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1Mtrologie et chimiomtrie validation intralaboratoire 1M1S2 SM-APC

MtrologieChimiomtrie

VALIDATION INTRALABORATOIREDES METHODES D'ANALYSE

Gnralits

Mtrologie et chimiomtrie validation intralaboratoire 2M1S2 SM-APC

I Objectif de la validation

Selon l'ICH (International Conference on Harmonization of TechnicalRequirements for the Registration of Pharmaceuticals for Human Use.Genve) l'objectif de la validation d'une procdure analytique est dedmontrer qu'elle est approprie l'usage auquel elle est destine.


I Objectif de la validationCycle de vie d'une mthode d'analyse

Problme analytique

SlectionChoix des analytesType de mthode

DveloppementRglage instrumentsMode opratoire normalis

Validation intralaboratoireLinaritJustesseFidlit (rptabilit interne)SpcificitLimite de dtectionLimite de quantificationDomaine d'utilisationRobustesse

Validation interlaboratoireRptabilitReproductibilit

Utilisation en routineEssais d'aptitudeCartes de contrle


II Diffrents critres de validationObligatoire pour le dossier d'AMM :(module 3 (information chimique, pharmaceutique et biologique pour les mdicaments contenant des substances chimiques et/ou biologiques actives) des exigences du dossier standardis de demande dautorisation de mise sur le march (JO directive 2003/63/CE))

-preuves d'identification-Dosage quantitatif des impurets. Vrification des teneurs limites des

impurets. -Dosage de la partie active ou dune ou de plusieurs autres composantes de

la substance mdicamenteuse ou du produit fini. Non ncessaire si mthode de la Pharmacope


II Diffrents critres de validationLes diffrentes critres de validation d'une mthode d'analyse

Slectivit, Spcificit

Linarit

Justesse

Fidlit rptabilitfidlit intermdiairereproductibilit


Les diffrentes critres de validation d'une mthode d'analyse (suite)

justesse et fidlit

II Diffrents critres de validation


II Diffrents critres de validationLes diffrentes critres de validation d'une mthode d'analyse (suite)

Limite ou seuil de dtection

Limite ou seuil de dosage

Domaine d'utilisation

Robustesse


II Diffrents critres de validationCaractristiques valider

(1) Si la reproductibilit est value, il n'est pas ncessaire de dterminer la fidlit intermdiaire.(2) Si la mthode est insuffisamment spcifique, cette dficience peut tre compense par la spcificit d'une ou de plusieurs autres preuves complmentairesauxquelles l'chantillon est soumis.(3) parfois ncessaire


II-1 Spcificit

"La spcificit est la proprit qui fait quune mthode danalyse rend comptesans ambigut de la substance analyse en prsence dautres composantesnormalement prsentes. Ces dernires peuvent inclure des impurets, des produitsde dgradation, la matrice, etc.

Si une mthode danalyse est insuffisamment spcifique, cette dficience peut trecompense par la spcificit de lune ou de plusieurs des autres analysescomplmentaires. (ICH Q2R1)"

"Slectivit : proprit d'un systme de mesure, utilisant une procdurede mesure spcifie, selon laquelle le systme fournit des valeurs mesurespour un ou plusieurs mesurandes, telles que les valeurs de chaquemesurande sont indpendantes des autres mesurandes ou d'autresgrandeurs dans le phnomne, le corps ou la substance en cours d'examen(VIM 2008) "



II-1 Spcificit (suite)-indispensable -absence d'interfrence entre l'analyte et les composs de la matrice-dpend de la matrice-dpend de la mthode utilise (prparation des chantillons, dtection

slective)-rsultats d'analyses identiques en prsence d'ajouts de substances interfrentes

potentielles

-tude d'chantillons "stresss"

-comparaison avec autre mthode valide

-analyse de la puret du pic en chromatographie (paulements, recueil du pic et analyse, UV avec barrettes de diode, spectromtrie de masse)



Spcificit : Analyse d'chantillons "stresss"


Spcificit : puret du pic chromatographique (1)

- symtrie du pic

- "re"chromatographie du pic suspect


Spcificit : puret du pic chromatographique (2)

- utilisation d'un dtecteur barettes de diodes (idem avec spectromtrie de masse fragmentation)


