insights on the mechanism of formation of protein ... · molecular pharmaceutics is published by...

37
Subscriber access provided by b-on / UNIVERSIDADE DO MINHO Molecular Pharmaceutics is published by the American Chemical Society. 1155 Sixteenth Street N.W., Washington, DC 20036 Published by American Chemical Society. Copyright © American Chemical Society. However, no copyright claim is made to original U.S. Government works, or works produced by employees of any Commonwealth realm Crown government in the course of their duties. Article Insights on the Mechanism of Formation of Protein Microspheres in Biphasic System Raquel Silva, Helena Ferreira, Nuno G. Azoia, Ulyana Shimanovich, Giuliano Freddi, Aharon Gedanken, and Artur Cavaco-Paulo Mol. Pharmaceutics, Just Accepted Manuscript • Publication Date (Web): 01 Oct 2012 Downloaded from http://pubs.acs.org on October 12, 2012 Just Accepted “Just Accepted” manuscripts have been peer-reviewed and accepted for publication. They are posted online prior to technical editing, formatting for publication and author proofing. The American Chemical Society provides “Just Accepted” as a free service to the research community to expedite the dissemination of scientific material as soon as possible after acceptance. “Just Accepted” manuscripts appear in full in PDF format accompanied by an HTML abstract. “Just Accepted” manuscripts have been fully peer reviewed, but should not be considered the official version of record. They are accessible to all readers and citable by the Digital Object Identifier (DOI®). “Just Accepted” is an optional service offered to authors. Therefore, the “Just Accepted” Web site may not include all articles that will be published in the journal. After a manuscript is technically edited and formatted, it will be removed from the “Just Accepted” Web site and published as an ASAP article. Note that technical editing may introduce minor changes to the manuscript text and/or graphics which could affect content, and all legal disclaimers and ethical guidelines that apply to the journal pertain. ACS cannot be held responsible for errors or consequences arising from the use of information contained in these “Just Accepted” manuscripts.

Upload: others

Post on 19-Aug-2020

0 views

Category:

Documents


0 download

TRANSCRIPT

Page 1: Insights on the Mechanism of Formation of Protein ... · Molecular Pharmaceutics is published by the American Chemical Society. 1155 Sixteenth Street N.W., Washington, DC 20036

Subscriber access provided by b-on / UNIVERSIDADE DO MINHO

Molecular Pharmaceutics is published by the American Chemical Society. 1155

Sixteenth Street N.W., Washington, DC 20036

Published by American Chemical Society. Copyright © American Chemical Society.

However, no copyright claim is made to original U.S. Government works, or works

produced by employees of any Commonwealth realm Crown government in the course

of their duties.

Article

Insights on the Mechanism of Formation of

Protein Microspheres in Biphasic SystemRaquel Silva, Helena Ferreira, Nuno G. Azoia, Ulyana Shimanovich,

Giuliano Freddi, Aharon Gedanken, and Artur Cavaco-Paulo

Mol. Pharmaceutics, Just Accepted Manuscript • Publication Date (Web): 01 Oct 2012

Downloaded from http://pubs.acs.org on October 12, 2012

Just Accepted

“Just Accepted” manuscripts have been peer-reviewed and accepted for publication. They are posted

online prior to technical editing, formatting for publication and author proofing. The American Chemical

Society provides “Just Accepted” as a free service to the research community to expedite the

dissemination of scientific material as soon as possible after acceptance. “Just Accepted” manuscripts

appear in full in PDF format accompanied by an HTML abstract. “Just Accepted” manuscripts have been

fully peer reviewed, but should not be considered the official version of record. They are accessible to all

readers and citable by the Digital Object Identifier (DOI®). “Just Accepted” is an optional service offered

to authors. Therefore, the “Just Accepted” Web site may not include all articles that will be published

in the journal. After a manuscript is technically edited and formatted, it will be removed from the “Just

Accepted” Web site and published as an ASAP article. Note that technical editing may introduce minor

changes to the manuscript text and/or graphics which could affect content, and all legal disclaimers

and ethical guidelines that apply to the journal pertain. ACS cannot be held responsible for errors

or consequences arising from the use of information contained in these “Just Accepted” manuscripts.

Page 2: Insights on the Mechanism of Formation of Protein ... · Molecular Pharmaceutics is published by the American Chemical Society. 1155 Sixteenth Street N.W., Washington, DC 20036

� �

��������������� ��������������������������

�� ������������������� ���������

�������������� �������������

����������������

�������������������

�����������������

�����

������������������������ ���!����"#�����

�$���

������������������������������� �!�"��#������������$���%��&��'(%�)����*++,+-*��-�

.%����/������%��"�0�

1�2�3��������4��������"���$��������'&��� �&�������"����&�4��� ��"��������������5�

�����,�"���6���,.����-�7++�������"�*�

8���"9�6����� ������%��:���.�%������$"�3�*����+������"������"��7�

;����������������������������� �!�"��#������������$���%��&��'(%�)����*++,+-*���+�

.%����/������%��"����%��<&�=%����=��� �">�++�-���-��-�+�5�����!>�++�-���-��-�+�7�����

'�� 6'$ =��� �����������3��������%���"3%����?��'@���&���"9���3����?��@�������&% �&����

3�� ���"����� %"���%�&� ��� �� 3������ � ������ �������� �� ��� �A%�%�� ������ �"%��� ��&� ������

����� ��"���=� ����������� �������������&�������&��������A%�%����&���B�����������������

���������� ��� ������ �� ������� �������� ��"���=� �����"�� %���B��������������� �� ����-�

�������"��&������&% �� ���������� ��������������������� �=�� ,�6����%"����&� �����"������0�

�� ������ ��� ��� ���� �� ��� %,����� &%����� ��� ������� �� ��"9� ��3���� �� ��������=��5�

Page 1 of 36

ACS Paragon Plus Environment

Molecular Pharmaceutics

123456789101112131415161718192021222324252627282930313233343536373839404142434445464748495051525354555657585960

Page 3: Insights on the Mechanism of Formation of Protein ... · Molecular Pharmaceutics is published by the American Chemical Society. 1155 Sixteenth Street N.W., Washington, DC 20036

� �

�"� %"���&����� �C����%"�������B��� "�����&������������% %�������'�B������3�"�(�&���

����������� ���B��%���D�� ������������ �&������% %��=��%������%&����&�������������

�����B���� ����� �"� �"����� ��&� "������ ����&���B��� �������&� ��&� "���� ��&���3� � ��&���

��&����"� �������"��&��������3"����&����""����������=� ������������������������������%"����

�����������&=�E���"������������������������"�����&% ����"��&��������� ���������B���-�

�� ��""�&���(��� ��""�&� ��������&��� �����&���3�"��=�0�

F#GEH6��� ����� � �&�I� ��&���3� J��&����"� � 3�"�� �I� �� ��������I� ������I�5�

�� �������=�*�

�=����&% ���7�

�� �,� ��&� ���,���� "��� ����� �%�&� &������� ��&� ������� ���"� ������ �������� ���� ����+�

�� ���%"���� �� &����� �"������ ��&� ������� ���� � &�%�� &�"������ ������� ��&� � ��� �%&�� �����

���3�������% %�����%� �����&���� ����=�,�����

'� �� ���� �"����&�����3����&���"��&�3���%�"� 9� ��&� ,B�9���� ��� ��� ��������������

��,�A%�%�� "�A%�&,��""�&� �� � ���%"��� ��&� ���,��""�&� �� �3%33"��=�� �%�"� 9� ���� ��B�� ������

�� ��������(�&����,���"�A%�&,��""�&������� �%���� ��������� ���3����&% �&���������%���-�

9��&�������������% �����3��������%���"3%����?��'@���,0��%�������%���"3%����?K�'@�5���&��0�

����"3��� ?K�@=*��%�"� 9� ���������� ��������� ����&�������� � ��������B����� "����5�

���"�� "���� ��&� ����� ��3�"��=� ����� ��������� ��� ���������� �� ������ �%���� ����������*�

3����&�3������� ���� �"����&�����3����&�� %���&������%�"����&������&��� ����%"�������7�

���� �"� ���� �� �� %"���%�&� ����&����� �� ��� �A%�%�� ��&�%�=7� ��&��&�� �� ���������+�

������������ �3��������B�� %�� �������������%"���� ������&� ������=��"����� ����

��%"���� ���� ������ ����� �� �� �&����������� ��������� �"%����� ������� � ���� ������

Page 2 of 36

ACS Paragon Plus Environment

Molecular Pharmaceutics

123456789101112131415161718192021222324252627282930313233343536373839404142434445464748495051525354555657585960

Page 4: Insights on the Mechanism of Formation of Protein ... · Molecular Pharmaceutics is published by the American Chemical Society. 1155 Sixteenth Street N.W., Washington, DC 20036

� �

������ �� ��� ������ �%���� �������� ���""=� H�� ��� ���� ���&�� ��� %"����� � ����&����� ����

"�A%�&�� ��&% ��� � %�� � �������� �=�=�� ��� �������� ��B�� ��&� ���"����� ""����� ����

3%33"��=� ��� ""����� �� �% �� 3%33"��� ������ �������� �,���� B��� ����%�� ���9���

������%���� ��&� ��� ��&% ��� �� ����� ��&� �"�=�+,��� ��� �%���!�&�� ��&� �"� ?H�,L@� ��� �������

����,������ &��%"���&�� 3�&�� ��� ���,"��9� ��� ������=�,*� KB������ .�&��9��� � � ��=� ��&�-�

��B��������������3"��������� ���������B�������������&�&��� ����������$�������0�

�=�=�����������% %��������������&������"��?."%��� �' �&@=���' �&�����������!�"�������5�

��&���3� � ����� ���� �� �����"� &���%����� �� ��� ������ ����� ��� �����"� %"����� �*�

��%"���� ���� ������� ��� �� �������� ������=��� KB������ ��� �� ���� �!�"������� B����7�

��� %"�������&�"� 9��������!��������"��%���=��+�

��� ��� ������� B�9� %�� ����� ��"� B��� � �"% �&��� �%����� ��� �����%�"�,�%�����&����

��&���3� � ����� ����� ��� B�""� � "������ ��� ��% %��"� ������� ��� ��� ������ %�&���������

&%������� ��������������=����

��� �%&����� ��� ��% %��"� ������� ��� ��� ������ &%�� � �� �������� ������� %�&��� ������

?%"����� �B����@�B�� ���� B� �������� ��'� ?3����� ���%�� �"3%���@� ������ ��&� ��� ?��"9��-�

��3���@������=� ��� ������ ��� ������ ������������ ��� ����� �� �&���� ��% %��=� �����'��0�

������������"3%"���������-� �������"�� ����������"���,��"�!� �������B��"���������"���5�

������ �� �� 3��,����� �����=�0�� �5� E�� �!�� � ��� %����� ������� ��� ����� ��"��"���*�

&�������� ��% %����B�""� ����&�� %�� �%��� ���� ��������� ��� %�&�����&���� ����� ����������7�

���������������3������ �������3�����"�������=������"����%����%�����B�� %"&������&������+�

�����%��B�9������������% ����% %��"� ������=����

����������������B����"�����������&�3��%�������B�&��������������&���B��������3"�����

��A%�� ������(�����&�&����������&����"� J��&���3� �����=�E�����������!�� ���������B����

Page 3 of 36

ACS Paragon Plus Environment

Molecular Pharmaceutics

123456789101112131415161718192021222324252627282930313233343536373839404142434445464748495051525354555657585960

Page 5: Insights on the Mechanism of Formation of Protein ... · Molecular Pharmaceutics is published by the American Chemical Society. 1155 Sixteenth Street N.W., Washington, DC 20036

� �

��������������� ����������������������������&��������"�������������� ��""�&���

��(����&� ��""�&� �����&����� "��=���

�=�#!��������"��� �����

�=�=�������"����

��"���� ���B���� ���&�� �""� ��� �"����� ��&� �������� %��&� ��� ���� �%&��B���� ���� ��""��-�

�%��"��&� 3�� �����M'"&�� �� ��&� %��&� ��� �� ����&=� ���B��� &���&� 3������ ��"���� $����""((��0�

����N��(������� ��"�((�������"���� �� "%��O�?��&��@=��������������&���B���� ���% �&�5�

3���&� �� ��� ���� � �&��&�"�� ��&� �� ��� �������� ��A%�� �� �� �� �� ����� "�% ��� �������*�

����3���?�2��@=�*� �������&����% %����B�����������(�&�3��P� �����&�� � ��"�����.�3K�7�

?���"����.������@=� ���������&���B�����%��"��&������"����"�(�&�������"=� ����B�������"�(�&��+�

3�� ����� �������� �� "�A%�&� ����������� ?K�2$@� ��&� ����� ��� ������ ?��@�� ��&� ��������

�%����B�������5+Q�?K�2$����+�����$�*�� "���������&���@=� ������������&���A%�%���"%������

� ������� ?�++�R����K�S�0@�B���%��&� ��� ���������=���� ���������&���3� �����&��� �����

B����� ���������&&����H�?%��"��Q@����� ���������"� � ������=� �������&����A%�� �������

��� &�� ��3�&�3�� ����,"���� &���B�� �� ��� ��� ���3"� ���"��%��&� � ��������� ��� ������-�

� �&�?�=�=@�����&%��?�%���������������@=��0�

�=�=�#A%�������5�

����!��������"����%��B��� ����&�������3�,����%"���%�&��%� ��?�+�9K(���� ��T��*�

������"��:�3�� �""�$:���@����&�B����������&�����������%���� �,��=��B���&�"������B����7�

��""�&������� ���������"�%&�=� ������ ��������"�B�����������"���� �""�?&��������7�����+�

��&� ������ 5-���@� �������� ��� ����"�� �"%��� ?�0��2@=� ��� �� ���� �"� ��� �����

������%���B��� ��""�&��������������&�B����3���B���������(����! ��������"� �&�B��������

Page 4 of 36

ACS Paragon Plus Environment

Molecular Pharmaceutics

123456789101112131415161718192021222324252627282930313233343536373839404142434445464748495051525354555657585960

Page 6: Insights on the Mechanism of Formation of Protein ... · Molecular Pharmaceutics is published by the American Chemical Society. 1155 Sixteenth Street N.W., Washington, DC 20036

� -

�������D� 9�� �""��B�� ������������&����������������%���?�+U��V$@=� ���������%���B�����

�����&���%��%�%������%��B����F,�������� %�"���? $�@�������������&������%�����

��&�����&���������3���������"���������"=� ��� $��B���������� �&�B������� � � ��"��� $,��

+*� ���� %�"��&���"����� ��� �&���� ��%���B����� �2����B�����������6=��=� �����

�����"� ������%��� ? �@� B��� �9��� ���� ��� �������� B����� ��� �"%��� ��� �+� �� ����� �-�

� ���������&��������"�������%���? �@����������������������"��+���������"���=� ��� ���������0�

������%���?W @�������������"������"�"���"��B��� �" %"��&������ �� $�������B�����W �X�5�

��,� �����"%���B�����������&���������%�� $��������������W ':#=�*�

�=�=��� ������������������7�

����� ���������B�����������&�3������&���������%�"� 9Y�����&=������"������3�������+�

����,�������� %"����� � ���� B��� ������&� �� ��� ������ �� �� ��� �����J����&�� �A%�%�����

�"%��� ��&� �,&&� ���� �� ��� ���"�%&�� �� �+Q� �� �+�V$� ?U�@� ��� �����=� ��� ����� �����

�A%�%�J����� ������� ?Q@�%��&�B���>� 7-J-�� *+J�+� ��&�0+J�+�� ��&� ��� �� ���� ����� ����� ������

�""B���� � ������������'�B�������"��&>�+=�I�+=-I��=+���&�-=+���2,�=�������� ����� �����

�A%�%�J����� ����������""B������%���B����%��&>��=+I��=+I�-=+���&��+=+���2,�=��-�

�3������ ��"����������������������J����&���� ����������������������"%�����0�

��� �"��9�� B���� �"� �&� ��� �� ����������� ?��V$@� ��� ������ ����� B�� �� ��� �� ��������� B�����5�

""� �&�3�� �����%�����?�+++�����+����=@�%�������� ���� ��%3���?�"� %"���B����� %,����*�

���++���&���9����'�� �@�����&����������������������������J����&��������"%��=��7�

�=�=�� �������������������"� ����� �� ���?� #�@��+�

���� #�����"������ ���&�"%�&��� ���������%��������B���&����&��� ��������&��B��������

�++������ ��3����"�����������&������=� �����������&�����"���������� ���������B�������

3�����&�%�������4H:'�4����#���++��#������%���=����

Page 5 of 36

ACS Paragon Plus Environment

Molecular Pharmaceutics

123456789101112131415161718192021222324252627282930313233343536373839404142434445464748495051525354555657585960

