sumber: jurnal majalah - repositori digital:...

SUMBER:

JURNAL&

MAJALAH

This is an authorized facsimile. made from the microfilmmaster copy of the original dissertation or masters thesispublished by UMI.

The bibliographic information for this thesis is contained inUMI's Dissertation Abstracts database, the only centralsource for accessing almost every doctoral dissertationaccepted in North America since 1861.

UMI Dissertation• • Information Service

UniverSity Microlilms ImernallonalA Bell & HOW'eli Informahon Company

300 N Zeeb Road. Ann Arbol, Michigan 48106800-521·0600 OR 3131761·4700

Printed in 1992 by xerographic processon :It·id·f~e paper

lUG

Ordu Numbu 8918649

Modulation of tran.lationaJ fidelity by .mall .lIubunit rlbo8omaJRNA from E,~h£n·~hia ~oli

Abdul-Latif, Fazilah, Ph.D.

O~OIl St~« Ulli~... ity, 1988

UM·!300 N. L:cb Rd.Ann A!tltJr,!on .18106

'y

A nlI:SIS

.~ltted to

1n pAethl tu1~l1~nt ott:l. nquu·...nu !or tll<l

deq-ne ot

DOctor ot ~ilDaQpny

COllpleted OoIeellber 12. 1988

APPROVED:

Professor ot BiophySics 1n cnarge oe ~jor

Cha.1=an ot r~ent of 3iocne=~stry and 3iophysics

c.,~·LOm 0' Gu'.~o'J""'''''-------------------

Date esis is pr.s.nt~ c.ce",ber 12. 988

Typed by sa rba r. H. nson tor ...:F:.,:.:.;z:.;l::.;l::;05::.;n:.:....;.:Abd=u=l_-..:La:::..:t;.:l;.:t:...- _

5- 8293

.. I:;1'ROOUCT ION ..••......••••••.•••••••••••••••..•••..••••••.

1.1 General Ae~ct:ll of ;>rote in S'ynth•• le •••.••••••••••..

1.1.11. 1. 21.1.3

'.2

,..

11\1tU.1:1on of ProUtn Syntn•• u ...•.•......• ",. _...£101\<)11 tion Step ot Protein S)'1IUlesl:1l •..••••....••••Pepu,;!. Chell' !'l!Ir.:llnetl01\ •....•..•••••••••••••••..

Requletlon ot 7T.nalatlon During [ubacterlelIn1t1.t101l .The Slqnlt1cance of the ShLn. lind Da1q o sequenceIn E:lIbactlrla •........... _•...•.....................Reeerenc••.•............... ' •.........•....•......

2,,

""2. ESCHERICHIA COLI 3'-TER."IIl'fAL Ir,S rR~A SEQUENCE :1ODUU'::!;O

rIOE'LITY OURI:O:C TRAASU'UON. .••.• ••• .•••• •••••. ••••. •.•... 18

2. ,2.2'-'2.'

'2.4.1

2.4.2'.4.3

2.•. 4

2.5

2.').1

2.5.2

2.'2.'

Abstt".ct ..•.............•..•.•. _•...................In tt"odllctlon ..•.............•.•••••..•••.•••••............. t.r:t.l. and ~tllodll..................•.....••.....Resulta ........•..•.•.....•................•........

O<Il.tion of ). -'!'a r.:lln. 1 Sucleotide. On165 rRNA .Reconstitution Of lOS ;>artich•......•...••........PToto1n Coepo.ltlon ot Recon.tltutadP.r:tlclos ..••.............•.................•......In VItro '!'ran.lotlon A,n"ly.l •...........•...•......

Ol.CUa.lOn .•..............•............•.....•......

)05 Racon.t1tutlon •....•.•..........•.•..•..•......F'ldallty In '!'r"n.Latlon..........•.......•..•......

Ackn_l.d..... nt•.....................................Ra faranca •..•.......................................

"20

"""30

""

"".."

). PRO'I'[IN SEQUEScr A/'I"'LYSIS OF' 1'152 IN VITRO TIU.NSLATIONP~DUC':'................................................... 51

1.1 Introduction 51),2 1'.lItar141. 4nd .'M'tl':ods 5)).1 Rssul tS and 01scu.slon........................ .. .. .. 541.4 Rotsr:anc.s 55

4. PHE~OL 30RO~A~[ COL~~ ~~IONATION O~ HIG~ MOLECULA~

WEIGHT R.~"'""""""",.,."""""""""" ';6

,. ,'.J'.J4.3.14.3.2

,.,'.S,.,

AJ:>.uac:t ..••.•........•.......•.......•.•.......Introduc:tlon ..•....•...••••....•......•..•.•........~.. terl.l. and ~tnod••...•.••.••...•..••.•.......•..

!Ioron.te Col=n' .sa"ple ?'cepar.tlon ••.•.••.•..•.••.•..••.•.........•

Re.ultA and 01."", ••10n •••••••••••••••••••••••.•.••••"'::otnovl.dqm.nt••...••.••......•......•.•.••.•.•.....b t.r,nc:e••....•.•.•....•....•....•.•••..•..•.......

""""""""

S. 8ISLIOCRAPHY ••••••••••••.••••..•••••.••••••••••••••••••••• 74

6. Al'PEml1X •••....••••.••.•.•••••••••••••••••••••••••.••••.•• 81

6.1 In vitrO u·.n'l.tlon ••••y prl:=.ed lth M52 lIIRli 81

L1S"l' Of' PICUi'.£S

Ptq. I-I SCI'l.... t.1e dtAqr". "n_1:1g lnttUUon of prouln"yntl'l._l. til .ublet..r1".............................. 3

Ptq. 1-2 SCr..m"ue d1"qr"1lI _n_1nq 'lono;"tlon of prote1n_yntne.1_ 11'1 'ublet.'r1A.................. .••......... 6

P1g. 1-3 SCn_"Ue dl.gr.... Out11nlnq t.raln.Uon ot DrOUln_yntnee1_ 1. 'ublc:t..rlA.............................. 9

FIq. 2-1 scn.=auc ._1nq tile .trateqy tor RNA.' H

3'-tenln"1 d"l"tlon. 11'1 16S rRNA•...•.••.•.•..•..... 22

Flq. 2-3 ""'tor"d..oqr"pn ot e_p1ete iI.'I"A" .1 dlq... t10n otHiS rllNA ."d 16$ -..obj.cted to 1'..'I"...e it urge teddlq•• tlon .••••.•.•.•.•.••••.....••.•.•.••••..••..••.. )I

PIg. 2-' S.dl_nUluon proUle ot 30S pIlrtleh. recon.Utut.edvu.n R.>q.e R .ture<l [HpJ_pCp Libeled 165 rlUi'A •••.•• 3'

rlg. 2-S Los.r d.n.lt._ter SCAn. ot polYAeryl ..mld."'PAr"uon. ot 30S prOt.tn ~rOtl 1'10..... 1 30Sp.~lcle••"d PArtlcle. reeon.tltuted ue1nq3'-terwll1&1 deleted 16S rll...-IA .....••..•.....••.•....•. 36

Fig. 2-6 Poly.cryl.aalde qel ehetropl'loude ot baet.rlophAq.MS2 protelne .yntl'le.1red 11'1 vitrO by elteredrlt>o.o :7.~.................... 40

Ch.pter 4

Flg. '_1 CoIUQn cllr_t09r"pl'llc "PAr"non ot 16S rRNA onPBA-30 •.••..•....•........•.....•.•.........•........ 6'

r1q. '-2 Colu=ln c:nroa.at09r.. pntc: ••parat.10n of 16S tRIIA onP9,1,-10. . .. .... .•••.. .•.•.. ..••..•.•.. ..•. .... ... ..... 67

1'1'1. 4_1 Colu::>n C:1Ir-..tQ<j'~.. pn1; Mp.tr.. uon ot 165 ~~'l,\ on?!l,\-60. . •• . • •. • . • . . .• • . . . . . .• . . . . . .• . •. . . . • . • . • . .• . . . 59

T1q. 4_4 '\utondlQ<j'~"pl'I ot .. poly.. cry1.a=lde .hootln'l' ]. _el'ldl ..oeled 165 rJl.S,\ ••••••••••...•...•••..••••••••••.••.• 7'

'1'1. 6-1 ,\ p~opo.ed .econdanr .truc:tur" !o~ 16S r1DoIIOl:laL~loonuclelC:: ecld..................................... 82

r1'1'. 6-2 Alltond1oqu.pn ot S'-end Jlp_lat>ehd 10 baa.. lan'l'tnot OS,\ probe (p-r,UCCACGTC).......................... 84

'1'1. 6-1 Sedl".nYUon protn. ot toUI ~'\. In !.~ 01\

.uc~o..e g~adl.nt..................................... 86

'lq. 6_04 ,\utor,t.dloqrapl'lot)· -.nd JlP_labeled 165 rJI.!'!A trc."uo;:ro.e g~adi.nt........................•.•.. . .• .. ... a8

Plg. 6-5 Sedi_nuUQn P~QtU. ot (S·_J2p lpCp 16S rll!'!'" on ..• w;:~o•• qradl.nt..................... .•••...•.•.•.••. ')0

Plq ...-6 5edlQ.nutlon protne ot IS,_HPI_labeled Ie.; rll.,,,,.ubjeo;:Ud to tne ur.nn.i d.lation proc.dur.......... 92

rill'. 6-7 SIldl".nUUOn protne ot 70S r1.~• ...,e al,lbunlUi.olat1on ln IS-10' auc~o." gnd1ent................. 94

r19. 6-8 Standard CIlrv. to~ tn. Slo-Rad ;>rot.ln ......y ualnqal0-~d p~ot.ln .u.nd.. rd............................. 96

KOOULATION OF T~~5LATIONAL FID~ITY B¥ SHALL SUBUNIT

RIBOSOMAL RNA f'ROK E50lERIOUA COLI

I • INTRODUCTION

1. I c.nenl Aapecta ot Prouin 5ynthea:l.a

R:l.~aomea e~a el~nuclaopeote1n pertlc1ea tound 1n ell living

c:ell.. Ttley play e tundaClental cole 1n the bloayntheda ot peotdna.

They ae~v. to br1ng e a1ngle ~~A end eheeged tRNA molecules 1nto the

proper poa1u.on tor trenalct1on. Th.y u·••nzYIIlatic.lly eeUve 1n

torlling pepua. bond. dur1nq the polym.e1zaUon procaaa vhich y1alds

pE"otalna.

ThS moleculer composition ot the bact'E"iel elbaao,.. 1a v.ll kn~n

and ~st ot 1~ lIecromol.culeE" OOIIpon.nts a~. vall c:ha~aCt.rlz.d in

uro.. ot physical ehd pE"lIIary etJ:1>ctunl characudetice. ""

EecnerichU~ r1OO._e conYln. three speeus ot r1boaOlUl R..~A

(2)5, 165, SSI and approx1IUtely S2 prote1ns. It la dUUeul t to

's'lgn .pecUie rWll:tions to .sCh or tn. collpon.nt. a1nc. tn.y 'ppear

to oper.t. cooper.tively til both ribo.o Clbly and tr.nal.tion.

Tne No av.nta lnvolve protein-peote1n 11 •• pItoUin-Pw~A

lnur.ctlona (1,2,3).

Tne oyer.ll proce.~ or PE"Ot.ln eyntn.al. can be dlv1ded into thre•

• t.ooges; lnltUlUon, elong.tion .nd te",ln.Uon. The peoc••• in

g.ner.1 1•••••ntl.lly tne .... in bect.rt.l .nd euk.tyotlC .y.t.c•.

,

Ho..... v .... , olt t:o". :col"cul.... level there ate """jOt dltf .. t~nc.. ! in ~!'le

1n1t1....1.0n ph"''''. [n eUDolcterl .." tne Inlt14tl0n IIvent uk." pl"cft

prtor to tn. completIon of U"lInSCtlptton whll" In eukaryote .. tne =R~'"

15 proce..s post.u-a.,,,crlpttonally and Ule 1n1(1.... 10n process U1",e"

place 1n cytoplas:o (4). Tnts dlhe ..e"ce n......e"uIud In ..adtc.. l1y

varlant ~lecul.. r ...quir....... nts tor 1nltlatl0n.

1 • 1 _ , In!uatlon ot Protein Syntn.... ls

I'lgure 1 snovs " SCl'le<:lattc dl ..q ...... tor the Inlt1atlon of protlt1n

lIynt:'!,,!!! .. In lIubllcterill.

poLypeptide Cl\aln eynthesl" uquu:... the binding of lOS subunltll to a

Ipectf1c reqlon or :.IUI" pt""""'''01y Involv1ng Wolltson-Crtck t>e.se pelring

ot rn.. Shlne_Dillga",o eequence with J'-end of 165 rRN.... ThIS IS

followed by ~ .. t-tRN'" 0lndln'l to the lnlt1ator AUG codon. ThiS

prcx:eee requiree G1:P and tnree in1tU,t10n ~ac>:orl. 11'_1. !1'-2 and

If'-3.

rlDeeomes. while II'·2 ~unctions to d1rect fMet-L~SA oindin9 to tha

complex. II'-3 acte ae an 'anti-aeaoclation' fac>:or which pra ...an>:s

preCla>:UU 50S b1ndin9. All the initiatlon ~actore ara raleaead "hen

50S euaunl>: olnds. 1n11 for~s >:ns ~inal 70S 1nit1ation complex and

SaU tl'.a sysu~ for tne ,,10n9at10n phae" (5.6l.

So",a prl".ry differ,nca' o.>:"een eubecter!al and au.J<aryoti<:

I.nlt1at"on are lie follO'olS: ..1S not for:oylol.ud. 2. 'Ihe 5' end ot tna :.RNA 1S posttranscr1p>:10n_

ally mOdl~1.d to '1"narate "nat le call"d a cap structure. !'hls la>:>:lr

Flg\lre 1-1

,

sen...... ue dl.g .... 11 .now1n'i! ln1U.tton ot prot.1n 'yntne.la

1n e\ll),aeter1••

cD/ 709

309 0 "acton 0 50 9tFItF2tF3C1'l'

e309

~!" =-'-<RNAtF3

70S IlUtjaOon compla

Figure - 1

tne ....oce .... 13 dl" ..ctad by to"re .. specific codons UN\.. :JAC, and 'lCA.

Wnen any of til ..... codon. ar .. found 1n tl'le A site ;>eptldyl transferas..

el"slI". Ul" na.eent peptlde frOlll Ule t!U;A ln tn.. ?-sit... -:Ollls e"us.."

tn. r .. l ..a." o( tn .. cOlllp1"t ..d peptide fro.. tile rlbo"ocfl. In

.. ubactflrial aySt .. :Il0, Ul10 proce .. " 1.....d1.. ted by tIlr"" protein ..... 1"..."

factors, RFl, ~2 snd RF). RFl pl:OlllOUO tfl..",1n.otion in .... epon".. to

UM, !JAG, RF2 to llA.A or tlCA. !tT3 ..tlllul.. Uo ttl....etion of Rf'l and

Rr1. A 'Un'll .. p ...ot.. ln t .. r:linatlon taetor, rtF i.!l operativlI in

.. uk.ryot1c prot"in syntn"Oi...

1.2 Rlt'lulaUon of Tr"nslaUon During Eubllct"rlal Initiation

RiDO.o~i ~~A, whicn io tn.. =ajor coopon"nt at the rlbo.ace, plays

an LlIoportant 1'01" in dir ..cting a.set>biy of Ul .. part1cles. It ls also

llk.. ly to psrtlcl~to dir.. ctly in til.. proe.. s .. ot prot"in ..yntl"""i"

(8,9,10). An i(Oportantqus.t1on conc.. rn1ng tne p ... OCflSS of initi .. tion

cone.. rn n.,.. the riboSOlIle findo the correct atartin'l plae... on IllR~A,

and n.,.. tni .. proe.".e ls controll ..d. "rhe in1tiat10n at..p is on.. of tn ..

coa)or p,nnta at wlllell prot.. ln syntll .... iS io controll..d at til..

tr"nalauonal level in bacteria (4).

In E.~ at le".t ~o base-pairinq inte ...actions ~irll oR~A ar..

rnouqnt to be involved ln ..pec1t1c inlti"tion of orotein syTItll"siS.

Th...." ar .. at Ule AUG inlt1"uon codon loop of Blet-tlWA. ane! a

.equ"nce to r:>e S'-aid.. ot t:>e AUC (Shin.. ·Oal'larno sequenc,,1 pairlng

\lltn a ....quenc.. n""r t:>e 3' ·.,nd of Ule '65 ribosomal ~~A (1'). T.""

deq ...ee ot COIIIpl ..",,,nta.ry ot ShJ,n"-Dalqar:"lo SlIQlJ.enCe to tne ). -e:"le! of

16S rRNA on t:"le lOS suounit ~Ul atleer tne "Ulbtltty ot t.,e

"Inlt1at.on compl"" tgr:l"d, and thereto... regulate t., .. =ount at

proteIn produced (12).

Tne in1t1atlon ot prot"ln synth".lS can be negattvely controlled

oy L'. ~lndln9 of .. specifiC proteIn vltnln or ne"" tn" 1nltlatlon

zon•• on ~NA.

rlco"ace 101tl&tlon cO'Ilple"••. For e>«lll:lple, it rlbosO<Ial pt"oteln S8

4c="I"t•• It vl11 tllnd to tne initiation region On tne ~l(A '011\1<;11

cod... tor .. 10080lIl51 prOUin L5. Tnle 10/1.1.1 .. pr.... tne UanS14tlOn ot

tn" corr••ponding dQWn.tr,,"~ clseron on tn" QRNA (13,14). ThIS type

ot r"qulliltlon 11.•• t>een c"lled ""togenoue .."qul"t10n and .. pp..., .. s to

play an l.OIpOrUlnt rOle In balancing ..100"0lO<'I1 pt"oteln syntnelllS "ltn

r~NA syntheSiS.

In" struCtu..e ot U1" ..RNA a1eo playe iIIn \.::IporUlnt role In

requl"tlng tn" Inlt1&tlon proc...... SUCC'l8lltul initiation oc:cur~ only

"nen tl'le ZOne ~&quired tor proptlr initiation 1'1' la~gely slngl.

stranO.d. M52 viral <:Iesseng.r RNA providee a qood exampl" ot thi"

type ot pasllive requlation. 'rl'le porUon ot tne ..RtJA <;:oding ~or tl'l"

Coat p~ot.. in i" pr"terentially tranSlated IInile ottler proteins encoded

5ecotldary IItru<;:tural ~dels o~ thill aRt'A clearly

snail tl'l4t tn. COoIIot prOtein lnitiation zon.. is C1Uch "0"''' "ingi.

stranded tnan initiatiOn ..egtona tOE' tne otne... coded prOt.. in.

(15,16,17}.

l.l '!'ne Signiticance o~ tl'le Sl'Iintl and Oalgarno Sequence in EuDacu ... la

,l'Ie 305 rinoaocai subuntt ~ ...oc !.~ is an aasa..blage ~~e ot 21

Ol!!...... nt protonnll and a 165 r1l:Io"0...,,i Rt<,I,.. 'rhe p"'llIlary st.nJctu... " o~

"165 1'1\'''' U l'IOV ."'1111.01..."d tll. pn~ry stnlct1,l.Ce. "lid prop-ru". o~

,un)' ot u:. ;:rotelne r""'e :lean t'llpo.. Ud (18). 'tna 30S subunit'S

.&~loym.nt Ln proteln wyntn•• tl end senstttvity to &"'t1010t1<:& e ...

... U do=ent&d (19,201. ,ultlouq/\ 2Ucn ..r09"••• Iws :lean 3110. 1"

und.... undlne; tn. !unCtlon.l role ot L"I& protetn. 1n thiS p.ortlel_,

liuct. la kn....n of u •• !unCtion.-1 &tutbute,. ot tn. R,,, ..ith t....

n:cepUon ot t.."le J' -U[Dlnal sequence centered around CC"JCC. 'tills

.~u.'l<;. Otnovn ". the antt Sllln...nd 0lI1qerno sequence Nos •

(un<:tol0".1 role In tne lntt.t.'uon ot protetn synth".ll Cl1.22,231.

Tn. <accepted "1." 1. tnet tnts pyrilllidine_ricn nquanc& c.1ln baa. paIr

wHn .. cOlllpl ....."ury ....."'9.1' !l."'" .eque,.,ce centered &Pprolfl=&Uly 5

SlIlrIe and Ctllqarno

propos.d t/let tn_ eoc:wttOI\ ot ;;"tson-Crlck bIl •• pIlIC& betv••n tn.

=R.~'" and tn. 16S r!'lSIo ln tn. lOS .WNn1t alL_. t."l. r1boaoa. to detect

tna 1n1t1atlOn 4r.a 121.2~1. ~n1. propo•• l 1• .upport~ by tn.

r.ault. at lnv.at19atlona on bactar10p~9a 17 ~SA vn.r. ~ su~at~on.

tn ona

:lUUt10n tl'la AUC ln1t1at1on CQdon va. cllan9.4 to an ...C:::. Tnl.

"utatton dtd not altar th. tlln41nq ot r1l>oaaca. to tn.......9 •. rn.

a.cand :luuUan vaa a G-tO_A tranattlon locat~ 11 IN.••• to ti'l.

S·_alde ot trI. tn1t1aUon codon and tnla eauaed tn" rlboaoo=.a bindl:1q

to .nltt IS besa. to tria )'·alda ot t:la initiation o::odon. A• .ll reault

l)otn =Utlcn...Dollah.d tn. tran.lauon ot 0.) proUln (Ill.

'In. tunCtlonal lnuractton. ot Ul. l·_t.~ln.l pertlOn at If>S rRI'A

IHt.n tn. Sllln._Oalqarno a.qu.nc. on t..... :lRN". ::I••••q. ara con.lstent

2. ~5CH£;UCIlIAE£!:! 3'--r£R.·n~AL 165 rRNA S£QU£NCt

~OOULAT[O FIDELITY DORI~C TRANSLATION

Fa:Z:.l.lollh A. r..Ut and fl.'''. SCl'lollUP'

Oeparm"nt. ot Blocl'1"",lst.ry and Blophy.. 1C.

Orollgon St.at.oII Untver.lty

Corvollllls, Orollgon 97331 USA

'To VI'10111 correspondence Sl'1ould De sent..

"

"

"tn. r-lboflOllfl 1•• e.ntral C'OlIponenl: at to.,. peat.1n ~ntl:.tle

.~nt\l•• .\ltnouqll ptoqr••• 1'140. tlee" ::t.IId. 1n c:nU·.CUtlZlnq tM

funC1:10nfll tal. tor ....ny ot uw rH>oflClCllfll prOtelne, the properttes ot

rlbo50sal ~~~ find lt8 tal. 1n t1Oo.008 .t~ct\lr. end lunction flte not

con •• rved 3'-fl"d ot 16S tRNA, • elte_epeclfic delet10n we. =ad.

directly wit"l" tn. 16S tR~A ool_cuie. ,ha tee.1nel deletlon dld not

l~p.lr 1n vltro lOS allOun!t •••••Oly. but the ~rtlcl•• produced 10et

tra"81euo... 1 fideUty in fin 1n vltro tran.laUo" eyeu.. prl••d "nn

neuu.l lIANA.

This is an authorized. facsimile, made from the microfiimmaster copy of the original dissertation or masters thesispublished by UMI.

The bibliographic information for this thesis is contained inUMl's Dissertation Abstracts database, the only centralsource for accessing almost every doctoral dissertationaccepted in North America since 1861.

V.M.I DissertationServices

A Bell & Howell Company

300 N. Zeeb Road. Ann Arbor. Michigan 481061-800-521 -0600 313·761·4700

Printed in 1993 by xerographic processon acid-free paper

Order Nwnbu 9101306

Genetic .tudles of the biodegradation of organopbosphonates byE.eheriehl'a eoli

Loo, Seng Hal, Ph.D.

UM·!300 N. Ze:cb Rd.Ann Albor. MI 4&106

INFORMATION TO USERS

The most advanced technology bas been used to photograph andreproduce this manuscripl from the microfJ.lm masler. UMI films the

text direCtly frOIll the original or copy submitted. Thus., some thesis and

di.ssertatiOD alpies are in typewriter face, while olben may be from anytype of computer printer.

The quality or this reproduccloQ Is dependent UpoD the quallty or the

cop,. submlued. Broken or indistinct print, colored or poor quality

illustrations and photographs, print bleedthrough, substall.dard margins,

and improper alignment can adversely affect reproduction.

In the unlikely CVCLl lilal Ihe autnor e,;iG not send UMI a complete

manuscript and there are missing pages, these will be noted. Also. ifunauthorized copyright malcriaJ bad to be removed, a Dote will indicatethe deletion.

Oversize malcrials (e.g.• maps, drawings, cbarts) arc reproduced by

sectioning the original, beginning at tbe upper left-hand corner andcontinuing flom left to right in equal sections with small overlaps. Each

original is also photographed in one exposure and is included in

reduced fonn at the back of the book.

Pholographs included in the original manuscript have been reproduced

xerographically in this copy. Higher quality 6" x 9~ black and white

photographic prints are available for any photographs or illustrations

appearing in this copy for an additional charge. Contact UMI directlyto order.

UM·IlJn..et~l~ M'CrQI,ims l"le'''auonal

A 81:'1 & ;.;o..ell IniOtmaloOl" ComoanyJOO Non,., Zeet) Roao AM ,l.,llOI MI ~8106·13~6US"

313 761.4700 IlOO ">21·0600

r

GENETIC STUDIES OF THE BIODEGRADATION

OF ORGANQPHQSPHQNATES BY ESCHERICHIA COU

A DISSERTATION

SUBMITTED TO THE DEPAATMENT OF CHEMISTRY

AND THE COMMITTEE ON GRADUATE STUDIES

OF STANFORD UNIVERSITY

IN PARTIAL FULFILLMENT OF THE REOUIREMENTS

FOR THE OEGREE OF

DOCTOR OF PHILOSOPHY

By

Seno Hal Loo

Matdl, 1990

I certify that I have read this thesis anC: that in my opinion it is fullyadequate. in scope and quality. as a dissertation of the degree ofDoctor of Philosophy.

I certify that I have read this thesis and that in my opinion it is fullyadequate. In scope and quality, as a dissertation of the degree ofDoctor of Philosophy.

14.'1 ~\ It~!""..At:L~. _\

I certify that I have read this thesis and that in my opinion it Is fullyadequate, in scope and qUality. as a dissertation of the degree 0'Doctor of Philosophy.

Approv6d lor the University Committeeon Graduate Studies:

u

GENETlC STUDIES OF TliE BIODEGRADATIONOF ORGANOPHO$PHONATES BV ESCHERICHIA COU

Seng Hal Lao. Ph.D.Stanford University, 1990

....STRACT

To study the genellc:s of Escherichia coJi ~anophosphonate carbon to phosphorus

boncl cleavage, a TnS mutant was generated from l.::TnS mutagenesis 01 wUd type ~.

coli RB791. Unlike ~. coil RB791, this mutant, designatee:i SL724. is unable 10 utilize

Olganophosphonates as the sole source of phosphorus fer growth. SL724 could be

complemented by a piece 01 DNA thai was isolated from wild type E. COIl AB791.

Subclonlng experiments showed that the DNA encoding the cpc~ to Qhosphorus

bond ~eavage) locus is about 6.6 kb in length.

Transduction and conjugation experiments as well as comparison of restriction maps

allow the locaJization ot tt:e cpc genes 10 a previuosly unknown locus al 92.7 minutes on

the E. COli K12 genome, between the fdhF arw:l melS loci. To facilitate studies of the

proteins involved in the cleavage procees, the normal regulation of organophosphonate

biodegradation in E. coil was altered by placing the cpc genes required for Cop born:l

cleavage under lhe regulatoty control of a lac promoter. Modified regulation of

Ofllanophosphonate biodegradation eliminated the phosphate-free culturing conditions

needed for expression of the Cop bond deavage system, and has expancled the range

of degradable oroanoPhosphonateS 10 include benzylpl'lOsphonic acid and

phosphonoacet:ic acid. In vivo expression of the cloned DNA by the 17 RNA polymerase

expression system revealed the pre!:o::nca 01 seven proteins. with apparent molecular

weights 01 43, 42. 41, 34.2, 27, 26 and 25 kD. Two of these proteins (43 and 27 kD)

were shown to be membrane localized. These data show that the cpc proteins exist as

pan of a compfex, and may play a rolc in the lJatlSpOn and'or cleavage Of

Otllanophosphonate COP bond deavage.

iii

Table 01 Contents

AbSlTaet

Acknowle1;jements

Ust 01 Tables -

Ust of Figures·

Chapter 1. Introduction·

Cl\apter 2. Radical-based Dephosphorylation as a Model forOrganophosphonate Biodegradation· - - . -

Chapter 3. Isolation 0' Escherichia coli MutarlfS DefectiveIn Organophosphonate Biodegradation. • -

Chapter 4. Genetic Characterization of OrganophosphonateBiodegradation· - - - - • . - - -

Chapter 5. 5wdies on E.coJi ope Proteins -

Experimental -

•

vii

20

33

52

84

111

list of Tabl••

1- Natural C-P Compounds and Related Phosphate Esters and Carboxylic Acids 5

2. Alkylphosphof'late Substratlls lor Esc/IericJlia coil RB791 •3. A1kenylphosphonate Substrates lor E. coli RB791 10

•• Oegradalion 01 Aminomethylphosphonates "5. Reaetiorl 01 A1kylphosphonates wiltl 18ad(lV) tfltraae8tale 28

•• Reaction 01 A1kylphosphonates wilh Lead (IV) tetraaeetaleand Copper(lI) acetate 30

7. Alkaline Phosphatasa Activity In E. co/J Tn5 Mutallts ..•• Growth 01 E. r::oJf To5 Mutatlls 00 Ofganophosphooates '8

Chapter 4

Genetic CharacterizJtlon of Organophosphonate Biodegradation

Results and DlsCl,lSSlon

CJoning ClIINI E caM CPC~ ., £tIo$ptIOtUS Bond Qilzvag.j Goanes

The isO'atloo 01 S1124. a Tr6 mutu'll: c:!efac:dve in organopnosphona!e

~. faciitaled the genetic analysis oi lhe geM(S) irNolved in miotlbiaI

Carbon kl phOSphorus bond cleavag'. As a first step. trle genomic DNA surrouRfng tne

Tn5 inseft d SLn4 was isolated m::l restricllon enzyme mapped (F'lIJUr, 12a1 with tne

hope tha! ill would provide some clues relalive 10 the types 01 reslridlon enzymes 10 be

used dUring the subsequent ganomlc IiIraty construction. E. coJJ SLn4 genomic DNA

was tlrst diQesl8d to complluion with EcoA1. This restriction enzyme was chosen due to

the lack 01 ~ch a cutting site In TnS (F'lQure 12b). The resultinr. DNA fragments were

ligated In the EcoA1 sile of pUC11! '. followed by lJanslormation 01 the plasmlds into

DH5(l celts. Restriction enzyme dlgeslS 01 one 01 the arnpicilHManamycin resistant

dones revealed that il contained two E"coA1 IragmenlS (3.5 and 14 kb) cloned into the

pUC118 vector. The larger EcoR1 ltagmenl, which contained the 5.8 kb TnS insert. was

subS8quentty subcloned InIO pUC118. Digestion of this plasmid with various reslric:tlon

enzymes R:licated an absence 01 any 8amH1 and Hindlll cut sites in the g,nomic DNA.

lbIlre ate quite a rornber 01 ways kl c:onswe:t an E. coIJ genomic library. u.s:ng

vectors based on It'.e A. phage. plasmids. or cosmlds. IdeaDy. w. wanlAld to construa a

IbraIy representative of all the DNA in the bacterial genome that could be screened in a

reasonable amount 01 time. The number 01 clones required to represent an er.tire

genome a! a certain probability is given by the lom1ula ':

N. ln~l·Pl1~1

where N_ number 01 elenes required. P. probability desired (usually 0.99) and n

sequence's frae:tlonaJ ptOportlon of the genome length. AlthClUQh large fragmenlS of DNA

could be cloned into the phage A.. thus reducing the number 01 clones needed lor a

represenrative librar/, the manipulations associated with DNA preparation and phage

propagation from A. clones are troublesome. AlsO the direct complementation 01 the

mutant SLn4 with a phage library Is not pos.sitlle. Cloning using plasmids allows direct

complementation studies. although ClOning Iaroe pieces of DNA Into plasmid vectors is

otten ditrClIt. Dividing the genome Into smal pieces means screening a large number 01

Flgure 12. Aesaiclion Enzyme lIPS of TI'I5 and Genomic 0 SurroUllding TI'I5Insert in E. CDR SL724

pUCII8

E HBE XH XB H X

Tn5 insert)

, kbL.....J

A) Restriction enzyme map 01 the Tn5 insert and surrounding DNA of E. CDliSl724. Enzymes included EcoAl IE). BamHl (B). Hin:llll (H). and Xhd (X).

n51 R

(

= -

B) Partial restriction map 01 11'15

54

lraol1'l8n~ lor (Xlmplllmentalion as we. as If..e increased ptOOaOiijty that 1M gene 01

interest wou/d be deaved in the pteparation of the smaller pieces 01 DNA. Cosmid

donlng vectDrS are a good solution lot' Fha abova diffiaJltles as Fhey allow lairly large

lragments (20 10 2S kb) 10 be doned easily and delivered into tIM I'losI elfidenlty.

