presencia de lactato deshidrogenasa. citocromo oxidasa y succÍnico deshidrogenasa

7/16/2019 PRESENCIA DE LACTATO DESHIDROGENASA. CITOCROMO OXIDASA Y SUCCNICO DESHIDROGENASA

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PRESENCIA DE LACTATO

DESHIDROGENASA. CITOCROMO

OXIDASA Y SUCCNICO

DESHIDROGENASA

S e m e s t re : 2 0 1 3 - 1

2013UNIVERSIDAD NACIONAL MAYOR DE SAN

MARCOS Decana de

amrica

Q.UNIVERSIDAD NACIONAL MAYOR DE SAN MARCOSEscuela de Farmacia y BioqumicaF. Mg. Yadira Fernndez Jer

Docente:

Q.F. Mg. Yadira Frnandez Jer

Integrantes:

Alderete Espejo, Hattie.

Moleros Coral, Diego Alejandro.

Porras Cochachi, Katia Rub.

Quiones Huayaney, Mara Eugenia.

Tolentino Chvez, Jorge Luis


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UNIVERSIDAD NACIONAL MAYOR DE SAN MARCOSPRESENCIA DE LACTATO DESHIDROGENASA. CITOCROMO OXIDASA YSUCCNICO DESHIDROGENASA

ASIGNATURA: Bioqumica I

PRESENCIA DE LACTATODESHIDROGENASA, CITOCROMO OXIDASAY SUCCNICO DESHIDROGENASA

OBJETIVOS

Identificar la presencia de citocromo y el efecto de inhibidores sobre lacadena transportadora de electrones.

Evaluar la actividad de la enzima lactato deshidrogenasa en tejidos deres.

Determinar la actividad de la succinato deshidrogenasa en la fraccinmitocondrial de hgado de res en presencia y en ausencia de un inhibidorcompetitivo de la enzima.

INTRODUCCIN

En esta prctica se evaluaron las enzimas lactato deshidrogenasa(LDH), que asu vez se libera al plasma como consecuencia de la destruccin celular(fisiolgica o patolgica) y es un marcador de destruccin celular sensibleaunque poco especfico. Por otro lado la succinato deshidrogenasa odeshidrogenasa del cido succnico, es una oxidorreductasa que cataliza laoxidacin del succinato para formar fumarato siendo la coenzima el FAD.

Para ello se hizo la extraccin y preparacin de las enzimas y coenzimas,provenientes del corazn y del hgado de res, eliminando completamente lagrasa y el tejido conectivo, para el lavado se utiliz KCl 0.154M, para hacer

luego un homogenizado. Posteriormente se hizo un seguimiento de la reaccincatalizada por el lactato deshidrogenasa, en donde el sustrato fue lactato desodio 0.1M, azul de metileno como indicador y el aceite mineral para protegerla oxidacin del azul de metileno. Por otro lado se identific al malonato desodio 0.1M como inhibidor especfico, puesto que slo acta a nivel de la

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succinato deshidrogenasa, mientras que el cianuro de sodio 0.1M es un

inhibidor del citocromo oxidasa, el buffer fosfato 0.1M dio el medio adecuado.

Es posible distinguir 5 isoenzimas de la LDH, que permiten diferenciar hastacierto punto el rgano u rganos de procedencia. As, la LDH-1 procede en el60% del msculo cardaco, mientras que la LDH-5 procede mayoritariamentedel hgado y la piel.

MARCO TERICOLACTATO DESHIDROGENASA (LDH)Es una enzima que cataliza una parte del metabolismo anaerbico de laglucosa y de la sntesis de la glucosa, los humanos disponemos de dos cadenaspolipeptdicas isoenzimticas para esta enzima: el isoenzima H que se expresaabundantemente en el msculo cardiaco y el isoenzima M que lo hace en elmsculo esqueltico1. Hay cinco forma isoenzimticas distintas codificadas porgenes distintos. Su funcin es la de reducir reversiblemente el piruvato a

lactato.

