pre-analytische evaluatie van calprotectine bepaling in bloed bij … · 2020-06-22 · window of...
TRANSCRIPT
![Page 1: Pre-analytische evaluatie van calprotectine bepaling in bloed bij … · 2020-06-22 · Window of opportunity bij RA Raza et al. Ann Rheum Dis 2012; 71:1921-1923 Gerlag et al. ARD](https://reader033.vdocuments.us/reader033/viewer/2022042402/5f12d7209905ac18b6008406/html5/thumbnails/1.jpg)
Pre-analytische evaluatie van calprotectine bepaling in bloed
bij Reumatoïde ArtritisMarnix Mylemans
ASO Chemie
OLVZ Aalst
![Page 2: Pre-analytische evaluatie van calprotectine bepaling in bloed bij … · 2020-06-22 · Window of opportunity bij RA Raza et al. Ann Rheum Dis 2012; 71:1921-1923 Gerlag et al. ARD](https://reader033.vdocuments.us/reader033/viewer/2022042402/5f12d7209905ac18b6008406/html5/thumbnails/2.jpg)
Inhoud
• Inleiding calprotectine• biologische functies
• rol als biomerker bij RA
• CAT-vraagstelling
• Voorstelling project
• To do’s
![Page 3: Pre-analytische evaluatie van calprotectine bepaling in bloed bij … · 2020-06-22 · Window of opportunity bij RA Raza et al. Ann Rheum Dis 2012; 71:1921-1923 Gerlag et al. ARD](https://reader033.vdocuments.us/reader033/viewer/2022042402/5f12d7209905ac18b6008406/html5/thumbnails/3.jpg)
Calprotectine
• Heterodimeer van de Ca2+-bindende eiwitten S100A8/S100A9 (MRP8/14, calgranulin A/B)
• Typisch in neutrofielen, mono/macrofagen• 50% van totaal cytosolisch eiwitgehalte in neutro’s
• Ook homodimeren/heterotetrameren/oligomeren• Heterodimeer: intracellulair
• Heterotetrameer: extracellulair
Stephan et al. Am J Chem Soc. 2018;140(50):17444-17455
Korndörfer et al. J Mol Biol. 2007;370(5):887-898
![Page 4: Pre-analytische evaluatie van calprotectine bepaling in bloed bij … · 2020-06-22 · Window of opportunity bij RA Raza et al. Ann Rheum Dis 2012; 71:1921-1923 Gerlag et al. ARD](https://reader033.vdocuments.us/reader033/viewer/2022042402/5f12d7209905ac18b6008406/html5/thumbnails/4.jpg)
Intracellulaire functies van CLP
Belangrijkste functies:• Cytoskelet regulatie
• Leukocyt migratie en chemotaxis
• Amplificatie van het inflammatoir proces
• Rechtstreeks antibacterieel effect door chelatie zink en mangaan
Secretie van CLP:1. actief via PKC pathway2. vrijzetting in NETs3. lekage uit necrotische cellen
Ometto et al. Exp Biol Med. 2017; 242; 859-873
![Page 5: Pre-analytische evaluatie van calprotectine bepaling in bloed bij … · 2020-06-22 · Window of opportunity bij RA Raza et al. Ann Rheum Dis 2012; 71:1921-1923 Gerlag et al. ARD](https://reader033.vdocuments.us/reader033/viewer/2022042402/5f12d7209905ac18b6008406/html5/thumbnails/5.jpg)
Extracellulaire functies van CLP
• CLP productie vindt plaats door neutrofielen in ontstoken gewricht ↔ CRP < lever o.i.v. IL-6 tgv systemisch inflammatoire activiteit
• CLP in serum/plasma correleert goed met concentraties in synoviaal vocht en lijkt dus een goed surrogaat voor de inflammatie in het gewricht.
Ometto et al. Exp Biol Med 2017; 242; 859-873
Hammer et al. Clin Exp Rheumatol 1995; 13: 59-64
![Page 6: Pre-analytische evaluatie van calprotectine bepaling in bloed bij … · 2020-06-22 · Window of opportunity bij RA Raza et al. Ann Rheum Dis 2012; 71:1921-1923 Gerlag et al. ARD](https://reader033.vdocuments.us/reader033/viewer/2022042402/5f12d7209905ac18b6008406/html5/thumbnails/6.jpg)
CLP medieert gewrichtsschade in een RA-muismodel
CLP KO-muis:-minder proteoglycaan depletie-minder MMP-gemedieerde degradatie-quasi geen kraakbeen necrose-significant lagere expressie van MMP3/9/13
Van Lent et al. Ann Rheum Dis. 2008;67(12):1750-1758.
