UNIVERSIDADE PRESIDENTE ANTNIO CARLOS

RFLPRestriction Fragment Lenght Polymorphism

Juiz de Fora, 09 de dezembro de 2011.

Grupo

Brbara Tune; Carlos Eduardo Cardoso; Marina Cognalato; Poliane Lopes.

Introduo A tcnica de RFLP foi descrita inicialmete por Botstein em 1980; RFLP um dos muitos tipos de marcadores moleculares, e so capazes de detectar variaes em sequncias de DNA de 4 a 8 pares de base, reconhecidas por enzimas de restrio, capazes de clivar DNA por reconhecimento de sequncias.

Marcadores Genticos

Qualquer caracterstica morfolgica ou molecular que diferencia indivduos, e que seja facilmente detectvel um potencial marcador gentico.

Marcadores Genticos

Marcadores moleculares

Morfolgicos

Bioqumicos

DNA

Marcadores Dominantes

Marcadores Codominantes

RFLP

So fragmentos de DNA obtidos de enzimas de restrio, separados por eletroforese e visualizados por meio de hibridizaes com sondas marcadas com radioatividade ou fluorescncia.

Etapas para aquisio de RFLPs Extrao do DNA; Digesto com endonucleases de restrio (cortam a molcula de DNA atravs do reconhecimento de sequncias nucleotdicas especficas); Eletroforese; Transferncia dos fragmentos para uma membrana de nitrocelulose; Hibridizao dos fragmentos com sondas marcadas; Visualizao dos polimorfismos atravs de autoradiografia.

Base Genticas dos Marcadores RFLPs

O polimorfismo observado na tcnica de RFLP ocorre porque o DNA de indivduos geneticamente distintos difere na sequncia de nucleotdeos ao longo da fita.

Interpretao

Autoradiografia de uma membrana de hibridizao revelando marcadores RFLP. Indivduos homozigotos para o alelo A1(3,5,6,7,8,9) e homozigotos para os alelos A2(1,2,4).

Vantagens e Desvantagens Reprodutvel; Marcadores co-dominantes; Simples.

Trabalhoso; Caro; Uso de sondas radioativa.

Aplicaes Mapeamento do Genoma; Genotipagem; Cincia forense; Teste de paternidade; Deteco de doenas hereditrias, etc.

Anlise do RFLP para a Fibrose Cstica

PCR-RFLP (AFLP- Amplified Fragment Length Polymorphisms) Isolamento de DNA suficiente para a anlise RFLP demorado e trabalhoso. No entanto, a PCR pode ser usado para amplificar pequenas quantidades de DNA, geralmente em 2-3 horas, para os nveis exigidos para a anlise de RFLP. Portanto,mais amostras podem ser analisadas em um curto tempo.

Artigo: Identification of a criminal by DNA typing in a rape case in Rio de Janeiro, Brazil.A identificao humana por DNA uma ferramenta poderosa para casos de paternidade, assim como investigao criminal pela tipagem de evidncias biolgicas coletadas em cenas de crime e identificao de restos mortais.

OBJETIVO: Identificao de criminoso em caso de estupro com quatro suspeitos. PARTICIPANTES: Sangue de quatro suspeitos e vtima e pele do feto. PROCEDIMENTOS: Reao em cadeia da polimerase (PCR) e polimorfismo de tamanho de fragmentos de restrio (RFLP).

RESULTADOS: Trs suspeitos foram excludos e um suspeito foi includo como pai biolgico do feto. Um teste complementar com 3 loci VNTR tambm foi realizado. O suspeito foi includo como pai biolgico apresentando ndice de Paternidade de 412.860 (probabilidade de paternidade: 99,9997%).

ConclusoO desenvolvimento de tcnicas baseadas na hibridizao de sequncias de DNA abriu novas opes para o estudo de variaes . A descoberta de enzimas de restrio, a possibilidade de transferncia de fragmentos de DNA para membranas e o desenvolvimento de novos mtodos de marcao radioativa e luminescente para fins de hibridizao de fragmentos de DNA determinaram o emprego eficiente de RFLP em anlise gentica.

Bibliografia Artigo: GOES, Andra Carla de Souza et al . Identification of a criminal by DNA typing in a rape case in Rio de Janeiro, Brazil. Sao Paulo Med. J., So Paulo, v. 120, n. 3, maio 2002 . Disponvel em Livro: Marcadores Genticos Moleculares Fbio Gelape Faleiro (2007); Livro: Introduo ao Uso de Marcadores Moleculares em Anlise Gentica Mrcio Elias Ferreira & Drio Grattapaglia (1996); Livro: Marcadores Moleculares em Plantas Sandra Milach (1998); Site: http://www.e-escola.pt/biologia; Site: http://www.ncbi.nlm.nih.gov; Site: http://www.sciencedirect.com/

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