La lactato deshidrogenasa (LDH) aparece en altas concentraciones en muchosrganos, a diferencia de otras enzimas. Se encuentra gran cantidad dedeshidrogenasa lctica especialmente en el hgado, los msculos, los glbulosrojos (eritrocitos) y los riones. Las concentraciones elevadas de lactatodeshidrogenasa son clnicamente importantes y pueden encontrarse enestados patolgicos que causan dao celular. Los infartos del miocardio,enfermedades hepticas y renales, anemias megaloblsticas, distrofiamuscular progresiva y algunas neoplasias producen altos valores de lactato

deshidrogenasa en el suero2

.PRINCIPIO:

El lactato deshidrogenasa convierte el L-lactato y NAD en piruvato y NADH. Elndice de incremento en absorbancia de la mezcla de reaccin a 340 nm,debido a la formacin del NADH, es proporcional a la actividad de la LDH.


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SUCCNICO DESHIDROGENASA (SDH)La enzima succinato deshidrogenasa (SDH, E.C. 1.3.99.1) es una flavoprotenaque participa en el ciclo de Krebs y al estar asociada a la membrana internamitocondrial, tambin forma parte la cadena de transporte electrnicomitocondrial. La SDH cataliza estereoespecficamente la deshidrogenacin entrans del cido succnico hasta cido fumrico. Esta enzima se inhibe pormalonato y maleato, que son anlogos estructurales del succinato3.


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Eldficitde

succnico semialdehdo deshidrogenasa (SSADH) es una enfermedad deexpresin clnica variable e inespecfica, pudiendo presentar en sus iniciosmoderado a severo retardo del desarrollo motor con hipotona global y reflejosconservados (hipo o hiperrreflexia), y posterior retraso en la manipulacin deobjetos, con movimientos coreoatetsicos y ataxia truncal.Si bien el retraso del desarrollo, la hipotona y el retardo mental constituyen lascaractersticas clnicas ms constantes del dficit de SSADH (74 a 78%)aproximadamente el 50% de los pacientes presentan trastornos de conducta,

ataxia y convulsiones; pudiendo ser stas tnico-clnicas, mioclnicas o crisisde ausencias.

CITOCROMO OXIDASA


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La citocromo C-oxidasa es un enzima que cataliza la transferencia de

electrones al oxgeno para dar agua, constituye lo que se conoce comocomplejo 4 de la cadena de transporte electrnico y est presente en todos losorganismos aerobios (es decir que utilizan el oxgeno como aceptor deelectrones).Los citocromos son protenas que contienen porfirinas que tienen ligado untomo de hierro. Existen citocromos que son hidrosolubles, otros que sonliposolubles. Otra peculiaridad es que existen citocromos mviles como porejemplo el citocromo c. Aunque la gran mayora funcionan asociadas amacromolculas como pueden ser los complejos III y IV.

Los citocromos son enzimas transportadoras de electrones quetienen ferroporfirina como grupo prosttico. Los citocromos fueron descubiertosy designados originalmente como histohematinas por C. MacMunn en 1866, susignificado en las funciones biolgicas fue descrito por D. Keilin en este siglo,quien los nombr como citocromos. La determinacin de sus propiedadesespectroscpicas lo realiz enun espectroscopio manual, utilizandomsculos de insecto; observ cmo

aparecan y desaparecan bandas deabsorcin con la actividad muscular.Finalmente los agrup en tres clasesdiferentes: a, b y c, segn las bandascaractersticas de cada uno.Cada tipode citocromo en estado reducidoexhibe tres bandas de absorcincaractersticas en el espectro de luzvisible, a, b, y g o Soret.La mayora de los citocromos son muy

difciles de purificar pues estnembebidos en las membranas,excepto el citc que puede ser aisladomediante disoluciones salinas; el hemo de este citocromo, est unido a laprotena por puentes tioster entre el anillo de porfirina y dos residuos de Cys,es el nico en donde hay un enlace covalente4.


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CICLO DE KREBSEl ciclo de Krebs (de los cidos tricarboxlicos o del cido ctrico) es una vametablica presente en todas las clulas aerobias, es decir, las que utilizanoxgeno como aceptor final de electrones en la respiracin celular. En losorganismos aerobios las rutas metablicas responsables de la degradacin delos glcidos, cidos grasos y aminocidos convergen en el ciclo de Krebs, que asu vez aporta poder reductor a la cadena respiratoria y libera CO25

Reacciones del Ciclo de Krebs:

1. La acetil-CoA (2C) se une al cido oxalactico (4C) y forma cido ctrico (6C).La CoA se libera as y puede volver a reaccionar con ms cido pirvico.2. Isomerizacin del cido ctrico, que pasa a Isocitrato3. Oxidacin del Isocitrato por el NAD+ producindose cido cetoglutrico (5C),NADH y una molcula de CO24. Descarboxilacin oxidativa del -cetoglutrico, debida al NAD+ que vuelve adar NADH y una molcula de CO2. El resto acilo (4C) se une al CoA, y formasuccinil-CoA.

