practica de dna de bioquimica

7/29/2019 Practica de Dna de Bioquimica

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INSTITUTO POLITECNICO NACIONAL

ESCUELA NACIONAL DE CIENCIAS BIOLOGICAS

CARACTERIZACION ESPECTROFOTOMETRICA DEL DNA, ELABORADO POR: ESPINOZA

CASANOVA GLORIA Y HERNANDEZ OBREGON YARA PATRICIA, LABORATORIO DE

BIOQUIMICA Y BIOLOGIA MOLECULAR, DEPARTAMENTO DE BIOQUIMICA, GRUPO: 3IV1,

SECCION: V.

INTRODUCCION:Los ácidos nucleícos son polímeros sustituidos de la aldopentosa ribosa, que llevan la información genéticade un organismo. Son biomoleculas formadas por polímeros de nucleótidos, los cuales están constituidos

por una base nitrogenada una pentosa y un grupo fosfato unidomediante enlaces fosfodiester y puentes de hidrogeno.Los ácidos nucleicos mas importantes son el ácido ribonucleico (ARN) yel acido desoxirribonucleicos (ADN)El descubrimiento de la estructura de DNA por parte de James Watson yFrancis Crick en el año de 1953 fue un momento culminante en lahistoria de la ciencia, del que surgieron disciplinas completamentenuevas y que repercutió en el curso de otras muchas que ya estaban

establecidas. Nuestros conocimientos actuales acerca de cómo sealmacena y utiliza la información genética de una célula se basan en

investigaciones que han sido posibles gracias a este descubrimiento. La investigación sistemática de labioquímica del DNA comenzó con Friedrich Miescher, quien llevo a cabo los primeros estudios de losnúcleos celulares. En 1868 aíslo una sustancia que contenía fosforo, a la cual denomino nucleina, obtenidadel núcleo de las células del pus (leucocitos) en vendajes quirúrgicos de desechos y demostró que dichanucleina consistía en una porción acida la cual conocemos actualmente como DNA y una porción básicaproteínica.

ADN: Ácido desoxirribonucleico(ADN), es el material genéticode todos los organismos

celulares y casi todos losvirus. El ADN lleva lainformación necesaria paradirigir la síntesis de proteínasy la replicación. La investigación sobre el ADN tiene un impacto significativo, especialmente en el ámbito dela medicina. A través de la tecnología del ADN recombinante los científicos pueden modificar microorganismos que llegan a convertir en auténticas fábricas para producir grandes cantidades desustancias útiles. Por ejemplo, esta técnica se ha empleado para producir insulina (necesaria para losenfermos de diabetes) o interferón (muy útil en el tratamiento del cáncer).Este ácido nucléico contiene las instrucciones genéticas usadas en el desarrollo y funcionamiento de todoslos organismos vivos y algunos virus. A los segmentos del ADN que tienen la información genética se lesllama genes, pero otras secuencias tienen propósitos estructurales, o están envueltas en regular el uso de

esta información genética. Hoy día, el ADN juega un rol muyimportante en la tecnología, y se ha convertido en un granmecanismo para estudiar y entender los procesos de la vida, en lamedicina, en la genética, en la biología y en otras ramas de laciencia. Estas moléculas aportan al conocimiento, y de estamanera, aportan también al desarrollo de nuevas cosas que sonútiles para la sociedad. Algunas aplicaciones del ADN en latecnología moderna son:

el entendimiento de los mecanismos de la vida, la resolución de crímenes y misterios la creación de soluciones para la salud y la nutrición.



Las técnicas de ADN son útiles para el entendimiento de los mecanismos de la vida

OBJETIVOEl alumno conocera y realizara un procedimientode purificación del DNA de germen de trigoEl alumno onvtendra el espectro de absorción

característico del DNA

PREPARACION DEL CROMATOGRAMA ENCAPA FINA

Después de ver las manchitas que se hicieron enel cromatograma, las marcamos y procedimos acalcular el Rf de cada una de las soluciones comose muestra a continuación

TIMINA

Rf =

725

URACILO

Rf =

675

CITOCINARf =

587

ADENINA

Rf =

537

GUANINA

Rf =

4

Espacio para el cromatograma

ESPECTRO DE ABSORCION DEL DNA

TABLA DE DATOS:

LONGITUD DEONDA (nm)

ABSORBANCIA

200 0.047205 0.079210 0.090215 0.090220 0.104225 0.090230 0.082235 0.106240 0.097245 0.166250 0.362255 0.815260 0.958265 0.974270 0.92275 0.902280 0.65285 0.468290 0.305295 0.170300 0.079

A continuación se muestra la grafica deabsorbencia contra longitud de onda

aplicar a 1 cm de

un extremo 2aplicaciones de

cada solucion y

de los

hidrolizados de

DNA Y RNA

desarrollar la

placa en una

camara decromatografia.

utilizando como

fase movil

butanol:acidoacetico:agua

5:2:3

revelar el

cromatogramapor exposicion

a la luz

ultravioleta en

un cuarto

obscuro

PREPARAR

UNADISOLUCION

DEL DNA CON

CITRATO

SALINA

DILUIDA

LEER LA

ABSORBANCIA

EN EL

ESPECTOFOTO

METRO

DETERMINAR

LOS VALORESDE 210 A 300

NM DE 5 EN 5



ANALISIS DE RESULTADOSEl DNA se disolvió con 2 ml de citrato salinadiluida y se hizo una primera dilución 1:60 y se fuea leer esta muestra al espectrofotómetro perodebido a que la absorbancia era mayor a uno se

hicieron varias diluciones hasta llegar a un factor de dilución que fue cuando la absorbancia seacercó a uno y se pudieron obtener los datos deabsorbancia a su respectivo espectro deabsorción. Para la realización de la cromatografíaempleamos soluciones de las bases puricas ypirimidicas posteriormente se aplicó la solución delhidrolizado de DNA y del RNA el cromatograma secorrió con una fase móvil de butanol acido acéticoagua que tardo aproximadamente 40 min.Finalmente al revelar el cromatograma por exposición de luz ultravioleta observamos la

separación de las bases puricas y pirimidicas delos hidrolizados comparando las manchas con lasde las manchas de las soluciones de dichasbases.

CONCLUSIONLa desnaturalización del DNA se puede detectar observando el aumento de la capacidad de unadisolución de DNA de absorber la luz ultravioleta

de una longitud de onda (λ) de 260 nm (A260).Las bases de los ácidos nucleicos absorbenfuertemente la luz de 260 nm. Mediante elcromatograma se observo la separación de basespuricas y pirimidicas que se encontraron en lamuestra de hidrolizados de DNA y RNA.

BIBLIOGRAFIA

MATHEWS-VAN HOLDE-AHERN (2002)BIOQUÍMICA 3A. ED. EDITORIAL.PEARSON

MURRAY ROBERT K. (2010)BIOQUÍMICA HARPER. BIOQUÍMICAILUSTRADA 28ª. ED. EDITORIAL:MCGRAW-HILL

NELSON DAVID L. (2009 )BIOQUÍMICA

LEHNINGER PRINCIPLES OFBIOCHEMISTRY EDITORIAL: FREEMAN5 ED

0

0.2

0.4

0.6

0.8

1

1.2

0 200 400

ABSORBANCIA

ABSORBANCIA

2 per. Mov.

Avg.

(ABSORBANCI

A )

A

ƛ

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