spolni hormoni 3
DESCRIPTION
biochemTRANSCRIPT
Endokrini sistem
Hipotalamus/hipofiza/Pinealka
Tiroidea/Paratiroidea
TimusAdrenalkaPankreas
Bubreg
Testisi
Ovarije
Adrenal Cortex: Steroid Hormone Production
Figure 23-2: Synthesis pathways of steroid hormones
SPOLNI HORMONI
Testosteron=najvažniji androgen(testisi)
Estradiol(ovariji)=najvažniji estrogen., koncentracija varirakroz menstrualni ciklus, malo ga ima i u plazmi muškaraca
Progesteron=produkt ovarija i luči se nakon stvaranja corpusLuteum
U normalnoj plazmi niska i koncentracija testosterona( 50% potječe iz ovarija i 50% iz periferne konverzije Androstendiona i DHAS(dehidoapiandrosteron sulfata)-adrenalni korteks
*Estradiol i Testosteron (95%)cirkuliraju vezani za proteine plazme(globulin koji vezuju polne hormone)-SHBG.
*Koncentracija SHBG 2 puta veća kod žena od muškaraca. Primarno vezivanje za SHBG: DHEA,testosteron, estradiol Kada raste SHBG------rastu i estradiol sični efekti Pad SHBG------rast androgen efekata
*Drugi oblici: transkortin, albumin. Ovi proteini imaju nizak kapacitet vezivanja, a visok afinitet, za razliku od alfa 1 kiselog glikoproteina.
Testosteron: 65% SHBG, 30% albumin, 2% slobodni
*Za alfa 1 glikoprotein se veže progesteron
*Za albumine-svi steroidi
ANDROGENI HORMONI
Testosteron:
Procjena testikularne aktivnosti muškarcaKontrola nastupanja puberteta u dječakaDijagnoza i praćenje liječenja hiperandragonemije hirsutizma(žena),policistični ovariji
Raste testosteron kada je LH/FSH veće od 2
Androstendion-prekurzor u sintezi testosteronaDijagnoza: hiperandragonemija(hirsutizam), sindrom PCO
DHEAS
sinteza u kori nadbubrega, žene tokom trudnoćeDiferencijalna dijagnostika hirsutizma/virilizmaDijagnoza i praćenje PCO,KAH
DHEA-dehidroepiandrosteronDHEA-dehidroepiandrosteron
Androgen iz adrenalke
RIA za određivanje DHEA te konjugacioni produkt DHEA-S u plazmi
Esej često zamijenjen analizom 17 ketosteroida
Direktni RIA za DHEA i DHEA-S bez ekstrakcije
EDTA ili heparinizirana plazma, stabilnost 7 dana na sobnoj temp.
Vrijednost testa: Utvrđivanje funkcije adrenalke
SpermatogeneSpermatogenezaza
GnRHGnRH
hipofizahipofiza
TestiTestisisi
TestosteronTestosteron
HHiipotalamuspotalamus
LH/FSHLH/FSH
SpermatogeneSpermatogenezaza
InhibinInhibin
Serum FSH Serum FSH iliili Inhibin B Inhibin B
Serum FSHSerum FSH refle reflektiraktira spermatogene spermatogenezuzu
Serum Inhibin BSerum Inhibin B je marker za funkciju je marker za funkciju Sertoli Sertolijvih ćelija kod jvih ćelija kod muškaracamuškaraca, , i korelira obrnuto proporcionalno sai korelira obrnuto proporcionalno sa FSH) FSH)
Serum inhibin BSerum inhibin B je dobar indikator aktivne spermatogeneze i je dobar indikator aktivne spermatogeneze i korelira sa volumenom testisa i gustinom sperme.korelira sa volumenom testisa i gustinom sperme.(Klingmuller (Klingmuller 1997)1997)
Kombinirano mjerenjeKombinirano mjerenje FSH FSH ii Inhibin Inhibina je bolji indikator a je bolji indikator spermatogeneze nego bilo koji marker sam po sebi.spermatogeneze nego bilo koji marker sam po sebi. (Pierik 1998)(Pierik 1998)
Ovi testovi ne mogu napraviti razliku između individua sa Ovi testovi ne mogu napraviti razliku između individua sa normalnom spermom i onih u spermatogenom arrestu.normalnom spermom i onih u spermatogenom arrestu.
(Bohring 1999, Foresta 1999)(Bohring 1999, Foresta 1999)
SpermatogeneSpermatogenezaza
Leydig Leydig ćelijećelije
Sertoli Sertoli ćelijećelije
TTTT TT
TT
PrimarPrimarnini spermatoc spermatociitt
SeSekundarni spermatocitkundarni spermatocit
Okrugli Okrugli spermatidspermatidspermatozoaspermatozoa
Detekcija Detekcija SpermatogenSpermatogenezeeze
Konvencionalna analiza sjemene tekućineKonvencionalna analiza sjemene tekućine
Serum FSH Serum FSH ili ili inhibin Binhibin B
Veliki broj funkcionalnih testova-in vitro Veliki broj funkcionalnih testova-in vitro penetracija mukusapenetracija mukusa,, test penetracije sa test penetracije sa hamster hamster jajima i test post coitusjajima i test post coitus
Analiza sjemene tekućine
volumen > 2 ml pH 7.2 – 8 Koncentracija Spermatozoida > 20
miliona / ml Ukupni broj spermat > 40 milion/ ml pokretljivost > 25 % brza progresija i > 50 % sa progresijom prema
naprijed
Analiza sjemene tekućineAnaliza sjemene tekućine
Potrebno je ispitati barem dva uzorka u istoj Potrebno je ispitati barem dva uzorka u istoj laboratorijilaboratoriji
Putem masturbacije na Putem masturbacije na temp (15C to 38C) temp (15C to 38C) i brzo i brzo isporučiti u laboratorijuisporučiti u laboratoriju
WHO WHO kriterijikriteriji (1999): (1999): >20 million/ml >20 million/ml >40% progre>40% progresivna sivna
pokretljivostpokretljivost >30% normal>30% normalni oblicini oblici
Semen Analiza
Vitalnost > 75 % živi i < 25 % mrtvi Morfologija > 14 % normalni oblici
(Kruger’s) WBC < 1 million / ml Immunobead test < 20 % Mješani antiglobulin reakcija < 10 %
Endokrina evaluacija
Ako je abnormalna niska koncenracija spermatooida < 5milion / ml
Poremećaj seksualne funkcije Drugi klinički pokazatelji koji ukazuju na
specifičnu endokrinopatiju.