5. Hidrlisis del succinil-CoA para liberar la energa del enlace, que se transfiereal GTP, un nucletido de alta energa, mediante fosforilacin a nivel desustrato. As se forman succinato y CoA.6. Transformacin del succinato en malato, gracias al FAD, que es usado comocoenzima por una deshidrogenasa y se transforma en FADH2


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ANARANJADO DE METILONaranja de metilo es un colorante azoderivado, con cambio de color de rojo anaranja-amarillo entre pH 3,1 y 4,4. El nombre del compuesto qumico delindicador es sal sdica de cido sulfnico de 4-Dimetilaminoazobenceno. Lafrmula molecular de esta sal sdica es C14H14N3NaO3S y su peso molecular esde 327,34 g/mol

MATERIALES:


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- 10 tubos de ensayo.

- 2 Matraces Erlenmeyer de 150 mL.

- Beaker de 500 mL.

- Homogenizador.

- 4 pipetas 5 mL.

- 5 pipetas 2 mL.

- 2 tubos de centrifuga.

- 1 Gradilla.

- Un pipeteador.

REACTIVOS:

- KCl 0,154 M.

- Lactato de Sodio 0.1M.

- Sol. De Azul de Metileno 0,01%.

- Buffer fosfato 0,1M ypH 7,4.

- Solucin malonato de sodio 1%.

- Solucin de cianuro de potasio 0,05M.

- Solucin de p-fenilendiamina al 1%.

- Solucin de succinato de sodio al 1%.

- Aceite mineral.

- Agua destilada.

- Bao de hielo.

- Tejido heptico fresco.

- Tejido cardiaco fresco.


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El mtodo de ensayo de la actividad SDH se basa en la utilizacin de un

aceptor artificial de electrones

PARTE EXPERIMENTAL1. Seguimiento de la reaccin catalizada por lactato deshidrogenasa

2. Seguimiento de la reaccin por la

citocromo oxidasa.

Reactivo Funcin.Lactato deSodio 0.1M

Sustrato

Sol. De Azul deMetileno.

Indicador de reaccin.

Cianuro deSodio

Inhibidor del sistemacitocromo.

Malonato de

Sodio

Inhibidor

Homogenizadode corazn.

Fuente de LactoDeshidrogenasa.

Sol. de p-fenilendiamina

Sustrato.


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Actividad sobre el Piruvato.

Lactato deshidrogenasa. Estructura

tridimensional.


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3. Seguimiento de la reaccin catalizada por la Succnico deshidrogenasa.

Reactivo Funcin.Sol. De Azul deMetileno.

Indicador de reaccin.

Succinato de Sodio0.1M

Sustrato

Malonato de Sodio InhibidorCianuro de Sodio InhibidorFerricianuro de Sodio InhibidorHomogenizado deHgado.

Fuente de LactoDeshidrogenasa.


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A todos los tubos inmediatamente despus de agregarles losreactivos se les agrego 1 mL de aceite mineral para evitar lainterferencia del oxgeno en la reaccin.


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RESULTADOSEnsayo 1

SEGUIMIENTO DE LA REACCIN CATALIZADA POR LA LACTATO DESHIDROGENASA

COMPONENTES TUBO1 TUBO2 TUBO3 TUBO4

Lactato de sodio 0.1M 1.0 0.0 1.0 0.0

Sol. De azul de metileno 1.0 1.0 1.0 1.0

Homogenizado de hgado 0.5 0.5 - -

Homogenizado de corazn - - 0.5 0.5

OBSERVACIONES Solucinazulturquesa

Solucinazulturquesaoscuro

Solucinazulada

Solucinazuladaoscura

RESULTADOS ++ +++ ++ +++

Reaccin6:


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Ensayo 2

SEGUIMIENTO DE LA REACCIN CATALIZADA POR LA CITOCROMO OXIDASA

COMPONENTES

TUBO1 TUBO2 TUBO3 TUBO4

Homogenizado de corazn

0 1.0 1.0 1.0

Cianuro desodio 0.1M

0.0 0.0 0.5 0.0

Malonato desodio 0.1M 0.0 0.0 0.0 0.5

Sol.P-Fenilendiamina

1.0 1.0 1.0 1.0

Buffer fosfato0.1M ,pH 7,4

1.5 0.5 0.0 0.0

OBSERVACIONES

Solucinincolora

Solucin marrnrojiza

Solucinanaranjada

Solucinmarrn rojiza

RESULTADOS - +++ ++ +++

Reaccin7

:2 Citocromo c reducido + 2H+ + O2 2Citocromo coxidado +H2O


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2Citocromo c oxidado + P-Fenilendiamina Compuesto

coloreado (marrn rojizo)