![Page 7: Pre-analytische evaluatie van calprotectine bepaling in bloed bij … · 2020-06-22 · Window of opportunity bij RA Raza et al. Ann Rheum Dis 2012; 71:1921-1923 Gerlag et al. ARD](https://reader033.vdocuments.us/reader033/viewer/2022042402/5f12d7209905ac18b6008406/html5/thumbnails/7.jpg)
CLP als biomerker bij RA
Window of opportunity bij RA
Raza et al. Ann Rheum Dis 2012; 71:1921-1923Gerlag et al. ARD 2012;71:638-641
Kenmerken goede biomerker in context RA
1. Vroege diagnose
2. Prognostische indicator → Pt’n met hoog risico op ernstigere vormen van RA identificeren
![Page 8: Pre-analytische evaluatie van calprotectine bepaling in bloed bij … · 2020-06-22 · Window of opportunity bij RA Raza et al. Ann Rheum Dis 2012; 71:1921-1923 Gerlag et al. ARD](https://reader033.vdocuments.us/reader033/viewer/2022042402/5f12d7209905ac18b6008406/html5/thumbnails/8.jpg)
Aanpassing ACR/EULAR criteria met oog op vroegtijdige diagnose
Arnett et al. Arthritis Rheum 1988;31:315-24Aletaha et al. Ann Rheum Dis 2010;62:2569-2581
ACR 1987
≥ 4/7=RA
ACR/EULAR 2010
≥ 6/10=RA
![Page 9: Pre-analytische evaluatie van calprotectine bepaling in bloed bij … · 2020-06-22 · Window of opportunity bij RA Raza et al. Ann Rheum Dis 2012; 71:1921-1923 Gerlag et al. ARD](https://reader033.vdocuments.us/reader033/viewer/2022042402/5f12d7209905ac18b6008406/html5/thumbnails/9.jpg)
CLP als biomerker bij RA
Raza et al. Ann Rheum Dis 2012; 71:1921-1923Gerlag et al. ARD 2012;71:638-641
Kenmerken goede biomerker in context RA
1. Vroege diagnose
2. Prognostische indicator → Pt’n met hoog risico op ernstigere vormen van RA identificeren
3. Accuraat ziekteactiviteit weerspiegelen → effect van behandeling opvolgen
4. Respons op behandeling inschatten → therapiekeuze sturen
van Vollenhoven. Nat Rev Rheumatol. 2019; 15:180-186
Treat-to-target strategie bij RA
![Page 10: Pre-analytische evaluatie van calprotectine bepaling in bloed bij … · 2020-06-22 · Window of opportunity bij RA Raza et al. Ann Rheum Dis 2012; 71:1921-1923 Gerlag et al. ARD](https://reader033.vdocuments.us/reader033/viewer/2022042402/5f12d7209905ac18b6008406/html5/thumbnails/10.jpg)
CLP als biomerker bij RA
• CRP, ESR of RF zijn negatief bij presentatie in 35-45% *
→ Talrijke studies tonen aan dat CLP correleert met ziekteactiviteit (DAS-28)
• CRP is niet bruikbaar bij patiënten behandeld met IL-6 inhibitoren **
→ CLP voor opvolging inflammatie/detectie van infectie
• Nauwkeurige inschatting van ziekteactiviteit is cruciaal voor treat-to-target strategie om best mogelijke outcome te bekomen
**Jarlborg et al. Arthritis Research & Therapy. 2020
*Sokka et al. J Rheumatol. 2009;36(7):1387-1390
![Page 11: Pre-analytische evaluatie van calprotectine bepaling in bloed bij … · 2020-06-22 · Window of opportunity bij RA Raza et al. Ann Rheum Dis 2012; 71:1921-1923 Gerlag et al. ARD](https://reader033.vdocuments.us/reader033/viewer/2022042402/5f12d7209905ac18b6008406/html5/thumbnails/11.jpg)
CLP als biomerker bij RA
• CLP correleert met biochemischeen klinische merkers van ziekteactiviteit
Bae et al. Postgrad Med. 2017; 129(5):531-537
• Significant hogere serum CLP bij RA t.o.v. controle• Significant hoger synoviaal CLP t.o.v. controle• Significante correlatie tussen CLP en CRP/DAS28
CRP
DAS28
![Page 12: Pre-analytische evaluatie van calprotectine bepaling in bloed bij … · 2020-06-22 · Window of opportunity bij RA Raza et al. Ann Rheum Dis 2012; 71:1921-1923 Gerlag et al. ARD](https://reader033.vdocuments.us/reader033/viewer/2022042402/5f12d7209905ac18b6008406/html5/thumbnails/12.jpg)
CLP als biomerker bij RA
• CLP correleert met radiologische/echografische merkers van ziekteactiviteit
Hammer et al. Ann Rheum Dis.