Cosmd veecrs' ate dOring \/&hides with sequences derived from ll'le

bac:t8riophaoe 1.. The ). DNA is a ~ear duplex molecule of about 49 lib'. At ead'l end

are 12 nJdeoUde singla shnded S' projections, calte<l ll'le cos sites, which are

complementary in saquen:e. During norma! A. rep5eatiOn. linear concaJ.emers are formed

containing Wldam arrays of !he ). genome with cos sites spaced al 49 kb (genome

si:.e) intervals. These sites are essential lor recognition and packaging of the ). DNA

into the phage heads in vivo and In vitro. The ). packaging system ree:t:IGnLzes the lWO

cos sites and packages the DNA between these two sites into ttle phaQe head as Ion;

as the DNA between ttle two cos sites is about 49 lib in total length.• Cosmid cloning

systems take advantage 01 !he cos sites but replaces (he ). genome wi(h the desired

Insert DNA. In general, cosmld vec'oOl'S contain (1) a ). phage cos Site, (2) a drug

resistance nw1ol.&r and a plasmid origin of replication. and (3) one or more unique

restriclion sites for doning. Depending on the size of the cosmid, dilferent amounlS of

Ioreilln DNA can be doned and packaged into the phage heads. Our cnoic.e of vector

was the cos.mid. pLAFR3 (22 kb), a derivative of pLAFRl. • It contains a muttiple ClOning

site an::! is able to accommodate 23·28 kb of foreign DNA. Based on lhe insert size.

roughly 1000 dilferent clones would be needed to asSlJre Nt there was a 99".

probabiity (hal each E. COli ge1'Wl was represented at least once 1fI the library.

Construction 01 ttle E. coli liJ:)raty (F"lQUre 13). began w,!h the iSOlation and

purification 01 E. CDi RB791 DNA. To ensure that substantial shearing and breaking <fd

not cx:cur during !he purification, !he DNA was analyzed by Qel electrophoresis which

showed that (he majority or the DNA isolated was 60 kb Of larGer. The E. COli DNA was

!hen subiected to BamHl partial digestiOn unlil most 01 (he Ir~menlS were 20 to 30 kb

In si:.e. The partial digest was conducted with high restriction enzyme concentrations ror

shorl periods or time 10 muimi:.e the probability 01 random cutting. Aliquots 01 the

digeslS were monitored by agarose gel electrophOleSis. The pufifled veclOr, pLAFRJ,

55

II

.I.

-I

i

THE INTERNATIONAL JOURNAL OF OIL PALM RESEARCH AND DEVELOPMENTVolume 4 No.1 June 1992 ISSN 0128-1828

THE INTERNATIONAL JOURNAL OF OIL PAL RESEARCH AND DEVELOPMENT VOLUME 4NO.1

•••••••••••••••••••••••••••••••••

alOng alu dd d rodu rom aImOil By 1 - 3 Regio 1 ctivity •nzymaticInt r sterificationJGraille; Pina; D ont t and J Mud rhwa

11 Con tru tion Of Recombinan PIa midarbouring ingl opy G nomi D Of

Oil Palm In Escherichia coliF H hah and G KAhmad Parv z

T SToc

19 A ote On Th lob ritanceOf Albini m In Oil almA Ku hairi' V Rao and Rajanaidu

21 Interaction Of Co oa Butter Equival ntCompon nt Fa In Ternary BI ndA R Md Ali ; Embong and Flingoh C H Oh

27 urface T n ion Of Palm Oil, Palm OleinAnd Palm tearinFlingoh, C H Oh and hong hi w t

32 Th Effe Of ea on, Rainfall AndOn Oil Palm Yield In Malay iaChow eh ing

44 Palm Oil Ab tra ts

(i) SEP 2

ELAEIS 4(1)JUNE 1992

CONSTRUCTION OFRECOMBINANT

PLASMIDSHARBOURINGSINGLE COPY

GENOMIC DNA OF OILPALM IN

Escherichia coli

Keywords: RFLP; Recombinant plasmids; Oil palm

F H SHAH' and G K AHMAD PARVEEZ'

Date of SUbmission : 14 January 1991

D9partment of Genetics, Faculty of Life Sciences,Universiti Kebangsaan Malaysia,43600 UKM, Sangi, 5elangor Oarul Ehsan, Malaysia.

Present Address:PORIM, P.O.Box 10620, 50720 Kuala lumpur,

11

CONSTRUCTION OF RECOMBINANT PLASMIDS

NUclearDNA was extractedfrom destarched

leaves of oil palm Elaeis guineensis, va

rieties tenera. dura and pisifera and from

leaves of E. oleifera. 17,e nuclearDNA samples were

digested with Pst I restriction endonuclease. It was

observed that there is some C-methylation in tenera

and E. oleifera but not in pisifera and dura The

presence of C-methylation in tenera was 01interest

and fragments generated from this digestion were

uh'lized in the constrnction of the library.

Restrictedfragments 010.4 to l.Okb were obtained by

gradient ultracentrifugation in 10%-40% sucrose.

17,ese fragments were cloned into pUC19 plasmid

vector and transformed into E. coli DH5cx. as host.

Colony hybridization and dot blot hybn'dization were

carried out on all the clones with labelled nuclear

DNA. Seventy six percent of the 250 clones

analyzed contained single or low copy sequences

and 24% contained repetitive sequences.

INTRODUCTION

o il palm (ElaeisguineensisJacQ.) is an importanteconomic crop of Malaysia. For years, there

has been a large effort in plant breedingprogrammes to improve economic traits such ashigh yield. disease resistance, high fruit-to-bunchratio and others. Selection for these traits takes along time. The application of molecular biologytechniques is now thought to be important inshortening the time taken during selectionprogrammes. Over the last few years, plant geneticists. breeders and molecular biologists have begunto develop restriction fragment length polymorphism (RFLP) maps for importantcrop plants. andsuch maps are available for at least seven plantspecies. These include crops with long histories ofgenetic studies and gene mapping, such as tomatoand maize. and also crops for which no genetic

ElAEIS

maps previously existed. such as lenure and potato(Landry et 0/.. 1987; Bonierbale et 01.. 1988). Fortomato, the linkage map has been correlated toquantitative trait loci (QTt). RFLP maps are important for plant breeding programmes: plants can bescreened for a desired trait at an early stage, e.g. asseedlings (Tanksley et 01., 1987: Tanksley et 01.,1989).

TIle use of restriction fragment length polymorph isms as genetic markers was first proposed in thecontext of human genetics (Bot stein et al., 1980).TIle molecular basis of RFLP is the loss or gain of arestriction site because of a point mutation withinthe recognition sequences ofenzymes, ora 1TI0lecu·larevent leading to insertion. deletion orinversion.Both situations result in a difference in the lengthof genomic restriction fragments. which is detectable on Southern blots.

In view of the fact that the oil palm is a crop ofmajor economic importance. it is timely that workshould commence on a long-term project to generate RFLP linkage maps in oil palm with the hope thateventually they may be used in oil palm breeding.

The construction ofa linkage map using RFLPsinvolves three stages. TIle first is the developmentof sources of probes: there are two types of probesthat can be used, eDNA clones and genomic singleor low copy clones. TIle second stage is the screening of probes that detect polymorphism and thethird. segregation analysis of RFLP.

This report documents the construction of asingle copy or low copy gene library. It is a preliminary study towards the eventual goal of using someof the inserts as probes in the mapping of RFLPloci in oil palm.

EXPERIMENTAL

Materials

leaves from the oil palm species E. guineellsis.fenera, dura and pisijera and E. olelfera weredestarched and harvested.

Extraction of Oil Palm Nuclear DNA

Oil palm nuclear DNA was extracted using aprocedure modified frolll Timberlake (1978) andFisher and Goldberg (1982). Forty grams of freezedried oil palm leaves were blended in a stainless

12

CONSTRUCTION OF RECOMBINANT PlASMIOS

steel Waring blender in 250ml of ice-cold H buffer(4mM spermidine, lmM spermine, 10mM EDTA,10mM Tns. 80mM KCI. 0.1% phenol. 500mM sucrose. 0.2% v/v 2- mercaptoethanol, pH 9.5) atmaximum speed. TIle homogenate was filteredthrough four layers of cheesecloth and one layer ofMiracloth (Calbiochem) into a 250ml centrifugebottle. After centrifuging at 2000g for 20 min at 4°C.the supernatant was discarded and the pelletresuspended into 100ml of ice cold HT buffer ( Hbuffer with 0.5% Triton X-IOO). TIle suspensionwas again centrifuged at 2000g, for20min at 4°C,andthe supernatant discarded. Resuspension of thepellet in HTbufferand centrifugation were repeated(4-5 times) until the pellet of nuclei was grey towhite. It was then resuspended in 25mI HT buffer:251111 lysis buffer (100mM Tris. 40mM EDTA 2%sarkosyl. pH 9.5) was added followed by incubationat 6O"C for one hour. with occasional inversions.Atterincubation. the lysate was centrifuged at 2500g.for 30 min at 4°C. TIle supernatant was transferredto a new 250ml tube. 25mI of 7.5M ammoniumacetate and looml cold ethanol were added. and themixture was kepI overnight at - 70"C. TIle precipi·tate which formed was centrifuged at 6000g for 30min at 4"C. The DNA pellet was washed in 80%ethanol and resuspended in TE buffer (lOmM TrisHCI. IIllM EDTA pH 8.0).

Preparation of DNA Fragments

Fifty micrograms ofoil palm nuclear DNA weredigested with Pstl restriction endonuclease for eighthours at 37°C. Restricted fragments were size-fractionated in a I0%-40% sucrose gradient by ultracentrifugation at 25000 rpm (Beckman SW40) for 25hours at 25"C. Fractions (O.5mleach) werecollectedinto microcentrifuge tubes. 250j.1I7.5M ammoniumacetate. and O.Sml isopropanol were added for precipitation overnight at -70"C. TIle precipitate wascentrifuged at lSOOOg for 15min at4°C. washed with8O"XJ ethanol, vacuum-dried and dissolved in 25jJiTE. DNA solutions (5 J.11) were electrophoresedwith lambda DNA-Hind III and lambda DNA-KpnI as molecular size markers.

Cloning of Nuclear DNA Fragments

pUC19 plasmid vector was digested with Pstland dephosphorylated with alkaline phosphatase.

ELAEIS

Digested DNA fragments (0.4-1.0 kb) and vectorwere ligated according to Perbal (1984) and trans·formed into DH5a (BRL) E. coli host. following themethod suggested by the supplier.

Screening of Recombinant Clones

TransCormants were spread on agar plates con·taining ampicillin (lOOj.1g/ml) I isopropyl-B-Dthiogalactosidase (1mM IPTG) and X-gal (50j..lg/mlin dimethyl formam ide) . Selection for recombinantclones were based on the colony colour. The recom·binant bacteria were cultured in LB media overnight at 37°C. Plasmids were isolated following themethod ofBirnbonn and Doly (1979). Isolated plasmid DNA was electrophoresed with a control(PUCI9) on 1% agarose gel.

Colony Hybridization

Bacterial colonies were prepared on nitrocellulose filters according to Grunstein and Hogness(1975). Total tenrro nuclear DNA was labelled withalpha [32PI-dCfP (Amersharn) according to thesupplier's method and hybridized according toManiatis et al. (1982). Nitrocellulose filters werewashed according to Tanskley et al. (1988) andautoradiographed (Fuji·RX) at -70"C.

Dot Blot Hybridization

Plasm ids isolated from colonies wereresuspended in 80~1 of 2M 'aOH and 120~1

ddH20. lllemembranewasboiled in ddH20 for30seconds and transferred to a dish containing 200ml1M ammonium acetate. Be(ore loadingeach sampleon to the dot blot apparatus. 200).JI 2M ammoniumacetate was added to each sample. Samples wereloaded into the wells o( the apparatus and airbubbles were avoided in the wells. Two internalcontrols were included. total 0 A as a positivecontrol, and plasmid pUC19 as negative control.The membrane was washed in 2X SSC (gentlyrubbing each sidewith gloved fingers) and rinsed in2X SSC. Membranes were blotted dry with papertowels and baked ill vocuo at 800C for two hours.Total DNA was labelled with [~P)-dCTP and hybridized to the membrane according to the methodo( Maniatis et al. (1982). Membranes were washedaccording to Tanskley et af. (1988) andautoradiographed (Fuji-RX) at-nrC.

13


RESULTS AND DISCUSSION

W hile eDNA clones have been used to identifypolymorphisms in some crop plants such as

mail.e. other crops were (ound to show polymorphisl1ls usingsingle or unique or low copysequences(Helentjaris et al., 1986; Gebhardt et al., 1989).Theuse o( eDNA probes allow analyses (or the codingregions of the genome or the sequences immediately flanking such regions. However, single copygenomic clones are expected to detect more polymorphism because o(the absence of selection pressures in the maintenance o( the sequence of nontranscribed regions.

However at present there is no evidence toshow the advantage o( eDNA clones over genomicclones as probes, or vice versa. A cDNA library hasbeen constructed (or use as a source o( probes(Cheah. personal communication). Thiscommunication is the first to report on the construction ofsingle copy genomic library (rol11 oil palm for use asa source o( probes (or the detection o( RFLP in oilpalm.

Preparation of Nuclear DNA

Extraction of DNA from (reer.e-dried oil palmleaves yielded 20j..lglgrall1. TIle method employedwas success(ul in isolating Iluclear DNA with little(ragmell ti zation.

DNA digestion and size fractionation offragments

DNA samples (rom three E. guineensis varietiesrenero. dura andpisi!era as well as (rom E. olei!ero,were digested with PitI and Hindlil HindIII wasused to confirm purity of samples by observation o(complete digestibility of samples. PstI was chosenas it is a methylation sensitive restriction enzymewhich recogni7.es the sequence 5' -CTGCAG-3' andsensitive to cytosine methylation in the 5' location(Nelson and Mc Clelland, 1987). It has been observed in mai7.e (Burr et al.. 1988) and tomato(fanskley et al.. 1987) that undennethylated areasare enriched (or single copy sequences. Sincemethylation occurs mostly in non-eoding regions.clones derived from fragments generated from PstIwill represent largely single or low copy sequencesthat are located throughout the genome.

ELAEIS

1


to

Ftg,tr 1. uc/ear D 'A digested with P tJ and Hind III. Undigest d D 'A (lane1). dura. pi ifera oleifera and tenera digested with P tI (lanes 2-5) and Hindlll

(lmles 7-10).

17

05

_30.0-17.0

- L5

Figure 2. 1%agarose gel electrophoresis 0/fracti01 aft r sucrose ultracentn"/ugation.Lanes 2-16: froctWns 2,4 8, 10, 11, 12 - 21. Lanes 1 and 171zad Lambda D ~

digested with Hind ill and Kpn 1 respecti ely, as controls.

14

EL EIS

1 6

Fi lir 3. 1% a aroector (a COJltro/). um

I I ctropllor is 0 r combillaJlt pia mid. Lan 1: p C 192· : Ilad r combiJlant pia mids lI.'Ilicil mi rated mor lowl

tllaJl til l' ctor.

Figur 4. Autoradiograpll ofdot blo t itll total 1/ucleor D A as prob . Til dotmark d' e'is a positi c01ltroUtotal1/ucl ar D W a'ld til mark d '. IS a

11egat; control (P C 19).

15

ElAEIS

It was observed that there is some degree ofmethylation in tenera and E. olei/era, but less inpisi/era and dura (Figure 1). To ensure that therewas complete digestion and that the incompletedigestion was not due to impurities, increasingamounts of PstI was added to samples (data notshown). Also, to confirm these observations, thesamples were also digested with Hpall and MspIenzymes (results to be published elsewhere) whichshowed differing degree of methylation. HPLCanalyses of methylated cytosine of the samplesshowed that tenera has 44% methylated cytosinecompared to 12% and 20% for dura and pisi/era respectively (results to be published elsewhere).Therefore, E. guineensis. tenera displayed thehighest degree of methylation and was chosen toisolate PstI fragments for cloning procedures. TIleclones produced should have a higher percentageof single copyflow copy sequences. The PstI fragments were separated by ultracentrifugation, andfractions (numbers 15-18), which representedfragment si7.es of 0.4 to 1kb, were pooled and usedfor cloning (Figure 2).

Cloning of O.4kb·lkb nuclear DNA fragments

Nuclear DNA fragments(0.4 - 1kb fragments)were successfully cloned into pUC19 vector andtransformed into DHScx host. TIle transformationefficiency was 4 x 1Q3 CFUfllg. Recombinant colonies which appeared as white colonies (250 clones)were isolated. Plasmid DNA isolation of somerecombinants showed presence of inserts, asshown by the slower migration in agarose gelcompared to the vector alone (Figure 3).

Screening for single or low copy sequences

Selection of clones which contained single orlow copy sequences is of importance to enable theiruse asprobesin RFLPscreening. Initiallyscreeningfor single or low copy sequences was carried outwith colony hybridization on 250 clones. High strin·gency washing (0.05 x sse. 0.1% 50S) and differential exposure were carried out to confirm singleor low copy genes. At such a stringency, thereshould be 80% homology to ensure stable hybrid·ization (Beltz et 01., 1981). In these washing conditions. only multicopy genes remain; single or lowcopy sequences, which have low homology. be-

16

CONSTRUCTION OF RECOMBINANT PlASMIDS

come unstable. Therefore onIy clones representingrepetitive sequences will give signals. Colony hy·bridization showed 96% single/low copy sequences.However since it has been shown that colony hybridization is not necessarily a reliable method fordetection of single copy sequences, hybridil.ationto dot blots was also carried out to confirm thisresult. Landry and Michelmore (1985) andHelentjaris et al. (1985) failed to select genomicclones which were suitable as probes using onlycolony hybridization.

Using dot blot hybridization on the same 250clones it was observed that 76% were single or lowcopy sequences and 24% represented repetitive sequences (Figure 4).

TIlis relatively high percentage of single orlowcopy clones is expected because of the cloningstrategy. DNA from tenera oil palm which displayed a high degree of methylation, was digestedwith methylation sensitive Pstl. TIlis would autirmatically exclude most repetitive sequences, whichare usually methylated.

Studies on tomato which has high C·methylation, yielded 92%single/lowcopy cloneswhen clonedwith Pst! fragments (Tanskley et al., 1987). Whencloned withEcoRI (non-sensitive to C-methylation),only 48% of the library was found to contain singleor low copy sequences. On the other hand, ricewhich has low methylation yielded 58%single orlowcopy clones with Pst! (Tanskley et 01.• 1988). TIletenera-PstI clones in this study yielded 76% single/low copy clones. The data suggest that the teneramay have a level of methylation between that oftomato and rice. Work is at present under way toscreen {or probe/enzyme combinations that willdetect RFLP in oil palm, and to detect the percent·age of methylation.

TIle role of DNA methylation in plants is notwell understood (Doefler, 1983). but there is evidencethat it plays a role in gene regulation and maybe an important factor to consider when analysingdifferences between and within species. TIle hypothesis is that the total genome size is positivelycorrelated with the si7£ of the repetitive regions ofDNA (Flavell, 1989).

It is interesting to note that tenera. which is thehybrid of duro and pis,!era showed a higher degreeof methylation, although the significance of this isnot apparent at present. It raises a question as towhy tenera should have a higher degree of methy-

ELAEIS

lation when compared with both its parental types.AJso of interest is the higher methylation in tenerawhen compared with the other species (E. olei/era)of oil palm.

CONCLUSION

T he tenera form of the oil palm E. guineensis andE. olei/era were observed to have a higher de

gree of DNA methylation than the dura danpisi!era form of E. guineellsis. Nuclear DNA fromtenera was digested with Pstl restriction enzyme.Fragments (0.4 - 1.0kb) were c10ncd in pVC19vector and transformcd in DH5cx as host. Seventysix percent of the recombinant clones obt;l.inedwere found to represent single or low copy sequences. Work is beingc;l.rried outto obtain probe!enzyme combinations that are capable of detectingRFLP in oil palm.

ACKNOWLEDGEMENT

We would like to thank Dr Beniot S L.1ndry(Agriculture Research -Canada) for his useful

suggestions. We also thank Dr Ihlim H;l.lllat and Dre A Ong (MARDI) for lise of equipment andtechnical advice. Finally our thanks are due to i'vlrAhmad Din Bani (VKM) for technical assistance.

REFERENCES

BELTZ.G;JACOB. K; EICHBUCH. T:CHEERBAS.RR and KAFATOS. F (1981). Isolation of multigcnefamilies and determination of homologies by filterhybridizatiollll1ethods. Methods Enzymol. 100.266285.

BIRNBOIM, H C and DOLY. J (1979). A rapidalkaline extraction procedure for screening reCOIIlbinant plasmid DNA NucleicAcids Res.. 7.1513-1523.

BONIERBALE, M IV, PLAISTED, R LandTANKSLEY, S D (1988). RFLP llIaps based on acomlllon set of clones reveal modes of chromosomal evolution in potato and tomato. Gel/etics. 120.1095-1103.

BOTSTEIN. 0, WHITE. R L; SKOLNICK, M andDAVIS. RM (1980). Construction of a genetic linkage lllap in man using restriction fragment lengthpolYll1orphisl11s. Am. j. /-IU11I. Gel/et.. 32.31<1-331.

17

CONSTRUCTION OF RECOMBINANT PLASMIOS

BURR, B, BURR. R A, THOMPSON. K H,ALBERSTRON, M C and STUBER. C W (1988).Gene Illnpping with recombinant inbreds in maize.Genetics, 118. 519-526.

DOEFLER, W (1983). DNA methylation and geneactivity. AmI. Rev Biochem.. 52.93-124.

FISHER. R Land GOLDBERG, R B (1982). Struc·ture and flanking regions of soybean seed proteingenes. Cell. 29. 651·660.

FLAVELL. R B (1989). Variation in structure andexpression of ribosomal DNAloci in wheat. GeMme,31, 963·968.

GEBHARDT, C, RITTER. E, DEBENER. T,SCHACfITSCHABEL. U, WALKEMEIER, B,UHRIG. Hand SALAMINI, F (1989>' RFLP analy·sis and linkage mapping in Solanum tuberosum.17/Cor. Appl. Cenet.. 78. 65-75.

GRUNSTEIN. M and HOGNESS. D S (1975).Colony hybridizat ion: A method for the isolation ofcloned DNAs that contain a specificgene.Proc. Natl.Acad. Sci.. USA. 72,3961·3965.

HELENTjARIS. T; KING. G, SLOCUM. M,SIDENSTRANG. C and WEGMAN. S (1985). Restriction fraglllClll length po!ymorphisllls as probefor plant diversity and their development as tools forapplied plant breeding. PI. Mol. BioI., 5,109-119.

LANDRY. B Sand MICHELMORE. R W (1985).Selection ofprobes for Restriction Fragment Lengthanalysis frolll plant genomic clones. Pit. Mole. Bioi.Reporter. 3, 174·179.

LANDRY. B S, KESSEll, R. HEI LEUNG andMICHELMORE. R W (1988). Comparison of restriction cndollucleases and sources of probes fortheir efficiency in detecting restriction fragmentlength polymorphisllls in lettuce (Lactuea sativaL.). 17leor. Appl. Genet.. 74,646-653.

LAu'lDRY. BS, RIVARD. SR CAPPADOCIA. MandVINCENT. G {l989). Restriction fragment lengthpolymorphism (RFLP) analyses of plant producedby in vitro antherculture ofSolanum cJzarconse. Bitt.771eor. Appl. Genet.. 78. 49-56.

ELAE1$

MANIATIS, T; FRITSCH, E F and SAMBROOK, J(1982). Molecular Cloning· ALaboratory Manual.Cold Spring Harbor Laboratory, U.S.A

NELSON, M and McCLELlAND, M (1987). Theeffect of site specific methylation on restrictionmodification enzymes. Nucleic Acid Res., 15 Suppl.219-130.

PERBAL, B (l984).A Practical Guide To MolecularCloning. John Wiley & Sons, New York.

TANKSLEY, S D; MILLER, J; PETERSON, A andBERNATZKY, R (1987). Molecular mapping ofplant chromosomes. In; Gustafson JP. and Appels.

18

CONSTRUCTION OF RECOMBINANT PLA$MIDS

R A (eds). O,romosome structure and /unctionPlenum Press. New York.

TANKSLEY, S D; McCOUCH, S R: KOCHERT, G;YU,ZH;WANG,ZY;KHUSH,GSSandCOFFMAN,W R (1988). Molecular mapping of rice chromosomes. 11"or. Appl. Genet., 76, 815-829.

TANKSLEY, S; YOUNG, ND; PATERSON,AH andBONIERBALE, M W (1989). RFLP mapping inplant breeding: New tools for an old science Biotechnology ,7. 257·264.

TIMBERLAKE, W E (1978). Low repetitive DNAcontent inAspergiJlus nidulons. Science, 202,973-975.

J. •

Ku

;Ii ball 1 aon ala.·;o

PASCASID GS OSIUM SAINS KESIHAT

KEBANGSAAN KE-4

29-30 April, 2002KUALAL P

KEHARMONIAN PENYELIDIKANDANAMALANDALAMSAINS KESIHATAN

LEMBAGA PENYUNTING

Norimah A Karim, Rosnani Hashim,Noor Aini Mohd Yusof, Rogayah Abd Razak,

Noraziah Md Zin, Norhani Mohidin,Proomwhicit P, Baharuddin Haji Omar,Sharanjeet Kaur, Haliza Abdul Mutalib,Ahmad Iskandar Zulkamain bin Johor

ANJURAN

FAKULTI SAINS KESIHATUNNERSm KEB GS

BERSEKUTUMALAYSIA

. .. '... .APNASKAH PEMEUHARMN

PEAPUST~ MALAYSIA

Cetakan pertama I First printing

Hakciptaleopyright Universiti Kebangsaan Malaysia, Kampus Kuala Lumpur, 2002

Hakcipta terpelihara. Tiada bahagian daripada terbitan ini boleh diterbitkan kembali, disimpan untukpengeluaran atau ditukar ke dalam bentuk atau sebarang alat juga pun, samada dengan eara elektronik,

gambar serta rakaman dan sebagainya tanpa kebenaran bertulis daripada Penerbit terlebih dahulu.

All right reserved. No part of this publication may be reproduced or transmitted in any fonn or by any means,electronic or mechanical, recording or any infonnation storage and retrieval system, without pennission in

writing from the Publisher.

Diterbitkan di Malaysia oleh I Published in Malaysia by

PENERBIT FAKULTI SAINS KESIHATAN BERSEKUTUUNIVERSm KEBANGSAAN MALAYSlA

KAMPUS KUALA LUMPURJALAN RAJA MUDA ABDUL AZIZ

50300 KUALA LUMPUR

Dicetak di Malaysia oleh I Printed in Malaysia by

UNIT SOKONGAN MEDIAUniversiti Kebangsaan Malaysia

Kampus Cawangan Kuala LumpurJalan Raja Muda Abdul Aziz

50300 Kuala LumpurMalaysia

Perpustakaan Negara Malaysia Pengkatalogan-dalam-PenerbitanlCataloging-in-Publicating-data

Simposium Sains Kesihatan Kebangsaan (Keempat:2002: KualaLumpur) Paseasidang Simposium Sains KesihatanKebangsaan Keempat. 29-30 April 2002, Kuala LumpurPenyunting : Norimah A Karim, Rosnani Hashim, Noor Aini MohdYusof, Rogayah Abd Razak, Noraziah Md 2in,Norhani Mohidin, Proomwhicit, Baharuddin Haji Gmar,Sharanjeet Kaur, Haliza Abdul Mutalib, Ahmad IskandarZulkamain bin JohorISBN,I. Health Sciences Congress: Norimah A Karim, Rosnani Hashim,Noor Aini Mohd Yusof, Rogayah Abd Razak, Noraziah Md Zin,Norhani Mohidin, Proomwhicit, Baharuddin Haji Ornar, SharanjeetKaur. Haliza Abdul Mutalib, Ahmad Iskandar Zulkamain bin Johor

P,O Kesan anublQIUc terhndap enlerohemoragik XOraziab \<IZ Lim AT. Bioperubaun 267Eschenchia coli yang menghasilkan loksin Sahalan AZsecara in vilro.