ENSAYO 3

SEGUIMIENTO DE LA REACCIN CATALIZADA POR LA SUCCNICODESHIDROGENASA

REACTIVOS TUBO1 TUBO2 TUBO3 TUBO4 TUBO5 TUBO6 TUBO7

Azul de metileno(0.02%)

0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5

Buffer fosfato 0.1MpH 7,4

0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5

Succinato de sodio0.1M

0.2 0.2 - 0.2 - 0.2 -

Agua bi-destilada - - 0.2 - 0.2 - 0.2

Malonato de sodio - 0.3 0.3 - - - -

Cianuro de sodio0.1M - - - 0.3 0.3 - -

Ferricianuro depotasio 0.1M

- - - - - 0.3 0.3

Homogenizado dehgado

0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5


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OBSERVACIONES Soluci

nincolora

Soluci

n verdeincolora

Soluci

nazulada

Soluci

nverdeincolora

Soluci

nazulada

Soluci

nverdosa

Soluci

n

Verdosa

RESULTADOS - - ++ - ++ +++ +++

Reaccin8:

DISCUSIONES:

1. EXTRACCIN YPREPARACIN DE LAS ENZIMAS Y COENZIMAS

Los resultados obtenidos en todas las mesas de trabajo no fueron muyeficientes debido a que la extraccin y preparacin de la muestra serealiz con muchos das de anticipacin a la prctica. Por ello se debetener en cuenta el rendimiento y la pureza de cada fraccin celular a usar


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o cada homogenizado. Adems la lactato deshidrogenasa solo tiene una

vida media de 113 horas aproximadamente (9). La conservacin parcial del homogenizado se obtuvo gracias a los

lavados con KCl, pues esta sal detiene la actividad enzimtica. Elmecanismo de accin de esta sal es someter a las clulas a un mediohipertnico, obligando as a la salida del agua junto a otros componentesresponsables de la degradacin celular. (10)

Adems esta conservacin enzimtica parcial tambin fue posible graciasal hielo. Esto se debe a que las bajas temperaturas inactivan a lasenzimas y permiten conservar los tejidos.

2. SEGUIMIENTO DE LA REACCIN CATALIZADA POR LA LACTATO

DESHIDROGENASA

La LDH es una enzima citoplasmtica. Su centro activo se encuentra en elinterior de cada subunidad, siendo especfico para el lactato, y utilizanicamente NAD+ como coenzima. Pero, a pesar que en la reaccin noagregamos el NAD+ la reaccin si se realiz, esto es debido a que se utiliz unhomogenizado en el cual ya se contaba con esa coenzima (11).

El azul de metileno funciona como un indicador de tipo REDOX, se utiliza comoaceptor de hidrogeno (tiene carga positiva y se une a compuestos cargadosnegativamente), pues posee la propiedad muy til de cambiar de color al pasarde oxidado a reducido. Es azul de metileno cuando esta oxidado y blanco(incoloro) de metileno cuando esta reducido. El azul de metileno al ser unindicador de REDOX y no de viraje de pH, podramos utilizar en su lugar unindicador con la misma propiedad como la sal frrica de la ortofenantrolina,que cambia de azul plido(forma oxidada) a rojo(forma reducida) o el cidodifenilaminosulfnico, que cambia de incoloro(forma oxidada) a violeta(formareducida).

La reaccin con el homogenizado de hgado present mayor decoloracin queel homogenizado de corazn, lo que puede significar que en el primero haymayor presencia de enzimas. Sin embargo, es necesario recalcar que Laisoenzima M4 (presente en el hgado) tiene mayor afinidad por piruvato y la H4


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(presente en el corazn) por lactato. Es decir, la concentracin de enzimas en

el hgado influenci ms que la afinidad de la enzima por el lactato (12).

