rezumat teza 25sep

8/17/2019 Rezumat Teza 25sep

1/38

UNIVERSITATEA DIN BUCUREŞTI

Facultatea de Chimie

BIOSENSORI-

INSTRUMENTE ANALITICE UTILIZATE ÎN

LABORATORUL MEDICAL

REZUMATUL TEZEI DE DOCTORAT

Conducător ştiinţific,

Profesor Dr. Vsi!e M"eru

Doctornd,

E!en Rodic Ionescu

Bucureşti, 2007


2/38

CURINS

INTRODUCERE!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!"

#. $#. $E%$OR E%$OR AMPEROMETRICAMPEROMETRIC PE%TRUPE%TRU DETECTAREADETECTAREA PROTEAZELOR PROTEAZELOR ....................................................&

3.5. Rezultate şi discuţii...............................................................................................................7 #.'.(. Crcteri)re e!ectroc*i+ic e!ectrodu!ui +odifict cu -o!/-iro!0!c*i!+oniu+102o3...........................................................................................................................................&#.'.#. Perfor+nţe!e n!itice !e 4iosensoru!ui -entru deter+inre tri-sinei.......................5

6. D6. DETECTAREAETECTAREA AMPEROMETRIC7AMPEROMETRIC7 AA CCAD%0AD%0ULUIULUI DERIVATDERIVAT DI%DI% VIRU$ULVIRU$UL % %ILEILE 88E$TE$T 9OLO$I%D9OLO$I%D ELECTROZIELECTROZI MODI9ICA:IMODI9ICA:I CUCU 9ILMUL9ILMUL DEDE POLIPIROLPOLIPIROL..........................................................................(;

4.1. Introducere..........................................................................................................................106.


3/38

. oncluzii..............................................................................................................................!5. C. COMPARAREAOMPARAREA AA TREITREI CO%9I2URA:IICO%9I2URA:II DEDE IMU%O$E%$ORIIMU%O$E%$ORI E%ZIMATICIE%ZIMATICI PE%TRUPE%TRU DETECTAREADETECTAREA A%TICORPULUIA%TICORPULUI A%TIA%TI00TOBI%ATOBI%A =OLEREI=OLEREI...........................................................................................


4/38

INTRODUCERE

@cterii!e, Hirusuri!e şi !te +icro0or"nis+e sunt !r" rs-ndite n ntur şi +ediu! nconurtor.

@cterii!e -to"ene se "sesc n -+Jnt, n -e, n trctu! intestin! ! ni+!e!or su n -e!e cont+inte

cu deşeuri fec!e. O -erson -ort n +edie +i +u!t de ('; de ti-uri de 4cterii cre -ot e3ist tJt n

interioru! cJt şi ! e3terioru! cor-u!ui u+n. Moritte +icroor"nis+e!or desfşor ctiHitţi esenţi!e

n ntur, fiind n nu+r +re 4enefice de)Ho!trii -!nte!or şi ni+!e!or.

De-istre r-id şi s-ecific +icro0or"nis+e!or /4cterii, Hirusuri1 este stfe! esenţi! n

di"nosticre, trtre şi -reHenire eficient unei infecţii u+ne. n cest direcţie, +etode!e de

!4ortor conHenţion!e deşi sunt eficiente necesit cJteH ore -Jn ! o4ţinere re)u!tte!or şi un -erson!

c!ifict n +icro4io!o"ie.

n +od curent -entru identificre +icroo"nis+e!or sunt fo!osite teste!e i+uno!o"ice c

i+unof!uorescenţ, "!utinre -e -!c şi teste!e en)i+tice ELI$A ce u ! 4) +onitori)re recţiiei

nticor-0nti"en K>'. Aceste teste -re)int o sensi4i!itte şi o s-ecificitte +odert, necesitJnd cJteH ore

de -re-re şi ce! -uţin (;> +icroor"nis+e -entru identificre. Dc cest nu+r de +icroo"nis+e nu este

-re)ent n -ro4 de n!i)t, tre4uie +i ntJi c +icroo"nis+e!e s fie cu!tiHte ntr0un +ediu de "r su

ntru0un +ediu 4o"t n nutrienţi -entru ce! -uţin < su # )i!e -entru tin"e niHe!u! necesr do)u!ui

i+uno!o"ic.

A!te tec*nici re!tiH r-ide /cJteH ore1 fo!osite n !4ortoru! +edic! -entru identi0ficre+icroor"nis+e!or, sunt tec*nici!e 4)te -e uti!i)re -ro4e!or de ci)i nuc!eici /AD% su AR%1, cre

recunosc s-ecific -ro4e!e co+-!e+ntre de ci)i nuc!eici, -recu+ şi tec*nica de a"pli-icare ,n lanţ a

acizilor nucleici PCR0 4)t -e o +-!ificre r-id AD%0u!ui su AR%0u!ui +icro4i! -entru

identificre. Deşi PCR0u! este forte s-ecific, +etod -re)int +i +u!te de)HnteN -re)enţ unui -erson

c!ifict, un +ediu de !ucru forte curt, necesitte i)o!rii si crcteri)rii "ene!or unice !e

+icroo"nis+u!ui n!i)t, ir uneori et-e su-!i+entre de !ucru -entru e!i+inre su4stnţe!or in*i4itorii.

Mre -rte inconHenienţe!or ntJ+-inte n re!i)re +etode!or c!sice de identificre

+icroor"ni+e!or sunt e!i+inte -rin introducere (iosensorilor . Astfe!, n u!ti+ii ni, se o4serH uninteres deose4it cordt de)Ho!trii tec*no!o"iei 4iosensori!or ce este 4)t -e cerinţ din ce in ce +i

ridict n detectre r-id şi s-ecific ntr0un ti+- scurt unui nu+r s-orit de n!iţi, Hit!i sntţii

o+u!ui. Prin introducere 4iosensori!or n di"nosticre -to"eni!or +icro4ieni şi to3ine!or 4io!o"ice se

+4untţeşte consider4i! sensi4i!itte şi se!ectiHitte teste!or 4ioc*i+ice. C ur+re, 4iosensorii

interHin n di"nosticre c!inic /de e3e+-!u deter+inre "!uco)ei din sJn"e1, n contro!u! !i+entţiei

-u4!ice, n 4io-rocese!e de contro!, şi n testre c!itţii +ediu!ui.

