicach poziom C-peptydu jest znaczącym wskaźnikiem wydzielania insuliny. Niskich stężeń C-peptydu oczekuje się przy upośledzonym wydzielaniu insuliny, jak w cukrzycy insulinozależnej lub przy pełnym zahamowaniu jej wydzielania w prawidłowej odpowiedzi na leczenie egzogenną insuliną; natomiast podniesione stężenia C-peptydu mogą być wynikiem wzmożonej aktywności komórek β w przypadku insulinomy.3,4,6,9 W związku z powyższym w diagnostyce różnicowej hipoglikemii oznaczenie C-peptydu może być stosowane obok pomiaru insuliny do ustalenia wskaźnika aktywności trzustki w klasycznym teście postu 72-godzinnego, lub jako samodzielny wskaźnik aktywności trzustki w teście sprawdzającym zdolność


hamowania wydzielania insuliny po jej egzogennym podaniu1,8. Ponadto samoistne wydzielanie insuliny może być faktycznie wykluczone jako przyczyna hiperinsulinemii poprzez stwierdzenie podniesionych poziomów C-peptydu.2,3,8,9 U chorych leczonych insuliną stwierdza się w krążeniu przeciwciała anty-insulinowe, które wpływają na immunoenzymatyczne metody oznaczania insuliny. Decyduje to o nieprzydatności takich testów u wspomnianych osób, w celu określenia szczątkowej aktywności komórek β, nawet przy zawieszonej chwilowo terapii. Alternatywą w takich przypadkach staje się oznaczenie C-peptydu, pośrednio monitorujące wydzielanie insuliny przez trzustkę w obecności przeciwciał anty-insulinowych. Test taki dostarcza informacji o dotychczasowym przebiegu zależnej od insuliny cukrzycy, pozwala na pośredni monitoring wydzielania insuliny w obecności przeciwciał anty-insullinowych, pomagając ustalić odpowiedni przebieg kuracji.3,6,7,10 Oznaczenie C-peptydu jest także dodatkowo stosowane w teście tolerancji glukozy oraz w teście po podaniu glukozy i glibenclamide.2,3,10

Zasada testu Test IMMULITE 2000 C-Peptyd jest chemiluminescencyjnym, dwupunktowym, immunometrycznym testem fazy stałej. Faza stała (kulka) opłaszczona jest mysim przeciwciałem monoklonalnym anty-C-peptyd. Faza ciekła składa się z fosfatazy alkalicznej (izolowanej z jelita cieląt) sprzęgniętej z mysim przeciwciałem monoklonalnym anty-C-peptyd w buforze. Próbka badana i odczynnik inkubowane są przez 30 minut z opłaszczoną kulką. W trakcie inkubacji, C-peptyd z próbki tworzy kanapkowy kompleks z przeciwciałami – z monoklonalnym przeciwciałem anty-C-peptyd na kulce i przeciwciałem anty-C peptyd z koniugatu z enzymem w odczynniku. Niezwiązana próbka i odczynnik usuwane są przez płukanie połączone z wirowaniem. Ostatecznie, do probówki z kulką dodawany jest substrat chemiluminescencyjny, a generowany sygnał jest proporcjonalny do ilości związanego enzymu.

Czas inkubacji: 1 x 30 minut. Czas do pierwszego wyniku: 35 minut.

Preparatyka próbek Surowica i osocze heparynowe: Badany powinien być na czczo. Krew pobierać przez nakłucie żylne12 do probówek zwykłych lub z heparyną, notować czas pobrania, oddzielać surowicę lub osocze od składników morfotycznych. Zalecane jest klarowanie próbek lipemicznych przez ultrawirowanie. Hemoliza próbki może świadczyć o nieprawidłowym postępowaniu z próbką na etapie przedlaboratoryjnym. Fakt ten należy brać pod uwagę przy interpretacji wyników. Osocze pobrane na EDTA lub fluorek sodu nie jest odpowiednim materiałem do oznaczenia. Odwirowanie próbki krwi przed zakończeniem wykrzepiania może spowodować, że w supernatancie pozostanie fibryna stanowiąca przyczynę fałszywych wyników. Przed przystąpieniem do wirowania należy mieć pewność, że skrzep jest ostatecznie uformowany. Niektóre próbki, a zwłaszcza pochodzące od osób poddanych leczeniu antykoagulantami, wymagają dłuższego czasu na wytworzenie skrzepu. W zależności od producenta probówki do pobierania krwi mogą różnie wpływać na uzyskiwane wyniki. Istotne jest tworzywo i czynniki dodatkowe jak żel lub bariery oddzielające skrzep, aktywatory krzepnięcia oraz antykoagulanty. Wpływ wszystkich możliwych wariantów probówek na test IMMULITE 2000 C-peptyd nie został określony. Informacje o przetestowanych wariantach podano w akapicie Wpływ rodzaju materiału na oznaczenie. Przechowywanie: Oznaczyć w ciągu 2–3 godzin, lub zamrozić w –20°C na 1 tydzień.11