En los tubos 2 y 4 la decoloracin por la reduccin del azul de metileno fuecasi imperceptible debido a que La LDH es una enzima cuyo sustrato especficoes el lactato. Al no encontrarse dicho sustrato en la solucin no pudo habertransferencia de electrones y por ende no se realiz la reaccin REDOX (13).

3. SEGUIMIENTO DE LA REACCIN CATALIZADA POR LA CITOCROMOOXIDASA

El ensayo en la prueba inhibidora del Malonato nos dio una coloracin rojizamarrn, lo que indicaba que la reaccin se desarroll normalmente, sinembrago segn referencias el Malonato es un inhibidor, entonces la reaccin sedio porque el Malonato acta sobre el succinato, pero no acta o inhibe alcitocromo oxidasa. La coloracin marrn rojiza es ocasionada porque lafenilendiamina se oxida.

El cianuro de sodio presento una coloracin anaranjada, se debe a una reaccindel homogeneizado con el sustrato fenilendiamina, en donde el cianuro es uninhibidor que inhibe al citocromo c impidiendo el flujo normal de electrones

para que se oxide el sustrato.Las reacciones que se hicieron fueron hechas con homogeneizados, lo cual nospuede indicar que en este homogeneizado no solo se encuentra la enzima quedeseamos sino su cofactor, parte de su sustrato y entre otros

4. SEGUIMIENTO DE LA REACCIN CATALIZADA POR LA SUCCINICODESHIDROGENASA

En el tubo N1 se obtuvo una decoloracin mucho mayor que en los demstubos, eso se debe a la presencia del sustrato (succinato de sodio), el medioptimo de pH (7,4) y al compuesto azul de metileno (indicador tipo REDOX).Cabe recordar que para que la enzima succinato deshidrogenasa acte,necesita una protena (FAD) el cual funciona como aceptor de hidrgenooxidando as al succinato a fumarato y reduciendo el azul de metileno a blanco


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de metileno (incoloro). El FAD no fue agregado porque el homogenizado, al ser

parte de un organismo vivo, cuenta ya con esa flavoprotena (14).

En todos los tubos solo se trabaj con el homogenizado de hgado debido a q elsuccinato deshidrogenasa es la nica enzima que no se encuentra en la matriz,en cambio est ligado a la membrana mitocondrial de hgado de ratas hembrasy macho. Por ello resulta ms eficiente trabajar solo con el homogenizado dehgado (15).

En los tubos 2 y 3, no se aprecia una decoloracin de la solucin, esto se debea que la Succinato Deshidrogenasa es inhibida por el Malonato, con estructura

semejante al Succinato, que nicamente tiene un metilo (-CH2-) y no se puedeoxidar por deshidrogenacin. Otro compuesto que tambin la inhibe es elOxalacetato, que tampoco se puede deshidrogenar (16).

El cianuro es un inhibidor enzimtico no especfico, se conoce que el cianuro seune e inactiva aproximadamente 40 enzimas, entre las cuales se encuentra lasuccnica deshidrogenasa. Es por ello que los tubos 4 y 5 que fueron sometidosa esta solucin de cianuro, permanecieron casi azul. Sin embargo, se pudopresenciar una ligera decoloracin, la cual se debe a que el cianuro bloqueaprincipalmente la citocromo oxidasa y con menos intensidad el succinato

deshidrogenasa (17).La presencia del substrato (succinato), en los tubos 6 y 7, permite que dichosuccinato se oxide, proceso que implica un transporte de electrones, los cualesson captados por el ferrocianuro, el cual se va decolorando a medida que elloocurre, pero luego son liberados algunos electrones y son captados por el azulde metileno. Es por ello que la solucin tom un color verde plido, de lamezcla del azul de metileno y el ligero color amarillo del ferricianuro (oxidado)(18).

CONCLUSIONES:


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Se determin la actividad de las enzimas, citocromo oxidasa, cuya

importancia en la actividad reside en el metabolismo oxido-reduccin.Los inhibidores actan especficamente en un lugar de la cadena detransporte de electrones. El cianuro de hidrogeno inhibe la citocromo coxidasa, Malonato de sodio inhibe en la parte que los electrones llegan alsuccinato deshidrogenasa.

El tejido de res presenta lactato deshidrogenasa, que segn losexperimentos podemos deducir que el homogeneizado de hgado posee

ms enzima lactato deshidrogenasa que el homogeneizado de corazn.Esto fue comprobado por una diferencia de coloracin con la reduccindel azul de metileno.