Post ejakulatna analiza urina
Indikacije:-Nizak volumen ejakulata-Nema ejakulata-Izbjeći ako postoje pokazatelji hipogonadizma
Uzroci niskog volumena / bez ejakulata:-Retrogradna ejakulacija-Nedostatna emisija-Obstrukcija ejakulacijskih vodova
Imaging muških genitalija
Transrektalno skaniranje isključuje obstrukcije na razini ejakulatornih duktusa
Izvodi se kod azo / oligospermičnih osoba sa niskim volumenom ejakulata i palpabilnom vasom.
Ako je teško ispitivanje, tada se radi skrotalna ultrasonografija
Specializirani klinički testovi na sjemenoj tekućini i spermi Leukociti u sjemenoj tek > 1 milion / ml
potreban tretman Penetracija Cervikalnog mukusa i post
coitus test Antisperm antitijela Test viabilnosti sperme (HOS test)
Endokrinologija seruma
Testosteron FSH, LH Funkcionalni testovi-tiroidna žlijezda prolaktin
Poremećaji na razini muških spolnih hormona
1.Deficit u produkciji sperme-mehanički nedostatak u transportu sperme, poremećaji na nivou funkcije spermija, blokiranje duktusa, droge –duhan, marihuana,alkohol azospermija, oligospermija
normalne razine hormona LH, FSH, Test
2.Smanjena sekrecija testosterona
Uzroci:• Deficit testisa-primarni poremećaji Hipergonadotropni hipogonadizam
• Defekt hipotalamus ili hipofiza(sekundarni. Poremećaji ili Hipogonadotropni hipogonadizam (nema oba gonadotropina ili samo LH)., generalizirani poremećaj na razini hipofize
3.Poremećaji vezani za seksualnu diferencijaciju muškaraca
Rijetki poremećaji
Produkcija testosterona poremećena, defekt produkcije Test 17 beta ketosteroid reduktaza nedostaje
Poremećaj- sindrom testikularne feminizacije-neaktivniandrogen receptori, nema odgovora ciljanih tkiva
•Uzroci primarnog hipogonadizma:
1. Kongenitalni defekti-Klinefelter sindrom ili ageneza testisa
2. Stečeni defekti uslijed infekcija testisa(zauške), trauma, iradijacija, citotoksični lijekovi Nalazi: pad Test, pad FSH, pad LH
• Uzroci sekundarnog hipogonadizma :a) Tumori hipofizeb) Poremećaji na razini hipotalamusa(Kallman sindrom) Opada testosteron, raste FSH, raste LH ?
Testovi:Dinamički testovi kao stimulacija sa GNRH utvrdjujeuzrok hipogonadizma kod nekih pacijenata
Kliničko stanje FSH LH Testosteron Prolaktin
Normalna N N N NSpermatogeneza
Hipogonadotropni Nizak Nizak Nizak Ngonadizam
Abnormalna Visok N N NSpermatogeneza
Complete Test Visok visok N/nizak NFailure
Prolaktin lučeći N/nizak N/nizak nizak visoktumor
N=normalan
DHEA-dehidroepiandrosteronDHEA-dehidroepiandrosteron
Androgen iz adrenalke
RIA za određivanje DHEA te konjugacioni produkt DHEA-S u plazmi
Esej često zamijenjen analizom 17 ketosteroida
Direktni RIA za DHEA i DHEA-S bez ekstrakcije
EDTA ili heparinizirana plazma, stabilnost 7 dana na sobnoj temp.
Vrijednost testa: Utvrđivanje funkcije adrenalke
Testosteron (RIA, EIA)Testosteron (RIA, EIA)
1. Imunoesej, prethodno dodati 8 anilino 1 naftalen sulfonat
Serum/heparinizirana plazma su uzorci(stabilnost 1 nedjelja na +4, 6 mjeseci na –20C. Najveće koncentracije su ujutro, opada 25% po noći.2. SHBG esej vezivanja specifični imunoesej3. Biodostupni test (slobodni + albumin vezani Selektivna precipitacija sa amonijum sulfatom za SHBG.4. Mjerenje prekurzora i metabolita (DHT, androstendion, DHEA)
Osa Osa HHiipotalampotalamusus--hipofiza-ovarije osahipofiza-ovarije osa• Potrebna za zdravo sazrijevanjePotrebna za zdravo sazrijevanje, c, cikličnostikličnost, , i reproduktivni reproduktivnuu
sposobnostsposobnost
• HHiipotalamuspotalamus: :
GnRH GnRH se oslabađa putemse oslabađa putem GnRH puls GnRH pulsnognog generator generatora svakih a svakih 60-60-90 min90 minuta.uta.
