jurnal pembuatan larutan

15
 PR E P A RATION O FS TANDARD SOL U TION AND SEPAR A TI NG RE AG ENT FOR T3 R IA KIT. Prep ara t io n o f T j-f r e e se rum , s tandard s olut i on a nd s epar at in g r ea gent h ave been c a rried ou t an d tested . Tj. f r ee ser um whi ch was u sed asas olv e nt of T3 st a ndar ds w a s pr e p a red b y additionofch a rco a l i n to human serum to adsorb the T 3 hormon . Comparison of the Tj-free s erum w i th the s t a ndard  o fa commercial RIA kit showed that the binding (  B) o f the prepared T j-free serum was (53 . 9  ) high e r than the commercial ki t (4 0 . 67 ) , indi catedthatthe pr eparedTj-free se rum wa s exc e ll e nt. ABSTRACT PEMBUA T AN LAR U TA N ST AN D A R DAN P E REAKSI PE M IS AH UNTUK KIT RI A T 3 . Te lah di lakuk a n pembua t an d a n p ene n t uan k ua l i tas se rum be ba s T 3 ' lar u tan sta nda r , da n pereaksi pemisah u nt uk kit RI A T3 . Serumb eba s T 3 ya n g di g u na k an s eb agai l aru tan sta nd a r  di buat denganm e ngadso r ps i T 3 pad a Charco a l  yang d ica m purk a n p ada seru m man u si a . Serum b e b as T3 y ang di p er ol eh te rnya t a m e mbe r ikan nilai p e rs e n ik a t an ( B )  5 3,9 y an g l e bih tingg i d iba n di n gkan de n gan s t andar  ki t k o m e rsil B  40 , 67 . H al i ni m e nu nj u k k anbahwa s e rum b e bas T 3 yang d i p e rol e h c u k up baik. L a ru t an standar T3 yang dibuat cu kup b a ik dil i h at da ri h as il kali b r asi den gan l a ru ta n stan da r se kund e r . Dilak u kan pula pembuatan 3 mac a m pereaks i pe m isa h ya itu ; A ntib odi kedua ya n g dim urnika n d engan a m oni um s u l fat ya ng diimobilisasi pad a p arti k e l m agne t ik (Hun g ari a) ; antibod i k edu a  Fitzg er a ld  yang diim o bil isas i pa d a part i kel magn e t ik ( Hun gar i ); da a nt i b od i k edua F i tzge rald  ya n g d i imo b i l isas i p a da partikel ma g neti k  Fi tzgerald . D a ri p e rb an d inga n pa r a m e t er k ontro l d u a ma c a m a n ti bodi kedu yang d i i mob ili s as i pada . pa rtikel ma gn etik ( Hu n garia) m e nun j uk a n k e du a a ntibodi mempun ya i kualita s ya n g sarn a. Pad a p e rbanding a n p a ram ete r k o n t r ol partik el magnet i k Hun ga r ia dan m ag n e t ik F i t zgera l d , dip ero l e h ni l a i p e r sen Bo (34 , 6  ) d a n NS B (3 , 2  ) un t uk p artikel magnetik H un garyya n g le bi h renda h d a ri  Bo (52 ) da n NS B (5 , 5  ) pa rt ikel magnetik F i tzger a l d t et ap i n i l a i BolNS B ( I I) d a n s l openy a ( 1 , 3) leb i ht i nggi d iba ndin g k a n nil a i Bo lN SB (9 , 5) da n s lop e (0 , 9) p a rt i k e l magn e tik F itzger a ld . .lum l a h p arti k e l ya n g d i butuhk a n pe rt abung un t uk p a rti ke l m ag n e t i k Fitz g er ald cu ku b an ya k ( 80 u g ) , s ed a ngkan un t uk p a r t ik e l m a gn e t i k Hu n g aria hanya 16 u g. Ke du a part i ke lm e mpun ya k e l eb ih an dan kek ur a n gan , te t api part i ke l mag n e t i k H u nga r ia l e b ih baik seb ag ai p e n du k u ng p adat unt uk p er eak s i p e misah . Dar i h a s il st ud i bandin g , d ipero l e h b a hwa k i t RIA T 3 den g a n l a ru tan pe m i s ah Ab . kedua -M agne t ik H u n g a ri a m em p uny a i ko re l as i ya n g ba ik (99 , I  ) den g an ki t R I A T3 k o m e r si a l DPC. ABSTRAK Darlina PE MB UAT AN LAR UT A N ST NDAR DAN P EREAKSI PEM ISAH KI T RIA T3 I SSN 14 1 0  8 5 42 Jurnal Rad i o i s o to p da n R a diofa r mak a J o urnal o f R adioisot o pes and R a diopha r maceuti c a l s Vo l . I  N o . 2  1 99 8

