Practica coproparasitoscopico

Directo

Kato

Faust

Willis

Ritchie

Conati

Amiba en fresco

Copas

Stoll

Objetivo

Aprender a realizar todos los métodos más utilizados en un laboratorio. También que se identifiquen los huevecillos, larvas, quistes y trofozoitos de los parásitos a observar.

Introducción

Las parasitosis intestinales pueden sospecharse por la presencia de sintomatología y datos epidemiológicos, pero la única forma de confirmar el diagnóstico es la demostración del parásito en cualquiera de sus formas evolutivas: diagnóstico parasitológico. El diagnóstico parasitológico se fundamenta en el conocimiento de la biología del parásito: hábitat, ciclo evolutivo, lo que permite tomar la muestra biológica y la técnica de laboratorio adecuada.  El examen parasitológico de las heces: coproparasitologia, tiene como objetivo diagnosticar los parásitos intestinales. Se han descrito muchas técnicas de examen de heces, algunas de ellas son de utilidad general, mientras que otras sólo sirven en casos muy concretos, de modo que se elige la más adecuada para un determinado tipo de muestra o para la detección de un determinado parásito. La consistencia de una muestra de heces es de gran importancia, indicando el tipo de organismo que puede contener. A de examinarse toda la superficie de la muestra en busca de parásitos macroscópicos. Con frecuencia pueden verse los oxiuros en la superficie de la muestra de heces, del mismo modo que las proglótides. El examen inmediato de las heces completamente formes no es tan importante, pero han de mantenerse refrigeradas. La efectividad de la técnica depende de varios factores: sensibilidad, especificidad, calidad de los equipos y reactivos utilizados, adecuada ejecución y experiencia del operador.

Método Directo

Material y equipo

Microscopio óptico

Portaobjetos

Cubreobjetos

Gotero con agua

Aplicador

Material Biológico

Materia Fecal

Reactivos

Yodo Lugol

Técnica

Con un aplicador se toma un poco de materia fecal y se coloca en un portaobjetos agregándole una gota de yodo lugol se mezcla perfectamente y posteriormente se le coloca un cubreobjetos y se lee a microscopio.

Método de Kato

Material y equipo

Microscopio óptico

Portaobjetos

Aplicador

Cuadros de papel celofán

Material Biológico

Materia Fecal

Reactivos

Solución verde de malaquita

Técnica

Se pone un día antes de la practica cuadros de papel celofán en la sustancia verde de malakita.

Ya en práctica se hace un frotis un poco grueso de materia fecal y se le coloca un cuadro de papel celofán con la sustancia antes mencionada y se deja reposar durante una hora.

Posteriormente se lee a microscopio y el total de huevos observados en la preparación se multiplica por un producto constante de 20, el resultado se expresa en huevos por gramo de heces fecales (h/mg/h) y ese es el valor a reportar.

Método de concentración por centrifugación y flotación (Faust)

Este método se utiliza solución de Zn, cuya densidad específica es de 1.180 (33%), que conforma un medio de densidad más alta que la de los huevos: Necator 1.055, Tricocéfalo 1.150, Ascaris fértil 1.110 y facilita que los huevos livianos de estos helmintos, con menor peso específico que la solución, se concentren y floten.

Material y equipo

Microscopio óptico

Tubo de ensayo

Vaso de precipitado de 50ml

Gasas

Embudo

Gradilla

Portas y cubreobjetos

Asa Bacteriológica

Pipeta pasteur

Agitador

Material Biológico

Materia Fecal

Reactivos

Sulfato de Zinc

Técnica

Se hace una suspensión homogénea con 1gr de materia fecal y 10ml de agua en el vaso de precipitado.

Se filtra la suspensión a través de la gasa colocada en el embudo, recolectándola en el tubo.

Se centrifuga el tubo a 2000 r.p.m. durante 1 min.

Se decanta el sobrenadante y se suspende el sedimento con agua, agitándolo. Se centrifuga constantemente repitiendo la misma operación hasta que el sobrenadante se observe claro.

Se decanta el último sobrenadante, se agregan 3ml de Sulfato de Zinc, se agita hasta resuspender todo el sedimento, y se centrifuga a 2000 r.p.m.

durante 1 min.

Con el asa se recoge la muestra de la película superficial de la parte superior en dos o tres veces y se deposita en el portaobjetos, se añade una gota de yodo lugol y se le coloca un cubre objetos, finalmente se observa a microscopio.