Mocz – zbiórka i przechowywanie: Mocz ze zbiórki 24-godzinnej, bez konserwantów, przechowywany w trakcie zbiórki w 2–8°C. Zmierzyć objętość moczu i pobrać próbkę do oznaczenia po uprzednim dokładnym wymieszaniu


materiału. Przed oznaczeniem próbkę klarować przez wirowanie lub filtrację. Przechowywanie: W celu dłuższego przechowywania rozpipetować i zamrozić, stabilny w –20°C przez 30 dni. Współczynnik rozcieńczenia: Co najmniej 5x. Przy rozcieńczeniu 20x wyniki w moczu z wartościami prawidłowymi będą się mieściły w zakresie raportowania. (Dla próbek moczu należy wybrać współczynnik 5 lub 20 w Okienku Współczynnika Rozcieńczenia.

Wymagana objętość: 25 µL próbki surowicy, osocza lub moczu.

Ostrzeżenia i warunki wstępne Test diagnostyczny in vitro.

Odczynniki: Przechowywać w 2–8°C. Usuwać zgodnie z instrukcją.

Zachowywać środki ostrożności konieczne przy pracy z materiałem potencjalnie zakaźnym. W materiałach pochodzących z krwi ludzkiej wykluczono reaktywność w kierunku syfilisu, obecność przeciwciał anty-HIV1/2, HBsAg i przeciwciał anty-HCV.

Azydek sodu w stężeniu mniejszym niż 0,1 g/dL dodawany jest jako konserwant. Wykorzystane odczynniki usuwać w dużej ilości wody, by zapobiec osadzaniu azydku sodu w rurach miedzianych lub ołowianych, co może doprowadzić do wytworzenia potencjalnie wybuchowych azydków tych metali.

Substrat Chemiluminescencyjny: Unikać zanieczyszczenia i chronić przed bezpośrednim światłem słonecznym (Patrz ulotka).

Woda: Dejonizowana lub destylowana.

Elementy zestawu Elementy zestawu tworzą całość. Kody na wewnętrznych pokrywach pudełka są niezbędne do wykonania oznaczenia.

C-Peptyd Pojemnik z kulkami (L2PEP12) Z kodem kreskowym. 200 kulek opłaszczonych mysim przeciwciałem monoklonalnym anty-C-peptyd. Stabilne w 2–8°C do daty ważności.

L2KPEP2: 1 opakowanie. L2KPEP6: 3 opakowania.

C-Peptyd Klin odczynnikowy (L2PEPA2) Z kodem kreskowym. 11,5 fosfatazy alkalicznej (izolowanej z jelita cieląt) związanej z mysim przeciwciałem monoklonalnym anty-C-peptyd w buforze. Stabilne w 2–8°C do daty ważności. L2KPEP2: 1 klin. L2KPEP6: 3 kliny. Przed użyciem zerwać taśmę zabezpieczającą nie uszkadzając kodu kreskowego. Usunąć foliową uszczelką komór odczynnikowych. Wsunąć przesuwne zamknięcie komór w prowadnice w pokrywie klina.

C-Peptyd Kalibratory zestawu (LPEPL, LPEPH) Dwie fiolki (kalibrator niski i wysoki) zawierające liofilizat C-peptydu w buforowanej ludzkiej albuminie z konserwantem. Zawartość każdej fiolki rekonstytuować 4,0 mL wody destylowanej. Odstawić na 30 minut. Mieszać przez delikatne obracanie i odwracanie aż do całkowitego rozpuszczenia liofilizatu. Po rekonstytucji rozporcjować i zamrozić. Stabilne w –20°C przez 6 miesięcy. Wyrzucić po użyciu. L2KPEP2: 1 zestaw. L2KPEP6: 2 zestawy. Przed wykonaniem kalibracji umocować na probówkach odpowiednie nalepki z kodem kreskowym (dostarczane z zestawem) rozpoznawane przez czytnik kodów kreskowych aparatu.