• HipofizaHipofiza: :
GnRH simulGnRH simuliraira gonadotrop gonadotropine da oslobodeine da oslobode FSH FSH ii LH LH
• OvariOvarijeve folikulejeve folikule::
PulsatilPulsatilno osobađanjeno osobađanje LH LH ii FSH FSH potrebno je za razvoj ovarijevih potrebno je za razvoj ovarijevih folikula koji luče spolne hormone potrebne za cikličnost u folikula koji luče spolne hormone potrebne za cikličnost u sklopu samog ciklusasklopu samog ciklusa
Ciklične promjene na nivou ženskih hormona reprodukcije
1 4 8 12 16 20 24 28
Days since onset of menses
FSH LH Estradiol Progesterone
Ovu
laci
ja
Početak ciklusa FSH-injiciranje rasta folikula zrela folikula-diferencijacija corpus luteumSredina ciklusa- lučenje LH-izazivanje ovulacije sekrecija PG i estradiolapriprema endometrija
NivoNivo E2, LH E2, LH ii P Progesterona u toku rogesterona u toku normalnog normalnog menstrualmenstrualnognog c ciklusaiklusa
11 12 1412 14 2121 28 28DaDani ciklusani ciklusa
E2E2 PP
LH/FSHLH/FSH
LHLH ProgesteronProgesteron
OvulacijaOvulacija
PrimarnePrimarnefolikulefolikule
OocitOocit
GraafijevaGraafijevafolikulafolikula
Rupturirana folikulaRupturirana folikula
Corpus Corpus luteumluteum
CorpusCorpusalbicansalbicans
SekundarnaSekundarnafolikulafolikula
GonadotropiniGonadotropini
FSH odgovoran za rani razvoj folikula u ovarijima ženaLH-ovulacija
Muškarac-FSH- odgovoran za spermatogenezuRIAIspitivanje infertilnosti, hipogonadizma
LH-ispitivanje ovulacijeRazvoj EIA (urin)Kućno testiranje(za detekciju ovulacije)
Određivanje i značaj FSH i LH
1.RIA metode
FSH može biti veoma nizak ispod 0,5 U/L na litar-loše lučenjeGnRH, hipogonadotropni hipogonadizam
FSH iznad 20 U , insuficijencija jajnika, menopauza
LH-ovulacijski rast iznad 20 IU/I
Policistični janici-raspon 13-25 IU/L, normalan FSH
Najvažniji gestagen Progesteron
U ciklusu maks lučenje u 21 om danuU lutealnoj fazi-potvrda ovulacije
U trudnoći sinteza mu raste nakon 8 nedjelja
Značaj:
1. Dokazivanje ovulacije2. Funkcija žutog tijela3. Defekt 20-22 liaze(ne sintetiše se PG) ili 17 alfa hidroksilaze(raste PG)
Progesteron-oslobađa ga corpus luteum nakon ovulacije
Uloga:priprema endometrija na trudnoću priprema dojki za laktaciju inaktivira se u jetri
Hiperprogesteronemija-nema mensturacije, vrlo rijetko
Hipoprogesteronemija- proizvodi variranja u samom ciklusui količini izlučene krviInfertilnost
Nedovoljna produkcija PG od strane corpus luteum –čest abortus u prvom trimestru.
Estradiol
Najpotentniji estrogenEsej kompetitivnog vezivanja., RIASkupljanje u određeno doba danaZa funkciju ovarija (tumori ovarija,adrenalki , testikularnog porijekla uzrokuju rast)
Raste u trudnoći, kod aplikacije gonadotropinaPad nivoa-primarna i sekundarna disfunkcija ovarija i adrenalki
ProgesteronUrinarni metabolit-pregnandiolRIAEvaluacija fertilnosti kod žena i detekcija ovulacije
Estradiol- najvažniji estrogen
a) Sekundarne karakteristike ženab) Stimulacija ili rast folikulac) Razvoj endometrijad) Razvoj falopijevih tubae) Razvoj vaginef) Stimulacija razvoja dojkig) Sazrijevanje spoljnjih genitalijah) Završetak linearnog rasta
Uloga: priprema uterusa za trudnoću i dojke za laktaciju
Dijagnostička važnost:
Ovulacija, funkcija jajnika, pad kon.-smanjena funkcija jajnikaNeplodnost, nastupanje puberteta kod djevojčica(ispod 36 umol/L prije)Funkcija jajnika prije menopauze
Poremećaji na razini ženskih spolnih hormona
*Subfertilnost, amenoreja i oligomenoreja (odsustvo krvarenja) primarni poremećaj(nema nikako krvarenja) sekundarni poremećaj-nema menzesa 6 mjeseci *Hirsutizam—rast dlaka sa muškom distribucijom uzroci inzulinska rezistencija povezana sa policističnim obolenjem ovarija
* Virilizam-abnormalan razvoj sekundarnih muških karakteristika(rast testosterona), uvećanje klitorisa, dubok glas atrofija dojke Čest uzrok-tumori ovarija,adrenalkiČest uzrok-tumori ovarija,adrenalki
Kada se kod žena dobije visok testosteron, veći od 2000ng po ml Kada se kod žena dobije visok testosteron, veći od 2000ng po ml ispitati SHBG, mispitati SHBG, mjeriti androstendion, DHA sulfat.jeriti androstendion, DHA sulfat.Razlog:sinteza ovog proteina u jetri depresirana visokom koncentracijom Razlog:sinteza ovog proteina u jetri depresirana visokom koncentracijom testosterona.testosterona.