Método de concentración por sedimentación (Willis)

Recomendado especialmente para la investigación de Geo-helmintos. Consiste en preparar el material fecal con Solución saturada de ClNa. Los Huevos de helmintos de peso específico menor que la solución saturada de ClNa tienden a subir y adherirse a una lámina colocada en contacto con la superficie del líquido

Material y equipo

Microscopio óptico

Vaso de precipitado de 50ml

Gradilla

Portas y cubreobjetos

Agitador

Vaso de 20ml

Material Biológico

Materia Fecal

Reactivos

Solución saturada de cloruro de sodio

Yodo lugol

TécnicaSe toma 2gr aproximadamente de materia fecal. Se coloca  la muestra en un tubo y se mezcla con la solución saturada de ClNa hasta el tope del mismo.

Se coloca un cubreobjetos sobre la boquilla de tubo de tal manera que quede en contacto con la suspensión y se deja reposar durante 15 min.

Después de ese tiempo, se toma el cubre objetos y se coloca en un porta el cual contiene ya una gota de lugol previamente puesta. Se observa a microscopio.

Método de concentración por sedimentación (ritchie)

Es un método de concentración fecal muy parecido al de Faust, solo que esta vez se sedimentará en el fondo nuestra materia fecal a examinar, y es útil para encontrar huevecillos, quistes y trofozoitos muy pesados.

Material y equipo

Microscopio óptico

Cubre objetos

Porta objetos

Pipetas Pasteur

Vaso de precipitados

Agitador

Tubos de ensayo

Centrifugadora

Embudo

Gradilla

Pipeta de 10ml

Material Biológico

Materia Fecal

Reactivos

Solución Salina

Formaldehído al 10%

Yodo lugol

Éter Etílico

Técnica Se pesan 1g de materia fecal y se hace una mezcla homogénea, en un vaso de precipitados con 10ml de solución salina.

Se hace pasar a través de un embudo (con una gasa) a un tubo de ensayo.

Se centrifugan los tubos a 2000 R.P.M. durante 1 min. y se decanta el sobrenadante, se resuspende en solución salina y se vuelve a centrifugar hasta que el líquido sea transparente.

Se decanta nuevamente y esta vez se le agregan 10ml de formaldehído al 10% y se homogeniza, se deja reposar durante 10 min.

Se añaden después 5ml de éter se tapan los tubos y se agitan durante 30 seg. Se centrifugan a 1500 r.p.m.

Después de centrifugar se observan 4 capas.

Se introduce la pipeta pasteur hasta la capa de sedimento en el fondo del tubo para extraer una gota de sedimento y colocarla en un porta. Se añade una gota de yodo lugol y se le coloca un cubre. Se observa a microscopio a 10x y 40x

Método de conatin

Es un procedimiento de concentración de aclaración y tinción, que permite teñir al quiste, aclarar y colorear el contenido de 4 esporozoitos permitiendo una observación clara.

Material y equipo

Microscopio óptico

Porta objetos

Tubos de ensayo

Centrifugadora

Gradilla

Mechero

Frasco gotero

Incubadora

Material Biológico

Sedimento de materia fecal obtenido por el método de ritchie

Reactivos

Solución Isotónica de Cloruro de sodio

Hidróxido de sodio .2 normal

Metanol

Carbol -Fusina Básica

Acido sulfúrico al 10%

Verde brillante al 1%

TécnicaColocar el sedimento obtenido a partir del método de ritchie y aforar a 1 ml con agua destilada. Agregar a este sedimento 3ml de hidróxido de sodio .2 normal y se agita.

Incubar a 37º durante 30 min. y se centrifuga a 2000 r.p.m. durante 1 min.

Lavar 2 veces con solución salina isotónica y centrifugar a 2000 r.p.m. durante 1 min.

Con el sedimento se realiza un frotis y este es teñido con la Técnica de Kinyou

Tinción de Kinyou

El frotis se deja secar al aire y se fija con el etanol hasta la evaporación. Se pasa ligeramente por la flama.

Se tiñe con carbol- fusina por 3 min. despues se decolora con acido sulfiurico al 10% y se contrasta con la sustancia verde brillante al 1% durante 30 seg.Se lava y se observa a 100x.

MÉTODO DE AMIBA EN FRESCO:Es un método, sencillo de realizar y que nos ayudará en la búsqueda de protozoarios, así como sus quistes y trofozoitos.

Material y equipo

Microscopio óptico

Cubre objetos

Porta objetos

Pipetas Pasteur

Vaso de precipitados

Tubos de ensayo

Pinza para tubo

Mechero

Tela de alambre

Tripie

Termómetro

Material Biológico

Materia fecal

Reactivos

Yodo lugol

Técnica Se colocan aproximadamente 1g de materia fecal dentro de un tubo de ensayo agradándole solución salina

Se le agrega agua al vaso de precipitados y se calienta con el mechero, se deja de calentar hasta que tenga una temperatura de 37º C. Se coloca el tubo tapado dentro del vaso de precipitados con ayuda de las pinzas, evitando y se deja reposar 5 minutos.