Upload: stifano-eko

Post on 07-Jan-2016

1.130 views

Category:

Documents


277 download

DESCRIPTION

larutan

TRANSCRIPT

Page 1: jurnal pembuatan larutan

7/17/2019 jurnal pembuatan larutan

http://slidepdf.com/reader/full/jurnal-pembuatan-larutan 1/15

 

PREPARATION OF STANDARD SOLUTION AND SEPARATING REAGENT FOR T3 RIA

KIT. Preparation of Tj-free serum, standard solution and separating reagent have been carried out and

tested. Tj.free serum which was used a s a solvent of T3 standards was prepared by addition of charcoal into

human serum to adsorb the T3 hormon . Comparison of the Tj-free serum with the standard

 

of a

commercial RIA kit showed that the binding ( B) of the prepared Tj-free serum was (53.9  ) higher than

the commercial kit (40.67 ), indicated that the preparedTj-free serumwas excellent.

ABSTRACT

PEMBUATAN LARUTAN STANDAR DAN PEREAKSI PEMISAH UNTUK KIT RIA T3.

Telah dilakukan pembuatan dan penentuan kualitas serum bebas T3 ' larutan standar, dan pereaksi pemisah

untuk kit RIA T3. Serum bebas T3 yang digunakan sebagai larutan standar   dibuat dengan mengadsorpsi

T3 pada Charcoal  yangdicampurkan pada serum manusia. Serum bebas T3 yang diperoleh ternyata

memberikan nilai persen ikatan ( B)

 

53,9 yang lebih tinggi dibandingkan dengan standar

 

kit

komersil B  40,67 . Hal ini menunjukkan bahwa serum bebas T3 yang diperoleh cukup baik. Larutan

standar T3 yang dibuat cukup baik dilihat dari hasil kalibrasi dengan larutan standar sekunder. Dilakukan

pula pembuatan 3 macam pereaksi pemisah yaitu; Antibodi kedua yang dimurnikan dengan amonium sulfat

yang diimobilisasi pada partikel magnetik (Hungaria); antibodi kedua  Fitzgerald  yangdiimobilisasi pada

partikel magnetik (Hungaria); dan antibodi kedua Fitzgerald  yang diimobilisasi pada partikel magnetik

 Fitzgerald . Dari perbandingan parameter kontrol dua macam antibodi kedua yang diimobilisasi pada

. partikel magnetik (Hungaria) menunjukan kedua antibodi mempunyai kualitas yang sarna. Pada

perbandingan parameter kontrol partikel magnetik Hungaria dan magnetik Fitzgerald, diperoleh nilai persen

Bo (34,6   )dan NSB (3,2  ) untuk partikel magnetik Hungary yang lebih rendah dari   Bo (52 ) dan

NSB (5,5  ) partikel magnetik Fitzgerald tetapi nilai BolNSB (II) dan slopenya (1,3) lebih tinggi

dibandingkan nilai BolNSB (9,5) dan slope (0,9) partikel magnetik Fitzgerald. .lumlah partikel yang

dibutuhkan pertabung untuk partikel magnetik Fitzgerald cukup banyak (80 ug), sedangkan untuk partikel

magnetik Hungaria hanya 16 ug. Kedua partikel mempunyai kelebihan dan kekurangan, tetapi partikel

magnetik Hungaria lebih baik sebagai pendukung padat untuk pereaksi pemisah. Dari hasil studi banding,

diperoleh bahwa kit RIA T3 dengan larutan pemisah Ab.kedua-Magnetik Hungaria mempunyai korelasi

yang baik (99, I   ) dengan kit RIA T3 komersial DPC.

ABSTRAK

Darlina

PEMBUATAN LARUTAN STANDAR DAN

PEREAKSI PEMISAH KIT RIA T3

ISSN 1410 8542

Jurnal Radioisotop dan Radiofarmaka

Journal of Radioisotopes and Radiopharmaceuticals

Vol. I  No.2  1998

Page 2: jurnal pembuatan larutan

7/17/2019 jurnal pembuatan larutan

http://slidepdf.com/reader/full/jurnal-pembuatan-larutan 2/1578

Dalam usaha produksi kit RIA secara lokal, dalam penelitian ini dicoba untuk

membuat pelarut, larutan standar, dan pereaksi pemisah untuk T3.

Pelarut merupakan matriks yang digunakan untuk melarutkan analit, yang

, umumnya harus sesuai dengan matriks sampel. Oleh karen a sampel yang diperiksa

dengan teknik RIA berupa serum manusia, maka pelarut harus semirip mungkin dengan

serum manusia. Serum manusia merupakan matriks yang paling cocok digunakan

sebagai pelarut, namun serum yang digunakan sebagai pelarut harus bebas dari analit

yang akan diuji. Untuk kit RIA T3, serum harus dimurnikan terhadap T3. Cara yang

paling umum digunakan adalah adsorbsi dengan serbuk karbon (charcoal).