Lucrre de doctort -re)int construire reuşit +i +u!tor ti-uri de 4iosensori 4)ţi -e

uti!i)re de fi!+e Hrite de -o!i-iro! ce fci!ite) c-turre 4io+o!ecu!e!or şi -er+it do)re s-ecificşi re-roduci! en)i+e!or, Hiruşi!or şi 4cterii!or cu utoru! +etode!or e!ectroc*i+ice /+-ero+etrie,


5/38

Ho!t+etrie1. C şi construcţie, !ucrre este structurt n dou -rţi -rinci-!e cre se refer ! dte din

!itertur 0PARTEA TEORETIC70 -ri+e!e dou c-ito!e şi contri4uţii ori"in!e PARTEA

EBPERIME%TAL7 -re)entte -e -rcursu! c-ito!e.

n -ri+u! c-ito! sunt trtte s-ecte "ener!e !e"te de structur Hirusuri!or, 4cterii!or şi

4cterio-*"i!or cu descriere n -rticu!r Hirusu!ui %i!e 8est şi 4cteriei %i(rio c*olera ce sunt

studiaţi identi-icaţi electroc*i"ic ,n teza de doctorat -recu+ şi +etode!e fi)ico0c*i+ice şi en)i+tice de

identificre cestor curent fo!osite n !4ortore!e de n!i)e +edic!e.

n c-ito!u!u! < se -re)int s-ecte!e "ener!e -riHind construire 4iosensori!or /i+uno0sensori şi

sensori AD%1 4)ţi -e uti!i)re de e!ectro)i +odificţi cu diferite fi!+e -o!i+erice 4)te -e deriHţi i

-iro!u!ui. De se+ene se trte) succint 4ioc*i+i "ener! nticor-i!or, ci)i!or nuc!eici şi

+reri!or en)i+tici ce ut ! nte!e"ere -rinci-iu!ui de funcţionre ! 4iosensori!or f4ricţi n !ucrre

de doctort.

n c-ito!u! # se descrie construire unui 4iosensor +-ero+etric fo!osit n deter+inre de

concentrţii sc)ute de -rote)e /tri-sin1. L nce-ut este -re)entt -rinci-iu! de construcţie ! sensoru!ui

en)i+tic, ur+t de discutre eHo!uţiei +-ero+etrice n ti+-, c ur+re cţiunii tri-sinei su-r unui

strt usct de "e!tin. @iosensoru! re ! 4) di"esti unui strt usct de "e!tin de-o)itt ! su-rfţ

unui e!ectrod de -!tin.

n c-ito!u! 6 este -re)entt e!4orre unui 4iosensor +-ero+etric fo!osit n deter+inre

fr"+ete!or scurte -re)inteti)te de AD% din Hirusu! Nile $est . @iosensoru! este 4)t -e cu-!re

coH!ent unei -ro4e0AD%0+inte de un fi!+ de -o!i-iro! e!ectro"enert ! su-rfţ unui e!ectrod de

-!tin. Prin cu-!re u!terior cu AD%0u! tr"et se re!i)e) -rocesu! de *i4ridi)re +onitori)t -rininter+ediu! unei -ro4e0AD% 4iotini!te Hi intercţiei cu Hidin.

C-ito! ' descrie un conce-t ori"in! de sensor0AD%, 4)t -e identificre unui AD% deriHt din

Hirusu! Nile $est -rin inter+ediu! unui co+-us interc!nt "reft coH!ent de un fi!+ de -o!i-iro! ce

-er+ite u!terior inte"rre s s-ecific n du-!e3u! AD% du- cu+ rt e3-erienţe!e de Ho!t+etrie cic!ic

şi +-ero+etrie.

n c-ito!u! > se descrie construire unui i+unosensor +-ero+etric -entru deter+inre

nticor-i!or I"2 s-ecifici -entru Hirusu! Nile $est -rin inter+ediu! 4cterio-*"i!or/nti"ene1 0 ce -ort

un e-ito- s-ecific -entru Hirus0 -otoi"o(ilizati ntr0un fi!+ co-o!i+eric constituit din unitţi de -iro!0 4en)ofenon şi -iro!0ruteniu+. Pre)enţ -*"i!or "refţi -recu+ şi inf!uenţ unui r-ort o-ti+ ntre cei doi

+ono+eri uti!i)ţi este confir+t -rin studii de Ho!t+etrie cic!ic.

n c-ito!u! & se -re)int f4ricre unui i++unosensor +-ero+etric -entru deter+inre

nticor-i!or I"2 s-ecifici Hirusu! Nile $est -rin inter+ediu! 4cteri-*"i!or inc-su!ţi ntr0un fi!+ de

-o!i-iro! +fifi!ic. O-ti+i)re siste+u!ui de do)re +-ero+etric /cntitte de -*"i de-o)itt, +odu!

de e!ectro0-o!i+eri)re1 este re!i)t -rin Ho!t+etri cic!ic.

n c-ito!u! 5 se descrie +odu! de f4ricre şi de funcţionre unui i+unosensor +-ero+etric

ori"in! -entru detectre nticor-i!or de *o!er HJnd ! 4) uti!i)re unui co-o!i+er de -o!i-iro!04iotin

şi -o!i-iro!0!cto4ion+id -entru i+o4i!i)re nti"ene!or *o!erei 4iotin!te -rin inter+ediu! intercţiei


6/38

cu unitţi!e de Hidin şi n co+4inţie cu un +rer en)i+tic c -ero3id). C-ito!u! -re)int de

se+ene studii de esti+re -er+e4i!itţii fi!+u!ui co-o!i+eric 4iotini!t cre este direct core!t cu

-osi4i!itte de detecţie i+unorecţiei -rin +-ero+etrie.

n c-ito!u! se co+-r -erfor+nţe!e n!itice o4ţinute -entru trei confi"urţii de i+unosensori

+-ero+etrici ce uti!i)e) "!uco0o3id), tiro)in) şi -ero3id) dre-t +reri en)i+tici -entru

detectre +-ero+etric ntico-i!or de *o!er. n -ri+ -rte studiu!ui se -re)int +odu! de -re-re şi

-rinci-iu! de funcţionre ! ce!or trei i+unosensori ir n -rte dou se -re)int n det!iu -erfor+nţe!e

fiecrui 4iosensor, unde siste+u! ce uti!i)e) -ero3id) se re+rc c fiind ce! +i sensi4i!.

n c-ito!u! (; este -re)entt sinte) unui nou deriHt de -iro!, +ono+eru! de -iro!0!"int cre n

ur+ -rocesu!ui de e!ectro-o!i+eri)re condus ! for+re unui +tri3 -o!i-iro!0"e!, ce -re)int un "rd

ridict de reţinere en)i+e!or, cu s-orire st4i!itţii ! efectu! distructiH ! nioni!or de fosft cee ce nu

este -osi4i! cu "e!u! de !"int stndrd. Pre)enţ !nţuri!or e!ectro-o!i+eri)te fost c!r i!ustrt -rin

scdere -er+e4i!itţii co+-rtiH cu "e!u! ntur! de !"int n -re)enţ s-eciei -er+ente 0

*idroc*inon. n -rte dou studiu!ui u fost n!i)te -erfor+nţe!e n!itice !e fi!+e!or de !"int

+odifict şi ne+odifict cu "ru-ri -iro!ice conţinJnd +o!ecu!e de "!uco0o3id) -entru deter+inre

"!uco)ei.

n c-ito!u! fin! /((1 sunt r-ortte f4ricre reuşit şi -erfor+nţe!e n!itice !e 4iosensori!or

4)ţi -e inc-su!re ce!u!e!or !"!e de *lorella &ul+aris n "e!u! de !"int ntur! şi ntr0un +tri3 nou

sinteti)t de -iro!0!"int. Ce!e dou confi"urţii de 4iosensori sunt co+-rte n cee ce -riHeşte curentu!