Materiały dostarczane oddzielnie

C-Peptyd Rozcieńczalnik próbek (L2PEZ) Do automatycznego rozcieńczania próbek moczu i wysokich próbek surowicy/osocza. 25 mL koncentrowanej, gotowej do użycia, preparowanej, pozbawionej C-peptydu, buforowanej albuminy ludzkiej, z konserwantem. Po otwarciu stabilny 30 dni w 2–8°C lub 6 miesięcy w –20°C (rozpipetować). Wraz z rozcieńczalnikiem dostarczane są nalepki z kodami kreskowymi. Nalepkę umieścić na probówce (16 x 100 mm), by


umożliwić jej rozpoznanie przez czytnik kodów aparatu. L2PEZ: 3 nalepki. L2SUBM: Substrat chemiluminescencyjny L2PWSM: Roztwór płuczący L2KPM: Roztwór czyszczący igłę pipetora LRXT: Probówki reakcyjne (jednorazowe) L2ZT: 250 probówek do rozcieńczania próbek – 16×100mm L2ZC: 250 korków do probówek na rozcieńczalnik PECM: Trzy-poziomowy zestaw kontrolny C-peptydu. Ponadto niezbędne: woda destylowana lub dejonizowana, probówki, kontrole.

Procedura oznaczenia Przestrzeganie procedur dotyczących utrzymania aparatu, zawartych w „Podręczniku operatora do obsługi systemów IMMULITE 2000” poprawia charakterystykę uzyskiwanych wyników. Procedury: przygotowania aparatu, ustawień aparatu, przygotowania i rozcieńczania próbek, rekalibracji, oznaczenia i kontroli jakości zgodnie z „Podręcznikiem operatora do obsługi systemów IMMULITE 2000”. Zalecany odstęp pomiędzy Rekalibracjami: 2 tygodnie. Próbki kontrolne: Stosować kontrole lub pule surowic co najmniej o niskim i wysokim poziomie C-peptydu

Oczekiwane wartości

Surowica i osocze heparynowe: Pobrane na czczo próbki surowicy pobrane od 136 ochotników z laboratorium oznaczano w teście IMMULITE 2000 C-Peptyd uzyskując medianę 2.2 ng/mL (0,7 nmol/L; 728 pmol/L) i zakres nieparametrycznych środkowych 95% 0.9 – 7.1 ng/mL (0,3 – 2,4 nmol/L; 298 – 2 350 pmol/L)

Mocz: Próbki moczu z 24 godzinnej zbiórki uzyskano od 82 widocznie zdrowych ochotników i oznaczono testem IMMULITE 2000 C-Peptyd uzyskując średnią ± SD równą 77 ± 59 µg/dzień i zakres środkowych 95% 3,6 do 253 µg/dzień. Wartości te mają charakter orientacyjny. Każde laboratorium powinno opracować własne zakresy referencyjne.

Ograniczenia Ze względu na różnice w metabolizmie C-peptydu i insuliny, poziomy C-peptydu są w najlepszym razie pół-ilościowym wskaźnikiem wydzielania insuliny. Okres półtrwania dla C-peptydu w osoczu oszacowano na około 30 minut, podczas gdy dla insuliny wynosi on około 5 minut. Ze względu na te różnice poziom C-peptydu w osoczu jest około 5 razy wyższy niż insuliny, chociaż obydwa składniki powstają w równomolowych ilościach. Ponadto w usuwaniu insuliny główną rolę pełni wątroba, podczas gdy C-peptyd rozkładany i wydalany jest przez nerki. W związku z powyższym, schorzenia tych narządów zaburzają stosunek poziomu C-peptydu i insuliny w krążeniu. Przeciwciała heterofilne obecne w surowicy ludzkiej mogą wchodzić w reakcję z immunoglobulinami będącymi reagentami testu immunologicznego, wpływając na przebieg oznaczenia in vitro. [Porównaj: Boscato L.M., Stuart M.C.: Heterophilic antibodies: a problem for all immunoassays – Przeciwciała heterofilne - problem wszystkich testów immunologicznych. Clin. Chem. 1988: 34: 27-33]. Wpływ przeciwciał heterofilnych może ujawnić się w oznaczeniach wykonywanych w surowicy osób mających ciągły kontakt ze zwierzętami lub zwierzęcymi produktami krwiopochodnymi, stanowiąc potencjalną przyczynę błędnych wyników. W teście ryzyko interferencji przeciwciał heterofilnych zostało zminimalizowane przez odpowiedni dobór proporcji odczynników, tym niemniej interferencja taka może potencjalnie nastąpić w rzadkich przypadkach. W postępowaniu diagnostycznym wyniki uzyskane tą metodą powinny być z zasady interpretowane w połączeniu z badaniem klinicznym pacjenta, jego historią choroby oraz innymi okolicznościami.