Ako raste DHAS-adrenalka ima produkciju androgenaAko raste DHAS-adrenalka ima produkciju androgenaAko je uzrok ovarije-onda raste androstendionAko je uzrok ovarije-onda raste androstendion.
1.Abnormalnosti vezane za sekreciju estrogena se javljaju zbog primarnih poremećaja na nivou ovarija, sekundarno vezano za iregularnosti u produkciji FSH ili pak oboje.
•manifestacija: poremećaji ciklusa, odgođen pubertet ili oboje, infertilnost
2.Hiperstrinizam-Kliničke manifestacije ovise od starosti pacijenta., iregularanMenzes, infertilnost, uterina krvarenja
3. Prerani pubertet
4. Iregularnosti na nivou menzesa i infertilnost
Klasični poremećaji kod žena
INFERTILNOSTINFERTILNOST
InfertilInfertilnost je nesposobnost para nost je nesposobnost para da ima potomstvo nda ima potomstvo naakon jednu kon jednu godinu seksualnog života bez godinu seksualnog života bez kontracepcijekontracepcije
U 6U 6-o-om mjesecu intrauterinog m mjesecu intrauterinog života:života: 6 milion 6 miliona a ovariovarijevih jevih folfolikulaikula
Pri rođenju:oko dva miliona preživiPri rođenju:oko dva miliona preživi
U menopauziU menopauzi:: 400,000 viab 400,000 viabilnih folikulailnih folikula
Kod zdrave žene koja nikad ne postane trudna i koja Kod zdrave žene koja nikad ne postane trudna i koja ima ovulacije 13 puta godišnje u starosnoj dobi od ima ovulacije 13 puta godišnje u starosnoj dobi od 15-50 godina starosti15-50 godina starosti:: manje odmanje od 500 o 500 odd originalnih 6 originalnih 6 miliona folikula dođe do ovulacije.miliona folikula dođe do ovulacije.
Uzroci subfertilnosti kod žena
1.Povećana sekrecija ANDROGENA(OVARIJE) KAO ODGOVOR NA INZULINSKU REZISTENCIJU
2.Primarno oštećenje ovarija(rastu gonadotropini, opada estradiol)
3.Hiperprolaktinemija
4.Bolest policističnih ovarija(raste LH, normalan FSH), estradiolEvidentan hirsutizam(raste testosteron i konc sHBG)
5.Hipogonadotropni hipogonadizam (rijedak uzrok tumor hipofize)
Subfertilnost -MUŠKARCI:
1. Primarni testikularni nedostatak(oštećene tubule i intersticij, raste FSH, raste LH, opada testosteron)
2 Obolenja hipotalamus-hipofiza(opada testosteron., niski ili normalni gonadotropini)
3. Hiperprolaktinemija
Faktori kod muškarcaFaktori kod muškarca
Analiza sjemene tekućineAnaliza sjemene tekućine
Serum Testosteron, LH, Serum Testosteron, LH, FSHFSH ii (? Prola (? Prolakktin)tin)
Na primjerNa primjer: Histor: Historija zauški ija zauški // kriptohidizam kriptohidizam
TestosteronTestosteron 18 nmol/L18 nmol/L
LHLH 3.5 IU/L3.5 IU/L
FSHFSH 2323 IU/L IU/L
Ispitivanje ovulacije
Zadebljanje mukisa cerviksa Regularan menstrualni ciklus mid lutealni serum progesteron > 30
nmol/L Ultrazvučni monitoring folikulogeneze i
ovulacije Bazalna tjelesna temperatura Detekcija LH u urinu
Endokrini profil
Bazno linijski profil prva tri dana menstrualnog ciklusa
Gonadotropini (FSH, LH) Androgeni Funkcija tiroideje Prolaktin Estrogen Test tolerancije na glukozu
FFaktori kod ženeaktori kod žene
Disfunkcija ovarija Disfunkcija ovarija /PCOS:/PCOS:
Serum LH, FSH, E2, androgenSerum LH, FSH, E2, androgenii, SHBG, SHBG
HHiiperprolaperprolaktinemiaktinemia::
Serum prolaSerum prolakktintin
Poremećaji Poremećaji TTiroidne žlijezdeiroidne žlijezde::
serum TSHserum TSH
Oligomenorea/amenoreaOligomenorea/amenorea
IIspitivanje infertilnostispitivanje infertilnosti
Serum LH/FSH/E2/ Serum LH/FSH/E2/ testosteron/17-OHPtestosteron/17-OHP
Serum prolaSerum prolakktintin
Serum TSHSerum TSH
RegularRegularni ciklusni ciklus Amenorea/oligoAmenorea/oligo
Serum progesteron Serum progesteron za za detekcijudetekciju ovula ovulacijecije
HHisterografija za isterografija za potenciju tubusapotenciju tubusa
Analiza sjemene Analiza sjemene
tekućinetekućine
HistorHistorija i ispitivanjeija i ispitivanje
RegularRegularanan c ciklusiklus Oligo/amenoreaOligo/amenorea
DaDann 21 progesteron 21 progesteron
>30 nmol/L>30 nmol/L <30 nmol/L<30 nmol/L
NormalNormalnana lutealna lutealna fazafaza
? Luteal? Lutealnana fazafazaInsufInsuficijencijaicijencija
S. ProlaS. ProlakktintinU/SU/SEndometrialEndometrialnanabiopsbiopsijaija
sasaHirsutismHirsutismomom
bezbezHirsutismHirsutismaa
S. TestosteronS. TestosteronS. DHEA-SS. DHEA-SS. 17-OHPS. 17-OHPU. U. Slobodni kSlobodni kortiortizzolol
S. FSH/LHS. FSH/LHS. E2S. E2S. TSHS. TSHS. prolaS. prolakktintin