+-ero+etric o4ţinut n -re)enţ su4strtu!ui de p0nitrofeni! fosft -entru do)re ctiHitţii fosft)ei

!c!ine !"!e. $t4i!itte su-erior "e!u!ui de -o!i-iro!0!"int este eHidenţit n co+-rţie cu cecrcteristic !"intu!ui ntur! cee ce reco+nd "e!u! de -o!i-iro!0!"int c un su-ort neto3ic şi

eficient -entru construire de 4iosensori.

&! A'(ecte )e*e+ale ,* c*'t+ui+ea .i'e*'+il+

@iosensorii sunt instru+ente n!itice ce inte"re)ă o co+-onentă 4io!o"ică /receptorul (ioc*i"ic1

de o su-rfţă so!idă /transducer ce fci!ite)ă intercţii!e 4ios-ecifice reHersi4i!e cu n!itu! şi

conHerteşte se+n!u! 4io!o"ic ntr0un se+n! e!ectric +ăsur4i!. Co+-onent 4io!o"ică este re-re)enttă

fie de en)i+e, rece-tori, ce!u!e, ţesuturi, or"ne!e, -e-tide, nticor-i, ci)i nuc!eici etc., si"urJndrecunoştere +o!ecu!ră /9i"ur


7/38

Fi)u+a &!/. c*e"a +eneral a unui (iosensor.

De se+ene, 4iosensorii AD% 4)ţi -e recunoştere ci)i!or nuc!eici, cunosc o de)Ho!tre

r-idă dtorită si+-!icităţii şi costuri!or reduse necesre -entru testre 4o!i!or infecţiose şi "enetice. $-re

deose4ire de en)i+e su nticor-i, strturi!e de recunoştere cidu!ui nuc!eic -ot fii sinteti)te şi

re"enerte -entru +i +u!te uti!i)ări.

@iosensorii sunt uti!i)ţi intensiH c intru+ente de di"nosticre c!inică K65, -redo+innt n ş

nu+itu! point#o- care testin+ . Astă)i, 4iosensoru! cu ce! +i ridict succes co+erci! in &itro este

4iosensoru! de "!uco)ă su4 for+ă de dis-o)itiH -ort4i!e ce u -osi4i!itte de sc*i+4re crtri"0u!ui de

rectiHi.

REZULTATE ORI#INALE

$! S$! SENSOR ENSOR AMEROMETRICAMEROMETRIC ENTRUENTRU DETECTAREADETECTAREA ROTEAZELOR ROTEAZELOR

n cest c-ito! se -re)ent o +etod ori"in! de cuntificre tri-sinei n do+eniu! -ico+o!r, 4)t -e

e!4orre unui 4iosensor ce re ! 4) detecţi +-ero+etric curentu!ui nre"istrt de un e!ectrod de

-!tin +odifict cu +o!ecu!e de "!uco0o3id) inc-su!te intr0un fi!+ de -o!i/-iro!0!c*i!+oniu+1

/9i"ur #.(.1 şi u!terior co-erit cu un strt de "e!tin ce este su-us di"estiei -roteo!itice.

Fi)u+a $!/! tructura "ono"erului de pirol#alc*ila"oniu".

$!0! Re1ultate 2i di'cu3ii

$!0!/! Ca+acte+i1a+ea elect+chimic4 a elect+dului mdi5icat cu (l67(i+l-alchilam*ium8-#9!

Deorece 2o3 ct!i)e)ă o3idre ero4ică "!uco)ei cu -roducere conco+itentă =


8/38

-otenţiostre e!ectro)i!or +odificţi ! ;.> V -entru fci!it o3idre en)i+tică =


9/38

Fi)u+e $!"! reşterea intensitţii curentului a"pero"etric pentru sensorii de +elatina#@o ,n prezenţa +lucozei !"9 pentru di-erite concentraţii de tripsin dup 1 "inut de di+estie enzi"atic. reşterea esteraportat su( -or"a de raport a curentului o(ţinut de (iosensor şi cel o(ţinut iniţial ,n a(senţa +elatinei.

Do)re tri-sinei fost inHesti"tă -rin incu4re e!ectro)i!or "e!tinţi (; +inute n so!uţi de

tri-sină. Pentru fiecre concentrţie de tri-sină u fost -re-rţi trei 4iosensori indiHidu!i "e!tină02o3 ir

curentu! +-ero+etric +edie fost nre"istrt. $0 o4serHt o creştere !iniră curentu!ui cu !o"rit+u!

concentrţii!or de tri-sină n do+eniu! de ( -Jnă !


10/38

triptic -ro"resiHă strtu!ui de "e!tină. Di"esti -roteo!itică strtu!ui de "e!tină este forte r-idă n

-re)enţ unei concentrţii de #;; S"+! tri-sin, conducJnd ! o creştere continuuă curentu!ui nodic

ti+- de un +inut de trt+ent cu tri-sină. Du-ă cest ti+-, se o4serHă un efect to3ic ! tri-sinei su-r

+o!ecu!e!or de "!uco0o3id) ce induce o scădere -ro"resiHă curentu!ui. Acest efect de to3icitte este

dtort tri-sinei ce tcă situsuri!or de r"inină şi !i)ină -re)ente n 2o3. C ur+re, ti+-u! de do) forte

r-id ! tri-sinei /( +in1, -recu+ şi si+-!icitte cons0truirii 4iosensoru!ui en)i+tic fce c cest tide

do)re en)i+tică să Hină n utoru! +onitori)ării stării de sănătte -cienţi!or sus-ecţi de dere"!ări n

niHe!u! tri-sinei.

"! D"! DETECTAREAETECTAREA AMEROMETRIC;AMEROMETRIC; AA CCADN-ADN-ULUIULUI DERIVATDERIVAT DINDIN VIRUSULVIRUSUL N N ILE ILE W W EST EST FOLOSINDFOLOSIND

ELECTROZIELECTROZI MODIFICA


11/38

Fi)u+a "!&! Ba(ricarea sensorului cADN $N%. "# Bil"ul de polipirol#N?< 2# uplarea pro(ei ADN a"inate< $# ?i(ridizarea cADN $N% # ţint< %. ?i(ridizarea cu lanţul oli+onucleotic (iotinilat< 5.uplarea +luco#oidazei cu a&idin şi detectarea se"nalului.