Larutan standar primer merupakan larutan standar yang dibuat dari zat stan dar

dengan kemurnian sangat tinggi yang umumnya dipasok oleh NIST,NIBCS yang dipakai

untuk kalibrasi larutan standar yang dibuat. Larutan standar sekunder merupakan larutan

yang konsentrasinya ditentukan dengan metode analitik yang dapat dipercaya. Pada

umumnya larutan standar kit RIA komersil bisa berfungsi sebagai larutan standar

sekunder, dan bisa digunakan untuk kalibrasi bila larutan standar primer tidak tersedia.

Pada teknik RIA, setelah kesetimbangan reaksi dicapai perlu

 il kuk n

tahap

pemisahan dimana ligan yang terikat dan yang bebas harus dipisahkan. Sistem

pemisahan yang ideal adalah yang cepat dan sempurna, sederhana, reprodusibel, dan

ekonomis. Ada dua sistem pemisahan pada teknik RIA yaitu pereaksi pemisah fasa cair

dan pereaksi pemisah fasa padat. Dalam perkembangannya, pereaksi pemisah fasa padat

lebih disukai karena pengerjaannya sederhana, cepat, dan reprodusibel.

PEN HULU N

The T3 standard solutions prepared with the Tj-free serum were calibrated against secondary standard

solutions showed a reasonably good correlation, as there was no significant difference observed against

expected value. Assay performance of three different separating reagents, i.e : (NH4)S04_purified second

antibodies immobilized onto Hungary magnetic particles , impurified Fitgerald second antibodies

immobilized onto Hungary magnetic particles, and impurified Fitzgerald second antibodies immobilized

onto fitzgerald magnetic particles, were compared. Comparison of control parameters of the purified and

impurified second antibodies immobilized onto Hungary magnetic particles showed that both antibodies

have similar quality. Hungary magnetic particles gave lower  B/T and NS B (34.6 ) and (3.2 ) t han

Fitzgerald magnetic particles (52 ) and (5.5 ) howe ver higher BolNSB and slope (9.5 and 0.9) were

observed for Hungary magnetic particles as compared to Fitzgerald s (I I and 1.3). For a sufficient

separation, the required amount of Hungarymagnetic particles per assay tube was much lower (16 ug) than

of Fitzgerald magnetic particles (80 ug). Therefore, it is considered that the Hungary magnetic particles was

a better solid phase separating reagent. Assay comparison between the prepared T3 RIA reagent and

a commercial (DPC) T3 RIA kit showeda very well correlation (99.I ).

ISSN 1410 8542

Jurnal Radioisotop dan Radiofarmaka

Journal of Radioisotopes and Radiopharmaceuticals

Vol. I  No.2  1998

Page 3: jurnal pembuatan larutan

7/17/2019 jurnal pembuatan larutan

http://slidepdf.com/reader/full/jurnal-pembuatan-larutan 3/15 

Serum manusia yang dipakai dalam percobaan diperoleh dari PM . Bahan kimia

yang digunakan untuk pembuatan serum bebas hormon antara lain

Glass wool

buatan

E.merck,

glass fiber

buatan E.Merck ,

celite

buatan E.Merck, dan

Charcoal

buatan

. E.Merck. Untuk pembuatan larutan standar dipakai T3 buatan Sigma. Antibodi kedua

yang digunakan diperoleh dari PPR-BA TAN dan antibodi kedua produk Fitzgerald.

Sebagai pendukung padat digunakan partikel magnetik buatan Fitzgerald dan partikel

magnetite dari Hungaria. Untuk kalibrasi larutan standar digunakan kit RIA T3 buatan

OPC dan untuk pembanding digunakan kit RIA T3 buatan ICN. Bahan-bahan kimia

yang lain adalah produk E.Merck dengan tingkat kemurnian p.a ..

