koagulation – acl top modul 4 ved peter böhm nielsen

Koagulation – ACL TOP

Modul 4

Ved

Peter Böhm Nielsen

Disposition

• Kort introduktion til hæmostase

• Gennemgang af ACL TOP udstyret

• Turbidimetrisk måleprincip

• APTT-analysen

• Analyse af koagulationsfaktorer 2,7,10

Thrombocytter

• Thrombocytter kaldes også blodplader. De dannes fra den samme fælles stamcelle som erythrocytter og leucocytter.

• Thrombocytter har ingen kerne og kan derfor ikke dele sig.

• De dannes i knoglemarven af en særlig celletype, Megakaryocytter. De store celler afsnører små ”pakker” af cytoplasma omgivet af en del af cellemembranen. Det er disse ”pakker” som kaldes thrombocytter.

Thrombocytter generelt

• Thrombocytter forlader aldrig blodbanen.

• Har en levetid på ca. 10 dage, destrueres vha. makrofager i milten eller leveren.

• Indeholder celleorganeller og cytoplasmiske enzymer som sørger for ATP produktion og syntese af vigtige biologiske produkter som lagres i vesikler.

Thrombocytter funktion

• Thrombocytter aktiveres ved karskade og binder sig til vævet i det skadede område. Det skadede kar kontraherer

• Vesiklerne udtømmer deres indhold, actin og myosin får thrombocytten til at trække sig sammen.

• Thrombocytterne agglutinerer og danner derved en prop.

• Blødning standses mekanisk, og de hæmostatiske mekanismer (koagulationen) vil nu finde sted. Der dannes et netværk af fine fibrintråde i - og omkring proppen som derved forstærkes.

• Processen kan vare op til ½ time

Thrombocytters funktion / Hæmostase

Hæmostase

• Hæmostase er fællesbetegnelsen for de processer i kroppen som permanent kan stoppe en indre eller ydre blødning som følge af skade på en blodåre.

• Det er en kompliceret proces, der følger en række trin, hvor hvert trin bygger på det foregående

• Kædereaktionen kaldes koagulationskaskaden

Hæmostase - koagulation

• Koagulationsprocessen er en kaskade af kemiske processer, der involverer et antal proteiner i blodet (koagulations faktorer), som tilsammen medfører at blodet danner et koagel, som forstærker den prop som thrombocytterne etablerede.

• Processen afsluttes med fibrinolysen, som er dem proces hvor koaglet igen nedbrydes så blodet atter kan flyde normalt i blodåren

Koagulationen

• Der indgår koagulationsfaktorerne: Faktor I – XIII (FVI findes ikke).• Koagulationsfaktorerne er proteiner som dannes i leveren.• De cirkulerer i blodbanen i inaktiv form, først ved en koagulationsproces

bliver de aktiveret.

• Ca2+ ioner, som findes i blodbanen er nødvendig ved koagulationsprocessen.

• Antikoakulans, der binder Ca2+: Citrat, EDTA og oxalat

Koagulationen

Fibrinolyse

• Når vævsheling finder sted og der ikke mere er brug for koaglet. Fibrintrådene nedbrydes,således at koaglet går i opløsning.

• Derved kan blodkar som har været helt stoppet af koagel igen blive åbnet. Fibrinolysen er som koagulations-processen kompliceret

Prøvemateriale koagulation

• Fuldblod med tilsat antikoagulans (citrat)

• Plasma er blod tilsat antikoagulans og centrifugeret (plasma øverst)

Plasma indeholder koagulationsfaktorer

• Serum blod uden antikoagulans og centrifugeret

(serum øverst)

Serum indeholder ikke koagulationsfaktorer

http://www.youtube.com/user/academiadeciencia#p/a/u/0/9QVTHDM90io



QUIZ-time

Spørgsmål 1 ?

• Hvad indgår i den primære hæmostase ?

1. Koagulationsfaktorerne V, VII og X

2. Plasminogen

3. Thrombocytter

Spørgsmål 2 ?

• Hvor kommer thrombocytterne fra ?

1. Milten

2. Megakaryocytter

3. Neurale celler

Spørgsmål 3 ?

• Hvad kan thrombocytterne blandt andet?

1. Gå ud i vævet og fjerne bakterier

2. Agglutinere

3. Initiere koagulationen selv

Spørgsmål 4 ?