P" Tabmt pengambilan suplemen kesihatan di >lur Zakiab ~IS, Che Pemakanan & 273kalangan masyarak:n Melayu di Kuala Kllrimah I, Alini M DietedkLumpur dan Pantal Timur.

P.:12 Pengesanan agen anlLbaklena dan kehadlran Sbajariarul AI. Fanda Bloperobalan r6vnamm E danpada belul (Monopterus a/bus), ZMY, Hayan T

N3 Microsporidium In the environment. Suresh K. Akmar N, Cbye Biopelllbatan 278TS. Robello M. KhaimlAnuar A

P44 Kajian pengubatan dan masnlan Yusof H, Shahirah Z Fannasi 279ketidakparuhan di kalangan pesakil geriatric dibaw3h jagaan instirusi.

P'S Food consumption pattern among pregnant Zaharn AM, Norsaadah R Pemakanan & 284women complic31ed with impaired glucose Dietetiktolerance (IGT).

N6 Collection of murine peritoneal macropllages Norhajdah A, :vIahmood Bioperubatan 288by peritoneal lavage and acridine orange AA., Khalifa S, 5alma I.chemilumines assay for phagocytosis and 5uzainur KA.Rintracellular killing ofbacleria in vitro.

P47 Toxicity evaluation ofAverrhoa bifjmbi L in Norljzjl ZA, Ayub MY, Bioperubatan 288normotensive and hypertensive rats. 5uriah AR.

P48 Alergi makanan dan simptomnya di kalangan Nm Zakjah MS, Norjan Pemakanan & 289masyarak:n Melayu di Negeri S~mbilan. Y, Nor Azila ~fN. Sazlina Dietetik

K, Nurul lzzati A

P'9 Amalan pengambilan suplemen kcsihatan di Nur Zakiab MS, Che Pemakanan & 293kalangan masyarakat Melayu di Pamai Karimah I, Alini ~I DietctikTimur Scmcnanjung Malaysia dan KualaLumpur.

PSO Inhibitory action of Oavonoids on human Munbodv P, Kuppusamy Bioperubatan 297erythrocyte catalase: A structure - Activity URstudy.

PSI Vitamin and mineral in garlic (Allium S3tinum Rabetjl ~15, Asmah R, Pemakanan & 297lion) and onion (Allium cepa linn). Nawalyah AG, Fauzlah Dietelik

P52 Analisis keperluao maklumal dalam Rafidjlh G, Suzann 5, Pemakanan & 298pembangunan sistem pengurusan pemakanan Nomazahiah A, Noor Dieletikberkompulcr: saN k:ijian penotis di kalangao Ami MY, Shahrul Azmandietition Malaysia. WI

15

Hasil bjian menunjukkan kl.'tahanan yang lebih kCp:ld:1 bunyi bising persckllaran pada mod QS berb:l!lJin~ mod ORl.Walaubagaimanapun. ujian CEAOE sesuai diaplikasikan di klJinik-klinik ~'ang lIdak mempunyal bilik-bilik kedap bUIl)'i

s.:lagi aras kcbisingan pcrseknaran tidak melcblhl 55 dl3 ,\ bagl mod QS d:ln 50 dl3 ..\ b:lgl mod ORI

RUJUK.-\Nl. Culpepper. N.B. 1997. Neonawl screening via evoked OlOaeOUSlie emissions. DIm. RobinclI':. M,S. & GI:lltke. T.J.

[pnyll OluUCfJWJtic E/Ilissions: Clinical Applications. New York: Thienle. him 233·270.

2. Iran Hemlan. Md. Azm:ln. 1992 Ukur:ln nil<li kcrja: Pcnilai:ln awal isu kebolchpcn::lyaan dan kesahan gagasan.

}url1o{ Psikolog. 8: 3-10.

3. Nonon. SJ., Stovcr. L1. 1994. Oloaeoustie emissions: An emerging clinical tool. DIm. Katz, 1. (pnyt) Handbook of

Ginic-al Audiology. Ed Ke-4. Baltimore: Williams & Wilkins. him. 448-462.

4. Rhoades. K.• McPherson, B., Smyth, V., Kei. J., Baglioni, A. 1998. EfTeets of background noise on cliek-el'okedotoaeoustie emissions. Ear and Hean·ng. 19(6): 450-462.

5. Vohr. B.R.. White, K.R.. Maxon. A.B .. Johnson, M.1. 1993. Factors affecting the interpretation of transient evokedotoaeoustie emission results in neonatal hearing screening. Semi/lar in Hearing. 14(1): 57-72.

b. Weiss. N.A. 1995. Introductory SWtislics. Ed. Ke-4. New York: Addison-Weseey Publishing Company. Inc.

KESAN ANTIBIOTIK TERHADAP ENTEROHEMOR~GIKESCHERICHIA COLI YANG MENGHASILKAN

TOKSI:-I SECAAA IN-VITRO.

THE EFFECTS OF ANTIBIOTICS IN VITRO ON TOXIN-PRODUCINGENTEROHAEMORRHAGIC ESCHERiCHIA COLI.

Noraziah MZ, Lim AT, Sahalan AZlabatan Sains Bioperubatan, Fakulti Sa ins Kesihatan Bersekutu,

Universiti Kebangsaan Malaysia, Jalan Raja Muda, 50300 Kuala Lumpur.

ABSTRAKIABSTRACTEnterohemoragik Escherichia coli (EHEC) sinonim kepada kumpulan E.coli pcnghasil toksin "Shiga-like" (SLT).Penggunllan antibiotik yang meluas d~lam bidang perubatan merupakan risiko aruhan pmghasilan toksin dari EHECschingga menyebabkan penyakit diarea berdarah seterusnya sindrom hemolitik uremik (HUS). Dalam kajian ini, £.coli0157:H7 (NCTC 12079) dan isolat kJinikal (CFI) digunakan untuk penilaian kesan antibiotik Kepekatlln pereneatanminimum (MlC) antibiotik (~tgfml) terhadap E.cofi 0157:H71 CFl ditentuknn dan kepulUsan adalah: ampicillin 25-50 12500-5 000. Tet 0.39-0.78 I 0.78-1.56, mitomycin·C 0.625-1.25 I 1.25·2.5. kanamycin 3.13-6.25 I 6.25-12.5 dantrimethoprime : sulfamethoxazole (0.1-0,2 : 0,5-l.0 I 250·'500 : 1250-2500), Seterusnya, kadar pcnumbuhan sampelkawalan dan CFl dalam keadaan kepekatan antibiotik yang berbeza ditentukan dengan teknik unit pemhentukan koloni(efu). Keputusan 'kajian mendapali tetracycline adalah di antara antibiotik yang paling berkesan membunuh kedua·duasampel dalam masa 24 jam tetapi tidak untuk 30 jam. Selain itu, kadar penghasilan tohin dengan kehadiran atau tidllkantibiotik ditentukan dengan lcknik ELISA tid:lk langsung. Keputusan menunjukkan scmU:l :mtibiotik yang digunakantidak merangsang pellghasilan toksin yang signifikan bagi kawalan dan CF I.

Emcrohaemorrhagic Escllerichi() coli (EHEC) is one of the £.co/l group thot produced Shiga-like toxin (SLT). II isreported that antibiotics ser\'ed as a risk factor in inducing toxin production which causes bloody diarrhe:l to lheprogression of haemolytic uraemic syndrome in EHEC group. In this study. the antimicrobi:ll susceptibility against twoEHEC strains namely £.coli 0157:H7 (NCTC 12079) and clinical isol:lte (CFl) have been evaluated The results forminimum inhibitory concentr:l.tion (MIC) of Eroli 0157:H71 CFl (pg/ml) as followed; ampicillin 25-50/2500-5000.tetracycline 0.39-0.78 I 0.78-1.56. milomycin-C 0.625-1.25 I 1.25-2.5, kanamycin 3.[3-6.25 I 6.25-12.5 andtrimethoprime : sulfllmethoxazole (0.1-0.2 : 0.5-1.0 I 250-500 : 1250-2500). Besides MIC. the survival rate of CFl andcontrol sample at the different concentration of antibiotics was observed by colony forming units (CFU) technique.

\ { .....',,

Among five anlibiotics used, tctracyclim.> was the mosl effective drug 10 kill both strains wilhin 24 hours bUl not in 30hours. The indireel ELISA lcchnique was used 10 delermine lhe yicld of shiga-like loxin in lhe presence with and wilhoulanl1biolies :md shows thallhc lechnique was nOI sensitive enough 10 delecllhe toxin produced by clinical isolate.

PI:::NGENALAN£. "ali t:merohcmorngik (EHEC) sinonim "\'crotoxin-producing £.coli" (VTEC) adal:!h sekumpulan E.mli pcnghasilloksin ,;cpeni Shigcflu spp. (SLTEC). Strain EHEC y:!ng mendapal pah:!lian penyclidik pcrubatan ialah £.coli 0157:H7yang menycbabkan kc,;-kc,; infcksi diseluruh dunia (Riley et al. 1983, Evan et al. 1998, Michino Cl al. 1999, Ahmed1998). Faklor \'irulcn kumpulan ini dicirikan olch kcbolehannya menghasilkan toksin iaitu Shiga-like I (SLT-I) dan toksinShiga-like [I (SLT-II) atau variasinya (O'Brien & Holmes 1987). £.coli 0 157:1-17 biasa diisolasikan, tClapi terdapat lebih25 serotaip £.coli bukan-0157 pcnycbabkan penyakit yang scrius juga dikenalpasti (Griffin & Tauxc 1991). Masalahkcreslslnnan pelbagai slrain £.culi kepada anlibiotik yang scmakin mcningkal (Zhancl et a!. 2000) dan faktor risikomcngakibalkan komplikasi HUS adOllah dikaitkan dengan ternpi anlibiolik, agen antimotilili (Cimolai el al. 1990) senaagell antidiarca (Robson & SCOl! 1990, Pavia el al. 1987, Proulx el al. 1992). 01eh itu, objektif kajian ini iakth melihatprofil antibiolik ke atas kumpulan SLTEC dari segi penentuan Kcpekalan Perencalan Minimum (MIC) dan mengkajiKadar pertumbuhan SLTEe dengan kehadiran antibiotic tertentu. Disamping itu, kesan aruhan penghasilan toksin dariSLTEC dal:lrn ke:ld:lan t:lnpa antibiotik dcngan keadaan perawatan antibiotik berkepckatan subinhibitori dan kepekatanoptimum turut ditcntukan.

BAHAN DAN KAEDAHBUHleriu dall Media pertumbu!JuliBakteria Escherichia coli 0157:H7, NCTC 12079 (NCTC) dan klinikal isolate, CFI yang mengkodkan slt-I dan sIt-II(Nornziah el al 2001) dan dilrulturkan ke alas Agar NUlrien (NA) (Merck), agar Sorbitol Mae--conkey (SMAC) (Difco)serta Kaldu Soya Tripton (TSB) (BBl). Bakteria E.eoli 0157:H7 dan CFI dari lrultur mumi disublrultur pada agar SMACdan pengeraman pada 3flc selama 18 hingga 24 jam. Stok bakteria disebarkan ke atas agar nUlrien condong dandisimpan dalam peli sejuk 4 0C.

AlilibiolikLarutan Amibiotik dijadikan slok yang mempunyai pelarot dan kepekatan berbeza-beza iaitu Ampicillin dan Kanamycindi dalam salin normal tlO mgtml), Telracycline di dalam methanol (10 mg/ml), Mitomycin-C, di dalam PBS (0.33mg/ml), dan tablel Trimelhoprim-Sulfamelhoxazole. di dalam DMSO (I tablelo1alam 10 ml pelarut). Tmp-Smx. Akantetapi bagi Tet, Me dan Tmp-Sm~. pelarutnya adalah melanol. PBS dan DMSO masing-masing.

fomen/uu/I /lila; Kepekatan Perellca/ulr J/ill;1IJ1I1II (11,1Ie)Penentuan nilai 1>.IlC o1ijalankan menggunakan teknik pencairan bcrsiri o1u:! kali ganda dalam pial mikrotiter 96 lclaga(Andrews. 200 I). Untuk menycdiakan suspensi bakteria, satu gelung pcnuh koloni bakteria terasing dimasukkan ke o1alam20m I kaldu soya triplon (TSS) d:m dierumkan 24 jam paola 37 oc. Pcnentuan kepekatan suspensi dilakukan secaraspektrorOlOr,]er~'r p:Jda A6:!0. Seterusn:,a. peneairnn suspensi dengan TSB dijalankan supaya absorban berada o1alamlingkung:tn bacaan 0.3 - 0.5. KepekatOln suspensi boleh dilentukan dengan romus berikut (Harlow & Lane 1985):

!l.2 '" Y ml suspensi mengandungi 2 X 108 sel bakteria X factor pencairanA620

Pencairnn dilakukan untuk memperolchi inokulum bakteria 104 sell ml dan digullakan dalam masa 30 minil (Andrews2001). Antibiotik dicairkan dalam siri 2.'( peneairan:

Kepekatan 1 1/2 1/4 1/8 1116 1132 IJ64 1/128 1/256 1/512(ul/ml)Am, 100 50 25.5 12.5 6,25 3.13 1.56 0.78 0.39 0.20Tel 10 5 2.5 1.25 0.625 0.313 0.156 0.078 0.039 0.019MC 1 0.50 0.25 0.125 0.063 0.031 0.016 0.008 0.004 0.002

K" 10 5 2.5 1.25 0.625 0.313 0.156 0.078 0.039 0.019Tmp·Smx 1/100 11200 1/400 1/800 111600 113200 1/6400 1/12800 1125600 1/51200

Sebanyak 50pl suspensi bakteri:l 10.. sellml yang o1isediakan ditambah kc dalam seliap telaga. Kawalan positif ialah 50j.l.1salin dan 50 j.l.1 suspcn~i b3kteria. Kaw;llan ncgalif pula ialah 50 j.l.1 TSS dan 50 j.l.l swk amibioti<: dan pial mikrotiterdll.'r:lmkan pada 37 OC selama 2.. Jam. Proses inl diulangl lJuplikal) menggllnakan kcpckalan anllbiotik yang berbezasehingga menJap:tli nilal MIC yang konsimll.

268

UjllJn knoksikIJlf pdlJ",,'antibiolikUjian kCloksikan mC!aool yang mcrupakan pelarul Ictnacyclinc dijalankan unluk mcngctahui kcpeklltan pcrencatanminimum mctanol tcrhacbp kcdua-dua "mpe! dalam kljian ini. Tcknik yang diguna.kan adalah Icknik pcncairan makrodalam tabung uji (Andrews 2001) dan kacdah yang sama scpcrti di alliS dijalankan. Prosedur diulangi untuk pclarut TmpSmx iailu DMSO.

Ttkni/t Unit Ptmbtn,uk.n Koluni (CFU)Kajian kadar pertumbuhan EHEC di bawah penganlh anlibiotik Iclah menggunahn lcknik kiraan Unil Pembenluk:mKoloni (CFU). modifikasi daripada kaedah yang digunakan oleh MiYlgi clll. (2001). Pencairan betsin 10 hli gandadilakukan dan set-oyak 100}ll suspensi dikulturbn di alas agar nUlnen dan dieramkan Pilda 37 OC. Kemudian. antibiotiktertCOlU canlohnya Amp dimasukkan kc da.lam 5uspc:nsi unruk mencapai lu:peltatan akhir 100 j.LWml. Pengeluanm sampeldilainlkan pada jam kc 4. 6. g dan 24 dan pengiraan bilansan kaloni dilakukan. Ujian di afU diulangi dcngan kepc:kaLananlibiotik Amp ~O. 200 j.Lglml; Tc:l ~. 10. 20 ~glml: MC 600. 800. 1000 nglml: Kan S. 10. 20 ~glml dan Tmp-Smx118000, 1/4000. 1/2000 dan stok.

Penytdi(um dan ptnghruila" antigtn toksinBakleria ini disubkulturkan ke dalam 25 ml TSB dan dieramkan pada 37 OC. Sclepas dua jam eraman, 10 ml suspen5idikeluarkan dan dimasukkan ke dal,m bolol universal yang mengandungi antibiolik lenenN conlohnya Amp, padakepckatan akhir 100 ~glml atau kepekatan subinhibilOri (1/10 daripada MIC Amp) (Yoh & Honda 1997)atau tanpaantibiotik. Ketip-tigl botol dieramkan Plda 370C selama 22 jam. Suspcnsi diempar dengan pengempar ultna pada.kelljuan 10000 rpm selama 45 minit pada ,. OC unlUk mendapalkan SUpemlWl taopa sel. Supematan ylng kaya denglnSLT ini dijadikan antigen dalam ujian ELlSA_ Langkah di IllS diulangi dengan bakteria E.eoli 0 157:H7, anlibiotik Tet 10loti/mi. MC 800 nglml. Kan 10 I-liIml dan Tmp--Smx 1/4000 kepc:katan slok sena set antibiotik berll;epc:katan subinhibiuxianlibiotik tersebur.

Td"ik ELISA tidilk llUlgS"'"Telcnik ELISA tidalc langsung yang digunakan merupakan modifikasi daripada teknik yang digunakan oleh Noraziah danStimson (2000). Kawalan ujian ini ialah medium lengkap (TSB dan PBS+antibiotik). Plat mikrotiler yang mengandungi96 lellga berberbenruk "U" digunalcan. Substrat OPO 0.5 mglml sebanylk 100 111 dimasukkan ke dalam setiap lelaga dandieram pada suhu bilik dalam keadaan gelap selama 30 mini!. Reak.si IntaB HRP dengan OPO ini akan menghasilkanwarna kWling. Reak5i kemudiannya dihentikan dengan penambahan 50 ~I 2.5M asid sulfurik pada setiap lelap.Penambahan asid sulfurik ini menyebabkan perubahan warna daripada lcuning kepada o~n. Perubahan wlma ini diukutpada panjang gelombang 490 om dengan menggunakan pembac. ELISA (Dynalcch MR 5000).

KEPUTUSAN DAN PERBlNCANGANUjla" knobib." /,*1""", fla" rriJai K,/,*Ir.alalf P",,,clUa,, Mini",um (MIC)Ujian mendapali melanal dan DMSO hilang kesan lobik lerhadap kcdua-dua sampel apabila dicairkan 1/16 kali dan 118uti masing-masing. Oleh iru, pencairan ini digunakan untuk melarul anlibiolik Manakala nilai MIC yang didapati adalahsepeni berilrut:

A.NTIBIOTIK £.coIiOI57:H7 CFI

(~gfml) (IJ.W'ml)

Ampicillin 25 - ~O 2500-5000

Tettaeycline 0.39 - 0.78 0.78 - 1.56

Mitomycin C 0.625 - 1.25 US - 2.5

Kanamycin 3.13 - 6.2~ 6.25 - 12.5

Tmplsmx 0.1-0.2 :0.5-1.0 250-500: 1250-2500

Berdasarkan jadual di IllS, kedua-dua sampel yang diu;i adalah rcsistan lehadap ampicilin dan CFI iairu isolat klinikalmenunjultbn nilai Mle yang ringgi betbanding kawalan. Ini lebih ketata ke lIaS ampicillin danTrimethoprime:SulfamethoXlzole Fenomena ini mung.lcin disebabbn CFJ merupakan isolat klinibl yang telah lama danbanyak Ierdedah kepada pelbaga.i antibiotik yang biasa digunabn dalam bidang peNbatan_ Bagi trimethoprimesulfamethoxazole terutamanya, dadah ini amll biasa digunabn unlUk: menwat infeksi trak urin.ari dan juga sebagairaWltan diln:a infeksi pelbagai spesies Salmonella, Shigella dan E.coli (Goldstein &. Slein 1999). Manakala. klwllan

269

adalah kultUI tuJen yang diperolehi daripada NCTC. Pendedahan bakteria ini kepada penggunaan pelbagai antibiotikadalah kurang daripada CFI. Justeru itu, nilai MIC pelbagai antibiotik lerhadapnya juga lebih rendah daripada CFI.Kesimpulannya, tahap keresistanan yang tinggi sepeni yang ditunjukkan oleh CFl perlu diambil perhatian oleh parapegawai perubatan terutamanya dalam kes jangkitan yang disebabkan oleh kumpulan EHEC.

Kadar pertumbuhan EHEC di baH'ah pengaruh antibiotikKajian kadar penumbuhan sampel kawalan dan CFI di bawah pengaruh antibiotik telab dijalankan untuk kelima-Iimaantibiotik. Keputusan menunjukkan bahawa ampicillin, mitomycin C dan trimethoprime-sulfamelhoxazole tiada kesanperencatan pertumbuhan dapat diperhatikan terhadap CFI kerana kepekatan yang digunakan jauh lebih rendah daripadanilai MICnya. Mitomycin C dan kanamycin masing-masing menunjukkan ketidakberkesanan dalam membunuh EHECdalam masa 24 jam. Kepekatan-kepekatan yang berlainan juga tiada perbczaan antara satu sarna lain dalam kesanmerencat penumbuhan EHEC. Hasil inL lerutamanya bagi kanamycin adalah bercanggah dengan sifat bakterisidalnyayang berganrung kepada kepekatan iaitu lebih linggi kepekatan lebih cepat kesan bakterisidal (Davis 1987).Di antarakelima-lima anlibiotik ini, didapati tetracycline adalah di antara antibiotik yang paling berkesan merencat penumbuhankedua·dua sampcl pada kepekatan yang digunakan. Walau bagaimanapun. kesan bakteriostatik tetracycline adalah tidakberkekalan selepas 24 jam (Rajah 1).

" 10 ug/m

" 20 ug/n130282624

,,~

8

,/,

, ;, / /~ sf:

.....,/ "-- ........ , /~'"........... " 5 uglm

1200

'100

E,

::J10.00

U .. ,

OJI." .'"":~:0 9.00 /: . .

...J • 01 .......... _, .I:',-

8.00 , ......." II

700

0 2 4 6

Masa (Jam)

Rajah 1: Bilangan inokulum berbanding masa bagi sampel kawalan di bawah pengaruh tetracycline dalam jangka masa 30jam. Kepekatan tetracycline adalah berbeza (5- 20 ).Ig/ml).

Kesull aruhall penghasilall toksin duri EHECRajah 2 menunjukkan liter toksin yang dihasilkan oJeh sample kawalan lebih tinggi dari CFI dan titer pengosongmemberikan bacaan yang tinggi berbanding toksin CF I. Di samping itu, dapat diperhatikan tiada peningkatan yang jelasdalam titer IOksin yang dihasilkan oleh kedua-dua sampel dalam kehadiran antibiotik atau tidak walaupun banyak kajianlepas mendapati aruhan penghasilan toksin dan sampel E.coli disebabkan oleh antibiotic (Walterspiel 1992, Ostroff et al.1989. Karch et al. 1986). Punca yang menyumbang kepada perbezaan hasil penyelidikan ini dengan hasil kajian-kajianlepas mungkin discbabkan oteh pengaruh faktor-faktor luaran sepcni jenis antibiotik Uenama dan pengeluar) yang berbcl.ascnsitiviu, teknik ELISA yang dijalankan scna faklOr sekitaran terutamanya berkaitan dcngan [eknlk penyediaan sampel.

1\1 ilomycin C mcrupakan antibiolik yang biasa digunakan untuk mengaruh penghasilan Loksin dari E.coli 0 157:H7 (Lawet aL 1995) tctapi Griffin (19\15) mendapati bahawa mitomycin C udak. mcngaruh pcnghasilan toksin SLT-II\' dalam salustrain E.coli yang mcngkodkan gcn loksin ini tctapi peningkatan penghasilan IOksin yang signiflkan diperhalikan untuksatu strain yang lain. kajian pengcsanan \oksin melalui Ick.nik ELISA adalah kurang scnsitif untuk mengcsan toksin alchCFI. Poliklonal antibodi yang digunakan dalan1 kajian 101 Icbih spcsifik mengesan SLT-II dan kemungkinnn toksin CFIlebih kepaJa SLT-J dan membawa kcpaJa kcgagalan tcknik ELISA unluk mcngcsan IOksin yang dihasilkan (Noraziah &Stimson 2000).

270

...

Rajah 2: perbandingan titer toksin dengan kehadiran antibiotic atau tidak yang dihasilkan oleh samplekawalan(atas) dan cn (bawah), dllcmukan melalui kaedah elisa tak langsung. Setiap bar me~ akili min ±sd (n= )

KE nIP LKajian mendapati CFI adalah Icbih resistan kepada antibioti berbanding dengan kawalan. Hasil ajian ini harap bolchdijadikan cba ai garis panduan cpada pakar-pakar perubatan tcntang keberkcsanan preskripsi an ibioti tcrutaman atcrhadap kes diarea agar masalah resistan tidak terus menin kat. te' ik ELISA tidak langsung yang dijalankan dalamkajian ini adalah kurang scnsitif unlu . mcngesan tok in yang dihasilkan olch sampel khasnya sampel CF I.

PENGHARGAANPihak penulis ingin merakamkan ucapan terima-kasih kepadl.l geran UKM N I') 2000 dimas pembiayaan projck Inl.

RUJUKANI. Ahmed, S., Donaghy, M. 1998. All Olllbreak olE cherichia coli O/5i ill Celltral Scotlalld, Dim: Kaper 18. O'Brien

AD (cds) Escherichia coli OlS7:H7 and olher Shiga to."in-producing E coli. WashmglOn. DC. A M Press. p 59-65.

271

2. Andrews, 1M. 2001. Dctenninalion of minimum inhibitory conc:enlflltions. Jou17Iai ofAntimicrobial CMmolhrrapy.48, Suppl. 51, 5-16.

3. Cimolai, N., Carter, lE., Morrison, BJ.• Andcrwn, 10. 1990. Risk factors for the progression of Eschericltia colio157:H7 enteritis ro hemoliric uremic syndrome. The JOll17lal ofPediatric. 116: 589-92.

4. Davis, B.D. 1987. Medl3nism ofme baclcrisidal action of the amynoglycosides.. Microbial Rev. 51: 341-50.5. EVIns, H.S., Madden, P., Douglas. C., e:t 11. 1998. General oUlbreaks of infection with EsclKTichia coli 0157 in

Englands and Wales: 1995 Illd 1996. Commun Dis public Heallh_ I: 167-716. Goldslein, r.w., Stein, G.E. 1999. Trimelhopn·m. and Trimethoprime·sulfamefhoxD:ale. Dim: Vu, V.c., Merigan,

T.e., Barrere, S.L An/imicrobial Therapy and Vaccines. Balli~. Williams & Wilkins.7. Griffin, P.M. 1995. Escherichia coli 01 57:H7 and Other enlerohemonhagic Escherichia cali. Dim: Blaser Mj, Smilh

PD. Ravdin JI. Greenberg HB, Gerrenl RL,eds. Inftxtions of/ht! gaslrointeslinal/raet. Raven Press: New YOR.. p739-61.

8. Griffin, P.M., Tawle, R.V. 1991. The epidemiology of infeclion c3used by Escherichia coli 0157:H7, otherenlerohemorrliagic E. coli and the 3ssociated hemolytic uremic syndrome. Epidemlol Rev. 13: 6Q.98.

9. Harlow, E., Lane. 1988. Antibodies. a laboratory manual. Gold Spring Harbor Laboratory, Gold Spring Haber, NewYork.

10. Karch, H., Slrockbine, N.A., O'Brien,. A.D. 1986. Growth of Escherichia coli in the presence of trimelhoxazolefacilitates detection of Shiga-like toxin producing strins by colony blot assay. FEMS Microblol. Lel/. 35: 141-45.

II. Law. D., Kelly, J. 1995. Use of heme and hemoglobin by Escherichia coli 0157:H7 and other Shiga-like-rox.in.producing £.co/l serogroups. Inftcllmmun. 63: 700-02.

12. Michino, H., Alllki, K., Minami, S., et al. 1999. Masive outbreak of Eschen'chia co/l 01S7:H7 infection in schoolchild~n in Sakai City, Japan, associated with consumption of white Illdish sprouts. Am. J. Epidemlol. J50: 787-95.

13. Miyagi, K., Omura, K., Ogawa, A., Hanafusa, M., Nakano, Y., Morimatsu, S., Sano, K. 2001. Survival of ShigaIOJ.in-producing Eschrrichla coli 0157:H7 in marine waler and frequent detection of the Shiga toxin gene in marinewater samples from an estuary pan. Epidmliol. Infeel. 126: 129·33.

14. Noraziah, M.z., Stimson, W.H. 2000. The Influence of Antibiotics on Shiga-like Toxin (( Production by Escherichiacoli 0157:H7 and Possible Ways of Regulating Toxin Production. Simposium Sains Kesihatan K~bGngs(Ja" Kr-J:174-181.

15. O'Brien, A.D., Holmes. R.K. 1987. Shiga and Shiga-like Toxins. Microbiol Rev. 51: 206-22.16. Ostroff, S.M., Kobayashi, J.M., Lewis, J.H. 1999_ Infections with Esclrrrichia coli 0157:H7 in Washington States..

The first year of statewide disnse surveillance. JAMA. 261: 355·9.17. Pavia, A.T., Nichol:u:, C.R., G~, D.P., et al. 1990. Hemolitic uremic syndrome during an outbreak of Eschuichia

coli 0157:H7 infection in institutions for menlelly retarded persons:dinical and epidemiological observations. J.Peadiafr. 116: 544-51

18. Proulx.. F., TUl!con, 1P.. Delage, G., Lafleur, L., Chicoine, L. 1992. Randomied, controlled mal ofantibiotie therapyfor Escherichia coli 0 157:H7 enlentis. J. PMiaClr. 121: 299·303.

19. Riley. L.W.. Remis, R.S.. Helgerson. S.D.. McGee, H.B,. Wells. J.G., Davis. B.R., Heben, RJ., Oleon, E.5..Johnson. L.M.. H3rgrell. N.T.. Blake. P.A., Cohen, M.L 1983. Hemorrhagic colitis associaled with a rareEscherichia coli serOlYpe. N. Eng!. J. Med. 308: 681-5.

20. Robson. W.LM .. SCol1. R.B. 1990. Influence of antidiarrheal and antimicrobial medications on the hemorrhagiccolitis associated with hemolitic uremic syndrome. J. Pediafr. 117: 675-76.

21. Walterspiel, J.N., Ashkenazi, S., Morrow, A.L., Cleary, T.G. 1992. The effect of subinhibitory concentrations ofantibiotics on eXlracellular Shiga-like toxin 1.lnfeclion. 10: 25·9.

22. Yoh, M., Hond3, T. 1997. The stimulating effecl of fosfomycin, an antibiotic in common use in Japan, on theproductionlrelease of verotoxin-I from Enterohemorrliagic Escherichia coli 01 57:H7. Epidemlollnfecf. 119: 101-03.

