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Dra. P. Isabel Valdez GuerraResidente de Ginecología y Obstetricia de 3er año
Universidad El BosqueBogotá - Colombia
Cell-free DNA in the Maternal Circulation
Placenta Maternal plasma Maternal blood cells
• DNA fetal es 5-25% del total del cfDNA en circulación materna(~10% en promedio).
Lo YMD et al. Lancet 1997;350:485-7
Fetal Nucleic Acids in Maternal Plasma
• Primer reporte de DNA fetal en sangre materna. (Lo YMD et al. Lancet 1997;350:485-7)
• El DNA desaparece rápidamente clears de la circulacion materna una vez de que el recien nacido es dado a luz. (Lo YMD et al. Am J Hum Genet 1999;64:218-24)
• Primer reporte de RNA fetal libre en circulación materna. (Poon LLM et al. Clin Chem 2000;46:1832-4)
• Prenatal diagnosis of fetal RHD status by molecular analysis of maternal plasma. (Lo YMD et al. N Engl J Med 1998;339:1734-8)
10% of free DNA in maternal plasma is fetalRelative amount of chromosome 21
Normal Mother Normal Fetus
18 copies + 2 copies20 copies
18 copies + 3 copies21 copies
Relative amount of chromosome 21 Normal Mother Down syndrome Fetus
Need to distinguish 21 copies from 20 copies, a 5% difference.(assumes 10% of ccfDNA is fetal)
CONCEPTO
International Society for Prenatal Diagnosis
Nacional Society og genetic counselors
ACOG
Society for Maternal-Fetal Medicine
Publicar opiniones de comité
referenciando el estudio
Mujeres de alto riesgo
Song Y, Liu C, Qi H, Zhang Y, Bian X, Liu J. Noninvasive prenatal testing of fetal aneuploidies by massively parallel
sequenc- ing in a prospective Chinese population. Prenat Diagn 2013;33:700-6.
1741< 35 años 2do trim 2 clínicas
cf DNA
Sensibilidad 100% vs 54%Especificidad 99% vs 85%VPP 91% vs
2,4%
CHINA
Reino Unido
Gil MM, Quezada MS, Bregant B, Ferraro M, Nicolaides KH. Implementa- tion of maternal blood cell-free DNA test- ing in
early screening for aneuploidies. Ultrasound Obstet Gynecol 2013;42:34- 40.
1 clínica1er trim
>35 10 sem
cf DNA vs Tamizaje
primer trimestre
cf DNA fue superior
Resultados incompletos
21Pacientes de al menos 18 años.
Al menos 8 semanas.
Para tamizaje de 1er o 2do trimestre.
?
MétodoCARE
Resultados clínicos Se hizo seguimiento de pacientes durante todo
el embarazo para valorar resultados. Examen completo por pediatra calificado. Clasificacion basada en examen fisico ó estudio
citogenetico.
Recoleccion de muestras – Secuenciación y Clasificación de
aneuploidias
Muestra 10ml de sangre. Tubo etiquetado codigo de barras.
Schematic illustration of the procedural framework for using massively parallel genomic sequencing for the noninvasive prenatal detection of fetal chromosomal
aneuploidy.
Chiu R W K et al. PNAS 2008;105:20458
CLASIFICACION DE ANEUPLOIDIAS
Comparación
1er trimestr
e
2do trimestr
e
cfDNA
Enrollment and Outcomes for Primary Analysis of False Positive
Rates.
ANALISIS
ANALISIS
ANALISIS
ANALISIS
DISCUSION Test no invasivo con cfDNA en poblacion general
obstetrica fue equivalente al estudio previo realizado en pacientes de alto riesgo.
La mayoría de pacientes en este estudio eran de bajo riesgo.
La edad promedio fue de 29,6 años. La mayoría primigestante, concepcion
espontantea.
Analisis primario
DNA vs tamizaje standard (18 y 21)
FP con cfDNAVPP con cfDNA
DISCUSION
Resultado de trisomia 21 y 18 combinados, la tasa de FP es 4,2% para tamizaje standard y 0,5% para cfDNA.
Si todas las pacientes se someterian a cf DNA como metodo primario y si el resultado diera positivo se realizarian pruebas invasivas, habría una reduccion significativa de las mismas.
DISCUSION
No hubo falsos negativos en ninguno de los dos métodos.
9 Falsos positivos encontrados en la cohorte. VPP de las pruebas de cf DNA(45% para
trisomia 21 y 40% para 18) muestran la necesidad de realizar pruebas de diagnostico de seguimiento para confirmar los verdaderos resultados positivos antes de tomar decisiones.
FORTALEZAS
Prospectivo y ciego
21 clínicas
Diversificacion racial
Seguimiento clínico completo
DEBILIDADES
Numero bajo de verdaderos positivos Basar resultados en examen físico.
Exclusion de pruebas en Tercer trimestre no tuvo efecto en la tasa de FP
0,9% no mostro resultaodos
CONCLUSION
Diagnostico con cfDNA muestra mejores resultados que el tamizaje standard, con mejoria en el VPP pata trisomia 21 en pacientes de riesgo bajo.
La mejor ventaja fue la reduccion de FP.
Costo-efectividad
?