Page 7: Insights on the Mechanism of Formation of Protein ... · Molecular Pharmaceutics is published by the American Chemical Society. 1155 Sixteenth Street N.W., Washington, DC 20036

� 0

�=-=�$�� �"��� �� �����

��� ��� �� �"� ����%�������� 4�"�� 6�&� B��� � ������� �� �+-�R�� B��� �&&�&� � �����

����� � �"���=� ��� ����"���B���� ���"�(�&�B��� �� �� �"� "����� � ��������� �� ����2�� ����

$����#=�����������,&��������"�?��@��� ���% �������������B����B���%��&�?�������5=+����

���"�����Z%�� �@=�-�

�=0=�� ,�6����"�����0�

�������&� ��� ��� B���� �� �&�&� �� ��� ������%��� %����� �� ���9��� #"���� ��� �%�� �++�5�

�������&���� �������������+++� �,���-++� �,�=� ��"���������� ��"� ���3%����&%��*�

��������� �B�������%����������%����B��� ���%%�"���%���&�B���&������=� ���������7�

�� �������� ��%"���� B��� A%� 9"�� ���������&� � �� �����%�� 3���&�� ?F��@� 2�A%�&� H�����+�

E��&B�� �%���� �""� ��� ��� H���� $�""� '����3"�� � ������� ��� ��""�� &������&� ��� "�A%�&����

�"%���=� '""� ����"��� B���� ����%��&� �� "���� ����� ����=� '� .�%������ &� ��"%��� �� ������

'��&����3��&�������B����������&�%�����H��������*=-���B���=� ����%�3����� ����������

��&���������9�������B����&�������&���������� �&�&������������ �%�����������������=����

��� �� �&���� ��% %��� ���� B��� �" %"��&� ���� ��� ������ �� ��� �������&� ���9� ��� ���-�

��� ��������� ���������"�����������'��&���������=�����""����&������"������3���"����B����0�

���&���&���"�,&� ��"%���B����������&�%�������.�%�������%� ��=��5�

�=5=� �"� %"��� �%&���� �� �����J����&�� ����� ��� 3�B���� ��� �A%�%�� ��&� ��� ����� ��*�

�������7�

�"� %"��� &����� �C� ���%"����� B���� �������&� B��� ��� .6H�'$�� �� 9����� %����� ����+�

.6H�H�70� �� �� ���"&�B��� ��� ��������� ���� ���� �� ����=� ��&� "������B���� �������&����

B��� 2�4$�� ��� ��� �"%�� ��&� B��� �# 2#� ��� ��� B���=� 4�,3�&�&� ����� ���� B�������

�" %"��&� %����� �� B��,������ ���&� B��� ���� ��&� "��� ������ %,���� �� *� ��&� ���[�����

Page 6 of 36

ACS Paragon Plus Environment

Molecular Pharmaceutics

123456789101112131415161718192021222324252627282930313233343536373839404142434445464748495051525354555657585960

Page 8: Insights on the Mechanism of Formation of Protein ... · Molecular Pharmaceutics is published by the American Chemical Society. 1155 Sixteenth Street N.W., Washington, DC 20036

� 5

����� ���"�=� '�� ��$� B���� �&�"� B��� %��&=� ��� �"%�� ��&� �"���� B���� %�"�&� � B���

������������3����B���������%��� %�"���� ��������+=�������&�������� ��������%��������

�++�F=� ��������%��� ��"�B������"�����&�B������������ �������%������������&�����"�!������

���� �� +=-���=� ��� ���%"�� ��������� -+���� �� ���%"��&� ���=� ��� �%�3��� �� �,&&� ������

�"� %"���B��� �����������������"��"%���B%"&�3���A%���"�������>����!%�����B���J�,-�

&&� ����?�J�@=�0�

�=*=��� �����������"&�5�

��� ���� ��� �� �� �� �������� ������� B��� �������&� ���� ��� 2B��� ���&��7� �� ���&�*�

3���&� �� ��� A%����� ���� �� �����J����&��� ��� �%�������=� �������&�B��� �������&� �7�

A%������ ��� �����J����&�� ��� �%��������� %����� ��'� ��� ���&��&� �����=� ��� �"� �������+�

� ������� ��� �!��3��&� 3�� �� "%�� ������ �� ��� ����"�� �"%��� ��� ������� ����

�����J����&�� � �������� B�� �� ��� ���� ��� ����%��&� 3�� �"������ � � ���A%��=� ������

�3��3�� ��B�������%��&���5-+�����%��������K�\�������� ������?��� ��@=� ������� ��� �����

���� ���������������B��� �" %"��&�� �&�����#A=�?�@>����

� �� � � �

� ��++

��

����Q���������� ������ �

�� ��� � � � � � � �?�@��-�

B����� ]�^�� ��&� ]�^�� ���� ��� �����"� ��&� ��� ����"� �����J����&�� � ������� ��� ��� �A%�%���0�

�"%���� ����� ���"�=� ������ ���� ��&� ���� ������ �������������J����&���� ��������� ����5�

��"���� � ��� �����"� ��%���������J����&�=�����%�������B���� �� �&�&� ��� ���"� ��� ��&��*�

������%"��B�����!������&�����������"%��U����&��&�&������=��7�

�=7=���(����&�(��,�����"�&������������+�

���(��,�����"���&������(��&����3%������� ���������B����&�������&����-=+�U�+=��V$����

%����� �� ��"����� (����(��� 4�� ?��"����� ����%����@� B��� ��� �"� ������ � "����� ���"������

�����������&����� ���"������� �� ���?�$�@������� ���"�=� ��������J����&���B�������

Page 7 of 36

ACS Paragon Plus Environment

Molecular Pharmaceutics

123456789101112131415161718192021222324252627282930313233343536373839404142434445464748495051525354555657585960

Page 9: Insights on the Mechanism of Formation of Protein ... · Molecular Pharmaceutics is published by the American Chemical Society. 1155 Sixteenth Street N.W., Washington, DC 20036

� *

&�"%�&����&���""�&�B������>�++����&�����&������������������&% �3�"����������������������

����� ��������������3"�&�%�&��������� �"��� ����&�� ��3�&��3��������� �&%���B��� �����&���

%���"������������������� ����&���&%�"����� "�=� ������%"��B�����!������&�������������"%��U���

���&��&�&������=���

�=�+=��� ����������3�"���-�

����� ���������B�������&�����V$������%������=� �����3�"���������� ���������B���0�

����%��&� ��� ����� �� ��(�� &����3%���� (��,�����"� ��&� ��� �� �� �� � ���� =� ���5�

����%������� �� ��(�� ��&� (��,�����"� B���� &��� ������ B��9� 3�� ��� �� �&%��� �����%�"��*�

&�� ��3�&=� ����� �&%���B��� �����&�%� �� "���� ����� ����� ��� �� �� ��&���&%�"����� "�=� ���7�

����3�"��� �� ����� ���������B��� �������&�B���� �����B��� �� �������� �� -Q� ��� ��� ��(�� ��&��+�

(��,�����"=����

�=�6��%"����&���� %��������

�=���������� �������������������

��� ����� �� ������� ?��'� ��&� ��@� B���� �% ����%""�� �����&� � ���� 3�� %����� ��������

��������%"���%�&���������&�3��� #�����%"��?��������@=����%������""%�����������������������-�

"���"�������� �"����� "���B��������%��� ��=� �������"����������� �"��������B%"&�������0�

��� ������� �����"� ��� ��� ��""�&� ��"����� ��&� ��� ��� �� �� �����&� &�%���� ��� �����5�

����&�� �����%�� �� � B��� ��� �A%�%�� ����������� ��� B�""� ��� ��� "����� &���%�����*�

���B���=� $�������� ��� ���� "���B��� ���� ���,�����&� ������ �"� ���� "��� �"�� ��A%����� ����7�

���""�����%�����%��� �,� ��������������3�"�(����3� �%����� ��������""���� ��� ��%��� ���+�

����=�+� �%��������� ��� ���%"�� ���� ���&�� �� �� �� ���� ������%�� ��%"���� ��� ��'����

�� ���������B���� �����&������� ��������=����

Page 8 of 36

ACS Paragon Plus Environment

Molecular Pharmaceutics

123456789101112131415161718192021222324252627282930313233343536373839404142434445464748495051525354555657585960

Page 10: Insights on the Mechanism of Formation of Protein ... · Molecular Pharmaceutics is published by the American Chemical Society. 1155 Sixteenth Street N.W., Washington, DC 20036

� 7

�@� 3@���

���������� #�����������?!-++++�������� ���@��������� �%���� ��������>� ?�@���'���

��&� ?3@����3����&�B��� �������� � ���������-=+���2,�� ��&��+=+���2,�� �����'���&�������

����� ���"�=���

'� "�����"� � �"%��� ��� ��3�� B��� �� �����&� ��� ���� ��&� ���"�(�&� 3�� �� �"�-�

�� �� ���� ����&���� �� ������&� &��� ��� ��&�� %"����"��� ������ ��� ���� ���"%���� �� ������0�

�����������?�������@=�4�"����&������&�������!��3����"�� ���������&�����3������3��&�5�

������� ��� ��� ��� ��"� ������� ������ ��&� ��������� B��� ��� ��%��� �� ��� �"���=� ��� &��� ���*�

����"�� �"%��� ��� ��� ����� � �"%����� ��&� �� �������� ��� �"����� �� ��� �"���� "��&�� � ���7�

����� �����������������&��! �������!����B��������"%��� ������ �����������%��&=��������+�

���%��� �� �������(��� ��� ������ 3������� �� ��� �A%�%�J����� � ������ ��� ���������� �� ���������

"�� ��� �� "���� ��&���3� ���&�%���B��"�� ��� �� ���"��� �"���� �� � A%����� �� ��&� "�=� ������

���%"�� "���"�� &�������� ��� ������ ����������� ��� �� ����� "�� �������� �%�������� �����

������&���3� � �����������% %��=����

Page 9 of 36

ACS Paragon Plus Environment

Molecular Pharmaceutics

123456789101112131415161718192021222324252627282930313233343536373839404142434445464748495051525354555657585960

Page 11: Insights on the Mechanism of Formation of Protein ... · Molecular Pharmaceutics is published by the American Chemical Society. 1155 Sixteenth Street N.W., Washington, DC 20036

� �+

� ���������� �2��>� $�� �"� �������� �� ��'��� ��������� "��&�B��� 4�"�� ��&� &��� ?��������

"����B����������"�����������! ��&�B�����"�����"������-���������&������&� "����B����

��� ���� ���"��� ������� �! ��&� B��� �� "����� "���� �� �**���@=� 6���>� ��� ��� ��������

�� ���% �&����� �� �"�(,�� 9��������%�����_������_���B�����������&�� �������������-�

3�������������A%�%�J����� ������� ��������������������� "�������"������&���3� ���&�%���0�

B��"�� ��� �����"��� �"���� �� � A%����� �� ��&� "��� �%�������� ��������&���3� � ��� ��� ���5�

��% %��=� �����B������� "������������� ���������3�3"��&%������B�����"� %"�������&�*�

����&��������=�7�

����&���������������� ����������������������� �������������%�&�����"�A%���������+�

������������������������% %����%�������� �������������� ������������������=� ������� ������

��������"� ������� B��� ������ ���9�&� ��� ��� �� ������� ������� �� �� ������������

3����&�3��%"���%�&=�K�������B���������� ��������"� ������������ �&������% %���������

��'���&����������� ���������������3��%"���%�&�����&�����%��������� ,�6����������=����

��� ���� ����� � 3��&�� �%�&� ��� ��� �������&� ��� ��� �� ������� ��&� �"�����&��� �� "%&���-�

'��&�����'��&�������&�'��&�����=� �������3�����"�3��&������������������&��3�&��?,$H4K,@��0�

��� "��9� ����=�==� ��� �3������ ��� ���&�B��� ���'��&�� �� ��3�����"�3��&� ��� �������&� ��5�

��� ����� ��3������ �� ��� $XH� 3�&� �� ��� '��&�� ��&� ��� &�� �&� ��� ��� ������ �� �5++,�*�

���� �������

Page 10 of 36

ACS Paragon Plus Environment

Molecular Pharmaceutics

123456789101112131415161718192021222324252627282930313233343536373839404142434445464748495051525354555657585960

Page 12: Insights on the Mechanism of Formation of Protein ... · Molecular Pharmaceutics is published by the American Chemical Society. 1155 Sixteenth Street N.W., Washington, DC 20036

� ��

�0++� �,�=���� ��� ��� ����B�9� �� &������ �%&�� �� ���'��&�� �� 3��&�B��� �&% �&� � ��3�� �����

�� ��������C��� �&������% %��=� ����%�����&� ��"%����� �&%�������������������&������

N���"%��� ����� �����O� ���"���� ����B���� ��� B�&��� �� �������&� 3��&��� �%�� �""B���� �����

�� �����&������������������"������� ��������������B��������3��&�3��&�����"��=�-,�5���

��'�������"3%"�����������&������ �&������% %��� ����������"����`,��"� ��=�*,��������,-�

%�����&� ����"���� ��"9� �� ?6��&�� �"@� �������� ��� ������&� 3�� ������� 3��&�� �� ������0�

��*+�� ����� �,��� B�� �� ���� ���&���&� ���9��� 3��&�� ��� ���� ��% %��=��� �� ��� �� ��������5�

&���"�&� ��������� �� '��&�� �� &� ��"%��� ��� ��'� ��&� ��� �� ��������=� ��� ����*�

����� ��� ���'��&����3��&�B��� ��������&�����"&��� ���&���"�,&� ��"%�&������3��&��7�

����B�� ������� �&������% %���B���&�������&�?�%��������������������%��������&���@=��+�

��'��� ��������� �������&� �� ����"��� `,��"�!� ���� ��� ����� ��% %���� ��&� ����� �����������

���������3������� ���� �"����&��������"��&�&���&��%�3������������������� �&�������

��������% %��=�H������������&�� ���������&� ��"%������%"�&��������� ������������%,���

����� ���=� ���� &��� ��&� ��� ��� ��%����� �������� �������� ��� � A%���������"�� ��%,���

����� ��������� ��&% �&�3���� �������� ������=�'���� ���A%�� ���� ����� ���� �"��-�

�� ����� ��� �"� %"��� &���� �� 3�B���� ��� �"� %"��� ������ &� �����&�� �%�� �� �������� ����0�

����� ���� �� ��� ��&�� ����� ��%��� ��&� ������� �� ������� ���������� ��� ��� �� ���������5�

������=� ��� � ,�6� ���%"�� ��B� ��� ��� �� �&���� ��% %��� �� ��� ��3�%�� ������ B����*�

�����&��B��"������"3%"�����������������������"�������%������� �&������% %���&%������7�

���� "��������=��+�

�� ��� �� 6��%"�� ���� ��� %���� ������ �� ��� '��&�� �� ������ �� ��� � ,�6� ��� �%�� �����

������ �%���� ����������������&�B���-=+���2,������'���&��+=+���2,��������%�����0+J�+������

�A%�%�J����� ���������

Page 11 of 36

ACS Paragon Plus Environment

Molecular Pharmaceutics

123456789101112131415161718192021222324252627282930313233343536373839404142434445464748495051525354555657585960

Page 13: Insights on the Mechanism of Formation of Protein ... · Molecular Pharmaceutics is published by the American Chemical Society. 1155 Sixteenth Street N.W., Washington, DC 20036

� ��

� ��'� ���

� ������&]�^� �� �������� ������&]3^� �� ��������

a,����� �*,��Q� S��7Q� S��7Q� S�-7Q�

`,K�"�!� -�,0*Q� S�0�Q� ,� ,�

6��&�� �"J��"9���

,� ,� S���Q� S��-Q�

%������&�3��&��

,� ,� S��5Q� S��-Q�

&�'�(�)������� ��� ��������)�*+",-

�&.'�(�)����������/���01)�0����)���0�.�)������)�� )��2�,*

���

�����������3������������"3%"������������'����%������%"���%�&�����������"� %"�����

�&�"���� �%&�� B��� �������&� %����� .6H�'$�� ��B���� ��� B��� ��� .6H�H�� ?��.-�'0@���

�� �,���"&=��� ������ ������ ����B���������"�����%"��&��3%��3�����������"��� ��&�"����

����,&&� �����"� %"���B�����&&�&����&�"����&������������ ��B�����""�&�B���B���=� ���-�

�� �&%����B����� �""� ��� ������� ���� ���&�"�� &����3%�&� ��%��� ��� ��� ������ � 3�� ���0�

3�������� ������%"��������� ������ ���=������������B����'������������� ��3�B����5�

B������&��,&&� ���=� ��������������������B�����"� %"����������%��� ������� ����B���*�

�,&&� ���=�KB��������&���������������������"���������B��&����������� �=�7�

��+�

Page 12 of 36

ACS Paragon Plus Environment

Molecular Pharmaceutics

123456789101112131415161718192021222324252627282930313233343536373839404142434445464748495051525354555657585960

Page 14: Insights on the Mechanism of Formation of Protein ... · Molecular Pharmaceutics is published by the American Chemical Society. 1155 Sixteenth Street N.W., Washington, DC 20036

� ��

���������� ���"� %"��� &����� � ���%"���� ���%"�� �� ��'� ��� �� �>�� ?�>�@� ��!%��� �� B���J�,��

&&� ���=���'�?�����@������������� ��B����?��&���&�B���@J�,&&� ����?����B�@=� �����'���

���������������3"���������� ����B����,&&� ���=���

����������""%���������&������� ���3�B���������'��%��� ������������������"=������ "����-�

��� ��� �%��� �� ����� ����B����,&&� ���� ���������&���3� � ?��� �%��� �������"� ��������0�

(��@=���� ����������%��� ������� ����B���B���� "���"�����������������%��� �������"=�5�

�"� %"��� &����� �� �%����� ��� ��'� ��� �&��� ����� ������� ��% %��� �� ��� ������ ��*�

�A%�%�J����� ��"������3�"�(���� ����� ������������3�3"�� "��&���� ����""������� "��=�4�7�

������� ��� �������B�����%�&��������� �&������% %���������B��3��� ,�6����%"�=������B���+�

��� ����� ����� �� �&������� ������� �� ���� ����&� ��% %��I� ���A%��"�� ������� ��(��� �������

3�����&=��%����������������&�� ����B����������������% %����%����������"���������������

������ ��������������� ��������C���3�"��=����

Page 13 of 36

ACS Paragon Plus Environment

Molecular Pharmaceutics

123456789101112131415161718192021222324252627282930313233343536373839404142434445464748495051525354555657585960

Page 15: Insights on the Mechanism of Formation of Protein ... · Molecular Pharmaceutics is published by the American Chemical Society. 1155 Sixteenth Street N.W., Washington, DC 20036

� ��

������������6���������������������"��%��� ������� %%�>�"��@�������%��� ������'��� ������

���B���������I� ����@��� ��� �%��� ������'� ��� "������ ��� ������ ��B���J�,&&� ���=� �����

�����"��B���� �" %"��&�%��������"=���

H���� �������A%����� ��� ���� �%&�� ���B������ ��� ���� ��������� � ���������&� ���-�

�������A%�%�J����� �?B���J�,&&� ���@�&��%�3�������=�����������������������������B���0�

����3"������3"�����B������������������������� , ���� �"������=���� � ��������B����5�

������� ������'� � ���������3� �%����� � ��������3�"B��=+���2,�������B�� %"&���*�

3������ ��������=� ������������� ���3����"��&�����������(������ ��������B�� �����7�

������ ��&�� ����� � ��� ������ �� � ����������� "��=� ����� �������� ������� %����+�

�"��B������������� � ��������! ��&���������"&�B�� �� %"&�3�� �""�&��� � ����������

�3���B�� ������������������&=� ���� � �������3��������������"�������B�"",9�B�� ��� �"����

�� �""�� � �������?$�$@=�$���&�����������!�"����������������� ���������������������

Page 14 of 36

ACS Paragon Plus Environment

Molecular Pharmaceutics

123456789101112131415161718192021222324252627282930313233343536373839404142434445464748495051525354555657585960

Page 16: Insights on the Mechanism of Formation of Protein ... · Molecular Pharmaceutics is published by the American Chemical Society. 1155 Sixteenth Street N.W., Washington, DC 20036

� �-

B%"&� 3�� &�������&� ��� �� �"%��� 3�"B� �� ��� �"� � �������� ��&� B�""� �"�� ���� � ������

�� ��������������3������� � ������=���

��� ���� ���������� � �������� ��&� ���&�������� �A%�%�J����� � ������ �����%��&�����

�� �������� �������B���� �%&��&=� ��� ���%"�� &�������&� ��� ��� ��� � ��������� �����

������ �� �������� ������"&��� ����� ��������� �� �������� ��� ����� �����!��%�����"&������ �-�

�++Q� �� � ������� �� -=+��� 2,�� ��&� �+=+��� 2,�� ��� ��'� ��&� ���� ����� ���"�� ?������� �@=�0�

$������"��� ��� "B��� � ������������������ ������"&�3����&�B��� ������� ��"��&��������5�

����������*+J�+� �����&�����7-J-��A%�%�J����� ����=�*�

� �7�

��������=G��"&�����'�?"�������"@���&����?���������"@��� ����������������%�����&���������+�

�A%�%�J����� ������?QI�0+J�+I�*+J�+���&�7-J-@���&�&�������������� � ��������?+=�I�+=-I����

�=+I�-=+���2,�������'���&��=+I�-=+I��+=+���2,�������@=����

��������%"�� ��� �������3����&�B���"B��������� � �������� ?+=���+=-����&��=+���2,�����

�����'���&��=+����&�-=+���2,�������@� ���3���!�"����&�3�����"B����A%�� ������� ""����������

��'���&�����"� %"�����&����&������������� ����� "�����3������B�� ��&� �������������"&��-�

�� ��� �� ��������� 3����&=� ��� ���"%�� �� �� ��� �,&&� ���� �"%��� ��� ��� �� ����0�

�� �������� ������� ���"&� 3� ���� �����9�3"�� �"�� B���� "B��� ������ � �������� �����5�

%��&=� ��� ����� ��%��� �� ������� ���� �� �,&&� ���� ������ ��� ������� ���� ��� �� ���*�

Page 15 of 36

ACS Paragon Plus Environment

Molecular Pharmaceutics

123456789101112131415161718192021222324252627282930313233343536373839404142434445464748495051525354555657585960

Page 17: Insights on the Mechanism of Formation of Protein ... · Molecular Pharmaceutics is published by the American Chemical Society. 1155 Sixteenth Street N.W., Washington, DC 20036

� �0

���� "��������=� �����������%������%������������������� � �����&��������"%�������

������"&�B�������!����"���++Q�����""������������&=���

�������������������� ���������������B���J����� ��"����3������ �����������������

�A%�"�3��%����������� �������� ����%������� ��������� ����������&% �&�3��%"���%�&�������

��B���3��� ��� ���� ����=�KB������ ��� �&�����J3�&�������������� ��� ������ ���� ���-�

�� ��������� ���3��&�� ��3�&�3����������� �"���"����������� ���&�B���������"����������0�

�&�"=� ��� �&��� � %�&�����&� ��� ��%�� ?�@� �� ������ ��� �������� ��)�)� ��� ��(��� ��� �# �5�

�������B������"��&=� �������"����&��# ��������?�@���B�&��&����������B���%��&��=�*�

!�

�� �� � � � � � �� � � � � �?�@�7�

B������ ��� ��� ��� �&��3�&� ��%��� ��� ��� ��� ��%�� �� ������ �"%�� ��A%���&� � ���� ���+�

��"������� ��� �&��3�����&�!� ��� ��� ��"����� � ������� ?$J$��B����� ���$� ��� ��� ����"����

� ������� �� �����J����&�� ��� ��� �� �������� ��&� $� ��� ��� �����"� � ������� �����

�����J����&�@=� ��� ��"%��� B���� � �����&� 3�� ��"������ ���������� ��� �� �A%���� ?�@� � ������

�!��������"� &��� �� ��� ��)�)� !=� ��� ��� ��� ��� A%����� ?�@� �� ������ ��� ��� �� �������������

�����%�"��3����&�3��2B������&=��-�

E�� ����!�� ����������"�"�������������� ���3���&��3�&�������"������� ���B�� �� ���3���0�

B�""�&�� ��3�&�3���������"����&��# �������� � ��=��5�

��� �!� � ��"%��� �� ��� 3����&� ��� ��(��� ��)�)� �����"� ������ � ������� ��&��*�

B���J����� ��"�������������%�����(�&������ ���������� ����=� ������3"�����""B�&�3���7�

��������� ? ������������'���&����������(����������%"��� ���&�������� �����"� � ����������+�

������@������"��������� ����B������"B���A%��������������� ����������%��&����������3"�����

�3����������B�����(��&����3%���������B��������""�����(�� ?�������� "���"@=������������

�����3�"����� ����&���'���&��������������%� �������(��� � ���������&�B���J����� ����

Page 16 of 36

ACS Paragon Plus Environment

Molecular Pharmaceutics

123456789101112131415161718192021222324252627282930313233343536373839404142434445464748495051525354555657585960

Page 18: Insights on the Mechanism of Formation of Protein ... · Molecular Pharmaceutics is published by the American Chemical Society. 1155 Sixteenth Street N.W., Washington, DC 20036

� �5

�"�������� �������B����%&��&���&��������&���� �3"������&� �3"���=���'� "���"��������"B�����

��� �"� ������(���� � �������� "��&�� � ���""� ��(������ "��� ��&��������� "B��� ��%�������

������������������ ��B���� �����&�B�����=���

�� ��� � ������ ��� ��"������ ��(�� ?Z,�������@�� ���� "�� ��(�� &����3%��� ?���@� ��&� ��3�"�����

�����������&�����������3����&���������'�������?-=+���2,�@�-�

'A%�%�J����� �����

��"�����?��@

]�^�

]��^�

Z,��������]&=��^�

���� ��3�"���

]B��9^�

0+J�+� +=+��U+=+�� �+�7U��5� +=*0U+=+�� �0�

*+J�+� �=�+U+=+-� -55U�-� +=��U+=+�� ���

7-J-� �=-+U+=+0� �75U��� +=�-U+=+�� �+�

&�'�!������ ����������/�3 ��4���5*6�0�

�� ��� �� ������ ��� ��"������ ��(�� ?Z,�������@�� ���� "�� ��(�� &����3%��� ?���@� ��&� ��3�"���5�

�����������&�����������3����&����������������?-=+���2,�@�*�

'A%�%�J����� �����

��"�����?��@

�]�^�

]��^�

Z,��������]&=��^�

���� ��3�"���

]B��9^�

0+J�+� �=+-U+=+�� �-+-U�7�� +=07U+=+�� �0�

*+J�+� �=*�U+=+�� 70�U�++� +=0*U+=+�� 0�

7-J-� 7=�+U+=�� 5��U50� +=�5U+=+�� 0�

&�'�!������ ����������/�3 ��4���5*6�7�

Page 17 of 36

ACS Paragon Plus Environment

Molecular Pharmaceutics

123456789101112131415161718192021222324252627282930313233343536373839404142434445464748495051525354555657585960

Page 19: Insights on the Mechanism of Formation of Protein ... · Molecular Pharmaceutics is published by the American Chemical Society. 1155 Sixteenth Street N.W., Washington, DC 20036

� �*

���������� �=� 6�"�������� 3�B���� ��� ������ ������� ��� �����"����� ���� �������� ?���� �@����

�" %"��&�����#A=�?�@���&������(��3����&�?��@=���

����� ���������B���� �������&� ���B����� ���A%��"�� ��� ���(�3"�� ��%��� ���&��� �������

"������� ����������� ����������&�������&�3��(��,�����"�����%������=� ���&���3����&�-�

��B�&�������&����&���������A%�%�J����� �������&���� � ��������%��&�������������0�

�����������%��� �� �����=� �����(��,�����"���"%���B�����"���"�������&���%�&�,�-��:���&�,5�

�*��:� �� ��� ��'� ��&� ��� �%���������� ����� ���"�=� ��� ��� �� %���� ���� ��� ������� ���*�

�3�"%����"%�������(��,�����"�������� �������������"������B��������%���� ��������7�

������%��� �=� ������&% ��������������""�������� �������������� ���������&�������&�����+�

���3%����JB������%�����%"����������������3�"��=�-����

'�� ""�&�"� ���� "��� ��� �%����� ���������� ���� �����0� B�� �����&� %� ����%������� �����

���� "����(������������&����%������������������������� �"���3�"��=� ���(��,�����"�B������

�"�� &�������&�� ��� �� ���� ��������� �� ""�&�"� ���� "���� &%�� � &����&���� �� �������

�������� ����"�� �������������������=�5��-�

������%"�������������������������3�"�����������)�)����&�������������"� � ��������0�

����������&�B���J����� ��"���� ���������������&� ��� �3"�������&��=�E��3������ �������5�

Page 18 of 36

ACS Paragon Plus Environment

Molecular Pharmaceutics

123456789101112131415161718192021222324252627282930313233343536373839404142434445464748495051525354555657585960

Page 20: Insights on the Mechanism of Formation of Protein ... · Molecular Pharmaceutics is published by the American Chemical Society. 1155 Sixteenth Street N.W., Washington, DC 20036

� �7

�� �����������(�������������-Q����� ������&�3���� ������������(��,�����"�?��"%��� "������

(��@=� ���� ������ ��� ��&� ��������� �������� ����3�"��=� ���&���3����&� ? �3"�������&��@���

&������������������3�"���������� ���������%��������������������� � ������=���

E���� �������� ��� &�������� ��� ���� �� ��� ����� � ������ �� B��� 3�����&� ��� �����

�� ���������3����&�B���-���&��+Q����,&&� ������������������� B�"���B��9����������-�

��� ��'� �� ��������� ��&� ��!� B��9�� �� ������ ��� ��� �� ��������=� '�� �� ������ ��� ��'�0�

�� �������� ��(�� ?Z,�������@�B��� 3�����&� ��� �""B�>� -55U�-� � 5++U-+���� ��&� �75U��� �5�

�++U�+�������*+J�+���&�7-J-����A%�%�J����� � ����� ����� ���"�=� �����3�"��� ���%"���"��*�

&�������&������&�� �������(��,�����"�������"B�����������(��,�����"���"%���?,7�

�+U���:���&�,�+U���:����*+J�+���&�7-J-����A%�%�J����� ������������ ���"�@=�����"���&����+�

B��� 3����&� ��� ��� �� ���������� B����� ��� �� ������ ��� ��(�� B��� 3�����&>� 70�U�++� ����

�+�+U75���� ��&� 5��U50� � *5+U7+���� ��� *+J�+� ��&� 7-J-� �� �A%�%�J����� � ��������

����� ���"�=� �%��������� ��� (��,�����"� ��"%��� �������&� ������ �� ����3�"���� ���������� �����

������� ��� ����������������%����������B�����������&�?,��U���:���&�,�+U���:����*+J�+����

��&�7-J-����A%�%�J����� ������������ ���"�@=��-�

E���� ���&��������������%"������������3"��� � "%&������� ����������������&�B���0+J�+��0�

������A%�%�J����� ���������&�B������������%����������?-=+���2,����&��+=+���2,�������'��5�

��&���������� ���"�@�������3"�������"�����%������=��*�

�=�=�#��� ���&�������������� �&������&%������� �����������������7�

��� �&��� � �&������ �� ������� ��� ����&�&� ��� � ���3"�� �� ������� ��� �� ���������+�

��������B���%�����!��&������ ���� �"����&"����������"������� �����&��=� ������

�%&�� B��� ����&��� B��� ����� �������&� %����� ��� &�������� ��!�����&��� B��� ��� ������"����

��A%�� ����.b.b.b��B�����.����."� ������&�b� ���3��'"���������������2�% ������'����� ����

Page 19 of 36

ACS Paragon Plus Environment

Molecular Pharmaceutics

123456789101112131415161718192021222324252627282930313233343536373839404142434445464748495051525354555657585960

Page 21: Insights on the Mechanism of Formation of Protein ... · Molecular Pharmaceutics is published by the American Chemical Society. 1155 Sixteenth Street N.W., Washington, DC 20036