Sebagai alat pencacah digunakan alat pencacah gamma type G-20 buatan mini

assay, digunakan plat magnet (magnetic separator) buatan Amersham digunakan sebagai

alat pemisah. Alat pemutar (rotator) yang digunakan dalam imobilisasi buatan NETRIA,

alat sentrifuga yang dilengkapi pendingin (lEC-Centra), alat pengocok (vortex),

komputer personal, dan perangkat lunak dari Amersham.

 ahan dan Peralatan

TAT A

KERJ D N PERCO N

Pada teknik fasa padat, antibodi diikatkan pada suatu pendukung padat seperti tabung

reaksi

 coated tube),

 macrobead , atau butiran halus (microbeads) baik secara absorbsi

maupun ikatan kovalen.Teknik antibodi fasa padat yang menggunakan butiran halus

sebagai pendukung memberikan efisiensi pemisahan lebih tinggi daripada

 macrobead

maupun

coated tube

karena mempunyai permukaan yang luas. Kini telah dikembangkan

teknik antibodi fasa padat magnetik , dimana antibodi diikatkan diimobilisasi secara

kimia pada butiran halus yang bersifat magnetik. Untuk pengendapannya hanya

diperlukan plat magnet kecil yang harganya murah.

Pada penelitian ini digunakan antibodi kedua (anti-RGG) yang diimobilisasikan

pada partikel magnetik. Penggunaan antibodi kedua mempunyai kelebihan dibandingkan

antibodi pertama, karena dapat digunakan dalam jumlah banyak.

fSSN 1410 8542

Jurnal Radioisotop dan Radiofarmaka

Journal of Radioisotopes and Radiopharmaceuticals

Vol. I  No.2 1998

Page 4: jurnal pembuatan larutan

7/17/2019 jurnal pembuatan larutan

http://slidepdf.com/reader/full/jurnal-pembuatan-larutan 4/15

80

Larutan standar T3

Larutan standar T3 dibuat dengan melarutkan larutan stok C di dalam serum

bebas hormon hingga didapat konsentrasi standar yang diinginkan dengan perbandingan

seperti Tabel 1 di bawah ini

Sebanyak 17,13 mg T3 dalam bentuk asam buatan sigma dilarutkan dalam

50 mL etanollNaOH 3: 1 iarutan stok A dengan konsentrasi 34,26 mg/l 00 mL .

Sebanyak 5 mL larutan stok A dilarutkan dengan etanollNaOH 3: 1 hingga 50 mL

 iarutan stok B dengan konsentrasi 3,426 mg/l00 mL . Sebanyak 0.1 mL larutan stok

B dilarutkan dengan larutan dapar fosfat BSA 0,05 M pH 7,4 hingga 100 mL.

Pembuatan larutan stok

Pembuatan larutan standar

Sebanyak 9 mL serum dimasukan ke dalam kolom, kemudian eluatnya

ditampung. Kualitas serum bebas hormon diperiksa dan dibandingkan dengan standar

nol DPC.

Pembuatan serum bebas hormon

Glass wool dimasukkan ke dalam kolom yang berupa suntikan plastik 30 mL

kemudian di atasnya ditaruh saringan

fiber glass.

Sebanyak 1 gram celite dilarutkan

dalam 5 mL air destilasi kemudian dimasukkan ke dalam kolom. Celite sebanyak

1 gram dicampur dengan 4 gram charcoal kemudian dilarutkan dalam 12 mL air

destilasi. Campuran tersebut dimasukan ke dalam kolom, lalu dimasukkan ke dalam

saringanfiber glass.

Penyiapan kolom.

Penyiapan Standar T3

ISSN 1410 8542

Jurnal Radioisotop dan Radiofarmaka

Journal of Radioisotopes and Radiopharmaceuticals

Vol.   No.2  1998

Page 5: jurnal pembuatan larutan

7/17/2019 jurnal pembuatan larutan

http://slidepdf.com/reader/full/jurnal-pembuatan-larutan 5/15

Pada satu seri tabung reaksi yang berisi 100 ul. partikel magnetik, masing-masing

ditambahkan antibodi yang telah dimurnikan yang jumlahnya divariasi dari 51lL sampai

50 ul diputar 1jam pada temperatur 4°C. Kemudian 5 mg EDAC ditambahkan-untuk

setiap 1 mg antibodi, diputar semalam pada temperatur 4°C. Partikel diendapkan dan

dicuci dengan 200 ilL dapar fosfat salin 0,01 M KH2P04, 0,15 M NaCI, pH

 

7,2 )

sebanyak 5 kali. Partikel magnetik dalam dapar fosfat salin kemudian diinkubasi

semalam pada temperatur 4°C. Dilakukan pula imobilisasi antibodi Fitzgerald pada

magnetik Hungaria dengan prosedur yang sarna.

Imobilisasi antibodi kedua pada partikel magnetite Fe304 dari Hungaria.

Serum antibodi kedua sebanyak 1 mL diencerkan dengan NaCI 0,9 hingga

2,33 mL. Perlahan-Iahan ditambahkan 0,9 gr NH4)2S04 dibantu dengan pengocokan.

Campuran dikocok selama 60 menit pada temperatur kamar. Untuk pengendapan

campuran disentrifuga selama 30 menit pada 2000 rpm. Endapan yang mengandung

IgG murni kemudian dilarutkan dalam bufer fosfat pH 7,4 selama 24 jam.