"!0! Re1ultate 2i di'cu3ii

"!0!/! Ela.a.+a+ea elect+chimic> 2i ca+ate+i1a+ea 5ilmului de (li7(i+l-N?S8!

Co+-ort+entu! e!ectroc*i+ic ! +ono+eru!ui de -iro!0%=$ /< +M1 fost inHesti"t n C= #C%

;.( M LiC!O6. Prin scnre o3idtiHă, +ono+eru! -re)intă un -ic ireHersi4i! ! (.;5 V /fţă A"(; +M

A" e!ectrod de referinţă1 cee ce cores-unde o3idării "ru-ării -iro! n rdic!i ctionici /9i"ur 6.#A1.

E!ectro-o!i+eri)re +ono+eru!ui de -iro!0%=$ fost re!i)tă -rin re-etre cic!ării -otenţi!u!ui -e

interH!u! ; ;.'V. A-renţ şi continuu cresşere -icu!ui reHersi! ! ;.65V indică c!r for+re fi!+u!ui

-o!i+eric ! su-rfţ e!ectrodu!ui /9i"ur 6.#@1. E!ectrodu! +odifict fost trnsfert n so!uţi de

C=#C% ;.( M LiC!O6 fără +ono+er de -iro!0%=$. Du-ă cu+ s0 -resu-us, Ho!t+o"r+ cic!ică cestui e!ectrod -re)intă un -ic de -otenţi! de o3idre ! 1:! Q ;.'5 V ref!ectJnd 4ine cunoscut

e!ectroctiHitte sc*e!etu!ui -o!i-iro!ic /9i"ur 6.#C1.

Fi)u+a "!$! %olta"o+ra"e ciclice ale -il"ului de pirol#N? ! "9 la supra-aţa electrodului de platin dia"etru 5 "" A ,nainte şi > ,n ti"pul electropoli"erizrii prin repetarea potentţalului de

scanare ,n ? 3N C 0.1 9 ilE4 dup tran-erul ,n ? 3N C 0.1 9 ilE4.< &iteza de scanare a -ost de 0.1 % s#1.

"!0!$! Cu+.a de cali.+a+e am(e+mt+ic> (e*t+u dete+mi*a+ea c*ce*t+a3iil+ de cADN =NV!

n -re)enţ o3i"enu!ui, 2o3 ct!i)e)ă o3idre "!uco)ei cu -roducere conco+itentă =


12/38

Fi)u+a "!0! Rspunsul de curent a"pero"etric al sensorului cADN la in8ectarea +lucozei a 140 "9 (!0 "9 ,n -uncţie de concentraţia de $N%. Potenţialul aplicat= 0.6 % ,n soluţia a+itat de 0.1 9 P> p? F 7.

"!:! C*clu1ii

n cest c-ito! este -re)entt e!ectro"enerre fi!+u!ui de -o!i-iro!0%=$ n co+4inţie cu -rocesu!

de su-ro3idre e!ectroc*i+ic n Hedere o4ţinerii unui -o!i+er -er+e4i! -entru "refre de

o!i"onuc!eotide rea+entless. Acest !e"tur c*i+ic -ro4ei cAD% 8%V de fi!+u! -o!i+eric conduce !

f4ricre unui sensor cAD% eficient -rin uti!i)re unui +rer en)i+tic ce identi-ic) du-!e3u! AD%

for+t ! su-rfţ e!ectrodu!ui de -!tin. $e o4ţine o !i+ită de detecţie e3tre+ de sensi4i! /( f" +! 0(1 de

cAD% 8%V ce este socit cu o st4i!itte ridict rs-unsu!ui +-ero+etric.

0! S0! SENSOR ENSOR ELECTROENZIMATICELECTROENZIMATIC OLIIROLOLIIROL--INTERCALATOR INTERCALATOR ENTRUENTRU DETECTAREADETECTAREA CCADNADN DERIVATDERIVAT DINDINVIRUSULVIRUSUL N N ILE ILE W W EST EST

0!/! I*t+duce+e

LuJnd n considerre -rocesu! de interc!re, n cest c-ito! se -ro-une un conce-t ori"in! de

identificre secHenţei AD% deriHte din Hirusu! %i!e 8est 4)t -e du"re o!i"onuc!eotidie

co+-!e+entre ntr0o so!uţie -os de ssD%A şi ur+t de identificre / -is*in+ 1 e!ectroc*i+ic

du-!e3u!ui for+t ! su-rfţ sensoru!ui. E!ectrodu! este n -re!4i! +odifict cu un interc!tor -!nr

sintetic, un deriHt redo3 cridinic /RAD1 K(6' "reft c*i+ic ! su-rfţ e!ectrodu!ui Hi unui fi!+

e!ectro"enert de -o!i-iro! %0su4stituit de "ru-re N 0*idro3idsuccini+id /9i"ur '.(1. RAD0u! "reft H

fii u!terior fo!osit n -rocesu! de interc!re n dsAD% ! su-rfţ e!ectrodu!ui.

Fi)u+a 0!/! tructura c*i"ic) a deri&atului redo de acridona RAD a şi a celui de pirol N#su(stituit de +rupul N#*GdroGsuccini"ida " (.

E!4orre unui sensor "eno+ic 8%V fost stfe! se!ectt c +ode! -entru inHesti"re

conce-tu!ui de 8%V0sensor. Pentru cest, deter+inre -rocesu!ui de *i4ridi)re dintre dou


13/38

o!i"onuc!eotide deriHte dintr0un fr"+ent -roHenind din -rte -roteic 8%V re"iune codt ((6'0

((5; fost re!i)t -rin c-turre -is*in+ du-!e3u!ui AD%. U!terior, crc0teristice!e n!itice !e

sensoru!ui 8%V cD%A u fost inHesti"te -rin +surtori +-ero+etrice ce fo!osesc unui +rer

en)i+tic K5&.