Se determin la actividad enzimtica de la enzima succinatodeshidrogenasa del tejido de la res, usando como indicador la reduccindel azul de metileno. EL uso de un buffer era indispensable para losestudios debido a que la enzima requiere de estos medios. El Malonato esun inhibidor, el cianuro de hidrogeno es un inhibir que acepta los

electrones y el azul de metileno no se reduce, el ferricianuro de potasioacepta los electrones, este se reduce y se aprecia el color verde.


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REFERENCIAS BIBLIOGRFICAS:

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5. Teijn, Jos Mara. Fundamentos de Bioqumica metablica.Pag.37

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14. Virginia Melo,Virginia Melo Ruiz,Oscar Cuamatzi. Bioqumica de losprocesos metablicos.Barcelona: Revert; 2007.

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CUESTIONARIO:

1. Cul es la importancia del sistema redox en el metabolismo energtico?

REACCIN REDOX

En los sistemas vivos, las reacciones que capturan energa (fotosntesis) y las

reacciones que liberan energa (gluclisis y respiracin), son reacciones de oxidacin-reduccin.La oxidacin completa de un mol de glucosa libera 686 kilocaloras de energa libre;de modo inverso, la reduccin del dixido de carbono para formar un mol de glucosaalmacena 686 kilocaloras de energa libre en los enlaces qumicos de la glucosa.Si esta energa fuera liberada de una sola vez, la mayor parte se disipara como calor.

Esto no solamente no sera til para la clula, sino que la alta temperatura resultantesera letal. Sin embargo, la vida ha evolucionado adquiriendo mecanismos que regulanla marcha de estas reacciones qumicas y una multitud de otras, de modo tal que laenerga se almacena en enlaces qumicos particulares de los que puede ser liberadaen pequeas cantidades cuando la clula lo necesite. Estos mecanismos, con laaparicin de nuevos tipos de molculas, permiten un aprovechamiento eficaz de la

energa sin alterar el delicado equilibrio que caracteriza a los sistemas biolgicos.Implican generalmente secuencias de reacciones, algunas de las cuales sonreacciones de oxidacin-reduccin. Aunque cada reaccin en la secuencia representasolamente un pequeo cambio en la energa libre, el cambio global de energa librepara la secuencia puede ser considerable.


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2. Usos clnicos de la evaluacin de las enzimas estudiadas.

LACTATO DESHIDROGENASA LDH: El examen de sangre mide la cantidad dedeshidrogenasa lctica (DHL).Razones por las que se realiza el examenLa deshidrogenasa lctica (DHL) se mide con mayor frecuencia para verificar daotisular. La enzima de deshidrogenasa lctica se encuentra en muchos tejidos delcuerpo, especialmente el corazn, el hgado, el rin, el msculo esqueltico, lasclulas sanguneas del cerebro y los pulmones.La deshidrogenasa lctica (DHL) afecta la reaccin qumica para la conversin delpiruvato y el lactato. Los msculos en ejercicio convierten la glucosa en lactato (y los

glbulos rojos la metabolizan). El lactato luego es liberado en la sangre y finalmenteabsorbido por el hgado, el cual lo convierte de nuevo en glucosa y libera dichaglucosa en la sangre. Los msculos en reposo, los glbulos rojos y otros tejidosabsorben luego esta glucosa.Valores normalesLos valores normales pueden variar ligeramente de un laboratorio a otro. Un rangotpico es de 105 a 333 UI/L (unidades internacionales por litro).Significado de los resultados anormalesLos niveles superiores a los normales pueden ser indicio de:

Accidente cerebrovascular (ACV, apopleja) Ataque cardaco

Anemia hemoltica Presin arterial baja Mononucleosis infecciosa Deficiencia de sangre (Isquemia intestinal ) Enfermedad heptica (por ejemplo, hepatitis) Lesin muscular Distrofia muscular Estados (neoplsicos) de formacin anormal de nuevos tejidos Pancreatitis Muerte de tejido (infarto pulmonar) Si se eleva el nivel de DHL, el mdico puede ordenar una medicin de las

isoenzimas de deshidrogenasa lctica.Otras afecciones bajo las cuales se puede realizar el examen son:

Anemia por deficiencia de B12 Anemia megaloblstica Anemia perniciosa


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CITOCROMO OXIDASA:

La enzima citocromo oxidasa cede electrones de un sustrato de oxgeno, en el tren detransportes de electrones. Se usa para diferenciar pseudomonas, oxidasa +enterobacterias, oxidasa -, neisserias.