23. Zhanel, G.G., Karlowsky, J.A., Harding, G.K.M., Carrie, A., Mazzulli, T., Low, D.E.. Horban, OJ. 2000. ACanadian national Surveillance Study of Urinary Tract Isolates from Outpatients: Comparison of the activities oftrimethoprime-sulfnmethoxazole, Ampicillin, Mecillinam, Nlltrofurantoin and Cipronoxacin. AmiMicrobial Agenlsand Chemotherapy. 44(4): 1089·92.

272

PENCGUi"'AA~ TEKJ"IK ELISA T AK. LANCSU:--JCDALA~I PEi'iGESA"'A:" TOKSIN SEPERTI SI1IGA

DARIPADA ESCHERICHIA COLI.

ASSESSMENT OF I DIRECT ELISA TECI1NIQUE FOR DETECTING TilE SI1IGA-L1KETOXIN PRODUCING ESCHERICHIA COLI

Nor3Zjah MZ. Nur Hikmah ZA.Jabalan S3ins Biopcrubatan, Fakulti Sa ins Kesih:lIan Bersekuru. Univcrsiti Kebangsaan Malaysia.

Jalan Raja Muda, 50300 Kuala Lumpur.

ABSTRAKIABSTRACTObJd;uf kaJlan inl ialah untuk mcnilat pcnggunaan h:knlk ELISA tak langsung unluk mcngesan loksin y:mg dihasilkanol.:h E Co/I 0157:H7 Ibn isolal khnlkal (CFI). Anubodi poliklonal dlha5ilkan d:uipad:a 'Fonnahn killed' E coli

0157.H7 )':lng berfungsl sebagai imunogcn. TokslO E coli OIS7'Hi dan Cfl dih:lsilkan dcngan mcngkl.lllUrkOln sdbaberia dl dalam kaldu soya IryptOne yang mengandungl 800 nglml mllomyslO C. PenCillran antibodi poliklonal yangoptimum lalah pada 1: 10 mcnggunak3n Ieknik ELISA udak Iangsung. ELISA menunJukkan sensirlviu )'ang tinggi apabiladilakukan penges:tnan ke :l1as toksin E coli 0157:H7 u:l:lpi udak pada toksin Cfl. Perbl=zaan ini mungkin disebabkantoksin yang dihasilkan oleh CFI berbcza dengan toksin yang dlhasilkan oleh E culi OI57:H7, Kesimpulannya. telmikELISA dapat digunakan untuk mengesan toksin E. coli 0157:H7 tetlpi mempunyai sensitivlti yang rend:lh unruk

mcngesan toksin CF I.

The obj«th'e of this study is to ilSse~ the indir«l ELISA t«hnique for detecting the Shiga-like rO.'l:in produced by E. coli0157:tl7 ilnd clinical isol:lII: (Cfl). Polyclonal antibodies were nised by using formahn killed E. coli 0157:H7 as animmunogen. Tryptic soya broth containing 800 nglml milomycin C was used 10 grow E. coli 0157:H7 for optimumproduction of toxin. The result show that Ihe optimum dilUlion of polyclonal antibody is at 1:10 by indirect EUSAlechnique. High sensitivity was obtained when detecting to.'l:in produced by E. coli 0157:Hi but nOI by CFI. This might be

because of the to.'l:in produced by CFl was differenl from the lo.~in produced by E. coli 0157:H7. In conclusion, EUSAtcchnique can be ulilized to detect to:(in produccd by E. coli 0157:H7 but it is less sensitive to delect the to:(in produced

by CFt.

PENGEI\'AlA:"riE. coli 0157:H7 tclall mend~pat perhati~n umum kcrana bcrlaku percbakan pcndarahan kotitis (HC) yang mdibalkanpelanggan di restoran makanan segerll dl Amcrika (Riley el al. 1983) dan pen8kuhurun reses pesukil dilukukun danberjaya mengisoh1t E. coli 0157:H7 (Nularo & Kaper 1998). Baklcria ini mempunyai pctbagai faklor virulen dan salahsatu daripadunya ialah ia menghasilkan 10kSln yang dikenali sebagai 'Shiga-like to:(in' (SLT) (Nalaro & Kaper 1998.Peningkalun kadar motiliti di kalungan pesakit STEC dlsebabkan otch kelcw:llan mcndiugnosis infeksi inL Pada pesakilHUS. simptom akan muncul bebcropa hari sclepas berlakunya diarea. P3da maS3 terscbul bilangan STEC lelah berkurangiairu dan 90% ke 33% d1ri kandungan nora iesC'S (TafT et al. 1m). Terdapal juga kes di mana diarta berlaku di dalamtempoh yang singkal. Diagnosis sukar untuk dijalallkan kerana jumlah ~mpel dan s.....ab rekrum lidak mencukupi.Pendiagnosan STEC boleh di bahagikan kepada 3 kacdah iairu pcngkulluran STEC, mengesan SlT dan mengesan genSLT (Paton & Paton 1998).

Di Malaysia kes infeksi E. coli 0157:H7 masih belum pemah dilaporkan. Waillubaglllmanapun kajian yang dijalartkanoleh Noraziah et a1. (2001), saw spesimen klinibl daripada peSlkit di:a~a dlbuktikan me:lalui k.aed:ih PeR mcngandungigen SLT-I dan SLT-II. Ujian pengenalpastian menggunakart API 20E mendapati ia a<blah E. coli telapi bukan se:rotaipOI57:H7. Oleh iru kajian ini dijalankan untuk membangunkan dan menilai tdenik ELISA 13k langsung dalam penges.ananSLT yang dihuilkan oleh CFt bcrbanding sampel kawalan.

(l

409

1

BAHAN DAN I(AEOAH

Balaeria dall Pt'lrghasi/a/l 'Slri/:a-likl' toxin'

Balneria yang digunakan dalam kajian ini adalah E. coli 0 151:H1, E. coli 0 151:K88a dan 0 I:K I(L I):H1 dari National

Cell Tissue Culture dan sampcl isolat klinikal I (CF1) (Noraziah et a1. 2001). Agar dan kaldu yang digunakan unluk

rengkulturan lalah agar sorbital MaeConkey. SMAC (DIFCO). agar nUlrien ( BBl ), kaldu nutricn (BBl) dan kaldu soya

IryplOne (BBl), £. coli 0151:H1 dikulrurkan pada agar SMAC dan dieramkan pada 31°C selama 24 jam seterosnya di

subkulturkan dalam TSB yang mengandungi 800 ngtml Me. Kultur kcmudiannya dicmpar pada kelajuan 10.000rpm

sclama 45 minit pada suhu 4QC dan supcmauJn diambil scbagai sumbcr kasar SlT.

Pellghusilall amibodi polik/olw{

Amab pUlih New Zealand (Unil Sumber Hai ..... an Makmal. Fakulti Perub~llan) disuntik dengan FK 0151:H1 (2 X 1081200 J.l1) yang seeam intramuscular (Noraziah dan Slimson. 2000). Pada kajian ini. penghasilan antibodi poliklonal

diJakukan sclama 12 minggu, Amab disunlik sCliap tiga minggu dan darah diambil4-5 hari sclepas sunlikan. 10 ml darah

diambil melalui I'cna lelinga dan diisi di dalam b0101 unl\'ersal. Penulinan antibocli ditakukan mengikul kaedah Noraziah

POOl),

Tckllik ELISA rak LUllgSUllg

Teknik ELISA yang dijalankan adalah modifikasi dari Nomziah dan Stimson (2000) di mana substral oro digunakan dan

dlbaca pada gelombang 490 nm,

KEPUTUSAN DAN PERHI.'iCANGAN

Perballdingall Sf'rlIm Iwrlflul dUll all/ibodi polik/mw{

reId alan spcsilik antara SLT 0151:H1 d3n anlibodi poliklonal memberikan scnsitiyili ELlS.~ yang linggi. ~.Janakala

sensili\"iti ELISA rendah apabila kompleks anligen dan anlibodi yang melibalkall serum normal dan SlT 0 157:H1 (Rajah

I), Serum normal benindak scbagal indikalor bahawa tindakbailis silang tidak berlaku, Sin pcm;airan anlibodi

membcnbn sensili\"iti ELISA yang semakin rendah apabila semakin tinggi peneairannya dan peeairan amobodi yang

optima adalah pada 1: I0

Pcrbulldillgall pt'llgi/;ufal/ amibodi po/ikltJ/la/ df'llgull FK E. coli dall SL T E. coli 0/57;1/7

Rajah 2 mcnunjukkan hasil bacaan ELISA mcnggunakan antigen yang berlainan. bertujuan untuk mcngellihui samada

wujud atau lidak kcadaan scnsitivili silang deng3n E. coli yang lain. Hasil yang dipero1chi mcnunjukkan spesilisiti

ELISA tinggi arabila SlT 0151 digunakan sebagai antigen.

Pl'rbOlldillgOll Ollfara SL T 0/57:1/7 dUll SL T CF1

Raj3h 3 menunjukkan kepulusan daTi lcknik ELISA lidak langsung yang dijalankan umuk mcngesan toksin yang

dihasilkan oleh STEe. Apabila amigen yang digunakan ialah SlT 0151, sensill\"ili ELISA adalah tinggi lelapi

pengesanan SlT CF I memberikan sensiti\'iti ELISA yang rcndah. Kaldu TSB mengandungl MC yang berkepekalan 800

nglml digunllkan sebagai kawalan,

Tcrdapal bcberapJ faktor yang mcmpcngaruhi hasillcrsebll1. Faktor penama ialah kcmungkinan CF I leblh menghasilkan

SLT I berbanding SLT II. Ini ker:!n:! l<'rdapat s<'rolaip mcnghasi\kan SLT I dan SLT II pada kuantiti yang berbeza (Mead

& Gnffin 1998). F;lklOr yang kedua lalah berkemungkinan SLT II yang dthasilkan oleh CF I adalah berbcz.a dengan SlT

II 0151 H1. SLTil boleh dibaha~~.ikan kcpada bebcrapaJel1ls lauu SlTil\', SLTII yha. SLT IIl'hb dan SLT II I'a (Moss el

al. 1995). r-bka leknik ELISA )all£ digunakan dt dalam kaJI3n Inl I11tmpunyal lahap 5e1lS11l\'1 yang rendah untuk

l11engesan lUblil yang dlha~l!kan uleh CF I

410

I. 1m Kawalan (TSB + Me)~ I.GEc 1.4 o FK 0157:H70

'"" 1.2S 1 SLT O157:H7<III O.:Jw

0.6

lJ--LL:a,""13 0.4"c:l 0.2

0

erum Ab Abl/20 Ab 1/40 Ab II 0 Ab Ab Ab

normal 1/160 1/310 1/640

Rajah I: Perbandingan 3ntara serum nom1al dan antibodi poliklonal terhadap fK dan SLT 0157:H7 dikcsan dcnganmenggunakan ELISA tidak langsu.ng. Nilai setiap litik min ± SD (n=_).

L 1E 1.6c:

0 1.4'"" 1 ? ~<: .- I< 1 "l

<r. 0.8 ~:JUJ 0.6c:

0.4 ~""u 0.2"!Il0

Ab 1/10 Ab 1/100

mK1Jwalan (PBS)

.FK 0157:H7

li'JFKOI57:K8 a

mFK OI:KJ(LI):H7

I2ISLT 0157:H7

Ab 1/1000

Rajah 2: Rajah di alas menunjukkan hasil pengikatan amara amibodi poliklonal dengan FK 0157:H7. 0157:88a ,01:Kl(L1):H7 dan SLT OI57:H7. Nillli setiap tilik min ± SD (n=2).

1.6

1.4

§1.2o~I

~ 0.8:JUJ 0.6~lj 0.4

ciS 0.2

Ab 1/10 Ab 1/100

o Kawalan (TSB + MC)

~ SLTOI57:H7

~ SLTCFl

Ab 1/1000

Rajah 3: Perbandingan antara SLT yang dihasilkan oleh 01 7:H7 dengan SLT yang dihasilkan oleh CF I. ELISA lidaklangsung pada penyerapan 490 run digunakan. Penghasilan SLT dilingkaikan dengan meng ubkulturkan £. coli 0157:H7dan eFI dalam TSB yang mcngandungi 800 nglml Me. Nilai seliap lilik ialah min ± SD (n=2).

411

PENGHARGAANPih.k penulis ingin meraumbn ucapan lerima-kasih kepada gem! UKM N1212000 diaw pembiayaan projek ini.

RUJUKANI. Mead, P.S., Griffin, P.M. 1998. £.scMrichio coli 0157:H7. T1J~ IAnw. 3S1: 1207-1212.2. Moss, l, Iglewsk.i, B., Vaughan. M. I99S. BQCterials loxlns aNI vin4/~n«/DCton in disfts~. New York;: Marcel

Dekker.). Nltaro, J.P.• Kaper, lB. \998. DilJ'Theagenic Esch~richia colL CJin;col microbiology Rml:M. 11: 142·201.4. Noraziah, ML Kamrul, N., Ooi. W.L., Son, R. 2001. A multiplu PeR technique for detection of Shiga-like: toxin

gellC$ from clinical sample. 21f' Annual Confenncr of th~ Malapian Society for BiocMmUlf)I and MoI«tJarBiology, him. 3.

5. Noraziah. M.Z., Slimson, W.H. 2000. Penghasilan dan pc:ncirian antibodi poliklonal yang berpotensi sebagai asendiagnostik lerhadap Shiga-like loxin II. Simposil.lm Sain.r Ke:sjha(an-K~~1/gsQ41/ K~-J FSKB, UKM, Kilaia Lllmpur,hIm. 200-205.

6. Palon, le.• Palon, A.W. 1998. Pachogenesis and diagnosis of Shiga Toxin-Producing Escherichia coli Infections.Clinical microbiology reviews. II: 4SG-479.

7. Riley, LoW., Remis, R.S.• Helgerson, S.D., McGee, H.B., Wells, lG., Davis, B.R., Heben, R.J" Olcon, E.S.,Johnson, L.M., Hargren, N.T., Blake, P.A., Cohen, M.L. 19S3. HemoTThagic colilis associated with a rareEscherichia coli serorype, N. £nll. J. Me:d. 308: 631-685.

8. Tarr, P.I., Neil, M.A., Clausen, C.R., WalJcjns, S.L., ChriSI, D.L., Hickman, R.O. 1990. Escherichia coli OIS7:K7and the hemolytic urtmic syndrome; imponance of early cultures in establishing the etiolOB)'. 1. In/eel Dis. 162:S53-556.

CORNEAL CURVATURE OF ONE SAMPLE OF MALAYSIANABORIGINE SCHOOLCHILDREN.

Mgbd-AII B, Mahlnl MSDepartment of Optometry, Faculty of Allied Health Sciences, Universiti Kebangsaan Malaysia,

Jalan Raja Muda, 50300 Kuala lumpur.

ABSTRAKIABSTRACTSalah satu parameter yang menentubn kesalahan refrak$i mata manuia adalah kelenglcungan komea. Satu kajian lelahdil3lrukan untuk mengukur kelenglcungan kornea satu sample ol'1lllg asli yang terdapat di Malaysia, 58 ol'1lllg (28pe~mpuan dan 30 leiaIci). julat umur anlar1. 5 hingga 13 tahun dari suku bum Temuan lelah bersetuju \llltuk menjadisubjek untuk kajian ini. Pengukutan kelenglcungan komea dilakukan haw mata Unan sahaja menagunakan keratometerBausch and lomb. Kepucusan kajian mendapali min kelengkungan komea untuk keselwuhan sample adatah 7.6I:tO.24mm dimana 7.71±O.30 untuk: lelaki dan 7.SI±O.12 untuk pc:rempuan. Tiada perbeuan yang signifikan didapati antarapengukuran mata lelaki dan perempuan (p-O.12) sena pc:rbezaan umur (p-O.Sl). Walaubagaimanapun keputusaD bjianini menujukkan perbezaan yang signifikan berbanding dengan Icanalt-kanak sekolah berbangsa Cina di Malaysia (p<O.05).Kesimpulan kajian ini menunjukJcan bahawa faclOr genetic memainbn peranan penting dalam mencntultan kelengkungankomea sesuatu bangsa.

One oflhe parameler.> thai determine the refractive error ofa human eye is the corneal curvature. A study was e&rried outto measure the corneal C\lrvaIU~ of one sample of Malaysian aborigine school childl'CTl, Fifty eight subjects (28 maks and)0 females). age ranging from 5 10 13 years old, from Temuan population volunleered for chis study. The meuurementwas taken using the Bausch and Lomb keralomeler on the righl eye only. The results showed thai the mefln of cornealcurvalure for che whole sample is 7.61%0.24 mm wich 7.7\%0.30 mm for males and 7.SI%O.12 mm for females. Nosianiflcant difference was found between males and females (p-O.12) and between differenl age groups (p-O.SI).However, our results sho~ signiflcanl difference when compared 10 the Malaysian Chinese sclw)olchil~n (p<O.05) btUinsigniflcanl difference when compared 10 the Malay schoolchil~n. It was concluded from Ibis slUdy thaI genetic mayplay an important role in determining corneal curvature ofa population.

\I t,I>

rJ- /10-

412(C c.i - "01Gv

SUMBER:

ELEKTRONIK

1

ARKIB : 01/07/2011

Sayur import ke Johor bebas E.Coli

NUSAJAYA 30 Jun - Kerajaan negeri mengesahkan tiada sebarang sayuran import yang dibekalkan ke negeri ini dicemari wabak Escherichia coli (E.Coli).

Pengerusi Jawatankuasa Pembangunan Wanita dan Keluarga, Kebajikan Masyarakat dan Kesihatan Negeri, Dr. Robia Kosai berkata, Kementerian Kesihatan sedang memantau pengimportan timun ke negara ini.

Beliau berkata, berdasarkan maklumat daripada Sistem Maklumat Keselamatan Makanan Malaysia (FoSIM), tiada timun yang diimport dari Jerman atau Sepanyol selepas disyaki berlaku penularan wabak tersebut sehingga menyebabkan kematian di kedua-dua negara itu.

"Sekiranya terdapat pengimportan timun dari dua negara itu, analisis bakteria Enterohaemorrhagic Escherichia coli (EHEC) akan dilakukan.

"Jenis sayuran lain yang disyaki tercemar juga disahkan tidak dieksport dan sehingga 20 Jun 2011, tiada kes jangkitan EHEC dikesan di Malaysia," katanya sebagai menjawab soalan Datuk Md. Othman Yusof (BN- Kukup) pada sidang Dewan Undangan Negeri (DUN) di Kota Iskandar, di sini, hari ini.

Menjawab soalan tambahan daripada Lim Kee Moi (BN-Yong Peng) mengenai wabak E.Coli dalam sayur organik, Robia berkata, tiada kajian yang menyatakan wabak tersebut ditemui dalam sayur organik dan kajian sedang dilakukan.

"Bagaimanapun pihak kerajaan akan mempertimbangkan untuk menjalankan kajian mengenainya," katanya.

2

ARKIB : 11/06/2011

E-Coli: Tiada cadangan periksa pelancong asing

11/06/2011 2:46pm

TEMERLOH 11 Jun - Kementerian Kesihatan belum bercadang untuk mengadakan pemeriksaan wajib terhadap pelancong dan rakyat yang baru pulang dari Eropah berikutan wabak penyakit Escherichia Coli atau E-Coli.

Menteri Kesihatan, Datuk Seri Liow Tiong Lai berkata, bagaimanapun, pihaknya tetap mengambil langkah berjaga-jaga terhadap kemungkinan merebak penyakit itu di negara ini.

Setakat ini jelas beliau, Malaysia masih bebas daripada wabak penyakit E-Coli yang menyerang beberapa negara Eropah dan belum ada sebarang kes berlaku di negara ini. - Utusan

ARKIB : 08/06/2011

EU: Tauge bukan punca E.coli

BRUSSELS 7 Jun - Ketua kesihatan Kesatuan Eropah (EU) memberi amaran kepada Jerman supaya jangan membuat kesimpulan terburu-buru dan tidak tepat mengenai punca wabak bakteria E.coli, selepas siasatan mendapati penyakit itu bukan disebabkan tauge seperti yang dilaporkan.

Wabak tersebut telah meragut 23 nyawa dan menimbulkan ketakutan di seluruh Eropah selain menyebabkan kerugian eksport kepada petani.

Pesuruhjaya Kesihatan EU, John Dalli memberitahu Parlimen EU di Strasbourg hari ini, maklumat awam seperti itu mesti mempunyai asas saintifik yang kukuh dan tidak boleh dipertikaikan sebelum disiarkan kepada umum.

Pihak berkuasa Jerman pada mulanya menyalahkan timun dari Sepanyol, kemudian tauge tempatan, sebagai punca penyebaran wabak maut itu, sebelum menarik balik kenyataan mereka.

Menteri-menteri pertanian EU bersidang dalam mesyuarat tergempar di Luxembourg lewat hari ini ekoran tuntutan daripada petani supaya mereka dibayar pampasan bagi kerugian yang berpunca daripada wabak tersebut.

Dalli berkata, mesyuarat itu akan juga mengkaji semula sistem amaran keselamatan makanan EU untuk memastikan sesuatu amaran mempunyai 'asas dan bukti saintifik' sebelum disiarkan.

Sementara itu Jerman melipat gandakan usaha untuk mengesan punca wabak setelah siasatan awal di sebuah ladang yang menanam pelbagai jenis tauge di negeri Lower Saxony, utara Jerman didapati negatif bagi bakteria tersebut.

3

Pihak berkuasa dijangka mengumumkan keputusan ujian terhadap 17 lagi sampel biji benih, air dan peralatan yang diambil dari ladang itu hari ini.

Namun pihak berkuasa Jerman mengekalkan amaran kepada pengguna supaya jangan memakan tomato, daun salad, timun dan tauge mentah sehingga punca wabak E.coli itu dapat dikenal pasti.

Bakteria itu telah membunuh 22 orang di Jerman dan seorang di Sweden dan menyebabkan lebih 2,300 lagi jatuh sakit, dengan tanda-tanda termasuk cirit-birit berdarah dan dalam kes paling teruk, kerosakan buah pinggang. - AP/AFP

ARKIB : 07/06/2011

Tauge Jerman punca E.Coli

HAMBURG 6 Jun - Sayur tauge yang ditanam di Jerman mungkin menjadi punca penyebaran wabak maut E.Coli, yang kini telah meragut 22 nyawa dan 2,200 yang lain jatuh sakit.

Ia juga telah mendorong Rusia mengharamkan sayur-sayuran dan buah-buahan import dari negara-negara Kesatuan Eropah (EU).

Menteri Pertanian di Lower Saxony, Gert Lindermann berkata, pasukan penyiasat telah mengesan bakteria yang jarang ditemui dan bertoksin tinggi itu di sebuah ladang di daerah Uelzen.

Media melaporkan ladang tersebut terletak berdekatan dengan bandar Bienenbuettel, kira-kira 70 kilometer ke selatan Hamburg.

Pusat perubatan di Hamburg, bandar kedua terbesar di Jerman dan pusat penyebaran wabak yang bermula tiga minggu lalu, berhempas-pulas menerima kebanjiran pesakit, kata Menteri Kesihatan, Daneil Bahr.

Lindermann berkata, terdapat hubungan jelas yang mengaitkan sayuran dari ladang dan makanan yang dimakan oleh sesetengah mangsa.

"Kami telah mendapat petunjuk yang penting," kata Lindermann, berdasarkan laporan siasatan terhadap kebimbangan kesihatan yang menjejaskan hubungan dua negara EU, Rusia dan Jerman.

Ia sekali gus menyebabkan Perdana Menteri Rusia, Vladmir Putin berkata, beliau tidak akan 'meracun' rakyat Rusia dan bertindak mengenakan sekatan terhadap import buahan dan sayuran daripada EU.

Lindermann berkata, bukan hanya tauge, tetapi tauge alfalfa, tauge kacang hijau, tauge lobak dan tauge arugula daripada ladang, yang mungkin mempunyai kaitan dengan wabak yang tersebar itu.

4

Tauge mentah merupakan sayuran popular di kalangan rakyat Jerman dan kebiasaannya dicampur dengan salad atau ditambah ke dalam sandwic.

Pegawai telah memberi amaran kepada pengguna selama beberapa minggu supaya mengelak daripada makan tomato, timun dan salad, dan ada yang mengatakan timun dari Sepanyol mungkin merupakan punca wabak maut itu tersebar. - REUTERS

ARKIB : 03/06/2011

Rusia haram import sayur dari EU

MOSCOW 2 Jun - Rusia mengharamkan import sayur-sayuran mentah dari negara-negara Kesatuan Eropah (EU) mulai hari ini berikutan wabak bakteria E.coli, yang merebak di Jerman.

Rusia sebelum ini telah mengharamkan import sayur-sayuran dari Jerman dan Sepanyol yang dilanda wabak tersebut yang setakat ini telah membunuh sekurang-kurangnya 16 orang dan 1,500 yang lain jatuh sakit di lapan negara Eropah, lapor media Rusia memetik kenyataan pengarah agensi perlindungan pengguna Rospotrebnadzor, Gennady Onishchenko.

"Pengharaman import sayur-sayuran segar dari EU bermula pagi ini," kata Onishchenko kepada agensi berita Interfax.

Onishchenko berkata, beliau turut mengarahkan sayur-sayuran mentah yang import dari negara EU di kedai-kedai dihapuskan.

Beliau mengingatkan rakyat Rusia supaya makan sayur-sayuran tempatan.

"Situasi bertambah buruk sejak beberapa hari lepas dan kami terpaksa mengambil langkah drastik untuk mengharamkan import tersebut," katanya.

Agensi kawalan wabak Jerman, Institut Robert Koch (RKI) melaporkan 365 kes baru E.coli dikesan berlaku semalam, suku daripadanya melibatkan jenis E.coli yang boleh mengancam nyawa, dikenali sebagai E.coli pengeluar toksin Shiga (STEC).

Pegawai EU berkata, tiga kes baru dilaporkan di Amerika Syarikat (AS), dan kebanyakan jangkitan yang dilaporkan di luar Jerman membabitkan rakyat Jerman atau mereka yang berkunjung ke negara itu, baru-baru ini.

Pesuruhjaya Kesihatan EU, John Dalli, bagaimanapun berkata, jumlah kes terbaru yang dilaporkan dilihat semakin berkurangan. - REUTERS

5

ARKIB : 01/06/2011

Awas kalau cirit-birit berdarah selepas ke Eropah

01/06/2011 4:35pm

KUALA LUMPUR 1 Jun — Orang ramai yang telah mengunjungi Eropah sejak 1 Mei lepas dan pada masa yang sama mempunyai gejala cirit-birit berdarah dinasihatkan untuk menjalani ujian pemeriksaan kesihatan di pusat-pusat kesihatan yang berhampiran.

Ketua Pengarah Kesihatan, Datuk Dr. Hasan Abdul Rahman berkata, pihaknya telah menerima laporan daripada Pertubuhan Kesihatan Sedunia (WHO) mengenai satu kes wabak penyakit ”sindrom uremik haemolytik” (HUS) yang berpunca daripada pencemaran bakteria ”Enterohaemorrhagic Escherichia Coli” (EHEC).

Satu kes wabak penyakit itu telah dilaporkan di negara Jerman, katanya dalam satu kenyataan di sini hari ini.

"Untuk makluman, wabak penyakit ini adalah satu sindrom dengan ciri-ciri darah merah pecah dan menyebabkan anemia (menyebabkan kekurangan jumlah pigmen hemoglobin yang membawa oksigen dalam darah), kegagalan ginjal akut dan kekurangan sel darah pembeku,” katanya.

Dr. Hasan berkata, tanda-tanda seseorang itu telah dijangkiti wabak penyakit itu adalah seperti sakit perut, muntah-muntah dan cirit-birit berdarah.

Gejala gejala yang dinyatakan di atas juga boleh menyebabkan dehidrasi, keletihan, kelesuan, anemia, ”uraemia” (kehadiran urea dan sebatian buangan bernitrogen lain dalam darah dalam jumlah berlebihan) serta ”kecenderungan pendarahan, katanya.

Menurut beliau, punca wabak penyakit itu yang menjangkiti mangsa adalah menerusi makanan yang dicemari dengan bakteria E. Coli.

"Gejala penyakit ini dapat dilihat dengan ketara dalam tempoh tiga hingga lapan hari. Selalunya mangsa akan sembuh dalam tempoh 10 hari dan tanpa sebarang komplikasi selepas dijangkiti wabak penyakit ini,” katanya.

Selain itu, sebahagian kecil wabak penyakit ini turut melibatkan kanak-kanak dan warga tua yang boleh membawa kepada komplikasi yang lebih serius seperti penyakit buah pinggang pada tahap kronik.

Kadar kematian yang berpunca daripada wabak penyakit ini berada pada kadar antara lima hingga 10 peratus.

Dr. Hasan berkata, kajian awal mendapati pesakit yang terlibat dengan wabak ini didapati berkemungkinan memakan sayuran mentah iaitu tomato, timun dan daun salad.

6

Berikutan itu, katanya, kementerian sedang memantau pengimportan timun ke dalam negara ini tetapi maklumat daripada Sistem Maklumat Keselamatan Makanan Malaysia menunjukkan tiada timun yang diimport dari Jerman atau Sepanyol.

Kejadian wabak penyakit ini dilaporkan bermula pada 25 April lepas dengan mangsa mengalami gejala cirit-birit berdarah. - Bernama

ARKIB : 01/06/2011

Bakteria timun ragut 14 nyawa

BERLIN 31 Mei - Wabak bakteria E.coli berpunca daripada timun tercemar yang sudah meragut 14 nyawa dan menyebabkan lebih 320 lagi sakit teruk di Jerman, kini merebak ke negara lain di Eropah utara dan dijangka menjadi bertambah buruk pada minggu akan datang.

Sumber bakteria berbahaya itu belum diketahui, kata pihak berkuasa Jerman semalam, menjelang mesyuarat krisis pegawai-pegawai kerajaan persekutuan dan negeri di sini.

Kebanyakan kematian berlaku di utara Jerman.

"Kami berharap bilangan kes akan menurun tetapi kami khuatir keadaan akan menjadi bertambah buruk," kata jurucakap Pusat Perubatan Universiti Schleswig-Holstein di utara Jerman, Oliver Grieve.

Patogen E.coli itu dikenal pasti terdapat pada bekalan timun yang diimport dari Sepanyol tetapi belum jelas sama ada sayur tersebut mula dicemari di negara itu, semasa dalam pengangkutan atau di Jerman.

Sebanyak 36 kes disyaki E.coli dikesan di Sweden, semuanya dikaitkan dengan perjalanan di utara Jerman, kata pihak berkuasa.

Sebilangan kecil kes dilaporkan di Britain, Denmark, Perancis dan Belanda, semuanya juga dikaitkan dengan perjalanan ke Jerman.

Kerajaan Jerman mengenal pasti wabak itu sebagai sindrom hemolitik-uremik (HUS) iaitu komplikasi serius berpunca daripada sejenis E.coli yang dikenali sebagai E.coli pengeluar toksin Shiga (STEC).