0! "! Re1ultate 2i di'cu3ii

$co-u! e!ectro)i!or +odificţi fost ce! de detect du-!e3u!0AD% du-ă +rcre cu +o!ecu!e

de 2o3, -rin o3idre e!ectroc*i+ic ! su-rfţ e!ectrodu!ui de -!tin cu -roducere de =


14/38

Fi)u+a 0!&! %olta"o+ra"ele ciclice pentru electrodul "odi-icat cu polGpirol dia"etrul de 5""= Aelectroacti&itatea polipirolului > supraoidarea polipirolulu a pri"ul scan ( patru scanari ,n? 3N C 0.19 ilE4 < &iteza de scanare 0.1 %s#1 < dup) i"o(ilizarea c*i"ic) a RAD ,n ta"pon P> deaerat &iteza de scanare !0 a 50 ( and 100 c "%s#1. D %olta"o+ra"e ciclice ale electrodului

polG#1#RAD a ,nainte şi ( dup) incu(area cu $N% dsDNA 10 n+:" ,n soluţie ta"pon P>< &iteza de scanare 0.1 %s#1.

Rs-unsu! curentu!ui o4ţinut de e!ectro)ii +odificţi /-o!i/0RAD0dsD%A1 ! inecţi "!uco)ei /


15/38

In cest c-ito! se r-orte) e!4orre reuşit unui fi!+ co-o!i+eric n sco-u! uti!i)rii s!e n

construcţi de i+unosensori, co-o!i+eru! HJnd ! 4) doi +ono+eri -iro!iciN un +ono+er fotoctiH4i!

-iro!04en)ofenon /+ono+eru! /1 şi un +ono+er ctionic tris/4i-iridin0-iro!1ruteniu+ co+-!e3 /+ono+er

&1 /9i"ur >.(1.

Fi)u+a :! /. tructura "ono"erilor " şi 2.

I+o4i!i)re -*"i!or de $N%#diplaGed epitope de fi!+e!e co-o!i+erice fotoctiH4i!e se re!i)e)

-rin irdiere co-o!i+eru!ui ce fHori)e) for+re de !e"turi coH!ente +u!ti-!e ntre "ru-e!e de

4en)ofenon -o!i+eri)te şi -*"i. E!ectro)ii +odificţi cu -*"i u fost testţi +-ero+etric -entru

i+unodo)re de nticor-i08%V.

:!&!$! Mdi5ica+ea elect+1il+ de ca+.* u* 5ilm (lime+ic

E!ectro-o!i+eri)re +ono+eri!or su +estecu!ui de +ono+eri /5(; Arc /+4e!e -roHenite de ! Orie! Instru+ents1.

9i!tre!e u fost fo!osite -entru se!ectre !un"i+ii de und de ##' n+ şi s 4!oc*e)e r)e!e IR, -reHenind

stfe! su-rnc!)ire fi4erei o-tice şi su-rfeţei e!ectrodu!ui.

:!"! Re1ultate 2i di'cu3ii

:!"!$! C*'t+uc3ia imu*'e*'+ului 2i detec3ia a*tic+(il+ =NV

Du- dso-ţi -*"i!or de fi!+e!e de -o!i//-&1 ur+t !e"re !or coH!ent de su-ort -rininter+ediu! ctiHrii !u+inii ! X Q #'' n+ cee ce iniţi) -o!i+eri)re "ru-e!or de 4en)ofenon. Pentru


16/38

inHesti" efectu! -rodus de cest recţie fotoc*i+ic, e!ectro)ii +odificţi u fost incu4ţi cu diferite

concentrţii de nticor-i08%V /de ! (; ! (;>1. A-oi, e!ectro)ii u fost incu4ţi cu ce! de0! doi!e

nticor- +rct cu -ero3id) din *ren. Recunoştere nticor-i!or08%V !e"ţi de -*"i este re!i)t

-rin inter+ediu! unui +rcr en)i+tic c -ero3id). U!terior, toţi i+unosensorii08%V u fost i+ersţi n

so!uţi de t+-on fosft s!in ;.( M / 0.19 !0 "l p? F7.!

9iecre -unct din cur4 de c!i4rre re-re)int +edi de rs-uns n curent nre"istrt de trei

i+unosensori diferiţi. $e o4serH o scdere se+n!u!ui +-ero+etric -entru titru! nticor-i!or din

interH!u! (N(; ! (N(;>

constituind stfe! o !i+it de detecţie forte sensi4i!.


17/38

:!0! C*clu1ii

n cest c-ito! este -re)ent e!ectro"enerre fi!+e!or de -o!i-iro! co+-use din "ru-ri de

4en)ofenon şi "ru-ri de tris/4-iridin0-iro!1 ruteniu+ /II1 -entru o i+o4i!i)re fotoc*i+ic inoHtore

entitţi!or 4io!o"ice, n -rticu!r p*a+ilor &irusului Nile $est ce0şi -re)erH -ro-rietţi!e de recunoştere

+o!ecu!r n -re)enţ nticor-i!or s-ecifici. Pentru do)re recţii!or i+uno!o"ice s0 uti!i)t do)u!+-ero+etric cee ce -er+ite o4ţinere unei !i+ite de detecţie n interH!u! de (N(; > ce re-re)int titru!

nticor-i!or I"208%V. Acest ref!ect eficienţ !e"rii coH!ente fotoc*i+ice dintre -*"ii şi fi!+u!

-o!i-iro!ic, fr fect u!terior i+unorecţii!!e, -recu+ şi o -er+e4i!itte 4un fi!+u!ui co-o!i+eric

dtort co+-!e3u!ui de ruteniu+ ce -er+ite trnsducere +-ero+etric i+unorecţiei.

%! I%! IMUNOSENSORULMUNOSENSORUL AMEROMETRICAMEROMETRIC ENTRUENTRU DETECTAREADETECTAREA ANTIANTI-- N N ILE ILE W W EST EST VIRUSVIRUS II))## FOLOSINDFOLOSIND

INCASULAREAINCASULAREA ?A#ILOR ?A#ILOR INTR INTR --UNUN FILMFILM DEDE OLIIROLOLIIROL77ALC?ILALC?IL--AMONIUMAMONIUM

%!/ I*t+duce+e

n cest c-ito! este r-ortt construcţi i+unosensori!or +-ero+etrici -entru identificre r-id

nticor-i!or I"208%V fo!osind fi!+e de -o!i/-iro!0!c*i!+oniu+1 -entru reţinere -*"i!or08%V !

su-rfţ e!ectrodu!ui de cr4une. C ur+re u fost inHesti"te -ro-rietţi!e e!ectroc*i+ice !e e!ectro)i!or

+odificţi cu -o!i+er0-*"i 8%V, ir -erfor+nţe!e n!itice +-ero+etrice !e i+unosensoru!ui cu

confi"urţie o-ti+i)t u fost deter+inte. Mo!ecu!e!e de -*"i u fost +odificte cu o secHenţ de ('

+inoci)i -roHeniţi din nHe!o- -roteic Hirusu! Hirusu! %i!e 8est Hirusu!ui /8%V1 ce u fost fo!osiţi

dre-t nti"eni n !oc de Hirusu! -ro-riu0)is /-*"i identici cu cei din c-ito!u! >1. AHntu! +or ! -*"i!or const n f-tu! c sunt inofensiHi -entru o+eni ir -re-re !or nu necesit et-e co+-!icte de

e3ecuţie.