Todas las especies de pseudomonas y neisseria producen la oxidasa que, cuando seencuentra en presencia del oxgeno atmosfrico, citocromo C y reactivo oxidasa,oxidan al reactivo para formar un compuesto coloreado. Existen comercializacin dediscos o tiras de papel ya listo para la determinacin. La aparicin de una coloracinpurpura sobre la zona de inoculacin se considerara reaccin +.

Datos clnicos y anlisis clnicos recientes:Nio de 11 aos de edad que consulta por torpeza motriz, dificultad en la coordinacinde los movimientos y lentitud en su ejecucin, retraso escolar y pie cavo derecho.

Presenta tics de cierre palpebral de un mes de evolucin.Los problemas que tena el nio se vieron afectadas por dficit de citocromoC oxidada (1).

SUCCINATO DESHIDROGENASAEl papel fundamental de succinato-coenzima Q reductasa en la cadena detransferencia de electrones de las mitocondrias hace que sea vital en la mayora de losorganismos multicelulares, la eliminacin de esta enzima a partir del genoma tambinse ha demostrado ser letal en la fase embrionaria en ratones.

SDHA mutaciones pueden llevar al sndrome de Leigh, encefalopatamitocondrial, y atrofia ptica.

Mutaciones SDHB pueden conducir a la tumorognesis de clulas cromafines,causando paraganglioma hereditario y feocromocitoma hereditario. Los tumorestienden a ser maligno. Tambin puede conducir a la disminucin de la vida til yel aumento de la produccin de iones superxido.

SDHC mutaciones pueden llevar a una disminucin de la vida til, el aumentode la produccin de iones superxido, paraganglioma hereditario yfeocromocitoma hereditario. Los tumores tienden a ser benignos. Estasmutaciones son poco frecuentes.

SDHD mutaciones pueden llevar a paraganglioma hereditario y feocromocitomahereditario. Los tumores tienden a ser benigna, y se producen a menudo en lasregiones de cabeza y cuello. Estas mutaciones tambin pueden disminuir la vida

til y aumentar la produccin de iones superxido.(5)

3. Mencione 5 inhibidores respiratorios y precise en qu lugar de la cadenarespiratoria ejercen su accin.


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Cianuro y monxido de carbono: Inhiben la cadena de transporte de

electrones unindose ms fuertemente que el oxgeno a los centros Fe-Cu en lacitocromo c oxidasa, evitando la reduccin del oxgeno.

Oligomicina inhibe la ATP sintasa, los protones no pueden ser devueltos a lamitocondria. Como resultado, las bombas de protones son incapaces de operar,y el gradiente se torna demasiado fuerte como para ser superado. NADH dejade ser oxidado y el ciclo del cido ctrico deja de operar porque la concentracinde NAD+ cae por debajo de la concentracin que estas enzimas pueden utilizar.

AntimicinaA, Acta bloqueando la transferencia de electrones entre elcitocromo b y el citocromo c1. En presencia de esta substancia, el citocromo bH

puede ser reducido pero no oxidado, y consecuentemente, el citocromo cpermanece oxidado, al igual que los citocromos a y a3 del Complejo IV. Malonato y oxaloacetato: Inhibidores competitivos de la succinato

dehidrogenasa (complejo II).(3)

Barbitricos,

Piericidina A, Rotenona: Sobre la NADH-deshidrogenasa, bloqueando latransferencia de electrones entre la flavina y la ubiquinona. (Inhibidores delcomplejo I).

4. Mencione 5 aceptores electrnicos artificiales.

1) Ferricianuro:2) Azul de metileno3) 2,6 diclorofenolindofenol4) Menadiona5) Metasulfato de fenacina


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REFERENCIAS BIBLIOGRAFICAS:

I. Aznar Soria. SINDROME DE LEIGH POR DEFICIT DE CITOCROMO C OXIDASA:CASO CLINICO. Pediatr 1996; 45:286-288.

II. Garcia Jose, Sava. Del Carmen. MANUAL TECNICO SUPERIOR DE LABORATORIO DE ANALISISCLICNOS. Ed MAD; 2004:345-3450.

III. Melo Virginia. BIOQUIMICA DE LOS PROCESOS METABOLICOS. Ed Revert.Barcelona; 2007: 205-2010.

presencia de lactato deshidrogenasa. citocromo oxidasa y succÍnico deshidrogenasa

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