Pusat Pencegahan dan Kawalan Penyakit Eropah (ECDC) dalam penilaian risikonya menyifatkan wabak HUS/STEC itu sebagai antara yang terbesar di dunia.

HUS menjejaskan darah, buah pinggang dan dalam kes paling teruk, sistem saraf dan boleh menjadi sangat serius bagi kanak-kanak dan orang tua. – Reuters

7

ARKIB : 31/05/2011

Wanita dijangkiti E.coli meninggal dunia

31/05/2011 6:34pm

STOCKHOLM 31 Mei - Wanita berusia 50-an yang dijangkiti bakteria E.coli di Jerman meninggal dunia ketika menerima rawatan di sebuah hospital di Sweden hari ini.

Wanita berkenaan menjadi mangsa pertama meninggal dunia di luar Jerman selepas dijangkiti bakteria yang terdapat pada sayur timun. - AFP

ARKIB : 31/05/2011

Sepanyol sangkal timun mereka penyebab E-Coli

31/05/2011 4:11am

MADRID 31 Mei – Sepanyol menegaskan bahawa tidak ada bukti yang menunjukkan timun mereka menyebabkan wabak Escherichia coli (E-Coli) di Jerman yang telah mengorbankan 14 orang.

Sepanyol dalam pada itu turut menuntut untuk diberikan penjelasan mengapa pekebun mereka dipersalahkan.

Wabak E-Coli yang dibawa oleh timun tercemar yang turut menyebabkan 300 orang sakit tenat di Jerman telah merebak ke negara-negara utara Eropah dan dijangka semakin buruk dalam tempoh beberapa minggu ini.

Menurut laporan media, pekebun di Andalusia, selatan Sepanyol telah kerugian antara 7 juta euro (RM30 juta) hingga 8 juta euro (RM34 juta) sehari sejak wabak itu tercetus minggu lalu. – Reuters

ARKIB : 07/05/2011

Sumber air dicemari bakteria

JAKARTA - Hampir 100 peratus sumber air minum di bandar-bandar besar di Indonesia dicemari bakteria E Coli dan Coliform.

Pengarah Penempatan dan Perumahan Badan Perencanaan Pembangunan Nasional (Bappenas), Nugroho Tri Utomo berkata, sebanyak 80 peratus daripada pencemaran itu berlaku hasil perbuatan manusia sendiri.

"Pencemaran berlaku kerana sikap kita sendiri, oleh itu kita perlu mengambil berat tentang sumber air kita, termasuk sistem perparitan," katanya ketika menghadiri Persidangan Kebangsaan Pengurusan Sumber Air Bersepadu di Jakarta.

Persidangan bertemakan 'Peranan Rakyat dalam Pengurusan Sumber Air Bersepadu' itu dianjurkan oleh Bappenas dan Danone Aqua sempena menyambut Hari Air Sedunia.

Menurut Nugroho, dianggarkan 3.5 juta orang akan berhadapan masalah kekurangan air pada 2025, dengan 2.5 juta daripada jumlah itu pula akan hidup tanpa tahap kebersihan yang sepatutnya.

Punca masalah itu ialah sikap manusia sendiri yang suka membazir dan mencemarkan sumber air.

"Di Indonesia, keperluan bekalan air bersih semakin meningkat dan kecenderungan pengguna air bersih turut bertambah.

"Jumlah peningkatan pengguna ialah antara 17 hingga 30 peratus per kapita untuk setahun, sedangkan jumlah air bersih yang ada semakin berkurangan ekoran pencemaran dan kerosakan," ujar Nugroho.

Sementara itu, anggota Dewan Air Nasional, Piter Hehanusa berkata, kira-kira 169 juta rakyat Indonesia belum dibekalkan dengan air bersih.

"Kerajaan memiliki 7.1 juta saluran air bersih yang hanya mampu membekalkan air kepada 35.5 juta orang dan hanya dinikmati penduduk bandar.

"Ini bermakna, sejumlah 82 peratus rakyat negara ini terpaksa menggunakan air yang tidak mematuhi piawaian kesihatan," katanya.

8

9

Ketua Pusat Sumber Daya Air Tanah dan Geologi Persekitaran dari Kementerian Tenaga dan Sumber Mineral, Dodid Murdohardono pula berkata, pencemaran air menjadi punca utama krisis air bersih di seluruh Indonesia.

Menurutnya, masalah ini diburukkan lagi dengan pengawasan yang lemah dan keengganan pelaksanaan undang-undang yang ketat. - AGENSI

ARKIB : 08/01/2011

Sungai Sarawak tercemar bakteria e-coli dikaji

KUCHING 7 Jan. - Lembaga Sumber Asli dan Alam Sekitar (NREB) Sarawak perlu membuat kajian terperinci terhadap kualiti air Sungai Sarawak untuk mengesan tahap bakteria e-coli daripada sisa kumbahan dan air buangan yang didakwa menyebabkan sungai itu tercemar.

Timbalan Ketua Menteri, Tan Sri Dr. George Chan Hong Nam berkata, kajian yang meliputi segenap aspek perlu dilakukan secepat mungkin oleh NREB kerana ia melibatkan keselamatan orang ramai.

Selain itu, katanya, perkara sebegitu akan mencetuskan panik di kalangan orang ramai serta mampu menjejaskan kehidupan para nelayan yang mencari rezeki di situ.

"Ia perkara serius kerana Sungai Sarawak adalah nadi kehidupan rakyat di negeri ini, terutamanya yang tinggal di Kuching.

"Kita tidak mahu perkara seperti ini menjejaskan banyak pihak terutamanya nelayan serta industri pelancongan," katanya pada sidang akhbar mengenai hal-ehwal semasa negeri di Wisma Bapa Malaysia di sini semalam.

Kelmarin, sebuah akhbar tempatan melaporkan hasil tangkapan dari Sungai Sarawak seperti ikan, udang dan ketam tidak selamat dimakan kerana hidupan sungai itu dipercayai mengandungi bakteria e-coli.

Seorang pegawai NREB, Peter Sawal mendedahkan sungai berkenaan merupakan antara yang paling tercemar di negeri itu.

Menurut Peter, Sungai Sarawak, terutamanya bahagian berhampiran Ladang Perindustrian Bintawa mempunyai tahap pencemaran yang tinggi kerana selain dipenuhi bakteria, ia turut mengandungi bahan toksik merbahaya.

Mengulas lanjut Dr. George berkata, beliau dimaklumkan kerjasama antara NREB dengan Universiti Malaysia Sarawak (Unimas) dalam penyelidikan mengenai kualiti air sungai telah lama dijalankan.

"Bagaimanapun, saya harap skop kajian mereka akan diperluaskan meliputi aspek-aspek pemuliharaan supaya kita dapat memulihkan kualiti air sungai di negeri ini," katanya.

10

Dalam perkembangan lain, beliau turut memberitahu sebanyak 51 kes influenza A H1N1 dilaporkan berlaku di negeri itu sepanjang tahun lalu.

"Berdasarkan situasi semasa dan persekitaran yang lebih selamat, kita jangkakan bilangan ini akan terus menurun pada tahun ini," katanya.

ARKIB : 09/12/2010

Kementerian arah siasat dakwaan kononnya Tasik Kenyir tercemar

Oleh NORLIZA ABD. RAHMAN [email protected]

PUTRAJAYA 8 Dis. - Kementerian Kesihatan telah mengarahkan pegawainya mengambil sampel air Tasik Kenyir di Hulu Terengganu untuk mengesan tahap bakteria e-coli dari sisa kumbahan dan air buangan yang didakwa menyebabkan tasik itu tercemar.

Menterinya, Datuk Seri Liow Tiong Lai berkata, jika benar tasik itu tercemar ia boleh memberi kesan buruk kepada para pengguna air di Tasik Kenyir.

Menurutnya, dakwaan berlaku pencemaran di Tasik Kenyir itu bukan dibuat kementeriannya, justeru pihaknya perlu menyiasat terlebih dahulu bagi memastikan kebersihan air Tasik Kenyir terpelihara.

"Kita ada jurutera atau pegawai di peringkat daerah dan negeri yang bertugas mengambil sampel air di tiap-tiap pusat pembersihan dan loji rawatan air untuk mengawal kebersihan dan kualiti air.

"Tandas awam kenalah jaga, tak boleh lepaskan sisa kumbahan ke dalam air (tasik). Semua tandas perlu merawat sisa kumbahan dengan betul sebelum dilepaskan ke longkang kerana kita takut saluran air tandas masuk ke Tasik Kenyir," katanya kepada pemberita di sini hari ini.

Beliau mengulas laporan akhbar yang mendakwa air Tasik Kenyir dicemari bakteria e-coli dan berada pada tahap membimbangkan berikutan pembuangan sisa kumbahan dari rumah bot.

Kerajaan negeri Terengganu semalam bagaimanapun menafikan laporan beberapa akhbar berkenaan.

Menurut Pengerusi Jawatankuasa Pelancongan, Kebudayaan, Kesenian dan Warisan negeri, Datuk Rahin Mohd. Said, laporan tersebut yang memetik kenyataan beliau itu mengelirukan dan tidak tepat.

Tiong Lai menambah, kementerian itu akan tetap mencari punca dan penyebab berhubung dakwaan tersebut.

"Tiap-tiap tasik ada bakteria e-coli tapi tak tahu tahapnya berapa tinggi dan kesannya kepada kesihatan manusia," katanya.

11

ARKIB : 08/12/2010

Tiada sebarang pencemaran air berlaku di Tasik Kenyir

08/12/2010 7:13pm

HULU TERENGGANU 8 Dis. – Tidak ada sebarang pencemaran air berlaku di Tasik Kenyir malah tasik terbesar buatan manusia itu selamat digunakan untuk pelbagai aktiviti termasuk beriadah.

Pengarah Institut Akuakultur Tropika Universiti Malaysia Terengganu (UMT), Prof Dr Faizah Shaharom berkata, kualiti air tasik itu juga tidak berbahaya atau membimbangkan seperti yang dilaporkan beberapa media tempatan semalam.

Kajian kualiti air tasik yang dijalankan sekumpulan ahli sains universiti itu dengan mengambil sampel air Sungai Comor di tasik itu, mendapati hanya suhu air mengalami kepanasan sehingga 31 darjah Celsius yang menyebabkan ikan mati.

"Kalau ada pun bakteria e-coli di situ, ia tidaklah ditahap yang berbahaya seperti yang dilaporkan akhbar berkenaan,” katanya kepada pemberita di sini, hari ini.

Beliau ditemui ketika menghadiri pelepasan peserta pertandingan memancing Piala Kenyir yang melibatkan kira-kira 80 warga negara China di Tasik Kenyir, hari ini yang disempurnakan oleh Speaker Dewan Undangan Negeri Terengganu, Datuk Tengku Putera Tengku Awang.

Beberapa akhbar melaporkan air Tasik Kenyir dicemari bakteria e-coli berpunca daripada sisa kumbahan daripada beberapa rumah bot yang beroperasi di dalam tasik itu, menyebabkan air tasik itu tidak selamat. – Bernama

12

ARKIB : 08/12/2010

Arahan siasat Tasik Kenyir dicemari bakteria e-coli

08/12/2010 4:20pm

PUTRAJAYA 8 Dis. – Jabatan Kesihatan Negeri Terengganu telah diarah menyiasat kandungan air Tasik Kenyir yang didakwa dicemari bakteria Escherichia coli (e-coli).

Menteri Kesihatan, Datuk Seri Liow Tiong Lai berkata, keputusan siasatan itu dijangka diketahui dalam masa terdekat.

"Bakteria e-coli memang biasa terdapat di tasik-tasik, namun pada tahap tertentu yang tidak membahayakan kesihatan orang ramai.

"Kita dah arahkan pegawai kita untuk ambil sampel air itu dan lihat sejauh mana tingginya e-coli dalam air Tasik Kenyir,” katanya kepada pemberita ketika diminta mengulas laporan media bahawa jumlah bakteria e-coli di Tasik Kenyir berada pada tahap membimbangkan berdasarkan kajian oleh Universiti Malaysia Terengganu (UMT).

Pengerusi Jawatankuasa Pelancongan, Kebudayaan, Kesenian dan Warisan Terengganu, Datuk Rahin Mohd Said, yang dipetik dalam laporan itu, bagaimanapun telah menafikan laporan itu dan berkata, ia mengelirukan dan tidak tepat. – Bernama

13

ARKIB : 05/08/2010

E.coli: Biskut 'Wang Wang' diletak ditahap berjaga-jaga

05/08/2010 7:32pm

KUALA LUMPUR 5 Ogos - Kementerian Kesihatan kini meletakkan biskut beras ”Wang Wang” keluaran negara China pada tahap 5 keselamatan makanan berikutan laporan kehadiran bakteria koliform dan E.coli dalam biskut itu di Wilayah Shandong, China semalam.

Menterinya Datuk Seri Liow Tiong Lai berkata, arahan telah dikeluarkan kepada Bahagian Kualiti dan Keselamatan Makanan agar mengambil sampel daripada biskut yang berada di pasaran sekarang untuk diuji.

Sebanyak 334,460 kotak produk itu dibawa masuk ke Malaysia tahun ini tetapi tidak dapat dipastikan berapa banyak yang masih berada dalam pasaran, katanya pada sidang media selepas melawat Biro Pengawal Farmaseutikal Kebangsaan, di sini hari ini.

Berdasarkan standard maklumat keselamatan makanan Malaysia atau FoSIM, tahap 5 adalah tahap berjaga-jaga, manakala tahap 6 akan mengakibatkan produk terbabit dikeluarkan daripada pasaran.

Tiong Lai berkata, pihaknya juga sedang berhubung dengan pihak berkuasa China bagi mendapatkan maklumat lanjut mengenai kes itu selain mengesan sumber pencemaran.

Ditanya sama ada produk itu selamat untuk dimakan, beliau berkata, keputusan akan dibuat selepas menerima hasil analisis. - Bernama

14

ARKIB : 03/11/2009

Elthon John dimasukkan ke hospital

03/11/2009 2:50am

LONDON 2 Nov. - Jurucakap Elthon John hari ini berkata, penyanyi tersebut telah dimasukkan ke hospital selepas menghidap jangkitan bakteria E.Coli dan flu.

Gary Farrow berkata, bintang pop itu berharap beliau dapat dibenarkan keluar lebih awal namun telah dipaksa untuk membatalkan konsertnya di England, Ireland dan Amerika Syarikat (AS).

John merancang untuk menyertai semula jelajah `Face2Face’ akan datang semasa beliau dan Billy Joel mengadakan konsert di utara California.

Menurut Farrow, John yang berusia 62 tahun itu menghidap flu yang teruk dan jangkitan E.coli peringkat awal.

Laman webnya menyatakan, beliau telah dinasihatkan oleh doktor supaya menunda tarikh konsert jelajahnya di Seattle dan Portland.

Sementara itu, laman web The Daily’s Mail yang memetik pasangan John, David Furnish sebagai berkata “Beliau OK, keadaannya baik,”, selepas meninggalkan hospital London. -

15

ARKIB : 22/05/2008

MARDI cipta alat kesan E.coli dan Salmonella

KUALA LUMPUR 21 Mei - Institut Penyelidikan dan Kemajuan Pertanian Malaysia (MARDI) mereka cipta alat biosensor dan biodiagnostik untuk mengesan bakteria seperti E.coli dan Salmonella yang terdapat dalam makanan.

Ketua Pengarah MARDI, Datuk Dr. Abd. Shukor Abdul Rahman berkata, alat-alat tersebut juga dapat membantu inspektor kesihatan serta pengusaha kantin sekolah menguji makanan yang dijual sekali gus mengelakkan kejadian keracunan makanan.

Menurutnya, pengedar makanan pula boleh menguji produk mereka sebelum mengedarkannya.

''Alat-alat itu kini masih dalam proses pengujian. Apabila diguna pakai kelak, ia mampu mengurangkan masa diperlukan untuk mengesan makanan yang tercemar oleh kehadiran bakteria,'' katanya kepada Utusan Malaysia di sini hari ini.

Terdahulu, beliau merasmikan Persidangan Serantau Mengenai Biosensor dan Biodiagnostik yang antara lain menekankan aspek keselamatan makanan, persekitaran dan pertanian.

Turut hadir Pengarah Pusat Penyelidikan Bioteknologi MARDI, Dr. Umi Kalsom Abu Bakar dan Timbalan Pengarah Program Biodiagnosis dan Biokeselamatan, Pusat Bioteknologi, MARDI, Dr. Zamri Ishak.

Berdasarkan teknologi biosensor itu, Abd. Shukor berkata, pihaknya kini telah membangunkan kit pengesan pantas sisa baki racun serangga dalam sayur-sayuran dan buah-buahan segar.

''Selepas itu, projek yang berada dalam perancangan MARDI termasuk penentuan antibiotik haiwan ternakan seperti ayam.

''Selain itu, kita juga ingin mengenal pasti racun rumpai dan organisme pengubah suai secara genetik (GMO) dalam makanan. Kita akan memajukan teknologi ini dalam masa terdekat untuk faedah rakyat,'' katanya.

Mengulas lanjut mengenai alat biosensor dan biodiagnostik untuk racun serangga itu, beliau berkata, ia adalah lebih murah, tepat dan cepat.

ARKIB : 26/12/2004

E. coli bakteria kawan dan lawan

Oleh Najibah Hassan BAKTERIA E. coli berbentuk rod ini juga mampu menghasilkan antibiotik untuk merawat penyakit.

SAINTIS mendakwa bakteria merupakan salah satu hidupan tertua dan dipercayai wujud di dunia ini hampir 4,000 juta tahun lamanya. Dalam tempoh tersebut, hidupan ini menjalani kehidupan yang berbeza-beza dan cukup menarik.

Organisme mikroskopik ini merupakan hidupan satu sel yang sebahagian besarnya hidup di atas permukaan objek.

Dengan pelbagai bentuk dan saiznya yang berbeza-beza, mereka berkembang biak secara membelah dua dalam beberapa jam.

Sebagai komponen semula jadi yang terdapat di tasik, tanah, tubuh manusia dan haiwan hampir sebahagian besar bakteria tidak berbahaya kepada manusia.

Sebaliknya, organisme yang tidak dapat dilihat dengan mata kasar ini mempunyai sumbangan dan peranan yang tidak kurang pentingnya kepada dunia dan manusia.

Mungkin tidak ramai yang menyedari bahawa interaksi bakteria dengan lain-lain hidupan mampu menghasilkan sesuatu yang bermanfaat.

Ini termasuklah dalam proses pembuatan tanah, makanan lembu, mengawal serangga, ubat-ubatan, bioplastik, tumbuh-tumbuhan, mengurangkan pencemaran seperti minyak, plastik dan sebagainya.

Sebagai contoh, sebahagian besar haiwan mamalia seperti lembu dan kambing bergantung kepada bakteria untuk membantu menghadamkan makanan mereka.

16

17

Dunia juga terhutang kepada bakteria kerana keupayaannya menghasilkan ubat-ubatan seperti antibiotik untuk merawat penyakit.

Seiring dengan wujudnya teknik mikrobiologi moden, bakteria bukan saja digunakan untuk menghasilkan ubat-ubatan yang diimport dari luar negara, bahkan plastik mesra alam.

Tetapi, tidak dinafikan ada kalanya interaksi bakteria ini jika tidak `kena pada tempatnya' boleh memudaratkan, sekali gus menyebabkan jangkitan penyakit.

Bakteria Escherichia coli atau singkatannya E. coli, juga di sebut sebagai E.kolai adalah sejenis basilus gram-negatif. Ia merupakan sebahagian flora normal usus pada haiwan dan manusia. Sebagai flora normal, E. coli membantu menghalang penempatan organisme patogen yang menyebabkan penyakit.

Selain itu, E. coli juga menghasilkan vitamin K dan B kompleks yang diperlukan tubuh.

``Bagaimanapun, sekiranya E. coli beralih daripada ekosistem asalnya, bakteria ini menjadi berbahaya. Ia dilaporkan, antara agen penyebab jangkitan saluran kencing (UTI), jangkitan kuman dalam darah atau septisemia, radang selaput otak pada bayi (neonatal meningitis), cirit-birit dan jangkitan luka selepas pembedahan terutama yang melibatkan pembedahan usus,'' kata Pakar Perunding Mikrobiologi dan Kawalan Infeksi, Jabatan Mikrobiologi, Hospital Universiti Kebangsaan Malaysia (HUKM), Profesor Madya Dr. Nordiah Awang Jalil.

Bakteria E. coli julung kalinya ditemui dalam usus manusia oleh seorang pakar bakteria Jerman, Theodor Escherich pada 1885.

Beliau berjaya membuktikan bahawa terdapat beberapa jenis bakteria yang bertanggungjawab menyebabkan cirit-birit pada kanak-kanak. Bakteria ini juga dipercayai menyebabkan radang pada perut dan usus atau juga dikenali sebagai gastroenteritis.

Ia merupakan kejayaan terbesar dalam kesihatan orang awam. Peringkat awal, bakteria ini lebih dikenali sebagai Bacterium coli.

Bagaimanapun, namanya diubah kepada Escherichia coli sebagai satu penghormatan kepada individu pertama yang menemuinya.

Menurut Nordiah, E. coli dibahagikan kepada pelbagai jenis atau serogroup berdasarkan antigen O, H dan K. Antara faktor yang menyebabkan bakteria E. coli ini menjadi ganas dan punca penyakit ialah kehadiran adhesin iaitu rerambut halus yang melekat pada mukosa. ``Pada masa yang sama, penghasilan toksin iaitu sejenis racun daripada bakteria ini boleh merosakkan tubuh,'' katanya.

Lebih 80 peratus agen penyebab UTI adalah E. coli. UTI lebih ketara di kalangan wanita kerana beberapa faktor seperti uretra wanita yang lebih pendek berbanding lelaki. Pada masa yang sama, kedudukan faraj dan dubur yang berhampiran.

Pesakit yang mengalami UTI kata Nordiah, biasanya mengeluh rasa pedih semasa membuang air kecil, kerap membuang air kecil atau tidak dapat menahan untuk membuang air kecil.

18

Bagaimana E. coli dikenal pasti?

E. coli boleh dibiakkan di dalam makmal pada piring agar-agar daripada spesimen klinikal seperti najis, air kencing, darah dan cecair serebrospina pesakit. Ia kemudian diproses dan dikultur.

Selepas satu atau dua hari koloni E. coli yang tumbuh pada piring akan dikenal pasti menggunakan ujian biokimia.

Biasanya proses ini mengambil masa dua hingga tiga hari. Jika E. coli ditemui dalam air, ini boleh menjadi petanda bahawa air itu tercemar dengan najis haiwan atau manusia. Ia boleh terjadi sama ada melalui kumbahan sisa najis, yang boleh mengakibatkan penyakit tularan najis ke mulut seperti Salmonelosis dan kolera.

E. coli penyebab gastroenteritis dan cirit-birit terdiri daripada beberapa jenis:

* Enterotoksigenik E. coli (ETEC)

Biasanya cirit-birit ini dialami pengembara dan bayi di negara-negara kurang membangun. Ia berpunca daripada makanan atau minuman yang tercemar dengan najis.

Antara gejala yang dialami ialah kekejangan perut, muntah dan cirit-birit.

* Enteropatogenik E. coli (EPEC)

Ia menyebabkan cirit-birit pada bayi. Antara gejala yang dialami ialah demam, mual dan muntah-muntah.

* Enteroinvasif E. coli (EIEC)

Jangkitan daripada makanan. Pesakit biasanya mengalami demam, kekejangan perut, cirit-birit yang ada kalanya bercampur darah.

* Enteroagregatif E. coli (EAEC)

Ia mengakibatkan cirit-birit berair pada bayi yang berlanjutan sehingga pesakit mengalami dehidrasi.

* Enterohemoragik E. coli (EHEC)

Jenis ini berpunca daripada bakteria E. coli 0157:H7 yang mengakibatkan penyakit yang serius kepada manusia. Pesakit yang mengalami cirit-birit ini melarat hingga menyebabkan pendarahan usus.

Bakteria ini akan masuk ke dalam perut dan usus kecil. Ia kemudiannya melekat pada permukaan usus besar dan mengakibatkan radang pada dinding usus. Tindak balas ini disebabkan toksin yang dihasilkan oleh bakteria terbabit.

19

Ia berpunca daripada pengambilan produk tenusu seperti susu atau jus buah yang tidak dipastur, sayur-sayuran yang tidak dimasak seperti salad dan produk daging separuh masak.

Antara gejalanya ialah kekejangan perut dan cirit-birit berdarah. Keadaan ini boleh berlanjutan hingga pesakit mengalami komplikasi hemolytic uremic syndrome (HUS).

Ia menyebabkan komplikasi seperti kegagalan buah pinggang akut, sel platelet menjadi rendah dan kekurangan sel darah merah. Kira-kira tiga hingga lima peratus meninggal dunia akibat komplikasi ini.

E. coli O157:H7 buat pertama kalinya menyebabkan wabak penyakit cirit-birit berdarah berlaku pada 1982. Wabak itu dipercayai berpunca daripada burger yang tercemar. Selepas itu wabak E. coli O157:H7 juga telah dilaporkan terjadi di Amerika Syarikat, Jepun dan United Kingdom.

Rawatan

Rawatan untuk UTI, jangkitan kuman dalam darah atau septisemia, radang selaput otak pada bayi dan jangkitan pada luka pembedahan, pesakit perlu diberi ubat antibiotik tertentu.

Sebaliknya, pesakit yang mengalami cirit-birit perlu mendapat air dan garam gantian secukupnya sama ada melalui minuman atau intravena.

Bagaimanapun, agen menghalang pergerakan usus seperti lomotil tidak disyorkan kerana ia mengakibatkan cirit-birit yang dialami menjadi semakin serius.

Pencegahan

Sehingga kini, belum ada vaksin digunakan secara rutin untuk mencegah jangkitan E. coli.

Penggunaan antibiotik profilaksis juga tidak disyorkan kecuali kepada individu yang berisiko tinggi menghidap cirit-birit akibat mengembara. Lebih penting amalan kebersihan diri dan menggunakan air bersih dapat membantu mengelakkan masalah ini. Selain itu:

* Mengelakkan daripada menggunakan kateter membuang air kecil

* Menyusu bayi dengan susu ibu

* Pastikan daging yang dimakan masak sepenuhnya

* Minum susu yang dipasteur

* Kepada pengembara, pastikan mengamalkan makanan yang dimasak dan minum air yang dibotolkan atau dididihkan.

20

ARKIB : 23/12/2004

Rakyat Malaysia dibiarkan makan kerang berkuman

Saudara Pengarang, KERANG jenis makanan yang digemari kebanyakan orang. Apabila direbus atau dibakar separuh masak, ia semakin sedap dimakan dan ada kemanisannya yang asli.

Pada bulan puasa, beratus tan kerang dari sebelah utara dibawa ke seluruh negara, malah di Kelantan sahaja berlori-lori kerang dari utara dijual di pasar-pasar utama dan dijaja kerana ia menjadi bahan makanan paling digemari pada bulan puasa.

Tidak ada mana-mana pihak pun sebelum ini, memaklumkan tentang bahaya memakan kerang yang airnya dicemari najis manusia. Apatah lagi didedahkan bahawa najis orang Pulau Pinang selama ini dialirkan terus ke laut.

Setelah Menteri Tenaga Air dan Komunikasi, Datuk Seri Dr. Lim Keng Yaik mengumumkan bahawa Pulau Pinang akan mendapat sistem pembetungan dan rawatan air moden bernilai RM468 juta, barulah perihal kerang yang dicemari najis manusia didedahkan.

Ertinya sejak berpuluh tahun yang lampau, pemakan kerang yang dibawa dari Pulau Pinang telah terdedah kepada bahaya bakteria escherichia coli (E.Coli) kerana memakan kerang yang dicemari najis manusia.

Disahkan bahawa kehidupan laut seperti ikan dan sotong yang hidup mencari makan di kawasan yang kurang berisiko tercemar, pun diragui kebersihannya.

Tetapi bagaimana dengan ketam dan kerang? Yang nyata, kerang-kerangan dibimbangi oleh Pengurus Besar Alam Sekitar Malaysia Sdn. Bhd., Dr. Abdul Rani Abdullah mengandungi bakteria berbahaya.Bagi beliau, sisa kumbahan yang tidak dirawat terlebih dahulu sebelum disalirkan ke laut atau tasik bukan sahaja mencemarkan air tetapi juga menyebabkan hidupan marin di kawasan tersebut tidak selamat dimakan.

Bakteria E. Coli yang lazimnya terdapat dalam usus manusia atau haiwan dan adakalanya bakteria itu bertindak agresif sehinggakan membahayakan nyawa.

Oleh itu orang ramai dinasihat berhati-hati dan mengelak memakan makanan laut yang disyaki ditangkap atau diternak di perairan yang tercemar.

Menurut Pegawai Sains Jabatan Sains Perikanan dan Akuakultur, Kolej Universiti Sains dan Teknologi Malaysia (KUSTEM), Bahria Mustafa, E. Coli boleh menjejaskan sistem imuniti tubuh apabila dimakan.

Antara kesan segera kepada manusia ialah demam, muntah-muntah dan cirit-birit dan pada jangka masa panjang boleh menyebabkan penyakit usus yang serius. Ertinya sisa kumbahan (najis) yang disalir terus ke laut adalah sangat berbahaya.

21

Soalnya kenapa baru sekarang didedahkan cerita tentang kumbahan dialirkan terus ke laut dan boleh membawa kesan yang membahayakan kepada manusia?

Kenapa selama ini disembunyikan? Kini entah berapa ramai yang sudah mati kerana diserang penyakit sebagai kesan sampingan kerana memakan kerang-kerangan yang mengandungi kuman E. Coli yang dibawa dari Pulau Pinang dan dipasarkan ke seluruh negara.

Sudahlah udara dicemari oleh asap rokok daripada 4.5 juta perokok di seluruh negara dan sejuta rakyat negara ini menjadi mayat bernyawa kerana dadah, sekarang terdedah pula masalah air yang tercemar angkara sikap manusia yang sengaja mencemarkan air dengan najis mereka di Pulau Pinang. Jadi di mana lagi selamatnya kita? - RAMLI ABDUL HALIM, KOTA Bharu, Kelantan.

22

ARKIB : 06/07/2002

Alat baru pengesan kuman keracunan makanan

PARA saintis sedang membangunkan satu alat pengimbas telapak yang boleh mengesan kehadiran bakteria E. coli dan kuman-kuman lain yang membunuh pada makanan dan minuman, dan dalam sesetengah keadaan hanya mengambil masa beberapa minit saja.

Alat itu telah dibangunkan sejak sedekad lalu ketika berlakunya beberapa kematian akibat E. coli di serata Amerika Syarikat.