• Hvad gør citrat ved blodet ?

1. Hæmmer faktor VIII

2. Er en del af fibrinolysen

3. Virker antikoagulerende

Spørgsmål 5 ?

• Hvad initierer koagulationssystemet ?

1. Vævsskade og/el. bristede blodkar

2. Høj koncentration af lipider i blodet

3. Makrofager

Spørgsmål 6 ?

• Hvordan styres koagulationen når den er aktiveret?

1. Via intracellulære signalstoffer

2. Via hæmmere og clotdannelse

3. Via milten

ACL TOP

ACL TOPer en fuldautomatisk koagulationsanalysator, der udfører afpipettering af prøver, prøvefortynding, afpipettering af reagens, kalibreringskurve og beregning af prøveresultater, samt transmission af data til computer

ACL TOP apparat-funktioner (1)

Fotometerenhed (ORU – Optical Reading unit)

ACL TOP anvender fotometrisk registrering af reaktionen i kuvetten og har en lineær lysvej, der kan anvendes til både absorptionsfotometri og turbidimetri.

Der aflæses altid ved de to anvendte bølgelængder:

671 nm (clot og immunologiske tests) og

405 nm (chromogene og immunologiske tests).

Turbidimetri (1)

Turbidimetri

Lambert-Beers lov:

A = log(I1/I0)

A = · d · c

Turbidimetri (2)

Fibrindannelse registreres turbidimetrisk målt som absorbans ved 671 nm.

Måleopløsningens turbiditet stiger efterhånden som Fibrin dannes.

Koagulationstiden defineres som det punkt, hvor der indtræder en pludselig stigning i absorbansen.

ACL TOP apparat-funktioner (4)Racks

Reagensplacering (1)

Reagensplacering (2)

Reagenser

Diluent

Prøve placering

Spørgsmål 1 ?

• Må prøverne have prop på i ACL TOP ?

1. Ja

2. Nej

Spørgsmål 2 ?

• Hvordan måles turbidimetri ?

1. Sensitiv fokusering

2. Fotometrisk

3. Nephelometrisk

Statistisk baggrund (1)

Middelværdi:

Spredning:

Variations-koefficient:

Statistisk baggrund (2)

Kontrolregler Westgard

Falder en kontrol uden for middelværdien ± 2 SD vurderes ved brug af nedenstående tabel 1

Westgard-kontrolregler om kontrolresultatet fører til forkastelse eller godkendelse (evt. med advarsel) af analyseresultaterne

Acceptgrænser i ACL TOP (1)

Acceptgrænser i ACL TOP (2)

Kontrolkort (1)Præcisions kontrol

Kontrolkort (2)Præcisions kontrol

Extern kontrol Nycotest PT, arb,Enh/L (1)

Extern kontrol Nycotest PT, arb,Enh/L (2)

Extern kontrol Nycotest PT, INR

Kalibreringskurve (1)

Forklar princippet ?

Kalibreringskurve (2)

Kalibreringskurve (3)Reaktionskurve for 100%

Sensitivitet og specificitet Analytisk

• Hvad menes med en analyses ”Specificitet”?

- Evne til at måle netop den kvantitet

• Hvad menes med en analyses ”Sensitivitet”?

- Analysens følsomhed (hældning på kurve)

Sensitivitet, specificitet & cutoffDiagnostisk

Reference interval

Raske individers 95% normal-interval

Resultatvurdering (1)

Y – Akse: Repræsenterer ændring i absorbans under reaktionen.

X – Akse: Ændring i tid under reaktionen.

Resultatvurdering (2)

• Baseline: Reagens og prøve mixes. Er generelt kort for normale prøver og længere for abnormale prøver.

• Acceleration: Her dannes fibrin clot. En stejl hældning vises ved normale prøver, hvor en svagere hældning fremkommer ved abnormale prøver.

• Deceleration: Al fibrinogen er konverteret til fibrin, så reaktionen når plateu-fasen. Svage clots kan få negativ hældning i plateu-fasen.

• Delta: Ændring i absorbans mellem baseline og endpoint fase.

Aktiveret Partiel Thromoplastin tid - APTT (1)

Screeningsanalyse, der giver et mål for aktørerne i den interne koagulationskaskade.

