Journal Reading

Title :

Comparative Proteomic Analysis of Human Whole Saliva of Children With Protein-Energy Undernutrition

Presentator : Mumtazah

1

Journal ReadingDivisi Nutrisi dan Penyakit Metabolik

Title :

Comparative Proteomic Analysis of Human Whole Saliva of Children With Protein-Energy Undernutrition

Fonteles CSR, Santos CFD, Alves KSS, Mota ACM, damasceno JX, Fonteles MC, J.Nut.2012; 744-8

2

PENDAHULUAN

KEP merupakan salah satu kekurangan gizi yang paling umum dan penting, yang ditandai oleh rendahnya

asupan energi dan protein.

Saliva merupakan cairan yang diproduksi dandisekresikan oleh kelenjar saliva mayor (parotis,

submandibula, dan sublingual) dan kelenjar saliva minor

Saliva

99% air

Organik dananorganik

3

PENDAHULUAN

Saliva Protein-Prolin-Amilase-Albumin-Imunoglobulin-Lisosim-Laktoferin-Laktoperoksidase-Histatins-Statherin-Mucins-Cysteines

4

PENDAHULUAN

Protein dan peptida dalam saliva merupakan produk dariserangkaian proses molekuler kompleks yang menentukan

struktur akhir dari molekul-molekul protein. Proses inidimulai pada tingkat biosintesis, intraglandular dan berakhir

setelah sekresi intraoral

Studi sebelumnya telah menunjukkan bahwa profilprotein saliva dikaitkan dengan berbagai gangguan

patologis, seperti gangguan pada jaringan ikat, kistikfibrosis, diabetes mellitus, sindrom Sjgren , karies gigi,

dan penyakit periodontal

5

PENDAHULUAN

Meskipun telah banyak dilakukan penelitianmengenai hubungan sinergis antara

kekurangan gizi, penyakit menular, dan sistemkekebalan, tetapi masih sedikit studi yang

meneliti mengenai protein dalam saliva padaanak kekurangan gizi

6

TUJUAN

Untuk mengetahui profilprotein dari anak yang

menderita Kurang EnergiProtein (KEP) ringan,

sedang dan berat sertamembandingkan denganprofil protein anak sehat

melalui analisis proteomiksaliva

7

METODE

Desain Studi kasus kontrol

Waktu Jam 09.00 11.00 setelah pasien puasa 2 jam

Tempat Institute for Prevention and Exceptionality

(IPREDE) ,pusat rujukan pengobatan malnutrisi di

negara bagian Cear-Brazil dan Klinik gigi anak di

Universitas negara bagian Cear-brazil

Sampel

Kasus : 91 anak laki-laki dan perempuan dengan KEP yang berumur antara 12 17 bulan (GI = KEP ringan, GII = KEP sedang, GIII = KEP berat)

Kontrol : 31 anak laki-laki dan perempuan sehat yang berumurantara 12 17 bulan (G0 = kontrol)

8

METODE

Pengumpulan data: Anak anak ditempatkan di pangkuan ibu selama 30

menit

1.5 ml volume saliva dikumpulkan selama 60 detik memakai kanula

Saliva di tempatkan dalamtabung plastik

Laboratorium9

METODE Pengumpulan data:

Pengumpulan saliva selalu dilakukan pada pukul 09.00 -11.00 setelah sebelumnya pasien puasa selama 2 jam

Prosedur kebersihan mulut dilakukan 1 jam sebelum pengumpulan saliva

Saliva di sentrifugasi 10000 g selama 10 menit, dengan 200 mL supernatan,

diliofilisasi, dan disimpan pada suhu 800C untuk dianalisis

10

METODE Proteomik analisis saliva

Konsentrasi total protein ditentukan dengan metodeBradford

Coomassie biru G250 sebagai reagen dan serum bovine albumin sebagai protein standar

Semua sampel dianalisis rangkap dua. Sampel yang dilarutkan dilipholisasi

dengan menambahkan 50 mL Milli-Q air (Milli-Q Ditambah sistem ultra murni air, Millipore Corp, MA,