2010;2(69):150-154Hammer et al. Ann Rheum Dis.
2007 ;66:1093–109
Mansour et al. J Med Ultrasound. 2017;25(1):40-46
![Page 13: Pre-analytische evaluatie van calprotectine bepaling in bloed bij … · 2020-06-22 · Window of opportunity bij RA Raza et al. Ann Rheum Dis 2012; 71:1921-1923 Gerlag et al. ARD](https://reader033.vdocuments.us/reader033/viewer/2022042402/5f12d7209905ac18b6008406/html5/thumbnails/13.jpg)
Inciarte-mundo et al. Arthritis Care Res. 2016;68(7):899-906
CLP als biomerker bij RA• CLP is accurater dan CRP bij laag inflammatoire activiteit en correleert
met subklinische ziekteactiviteit bij RA in klinische remissie
Hurnakova et al. Plos One. 2016;11(11):1-14
![Page 14: Pre-analytische evaluatie van calprotectine bepaling in bloed bij … · 2020-06-22 · Window of opportunity bij RA Raza et al. Ann Rheum Dis 2012; 71:1921-1923 Gerlag et al. ARD](https://reader033.vdocuments.us/reader033/viewer/2022042402/5f12d7209905ac18b6008406/html5/thumbnails/14.jpg)
CLP als biomerker bij RA
• CLP voorspelt respons op biologicals en conventionele DMARDs…
Patro et al. J Rheumatol. 2016; 43(4):731-737
Choi et al. Ann Rheum Dis. 2015;74(3):499-505
![Page 15: Pre-analytische evaluatie van calprotectine bepaling in bloed bij … · 2020-06-22 · Window of opportunity bij RA Raza et al. Ann Rheum Dis 2012; 71:1921-1923 Gerlag et al. ARD](https://reader033.vdocuments.us/reader033/viewer/2022042402/5f12d7209905ac18b6008406/html5/thumbnails/15.jpg)
CLP als biomerker bij RA
… en voorspelt herval/opflakkering tijdens of na stop behandeling
De Moel et al. Arthritis Res Ther. 2019;21(1):1-8
→ Potentieel nut voor CLP als biomerker, met name in therapiemonitoring en follow-upvan medicatie-vrije remissie
![Page 16: Pre-analytische evaluatie van calprotectine bepaling in bloed bij … · 2020-06-22 · Window of opportunity bij RA Raza et al. Ann Rheum Dis 2012; 71:1921-1923 Gerlag et al. ARD](https://reader033.vdocuments.us/reader033/viewer/2022042402/5f12d7209905ac18b6008406/html5/thumbnails/16.jpg)
Huidige probleemstelling
• Veel studies naar klinisch nut van CLP bij RA, doch grote inter-studyvariabiliteit ~ analytische en pre-analytische factoren• → maakt vergelijking van resultaten tussen studies moeilijker
• Pre-analytische variabelen van CLP-bepaling in serum/plasma weinig bestudeerd
![Page 17: Pre-analytische evaluatie van calprotectine bepaling in bloed bij … · 2020-06-22 · Window of opportunity bij RA Raza et al. Ann Rheum Dis 2012; 71:1921-1923 Gerlag et al. ARD](https://reader033.vdocuments.us/reader033/viewer/2022042402/5f12d7209905ac18b6008406/html5/thumbnails/17.jpg)
Vraagstelling
Wat is de impact van pre-analytische variabelen
op de bepaling van calprotectine in serum/plasma?