Pemurnian antibodi kedua dengan

 NH4~SO~

Pembuatan Larutan Pemisah

Larutan standar 800, 400, dan 200 ng/dL dikalibrasi lebih dahulu dengan kit RIA T3

DPC , sebelum membuat larutan standar 100, 50, dan 25 ng/dL.

Larutan T3  mL)

Serum bebas hormon  mL) Konsentrasi standar ng/dL)

0.5 mL larutan stok C

1,64 mL

800 ng/dL

 

mL stan dar 800 ng/dL

1 mL 400 ng/dL

1 mL standar 400 ng/dL

1 mL 200 ng/dL

1 mL standar 200 ng/dL

I mL 100 ng/dL

1 mL standar 100 ng/dL

I mL 50 ng/dL

0.5 mL stan dar 50 ng/dL 0,5 mL 25 ng/dL

ISSN 141 -8542

 urnal adioisotop dan   adiofarmaka

 ournal of  adioisotopes and  adiopharmaceuticals

Yol.   No,

 

1998

Page 6: jurnal pembuatan larutan

7/17/2019 jurnal pembuatan larutan

http://slidepdf.com/reader/full/jurnal-pembuatan-larutan 6/15

. 82

Suspensi magnetite dan suspensi magnetik Fitzgerald yang telah terimobilisasi

dengan antibodi kedua, diambil sebanyak 5, 10, 25, dan 50 ul. dimasukan ke dalam

tabung reaksi plastik. Masing-masing ditambahkan 1 mL 125I-T3, 100 ul,

anti j

inkubasi selama 2 jam pada suhu kamar. Untuk tabung NSB anti-T3 diganti dengan

dapar fosfat 0,05 M pH 7,4 yang mengandung BSA 5 . Kemudian patikel magnetik

diendapkan, endapannya dicacah setelah supernatannya dibuang. Untuk suspensi

. partikel magnetik Fitzgerald perlu dilakukan pencucian 2 kali sebelum dicacah. Persen

ikatan dihitung dengan membagi cacahan bersih endapan dengan cacahan total. Kondisi

optimum yang diperoleh dari hasil pengujian ini digunakan untuk melakukan imobilisasi

antibodi kedua dalamjumlah banyak .

Pengujian hasil imobilisasi

Sebanyak 5 mL partikel magnetik 250 mg) diencerkan dengan larutan coupling

buffer yang telah tersedia hingga 25 mL , kemudian dikocok lalu diendapkan. Langkah

ini diulang hingga 3 kali . Endapan disuspensikan dengan 20 mL glutaraldehid 5   dan

diputar selama 3 jam pada temperatur kamar. Partikel diendapkan dan disuspensikan

dengan 20 mL coupling buffer kemudian dikocok lalu diendapkan. Langkah ini diulang

. sebanyak 4 kali. Larutan protein dibuat dengan rnelarutkan antibodi kedua dengan berat

bervariasi dalam 5 mL coupling buffer. Larutanpre-coupling dibuat dengari melarutkan

25 ul, larutan protein dalam 0,5 mL coupling buffer. Larutan protein yang tersisa

ditambahkan ke dalam suspensi partikel magnetik, lalu diputar semalam pada temperatur

kamar. Partikel diendapkan, konsentrasi supernatannya larutanpost-coupling diperiksa

dan dibandingkan dengan konsentrasi larutan

pre-coupling

untuk menentukan efisiensi

imobilisasi. Endapan disuspensikan dalam 25 mL larutan glycine quenching  dikocok

dan diputar selama 30 menit dalam temperatur kamar. Partikel kemudian diendapkan

dan dicuci dengan dapar pencuci sebanyak 3 kali, dan disuspensikan dalam 6 mL dapar

fosfat BSA.

 mo bilisasi antibodi kedua pada partikel magnetik dari itzgerald

[SSN 141 8542

Jurnal Radioisotop dan Radiofarmaka

Journal of Radioisotopes and Radiopharmaceuticals

Vol. I  No.2  1998

Page 7: jurnal pembuatan larutan

7/17/2019 jurnal pembuatan larutan

http://slidepdf.com/reader/full/jurnal-pembuatan-larutan 7/1583

Serum bebas hormon yang dibuat memberikan persen ikatan 53,9 ) yang lebih

tinggi dibandingkan standar 0 kit RIA ope  40,67 ) . Hal ini menunjukan

free serum

yang diperoleh lebih murni dari standar 0 kit ope karena T3 bertanda yang terikat

dengan antibodi lebih banyak. Serum bebas hormon yang diperoleh dipakai untuk

membuat larutan standar. Pembuatan larutan standar yang dilakukan cukup baik karena

hasil kalibrasi larutan standar yang dibuat dengan larutan standar sekunder larutan

standar kit komersil) menunjukan konsentrasi standar yang diperoleh tidak jauh

berbeda dengan perkiraan lihat Tabel 2).