Parametry testu Dane charakteryzujące test przedstawiono w tabelach i na wykresach. Wyniki podano w ng/mL. (O ile nie podano inaczej, wszystkie wyniki dotyczą próbek surowicy pobranych bez bariery żelowej i substancji przyspieszających krzepnięcie). Przelicznik ng/mL × 0,331 → nmol/L ng/mL × 331 → pmol/L Zakres raportowania: 0,1 – 20 ng/mL (0,03 – 6,6 nmol/L; 33 – 6 620 pmol/L) Standaryzacja wg WHO 1st IRP 84/510. Czułość analityczna: Zakres ślepej próby (najwyższa oczekiwana wartość dla próbki bez analitu; określona zgodnie z CLSI EP17-A13): 0,05 ng/mL (0,02 nmol/L, 17 pmol/L) Granica wykrywalności: (najniższe oznaczalne stężenie; określona zgodnie z CLSI EP17-A13): 0,08 ng/mL (0,03 nmol/L, 27 pmol/L) Czułość funkcjonalna: (stężenie z 20% współczynnikiem zmienności (CV) określona zgodnie z CLSI EP17-A13 i CLSI EP5-A214): 0,08 ng/mL (0,03 nmol/L, 27 pmol/L) Efekt wysokiej dawki — Hook Effect: Nie występuje do stężenia 3 560 ng/mL. Precyzja: Próbki oznaczano przez okres 10 dni w duplikatach, cztery razy dziennie, co dało w sumie 40 serii i 80 powtórzeń. (patrz: tabela Precyzja). Liniowość: Oznaczano próbki poddane kolejnym rozcieńczeniom (patrz: tabela Liniowość). Odzysk: Oznaczano próbki surowicy wzbogacane w stosunku objętościowym 1 do 19 trzema roztworami C-peptydu w stężeniach kolejno: 23, 50 i 107 ng/mL. (patrz: tabela Odzysk). Specyficzność: Przeciwciało jest wysoce specyficzne w stosunku do C-peptydu. (patrz: tabela Specyficzność). Bilirubina: Obecność bilirubiny związanej i niezwiązana w stężeniu do 200 mg/L może obniżać wyniki (patrz: tabela Bilirubina). Hemoliza: Obecność hemoglobiny w ilości do 500 mg/dL nie wpływa na wynik w charakterystycznym dla testu zakresie precyzji.

Lipemia: Obecność trójglicerydów w stężeniu do 3 000 mg/dL nie ma znaczącego wpływu na wynik w charakterystycznym dla testu zakresie precyzji. Wpływ rodzaju materiału na oznaczenie: Wpływ rodzaju próbki na oznaczenie określano w próbkach krwi pobieranych od ochotników do probówek systemu Vacutainer BD: zwykłych, z heparyną, probówek SST® i PST®. Niektóre próbki wzbogacano C-peptydem dla uzyskania wartości w całym zakresie raportowalności i oznaczano testem IMMULITE 2000 C-Peptyd, uzyskując wyniki: (Heparyna) = 0,93 (Surowica) + 0,67 ng/mL r = 0,99 n = 43

(PST) = 0,94 (Surowica) + 0,45 ng/mL r = 0,99 n = 43

Średnie: 5,3 ng/mL (Surowica) 5,6 ng/mL (Heparyna) 5,4 ng/mL (PST)

(SST) = 0,99 (Zwykła probówka) + 0,15 ng/mL r = 0,99 n = 42

Średnie: 5,1 ng/mL (Surowica) 5,2 ng/mL (SST)

Porównanie metod–Surowica: Test porównywano z testem IMMULITE 2000 C-Peptyd (L2KPE) w grupie 89 próbek surowicy.(Zakres stężeń: około 1,2 – 6,9 ng/mL. Wykres 1.). Otrzymano następujące równanie regresji liniowej: (IML 2000 L2KPEP) = 0,94 (IML 2000 L2KPE) – 0,30 ng/mL r = 0,923