II-2 Domaine d'utilisation

"Le domaine dutilisation dune mthode danalyse est lintervalle entre laconcentration la plus leve et la concentration la plus faible (quantits) de lasubstance analyse dont on a dmontr quelles pouvaient tre dterminesavec un degr acceptable de fidlit, de justesse et de linarit. (ICH Q2R1)"



II-3 Linarit"La linarit dune mthode danalyse est sa capacit de donner des

rsultats qui sont directement ( lintrieur de certaines limites) proportionnels la concentration (quantit) de la substance analyse dans un chantillon.(ICHQ2R1)"

- dosage de la teneur en PA et impurets- value sur l'ensemble du domaine d'utilisation- sur PA et/ou FPR

- examen visuel de la courbe- outil statistique de rgression- transformation mathmatique ventuelle autorise- coefficient de corrlation, ordonne l'origine, somme des carrs des rsidus,

graphique des rsidus, graphique- non linarit possible mais justifier (test immunologique par ex.)- au moins 5 concentrations espacer rgulirement sur tout le domaine d'utilisation



Exemple de non linarit

Dosage immunologique de l'oestradiolELISA comptitif

Courbe d'talonnageAbsorbance 450nm en fonction de la concentration en oestradiol


II-4 Justesse"La justesse correspond au degr de concordance entre la valeur de la mthode

obtenue et la valeur de rfrence ou la valeur considre comme vritable parconvention. La justesse est aussi dsigne comme lauthenticit. La justesse doit trevrifie dans le domaine dutilisation de la mthode danalyse. (ICHQ2R1)"

"justesse de mesure, justesse : troitesse de l'accord entre la moyenned'un nombre infini de valeurs mesures rptes et une valeur de rfrenceNOTE 1 La justesse de mesure n'est pas une grandeur et ne peut donc pass'exprimer numriquement, mais l'ISO 5725 donne des caractristiques pourl'troitesse de l'accord. NOTE 2 La justesse de mesure varie en sensinverse de l'erreur systmatique mais n'est pas lie l'erreur alatoire.NOTE 3 Il convient de ne pas utiliser le terme exactitude de mesure pourla justesse de mesure et vice versa. (VIM 2008)"



II-4 Justesse (suite)

- dosage de la teneur en PA et impurets- value sur l'ensemble du domaine d'utilisation

II-4-1 Teneur en PAII-4-1-1 Matire premire- application mthode une substance de puret connue- comparaison rsultat avec autre mthode II-4-1-2 Produit fini- application mthode FPR contenant une quantit connue de PA- ajout de PA dans le produit fini- comparaison rsultat avec autre mthode



II-4 Justesse (suite)II-4-2 Dtermination quantitative des impurets

- application mthode chantillons enrichis de quantits connues d'impurets- comparaison rsultat avec autre mthode - indiquer clairement comment les impurets sont doses (individuellement ou globalement, en pourcentage du PA en poids ou en pourcentage d'aire)

II-4-3 Recommandations concernant les donnes- au moins 9 rsultats (3 concentrations avec 3 chantillonschacune)- expression de la justesse : pourcentage de recouvrement avecintervalle de confiance- recouvrement calcul proche de 100%- recouvrement variable en fonction de la teneur



II-4 Justesse (suite)

II-4-3 Recommandations concernant les donnes (suite)



II-5 Fidlit

"La fidlit dune mthode correspond au degr daccord (degr de dispersion)entre les rsultats des mesures obtenues par lanalyse individuelle de plusieursprlvements dun mme chantillon homogne, prlevs dans des conditionsprescrites. La fidlit peut svaluer trois niveaux: rptabilit, fidlitintermdiaire et reproductibilit.

Lvaluation de la fidlit doit se faire au moyen dchantillons homognes etauthentiques. Sil est impossible dobtenir des chantillons homognes, on peututiliser des chantillons prpars artificiellement ou une solution dchantillon.