Untuk pembuatan larutan pemisah dilakukan imobilisasi dua macam antibodi

kedua pada partikel magnetik Hungaria dan imobilisasi satu macam antibodi kedua pada

partikel magnetik Fitzgerald. Untuk mendapatkan kapasitas ikatan yang optimal dari

hasil imobilisasi antibodi pada partikel magnetik dilakukan optimasi. Optimasi hasil

imobilisasi antibodi pada partikel magnetite Tabel 4) menunjukan 25 ul. partikel

magnetite yang diimobilisasi 250 ul. Ab/50 mg magnetite) memberikan hasil yang

optimum dimana nilai ikatan tidak spesifiknya  NSB) cukup kecil 3.5 ) dan ikatan

maksimumnya cukup baik  5 2 ). Jumlah antibodi di atas itu 50 ul.) tidak memberikan

peningkatan IT 

HASIL DAN PEMBAHASAN

Perbandingan dua partikel magnetik yang diimobilisasi dengan antibodi kedua

Fitzgerald serta perbandingan antara hasil imobilisasi dua macam antibodi pada partikel

magnetik Hungaria dengan menentukan parameter kontrol kualitas, dilakukan dengan

melakukan pengujian assay) dengan protokol seperti pada Tabel2.

Perbandingan mutu hasil imobilisasi antibodi kedua pada partikel magnetite

 Hungaria dan partikel magnetikFitzgerald

Untuk optimasi penggunaan pereaksi pemisah magnetik, jumlah antibodi yang

digunakan divariasi dari 5 ul, sampai 50 f-lL. Protokol pengujian sarna dengan protokol

assay pada pengujian imobilisasi.

Optimasi penggunaan pereaksi pemisah antibodi kedua raSa padat magnetik

dalam assayRIAT3

ISSN 1410 8542

Jurnal Radioisotop dan Radiofarmaka

Journal of Radioisotopes and Radiopharmaceuticals

Vol  I  No  1998

Page 8: jurnal pembuatan larutan

7/17/2019 jurnal pembuatan larutan

http://slidepdf.com/reader/full/jurnal-pembuatan-larutan 8/15

Optimasi hasil imobilisasi antibodi pada partikel magnetik Fitzgerald memberikan hasil

yang optimum pada 10 IJ.Lpartikel magnetik yang diimobilisasi 100 IJ.Lantibodi/250

mg magnetik) dimana NSBnya cukup kecil 4

 )

dan ikatan maksimumnya diatas 50

 

52,6 ). Pada volume partikel 25 IJ.L, ikatan maksimum yang diperoleh Iebih tinggi

 70,5

 )

tetapi persen NSB nya cukup tinggi diatas batas yang diperbolehkan. Kondisi

ini kurang baik karena akan menghasilkan assay yang tidak akurat.

Pada Tabel 4 terlihat bahwa persen ikatan   Bo) pada partikel magnetik

Fitzgerald lebih tinggi dari pada partikel magnetik Hungaria tetapi perbandingan 80

dengan NSB sedikit lebih kecil dibandingkan partikel magnetik Hungaria. Kemiringan

kurva slope) kedua partikel magnetik tidak jauh berbeda. Dari kurva standar pada

Gambar 1 terlihat ada perbedaan kecondongan kurva pada konsentrasi rendah sampai

sedang pada kurva partikeI magnetik Fitzgerald dimana pada konsentrasi rendah Iebih

landai tetapi sedikit lebih curam pada konsentrasi sedang. Pada konsentrasi tinggi

kecuraman kedua kurva standar tidak jauh berbeda, tetapi secara keseluruhan kedua

macam partikeI magnetik cukup sebanding. Perbandingan antara dua macam antibodi

. kedua yang diimobilisasi pada partikel magnetik Hungaria seperti yang terlihat pada

TabeI 4 menunjukan kedua antibodi tidak memberikan perbedaan yang nyata.