![Page 18: Pre-analytische evaluatie van calprotectine bepaling in bloed bij … · 2020-06-22 · Window of opportunity bij RA Raza et al. Ann Rheum Dis 2012; 71:1921-1923 Gerlag et al. ARD](https://reader033.vdocuments.us/reader033/viewer/2022042402/5f12d7209905ac18b6008406/html5/thumbnails/18.jpg)
Projectvoorstelling
• Studiepopulatie• 10 gezonde vrijwilligers
• 25-63 jaar• M/V = 4/6• CRP < 5mg/L
• Pre-analytische variabelen• Staaltype• Tijd tot centrifugatie• Bewaringstemperatuur• Bewaringstijd
![Page 19: Pre-analytische evaluatie van calprotectine bepaling in bloed bij … · 2020-06-22 · Window of opportunity bij RA Raza et al. Ann Rheum Dis 2012; 71:1921-1923 Gerlag et al. ARD](https://reader033.vdocuments.us/reader033/viewer/2022042402/5f12d7209905ac18b6008406/html5/thumbnails/19.jpg)
Staaltype Serum Serum met gel Heparine EDTA Citraat
Tijd tot centrifugatie <2h 6h 24 h
Baseline meting t=0
Bewaarconditie Frigo 2-8 °C Incubator 30 °CKT 18-25 °C Vries-dooi Diepvries-20°C
1 meting direct na centrifugatie
Bewaringstermijn 24h 72h 7 days 7 days – 3 months5 cycli
![Page 20: Pre-analytische evaluatie van calprotectine bepaling in bloed bij … · 2020-06-22 · Window of opportunity bij RA Raza et al. Ann Rheum Dis 2012; 71:1921-1923 Gerlag et al. ARD](https://reader033.vdocuments.us/reader033/viewer/2022042402/5f12d7209905ac18b6008406/html5/thumbnails/20.jpg)
Projectvoorstelling
• Studiepopulatie• 10 gezonde vrijwilligers
• 25-63 jaar• M/V = 4/6• CRP < 5mg/L
• Pre-analytische variabelen• Staaltype• Tijd tot centrifugatie• Bewaringstemperatuur• Bewaringstijd
• Assay• EliA Calprotectin 2
(serum/plasma protocol)
• Phadia 200• Imprecisie
![Page 21: Pre-analytische evaluatie van calprotectine bepaling in bloed bij … · 2020-06-22 · Window of opportunity bij RA Raza et al. Ann Rheum Dis 2012; 71:1921-1923 Gerlag et al. ARD](https://reader033.vdocuments.us/reader033/viewer/2022042402/5f12d7209905ac18b6008406/html5/thumbnails/21.jpg)
EliA Calprotectin 2 assay on Phadia 200
• FEIA: fluoro-enzyme-immunoassay
• Sandwich principe
• Monoclonale antilichamen: zeer specifiek voor het heterodimeer
• Fluorescentie door 4-methylumbelliferyl
CLP
Anti-CLP
4-MBF-galactoside
β-galactosidase
![Page 22: Pre-analytische evaluatie van calprotectine bepaling in bloed bij … · 2020-06-22 · Window of opportunity bij RA Raza et al. Ann Rheum Dis 2012; 71:1921-1923 Gerlag et al. ARD](https://reader033.vdocuments.us/reader033/viewer/2022042402/5f12d7209905ac18b6008406/html5/thumbnails/22.jpg)
Resultaten
![Page 23: Pre-analytische evaluatie van calprotectine bepaling in bloed bij … · 2020-06-22 · Window of opportunity bij RA Raza et al. Ann Rheum Dis 2012; 71:1921-1923 Gerlag et al. ARD](https://reader033.vdocuments.us/reader033/viewer/2022042402/5f12d7209905ac18b6008406/html5/thumbnails/23.jpg)
Verificatie van imprecisie t.o.v. Phadia 250 toont vergelijkbare CV%
Geen significant verschil t.o.v. eerdere bepaalde CV% van 9.2% op Phadia 250 (F-test: p = 0,326)
Op basis van deze bepalingen werd beslist om de analytische acceptatie limieten om klinisch relevante afwijkingen te definiëren op +/- 20% te nemen (2*CVa)
![Page 24: Pre-analytische evaluatie van calprotectine bepaling in bloed bij … · 2020-06-22 · Window of opportunity bij RA Raza et al. Ann Rheum Dis 2012; 71:1921-1923 Gerlag et al. ARD](https://reader033.vdocuments.us/reader033/viewer/2022042402/5f12d7209905ac18b6008406/html5/thumbnails/24.jpg)
Baseline calprotectine waarden zijn hoger in serum tubes.