USA), dan homogen dengan pengaduk mekanik(Vortex AP-56, Phoenix, S ~ ao Paulo, Brasil)

Selanjutnya, 5 mL ditarik, dan 1 mL larutan Bradford ditambahkan,dihomogenisasi, dan dibiarkan selama 10 menit. Penyerapan

diukur pada 595 nm dengan spektrofotometer11

METODE Analisis data :

Uji kruskal wallis

Uji dunn

Uji statistik signifikanjika P < 0.05

12

HASIL

13

HASIL

14

HASIL

15

HASIL

16

HASIL

17

HASIL

18

DISKUSI

Semua komponen protein yang dihasilkan daridegenerasi jaringan cenderung menumpuk di dalamrongga mulut, dalam konsentrasi yang mirip dengandinyatakan dalam plasma penggunaan saliva sebagaialat diagnostik pada keadaan KEP

Perbandingan dari dua dimensi gel elektroforesis yangdiperoleh dari sampel anak-anak yang sehat dan padaKEP ringan, sedang, dan berat menunjukkan polaprotein yang sama, namun terdapat perbedaan yangcukup besar dalam jumlah spot.

19

DISKUSI

Anak KEP berat fragmen protein dalam jumlahbesar (10-20 kDa) peningkatan aktivitasproteolitik

Para peneliti berasumsi bahwa peningkatankonsentrasi protein merupakan akibat darigangguan berat pada kelenjar ludah

Para peneliti menyatakan bahwahypoaminoacidemia didapati pada keadaan KEPberat penurunan asam amino sistemik danakhirnya mempengaruhi sintesis protein.

20

DISKUSIMeskipun beberapa telah sepakat protein lebih

tinggi dalam saliva anak-anak penderita kekurangangizi, namun dalam kasus lain, tidak menunjukkan hasil

yang sama

Fakta bahwa anak-anak penderita kekurangan giziberat dapat mengekspresikan respon pemecahan

protein yang berbeda, tergantung pada gejala klinis

Pada kasus tanpa oedem tingkat pemecahanprotein tinggimenghasilkan protein lebih sedikit

dalam plasma dan saliva Sedangkan pada kasus dengan oedemstatus gizitidak dapat dipertahankan, sehingga menurunkan

suplai asam amino bebas, plasma dan kadar protein saliva .

21

DISKUSI

Penelitian ini memisahkan protein berdasarkanberat molekul dan Isoelektrik protein memungkinkan pendekatan yang lebih akuratterhadap komposisi protein saliva dalam populasisampel

Meskipun menunjukkan konsentrasi proteintinggi, profil protein dari anak-anak penderitakekurangan gizi tidak berbeda dari pola yangdiamati pada anak-anak yang sehat atau dariorang-orang dengan status gizi ringan dansedang.

22

DISKUSI

Dalam penelitian ini, protein spot difokuskanterutama dalam gradien isoelektrik proteindengan gradient rata-rata 6,52 1,63. Selain itu,kecenderungan peningkatan isoelektrik rata-ratapada anak yang sehat dan anak dengan KEPringan dan sedang yang diamati,sedangkan padaKEP berat mengalami penurunan.

protein saliva dari anak-anak yang sehat danKEP berat terkonsentrasi dalam kisaran ph yanglebih asam.

23

DISKUSI

Anak dengan KEP ringan memiliki beratmolekul tertinggi 293 kDa dengan isoelektrikpoint=7.77 dan terendah 5 kDa denganisoelektrik point =4.83.

Protein protein kinase cyclin-dependent,yang bertanggung jawab untuk sinyal sel siklus sel dan regulasi transkripsi

24

KESIMPULAN

Profil protein dalam saliva bervariasi sesuai denganada atau tidak adanya KEP Saliva merupakan alatdiagnostik yang penting pada KEP

Pemeriksaan proteomik saliva memiliki kelebihanantara lain sifatnya yang kurang invasif dan harganyayang lebih murah

25