Se le agrega 1 gota de lugol y se observar a microscopio a 10X y 40X.

MÉTODO DE SEDIMENTACIÓN SIMPLE EN COPAS:Material y equipo

Microscopio óptico

Cubre objetos

Porta objetos

Pipetas Pasteur

Vaso de precipitados

Tubos de ensayo

Gasa

Embudo

Material Biológico

Materia fecal

Reactivos

Solución de detergente

Solución verde de malakita

PREPARACIÓN DE SOLUCIONES:

Solución de detergente: se pesan 5gr. de detergente y se disuelven en100ml de agua de grifo.

Solución verde de malakita: se pesa 1gr de verde de malakita y se disuelve en 100 ml de agua de grifo.

Técnica:Se homogeniza la materia fecal con agua de la llave

se hace pasar a través de la gasa colocada en un embudo colocado en el tubo de ensayo.

Enseguida se colocan 5 ml de verde de malkita, se agita y se le agregan 5ml de detergente de solución y se agita nuevamente. Finalmente se deja reposar 15 min. Se decanta el sobrenadante y se le agrega agua, se deja reposar otros 15 min.

Con la pipeta pasteur se toma una gota o dos de sedimento y se observa a microscopio a 10x y 40x.

MÉTODO DE DISOLUCIÓN STOLL:Material y equipo

Microscopio óptico

Cubre objetos

Porta objetos

Agitador

Vaso de precipitados

Pipeta graduada 100ml

Perlas de vidrio (canicas)

Pipeta de Stoll de 1 a 2 ml Graduada en 0.01

Material Biológico

Materia fecal

Reactivos

Hidróxido de sodio .1 normal

PREPARACIÓN DE SOLUCIÓN:

Hidróxido de sodio .1 normal: se disuelven 4gr. de hidróxido de sodio en una pequeña cantidad de agua, en un matraz volumétrico de 1l. luego se completa a 1000.

Técnica: Se llena en la probeta graduada de 100 ml con 56 ml de hidróxido de sodio 0.1 N.Con la varilla de vidrio se agrega las materia fecal hasta elevar  el nivel del liquido a 60 ml.

Se añaden 15 o 20 perlas de vidrio, se tapa con firmeza y se agita de 1 a 2 min. hasta crear una mezcla homogénea. Puede ser necesario que las heces duras se dejen reposar un poco de tiempo.

Cuando las heces están disueltas por completo, se toman 0.15ml del centro de la suspensión o 0.075 ml de la suspensión y se colocan en un portaobjetos y con aumento de 10x se cuentan los huevos de toda la suspensión.

El numero de huevos y larvas contados se multiplican por 100 si la materia fecal es dura, 200 si la materia fecal es mas liquida. el resultado se expresa, huevos o larvas por ml de heces (huevos/ml/h)

Guia de parasitos

Protozoarios

E. HISTOLITICACuando esta maduro el quiste mideDe 12 a 15 µm, es esférico yPresenta de 4- 6 nucleos.

E. COLI.Mide entre 15 y 25µm y presenta8 nucleos.

ENDOLIMAX NANAMide entre 6 y 8 µm de formaEsférica u oval, tiene 4 nucleos.

LODAMOEBA BUTSCHLIILa forma varia de esférica a ovalada, mide de 5 – 16µm el quiste presenta una vacuola de glicógeno en el citoplasma.

GiardialambiaQuiste de forma ovoide o elipsoide mide entre 8 y 19 um cuando esta madura tiene 4 núcleos. La pared quística es lisa e incoloraTrichomona vaginalisDe forma periforme mide de 7 y 23 um de longitud por 12 um de ancho, presenta 4 flagelos anteriores un quinto sobre la membrana ondulante tiene un solo núcleoNematodos (gusanos redondos)

Áscaris lumbriocoideMide unas 50 a 60 um por 20 a 40 um posee una doble cubierta trasparentes, con una cara plana y una convexa

Trichuris trichuraEl huevo tiene forma de barril con aspecto ovoide, con dos polos con tapones mucosos, mide 50 a 60 por 25 a 35um.

UncinariasLa forma infectante es una larva filarforme, su vía de infección es por piel, principalmente por la planta de los pies

Cestodos (gusanos segmentados)

Taenia soliumes un platelminto parásito de la clase Cestoda, que vive en el intestino delgado de los seres humanos, donde mide normalmente de 3 a 4 m

Taenia sagitanaEs parecida a la taenia solium solo que esta llega a medir un poco menos

Himenolepis diminutaEsférico con cascara gruesa mide 70um de longitud por 8um de diámetro, no presenta filamentos polares

Himenolepis nanaEs redonda u ovalado mide de 40um a50um de diámetro, posee una membrana trasparente que rodea un hembrion hexcanto.