PROMJENE NAKON UZIMANJA ORALNIH KONTRACEPTIVA
1.75 % zena razvija netoleranciju na ugljene hidrate, dijabetesInduciran steroidima
2.za 20% rast TG I VLDL, mali porast LDL holesterola I pad HDLHolesterola, najveci utjecaj estrogena, indukcija hepatocelularnihEnzima/promjene u sastavu zuci
3.Promjene koncentracije proteina, pad albumina,rast nosaca,povecana agregacija trombocita
4.Promjene koncentracije kortikosteroida i hormona tiroidejeRast za 50%
FUNKCIJA JETRE
1.Holestatski efekti/40% promjene BSP test, raste ALP, GGT
2.Idiosinkratska zutica/efekat progestagena
3, Rast transaminaza
4.Rast zeljeza, TIBC, rast transferina/progesteronska komponenta
Trudnoća= stanje razvoja embria ili fetusa u organizmu žene
Biohemijske promjene u trudnoći :
1.Zadržavanje tekućine/ redukcija plazma natrija,i ureje
Ekspanzija ECF/opadaju koncentracije albumina i ukupnih proteina, uticaj na klirens proteina, brzinu glomerularne filtracije, opadaju kreatinin i ureja., prisustvo intermitentne glikozurije zbog redukcije bubrežnog praga za glukozu)(javljaju se humani placentalni laktogen, specifični beta glikoprotein trudnoće
1a. Povećana produkcija proteina koji egzistiraju na nivou obje cirkulacije(Estrogen, progesteron, rana trudnoća-nivo održavanja PG, u napredovaloj trudnoći placenta izvor progesterona)
2.Raste tiroksin, ali urinarna ekskrecija T4 je normalna, rast TBG, opada FT4 , rast ukupnih kortikosteroida, rast kortizola
3. Rast placentalne ALP 2 do 3 puta, raste aktivnost oksicotinaze(enzim sličan cistin aminopeptidazi)
4. Željezo.,stupanj promjena ovistan o profilaksi
5.Metabolizam masti-rastu TG, holesterol, fosfolipidi, masne kiseline
Patologija koja se asocira sa trudnoćom:Patologija koja se asocira sa trudnoćom:
a) Dijabetična trudnoća- asocira se sa povećanim rizikom mortaliteta fetusa•Hiperglikemija kod majke-Promocija hiperinsulinizma na nivou fetusa(in utero manifestacija povećan rast, postnatalno dolazi do neonatalne hipoglikemije)b) Hipertenzija-povećan rizik insuficijencije placente, retardacijafetalnog intrauterinog rasta.Eklampsija-(druga polovina trudnoće)konvulzije, hipertenzija, poremećena funkcija bubregakoja uključuje proteinuriju
c) Obstetrička holestaza-rast žučnih kiselina seruma beba intrauterina smrt nakon 36 nedjeljad) Korištenje lijekova-posebno anti konvulzivi.
Placenta
Luči proteinske hormone, estrogen i PG
Biohemijski testovi imaju ograničenu vrijednost u monitoringu razvoja fetusa
1.HCG(humani korioni gonadotropin)
Testiranje na beta podjedinicu, danas na intaktan oblikBeta podjedinica-analitika(pacijenti sa HCG neoplazmama)
Intaktan HCG-detekcija trudnoće(1-2 dana nakon fertilizacije)
Raste do 70-90 og dana trudnoće, opada za 10-15% kasnije
Određivanje HCG korisno kod:
Sekrecija HCG održava produkciju PG od strane C.luteum u ranoj fazi trudnoće
HCG stimulira:
a) Razvoj gonada fetusab) Sintezu androgena u testisima fetusa
• Dijagnoza ektopične trudnoće • Predviđanje spontanog abortusa • Detekcija više trudnoća odjednom • Detekcija u monitoringu HCG produkujućih tumora, • Praćenje rasta, tretmana
Imunohemija
1. Ukupni HCG
1. Intaktni HCG(1 At specifično za alfa lanac) (At specifično za beta lanac)
3. Slobodna beta podjedinica (At specifično za epitop na beta lancu)
Određivanje beta HCG
1. Test aglutinacije-inhibicije(na staklu ili epruveti)
Princip:Eritrociti ovce presvučeni sa HCG pomiješaju se sa uzorkomReakcija sa HCG At____ posljedica aglutinacija inhibicija
Tehnika neosjetljiva-lažno neg.rezProblemi: lažno poz reakcija: proteini, eritrociti, leukociti, bakterije
2. Imunoenzimatski koncentracijski esej-sendvič tipHCG u uzorku uhvaćen od prvog At se vezuje za čvrstu fazuDodaje se detektor antitijelo., sendvič čvrsta tehnika
3.RIA HCG------vezivanje za anti HCG, vrlo osjetljiv
4. Imunoenzimometrijska tehnika(Elisa), HCG uzorak + HCG At vezano za čvrstu fazu, anti HCG detektor At(E*)-----sendvič
HUMANI PLACENTALNI LAKTOGEN(HPL)(humani korioni somatotropin)
Strukturalno i imunološki sličan hormonu rasta i prolaktinuRaste do 37 nedjelje trudnoće
Djeluje sa HCG u stimulaciji sinteze estrogena i PG putemcorpus lutum
Stimulira razvoj mliječne žlijezde, ima somatotropno dejstvo
Raste sa gestacijom, korelira sa masom placente
Određivanje: RIA serum
SteroidiSteroidi
PRODUKCIJA ESTRIOLA
Fetus Placenta Majka