%!"! +e(a+a+ea im*'e*'+ului-=NV a@*d la .a14 (ha)i i*ca('ula3i ,*t+-u* 5ilm de (li(i+l

Du- i+o4i!i)re p*a+ilor de e!ectrod, fost re!i)t sturre eHentu!e!or situri!or non0

s-ecifice de dso-ţie -roteine!or cu !4u+in seric 4oHin /@$A1 s-orind stfe! sensi4i!itte testu!ui de

do)re. $o!uţi (locant fost -re-rt )i!nic din so!uţie de t+-on fosft s!in /;.( M P@$, -= Q &.


18/38

Fi)u+a %!/! Reprezentarea sc*e"atic) a principiului de -uncţionare a i"unosensorului a"pero"etric pentru detecţia anticorpilor#$N% prin inter"ediul anticorpului#secundar "arcat cu ?RP ce catalizeaz) -or"area speciilor electroacti&e de c*inon) ,n prezenţa su(stratelor= *idroc*inon) ? si a ? !E!.

%!0! Re1ultate 2i di'cu3ii

%!0!/! Ela.+a+ea elect+1il+ mdi5ica3i cu (lime+ 'i (ha)iCo+-ort+entu! e!ectroc*i+ic ! fi!+e!or dsor4ite de -iro!0!c*i! +oniu+ cu şi fr -*"i fost

inHesti"t -rin Ho!t+etri cic!ic ! su-rfţ e!ectrodu!ui de cr4une n +ediu! -os conţinnd ;.(M

LiC!O6 dre-t e!ectro!it su-ort. Prin scnri re-etitiHe !e e!ectrodu!ui n interH!u! de -otenţi! ; ;. V se

o4serH -riţi [usi0reHersi4i! siste+u!ui de -icuri n uru! ;.' V /9i"ur &.


19/38

Fi)u+a %!&! %olta"o+ra"ele ciclice ale -il"elor adsor(ite de "ono"er de pirol#alc*il a"oniu" 1!0 n"ol,n ti"pul procesului de poli"erizare şi a poli"erului o(ţinut. A "ono"erul sin+ur< > "ono"erul a"estecat cu 10 Jl "ono"erul a"estecat cu !0 Jl p*a+i< D "ono"erul a"estecat cu 30 Jl p*a+i.

lectropoli"erizarea a -ost e-ectuat) ti"p de 10 "inute prin ciclarea potenţialului ,ntre 0 şi 0./% :A+:A+l ,ntr#o soluţie apoas) coţin'nd 0.19 ilE4 cu o &itez) de scanare de 0.1% s#1.

Pre)enţ -*"i!or i+o4i!i)ţi, densitte !or şi cesi4i!itte -entru i+unorecţi cu nticor-ii0

8%V este direct ref!ectt de intensitte curentu!ui o4ţinut ! reducere c*inonei. V!ori!e de curent

+3i+ /I+31 cores-un)nd trei cntitţi diferite de -*"i /(;,


20/38

%!0!&! e+mea.ilitatea 5ilmel+ de (li(i+l-(ha)i =NV

9i"ur &.#. i!ustre) Ho!t+o"r+ RDE o4ţinut -entru fi!+u! -o!i+er0-*"i. Per+e4i!ittte

/P+1 este esti+t fo!osind ecuţii!e descrise nterior de 2ou"* şi Le-o!dt K(#>0(#5 /9i"ur &.#1. V!ori!e

de -er+e4i!itte !e fi!+u!ui de -o!i/-iro!0!c*i! +oniu+1 şi ce!e !e -o!i+eru!ui conţinnd -*"i T&0E-

('3< /(; \!1 sunt si+i!re, 6.< şi res-ectiH @ra-icul MoutecG#e&ic* pentru a un electrod ne"odi-icat ( pentruun electrod "odi-icat cu un -il" poli"eric şi c pentru un electrod "odi-icat cu un -il" poli"ericconţin'nd 10Ll p*a+i 7lp15! p*a+e. oluţia test a -ost ! "9 *idroc*inon) ,n soluţia de 0.1 9 P> p? F 7.!.

%!0!$! e+5+ma*3ele imu*'e*'+ului (e*t+u detecta+ea a*tic+(il+-=NV

Pentru inHesti" c-4i!itţi!e n!itice !e e!ectro)i!or +odificţi cu -o!i-iro!0-*"i -entru

do)re +-ero+etric nticor-i!or08%V, e!ectro)ii cu -*"i u fost incu4ţi cu diferite di!uţii de

nticor-i08%V n interH!u! de (; -n ! (;&. Aceste rs-unsuri de curent u fost -ro-orţion!e cu

concentrţi nticor-i!or, ir !i+it de detecţie fost de(;& /9i"ur &.61.


21/38

Fi)u+a %!"! R)spunsul de curent a"pero"etric ,nre+istrat pentru i"unosensorii#$N% ,n prezenţa siste"ului *idroc*inona:? !E! ,n -uncţie de diluţiile de anticorpi#$N% 1=10 p)n) la 1=107 . Potenţialul aplicat este de 0% -aţ) de .

Do)re +-ero+etric este +u!t +i sensi4i! decJt !te tec*nici c testu! co!ori+etric ELI$A,

testu! c*e+i!u+inescent ELI$A su i+unotestu! 4)t -e fi4re o-tice

K(>5 ce conduc ! !i+ite de detecţie titru!ui de nticor-i de (N(;', (N'3(;', şi res-ectiH de (N(;>.

De +enţiont este r-iditte rs-unsu!ui de curent diferiţi!or i+unosensori cre este st4i! du-

nu+i ' !


22/38

Fi)u+a !/! Ba(ricarea i"unosensorului#?RP a"pero"etric (azat pe siste"ul electroc*i"ic*idroc*inona?:peroid de *idro+en ? !E! .

!0! +e(a+a+ea imu*'e*'+ului

Et-e!e ur+te n e!4orre i+unosensoru!ui ! su-rfţ e!ectrodu!ui de căr4une Hitros u fostN

+i ntJi,


23/38

detectre +-ero+etrică c*inonei u fost introduse -rin e!ectroco-o!i+eri)re "ru-e *idrofi!ice de -iro!0

!cto4ion+idă n sc*e!etu! -o!i+eric de -o!i0-iro!04iotină1 -entru contr4!nsre crcteru!ui său

*idrofo4ic /9i"ur 5.