La fidlit est gnralement exprime par la variance, lcart-type ou lecoefficient de variation dun ensemble de mesures. (ICHQ2R1)"



II-5 Fidlit (suite)"fidlit de mesure, fidlit : troitesse de l'accord entre les indications

ou les valeurs mesures obtenues par des mesurages rpts du mmeobjet ou d'objets similaires dans des conditions spcifies NOTE 1 Lafidlit est en gnral exprime numriquement par des caractristiquestelles que l'cart-type, la variance ou le coefficient de variation dans lesconditions spcifies. NOTE 2 Les conditions spcifies peuvent tre, parexemple, des conditions de rptabilit, des conditions de fidlitintermdiaire ou des conditions de reproductibilit (voir ISO 5725-3:1994).NOTE 3 La fidlit sert dfinir la rptabilit de mesure, la fidlitintermdiaire de mesure et la reproductibilit de mesure. NOTE 4 Le terme fidlit de mesure est quelquefois utilis improprement pour dsignerl'exactitude de mesure. (VIM 2008)"

- dosage de la teneur en PA et impurets- value sur l'ensemble du domaine d'utilisation ou 100% de la teneur

attendue



Reproductibilit

Fidlit intermdiaire

Rptabilit

Fidlit instrumentale

Les diffrents niveaux de fidlit


II-5-1 Rptabilit

"La rptabilit est une expression de la fidlit de lanalyse lorsque celle-ci estreprise dans les mmes conditions de ralisation, aprs un court intervalle detemps. La rptabilit est aussi dsigne fidlit intra-analyse.(ICHQ2R1)"

"condition de rptabilit : condition de mesurage dans un ensemblede conditions qui comprennent la mme procdure de mesure, les mmesoprateurs, le mme systme de mesure, les mmes conditions defonctionnement et le mme lieu, ainsi que des mesurages rpts sur lemme objet ou des objets similaires pendant une courte priode de temps.NOTE 2 En chimie, on utilise quelquefois le terme condition de fidlitintra-srie pour dsigner ce concept. (VIM2008)"

- au moins 9 mesures englobant le domaine d'utilisation de la mthode (3 concentrations de 3 chantillons chacune

ou

- au moins 6 mesures d'une concentration 100% de la teneur escompte



II-5-2 Fidlit intermdiaire"La fidlit intermdiaire correspond aux variations survenant dans un mme

laboratoire : analyses effectues des jours diffrents, par des personnesdiffrentes, au moyen dappareils diffrents, etc. (ICHQ2R1)"

"condition de fidlit intermdiaire : condition de mesurage dans unensemble de conditions qui comprennent la mme procdure de mesure,le mme lieu et des mesurages rpts sur le mme objet ou des objetssimilaires pendant une priode de temps tendue, mais peuventcomprendre d'autres conditions que l'on fait varier NOTE 1 Les conditionsque l'on fait varier peuvent comprendre de nouveaux talonnages,talons, oprateurs et systmes de mesure. NOTE 2 Il convient qu'unespcification relative aux conditions contienne, dans la mesure dupossible, les conditions que l'on fait varier et celles qui restent inchanges.NOTE 3 En chimie, on utilise quelquefois le terme condition de fidlitinter-srie pour dsigner ce concept. (VIM 2008) "

- influence de phnomnes alatoires sur la fidlit- plan d'exprience ventuellement



II-5-3 Reproductibilit"La reproductibilit correspond la concordance entre laboratoires (travaux de

collaboration visant gnralement luniformisation de la mthodologie).(ICHQ2R1)"

"condition de reproductibilit : condition de mesurage dans unensemble de conditions qui comprennent des lieux, des oprateurs et dessystmes de mesure diffrents, ainsi que des mesurages rpts sur lemme objet ou des objets similaires NOTE 1 Les diffrents systmes demesure peuvent utiliser des procdures de mesure diffrentes. NOTE 2 Ilconvient qu'une spcification relative aux conditions contienne, dans lamesure du possible, les conditions que l'on fait varier et celles qui restentinchanges. (VIM 2008)"

-s'value lors d'analyses interlaboratoires-non value dans un dossier d'AMM

II-5-4 Recommandations concernant les donnes

- cart-type, cart-type relatif (CV%, RSD), intervalle de confiance.