Testes ved APTT analyse


• Initiering: Plasma inkuberes med Hemosil APTT-SP opløsning, der indeholder phospholipid og silica opløsning.

• Aktivering: Calcium tilsættes og reaktionen løber til ende.

• Detektering: Koagulationstiden fra tilsætning af calcium til fibrin-dannelse måles med turbiditetsmåling ved 671 nm.


• P-APTT er forlænget ved:

– Nedsat funktion af en eller flere specifikke koagulationsfaktorer til under 30% af middelværdien

– Heparinbehandling

– Lupus antikoagulans


• Kalibrering: ikke relevant – den direkte clot-tid er resultatet

• Kontroller: 2 stk: normal og abnormal

• Måleområde: 20-240 sek.

• Standard måleområde: 20-90 sek.

• Referenceinterval:

– 0-30 dg: 28-50 sek.

– >1 md: 23-35 sek.

• Terapeutisk interval: 55-100 sek.

Aktiveret Partiel Thromoplastin tid - APTT (5)Resultater

Normal reaktion med afledede kurver vist.


Forlænget reaktion med afledede kurver vist. Svagere hældning på kurven.


Lille reaktionsinterval – 2. afledet kurve ikke acceptabel i forhold til valgte grænser.


Forlænget reaktionstid – ud over måleområde

Svar: >240 sek.

Koag.faktorerne II+VII+X (Funk.&INR) (1)

• En screeninganalyse, der giver et samlet mål for den katalytiske aktivitet af koagulationsfaktorerne: II, VII & X.

• Faktor VII er ansvarlig for aktivering af koagulations-kaskaden via den ”eksterne vej”.

• Syntesen af alle 3 faktorer er afhængig af K-vitamin og de produceres alle i leveren.


• Aktivering: Fortyndet citrat plasma inkuberes med Nycotest PT, der indeholder thromboplastin, phospholipid og calcium.

• Reaktionsbetingelserne er optimeret, da Nycotest PT indeholder FV og fibrinogen, så det kun er Faktorerne II, VII & X, der er bestemmende for prøvens koagulationstid.

• Detektering: Koagulationstiden måles ved fibrin-dannelse med turbiditetsmåling ved 671 nm.

• Sammenhængen mellem arbitrærstofkoncentration og koagulationstid fastlægges via kalibreringskurve.


• P-KF II+VII+X er forlænget ved:

– Leverinsufficiens

– Malabsorption og K-vitaminmangel (nedsat syntese)

– Flere thrombotiske processer (øget forbrug)

– Behandling med K-vitamin antagonister (blodfortyndende medicin)

Koag.faktorerne II+VII+X (Funk.&INR) (4)INR

• Analyseniveauet er meget afhængig af thromboplastin-reagenset, hvorfor WHO har indført internationale thromboplastiner: International Normalized Ratio (INR).

• INR = (T Patient / T normal)ISI, hvor ISI er karakteristisk for det enkelte thromboplastin.

Eks: INR = 44 sek. / 22 sek. = 2


• Kalibrering: DEKS normal og INR (høj & terapeutisk)

• Kontroller: 2 stk: normal og abnormal

• Måleområde:

– Koagulation: 0,05-1,5 arb.stofk.

– INR: 8,0-0,9


– Koagulation:

» 0-1 md: >40 arb.enh./l

» >1 md: >60 arb.enh./l



– INR:

» 0-1 md: 1,6

» >1 md: 1,3

• Terapeutisk interval: 2,0-3,0 (undtaget er dog tilstande, hvor specifikke mekaniske hjerteklapper er indopereret)

Koag.faktorerne II+VII+X (Funk.&INR) (7)Resultater

Normal reaktion med afledet kurve vist.


Forlænget reaktion med afledet kurve vist.


Lipæmisk prøve – mABS høj Ultracentrifugering mulig.


Lille reaktionsinterval – 1. afledet kurve ikke acceptabel i forhold til valgte grænser.


Meget forlænget reaktionstid – måske stigning efter 135 sek.

koagulation – acl top modul 4 ved peter böhm nielsen

Documents

kompliceret proces

blodet koagulations

koagulationsfaktorerne

koaglet gr

brug for koaglet

koagulationsfaktorerserum

antal proteiner

rkke trin