Holesterol Holesterol <<--------—— Holesterol Holesterol
Pregnenolon Pregnenolon <<--------—— Pregnenolon --------- Pregnenolon --------->>
<<--------—— Progesteron --------- Progesteron --------->>
DHEA-S ---------DHEA-S --------->> DHEAS DHEAS <<--------—— Estradiol/estron--------- Estradiol/estron--------->>
16 hidroksi DHEAS ---------16 hidroksi DHEAS --------->> 16 hidroksi DHEAS 16 hidroksi DHEAS <<--------—— Estriol ---------Estriol --------->>
• Slab estrogen, 100-i dio potencije estradiola, deseti dio potencije estrona po jedinici težine,osnovni estrogen u urinu trudnica
• Uloga:Obezbjeđivanje optimalnog protoka u gravidnom uterusu
• Evaluacija fetoplacentalne jedinice kod majki dijabetičara- pad estriola od 40 %- predikcija fetalnog distresa
• Identifikacija postdatumske gestacije.dijete rizik od razvoja sindroma postzrelosti, pad nakon 40 nedjelje gestacije
• Dijagnoza intrauterine retardacije rasta- nivo estriola nizak
• Refleksija fetoplacentalne jedinice
• Dobrobit fetusa
ESTRIOLESTRIOL
Estriol metaboliti* PLAZMA URIN
Nekonjugirani estriol 0% 9%
Estriol 3 sulfat 4% 15%
Estriol 3 glukuronid 13% 15%
Estriol 16 glukuronid 73 % 21%
Estriol 3 sulfat-16 glukuronid 10 % 40%
Analitika estriola(urin)
1.Reakcija po Koberu (spektrofotometrija)
Određuju se ukupni estrogeni., uzorak zagrijati u prisustvu H2SO4 i hidrohinona, stvaranje ljubičasto obojenog hromogenana 514 nm
Hidroliziran urin dobar uzorak, estrogeni ekstrakcija u fenil etil acetatu, Alen korekcija na 472 i 556 nm., ekstrakcijahromofora u hloroformu
2.Ittrich metoda*fluorimetrija-ukupni estrogeni
Ekstrakcija hromofora, eksitacija na 530 nm, emisija 550 nmŽuto zelena fluorescencija
3.gasno tečna hromatografija-koristi se plameni jonizacionidetektor., hromatografija isparljivih derivata sa N2 mobilnomFazom.,ovom prethodi hidroliza slobodnog estriola
4.HPLC-uv ili fluorescentna detekcijaEstriol-hromatografija na obrnutoj fazi C18., detekcija 280 nmFluorescencija 220 nm, emisija 608 nm-dansil derivati
5.RIA-esej kompetitivnog vezivanja 3H ili 125I estriol,Oslobađanje od vezanog biljega, separacija drugim At
6.EIA –esej kompetitivnog vezivanja., estriol enzim konjugatSepariran od slobodnog enzima, enzimatska reakcija 463 nm
Estriol-urin
Plazma ESTRIOL-mjera fetoplacentalne jedinice
•Raste sa trudnoćom• Nalazi se pod djelovanjem hepatalne i renalne funkcije majke• Prati se kod trudnoća sa visokim stepenom rizičnosti• Pad od 40-50 % , rani znak fetoplacentalnog distresa
ANALITIKA:
1.RIA-slobodni i ukupni estriol (česta) Antibiotici interferiraju sa procedurom
2.EIA-rijetka
3.HPLC –elektrohemijska detekcija
Ekstrahirani nekonjugirani estriol se hromatografira hromatografijom na obrnutoj fazi, detekcija elektrohemijskom detekcijom
Alfa fetoprotein (AFP)
Produkcija hepatociti, fetusRaste do 32 nedjelje trudnoće, strukturalno sličan albuminuPojavljuje se u urinu fetusa, prisutan u amnionskoj tekućini i krvi majke
Dijagnostički značaj: a)Otvoreni defekti neuralne cijevi i defekti ventralnog zida (anencefalija, spina bifida)
b)Down sindrom , mrtvorođenčad, bebe malih težina
Uporedo raditi AFP majke-voditi računa o godinama starosti Majke, rasi te prisustvu dijabetesa tipa I(MSAFP 10% veći kod crnkinja, dijabetičari 20-40% niži)
Mogućnost nastanka hromozomskih aberacijaNizak MSAFP korelira sa rizikom za Down sindrom
Najčešći poremećaji- abnormalnosti na razini fetusa:
1. Fetalni distresPad estriola i HPL-a u urinu i serumu majke, danas zamjena Ultrazvuk
2. Erithroblastosis fetalisObolenje izazvano inkompatibilnošću krvi djeteta i majkeProdukcija At majke orijentiranih prema površinskim Ag eritrocita fetusaPosljedice: destrukcija, anemija, opterećeno fetalno srceStimulacija hematopoeze u koštanoj srži fetusa, gušterače i jetreRazaranje ćelija jetreSmanjena sinteza albumina, smanjen onhotski pritisakStupanj destrukcije se određuje preko razine bilirubina u amnionskoj
tekućini
3.Gestacioni dijabetesMakrozomija(veliki fetus u fazi gestacije)Uzrok: hipersekrecija inzulina u fetusuDetekcija: mjerenje inzulina u amnionskoj tekućini
•Defekti neuralne cijeviVelike koncentracije AFP-a u amnionskoj tekućini u 95 % slučajeva (16 nedjeljA GESTACIJE)
DALJA IDENTIFIKACIJA: Ultrazvuk, amniocentezaAko se dijagnoza postavi prije 20 nedjelje trudnoće, zaustaviti trudnoću!