II-6 Sensibilit, limites de dtection, de quantification

II-6-1 Sensibilit

"sensibilit : quotient de la variation d'une indication d'un systme demesure par la variation correspondante de la valeur de la grandeur mesure(VIM 2008)"

Pente de la droite d'talonnageDtermination non obligatoire




II-6-2 Limite de dtection (LD)

"La limite de dtection dune mthode danalyse individuelle correspond la plusfaible quantit de la substance analyse que la mthode permet de dtecter, sansncessairement fournir la valeur exacte. (ICHQ2R1)"

"limite de dtection : valeur mesure, obtenue par une procdure demesure donne, pour laquelle la probabilit de dclarer faussementl'absence d'un constituant dans un matriau est , tant donne laprobabilit de dclarer faussement sa prsence NOTE 1 L'UICPArecommande des valeurs par dfaut de et gales 0,05. NOTE 3 Leterme sensibilit est proscrire au sens de limite de dtection. (VIM2008)"




II-6-2 Limite de dtection (LD) (suite)

- paramtre des essais limites- plusieurs mthodes proposes valuation visuelle

examen de l'enregistrement valeurs du blanc droite d'talonnage

- indication de la limite de dtection en prcisant la mthode utilise (joindre l'enregistrement graphique le cas chant)



Limite de dtection : examen de l'enregistrement graphique (CLHP par ex)

- blanc d'analyse hmax

- injection de dilutions- dtermination de la limite de dtection


Limite de dtection : absence d'enregistrement graphique

valeurs du blanc- analyse de n blancs (n6)- calcul de sblanc- avec p=pente de la droite d'talonnage

droite d'talonnage- sblanc remplac par l'cart-type de l'ordonne l'origine ou l'cart-type des

rsidus


II-6 Sensibilit, limites de dtection, de quantification (suite)

II-6-3 Limite de quantification (LQ)"La limite de quantification dune mthode danalyse individuelle correspond

la plus faible quantit de la substance analyse que la mthode permet de doser avec un degr acceptable de fidlit et de justesse. La limite de dosage est un paramtre des analyses quantitatives des composs prsents en faibles quantits dans les matrices dchantillon; elle est plus particulirement utilise dans le dosage des impurets et (ou) des produits de dgradation. (ICHQ2R1)"

-dtermination identique prcdemment en remplaant le facteur 3 ou3,3 par 10

-indication de la limite de quantification en prcisant la mthode utilise(joindre l'enregistrement graphique le cas chant)

-vrification de la fidlit et de l'exactitude pour un chantillon de teneurproche de la LQ (calcul des recouvrement (justesse) et rptabilit (fidlit) sur nanalyses d'un mme chantillon (n6))



II-7 Robustesse"La robustesse dune mthode danalyse est une mesure de sa capacit

supporter sans consquences de petites variations apportes dlibrment auxparamtres de la mthode; elle donne une ide de la fiabilit de la mthode auxconditions normales dutilisation. (ICHQ2R1)"

- effectuer durant la phase de mise au point- dmonstration de la fiabilit lors de variations de paramtres opratoires critiques- lie la notion de reproductibilit

- paramtres opratoires considrer = paramtres quantifiables dontl'cart par rapport la valeur nominale est susceptible d'influer sur lersultat final



II-7 Robustesse (suite) stabilit des solutions dure dextraction

CLHP variations du pH de la phase mobile variations de la composition de la phase mobile colonnes diffrentes temprature dbit de la phase mobile

CPG colonnes diffrentes temprature du four dbit du gaz vecteur

- grand nombre d'essai raliser technique des plans factoriels (plan d'exprience) permet de diminuer le nombre (4 essais pour 2 paramtres, 8 essais pour 3 ou 4 paramtres)



II-8 Vrification de la comptence du systme

"La vrification de la comptence du systme fait partie intgrale de nombreusesmthodes danalyse. Elle suppose que lquipement et llectronique, les oprationsdanalyse et les chantillons constituent parties prenantes du systme et peuvent trevalues comme telles. Les critres en fonction desquels on dtermine si le systmeest appropri dpendent de la mthode valider. Les pharmacopes donnent de plusamples dtails ce sujet. (ICHQ2R1)"

USP (N, Rs, T, rptabilit injections)Ph.Eur. (As, rptabilit injections, limites de dtection et dequantification)



MtrologieChimiomtrie

FIN DE VALIDATION INTRALABORATOIRE

DES METHODES DANALYSE

Gnralits

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