• Centrifugatie <2u
• Outliers gedetecteerd in serum maar niet in plasma
• CLP-meting in heparine• Niet significant lager dan serum
• Significant hoger dan EDTA/citraatSerum Serum-gel Heparine EDTA Citraat
0.5
1
1.5
2
2.5
3
3.5
Cal
pro
tect
ine
(µ
g/m
L)
p= 0,4727p= 0,1431
p= 0,0009
p= 0,0007
p= 0,0413p= 0,0284
![Page 25: Pre-analytische evaluatie van calprotectine bepaling in bloed bij … · 2020-06-22 · Window of opportunity bij RA Raza et al. Ann Rheum Dis 2012; 71:1921-1923 Gerlag et al. ARD](https://reader033.vdocuments.us/reader033/viewer/2022042402/5f12d7209905ac18b6008406/html5/thumbnails/25.jpg)
Mogelijke verklaring voor verschillen in CLP tussen staaltypes?• In vitro release van CLP
Guo et al. Front Immunol. 2019; 10:2204
Vogl et al. Int J Mol Sci. 2012:2893-2917
• In vitro verandering van CLP conformatie o.i.v. Ca2+
→ meer epitopen vrij voor binding in FEIA
• Hypothese in serum en heparine:Ca2+ aanwezig→ heterotetrameer → dubbel fluorescentie signaal• in EDTA/citraat: Ca2+ afwezig → heterodimeer
Ometto et al. Exp Biol Med. 2017; 242: 859-873
![Page 26: Pre-analytische evaluatie van calprotectine bepaling in bloed bij … · 2020-06-22 · Window of opportunity bij RA Raza et al. Ann Rheum Dis 2012; 71:1921-1923 Gerlag et al. ARD](https://reader033.vdocuments.us/reader033/viewer/2022042402/5f12d7209905ac18b6008406/html5/thumbnails/26.jpg)
Conclusies
1. Toekomstige studies naar klinische waarde van CLP dienen het gebruikte staaltype te specifiëren en hiermee rekening te houden bij het bepalen van referentiewaarden/cut-offs.
![Page 27: Pre-analytische evaluatie van calprotectine bepaling in bloed bij … · 2020-06-22 · Window of opportunity bij RA Raza et al. Ann Rheum Dis 2012; 71:1921-1923 Gerlag et al. ARD](https://reader033.vdocuments.us/reader033/viewer/2022042402/5f12d7209905ac18b6008406/html5/thumbnails/27.jpg)
Reproduceerbaarheid van CLP meting in EDTA-plasma is hoger dan in serum• Vergelijking van gezonde controles (n=10) met voorgaande studie
(n=20)
Van Hoovels et al. Clin Chem Lab Med. 2019; 58(1):40-49.
![Page 28: Pre-analytische evaluatie van calprotectine bepaling in bloed bij … · 2020-06-22 · Window of opportunity bij RA Raza et al. Ann Rheum Dis 2012; 71:1921-1923 Gerlag et al. ARD](https://reader033.vdocuments.us/reader033/viewer/2022042402/5f12d7209905ac18b6008406/html5/thumbnails/28.jpg)
Conclusies
1. Toekomstige studies naar klinische waarde van CLP dienen het gebruikte staaltype te specifiëren en hiermee rekening te houden bij het bepalen van referentiewaarden/cut-offs.