24/38

Fi)u+a !$! %olta"o+ra"ele ciclice ,n prezenţa 1 "9 *idroc*inon şi 0.1 9 ilE 4 ,n P> p? F 7 pentru a un electrod de cr(une ne"odi-icat dia"etru de 5 "" ( un electrod "odi-icat cu polipirol#(iotin şi polipirol#lacto(iona"id c un electrod "odi-icat cu polipirol (iotin. %iteza de scanare a

-ost de 100 "% s#1.

9i"ur 5.6A -re)int Ho!t+o"r+e!e de disc0rotitor crctristice fi!+u!ui co-o!i+eric n so!utţ

-os de *idroc*inon /( +M1.

E3-erienţe!e de Ho!t+etrie RDE u fost re-re)entte su4 for+ de "rfic ]outec*0LeHic* unde

densitte de curent !i+it este re-re)entt n funcţie de -trtu! rdcinii Hite)ei de rotţie /9i"ur 5.6@1.

Din "rfic, se o4serH un co+-ort+ent !inir ! co-o!i+eru!ui cu ceeşi -nt c şi e!ectrodu!ne+odifict -re)entJnd o intersecţie -o)itiH ce -er+ite e3tr"ere r-ortu!ui D+]^ c fiind de


25/38

Fi)u+a !0! ur(a de cali(rare a i"unosensorului#?RP cu anticorpii# in inter&alul de 0.05 #500 J+:"l -olosind siste"ul *idroc*inona:? !E!.

! C*clu1ii

n cest c-ito! se -re)int o nou strte"ie de i+o4i!i)re +teri!u!ui i+uno!o"ic de un e!ectrod+odifict cu un fi!+ co-o!i+erict -entru do)re nticor-i!or s-ecifici *o!erei. $tudiu! efectut -re)int

-entru -ri+ dt coe!ectro-o!i+eri)re +ono+eri!or de -iro!04iotin şi -iro!0!cto4ion+id c o

Hrint de fi!+ -o!i+eric eficient -entru ncorre 4io+o!ecu!e!or n stre !or 4io!o"ic ctiH. Dtorit

crcteru!ui *idrofi!ic ridict, +ono+eru! de -iro!0!cto4ion+id s-oreşte consider4i! -er+e4i!itte

co-o!i+eru!ui -entru s-ecii!e e!ectroctiHe. Acest -er+is detectre +-ero+etric r-id şi forte

sensi4i! nticor-u!ui de *o!er n co+4inţie cu un indictor en)i+tic /-ero3id)1.

! C! COMARAREAOMARAREA AA TREITREI CONFI#URA


26/38

Fi)u+a !/! c*e"a electrozilor "odi-icaţi cu su(unitatea > a toinei *olerei (iotinilate.

!0! T+a*duce+ea am(e+met+ic> a imu*+eac3iei

I+unosensorii u fost incu4ţi ti+- de @o#> i"unosensor< PPE#>i"unosensor< 9ed red :9ed o F -erocianura:-ericianuda< *idroc*inona:c*inona< -erocen:-eroceniu"< @o #

+lucos#oidaza (iotinilat) PPE#poli-enol oidaza (iotinilat)< ?RP#anticorpul I+@ anti#iepure "arcat cu ?RP.


27/38

!:! Re1ultate 2i di'cu3ii

Pentru i+o4i!i) CT ! su-rfţ e!ectrodu!ui -rin interctţi de finitte Hi -unţi!or de Hidină0

4iotină, s0 fo!osit un nou fi!+ co-o!i+eric 4iotini!t K-o!i/-iro!04iotin1, -o!i/-iro!0!cto4ion+id1 c un

strt iniţi! de ncorre. Acest fi!+ co-o!i+eric fost e!4ort -entru +4unătăţire sensi4i!ităţii

trnsducţiei recţii!or en)i+tice 4)te -e detectre +-ero+etrică -roduşi!or en)i+tici -re)enţi !su-rfţ e!ectrodu!ui. Cteco!u! fost uti!i)t c -ro4ă e!ectroc*i+ică -entru i!ustr diferenţ n

-er+e4i!itte dintre co-o!i+eru! 4iotini!t şi fi!+u! de -o!i/-iro!04iotin1. 9i"ur .#. -re)intă o serie de

Ho!t+o"r+e cic!ice nre"istrte ! (;; +V s0( -entru e!ectrodu! ne+odifict, e!ectrodu! +odifict cu

-o!i/-iro!04iotin1 şi e!ectrodu! +odifict cu co-o!i+er.

Fi)u+a !$! %olta"o+ra"ele ciclice ale electrozilor de platin dia"etru de 5 ""= a electrod ne"odi-icat ( electrod "odi-icat cu copoli"erul polipirol#(iotina pirol#lacto#(iona"ida c electrod "odi-icat cu polipirolul (iotinilat ,n prezenţa a 1 "9 catecol ,n soluţia apoas de 0.1 9 ilE4 p? 7.

Bil"ele poli"erice au -ost electrodepozitate prin controlarea potenţialului de electroliz la 0. % sarcina

de electropoli"erizare a -ost de 1 ". %iteza de scanare a -ost de 100 "% s #1.

!:!/! R>'(u*'ul de cu+e*t am(e+met+ic la a*ti-CT 5l'i*d imu*'e*'+ul-?R

Confi"urţi en)i+tică ce +i si+-!ă constt n fo!osire nticor-u!ui secundr conu"t cu o

en)i+ă, n c)u! de fţă =RP. Dtoriă s-ectru!ui !r" de su4strte en)i+tice, trei siste+e e!ectroctiHe

/ferocinur=


28/38

Fi)u+a !"! ur(ele de cali(rare pentru anti# ,n cazul i"unosensorilor#?RP -olosind di-erite siste"e de"ediatori redo :? !E!


29/38

Fi)u+a !0! ur(a de cali(rare pentru anti# -olosind A i"unosensorii @o#> ,n prezeţta +lucozei applicat F 0.6% > i"unosensorii PPE#> ,n prezeţa catecolului< aplicat F #0.!%.

!%! C*clu1ii

n cest c-ito! este de+onstrt -osi4i!itte f4ricrii de i+unosensori -entru do)re

nticor-i!or s-ecifici -entru *o!er -rin inter+ediu! si+-!ei i+o4i!i)ri +teri!u!ui i+uno!o"ic /to3in

*o!erei1 ! su-rfţ e!ectrodu!ui +odifict cu un nou fi!+ de -iro! co-o!i+eric ce -ort "ru-ri de 4iotin

si !cto4ion+id. Intercţi nti"en0nticor- este do)t +-ero+etric. Dtorit -er+e4i!itţii 4une

fi!+u!ui co-o!i+eric, fost -osi4i! uti!i)re trei siste+e de trnsducere e!ectroen)i+tic /=RP, 2o30@,

PPO0@1 -entru detectre nticor-u!ui de nti0to3in *o!erei, ce u fost u!terior studite şi co+-rte n

cee ce -riHeşte -erfor+nţe!e n!itice o4ţinute -entru fiecre +rer. Astfe!, i+unosensorii ce fo!osesc

=RP -re)int ce +i sensi4i! !i+it de detecţie /'; n"+!1.