Pada perbandingan parameter karakteristik kedua partikel magnetik, terlihat

kedua partikel magnetik cukup sebanding, tetapi partikel magnetite dari Hungaria

mempunyai beberapa kelebihan dibandingkan dengan partikel dari Fizgerald yaitu,

prosedur imobilisasi antibodi pada partikel magnetite Hungaria lebih sederhana, partikel

magnetite lebih halus butirannya sehingga tidak mudah mengendap selama assay,

jumlah partikel magnetik pertabung yang dibutuhkan untuk assay lebih sedikit yaitu

16 IJ.g sedang partikel magnetik Fitzgerald 80 IJ.g, partikel magnetite lebih lama

tersuspensi pada saat pengujian assay) dibandingkan dengan partikel magnetik

Fitzgerald karen a partikelnya lebih ringan dan jumlahnya lebih sedikit. Prosedur assay

pada partikel magnetite Hungaria tidak membutuhkan langkah pencucian untuk

menurunkan nilai NSB, dan nilai NSB pada partikeI magnetik Hungaria lebih rendah

dibandingkan magnetik Fitzgerald.

Tabel 5 menunjukkan perbedaan parameter kontrol kit RIA T3 ICN dengan kit

RIA T3 yang dibuat. Walaupun ada perbedaan parameter kontrol, tetapi dari kurva

regresi seperti yang ditunjukan pada Gambar 3 terlihat kit RIA T3 yang .dibuat

mempunyai korelasi yang cukup baik dengan kit RIA T3 ICN.

1SSN1410 8542

Jurnal Radioisotop dan Radiofarmaka

Journal of Radioisotopes and Radiopharmaceuticals

Vol 1.

No 2 1998

Page 9: jurnal pembuatan larutan

7/17/2019 jurnal pembuatan larutan

http://slidepdf.com/reader/full/jurnal-pembuatan-larutan 9/15

85

1. CATT, KJ., NIALL, H.D., and TREGEARS, G.W., Biochem J 100 316,  1966).

2. CHARD, T.,  An Introduction to RIA and Related Techniques, Laboratory

Techniques in Biochemistry and Molecular Biology , Elsevier Biomedical, New

york, 1982.

3. SKELLEY, S.D., Basic Principles of Radioimmunoassay , Nuclear Medicine

Invitro, J.B. Lippincot Company, Philadelphia, 2nded.

4. WIDE, L., Solid Phase Radioimmunoassay ,IAEA-SM-20/220.

  FT R PUST K

Dari hasil penelitian pembuatan larutan standar dan larutan pemisah dapat

disimpulkan;

1. Serum bebas hormon yang dibuat cukup baik untuk digunakan sebagai pembuatan

larutan standar

2. Larutan standar yang dibuat mempunyai mutu cukup baik.

3. Antibodi kedua yang dimurnikan dengan amonium sulfatjenuh diimobilisasi pada

partikel magnetik Hungaria mempunyai kualitas yang sarna dengan antibodi kedua

buatan Fitzgerald yang diimobilisasi pada partikel magnetik Hungaria.

4. Partikel magnetik Hungaria lebih baik dari pada partikel magnetik Fitzgerald

sebagai fasa padat pada larutan pemisah

5. Kit Ria T3 dengan larutan pemisah antibodi kedua Fitzgerald-Magnetik Hungaria

mempunyai korelasi yang baik dengan kit RIA T3 DPC .

KESIMPUL N

ISSN 1410 8541

· Jurnal Radioisotop dan Radiofarmaka

Journal of Radioisotopes and Radiopharmaceuticals

Vol. I. No.1. 1998

Page 10: jurnal pembuatan larutan

7/17/2019 jurnal pembuatan larutan

http://slidepdf.com/reader/full/jurnal-pembuatan-larutan 10/15

86

Konsentrasi perkiraan estimasi Konsentrasi hasil kalibrasi  

800 ng/dL 730 ng/dL

400 ng/dL

 

350 ng/dL

200 ng/dL 200 ng/dL

100 ng/dL 107 ng/dL

50 ng/dL 55 ng/dL

25 ng/dL

30 ng/dL

Tabel Perbandingan konsentrasi larutan standar hasil kalibrasi dengan hasil

perhitungan estimasi

Larutan T3 mL Serum bebas mL

Konsentrasi stan dar

 ng/dl. : .

 

0,5 mL larutan stok C 1,64 mL

800 ng/dL

 

1 mL larutan stan dar 800 ng/dL 1 mL

400 ng/dL

1 mL larutan standar 400 ng/dL 1 mL

200 ng/dL

1 mL larutan standar 200 ng/dL 1 mL 100 ng/dL

1 mL larutan standar 100 ng/dL

1 mL 50 ng/dL

0,5 mL larutan standar 50 ng/dL

0,5 mL

25 ng/dl..

:

Tabell Protokol pembuatan larutan standar

ISSN 14/0 8542

Jurnal Radioisotop dan Radiofarmaka

Journal of Radioisotopes and Radiopharmaceuticals

Vol. / No.2 1998

Page 11: jurnal pembuatan larutan

7/17/2019 jurnal pembuatan larutan

http://slidepdf.com/reader/full/jurnal-pembuatan-larutan 11/15

87

Reagen Larutan Larutan perunut Larutan antibodi Larutan antibodi

Tabung

standar ul.

ilL pertama ilL  kedua ul.