2. Het meten van CLP in plasma i.p.v. serum zou mogelijks kunnen bijdragen tot meer harmonisatie tussen studies (betere reproduceerbaarheid)
![Page 29: Pre-analytische evaluatie van calprotectine bepaling in bloed bij … · 2020-06-22 · Window of opportunity bij RA Raza et al. Ann Rheum Dis 2012; 71:1921-1923 Gerlag et al. ARD](https://reader033.vdocuments.us/reader033/viewer/2022042402/5f12d7209905ac18b6008406/html5/thumbnails/29.jpg)
Calprotectine bepaling in plasmatubes is stabiel bij centrifugatie binnen de 6u
• CLP ↑↑ in serum tubes bij centrifugatie na 6u• CLP stabiel tot 6u in plasmatubes• In citraat stabiel tot 24u
p= 0,0195
p= 0,0195
p= 0,0039
p= 0,0039
p= 0,4316p= 0,9219 p= 0,0742
p= 0,0273
p= 0,7695
p= 0,0096
![Page 30: Pre-analytische evaluatie van calprotectine bepaling in bloed bij … · 2020-06-22 · Window of opportunity bij RA Raza et al. Ann Rheum Dis 2012; 71:1921-1923 Gerlag et al. ARD](https://reader033.vdocuments.us/reader033/viewer/2022042402/5f12d7209905ac18b6008406/html5/thumbnails/30.jpg)
Calprotectine bepaling in plasmatubes is stabiel bij centrifugatie binnen de 6u
Significante stijging van CLP concentraties in serum tubes bij centrifugeren na 6u t.o.v. <2u
Gem
idd
eld
ver
sch
il
Gemiddeld verschil t.o.v. baseline waarde van ca. 60-80%
![Page 31: Pre-analytische evaluatie van calprotectine bepaling in bloed bij … · 2020-06-22 · Window of opportunity bij RA Raza et al. Ann Rheum Dis 2012; 71:1921-1923 Gerlag et al. ARD](https://reader033.vdocuments.us/reader033/viewer/2022042402/5f12d7209905ac18b6008406/html5/thumbnails/31.jpg)
Verklaring voor stijgende serum CLP-waarde bij uitgestelde centrifugatie• Toename van in vitro release effect tgv langere contactduur tussen
cellen en serum
• Gebruik van plasmatubes maakt onmiddellijke centrifugatie mogelijk en dus minimalisatie van een in vitro release effect
• CLSI guideline GP44: “pre-centrifugatie tijd van 24-48u”• Geldt niet voor serum stalen! Centrifugatie dient binnen 2u te gebeuren
• Voor plasma tubes is er meer tijd (6u)
![Page 32: Pre-analytische evaluatie van calprotectine bepaling in bloed bij … · 2020-06-22 · Window of opportunity bij RA Raza et al. Ann Rheum Dis 2012; 71:1921-1923 Gerlag et al. ARD](https://reader033.vdocuments.us/reader033/viewer/2022042402/5f12d7209905ac18b6008406/html5/thumbnails/32.jpg)
Conclusies
1. Toekomstige studies naar klinische waarde van CLP dienen het gebruikte staaltype te specifiëren en hiermee rekening te houden bij het bepalen van referentiewaarden/cut-offs.