Średnie: 2,9 ng/mL (IMMULITE 2000 L2KPEP) 3,4 ng/mL (IMMULITE 2000 L2KPE)

Porównanie metod–Mocz: Test porównywano z testem IMMULITE 2000 C-Peptyd (L2KPE) w grupie 87 próbek moczu.(Zakres stężeń: około 0,6 – 6,9 ng/mL. Wykres 2.). Otrzymano następujące równanie regresji liniowej: (IML 2000 L2KPEP) = 1,01 (IML 2000 L2KPE) – 0,33 ng/mL r = 0,969

Średnie: 3,3 ng/mL (IMMULITE 2000 L2KPEP) 3,6 ng/mL (IMMULITE 2000 L2KPE)


Pomoc techniczna i konsultacje Krajowy Dystrybutor udziela wszechstronnej pomocy technicznej. www.siemens.com/diagnostics

System Kontroli Jakości Siemens Healthcare Diagnostics Products Ltd. posiada Certyfikat Jakości ISO 13485:2003.

IMMULITE® is a trademark of Siemens Healthcare Diagnostics.

©2008 Siemens Healthcare Diagnostics Inc. All rights reserved.

Origin: UK

Siemens Healthcare Diagnostics Products Ltd. Llanberis, Gwynedd LL55 4EL United Kingdom

2008-07-29

PIEL2KPEP – 3 {7}

Changes in this Edition: cc#17988: Updated IMMULITE 2000 to IMMULITE 2000 Systems on front cover, and in Intended Use and Procedure sections. cc#18063: Updated Company name to Siemens Healthcare Diagnostics. Added country of origin, website address, trademark and copyright statements, symbol glossary section. Standardized Technical Assistance section, changed the phone number. Removed all occurrences of CDC and CLIA Codes.

Understanding the Symbols Understanding the Symbols En English

Vysvětlivky symbolů Cz Česky

Επεξήγηση των συμβόλων El Ελληνικά

Znaczenie symboli Pl Polski

The following symbols may appear on the product labeling: / Na štítku výrobku mohou být uvedeny následující symboly: / Τα ακόλουθα σύμβολα ενδέχεται να εμφανίζονται στην επισήμανση του προϊόντος: / Na etykietach produktu mogą pojawiać się poniższe symbole:

Symbol Definition

En: In vitro diagnostic medical device Cz: Zdravotnický prostředek pro in vitro diagnostiku El: In vitro διαγνωστική ιατρική συσκευή Pl: Sprzęt do medycznej diagnostyki in vitro

En: Catalog Number Cz: Katalogové číslo El: Αριθμός καταλόγου Pl: Numer katalogowy

En: Manufacturer Cz: Výrobce El: Κατασκευαστής Pl: Producent

En: Authorized Representative in the European Community Cz: Autorizované zastoupení v Evropské unii El: Εξουσιοδοτημένος αντιπρόσωπος στην Ευρωπαϊκή Κοινότητα Pl: Autoryzowany przedstawiciel w Unii Europejskiej

En: CE Mark Cz: CE značka El: Σήμανση CE Pl: Znak CE

En: CE Mark with identification number of notified body Cz: CE značka s identifikačním číslem notifikovaného orgánu El: Σήμανση CE με αριθμό αναγνώρισης του φορέα πιστοποίησης Pl: Znak CE z numerem identyfikacyjnym jednostki notyfikowanej

En: Consult instructions for use Cz: Postupujte podle návodu k použití El: Συμβουλευτείτε τις οδηγίες λειτουργίας Pl: Zapoznać się z instrukcją użycia

En: Caution! Potential Biohazard Cz: Pozor! Potenciální biohazard El: Πρoσοχή! Δυνητικός βιολογικός κίνδυνος Pl: Uwaga! Potencjalne zagrożenie biologiczne


Symbol Definition

En: Temperature limitation (2–8°C) Cz: Teplotní rozsah (2–8°C) El: Περιορισμός θερμοκρασίας (2–8°C) Pl: Zakres temperatury (2–8°C)

En: Upper limit of temperature (≤ -20°C) Cz: Horní teplotní limit (≤ -20°C) El: Ανώτερο όριο θερμοκρασίας (≤ -20°C) Pl: Górny zakres temperatury (≤ -20°C)

En: Lower limit of temperature (≥2°C) Cz: Spodní teplotní limit (≥2°C) El: Κατώτερο όριο θερμοκρασίας (≥2°C) Pl: Dolny zakres temperatury (≥2°C)