Mjerenje aktivnosti AChE kada fetus ima ovaj defekt
•Skrining na Down sindrom-amniocenteza
Opada Majčin AFP i protein asociran sa trudnoćomRaste HCGRaste nekonjugirani estriol
Ostale analize u amnionskoj tekućini
1. Bilirubin-ispitivanje rizika po fetus Rh inkompatibilnost
Posljedica-hemoliza, anemija,prevelika sinteza bilirubina
Nekonjugirani bilirubin-max 450 nm u amnionskoj tekućiniRast ovog max-erithroblastosis fatalis
Amnionska tekućina-amniocenteza-ubacivanje igle kroz abdominalni i uterini zid majke u amnionsku šupljinu
22 nedjelja gestacije(historijat hemolitičke bolesti ili pak Serološka evidencijainkompatibilnostiSkanirati uzorke 350-750 nmAko poraste A 450, a stariji je fetus, ozbiljnije je obolenjePrisustvo mekonija-ekstremni fetalni distres (350-400 nm)
Masti u surfaktantu
Plućni surfaktant: Lecitin(fosfatidil holin) i fosfatidil glicerol (PG)Skladište se u kasnoj fazi fetalnog razvoja
Dijagn. značaj:evaluacija zrelosti fetalnih pluća, prevencija respiratornogrespiratornogDistress sindroma)Distress sindroma)
Surfaktant sa PG ima veće stabilizacijske osobine-prisustvo značizrela pluća
Mjerenje stabilnosti pjene, površinskog napona, mikroviskoznosti
Kvalitativni esej:test stabilnosti pjene
(Fosfolipidi surfaktanta grade stabilne mjehuriće u prisustvu etanola)
Priprema amnionske tekučine za mjerenje L/S
Centrifugiranje pri nižim brzinama, supernatant držati na +4 ili zaleditiDio fosfolipida izgubljen u taloguIzbjegavati rad sa uzorcima kontaminiranim sa krvlju(rastu fosfolipidi)Nalaz validan ako je prisutan PG
Određivanje:
Stabilnost pjene(test miješanja)-stvaranje mjehurića u prisustvu etanola
Površinska tenzija
Mikroviskozitet tekućine
Interference: krv,mekonij , vaginalni sekreti
Različit spektar obolenja:
Neonatalni problemiEndokrinološkiGastroenterološkiUrođene manePoremećaji na nivou DNK
Neonatalni:
Bebe male težineŽuticaHipoglikemijaHipokalcemijaNeonatalni skrining
Endokrinološki poremećaji
Nemogućnost rastaNemogućnost rastaOdgođeni pubertetOdgođeni pubertetPoremećaji na nivou adrenalkePoremećaji na nivou adrenalkePoremećaji na nivou tiroidne žlijezdePoremećaji na nivou tiroidne žlijezdePoremećaji na nivou paratiroidne žlijezdePoremećaji na nivou paratiroidne žlijezdeDijabetes tipa II kod tinejđeraDijabetes tipa II kod tinejđera
Gastroenterološki poremećajiGastroenterološki poremećaji
Cistična fibrozaCistična fibrozaNetolerancija proteinaNetolerancija proteinaNetolerancija na ugljene hidrateNetolerancija na ugljene hidrateNasljedni poremećaji transportaNasljedni poremećaji transporta
Problemi sa neonatusima
1.Problem rađanja djece manje tjelesne mase2. Žutica3.Hipoglikemija4.Hipokalcemija(Mg)5.Neonatalni skrining6.Dehidratacija
•Nezrelost neonatalne jetre-niska aktivnost enzima detoksikacije
Rizici za razvoj kernikterusa: spol, način poroda, ABO inkompatibilnost, težina , gestaciona starost
•Hipoglikemija
Ozbiljna hipoglikemija-permanentno oštećenje mozga kod djeceNajčešće se javlja kod beba malih za svoju starosnu dob, majki dijabetičarki
Kod prijevremeno rođene djece hipoglikemija na razini ispod 1,4 mmol/Lprvih nedjelja života
Vrijednost konc glukoze ispod 1,9 mmol/L -indikator ozbiljne hipoglikemije za normalno rođenu djecu u prva tri dana života
Nakon ovog perioda hipoglikemija se definira kao ( 2,2-2,5 mmol/L), počinjetretman kod novorođenčadiTest na ketone, ali isti nije pozitivan kod hiperinsulinizma
Dehidratacija
Ukupna tjelesna voda kod bebe- 75% tj .masePrvih nedjelja nakon rođenja kontrakcija ECF-a-bebe gube na težini, poslije dobivaju
Funkcija bubrežnih tubula nije adekvatnaSposobnost koncentriranja urina lošaMaksimum osmolalitet urina = 600 mmol/LReapsorpcija bikarbonata i glukoze reducirana
Posljedica: Niske koncentracije bikarbonata, glikozurija