2. Het meten van CLP in plasma i.p.v. serum zou kunnen bijdragen tot meer harmonisatie tussen studies (betere reproduceerbaarheid)
3. Impact van uitgestelde centrifugatie op de calprotectine concentratie is kleiner in plasmatubes, waardoor ze meer geschikt zijn voor gebruik in bvb. huisartsen setting
![Page 33: Pre-analytische evaluatie van calprotectine bepaling in bloed bij … · 2020-06-22 · Window of opportunity bij RA Raza et al. Ann Rheum Dis 2012; 71:1921-1923 Gerlag et al. ARD](https://reader033.vdocuments.us/reader033/viewer/2022042402/5f12d7209905ac18b6008406/html5/thumbnails/33.jpg)
Effect van bewaartermijn en temperatuur
-100%
-80%
-60%
-40%
-20%
0%
20%
40%
60%
80%
100%
Gem
idd
eld
ver
sch
il
Kamertemperatuur 18-25 °C
Serum
Heparin
Serum gel
EDTA
Citrate
CLP is stabiel in alle staaltypes tot 72uCLP is stabiel in alle staaltypes tot 7 dagen
-100%
-80%
-60%
-40%
-20%
0%
20%
40%
60%
80%
100%
Gem
idd
eld
ver
sch
il
Frigo 2-8°C
Serum
Heparin
Serum gel
EDTA
Citrate
![Page 34: Pre-analytische evaluatie van calprotectine bepaling in bloed bij … · 2020-06-22 · Window of opportunity bij RA Raza et al. Ann Rheum Dis 2012; 71:1921-1923 Gerlag et al. ARD](https://reader033.vdocuments.us/reader033/viewer/2022042402/5f12d7209905ac18b6008406/html5/thumbnails/34.jpg)
Effect van bewaartermijn en temperatuur
-100%
-80%
-60%
-40%
-20%
0%
20%
40%
60%
80%
100%
Gem
idd
eld
ver
sch
il
Kamertemperatuur 18-25°C
Serum
Heparin
Serum gel
EDTA
Citrate
CLP is stabiel in alle staaltypes tot 72u
-100%
-80%
-60%
-40%
-20%
0%
20%
40%
60%
80%
100%
Gem
idd
eld
ver
sch
il
Incubator 30°C
Serum
Heparin
Serum gel
EDTA
Citrate
CLP is stabiel in alle staaltypes tot 24u m.u.v. EDTA
![Page 35: Pre-analytische evaluatie van calprotectine bepaling in bloed bij … · 2020-06-22 · Window of opportunity bij RA Raza et al. Ann Rheum Dis 2012; 71:1921-1923 Gerlag et al. ARD](https://reader033.vdocuments.us/reader033/viewer/2022042402/5f12d7209905ac18b6008406/html5/thumbnails/35.jpg)
Stijgende/dalende trend van CLP in de tijd?
• Stijgende trends voor serum, heparine en citraat• Oorzaak??? → ~ conformatieveranderingen dimeer ↔ tetrameer in de tijd
waarbij hogere temperatuur faciliterende rol speelt
• Sterke daling voor EDTA (meest uitgesproken op 30°C)
Quid citraat?? → schijnbaar een stabiliserendeffect op CLP heterodimeer!
Stephan et al. Am J Chem Soc. 2018;140(50):17444-17455
![Page 36: Pre-analytische evaluatie van calprotectine bepaling in bloed bij … · 2020-06-22 · Window of opportunity bij RA Raza et al. Ann Rheum Dis 2012; 71:1921-1923 Gerlag et al. ARD](https://reader033.vdocuments.us/reader033/viewer/2022042402/5f12d7209905ac18b6008406/html5/thumbnails/36.jpg)
Conclusies
1. Toekomstige studies naar klinische waarde van CLP dienen het gebruikte staaltype te specifiëren en hiermee rekening te houden bij het bepalen van referentiewaarden/cut-offs.
2. Het meten van CLP in plasma i.p.v. serum zou kunnen bijdragen tot meer harmonisatie tussen studies (betere reproduceerbaarheid)
3. Impact van uitgestelde centrifugatie is kleiner in plasmatubes en daardoor meer geschikt voor gebruik in bvb. huisartsen setting
4. CLP is na centrifugatie <2h in alle staaltypes stabiel gedurende minstens 7 dagen, indien koel (2-8°C) bewaard. Op kamertemperatuur en 30°C treedt sneller instabiliteit op.
![Page 37: Pre-analytische evaluatie van calprotectine bepaling in bloed bij … · 2020-06-22 · Window of opportunity bij RA Raza et al. Ann Rheum Dis 2012; 71:1921-1923 Gerlag et al. ARD](https://reader033.vdocuments.us/reader033/viewer/2022042402/5f12d7209905ac18b6008406/html5/thumbnails/37.jpg)
To do’s
• Dataset uitbreiden met 5 RA-patiënten• Zelfde observaties t.o.v. controles?
• Western blotting ter confirmatie van conformationele hypothese
• Meta-analyse van de huidige literatuur met nadruk op pre-analytische variabelen
![Page 38: Pre-analytische evaluatie van calprotectine bepaling in bloed bij … · 2020-06-22 · Window of opportunity bij RA Raza et al. Ann Rheum Dis 2012; 71:1921-1923 Gerlag et al. ARD](https://reader033.vdocuments.us/reader033/viewer/2022042402/5f12d7209905ac18b6008406/html5/thumbnails/38.jpg)
Vragen?