TRA

 

500

50

 

MB

 

500

50 25

NSB

100 std 0

500

 

25

Standar 0

100

500 50 25

Standar 30

100 500

50

25

Standar 55

100

500 50 25

Standar 107 100 500 50 25

Standar 200

100 500 50 25

Standar 350 100 500 50 25

Standar 730

100

500 50 25

Ink u bas i selama 2 jam pad a temperatur kamar

diendapkan, buang supernatannya

untuk partikel magnetik Fitzgerald diperlukan pencucian dengan I mL dapar pencuci

Tabel Protokol pengujian

 assay

ISSN 1410-8542

Jurnal Radioisotop dan Radiofarmaka

Journal of Radioisotopes and Radiopharmaceuticals

Vol. I. No.2. 1998

Page 12: jurnal pembuatan larutan

7/17/2019 jurnal pembuatan larutan

http://slidepdf.com/reader/full/jurnal-pembuatan-larutan 12/15 

Parameter kit RIA T3 ICN

kit RIA T3 yang dibuat

 Bo

54 8

48

NSB

2

3

BolNSB

27 4

16

ED80

65 2 ng/dL

46 1 ng/dL

ED50

265 ng/dL

149 5 ng/dL

ED20

709 8 ng/dL

613 ng/dL

Slope 0 9 1 3

Tabel 5. Perbandingan parameter kontrol kit RIA T3 yang dibuat dengan kit RIA T3

ICN

Parameter

2nd Ab Fitzgerald- 2ndAb Fitzgerald- 2ndAb A.S-

Magnetik Fitzgerald Magnetik Hungaria

Magnetik Hungaria

 Bo

52

34 6 38

NSB

5 5

3.2

3

BolNSB

9 5

11

19

ED 80

20 1 ng/dL

46 6 ng/dL

46 9 ng/dL

ED 50 91 2 ng/dL 131.0 ng/dL 131 Ong/dL

ED20

670 ng/dL

617 ng/dL

689 3 ng /dL

Slope

0 9

1 3

1 2

Partikel 80 ug

16 ug

16 ug

magnetik

pertabung

1 kali pencucian

tanpa pencucian

tanpa pencucian

Langkah

pencucian

Tabel  Perbandingan parameter kontrol dari tigajenis larutan pemisah

ISSN 410 8542

Jurnal Radioisotop dan Radiofarmaka

Journal of Radioisotopes and Radiopharmaceuticals

Vol I  No 2  1998

Page 13: jurnal pembuatan larutan

7/17/2019 jurnal pembuatan larutan

http://slidepdf.com/reader/full/jurnal-pembuatan-larutan 13/15

89

 Gambar

 

Perbandingan kurva stan dar antara kit RIA dengan pereaksi pemisah

Ab2Fitz-Mag H dan kit RIA dengan pereaksi pemisah AbFitz-Mag Fitz

~ Konsentrasi Standar nmol/L

85

8

~

6

~

 

e

 

l

 -

~

4

2

Ab2Fitz - Mag H

  Ab2Fitz - Mag Fitz

 

/SSN 14/0 8542

 urnal adioisotop dan adiofarmaka

 ournal of adioisotopes and  adiopharmaceuticals

Vol. I  No  1998

Page 14: jurnal pembuatan larutan

7/17/2019 jurnal pembuatan larutan

http://slidepdf.com/reader/full/jurnal-pembuatan-larutan 14/15

9

Gambar 2. Kurva standar dari kit RIA K N, kit RIA dengan pereaksi pemisah

Ab2 A s Mag H dan pereaksi pemisah Ab2Fitz MagH

Konsentrasi standar

8

00

 5

20

o

 

i530

 

5

6

70

8

9

__ _  Kit RIA

l

____=Ab2

AS -

Mag H

  =

Ab2

Filz

Mag H

 

ISSM 1410 8542

Jurnal Radioisotop dan Radiofarmaka

Journal of Radioisotopes and Radiopharmaceuticals

Vol.  

No.2 1998

Page 15: jurnal pembuatan larutan

7/17/2019 jurnal pembuatan larutan

http://slidepdf.com/reader/full/jurnal-pembuatan-larutan 15/15

9

Gambar 3 Korelasi antara kit RIA T3  p dan kit RIA T3 yang dibuat

Kons Standar kit RIA yang dibuat

6

8

2

4

6

1 298  9652  x

 

8

ISSN 1410 8542

Jurnal Radioisotop dan Radiofarmaka

Journal of Radioisotopes and Radiopharmaceuticals

Vol. I  No.2  1998