Dalam wabak terburuk akibat jangkitan melalui air pada Washington County Fair tahun 1999 di New York, seorang remaja perempuan dan seorang lelaki tua mati manakala 1,000 yang lain jatuh sakit selepas terminum air yang tercemar.

``Alat ini akan dapat membantu menghalang orang ramai daripada terkena jangkitan dan tentunya menjimatkan perbelanjaan perubatan tetapi apa yang lebih penting ialah keselamatan pengguna,'' kata ahli kimia di Universiti Cornell, Richard Durst yang membantu membangunkan alat itu.

Alat yang mengambil masa lapan minit untuk mengesan E. coli 0157:H7 dijangka akan mula diuji di pasaran bulan ini.

Sebahagian besar daripada kejadian keracunan makanan di Amerika Syarikat berpunca daripada E. coli.

Bakteria ini sememangnya ada dalam salur usus manusia dan haiwan tetapi apa yang dikhuatiri oleh para pegawai kesihatan ialah E. coli jenis 0157, yang boleh mengakibatkan cirit-birit berdarah serta kejang perut dan boleh membawa kepada kegagalan buah pinggang berfungsi atau kematian.

E. coli 0157 mula dikesan pada tahun 1982 apabila hampir 50 orang di Michigan dan Oregon jatuh sakit selepas makan burger yang tercemar.

Sejak itu, jangkitannya dilaporkan berlaku di lebih daripada 30 buah negara di enam benua.

Ia boleh mencemari daging semasa proses penyembelihan dan pembungkusan, lazimnya daripada najis anak lembu.

Mereka yang minum susu dan jus tanpa pastur atau air yang tidak cukup klorin juga berisiko untuk dijangkiti.

Ujian bagi E. coli sekarang menggunakan pendekatan kayu celup sama seperti ujian kehamilan apabila kehadiran bakteria itu akan mengubah warna monitor.

Hasilnya pula boleh mengambil masa sehingga sehari bekerja untuk diselesaikan.

Sejak itu, para saintis bimbang beribu-ribu orang akan terdedah kepada kuman itu. –

23

ARKIB : 01/06/2011

Germany E.coli cucumber death toll rises to 14

BERLIN May 30 - An E. coli outbreak linked to contaminated cucumbers that has killed 14 people and made more than 300 seriously ill in Germany has spread to other north European countries and is expected to worsen in the coming week.

"We hope that the number of cases will go down but we fear that it will worsen,” said Oliver Grieve, spokesman for the University Medical Centre Schleswig-Holstein in north Germany, where many of those afflicted are being treated.

The source of the virulent strain of the bacteria is unknown, German authorities said on Monday ahead of a crisis meeting of federal and state officials in Berlin. Most of the deaths have been in northern Germany.

The E. coli pathogen has been identified on cucumbers imported from Spain but it is unclear if they were contaminated there, during transport or in Germany.

There are 36 cases of suspected E. coli in Sweden, all linked to travel in northern Germany, authorities said. A small number of cases have been reported in Britain, Denmark, France and the Netherlands, all linked with travel to Germany.

The German government has identified the pathogen as hemolytic-uremic syndrome (HUS), a serious complication of a type of E. coli known as Shiga toxin-producing E. coli (STEC), and said it had killed 14 people and made at least 329 ill.

The European Centre for Disease Prevention and Control (ECDC) said in a risk assessment that the HUS/STEC outbreak is one the largest in the world of its kind.

HUS affects the blood, kidneys and, in severe cases, the nervous system and can be particularly serious for children and the elderly. Some 60 cases of HUS are reported annually in Germany, the government said.

Grieve said his hospital had 82 cases of HUS and 115 confirmed E. coli cases, and said the number of cases there had doubled within the past few days.

The northern port city of Hamburg alone has reported 488 cases of E. coli since the outbreak began in mid-May and has 94 cases of HUS.

A hospital in the city said it was transferring patients with less serious illnesses to other clinics to cope with the flood of HUS patients.

Spain meanwhile said on Monday it was mulling taking action over Spanish cucumbers being blamed for the outbreak.

24

"There is no proof of this and so we will demand explanations from who has attributed this matter to Spain,” Diego Lopez Garrido, secretary of state for the European Union, told journalists.

Horticultural farms in the southern Spanish region of Andalusia have been losing 7-8 million euros a day since German authorities linked the bacteria to Spanish cucumbers last week.

German authorities have warned consumers to avoid eating cucumbers, lettuces and tomatoes and have ordered some products removed from store shelves.

"As long as the experts in Germany and Spain have not been able to name the source of the agent without any doubt, the general warning for vegetables still holds,” German Consumer Protection Minister Ilse Aigner said on Sunday.

Authorities in Sweden have warned Swedes travelling to north Germany to steer clear of cucumbers, tomatoes and salad.

Austria’s food safety agency ordered a recall of organically grown cucumbers, tomatoes and eggplant supplied by a Spanish producer thought to be the source of the outbreak. It said 33 Austrian stores were affected.

- REUTERS

25

ARKIB : 27/10/2004

Study finds 23 percent of bazaar food contaminated with E. coli

KUALA TERENGGANU Oct 26 - The delicious food sold at Ramadan bazaars may be tempting, but some of it may be not all that hygienic.

A check by the Terengganu Health Department found nearly a quarter of the food contaminated with the intestinal pathogen Escherichia coli.

State health director Dr Mohd Kamil Hassan said 81 samples of food sold in the first 11 days of the fasting month were analysed, and 23 percent was found contaminated with E. coli while five percent had Staphylococcus aureus.

"Staphylococcus aureus and E. coli can cause skin infections, food poisoning or diarrhoea," he told Bernama.

Dr Mohd Kamil said the contaminated samples included 'agar-agar', 'onde-onde', 'kuih nekbat', tomato chicken, sugarcane juice, 'nira' juice, meat curry, 'kerabu perut' (intestines with vegetable salad), 'asam gumpal' and 'kuih butir nangka'.

In the first nine days of Ramadan, he said, a joint check with the local authorities on 1,231 business premises resulted in 32 workers being fined RM1,650 for not having Typhi-V inoculation and not wearing aprons.

Last year, the health department's analysis of 275 samples of food sold during Ramadan found 27 percent had contravened the Food Regulations 1985.

As part of efforts to improve food hygiene this year, the department had given advice to nearly 2,000 people in the state involved in selling and preparing food. It also distributed circulars and put up posters and banners on food hygiene.

Dr Mohd Kamil advised the public not to take food bought at Ramadan bazaars for their 'sahur' (pre-dawn) meals as it might have gone bad and to choose stalls selling hot food. - Bernama

26

ARKIB : 26/07/2002

E. coli overtake strep among premature babies, study says

TRENTON (New Jersey) July 25 - In a dangerous boomerang effect apparently caused by antibiotics, E. coli is on the rise among premature babies and has overtaken strep as the most common infection in such infants, a disturbing new study suggests.

The shift is worrisome because E. coli bacteria can be more deadly than streptococcus germs.

The rate of group B streptococcus blood infections in newborn premature babies fell by nearly three-quarters during the 1990s, probably because more women in labour now get antibiotics to keep from passing the bacteria on to their babies during delivery, the researchers said.

During that same period, the rate of E. coli infections doubled, apparently because ampicillin, the antibiotic commonly used to wipe out strep, gave E. coli room to flourish, according to the researchers.

The study was funded by the National Institutes of Health and was published in Thursday's New England Journal of Medicine. It was led by Dr. Barbara J. Stoll, professor of pediatrics at Emory University School of Medicine.

Group B strep and E. coli are among the bacteria that live harmlessly in many people's intestinal tract. If they spread into a woman's vagina during pregnancy, though, they can overwhelm the newborn's weak immune system, sometimes causing mental retardation, hearing or vision loss or death.

Over the last decade, giving women preventive antibiotics intravenously during labour has cut the once-predominant group B strep infections by 70 percent in all newborns, but it still kills about 80 each year.

NIH scientists and doctors at about a dozen hospitals and medical schools compared 5,447 very low-birth-weight infants born from 1998 through 2000 with 7,606 similar births from 1991 through 1993. Very low-birth-weight is defined as 3 1/2 pounds (1.6 kilogrammes) or less.

Over the study, the more-dangerous ``gram-negative'' type of bacteria, predominantly E. coli, overtook group B streptococcus and other related bacteria as the most common type of infection in the premies. Gram-negative bacteria have innate resistance to antibiotics and can acquire further resistance mechanisms from other germs.

E. coli infections rose from 3 per 1,000 births to 7 per 1,000 births, while group B strep infections dropped from 5.9 per 1,000 births to 1.7 per 1,000 births. The overall rate of sepsis dropped from 19.3 per 1,000 births to 15.4 per 1,000 births.

The research appears along with a related study from the Centres for Disease Control and Prevention.

27

Since 1996, the CDC, the American Academy of Paediatrics and the American College of Obstetricians and Gynecologists have backed two strategies as equally effective for deciding which mothers should get antibiotics during labour to prevent group B strep transmission.

One involves testing mothers for presence of streptococcus in the vagina near the end of the pregnancy; the other recommends antibiotics for all mothers who have risk factors linked to transmission of the bacteria: a fever above 100 degrees, preterm delivery or rupture of the protective amniotic membrane 18 hours or more before delivery.

In the first study comparing the approaches, researchers found that testing for streptococcus cut the risk of a baby being infected 54 percent more than the risk-factor approach.

``While the risk-factor approach is definitely catching some women, it's missing a good proportion of women,'' said Stefanie J. Schrag, a CDC epidemiologist.As a result, the CDC in August will release new guidelines recommending screening all women for presence of group B strep, she said.The researchers studied records on 5,144 babies born at about 170 hospitals around the country.

On the Net: http://www.nejm.org

http://www.nih.gov

http://www.cdc.gov

http://www.acog.org

http://www.aap.org – AP

Sumber : http://www.utusanmalaysia.com.my Tarikh Akses : 26 Julai 2011

http://www.nejm.org/

http://www.utusanmalaysia.com.my/

Headline: Wabak maut E.coli Publication: BM Date of publication: Jun 19, 2011 Section heading: Main Section Page number: 014 Byline / Author: Oleh Nadia Hamid

DUNIA baru-baru ini digemparkan tragedi penyebaran bakteria E.coli yang dipercayai paling bahaya setakat ini dalam sejarah manusia. Dengan punca sebenar masih kekal misteri, semua pengguna di seluruh dunia kini berada dalam kebimbangan berikutan penularan bakteria itu sejak akhir April lalu yang setakat ini dikesan dalam sayur-sayuran dengan bilangan kesnya mencecah lebih 4,000 kes termasuk 39 kematian setakat ini. Apa yang membingungkan saintis seperti diakui Pertubuhan Kesihatan Sedunia (WHO) yang menyifatkan jenis E.coli dikenali sebagai 0104:H4, sebagai jarang ditemui atau dikesan pada manusia sebelum ini. Malah, ia juga tidak pernah tersebar sebagai wabak, menyebabkan penularan kali ini diklasifikasikan membabitkan jenis baru. Bakteria jenis E.coli yang menyerang Eropah kali ini mempunyai kemampuan untuk kekal pada dinding usus manusia dan mengeluarkan toksin dikenali sebagai Shiga (STEC) yang berkemungkinan mengakibatkan cirit-birit berdarah yang teruk, komplikasi lain seperti kerosakan ginjal dan boleh membawa maut. Jerman dikatakan menjadi pusat kepada wabak yang dipercayai paling bahaya setakat ini dalam sejarah manusia, E.coli yang menjangkiti lebih 3,300 mangsa dan membunuh sekurang-kurangnya 38 orang. Dianggarkan seramai 1,624 orang di barat seperti Austria, Denmark, Perancis, Belanda, Norway, Sepanyol, Sweden, Switzerland, Britain dan Amerika Syarikat (AS) dikatakan sudah jatuh sakit, disyaki selepas memakan salad dan sayur-sayuran yang tercemar dari Jerman. LANGKAH PENCEGAHAN * Basuh dan bersihkan barangan makanan terutama kubis dan salad. * Buang kotoran daripada usus haiwan. * Beli barangan yang ditutup rapi, contohnya, dengan plastik. * Cuci tangan menggunakan sabun dan air sekurang-kurangnya selama 20 minit sebelum menyediakan makanan. * Gunakan pisau pemotong, papan pemotong, gelas, palstik dan cuci dengan air panas serta air sabun.

1

Headline: Usah abai kebersihan tangan

Publication: HM Date of publication: Jun 13, 2011 Section heading: Variasi Page number: 008

RAMAI di kalangan kita sambil lewa dengan tabiat mencuci tangan walaupun sedar ia boleh menyebabkan kita terdedah dengan risiko penyakit seperti demam, selsema, ciri-birit atau jangkitan E-coli. Amalan mencuci tangan adalah perkara yang perlu sentiasa dititikberatkan dalam kehidupan seharian kita kerana ia menjadi asas kepada kebersihan. Sentiasalah mencuci tangan dengan sabun selepas ke tandas, begitu juga ketika tangan terkena darah atau cecair badan. Tangan juga perlu dicuci segera sekiranya ada tanda kotor kelihatan di tangan. Untuk menyediakan sesuatu hidangan atau masakan, pastikan tangan dibersihkan terlebih dulu dan apabila anda menyentuh makanan. Bagi yang mempunyai binatang peliharaan pastikan tangan dibersihkan setiap kali selepas bermain dengan haiwan itu. Berbanding orang dewasa, bayi dan kanak-kanak sangat sensitif apabila terkena kotoran mahupun kuman, jadi pastikan tangan dibersihkan terlebih dulu sebelum menyentuh mereka. Tidak sukar sebenarnya untuk mencuci tangan sehingga bersih. Apa yang diperlukan cuma air dan sabun yang cukup untuk membersihkan keseluruhan tangan termasuk di celah-celah jari serta kuku. Sabun biasa sudah memadai kerana ia juga memberi kesan yang sama dengan sabun antibakteria. Basahkan tangan dan lumurkan dengan sabun, seterusnya gosok kedua-dua tangan selama sekurang-kurangnya 15 saat, dengan tumpuan kepada tapak tangan, celah jari, kuku, bahagian belakang dan pergelangan tangan. Akhir sekali, bilas dengan air bersih dan lap hingga kering. Perkara penting yang perlu diingat selepas mencuci tangan ialah mengelap tangan hingga kering sama ada menggunakan kertas tisu atau tuala bersih. Selain itu, gunakan tisu untuk mengalas jari apabila menutup paip atau anda boleh membersihkan kepala paip (dengan sabun) setiap kali mencuci tangan. Sekiranya berada di tempat yang jauh dari punca air dan sabun, boleh juga gunakan tisu lembap antibakteria yang kini mudah didapati di pasaran.

2

Headline: Memahami kepentingan kebersihan dan keselamatan makanan

Publication: BH Date of publication: Jun 11, 2011 Section heading: 1Klassifieds Page number: 020

Keselamatan makanan bermaksud makanan itu bersih daripada kuman berbahaya, racun, toksin dan bersih daripada najis dan bahan buangan yang lain. Makanan yang tidak bersih boleh mengandungi bahan-bahan berbahaya atau bakteria yang boleh menyebabkan penyakit bawaan makanan seperti taun, tifoid, keracunan makanan, penyakit kuning (Hepatitis A) dan lainlain. Perkara-perkara asas yang perlu diutamakan untuk memastikan makanan yang bersih: a Kebersihan bahan mentah. b Pengendalian makanan yang bersih. c Kebersihan diri pengendali makanan. d Keperluan kesihatan asas yang mencukupi. e Premis makanan yang mempunyai persekitaran yang bersih. f Rekabentuk premis makanan dan peralatan yang sesuai. g Penyediaan dan penyimpanan makanan yang betul. APAKAH ASPEK KEBERSIHAN DALAM PENGENDALIAN MAKANAN? Aspek kebersihan dalam pengendalian makanan merangkumi: a Pengendali makanan b Bahan mentah c Peralatan yang digunakan d Persekitaran seperti dapur dan tempat menyediakan makanan Siapakah itu pengendali makanan? Pengendali makanan adalah semua orang yang terlibat dengan penyediaan makanan daripada mula hinggalah makanan itu diambil atau dimakan. Ia adalah mana-mana individu yang terlibat dalam penyediaan, penyajian dan juga penjualan makanan. Bagaimanakah kita memastikan makanan yang disediakan adalah bersih dan selamat?

3

Salah satu langkah bagi memastikan makanan yang disediakan adalah bersih dan selamat adalah dengan menjaga kebersihan diri dan mengamalkan amalan kebersihan yang perlu semasa mengendalikan makanan. AMALAN KEBERSIHAN DIRI Amalan kebersihan yang perlu diamalkan semasa mengendali makanan: Basuh tangan sebelum dan selepas mengendali makanan. Basuhlah tangan dengan sabun selalu. Tangan adalah anggota badan yang kerap bersentuh dengan makanan. Oleh itu, ia perlu dibersihkan setiap kali sebelum memulakan kerja-kerja penyediaan makanan atau selepas: i Ke tandas. ii Menyentuh muka terutamanya hidung, mulut atau telinga. iii Mengendalikan makanan mentah. iv Mengendalikan sampah sarap. v Rehat atau setiap kali kembali ke tempat penyediaan. vi Membersih dan disinfeksi tempat kerja. Semua tempat penyediaan makanan harus mempunyai sinki khas untuk membasuh tangan dan dibekalkan dengan sabun, air paip dan tisu yang bersih. (Penggunaan sabun cecair amat digalakkan kerana mungkin sabun buku mengandungi kuman daripada penggunaan sebelumnya). Amalkan tujuh langkah membasuh tangan yang betul: 1 Basuh tangan dengan sabun secukupnya. 2 Gosok tapak tangan. 3 Gosok setiap jari dan celah jari. 4 Gosok kuku di tapak tangan.

5 Gosok belakang tangan. 6 Basuh dengan air bersih secukupnya. 7 Keringkan tangan dengan kain bersih. MANUSIA PEMBAWA KUMAN

4

Pakaian Pakai pakaian yang sempurna dan bersih. Gunakan pakaian pelindung (apron), sarung tangan (jika perlu) dan penutup kepala. Pastikan apron, penutup kepala dan sarung tangan adalah bersih dan dipakai dengan betul. Rambut Rambut mengandungi pelbagai jenis kuman. Oleh itu rambut harus bersih, diikat dan ditutup semasa mengendalikan makanan. Jangan menyikat rambut semasa berada di tempat penyediaan makanan. Pakai penutup kepala dan jangan sentuh atau sikat rambut dalam kawasan penyediaan dan semasa menghidang makanan. Janggut dan misai hendaklah dijaga rapi. Amalkan tabiat kebersihan diri yang betul. Jangan menyentuh kulit khasnya mulut, hidung dan telinga. Jangan meludah, mengunyah, makan, merokok atau mengorek hidung. Mulut, hidung dan telinga Staphylococcus aureus biasanya didapati hadir dalam mulut, hidung dan telinga. Pemindahan bakteria boleh berlaku dan boleh mencemarkan makanan sekiranya: * Batuk semasa mengendalikan makanan. * Merasa makanan dengan jari. * Mengorek hidung semasa menyediakan makanan. * Meludah merata-rata. * Merokok. * Makan semasa menyediakan makanan. Amalan Kebersihan Diri

* Tutup semua luka dengan pembalut yang bersih dan kalis air. Permukaan kulit badan biasanya mengandungi bakteria dan perlu dibersihkan dengan kerap. S. aureus (salah satu kuman pantogen yang sering terlibat dalam keracunan makanan) dapat dikesan di tempat luka. Individu yang mempunyai luka di tangan atau sakit harus dielakkan daripada mengendalikan makanan. * Mandi dengan sabun sekurang-kurangnya dua kali sehari. Pastikan diri pengendali bersih dan kemas. * Jangan pakai barang kemas (contoh : cincin, gelang) dan jam tangan kerana pencemaran mudah berlaku iaitu barang tersebut sukar dibersihkan dan kemungkinan terjatuh ke dalam

5

makanan. * Tentukan kuku bersih dan pendek. Potong kuku dengan pendek dan elakkan mengguna pewarna kuku. Bersihkannya selalu kerana bahan kotor dan kuman seperti E. coli dan S. aureus terdapat pada kuku yang panjang dan kotor. * Sekiranya anda menghidap penyakit atau menunjukkan tanda-tanda keracunan makanan, elakkan daripada mengendali atau menyediakan makanan. Sesetengah daripada mangsa keracunan makanan mungkin membawa kuman patogen di dalam salur usus mereka walaupun mereka sudah sembuh dan masih berpotensi memindahkan kuman berkenaan ke makanan semasa penyediaan. * Jangan merokok di kawasan penyediaan dan penghidangan makanan. Air liur dan habuk rokok yang terjatuh boleh mencemarkan makanan. * Jangan memegang makanan tanpa penyepit. Gunakan penyepit makanan, senduk, sudu, garpu dan sarung tangan yang bersih semasa menghidang makanan. BERIKUT ADALAH AMALAN-AMALAN YANG BAIK SEMASA MENGENDALI MAKANAN * Pakai apron dan penutup kepala yang bersih dan sesuai ketika mengendali makanan. * Jangan merokok ketika menyediakan makanan. * Makanan tidak boleh diletak atau disediakan di atas lantai. Gunakan tempat yang dikhaskan. * Jagalah kebersihan apabila menyediakan makanan setiap masa. * Jangan menyapu makanan yang terjatuh di atas lantai. Buangkan makanan tersebut di tempat yang sesuai.

* Simpan makanan di tempat yang sesuai. * Jangan gunakan bekas yang telah retak atau sumbing untuk menghidangkan makanan. * Gunakan penyepit/sudu/garpu untuk mengambil makanan. * Lindungi makanan dari lalat, tikus, lipas, habuk dan bahan-bahan beracun. * Gunakan cara hidangan yang betul dan jagalah kebersihan diri ketika * menghidang makanan. * Gunakan tuala yang berasingan untuk membersih meja, lap peralatan dan untuk lap tangan. * Gunakan kain yang bersih untuk mengelap pinggan mangkuk. Pastikan ia hanya digunakan

6

untuk tujuan tersebut sahaja. * Gunakan tong sampah. * Gunakan air yang bersih untuk mencuci pinggan mangkuk. * Cuci tangan dengan sabun setiap kali selepas menggunakan tandas dan sebelum menyediakan atau menghidang makanan. * Jangan simpan makanan yang telah dimasak dan mentah di tempat yang sama untuk mengelakkan pencemaran silang. * Simpan makanan di tempat yang sesuai, misalnya makanan mudah rosak di dalam peti sejuk. (END)

7

Headline: Awasi kesihatan jika baru pulang Eropah Publication: BH Date of publication: Jun 2, 2011 Section heading: Main Section Page number: 013 Byline / Author: Oleh S Anand Kumar

KUALA LUMPUR: Orang ramai yang mengunjungi Eropah sejak 1 Mei lalu serta mengalami cirit-birit berdarah dinasihatkan untuk menjalani ujian pemeriksaan kesihatan di pusat kesihatan yang berhampiran. Ketua Pengarah Kesihatan, Datuk Dr Hasan Abdul Rahman berkata, Pertubuhan Kesihatan Dunia (WHO) melaporkan berlakunya wabak sindrom uremik hemolitik penuh (HUS) atau `Haemolytic Uraemic Syndrome' yang dikesan di Jerman. Beliau berkata, laporan WHO sehingga 27 Mei lalu menunjukkan 276 kes disahkan HUS dengan dilaporkan berlaku tiga kematian, sebanyak 86 peratus daripada kes itu adalah golongan dewasa berusia 18 tahun ke atas manakala wanita (68 peratus). "Wabak itu dikesan bermula sejak 25 April lalu dengan berlakunya kes cirit-birit berdarah, beberapa (kes) dimasukkan ke hospital sehingga ada di antara mereka memerlukan rawatan di unit rawatan rapi (ICU). "Selain itu, Sweden melaporkan 15 kes manakala United Kingdom dan Belanda masing-masing satu kes. Kajian awal mendapati pesakit yang mendapat wabak itu berkemungkinan berpunca daripada memakan sayuran mentah seperti tomato, timun dan daun salad. "Ujian makmal yang dijalankan oleh Institut Kebersihan dan Persekitaran Hamburg berjaya mengisolasi bakteria Enterohaemorrhagic E.coli (EHEC) daripada sampel timun yang diimport dari Sepanyol," katanya dalam satu kenyataan di sini, semalam. Sementara itu, Dr Hasan berkata, Bahagian Keselamatan dan Kualiti Makanan di bawah kementerian juga sedang memantau pengimportan timun ke negara ini. Katanya, berdasarkan maklumat daripada Sistem Maklumat Keselamatan Makanan Malaysia (FoSIM), tiada timun yang diimport dari Jerman atau pun Sepanyol. "Bagaimanapun, sekiranya terdapat pengimportan timun dari kedua-dua negara itu, analisis untuk bakteria EHEC akan dilakukan. Sehubungan itu, orang ramai tidak perlu khuatir mengenai isu ini," katanya. Dr Hasan berkata, penularan wabak itu boleh dicegah melalui kebersihan diri terutama dengan kerap mencuci tangan sebelum makan dan selepas menggunakan tandas. "Orang ramai juga dinasihatkan supaya mencuci sayuran dan buah-buahan mentah dengan air bersih sebelum dimakan. Kementerian dari semasa ke semasa akan memantau kejadian ini," katanya.

8

Headline: Tiada kes wabak HUS dikesan Publication: HM Date of publication: Jun 2, 2011 Section heading: Main Section Page number: 017

KUALA LUMPUR: Rakyat diminta supaya tidak bimbang mengenai wabak Haemolytic Uraemic Syindrome (HUS) yang menular menerusi penyakit cirit-birit berdarah yang melanda beberapa negara di Eropah. Wabak HUS ialah sindrom yang bercirikan sel darah merah pecah, kegagalan ginjal akut, dan kekurangan sel darah pembeku yang membawa potensi maut antara 5 hingga 10 peratus dan gejalanya adalah kelesuan dan pendarahan yang kerap. Ketua Pengarah Kesihatan, Datuk Dr Hasan Abdul Rahman berkata, belum terdapat kes membabitkan wabak berkenaan di Malaysia. Bagaimanapun, Kementerian Kesihatan kini mengambil langkah berjaga-jaga memantau rapi penyakit cirit-birit berdarah dengan merujuk semua kes itu sebagai aktiviti mandatori mengikut Akta 342 untuk siasatan lanjut. "Spesimen najis semua pesakit cirit-birit berdarah turut diperiksa," katanya. Dalam masa sama, beliau menasihatkan orang ramai yang mengunjungi Eropah sejak 1 Mei lalu yang menghidap cirit-birit berdarah menjalani pemeriksaan. Pihaknya juga sedang memantau pengimportan timun ke Malaysia kerana Pertubuhan Kesihatan Sedunia (WHO) melaporkan kejadian wabak terbaru itu dikesan daripada sampel timun dari Sepanyol yang mengandungi bakteria E Coli.

9

Headline: Punca E Coli merebak Publication: MA Date of publication: Jul 24, 2011 Section heading: Sihat Page number: 004

E COLI yang berlaku di Eropah, baru-baru ini benar-benar mengejutkan kerana tidak kurang 16 negara dilanda wabak berkenaan. Bahkan, ia juga menular ke negara lain, termasuk Amerika Syarikat dan Kanada. Sejumlah 4,137 kes cirit-birit berdarah direkodkan dan 50 daripada penghidapnya meninggal dunia. Wabak seperti itu biasanya berlaku di negara mundur dan sedang membangun, tetapi yang menghairankan ia terjadi di negara maju yang lengkap dengan sistem pengawasan wabak serba canggih, seolah-olah masyarakatnya mula mengamalkan kehidupan kuno membuang najis merata-rata. Persoalannya, bagaimana E Coli begitu berbisa dan mampu mencetuskan kemelut agresif? Ia dikatakan dicetus oleh sejenis bakteria spesies E Coli paling degil dan ganas iaitu daripada sub-spesies 0104:H4. Risiko buruknya dikatakan hampir 10 kali ganda berbanding E Coli biasa. Ini kerana toksin E Coli daripada jenis ini sangat toksik. Dikatakan apabila saja E Coli memasuki tubuh, mangsa segera mengalami gejala keracunan makanan. Antaranya cirit-birit bercampur darah, sakit perut memulas keterlaluan, disertai muntah-muntah dan letih lesu. Dalam masa singkat, seluruh sistem tubuh mengalami kacau ganggu yang hebat dan dalam beberapa hari saja mangsa mungkin maut akibat kegagalan beberapa sistem tubuh yang penting. Semua ini disebabkan dehidrasi melampau, termasuk perdarahan dalaman dan kegagalan ginjal akut. Profesor Promosi Kesihatan dan Pakar Perubatan Tingkahlaku, Dr Khalib Abdul Latiff berkata, wabak E Coli bukan semata-mata terletak kepada manifestasi klinikal, tetapi lebih kepada fenomena sampingan yang turut tercetus. Apabila panik, pelbagai perkara turut berlaku. Lebih banyak pertelagahan berbanding penyiasatan dan kawalan. Justeru, tuding menuding berlaku kerana tidak mempercayai wabak sebegini masih berlaku di negara maju seperti Eropah. Ini ketara pada permulaan wabak apabila beberapa negara dituduh sebagai punca wabak, manakala bahan makanan tertentu dikatakan membawa kuman E Coli yang menyebabkan malapetaka ini. Akibatnya beberapa industri teruk terjejas. Import eksport barangan makanan dan sayur-sayuran yang dikatakan tercemar terhenti dan industri pertanian terjejas. Menurutnya, meskipun wabak berpunca daripada najis manusia dialami berkali-kali, ternyata ia tidak dapat menafikan kelemahan akal manusia.