En: Do not freeze (> 0°C) Cz: Nezmrazovat (> 0°C) El: Μην καταψυΧετε (> 0°C) Pl: Nie zamrażać (> 0°C)

En: Do not reuse Cz: Pro jednorázové použití El: Μην κάνετε επαναληπτική χρήση Pl: Nie używać powtórnie

En: Keep away from sunlight Cz: Chraňte před slunečním světlem El: Διατηρείτε μακριά από το ηλιακό φως Pl: Chronić przed światłem słonecznym

LOT

En: Batch code Cz: Šarže El: Κωδικός παρτίδας Pl: Kod serii

En: Contains sufficient for (n) tests Cz: Dostatečné množství pro (n) testů El: Περιεχόμενο επαρκές για (n) εξετάσεις Pl: Zawartość wystarczająca na (n) testów

2008-01 En: Date format (year-month) Cz: Formát data (rok-měsíc) El: Μορφή ημερομηνίας (έτος-μήνας) Pl: Zapis daty (rok-miesiąc)

Symbol Definition

En: Use by Cz: Spotřebujte do El: Ημερομηνία λήξης Pl: Wykorzystać do

En: Harmful Cz: Škodlivé El: Επιβλαβές Pl: Szkodliwy lub drażniący

En: Corrosive Cz: Korozivní El: Διαβρωτικό Pl: Żrący

En: Toxic Cz: Toxické El: Τοξικό Pl: Toksyczny

En: Dangerous for the environment Cz: Nebezpečné pro životní prostředí El: Επικίνδυνο για το περιβάλλονPl: Niebezpieczny dla środowiska

BEAD PACK

En: Bead Pack Cz: Zásobník s kuličkami El: Συσκευασία σφαιριδίων Pl: Pojemnik z kulkami

TEST UNIT

En: Test Unit Cz: Testovací JednotkyEl: Μονάδες ανάλυσηςPl: Jednostki testowe

REAG WEDGE

REAG WEDGE A

REAG WEDGE B

REAG WEDGE D

En: Reagent Wedge Cz: Reagencie El: Δοχείο Αντιδραστηρίων Pl: Klin odczynnikowy

ADJUSTOR

En: Adjustor Cz: Kalibrátor El: Ρυθμιστής Pl: Kalibrator

ADJUSTOR L

En: Adjustor, low Cz: Kalibrátor, nízký El: Ρυθμιστής, χαμηλό Pl: Kalibrator, niski

ADJUSTOR H

En: Adjustor, high Cz: Kalibrátor, vysoký El: Ρυθμιστής, υψηλό Pl: Kalibrator, wysoki


Symbol Definition

ADJUSTOR AB

En: Adjustor Antibody Cz: Protilátka proti kalibrátoru El: Ρυθμιστής αντισώματος Pl: Przeciwciało Kalibratora

DIL

En: Sample Diluent Cz: Diluent Vzorků El: Αραιωτικό δείγματοςPl: Rozcieńczalnik próbek

CONTROL

CONTROL 1

CONTROL 2

CONTROL 3

En: Control Cz: Kontrola El: Έλεγχος Pl: Kontrola

CONTROL +

En: Positive Control Cz: Pozitivní kontrola El: Θετικός Έλεγχος Pl: Kontrola dodatnia

CONTROL + L

En: Low Positive Control Cz: Mírně pozitivní kontrola El: Χαμηλός Θετικός Έλεγχος Pl: Kontrola nisko dodatnia

CONTROL –

En: Negative Control Cz: Negativní kontrola El: Αρνητικός Έλεγχος Pl: Kontrola ujemna

CONTROL AB

En: Control Antibody Cz: Protilátka proti kontrole El: Έλεγχος αντισώματος Pl: Przeciwciało Kontrolne

PRE A

PRE B

En: Pretreatment Solution Cz: Roztok na úpravu vzorků El: Διάλυμα προ-επεξεργασίας Pl: Roztwór do wstępnej preparatyki

Symbol Definition

DITHIOTHREITOL

En: Dithiothreitol Solution Cz: Roztok dithiotreitolu El: Διάλυμα διθειοθρεϊτόλης Pl: Roztwór dithiothreitolu

BORATE-KCN BUF

En: Borate-KCN Buffer Solution Cz: Pufrový roztok boritan-KCN El: Ρυθμιστικό διάλυμα Βορικού-KCNPl: Bufor boranowo-cyjankowy

test de hormona peptido c.pdf

Documents