/H! Î/H! ÎMBUNATATIRIMBUNATATIRI ADUSEADUSE ÎNÎN RE


30/38

Fi)u+a /H!/. Reprezentarea sc*e"atic) a sintezei co"pusului pirol#al+inat.

/H!"! Re1ultate 2i di'cu3ii

/H!"! /! +e(a+a+ea elect+1il+ cu al)i*at 2i (li(i+l-al)i*at (e*t+u te'tele elect+chimice

Pentru funcţion!i)re e!ectrodu!ui de cr4une, s0u de-o)itt -e su-rfţ s # S! so!uţie -os

de !"int su -iro!0!"int /


31/38

controlarea poteţialului de electroliz) la 0./3% d identic cu c dup) i"ersarea ,n soluţie de etanol 10"in şi 0.19 ta"pon -os-at p? 7 pentru alte 10 "inute.>e un electrod "odi-icat cu 3 Jl al+inat - unelectrod "odi-icat cu 3 Jl al+inat dup) electroliza la potenţial -i de 0./3 % + un electrod "odi-icat identic cu e dup) i"ersarea ,n soluţie de etanol 10 "inute şi ,n soluţie de 0.19 ta"pon -os-at p? 7 10"inute. i"pul de +eli-icare a -ost de 5 "inute ,n prezenţa a+entului de +eli-icare 0.1 9 al !. %iteza de

scanare a -ost de 0.1% s#1.

/H!"!&! Studii de (e+mea.ilitate

Pentru doHedi -re)enţ !nţuri!or de -o!i-iro! n "e!u! de !"int, fost deter+int

-er+e4i!itte fi!+e!or de !"int şi -o!i-iro!0!"int cu utoru! e3-erienţe!or de e!ectrod0disc rotitor

/RDE1 ! diferite turţii şi n -re)enţ ( +M *idroc*inon di)o!Ht n ;.( M Tris0=C! /-= Q &1 şi

ecuţii!or 2ou"* şi Le-o!dt descrise n c-ito!u! 6 /9i"ur (;.61.

Diferenţ +re de -er+e4i!itte esti+t -entru fi!+u! de !"int şi -o!i-iro!0!"int /#.>' 3 (; 0( şi

res-ectiH


32/38

4iosensori +-ero+etrici -entru do)re "!uco)ei. Prin co+-rre -erfor+nţe!or n!itice !e

4iosensori!or n cee ce -riHeşte H!ori!e de curent +3i+ /I +31 şi de sensi4i!itte se o4ţin H!ori su-eriore

!e I+3 Q (.(( SA, şi sensi4i!ităţii Q (


33/38

di+etru. n do+eniu! 4iosensori!or, ce!u!e!e de . &ul+aris u fost de uti!i)te n construire de

4iosensori o-tici şi e!ectroc*i+ici K -olosit dup) 50 de "inute ,ntr#o soluţie di"a"ic) ta"pon.

Potenţialul de scanare a -ost ,ntre 0 şi 0.7 % -aţ) de A+:A+l ,n 0.19 ris#?l p? / conţin'nd 1 "9 9+l ! la 30U. %iteza de scanare a -ost de 0.1 % s#1.

APPA ! su-rfţ e!ectrodu!ui de -!tin ! #;C.


34/38

Cu+ s0 -resu-us, de-o)itu! de !"int0ce!u!e !"!e /AA1 induce iniţi! ce!eşi i+-iedicri sterice

c APPA n cee ce -riHeşte ccesu! s-eciei redo3, efect i!ustrt -rin H!ore de curent nodic de >; SA

/9i"ur ((.; µA ! (;; µA şi res-ectiH (;' SA /9i"ur ((.


35/38

$t4i!itte o-erţion! ce!or dou ti-uri de 4iosensori !"!i fost studit -rin nre"istrre

continu rs-unsu!ui de curent +3i+ /I+31 o4ţinut n -re)ent (+M -%PP dis-erst n so!uţi "itt

+"netic de ;.( M Tris0=C! /-= ,


36/38

crcteristici *o!erei /nti0CT1 cu utoru! siste+e!or e!ectroc*i+ice ce fo!osesc +reri en)i+tici c

"!uco0o3id) 4iotini!t /2o30@1, -o!ifeno! o3id) 4iotini!t /PPO0@1 şi -ero3id) /=RP1. Li+ite!e de

detecţie o4ţinute -entru 4iosensorii 2o30@, PPO0@, şi =RP sunt forte sensi4i!e de ( µ"+!, ;.( µ"+! şi

res-ectiH '; n"+! nti CT, ir ti+-u! de răs-uns ! ce!or trei i+unosensorii fost forte r-id +i -uţin

de #; de secunde.

n cee ce -riHeşte detecţi Hirusu!ui Nile $est , te) de doctort descrie 6 ti-uri de

/i+uno14iosensoriN /i1 i+unosensori -entru detecţi nticor-i!or I"2 s-ecifici Hirusu!ui Nile $est sensori

4)ţi -e fotoi+o4i!i)re p*a+ilor#$N% ntr0un fi!+ co-o!i+eric for+t din -iro!04en)ofenon şi

tris/4i-iridin0-iro!1ruteniua /ii1 i+unosensori -entru detecţi nticor-i!or I"2 s-ecifici Hirusu!ui Nile $est

unde p*a+ilor#$N% sunt inc-su!ţi ntr0un fi!+ de -o!i-iro!0!c*i! ++oniua /ii1 sensori cAD% deriHţi

din 8%V unde o!i"onuc!eotid +int este "reft de un fi!+ e!ectro"enert de -o!i-iro!0 su4stituit cu

"ru-u! de %0*idro3isuccini+ida /iH1 sensori cAD% deriHţi din 8%V 4)ţi -e uti!i)re unui interc!tor

redo3 cridic -entru detecţi s-ecific du-!e3u!ui0AD% 8%V. Li+ite de detecţie re+rc4i!e u fosto4ţinute -entru 4iosensorii cu confi"urţi /ii1 de (; 0& nticor-i08%V şi -entru 4iosensorii cu confi"urţi

/iH1 de ( -"+! o!i"onuc!eotid s-ecific -entru 8%V. De se+ene ti+-u! de răs-uns ! cestor 4iosensori

fost forte r-idN ntre '0


37/38

BIBLIO#RAFIE SELECTIVA

5;50>5(#, /


38/38

c*e+istr 0: /.

#0(>6< /

rezumat teza 25sep

Documents