10

Jika tidak, masakan kejadian wabak penyakit seperti kolera (taun), amebiasis atau disentri (jangkitan trek usus menyebabkan cirit-birit), keracunan makanan dan E Coli masih terus dibincangkan di seluruh dunia. "Menangani wabak bukan semata-mata terletak kepada peningkatan ilmu serta teknologi pencegahan dan pengawalan. Tidak juga dalam penyediaan sistem pengawasan serba canggih atau menambah bilangan pakar yang berpengalaman dalam hal ehwal penyakit. "Sebaliknya, ia hendaklah diasaskan oleh rasa tanggungjawab dan tugasan bersungguh-sungguh untuk memastikan setiap rantaian makanan antara najis dan mulut tidak mengalami pencemaran. Semua sumber yang ada digerakkan seoptimum mungkin untuk memerhati dan menjaga kualiti bahan makanan yang akan dimakan," katanya. Beliau berkata, apabila tanda ancaman wabak dianggap hal kecil dan data pelik daripada aktiviti pengawasan tidak dipandang serius kerana kepentingan industri, ia menunjukkan kepincangan ketara dengan tugasan diamanahkan. Wabak kolera yang membunuh lebih 5,500 nyawa di Tahiti susulan gempa bumi (yang juga meragut puluhan ribu nyawa) tahun lalu ialah satu contoh jelek yang mendukacitakan. Akibat kecuaian melakukan saringan kesihatan dan profilaksis (tindakan diambil bagi mencegah penyakit) terhadap kolera ke atas petugas kemanusiaan Pertubuhan Bangsa-Bangsa Bersatu (PBB) dari Nepal, seluruh Tahiti hancur akibat malapetaka berganda kerana kerja 'cincai' pertubuhan yang dianggap pakar. Sama juga dengan isu E Coli di Eropah. Meskipun ia dibuktikan kerana sayur tauge, mesti ada sesuatu yang menjadikan E Coli meledak dan mengganas. Adakah kerana keghairahan mencari keuntungan dan kesibukan menyediakan bekalan bagi memenuhi permintaan yang tidak henti-henti, komitmen terhadap biokualiti dan bebas pencemaran najis di sepanjang rantaian pengeluarannya tidak diutamakan. Adakah kerana kegagalan mengenalinya dari awal dan kegagalan memutuskan rantaian kehidupannya, komitmen terhadap pengawasan berterusan tidak diendahkan? Yang membingungkan ialah bagaimana tauge boleh tercemar najis? "Wabak hendaklah dirasakan besar sebelum ia terjadi. Justeru, jentera pengawasannya perlu efisien dan ketat. Sentiasa turun ke padang memantau menggunakan kecekapan akal dan pengalaman yang ada. Bukan bersembang kosong. "Isu kualiti, terutama membabitkan nyawa manusia, tidak seharusnya 'cair' akibat tekanan dan kepentingan tertentu. Ia adalah komitmen dalam urusan kerja, memastikan risikonya sifar dan kecuaiannya juga sifar," katanya. Meskipun wabak yang menyerang Eropah ini tidak menular ke Malaysia, pengajaran paling berharga daripada peristiwa itu ialah bagi penggemar hidangan mentah atau kurang masak seperti urap dan char kuetiau. Harus diingat, cara tauge diproses mungkin tidak jauh beza antara negara ini dengan Eropah, tetapi melihat dengan mata kepala sendiri caranya dikendali dan dipasarkan, risiko untuknya berlaku di negara ini tidak mustahil. Justeru, sesuatu perlu dilakukan.

11

Headline: Pengusaha rumah bot lega Publication: HM Date of publication: Dec 25, 2010 Section heading: Main Section Page number: 036 Byline / Author: Oleh Mohd Nasif Badruddin

KUALA TERENGGANU: Pengesahan Kementerian Kesihatan bahawa air di Tasik Kenyir bebas daripada dicemari bakteria e-coli minggu lalu bukan saja melegakan ramai pihak, malah pengusaha rumah bot. Beberapa pengusaha rumah bot yang ditemui Harian Metro bukan saja melahirkan kesyukuran dengan pengesahan itu, malah ia juga membuktikan langkah kerajaan negeri menyediakan tangki takungan buangan tepat pada masanya untuk mengelak pencemaran di tasik buatan manusia terbesar di Asia Tenggara itu. Seorang ahli jawatankuasa Persatuan Pengusaha Bot Pelancong Tasik Kenyir, Zalani Endut, 42, berkata, dia menyambut baik langkah kerajaan negeri menyediakan sistem tandas baru dan tangki takungan buangan kepada 37 pengusaha rumah bot di tasik berkenaan. "Jadi kami berharap dengan adanya pelbagai inisiatif disediakan kerajaan negeri seperti mahu menjadikan Pulau Bayas sebagai pulau bebas cukai, menyediakan tangki takungan buangan kepada pengusaha rumah bot dan sebagainya, dapat memberi nilai tambah kepada pengusaha produk pelancongan di sini," katanya. Abdul Karim Yunus, 33, pula berkata, sebagai pengusaha rumah bot yang bergantung kepada Tasik Kenyir sebagai sumber rezeki, pastinya mereka mengambil berat ekosistem lokasi tumpuan pelancong itu dan tidak sampai hati untuk mencemarkannya. "Sebolehnya pengusaha bot tidak mahu pengunjung membuang air besar di dalam rumah bot dan kita akan membawa mereka menaiki bot kecil untuk ke tandas awam di pulau berhampiran dengan tempat parkir bot. "Bagi saya, cadangan yang lebih praktikal kerajaan perlu menyediakan lebih banyak tandas awam di tempat tumpuan ramai seperti di Sungai Kerabat, Sungai Papan, Sungai Lawit dan Sungai Terenggan," katanya. Pendapat sama turut dikongsi Zakaria Jusoh, 43, yang meminta kerajaan negeri memberi garis panduan kepada pengunjung untuk bersama-sama menjaga kebersihan dan tidak terhad kepada pengusaha rumah bot saja. Akhbar sebelum ini melaporkan, air Tasik Kenyir dicemari bakteria e-coli berikutan pembuangan sisa kumbahan dan air buangan oleh pengusaha rumah bot yang menjadikan tasik itu sebagai lokasi mencari rezeki.

12

Headline: Tangan banyak bakteria, virus Publication: MA Date of publication: Dec 19, 2010 Section heading: Sihat Page number: 002 Byline / Author: Oleh Norlaila Hamima Jamaluddin

TAHUN lalu, ketika jangkitan virus Influenza A (H1N1) berleluasa, ramai bimbang dan mengambil pelbagai langkah proaktif untuk mengelak daripada terkena penyakit dengan mencuci tangan sekerap mungkin, menutup mulut dan hidung apabila batuk atau orang lain batuk serta membawa tisu dan cecair pembersih tangan ke mana saja mereka pergi. Malah, ada yang sangat berhati-hati sehingga menggunakan kunci kereta atau pen untuk menekan butang lif atau tidak mahu memegang susur tangan ketika menaiki mahupun menuruni tangga. Semua ini dilakukan untuk mengelak daripada menyentuh permukaan yang kerap disentuh dan mengurangkan risiko mendapat jangkitan virus berkenaan. Jika di hospital pula ramai yang sanggup beratur hendak menggunakan cecair pembersih tangan sebelum dan selepas melawat pesakit. Bagaimanapun, amalan itu tidak bertahan lama, ia hanya dilakukan kerana kebimbangan mendapat jangkitan virus H1N1 saja. Kini, apabila keadaan kembali 'tenang,' ramai mula lupa saranan yang diberikan untuk melindungi diri daripada jangkitan. Menurut Ketua Unit Kawalan Penyakit Berjangkit Hospital Sungai Buloh, Dr Christopher Lee, mencuci tangan adalah antara kaedah paling mudah, murah dan berkesan untuk menyekat penularan penyakit berjangkit. Menurutnya, mencuci tangan bukan sekadar mencegah pemindahan virus H1N1 saja, malah turut membabitkan semua virus dan bakteria berbahaya yang sentiasa menunggu peluang untuk menyerang kita. Katanya, apa yang menyedihkan ramai masih memandang remeh kepentingan mencuci tangan

dengan betul dan mungkin mereka tidak tahu bahawa tangan adalah antara anggota yang banyak organisma halus, sama ada bakteria, virus atau alga. Malah, ia juga menjadi 'pengangkutan' paling efisien untuk bakteria dan virus berpindah kerana apabila kita menyentuh muka terutama mata, hidung atau mulut; organisma halus ini akan terus sampai ke 'pintu masuk' badan. "Tangan petugas perubatan seperti doktor, jururawat dan pekerja hospital lain juga boleh tercemar melalui pelbagai cara termasuklah ketika mengambil darah pesakit, memeriksa tekanan darah atau nadi pesakit, membantu pesakit bergerak, menyentuh pakaian atau cadar tilam pesakit, memegang peralatan dalam wad termasuklah katil, lampu meja mahupun pam intravenus (bagi memasukkan cecair ke dalam salur darah). "Inilah sebabnya pencucian tangan sangat penting bagi petugas perubatan kerana mereka boleh memindahkan bakteria atau virus daripada seorang pesakit kepada pesakit lain atau pada

13

diri sendiri," katanya pada majlis penutup kempen 'Tangan Bersih, Hidup Sihat' yang dijalankan dengan kerjasama Antabax dan Hospital Sungai Buloh. Jurnal Perubatan New England 2006 melaporkan ramai doktor dan jururawat 'terlupa' untuk mencuci tangan mereka sebelum menyentuh pesakit. Walaupun kajian ini dilakukan di luar negara tetapi tidak mustahil turut berlaku di kalangan kakitangan perubatan di sini. Jadi, sebagai pesakit kita berhak meminta doktor atau jururawat untuk membersihkan tangan mereka terlebih dulu sebelum memberi rawatan atau membuat pemeriksaan terhadap pesakit. Dalam kempen ini, 33 sekolah, lebih 2,000 kedai makanan dan minuman, suku juta pengguna pengangkutan awam dan petugas barisan depan pelancongan di hab pengangkutan Semasa Sentral serta pesakit dan pelawat Hospital Sungai Buloh menerima bahan pendidikan yang disediakan Kementerian Kesihatan dan produk Antabax. Bahkan, mereka juga diberikan panduan bagaimana dan bila seseorang itu mesti membasuh tangan. Pada 2009, lebih 17,000 kes penyakit tangan, kaki dan mulut dilaporkan di Malaysia; 18,000 kes batuk kering dan 15,584 kes terkumpul (sehingga Ogos 2010) jangkitan H1N1. Itu belum termasuk kes keracunan makanan. Sebenarnya, semua jangkitan ini boleh dicegah dengan memberi penekanan terhadap kebersihan tangan. Malangnya, selepas pelbagai kempen kesihatan dan kesedaran dijalankan, pengetahuan masyarakat mengenai cara pencucian tangan masih kurang memuaskan walaupun ramai tahu kepentingannya. Hasil kajian selepas demonstrasi kebersihan tangan yang dijalankan dalam kempen itu, didapati hampir 90 peratus peserta bukan daripada sektor kesihatan tidak tahu cara mencuci tangan dengan betul, kata Pengurus Pemasaran Bahagian Penjagaan Diri dan Isi Rumah Lam Soon, Carmen Foo. Katanya, kajian itu juga menunjukkan orang dewasa juga perlu diberi pendedahan kepada kaedah penjagaan kesihatan paling asas (mencuci tangan) walaupun kumpulan sasaran kempen berkenaan ialah kanak-kanak sekolah rendah yang lebih terdedah kepada kuman kerana kebanyakan masa mereka dihabiskan di luar rumah.

Cara mencuci tangan Ia sangat mudah, iaitu dengan menggunakan sabun dan air. Sabun mandi biasa sudah memadai kerana ia juga memberi kesan yang sama dengan sabun antibakteria. Caranya: Basahkan tangan dan lumurkan dengan sabun. Gosok kedua-dua tangan selama sekurang-kurangnya 15 saat, dengan tumpuan kepada tapak tangan, celah jari, kuku, bahagian belakang dan pergelangan tangan. Akhir sekali, bilas dengan air bersih dan lap hingga kering. Perlukah menggunakan air suam untuk mencuci tangan? Tidak perlu kerana air hangat tidak cukup panas untuk membunuh bakteria. Kajian menunjukkan penggunaan air suam tidak memberi kesan lebih baik daripada air pada suhu bilik dalam mengurangkan jumlah bakteria di tangan. Sebaliknya bakteria membiak dengan lebih cepat pada suhu badan (37°C). Bagaimanapun, jika tangan anda berminyak, air suam dan sabun dapat membersihkan tangan dengan lebih baik. Perkara penting yang perlu anda ingat selepas mencuci tangan ialah mengelap tangan hingga kering sama ada menggunakan kertas tisu atau tuala bersih. Penggunaan tisu didapati lebih

14

baik daripada mesin pengering tangan seperti yang tersedia di kebanyakan pusat komersial. Kajian Universiti Westminster London pada 2008 mendapati jumlah bakteria pada tangan yang dikeringkan dengan mesin pengering (menggunakan udara panas) meningkat 254 peratus pada tapak tangan dan 194 peratus di hujung jari). Tangan yang dikeringkan dengan mesin pengering jet udara (lebih moden) didapati menunjukkan peningkatan jumlah bakteria sebanyak 15 peratus pada tapak tangan dan 42 peratus di hujung jari. Sebaliknya, tangan yang dikeringkan dengan tuala kertas menunjukkan pengurangan jumlah bakteria sehingga 77 dan 76 peratus pada tapak tangan dan hujung jari. ni boleh membuatkan bakteria tersebar ke seluruh bilik air. Selain itu, gunakan tisu untuk mengalas jari apabila menutup paip; atau anda boleh membersihkan kepala paip (dengan sabun) setiap kali mencuci tangan. Bila perlu cuci tangan? Bila-bila dirasakan perlu, terutama apabila tangan kelihatan kotor; sebelum menyedia dan menyentuh makanan; keluar tandas; jika tangan terkena darah atau cecair badan; selepas bermain dengan haiwan peliharaan dan sebelum memegang kanak-kanak kecil. "Tangan yang kelihatan bersih tidak bermakna ia benar-benar bersih (bebas daripada kuman) kerana ia terlalu halus untuk dilihat dengan mata kasar. Jika kita berada di tempat yang sukar mendapat air bersih, contohnya ketika dalam kenderaan awam dan tangan tiada tanda kotor, kita boleh gunakan cecair pembersih tangan beralkohol anti bakteria. "Cara betul menggunakan cecair pembersih tangan anti bakteria - letakkan beberapa titis cecair pembersih di tapak tangan kiri, rapatkan kelima-lima jari kanan dan gosokkan hujung jari (supaya ia mengenai kuku) dan segera gosokkan kedua-dua belah tangan (depan, belakang dan pergelangan tangan) sehingga cecair pembersih kering. Ulang untuk kuku sebelah lagi. Mulakan kerja selepas tangan benar-benar kering," katanya. Ada yang bertanya, adakah kandungan alkohol dan bahan anti kuman itu mendatangkan kesan sampingan jika seseorang itu makan sejurus selepas itu? Jawapannya tidak. Ia tidak berbahaya kerana alkohol dalam cecair pembasmi kuman ini meruap (sejat) dalam 20 hingga 30 saat. Selain itu penggunaan tisu lembap juga pilihan baik (kini sudah ada tisu lembap antibakteria), terutama ketika anda jauh dari punca air dan sabun. Namun begitu, pastikan tangan anda benar-benar kering sebelum menyentuh orang lain. Sikap penduduk Dr Lee berkata, walaupun semua orang tahu mencuci tangan itu penting, masih ramai yang tidak memberikan penekanan pada perkara ini. Dalam Soal Selidik Kebersihan Antarabangsa 2009 untuk mengetahui sikap penduduk Malaysia terhadap kebersihan; 31 peratus responden berkata mereka mencuci tangan selama lima saat selepas keluar dari tandas. Responden lain memberitahu mereka mencuci tangan selama 10 saat (34 peratus); 20 saat (15 peratus) dan 60 saat (18 peratus). "Lima saat adalah tempoh yang sangat singkat; besar kemungkinan mereka hanya membasahkan tangan saja dan berasakan ia sudah bersih. Seperti yang sering diulang; tangan

15

perlu dicuci sekurang-kurangnya selama 15 saat dengan sabun dan air. Murid sekolah di Hong Kong digalakkan menyanyi lagu tertentu ketika mencuci tangan bagi memastikan tangan mereka dicuci dengan betul," katanya. Apabila ditanya cara paling berkesan bagi mengelak jangkitan selesema, ada dua kaedah yang dicadangkan iaitu kerap mencuci tangan (21 peratus) dan menutup mulut dan hidung apabila orang lain bersin (30 peratus). Sebenarnya dua langkah ini baik tetapi jika anda yang bersin, anda perlu menutup hidung dan mulut dengan tisu dan buangkan tisu ke dalam tong sampah. "Jika tiada tisu dan ketika itu anda berada di tempat sesak, batuk atau bersinlah pada lengan baju (bahagian dalam; dekat dengan badan) kerana ia adalah tempat yang paling jarang bersentuhan dengan orang lain. Namun, cara yang lebih baik ialah sentiasa membawa tisu atau sapu tangan dan cecair pembersih tangan ke mana saja anda pergi," katanya. Antara penemuan lain di dalam soal selidik berkenaan ialah: * Tempat paling tercemar ialah kepala paip sinki dapur. Kajian menunjukkan 45 peratus kepala paip sinki dapur di negara ini dicemari bakteria Staphylococcus aureus (S aureus) dan 10 peratus tercemar dengan bakteria Escherichia coli (E coli). Bagaimana ia boleh terjadi? Kepala paip sinki dapur ialah antara benda yang kerap disentuh dan pencemaran boleh berlaku ketika memasak. Biasanya, selepas mengendalikan bahan mentah, kita mencuci tangan sebelum memegang makanan yang sudah dimasak. Bagaimanapun, berapa ramai antara kita yang mencuci kepala paip ini? Mungkin ada yang tidak pernah langsung. Bakteria paling banyak dikesan (pada lebih 50 peratus sampel) ialah E coli yang menjadi petanda penting terhadap tahap kebersihan rendah. S aureus dan E coli adalah dua bakteria yang paling lazim menyebabkan keracunan makanan dan cirit-birit. S aureus pula boleh menyebabkan pelbagai masalah ringan pada kulit seperti jerawat, nanah pada luka sehinggalah yang lebih teruk contohnya pneumonia (keradangan paru-paru) dan meningitis (keradangan selaput otak). * Didapati hampir 40 peratus papan pemotong penduduk Malaysia tercemar dan 15 peratus daripada itu dikategorikan 'sangat tercemar'. Ini bermakna risiko untuk mengalami keracunan makanan adalah tinggi bagi penghuni rumah berkenaan. Dalam kajian sama pada 2008 mendapati, secara global, kain lap dapur adalah 'peralatan' rumah paling kotor, tercemar dan mengandungi banyak kuman. Lebih 89 peratus rumah seluruh dunia mengandungi bakteria pada tahap tidak memuaskan, 78 peratus lagi dikategorikan sebagai sangat tercemar dan kotor. Malaysia lebih teruk kerana 100 peratus rumah responden di sini mempunyai kain lap dapur yang sangat kotor dan tercemar. Perkara ini disebabkan sikap tidak mencuci kain lap dapur, membiarkannya terperap dalam keadaan basah dan disidai di tepi sinki atau dapur meningkatkan lagi tahap pencemaran di rumah. Selain itu, menggunakan kain sama untuk tujuan pembersihan selepas masak turut membantu menyebarkan bakteria ke seluruh dapur. * Antara objek yang paling kerap disentuh ialah tombol pintu tandas dan ia sangat tercemar. Kira-kira 20 peratus responden mengakui tidak pernah membersihkan tombol pintu tandas di rumah mereka.

16

* Kira-kira 40 peratus alat kawalan jauh di negara kita sangat tercemar dan 63 peratus pemilik berkata tidak pernah membersihkan alat kecil yang sangat kerap digunakan itu. Keputusan ini juga menunjukkan bahawa pemiliknya kurang memberi penekanan terhadap kebersihan tangan. * Permukaan yang paling bersih di dalam rumah ialah telefon dan tombol penyimbah tandas.

17

Headline: Air Tasik Kenyir masih selamat Publication: HM Date of publication: Dec 17, 2010 Section heading: Main Section Page number: 008

KUALA TERENGGANU: Kadar pencemaran bakteria e-coli yang didakwa menjejaskan kualiti air di Tasik Kenyir tidak serius kerana jauh di bawah parameter pencemaran yang ditetapkan Piawaian Kualiti Air Interim di Amerika Syarikat. Pengerusi Jawatankuasa Pelancongan, Kebudayaan, Kesenian dan Warisan negeri, Datuk Abdul Rahin Mohd Said, berkata kajian yang dijalankan Pengarah Institut Akuakultur Tropika (Akuatrop) Universiti Malaysia Terengganu (UMT), Prof Dr Faizah Shahrom, belum siap dan dijangka selesai beberapa bulan lagi. Beliau yang juga Ahli Dewan Undangan Negeri (Adun) Teluk Pasu berkata, mengikut kajian awal itu, air di Tasik Kenyir masih jauh daripada pencemaran bakteria e-coli dan dalam peringkat selamat. Katanya, dalam usaha menjaga kualiti air di tasik buatan manusia terbesar di Asia Tenggara itu dan mengelakkannya tercemar dengan bakteria e-coli, kerajaan negeri memperkenalkan tandas sistematik dengan menyediakan tangki takungan buangan kepada 37 rumah bot sedia ada. "Kami juga akan kuatkuasakan peraturan supaya setiap chalet tidak menggunakan tasik untuk membuang najis kerana kualiti air di Tasik Kenyir perlu dijaga," katanya ketika sesi penggulungan Sidang Dewan Undangan Negeri (DUN), kelmarin.

18

Headline: Kaji peningkatan bakteria e-coli di Tasik Kenyir Publication: HM Date of publication: Dec 9, 2010 Section heading: Main Section Page number: 028

PUTRAJAYA: Kementerian Kesihatan akan mengkaji punca peningkatan bakteria Escherichia coli (e-coli) di Tasik Kenyir secepat mungkin bagi membolehkan tindakan segera diambil untuk mengatasi masalah itu. Menteri Kesihatan, Datuk Seri Liow Tiong Lai berkata, beliau sudah mengarahkan pegawai kesihatan negeri mengambil sampel air bagi membolehkan kajian dilakukan. Katanya, pihaknya belum mengetahui tahap ketinggian bakteria terbabit di dalam tasik berkenaan kerana dakwaan terbabit bukannya dibuat Kementerian Kesihatan. "Kita akan siasat dakwaan itu dengan membuat kajian untuk mencari punca serta sebab berlakunya peningkatan bakteria terbabit seperti yang didakwa. "Memang tiap-tiap tasik ada bakteria e-coli, tetapi kita nak melihat tahapnya. Kita tak tahu tahapnya berapa tinggi...dakwaan kata tinggi. "Jadi, saya sudah mengarahkan pegawai saya untuk mengambil sampel untuk melihat sejauh mana tingginya bakteria e-coli di dalam Tasik Kenyir," katanya. Beliau mengulas laporan mengenai dakwaan Tasik Kenyir di Hulu Terenganu, Terengganu dicemari bakteria e-Coli dan berada pada tahap membimbangkan. Dakwaan itu disahkan kerajaan Terengganu berikutan pembuangan sisa kumbahan dan air buangan oleh pengusaha rumah bot yang menjadikan tasik buatan itu sebagai lokasi mencari rezeki. Liow berkata, kementerian akan memastikan kebersihan air di tasik terbabit dijaga kerana ia akan memberi kesan buruk kepada masyarakat di sekitar.

19

Headline: E-coli: Sampel air Tasik Kenyir diuji Publication: BH Date of publication: Dec 9, 2010 Section heading: Main Section Page number: 034 Byline / Author: Oleh Sazarina Shahrim

PUTRAJAYA: Kementerian Kesihatan memulakan siasatan terhadap dakwaan berlaku pencemaran bakteria e-coli di Tasik Kenyir yang dilaporkan berada pada tahap membimbangkan berikutan pembuangan sisa kumbahan daripada rumah bot. Menterinya, Datuk Seri Liow Tiong Lai, berkata Jabatan Kesihatan Terengganu sudah diarah menjalankan siasatan segera dan mengambil sampel air di Tasik Kenyir untuk menentukan tahap pencemaran. "Kita bimbang sisa kumbahan dari tandas sekeliling kawasan disalurkan ke dalam Tasik Kenyir kerana jika dicemari dengan bakteria itu ia akan memberi kesan buruk kepada mereka yang menggunakan tasik berkenaan. "Bagaimanapun, dakwaan ini bukan dari Kementerian Kesihatan, kita akan siasat dulu dan pastikan kebersihan Tasik Kenyir dijaga," katanya kepada sidang media selepas mempengerusikan Mesyuarat Majlis Keselamatan Makanan dan Pemakanan Kebangsaan kesembilan di sini, semalam. Beliau berkata, e-coli adalah mikro organisma yang biasa ditemui di tasik namun tahap pencemarannya di Tasik Kenyir masih belum diketahui.

Kerajaan negeri baru-baru ini dilapor mengesahkan air Tasik Kenyir dicemari bakteria e-coli dan berada pada tahap membimbangkan berikutan pembuangan sisa kumbahan daripada rumah bot. Pengerusi Jawatankuasa Pelancongan, Kesenian, Kebudayaan dan Warisan negeri, Datuk Abdul Rahin Mohd Said, berkata kajian dilakukan saintis Universiti Malaysia Terengganu (UMT) mendapati berlaku peningkatan mendadak bakteria e-coli dalam air tasik itu. Mengenai ancaman 'superbug' dalam makanan, Liow berkata, sehingga kini, tiada kes bakteria itu dikesan di negara ini. Bagaimanapun, katanya, kementerian mewujudkan rangka kerja komprehensif dengan kerjasama pelbagai agensi kerajaan bagi memastikan rantaian makanan di negara ini bebas daripada bakteria berkenaan. "Kita perlu melihat seluruh rantaian makanan, justeru perlu ada kerjasama baik antara kementerian kerana kita mempunyai 10 akta yang mengawal selia rantaian makanan di negara ini yang membabitkan lebih 10 jabatan," katanya. Dalam mesyuarat yang berlangsung selama tiga jam itu juga, Liow berkata, masalah pemakanan terutama obesiti turut dibincangkan dan perlu ditangani segera bagi mengelak ia menjadi bertambah serius.

20

"Laporan Pertubuhan Kesihatan Sedunia (WHO) menyatakan Malaysia berada di tangga keenam tertinggi di Asia yang mempunyai jumlah penduduk dewasa mengalami obesiti selepas Arab Saudi, UAE, Bahrain, Kuwait dan Jordan," katanya.

Headline: Ratusan ikan Tasik Kenyir mati akibat suhu tinggi

Publication: BH Date of publication: Dec 9, 2010 Section heading: Main Section Page number: 033

KUALA BERANG: Selepas gempar dengan berita berhubung air Tasik Kenyir dicemari bakteria e-coli, Institut Akuakultur Tropika (AKUATROP) mendedahkan sejak lebih sebulan lalu, sekurang-kurangnya ratusan ikan di tasik berkenaan mati akibat peningkatan suhu air tasik berkenaan. Pengarah AKUATROP Universiti Malaysia Terengganu (UMT), Prof Dr Faizah Shahrom, berkata lonjakan suhu air di tasik itu yang sangat jarang berlaku selain di tasik beberapa negara seperti Afrika, Amerika Selatan dan Rusia, dipercayai membunuh ratusan spesies ikan di situ. Beliau berkata, peningkatan kadar suhu air Tasik Kenyir yang tidak seimbang menyebabkan keadaan tidak selesa untuk ikan hidup. "Kita mendapati suhu air di beberapa bahagian tasik ini tidak berubah sepanjang hari. Contohnya, jika suhunya setinggi 31 darjah selsius pada jam 6 pagi, suhu sama dicatatkan pada jam 10 pagi. "Ini menyebabkan ikan tidak selesa hidup dan akhirnya mati kerana kadar suhu air yang tinggi, tetapi ia tidak memberi kesan kepada manusia," katanya ketika ditemui selepas pelancaran pertandingan memancing Kenyir Cup di Jeti Pengkalan Gawi, Tasik Kenyir di sini, semalam. Pelancaran pertandingan tangkap dan lepas yang berlangsung selama tiga hari bermula semalam dilakukan Yang Dipertua Dewan Undangan Negeri (DUN), Datuk Tengku Putera Awang dan menerima penyertaan kira-kira 80 peserta dari China dan Hong Kong. Dr Faizah berkata, disebabkan peningkatan suhu air di tasik berkenaan termasuk di Sungai Comor, pengusaha ikan sangkar disaran memindahkan lokasi ternakan ke kawasan suhu airnya lebih sejuk bagi mengelak kejadian ikan mati. Sementara itu, beliau berkata, kajian dilakukan AKUATROP di Tasik Kenyir menjurus kepada kualiti air tasik berkenaan dengan mengambil sampel air daripada Sungai Comor dan mendapati banyak ikan di situ mati kerana suhu air panas sehingga mencecah 31 darjah Selsius.

21

Headline: Perlu kajian lebih spesifik Publication: HM Date of publication: Dec 8, 2010 Section heading: Main Section Page number: 017 Byline / Author: Oleh Mohd Nasif Badruddin

HULU TERENGGANU: Kajian lebih spesifik perlu dilakukan bagi menentukan kesan bakteria e-coli dari sisa kumbahan dan air buangan yang dilaporkan menyebabkan Tasik Kenyir, di sini, dikatakan tercemar berikutan ia mikro organism yang biasa dijumpai di mana-mana tasik dan sungai. Pengarah Kesihatan negeri, Dr Nordiyanah Hassan berkata, bakteria e-coli memang ditemui pada sungai dan tasik, justeru orang ramai tidak perlu bimbang atau panik mengenai laporan Tasik Kenyir dicemari e-coli kerana tahap pencemarannya sama ada serius atau tidak, belum dikenal pasti. "Kita tidak tahu tahap pencemaran e-coli di Tasik Kenyir seperti hasil kajian yang dilaporkan itu, justeru saya rasa kita perlu meneliti terlebih dulu laporan berkenaan sebelum membuat sebarang kesimpulan. "Saya tidak dapat memberi komen lanjut kerana kajian berkenaan bukan dijalankan oleh jabatan kerajaan, sebaliknya pihak lain yang perlu diteliti terlebih dulu," katanya ketika dihubungi semalam.

Sementara itu, Pengarah Institut Akuakultur Tropika (Akuatrop) Universiti Malaysia Terengganu (UMT), Prof Dr Faizah Shahrom yang mengetuai kajian mengenai pencemaran e-coli di Tasik Kenyir berkata, tumpuan kajian berkenaan lebih terarah kepada kesan bakteria itu terhadap hidupan akuakultur dan bukannya manusia. "Contoh hasil kajian yang kita peroleh menunjukkan bakteria e-coli memberi kesan negatif kepada populasi ikan di Tasik Kenyir, bagaimanapun kajian ini tidak memfokuskan kepada kesan bakteria berkenaan kepada manusia. "Sebenarnya kajian ini belum selesai sepenuhnya dan kita jangka dapat menyelesaikannya dalam tempoh sebulan lagi. Bagaimanapun, kita tahu bakteria ini datang daripada sisa kumbahan dan air buangan yang boleh menjejaskan hidupan air di Tasik Kenyir. "Begitupun, usaha untuk mengatasi masalah ini sangat dialu-alukan bagi memastikan kualiti air di Tasik Kenyir berada pada tahap terbaik supaya hidupan akuatik dan ekosistemnya tidak terjejas," katanya sambil memuji langkah kerajaan negeri menyediakan tandas sistematik kepada 37 rumah bot sedia ada sebagai usaha mengelak pencemaran e-coli di tasik berkenaan. Sementara itu, seorang ahli jawatankuasa Persatuan Pengusaha Bot Pelancong Tasik Kenyir (Kelaba), Zalani Endut, 42, berkata dia menyambut baik langkah kerajaan negeri menyediakan tandas itu, namun memerlukan penjelasan lebih lanjut kerana ia dianggap tidak praktikal buat jangka masa panjang.

