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LE MILIEU A LA LYSINE DE TAYLOR (LDC)
Peptone 5 gExtrait de viande 5 g L-Lysine 10 gGlucose 0,5 gPyridoxal phosphate 0,005 gPourpre de Bromocrésol 0,01 gRouge de crésol 0,005 g ED qsp 1 L
Composition
Source N
Source de C
Indicateurs de pHviolet pH basique ou neutre, jaune pH acide
pH = 6,8 à 7
Source de C, N
Vitamine PP , coenzyme des décarboxylases
Acide aminé indispensable à la recherche de la LDC
Ensemencement
1- Introduire une goutte de suspension dans le milieu.2- Agiter.
3- Si le tube n’est pas plein, recouvrir d’un peu d’huile de vaseline.4- Incuber 24 heures à 37°C
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LE MILIEU UREE INDOLE
Tryptophane 0,3 gUrée 2 g Phosphate monopotassique 0,1 gPhosphate bipotassique 0,1 gChlorure de sodium 0,5 gEthanol à 95° 1 mLRouge de phénol à 1% 0,25 mL ED qsp 100
mL
Composition Acide aminé nécessaire à la recherche de la TDA et de la tryptophanase
Source de P
Indicateurs de pHrouge pH basique ou neutre, jaune pH acidepH = 7
Molécule azotée nécessaire pour la recherche de l’uréase
Ensemencement
1- Introduire 1 ou plusieurs colonies identiques dans le milieu.2- Agiter.3- Incuber 24 heures à 37°C.
Solubilisation du tryptophane
Sels minéraux
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Lecture des milieux
Milieu LDC
1ère lecture possible
Alcalinisation du milieu par formation d’un composé basique issu de la décarboxylation de la lysine par la LDC, la cadavérine : LDC +
2nde lecture possible
Le milieu est devenu jaune le pH est acide par formation de composés acides issus de la fermentation du glucose par les bactéries. Il n’y a pas réalcalinisation du milieu : LDC -
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Milieu urée-indole
Recherche de l’uréase: lecture directe
1ère lecture possible
Alcalinisation du milieu par formation d’un composé basique issu de l’hydrolyse de l’urée : UREASE +
Le rouge de phénol reste orangé pH neutre l’urée n’est pas hydrolysée, absence de l’enzyme chez les bactéries : UREASE -
2nde lecture possible
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Recherche de la TDA et de l’indole
10 gouttes du milieu
Reste de la culture
2 gouttes de FeCl3
2 gouttes de réactif de Kovacs
Pas de modification du milieu : TDA -
Formation d’un précipité marron présence d’acide indole pyruvique : TDA +
Présence d’un anneau orangé en surface absence d’indole : INDOLE -
Présence d’un anneau rouge en surface formation d’indole à partir du Trp sous l’action de la tryptophanase : INDOLE +