Hidratacija se ispituje preko mjerenja tj. mase
•Nivo kalcijuma
Prilikom rođenja, nivo kalcijuma je 1,75-2,00 mmol/L u prvoj nedjeljiKasna neonatalna hipokalcemija između 4-10 dana starosti Uzrok: Vit D kod majke nizak, nizak Mg-nekad uzrok hiperfosfatemija, problem bubreg
Rast vrijednosti kod odraslih nakon 1,5 do 2 godine starosti
Pad kalcijuma manje izražen kod djece dijabetičnih majkiPrijevremeno rođena djeca-depresija u razini kalcijuma serumaPotencijalno: neonatalna tetanija-iritabilnost, konvulzije
Neonatalni rahitis
Hipokalcemija,defektna mineralizacija kostiju, rast aktivnosti alkalne fosfatazeIzražena kod prematurusa uslijed povećanih potreba za kalcijumom, fosfatom, vit DRijetko uzrok konvulzijaHipomagnezemija-uzrok neonatalnih konvulzija, uvijek vezana za kalcijDefekt u crijevnoj apsorbciji magnezijumaNetretirana djeca- opadne do 0,1 mmol
•CK(kreatin kinaza)Carski rez- bebe niži CK MM, CK MB od transvaginalnihRaste aktivnost enzima i rast može trajati do 10 dana
•Potencijalna nutriciona ispitivanjaAlbumini-mjera hepatalne zrelosti,marker nutricionog statusaŽeljezo-brzo se mijenja u prvoj godini životaHemoglobinLipoproteini-mjera nutricionog statusa i genetskog rizika za razvojem koronarnog obolenja arterija
Praktični problemi prilikom rukovanja sa uzorcima ove populacije:
Uzorkovanje Volumen Tip uzorka Interferencije Instrumenti
Problemi kod uzorkovanja
Kapilarna krv Volumen Evaporacija Hemoliza Lipemija Bilirubin Tip antikoagulansa
Hematokrit neonatus i mala beba
Efekti evaporacije uzorak 0.1 mL
Referentni opseg/Interpretacija
Starost/spolUticaj majkeNačin porodaNezrelostNačin prehraneRastZrelost organa
Starosne grupe:
•Neonatusi- manje od mjesec•Beba- 1 mjesec do 2 godine•Dijete- 2-12 godina•Odraslo dijete 12-18 godina
Plazma fosfat
Problemi sa interpretacijom rezultata-fosfat
oFosfat kod malih beba pada u okvire referentnih vrijednosti za odrasle
oRezultati normalni, ali de facto niski za tu dob
oKod djeteta registrovan rahitis nakon par mjeseci
Promjene u koncentraciji hormona tiroideje kod normalnih
neonatusa
Beba rođena majci sa dijagnozomhipotiroidizma14.06 2005
15.06 TSH 34,8 mU/L FT4 27,3 pmol/L
Majci rečeno da su rezultati nenormalni
21.06 2005-neonatalni skrining na suhoj mrlji
3 mU/L-rezultat normalan
IgM
Uticaj majke
AFP (kU/L)
-10 ned 38910-2034000-8 ned 15960-988900-6 ned 6548-4808004 ned 2686-2338002 ned 1102-1137000 452-552702 185-268704 76-130705 31-63538 13-308910 5-150212 Ispod 4 do 73014 Ispod 4 do 35516 Ispod 4 do 17318 Ispod 4 do 8420 Ispod 4 do 41 više od 8 mjeseci ispod 10
Problem zrelosti
Način prehrane
Rast
Zrelost organa 8 nedjelja- 200 nefronaEmbriogeneza bubrega
20 nedjelja-350,000 nefrona 28 nedjelja-766000 nefrona Rođenje 822,ooo nefronaBrzina glom. Filtracije proporcionalna ukupnoj tjelesnoj površiniod treće godine do srednjih godinaRačuna se na bazi konc plazma kreatinina ili za tačnije mjerenje koristiti Cr(51) EDTA ili klirens inulina
GFR=kx Ht/Pcr ht=visinaK=30 kod prijevremeno rođenih bebaK=40 kod beba rođenih na vrijeme
Problem: vremenski skupljanje
Mjerenja zasnovana na ranim jutarnjim uzorcima i slučajnim UzorcimaVezati ekskreciju za klirens kreatininaOmjer protein/kreatinin konstantan od 3-16 godina starosti,bezSpolnih razlikaNe može se precizirati vremenski slijed uzimanja uzoraka
Analitičari imaju problem malog volumena uzorakaTeško automatizirati procesTeže raditiManje opterećenje, ali treba brz odgovorČesto potrebno prisustvo roditelja
Organizacija laboratorije
Odjel za uzimanje uzorakaOpća pedijatrijska bolnicaNeonatalni skrinigUrođene metaboličke maneDNK laboratorija
Servis neonatalnog skrininga:
•Fenil ketonurija•Kongenitalni hipotiroidizam•Srpasta anemija•+- cistična fibroza•+-MCAD
Specijalizirna tehnologija: tandem Masena spektrometrija