22

Menurutnya, tangki takungan buangan yang disediakan hanya berkapasiti 200 liter dan dijangka penuh dalam masa setengah hari saja sedangkan kebiasaannya pelancong menyewa bot mereka sehingga tiga atau empat hari. "Tangki ini dicadangkan diletakkan di bahagian bawah bot, namun ia tidak sesuai kerana jarak ketinggian sangat hampir dengan permukaan lantai bot dan air tasik, jadi jika melimpah ia pasti akan jatuh ke dalam air tasik juga," katanya.

Headline: Usah bimbang laporan Tasik Kenyir tercemar Publication: BH Date of publication: Dec 8, 2010 Section heading: Main Section Page number: 008

KUALA TERENGGANU: Bakteria e- coli dari si-sa kumbahan dan air buangan yang menyebabkan Tasik Kenyir di Hulu Terengganu tercemar, adalah mikro organisma yang biasa di-temui di tasik serta sungai dan kesannya kepada ke-sihatan manusia perlu di-tentukan melalui kajian yang lebih spesifik ke arah itu. Pengarah Kesihatan negeri, Dr Nordiyanah Hassan, berkata orang ramai tidak perlu bimbang atau panik mengenai laporan Tasik Kenyir dicemari bakteria e-coli kerana tahap pencemarannya sama ada serius atau sebaliknya, masih belum dikenal pasti. "Kita tidak tahu tahap pencemaran e-coli di Tasik Kenyir seperti hasil kajian yang dilaporkan itu dan perlu meneliti laporan berkenaan sebelum membuat sebarang kesimpulan. "Jadi, saya tidak dapat memberi komen lanjut kerana kajian berkenaan bukan dijalankan jabatan kerajaan, sebaliknya pihak lain yang perlu diteliti terlebih dulu," katanya. Pengarah Institut Akuakultur Tropika (AKUATROP) Universiti Malaysia Terengganu (UMT), Prof Dr Faizah Shahrom yang mengetuai kajian mengenai pencemaran e- coli di Tasik Kenyir, berkata tumpuan kajian berkenaan lebih terarah kepada kesan bakteria berkenaan terhadap hidupan akuakultur dan bukan manusia. "Contohnya, hasil kajian yang kita peroleh menunjukkan bakteria e-coli memberi kesan negatif kepada populasi ikan di Tasik Kenyir. Sebenarnya, kajian ini dijangka selesai sepenuhnya dalam tempoh sebulan lagi, tetapi kita tahu bakteria ini datang daripada sisa kumbahan dan air buangan. "Usaha mengatasi masalah ini sangat dialu-alukan bagi memastikan kualiti air Tasik Kenyir berada pada tahap terbaik, supaya hi-dupan akuatik dan ekosistemnya tidak terjejas," katanya. Dr Faizah berkata, langkah kerajaan negeri menyediakan tandas sistematik kepada 37 rumah bot sedia ada di tasik itu bagi mengatasi pencemaran e-coli, wajar dicontohi. Berita Harian semalam melaporkan, kerajaan negeri mengesahkan air Tasik Kenyir dicemari bakteria e- coli dan berada pada tahap membimbangkan berikutan pembuangan sisa kumbahan daripada rumah bot.

23

Headline: Pencemaran e-coli Tasik Kenyir serius Publication: BH Date of publication: Dec 7, 2010 Section heading: Main Section Page number: 014 Byline / Author: Oleh Baharom Bakar

KUALA BERANG: Kerajaan negeri mengesahkan air Tasik Kenyir dicemari bakteria e-coli dan berada pada tahap membimbangkan berikutan pembuangan sisa kumbahan daripada rumah bot. Pengerusi Jawatankuasa Pelancongan, Kesenian, Kebudayaan dan Warisan negeri, Datuk Abdul Rahin Mohd Said, berkata kajian dilakukan saintis Universiti Malaysia Terengganu (UMT) mendapati berlaku peningkatan mendadak bakteria e-coli dalam air tasik itu. Katanya, jika tiada usaha dilakukan bagi mengawal keadaan itu, ia akan menjejaskan mutu air dan hidupan di tasik itu. "Kerajaan negeri mengambil kira cadangan dan rumusan dibuat UMT, termasuk menyediakan sistem buangan sisa lebih sistematik terutama di rumah bot yang beroperasi di tasik itu. "Sebagai permulaan kita membekalkan sistem buangan sisa dan kumbahan moden dan mesra alam kepada 37 rumah bot sedia ada, manakala rumah bot baru diwajibkan mempunyai sistem pelupusan sisa kumbahan baru yang mesra alam," katanya pada sidang media menjelang penganjuran pertandingan memancing Kenyir Cup 2010 di Pangkalan Gawi, di sini, semalam. Pertandingan yang membabitkan 60 peserta dari China dan 20 peserta tempatan, diadakan selama tiga hari mulai esok dan menawarkan hadiah keseluruhan berjumlah RM50,000. Hadir sama, Pengurus Besar Lembaga Kemajuan Terengganu Tengah (KETENGAH), Hamzah Ngah dan Timbalan Pengarah Tourism Malaysia negeri, Zaini Sulaiman. Abdul Rahin berkata, bagi memastikan kualiti air di Tasik Kenyir pulih, kerajaan negeri mengambil langkah drastik dengan meluluskan pe-runtukan berjumlah RM103,000 untuk pemasangan tandas dan sistem pelepasan sisa kumbahan lebih moden dan mesra alam di rumah bot. Katanya, kebanyakan rumah bot dilengkapi tandas jenis cangkung menggunakan sistem `flushing domestic' dengan sisa kumbahan tandas dan air buangan daripada sinki dapur yang mengandungi minyak masak dan sisa makanan dibuang terus ke dalam tasik. Bagi mengelak air tasik terus tercemar, kerajaan negeri menukar sistem tandas dan kumbahan di 18 rumah bot yang digunakan dalam pertandingan Kenyir Cup. "Pemasangan tandas itu membolehkan air kumbahan dan sisa makanan disalurkan ke tangki takungan berkapasiti 200 liter," katanya. Abdul Rahim berkata, isu pembuangan sisa kumbahan daripada rumah bot terus ke dalam tasik seluas 209,199 hektar itu dibentangkan pada mesyuarat Majlis Pelancongan Negara yang dipengerusikan Perdana Menteri, Datuk Seri Najib Razak pada 1 Jun lalu.

24

"Kerajaan negeri mempunyai pelan besar terhadap Tasik Kenyir yang mempunyai 340 pulau, terutama usaha menjadikannya destinasi pelancongan utama negeri ini. "Justeru, bagi memastikan flora dan fauna serta hidupan air kekal, sistem pengurusan sisa kumbahan perlu wujud di sini supaya bakteria e-coli umpamanya tidak merosakkan ekosistem di sini," katanya.

Headline: Tasik Kenyir dicemari bakteria e-coli

Publication: HM Date of publication: Dec 7, 2010 Section heading: Main Section Page number: 006

HULU TERENGGANU: Air Tasik Kenyir di sini, disahkan dicemari bakteria e-coli serta berada pada tahap membimbangkan berikutan pembuangan sisa kumbahan dan air buangan oleh pengusaha rumah bot yang menjadikan tasik buatan itu sebagai lokasi mencari rezeki. Pengerusi Jawatankuasa Pelancongan, Kesenian, Kebudayaan dan Warisan negeri, Datuk Abdul Rahin Mohd Said berkata, kebanyakan rumah bot menggunakan mangkuk tandas jenis cangkung dengan sistem 'flushing domestik' manakala air buangan daripada sinki dapur yang mengandungi minyak masak serta sisa makanan dibuang terus ke dalam tasik. "Kajian dilakukan Universiti Malaysia Terengganu mendapati berlaku peningkatan bakteria e-coli dalam air di tasik itu dan ia boleh menjejaskan sumber dan hidupan air di situ. "Berdasarkan hasil kajian itu, kita akan membina tandas dan menyediakan sistem buangan sisa lebih sistematik percuma kepada 37 rumah bot sedia ada serta mewajibkan rumah bot baru menyediakan sistem air buangan sebelum lesen dikeluarkan," katanya pada sidang media sempena pertandingan memancing Kenyir Cup 2010 di Pangkalan Gawi di sini, semalam. Pertandingan memancing Kenyir Cup membabitkan 60 peserta dari China dan 20 peserta tempatan diadakan selama tiga hari mulai esok menawarkan hadiah keseluruhan RM50,000. Hadir sama pada majlis itu Pengurus Besar Lembaga Kemajuan Terengganu Tengah (Ketengah), Hamzah Ngah dan Timbalan Pengarah Tourism Malaysia negeri, Zaini Sulaiman. Menurutnya, bagi memastikan kualiti air Tasik Kenyir sentiasa bersih, kerajaan negeri memperuntukkan RM103,000 untuk pemasangan tandas dan sistem kumbahan sisa makanan di atas rumah bot terbabit. Abdul Rahin berkata, pemasangan tandas membabitkan peruntukan RM2,775 setiap unit akan dilakukan mengikut beberapa fasa dan fasa pertama membabitkan 18 rumah bot yang digunakan sempena pertandingan memancing Kenyir Cup nanti. Menurutnya, dengan pemasangan tandas itu, air kumbahan dan sisa makanan akan disalurkan ke dalam tangki takungan berkapasiti 200 liter. Beliau berkata, isu pembuangan sisa kumbahan turut dibangkitkan ketika pembentangan kertas

25

kerja bertajuk Tasik Kenyir sebagai destinasi eko-pelancongan pada mesyuarat dipengerusikan Perdana Menteri, Datuk Seri Najib Razak, Jun lalu. "Bagi memastikan flora dan fauna serta hidupan air kekal, perancangan termasuk menyediakan sistem sokongan terutamanya pengurusan sisa kumbahan perlu disediakan agar tidak mengganggu ekosistem sedia ada," katanya.

Headline: Korean noodles safe to eat

Publication: NST Date of publication: Jun 15, 2011 Section heading: Main Section Page number: 010 Byline / Author: By Lydia Gomez

PORT KLANG: The Shin Ramen and Shin Ramyun Korean noodles are safe for consumption as they have not been contaminated. Health Minister Datuk Seri Liow Tiong Lai said the noodles, which the ministry earlier advised consumers to avoid, were free of excessive amounts of di (2-ethylhexyl) phthalate (DEHP). He said as of yesterday, 13 food and drink items from Taiwan, including sports drinks, juices, jam, jelly, yoghurt, confection flour, pasta, noodles and milk tea, were tested and found to be free of DEHP. This brings the total number of Taiwan-made food and drinks that have been tested to 44. So far, only 15 food products from Taiwan have been found to be contaminated with the dangerous chemical and placed under level six (automatic rejection) under the Food Safety Information System of Malaysia (Fosim). Liow said the ministry had strengthened its workforce at all entry points to monitor food from Taiwan and Hong Kong. All food consignments coming from the two nations, he said, were placed under Fosim level four alert (food released only after inspection and sample analysis). "The public need not worry about the safety of these foods as all necessary checks have been put in place. "We assure the public that all food imported into the country have been checked under the Food Act 1983 and Food Regulations 1985. It is the responsibility of all importers to make sure that the food they bring into the country is safe," he said after witnessing a Fosim inspection on food from Taiwan at a warehouse in Northport yesterday. More information is available at http://moh.gov.my or http://fsq.-moh.gov.my, or contact the ministry's Food Safety and Quality Division at 03-8883 3652/3653. On concerns raised in the media that meat from dead pigs was used to make processed food,

26

Liow said the ministry had ordered all Cap Ayam brand meat products to be recalled as well as those from two other manufacturers in Penang. He said investigations into the content of bak kua (dried pork meat slices), lap cheong (pork sausages), dim sum and pau sold by these manufacturers showed high amounts of nitrate and nitrite, used as preservatives. Liow said consumption of excessive amounts of nitrate could result in lack of oxygen flow to vital organs, leading to breathing difficulties, headaches, palpitations and fatigue. It could also cause cancer. He said of the 80 samples tested, those from the three manufacturers were found to contain more than 1,000mg/kg of nitrate and nitrite instead of the permitted 200mg/kg. "The ministry will take legal action against the manufacturers and, if found guilty, they can be fined up to RM20,000, five years' jail, or both." On the ongoing E. coli scare, Health director-general Datuk Dr Hasan Abdul Rahman said the ministry was actively testing food samples for the bacteria. "So far, we have not detected any cases related to the outbreak in Europe," he told the New Straits Times. He said those who recently visited Europe and were suffering from symptoms such as abdominal cramps, diarrhoea, fever and vomiting should immediately seek medical attention. On Saturday, German officials confirmed that bean sprouts from an organic farm in northern Germany were the source of the deadly outbreak across Europe. The sprouts carried a lethal strain of the E. coli virus, known as enterohaemorrhagic E. coli (EHEC). More than 3,000 people across Europe have fallen sick from EHEC poisoning, with some contracting Haemolytic Uraemic syndrome, a serious kidney ailment.

27

Headline: Sweet taste of good health Publication: NST Date of publication: Jul 5, 2011 Section heading: Life & Times Page number: 004 Byline / Author: By Kasmiah Mustapha

KASMIAH MUSTAPHA learns that a particular honey has wide-ranging curative value. THERE is a new twist to the old saying about apples and their health benefits and it goes like this, "A teaspoon of honey a day keeps the doctor away". Over the years, research studies have shown that honey has health benefits. It has been accepted as an alternative health remedy in treating various, ailments, from sore throats to management of wounds. Medi Bioactive Honey Company chief executive office Carolyn Macgill believes that one teaspoon of honey a day helps strengthen our immune system and protect us from infectious diseases. From her personal experience, honey, especially manuka, helps patients recovering from cancer. Cancer therapy affects a patient's immune system, would be affected making them them vulnerable to infections. "My daughter had a rare form of cancer when she was 10 years old. The surgery and chemotherapy affected her immune system. So we had to protect her from infections because she had scar tissues in her lungs and if we were not careful it could have made things worse. "She is now 19. She takes honey every four hours and in nine years, she's had cold and flu only twice. It has also protect her lungs from infection or more scar tissues." Australian company Medi Bioactive is the producer of the Berringa manuka honey. It was set up in 2009 after extensive research into the powerful properties of the Australian leptospermum polygalifolium tree which produces the manuka honey. Researchers found thatww Berringa manuka honey contains antioxidants that protect the body form harmful free radicals, provides relief from sore throats, stomach ulcers, acid reflex, minor mouth ulcers, oral infections, sore gums, helps clear infection in wounds, maintains a healthy digestive function and gives relief from indigestion. Berringa Honey can be eaten straight from the jar It is also an ingredient to produce a functional food, and is used in cosmetics and therapeutics. The products are certified organic by the Australian government. They also have halal certification from the Australian Halal Food Services. "To my knowledge we are the only ones with halal certification. We wanted it for the Malaysian market. We feel that we need to respect the market and be sensitive to what customers want." Macgill says that through the company's collaboration with the University of Queensland, it was found that manuka honey has anti-bacterial and anti-microbial abilities. The products also reach

28

the highest reading of 1,750 methylglyoxal (MGO) which measures anti-bacterial and anti-microbial activity. "As we continue our research on the benefits of manuka honey, we are learning more. We are now finishing research on wound and gut care. Not only that but veterinarians are also using honey to treat wounds on dogs and horses to prevent bacterial infection. The more we learn about it, the more we know how to apply it." In 2008, Professor Thomas Henle of University of Dresden, Germany found that MGO gives manuka honey its unique antibacterial properties. Prior to this discovery, the only other food items known to contain significant amounts of dietary MGO were coffee and cocoa. Since dietary MGO is resistant to heat, body fluids, light, and enzymatic activity, its potential benefits are extensive compared to the hydrogen peroxide-producing glucose oxidase enzyme found in all honey. Research has found that MGO can kill Helicobacter pylori, the bacterium known to cause stomach ulcers and duodenal ulcers, methicillin-resistant Staphylococcus aureus or MRSA (also known as the super bug for its high level of resistance to most available antibiotics), Escherichia coli (E. Coli) which is known to cause serious food poisoning, and Streptococcus pyogenes, a virus that causes sore throats. Macgill said the Berringa manuka honey is marketed in Germany, Japan, United Kingdom as well as Malaysia. While honey has numerous health benefits, Macgill said it is not a medical wonder. "More than anything, honey is offering you a choice. Of course it is not going to work for every one and every illness but the feedback that we are getting is that this is a natural alternative." Berringa manuka honey, available here since last year at selected organic stores and pharmacies, is priced between RM98 and RM398.

29

Headline: Emphasis on food safety at Monash Publication: NSUNT Date of publication: Jul 3, 2011 Section heading: Learning Curve Page number: 017

AS Europe battles a recent E. coli outbreak, other countries, like Malaysia, are paying closer attention to their food safety regulations and best practices. Malaysia, a country which prides itself on the variety of cuisines available, also sees its share of food-borne disease outbreaks like listeria and hepatitis A. Yet, although existing hygiene regulations are strict, a Monash University academic finds that some smaller industries may not be fully aware of the important role they play in preventing food-borne diseases. "A high proportion of food is made by small and medium industries which may not see a direct link of what they do and people getting sick," says Professor Gary Dykes, who specialises in food science and technology. This is contrary to larger companies, including multinationals, which follow good food safety practice. "Regulating food safety in Malaysia based on the number of people involved in the food production area is a difficult thing, but the best way is to educate those involved through community engagement," he says, adding that non-governmental organisations have a role to play. Dykes says safety is integral to food production and not adhering to policies and regulations, such as those advocated by the hazard analysis and critical control points (HACCP) system, could have devastating effects. The United States Department of Health & Human Services describes HACCP as a management system where food safety is addressed through analysis and control of biological, chemical and physical hazards from raw material production, procurement and handling, to manufacturing, distribution and consumption of the finished product. "The potential risks of food poisoning can be extreme, and include the loss of life, financial ruin and an economic cost to the country in terms of hospitalisation bills and lower productivity," says Dykes. To prevent food-borne diseases, good hygiene practices must be maintained through the chain of food production -- a point stressed to students pursuing the Bachelor of Science (food science and technology) at School of Science at Monash University Sunway campus. Students who pursue the three-year Bachelor of Science in food science and technology do not earn a theoretical science degree, but put science into practice, Dykes says. For example, internship programmes with food giants like Campbell's, Kerry Ingredients and F&N Holdings, expose students to best practices in the food industry while focusing on

30

understanding how agricultural raw materials are produced and how food is preserved, as well as food processing, packaging and distribution. "A top-notch education in food science is a passport to success in Malaysia, a country where food quality and safety is important to everyone." Apart from the Bachelor of Science (food science and technology), the School of Science offers the three-year Bachelor of Science (biotechnology), Bachelor of Science (environmental management), and Bachelor of Science (medical bioscience) degrees, all with honours. Double degrees, such as the Bachelor of Science (biotechnology), Bachelor of Science (environmental management), Bachelor of Science (biotechnology) and Bachelor of Science (medical bioscience), take four years to complete and include an honours certification. For information, visit www. monash.edu.my

31

Headline: What does it take to have hygienic eateries? Publication: NST Date of publication: Jun 27, 2011 Section heading: Streets Page number: 004 Byline / Author: By Estung

IF you have your breakfast out of home most of the mornings, do take a good look at your drink before you take a sip. The next time your order of Nescafe or teh tarik arrives, scrutinise it - especially the glass or mug it is served in. What you discover could make you think twice of patronising the popular stall you have been frequenting - just like the guy I encountered at the always-packed restaurant in Sentul last week. I was already about to finish my weekly treat of thosai when a commotion across the table next to mine caught my attention. A customer had just taken his first sip of teh tarik when he called out to the waiter who had just served him. The customer spotted a lipstick stain on the rim of the glass mug and pointed it out to the waiter. The latter, who was a new face at the restaurant, did not appear to understand what he wanted. When complaint turned into commotion, the supervisor who was manning the cash register rushed in to intervene, only to receive an earful from the angry customer. Apologising, the supervisor explained that the worker, a migrant, had just started work and did not understand the local lingo. To appease the angry man, the supervisor reprimanded the waiter in his own language as another waiter was gestured to change the customer's drink. As the supervisor calmed the man down, the drink was brought promptly to the drink station. The drink maker, who was hidden from the customer's view by a boiler, merely poured the drink into a new glass and the tea was brought back to the customer. As the customer started tucking into his breakfast and sipping in his tea, I lost my appetite for mine. Ever wondered how many restaurants in the city are concerned about hygiene these days? If the City Hall's enforcers were to conduct daily checks on all eateries in the Klang Valley, especially on the understaffed 24-hour restaurant chains, chances are that city folk would have to starve for weeks. Many outlets would have to be closed down for a week of cleaning up. Food preparation hygiene is being compromised daily and we have been fortunate not to have a large-scale food poisoning case. As a microbiologist told me, the E.Coli strain that hit Europe recently, is also probably on the tables and sinks of dirty eateries and restaurants. And the reason they have not caused harm is because they had not gotten into the food chain in large numbers yet. How difficult is it to keep plates, cups or mugs clean anyway? Immersing them into boiling water before they are used is a cheap and effective method to kill germs. But do you see any eatery doing it? There is a café near my office that uses an age-old method of sterilising its cups for any drink it prepares. The cafe uses an old-fashioned boiler that you used to see in coffeeshops of yesteryear. Made

32

of stainless steel, instead of brass like its predecessor, the boiler has a long trough at the side. Cups are soaked in the simmering water in the trough whole day long, until they are needed to prepare drinks. Back in the 1970s, many coffeeshops used this method to sterilise their cups. Unfortunately these days, you don't see the practice any more. Even the modern cafes that boast of old-charm ambience you see in the city have failed to incorporate this hygienic practice into their business.

33

Headline: Go for medical checks if you've visited Europe Publication: NST Date of publication: Jun 2, 2011 Section heading: Main Section Page number: 005

KUALA LUMPUR: Travellers having symptoms of dysentery (bloody diarrhoea) on their return from Europe have been advised to seek medical treatment at the nearest healthcare provider immediately. In a statement yesterday, Director-General of Health Datuk Dr Hasan Abdul Rahman said those who have travelled to Europe in the past month were at risk of contracting Haemolytic Uraemic Syndrome (HUS), after the outbreak of a particularly lethal strain of E.coli in Germany. According to the World Health Organisation, the outbreak was first reported on April 25. "As of last Friday, the WHO has reported 276 confirmed cases of HUS, including three deaths." Eighty-six per cent of the cases involved adults aged over 18 while 68 per cent of those infected were women. There were also several cases among European travellers to Germany, with Sweden reporting 16 cases, while the United Kingdom and the Netherlands each reported one case. Hasan urged all state health departments, including the entry health offices and private health facilities, to continue monitoring the situation and to notify the ministry of any dysentery cases as a mandatory activity under Act 342, so that further action can be taken. He said bacterial isolation had revealed that those suffering from HUS had been infected by E. coli 0104, a strain of the Enterohaemorrhagic Escherichia coli (EHEC) virus. "Early studies show that the outbreak may have been caused by consuming raw vegetables, including tomatoes, cucumbers and lettuce," he said, adding that the E.coli 0104 bacterial strain had been found in a sample of cucumbers from Spain. He said the ministry's food safety and quality division was also monitoring the import of cucumbers. "So far, none of the cucumbers imported are from Germany or Spain."

34

Headline: E. coli infection symptoms Publication: NST Date of publication: Jun 2, 2011 Section heading: Main Section Page number: 005

HAEMOLYTIC uraemic syndrome (HUS) symptoms include abdominal cramps, vomiting, and bloody diarrhoea (dysentery), which can cause dehydration, severe fatigue, anaemia, uraemia and bleeding tendencies. The syndrome is characterised by abnormal breakdown of red blood cells (haemoloytic anaemia), acute renal failure, and low platelet count (thrombocytopenia). HUS is expected to be caused by consuming foods contaminated by the E. coli bacteria, with symptoms arising in between three to eight days. "While most will recover within 10 days, a small number of cases may involve more serious and chronic complications such as kidney disease, especially among children and the elderly," Director-General of Health Datuk Dr Hasan Abdul Rahman said, adding that the fatality rate of the disease was between five and 10 per cent. He advised the public to practise good hygiene to contain the spread of the disease, including washing of hands before preparing or eating meals and after bathroom visits. "We also advise the public to wash all raw vegetables and fruits with clean flowing water before they are cooked or served."

35

Headline: E. coli at lake poses threat to humans and tourism

Publication: NST Date of publication: Dec 16, 2010 Section heading: Main Section Page number: 018 Byline / Author: By Jeong Chun Phuoc

I REFER to the comments by the Terengganu health director in the report "E.coli in Kenyir no threat to humans" (NST, Dec 8). The outbreak of any biological hazard is a serious public issue and must be dealt with swiftly by the Health Ministry. Several years ago, the same scenario arose in Penang, which saw a drastic drop in the number of tourists.

Due to the multiplier effect of E. coli if left untreated, the authorities must inform the public and issue travel advisories to correct any misperception. Tasik Kenyir is a major tourism attraction and, hence, any report, whether true or false, must be addressed promptly to avoid chaos and negative impact on the tourism industry. I don't believe that the lake is a closed ecosystem because it is rare that it can survive independently of the global ecosystem. Climate change is a clear example that contradicts the perception of a closed and stand-alone ecosystem. I understand that a study is underway to determine the impact of E. coli on aquaculture potential at and around the lake. Perhaps, the ministry should study its impact on human health as well. In the absence of any such report, it is understood that the impact of E. coli on human health is real, contrary to the opinion expressed by the Terengganu health director. Reports by the Centers for Disease Control and Prevention in the United States indicate that the negative impact of E. coli on human health is real and substantial. Therefore, it is imperative for the relevant ministries, including the Department of Environment, to work together to address the E. coli issue and any biological hazard to safeguard public health. JEONG CHUN PHUOC Shah Alam, Selangor

36

Headline: E.coli in Kenyir `no threat to humans' Publication: NST Date of publication: Dec 8, 2010 Section heading: Main Section Page number: 009 Byline / Author: By Satiman Jamin

KUALA TERENGGANU: The public should not be alarmed by reports of Escherichia coli (E.coli) bacteria found in Tasik Kenyir as its presence does not necessarily pose increased risks to human. Terengganu Health director Dr Nurdiyanah Hassan said the bacteria is commonly found in rivers and lakes. She said a certain level of E. coli in water is considered acceptable but declined to elaborate on what level is considered dangerous. "I cannot comment much as the study quoted by newspapers on the presence of E.coli in Tasik Kenyir was not conducted by the Health Department," she said, adding that there had been no request to conduct such a study.

The New Straits Times reported yesterday that E.coli had been found in Tasik Kenyir and the state government will need to spend more than RM100,000 to provide toilets with proper septic tanks to nip the problem at the source. State Tourism, Culture, Arts and Heritage committee chairman Datuk Abdul Rahin Mohd Said said the second edition of the Kenyir Cup Fishing Tournament, which started yesterday, will go on as planned as there was no threat to the participants. The E.coli presence is being studied in a research by Universiti Malaysia Terengganu Institute Of Tropical Aquaculture (Akuatrop). Akuatrop director Prof Dr Faizah Shahrom said the study is focused on E.coli population level and its effects on the aquaculture potential in Tasik Kenyir. She said although there were instances of the bacteria negatively affecting the fish population, especially in fish farms that dotted Tasik Kenyir, the nature of the study did not include its effects on humans. "We are more focused on the weather pattern. The study will document the E.coli population before, during and after the monsoon season," she said, adding that it would be at least another month before the study could be wrapped up. However, she commended the state government's move to curb E. coli by providing toilets with proper septic tanks for the houseboats in Tasik Kenyir. "As a closed ecosystem, contaminant build-up is a major concern in Kenyir. Therefore, prevention is the only option available and providing a proper sanitary system is a move in the right direction," she said. Terengganu Tourism Ministry director Ahmad Fathil Abd Ghani refused to comment on whether the reports could negatively affect tourist arrivals at Tasik Kenyir.

37

38

Headline: Kenyir fishing contest on despite E. coli risk

Publication: NST Date of publication: Dec 7, 2010 Section heading: Main Section Page number: 013

HULU TERENGGANU: The second edition of the Kenyir Cup at Tasik Kenyir will go on from tomorrow to Thursday despite a report that the lake had traces of the E. coli bacteria. State Tourism, Culture, Arts and Heritage Committee chairman Datuk Abdul Rahin Mohd Said said this was not a threat to participants of the freshwater fishing competition. Rahin said Universiti Malaysia Terengganu's report of the lake being contaminated was not a surprise as houseboats were allowed to operate without a proper sewerage system for the past 10 years. He said most houseboats were equipped with squatting toilet bowls and used the domestic flushing toilet system. "Waste from kitchen sinks, which may contain cooking oil and other food waste, are also flushed into the lake. "But 18 houseboats are equipped with septic tanks while 19 others will be fitted with them soon," he said at the Pengkalan Gawi jetty yesterday. The state government would spend about RM103,000 to install them, he said. He said future operators would be required to install proper waste and sewerage systems on the houseboats. "This is to ensure that Kenyir's sensitive ecosystem is protected." On the fishing event, he said more than 100 anglers, including 60 from China, would take part in the three-day competition, which was introduced last year to attract fishing enthusiasts from China and Hong Kong. "This is the final event for the Visit Terengganu Year 2010 and just like last year, RM50,000 in prize money will be handed out to winners of the competition. "We introduced a deep-sea fishing competition in Pulau Redang in 2008 but we found that most anglers preferred fishing at the lake."

Sumber : http://www.nstemedia.com.my Tarikh Akses : 26 Julai 2011

http://www.nstemedia.com.my/

RUJUKAN

RUJUKAN

Escherichia coli Available: http://www.ms.wikipedia.org/wiki/Escherichia_coli ( 15 Julai 2011) Fazilah Abdul Latif Modulation of translational fidelity by small subunit ribosomal RNA from Escherichia coli, 1989. Seng Hai Loo Genetik Studies Of Biodegradation Of Organophosphonates By Escherichia Coli, 1990. ELAEIS The International Journal Of Oil Palm Research And Development, 1992. Fakulti Sains Kesihatan Bersekutu, UKM. Keharmonian Penyelidikan Dan Amalan Dalam Sains Kesihatan, 29-30 April 2002. Nst Emedia. [Online]. Available: http://www.nstemedia.com.my (26 Julai 2011) Utusan Malaysia. [Online]. Available: http://utusanmalaysia.com.my (26 Julai 2011)

http://www.ms.wikipedia.org/wiki/Escherichia_coli

http://www.nstemedia.com.my/

http://utusanmalaysia.com.my/

sumber: jurnal majalah - repositori digital:...

Documents