� �+

' �&=�H%������B�������"%���������� ������� ���� �"��������������� �����������������

����������""�����&�=� ������%"������&�����"���������&��B�������"����&���3� �����&%������

"�9��2�% ����������� ���������?����!����"��7++�������&���������&�B�����������+=*U+=+-����

������������0+Q����"&���&����������� �����@=�'"����������� ��������""���!�����&���3�"������

������ ��������� �� ��� �"���,B���� ������ ��� 3� �%��� ��B��� �� �%��� ���"�� ��&���3� =�-�

'"���������������""�����&�� �����B���� �����&�B���2�% ���=�0�

���&���������������&�������B����������������(���� ���������&���&���3� ���B���3���&�5�

���������� �&��&�"��B�� �������� �����&J�"������&���&������&���3� ���"=� �������&���*�

��&����������"����%"����]�^!''].''''^��B���*,�������&%����B������4,�����%��"��9�&��7�

'����� �' �&�?!X�,�� ����&%��@���&��� ��"�����&���3� ��=�=� ?'"������ ������&�� �'I�0,�*��+�

����&%��@��B�� ���������������&�B���.������ �����&��"�!�3�"��=� ���&������� �������B�������

�����%����'����� �' �&��� ����,������"� "��&�������� ���������������"&����� �����������

�����������""�����(�����&������"�� �����&��� ��������=� �����9�B���������"�� �����&����

���� "��� �����&% ��������3"���� ���������&%������������,�����������%"���������� ���=����

�%�������������� �����&���(���������&���3� ���"������.''''������"������������-�

����� ����� �� ��� ���"&� �� �� �������� �������� �� &� ������ ��� ��(�� ��"%���� ��&� ������0�

��&�������&���� ���=� ��������%"����&� �������������&���B��� � �����&� �����&��������5�

��&� "����� "������ ��&���3� � ������� "��&� � ���""��� ��(��� ��&� ����� �%��� �� �������� �%���*�

�������������� ������������������"&���&��� ����������3�"��=��7�

��+�

����

����

����

Page 20 of 36

ACS Paragon Plus Environment

Molecular Pharmaceutics

123456789101112131415161718192021222324252627282930313233343536373839404142434445464748495051525354555657585960

Page 22: Insights on the Mechanism of Formation of Protein ... · Molecular Pharmaceutics is published by the American Chemical Society. 1155 Sixteenth Street N.W., Washington, DC 20036

� ��

�� ���������&�� �����"��������(�� ?Z,�������@������ "����(��&����3%���?���@��(��,�����"���

?�@���&���3�"�������3����&����������������&�����&���3���&�������� �&��&�"�?�++�R�@����

%���������A%�%�J����� �������0+J�+���

����&��

?4c$,�����%�@�

��"�����?��@

�]�^�

]��^�

G��"&�]Q^�

Z,��������]&=��^�

���� ��]�:^� ��3�"���

]B��9^�

]�^''].''''^� +=�-�U+=�� �7U7� 05�U�5� +=0U+=+�� ,��U�� ��

]�^�''].''''^� +=0-*U+=+-� 0+U�� 0�+U�0� +=-U+=+�� ,�0U�� ��

]�^�''].''''^� +=*0�U+=�� 0*U�� 0��U��� +=0U+=+5� ,�5U�� ��

]�^�''].''''^� �=++U+=�� 5+U�� -��U�5� +=0U+=+0� ,�7U�� ��

]�^''].''''^-� �=0�U+=�� *7U�� �07U�-� +=�U+=+�� ,�*U�� �0�

]�^�''].''''^-� �=��U+=�� 7*U�� �--U��� +=�U+=+�� ,�5U�� �0�

&�'�!������ ����������/�3 ��4���5*6���

��� �����!�������!�������������&�������B����%��&�3���&��� �������������A%�� ������-�

�� ����� "�%9 ���������� ����3��� ?�2����B��� ��� ���������"� ����3���� ��� �����0�

����%������%����"� �"������ ?K4#@=�*� ��������� ��� ��(���� �������&��� ��� �%��$�������5�

����&%���B�������"� �&�B���������������&����"� ���&���&���3� �����&%���?�� ����@=�*�

�7�

��+�

����

����

����

����

��-�

��0�

Page 21 of 36

ACS Paragon Plus Environment

Molecular Pharmaceutics

123456789101112131415161718192021222324252627282930313233343536373839404142434445464748495051525354555657585960

Page 23: Insights on the Mechanism of Formation of Protein ... · Molecular Pharmaceutics is published by the American Chemical Society. 1155 Sixteenth Street N.W., Washington, DC 20036

� ��

�� ���������&�� �����"��������(�� ?Z,�������@������ "����(��&����3%���?���@��(��,�����"���

?�@���&���3�"��� ����3����&���� ������������&�����&���3���&����2�����A%�� ���?�++�R�@����

%���������A%�%�J����� �������0+J�+���

����&�]�^�

?4c$,�����%�@�

��"�����?��@

�]3^�

]��^�

G��"&�]Q^�

Z,��������]&=��^�

���� ��]�:^� ��3�"���

]B��9^�

F6$$�� $.�F$2��?�$��@�

�=70U+=�� *��U�� �*+U�+� +=-U+=+�� ,�0U�� �0�

F6���� �.�F�2��?����@�

�=5�U+=+-� 5*U�� 75�U�*� +=*U+=+�� ,�0U�� ��

F6GG�� G.�FG2��?� ��@�

�=+5U+=�� 55U+=�� *�7U�-� +=*U+=+�� ,��U�� ��

F6KK�� K.�FK2��?�K��@�

�=7�U+=�� 50U+=7� *�+U��� +=5U+=+0� d��U�� ��

F6���� �.�F�2��?����@�

�=�7U+=+�� 7�U+=0� ��+U�-� +=-U+=+�� ,�+U�� �0�

F622�� 2.�F22��?�2�%@�

�=�*� 7�U�� �++U*� +=�U+=+�� ,�0U�� �0�

&�'�!���/���������������������&.'�!������ ����������/�3 ��4���5*6���

��� �� �� ����&�� ����� ��� �%�� $������� ����&%��� ?�$��@� B���� ���"� �&� 3�� ������� ?����@��-�

�������?� ��@��K���&����?�K��@�������"�"������?����@���2�% ����?�2�%@=� ������%"�������&�0�

��� �3"��-���&� ����"����&������� �������������&�����������������"����=���B��� ������&�5�

���$������� ���� �� ���&� ����� �������(���� ��&� �������� �������� ��� �����D�� �%��� ���*�

�� ��������������=� ��������������"�����&�3��� �����&%�����������&�������������������7�

B������3�"�� ���� �����&���3� J��&����"� � ���� ��� "��&����� ������ ��������������(�����+�

����� ��������=� �������&��B���K���&���������������������"%���&%�����������A%����������

3��� �K���&��������&%����������A%�� �=����

Page 22 of 36

ACS Paragon Plus Environment

Molecular Pharmaceutics

123456789101112131415161718192021222324252627282930313233343536373839404142434445464748495051525354555657585960

Page 24: Insights on the Mechanism of Formation of Protein ... · Molecular Pharmaceutics is published by the American Chemical Society. 1155 Sixteenth Street N.W., Washington, DC 20036

� ��

��� ���"%���� �� ��� �%�������� ��3�"��� ���� ���������B��� �������&�3������%����� �����

��(�� &����3%���� ��� �%��� �� ������� ��&� 3�������� ����� �� �� � ���� � ���� �%������=���

��� ������� ""�&�"����� "�����&���%���������������������������� %"��"��B�������&���������

�A%�%��&������������� D%�����&��������"%������ ������� "����(��B���&������ �%����������

����&������"%��������������� �"���3�"��=�0� �����3�"������%"����B�&�����������&���3���&�-�

������� �&��"� %"����&�"�? �3"���@�� ��������� ���������B����������3�"��=� ���&������0�

�� ��&���3� ��� �� ����&�� ����� ��� ������� ��"�� ���� � ����� &��=� E���� ��&���3� �5�

����&%��� �� ������ ?�X-@�� ����"� %"���������� ��&�� �� ������3"����&� ��������&������ ���*�

B��� ����� �&� ������=� ��� ]�^�''].''''^-� ��&� ]�^�''].''''^-� ����&��� �����"�&� ���7�

�����3����������� �%������=� �����(��&����3%�����&� ���(��,�����"���"%���B����������+�

����"�����&������B����� �������������� �� �� ��������� �=���� ��������� �" %"�����������

��� ��3�"��� �� ��� ���� ����&��� &�������&� ��� �� ������ ��� ��� ��"%��� �� ��(�� &����3%������

������� ����-Q�� ��"����� � ��� �����"� ��(�=��%��������� ���(��,�����"���"%��� ��&� B��&�����

(�����!��3���������3�"��=� ������%"����&� ��&�������"������������&�����������������������

��������&�� �����"�,�����3"�����B�"",&�����&���&���3"���� ���% %���=� �����3�"������%"���-�

��� ������ �K��� ��&�� ���� &�����&� �����2����B���� �"�� ���"%��&� ��&� ��� �� ������ ��� ��� ��(���0�

&����3%��� ?�+Q� �3��� ��� �����"� ��(�@� B��� 3�����&� ����� �%�� B��9�� �� ������ ? �3"�� -@=��5�

'&&����""������(��,�����"���"%������������������&��������B��� "�����(������&� ������*�

��� ��&�� �� �� ��� ���� "��� � ��������=� $������"��� ��� ��� ����� ��&� �2�%�� ��� ��"%����7�

3����&� ��� ��(�� &����3%��� ��&� (��,�����"�� &%����� �%�� ����� B���� ����� ����"��=� ����+�

���%"�� � �����&� ���� ����"�� &%�� � ��� ������ �� �� $������� ��&� ��&���3� � ����&%��=� ������

$������� �""B�� ��� &��%"���&�� 3�&�� 3�B���� ���� ����&%��� ��� �&D� ��� ����&��� � ��&% �����

Page 23 of 36

ACS Paragon Plus Environment

Molecular Pharmaceutics

123456789101112131415161718192021222324252627282930313233343536373839404142434445464748495051525354555657585960

Page 25: Insights on the Mechanism of Formation of Protein ... · Molecular Pharmaceutics is published by the American Chemical Society. 1155 Sixteenth Street N.W., Washington, DC 20036

� ��

�3%�� ��"���3�&�=��%��������������&���3� �������������"�"��������&�2�% ������%�����

������%��� ������������3"���� �&��� ��=���

� ������ ��� ���"%�� �� �� &�������� �"�� ?����� � �&�@� �� �� �������� �������� �"����

?2�����@I��"��?������@I��"��?��"���@I���&��"��?'"�����@�B�������&=��� �������B������"����

�"��?2�����@�&�&��������� ��������=� ����"�������&����������� ��������2������ %"&�-�

���������� ��������������=� ���3������%"�B���3����&�B����"��?��"���@���""B�&�0�

3���"��?'"�����@=� ��������3����&���3� ���"�%���������&�� ��������"��?��"���@����"������5�

�������'"��������&�� ����=� ������"&�� �����&�����"��?������@��� ���������B������"B��=�*�

'""��"��?������ �&�@����&������������������ �����=�7�

�� ���������&�� �����"��������(�� ?Z,�������@������ "����(��&����3%���?���@��(��,�����"��+�

?�@� ��&� ��3�"��� ���� 3����&� ��� &�������� �"�� ?����� � �&�@� ?�++�R�@�� %����� ������

�A%�%�J����� �������0+J�+����

�"�� ?������ �&�@�

��"�����?��@

�]�^�

]��^�

G��"&�]Q^�

Z,��������]&=��^�

��"� ��]�:^�

�"��?������@� -=��U+=�� �7U*� 570U�5� �U+=+�� ,��U+=*�

�"��?��"���@� �=��U+=�� 0+U�� 07+U�0� +=7U+=+�� ,��U+=-�

�"��?'"�����@� �=--U+=�� -+U�� 050U�0� +=*U+=+�� ,�0U��

�"��?2�����@� ,� ,� ,� ,� ,�

&�'�!������ ����������/�3 ��4���5*6����

�""B����#A=�?�@��B�� �����������(������� ����������������&�B���&������������&�����&����

�"��?������ �&�@=�������������&���&����������������� ���������&���3� J��&����"� ��-�

����&%��3�"�� ���������&����A%�� ������&����� ���������� "���B�������&% �&���(�=��0�

Page 24 of 36

ACS Paragon Plus Environment

Molecular Pharmaceutics

123456789101112131415161718192021222324252627282930313233343536373839404142434445464748495051525354555657585960

Page 26: Insights on the Mechanism of Formation of Protein ... · Molecular Pharmaceutics is published by the American Chemical Society. 1155 Sixteenth Street N.W., Washington, DC 20036

� �-

���

���������6�"��������3�B�����������&���3���&�������� �&��&�"�����&��"��?������ �&�@���

������� ��� �����"��������� �������� ?�����@�� �" %"��&�����#A=� ?�@���&� �����(��3����&���

?��@=���

�-�

�0�

���������6�"��������3�B���� �������&���3���&����2������&��"��?������ �&�@�������� ���5�

�����"��������� ��������?�����@�� �" %"��&�����#A=�?�@���&������(��3����&�?��@=�*�

�7�

��+�

����

Page 25 of 36

ACS Paragon Plus Environment

Molecular Pharmaceutics

123456789101112131415161718192021222324252627282930313233343536373839404142434445464748495051525354555657585960

Page 27: Insights on the Mechanism of Formation of Protein ... · Molecular Pharmaceutics is published by the American Chemical Society. 1155 Sixteenth Street N.W., Washington, DC 20036

� �0

�=�=������&��� ����������� �����������������

������� ���� ��%��"� �� ��"� %"���� ������""�� �������� ��&���3� � ��&� ��&����"� ���

������������������% %��=��������A%�%����������������������3"�������% %����3���&��������

3�"�� �� 3�B���� %��� ��&����"� � �������� ������� ��� ������ ��&���3� � �������� ��� ����

����������������"�������=�E�������������������� �����% �����%"���%�&���������"��&��-�

��� 3������ � ������� �� B���J��&���3� � �"����� ������� ��&� � �&��� ����� ��% %��� ��&�0�

������� � ��� ������ �=������&���� �� ��� ������ ��% %���� ��� �&���������� �� "%&�� �� ���5�

�&��� ���������������������B������������'��B�������������� ��� �������B�����%�&����*�

����� �� �&���� ��% %��=� ��� � ��&���� �� ��� � ��� B���J�"���� ������ �� ��&�� �7�

�������"�,�����3"����&�%,�����������=�����""� �������������������������������""�B����+�

��&���3� � ���� ����� ������� �������� � �"���� ��&���&����"� � ���� ����� �������B�������

?��������@=�H%�����%"��? �3"������&��@��%����� ���������������&��3�&������������ ����������

�%"�"����� ������=� �� �������� ������� ��� ��"��"�� ��&����&��� �� ��� ������ �� �����

$����������&� �������������� �� ���������&��������� �� �� ��������3"������ "��=����""�����&����

��3"�� ���� "��� ��� 3�� 3����&� B��� ��� ����� B���� ���� ��&� B��� ����&��� B��� "�����-�

��&���3� J��&����"� ���A%�� ��=��0�

��5�

Page 26 of 36

ACS Paragon Plus Environment

Molecular Pharmaceutics

123456789101112131415161718192021222324252627282930313233343536373839404142434445464748495051525354555657585960

Page 28: Insights on the Mechanism of Formation of Protein ... · Molecular Pharmaceutics is published by the American Chemical Society. 1155 Sixteenth Street N.W., Washington, DC 20036

� �5

���������� ��� �����"� �� ������� ���B��� �� ������ �� �������� ������>� �@� ������ �����

�"%��I� �@� ������ ����������� �� ��� ������ �� �� �A%�%�J����� � ������ ��B���� �����

��&����"� � ����&%��� ?��&� "�@� ����� ���� B��� B���� ��&� ��� ��&���3� � ����&%��� ?��������

"�@� ����� �B��� ��� ����� � �����=� ������� ��&� � �&��� ����� ��% %��� ��&� ��� �&������-�

�� "%&���������&��� �����������=�0�

�=�$� "%�����5�

�����%&������&�������"�������������� ����%"���%�&������������������ �����������*�

&�������� ������� ��&� ����&��=� K������� �� B��� ���3"����&� ��� ��� ��%�� �� ������ ��&� ���7�

��&���3� ��"�����"%������ ��������������"����������������������� �%���� ���������+�

�� ���=� ��� %��� �� &�������� ������ � ����&��� �""B�� %�� � 3�"����� ��� ��� ����� 3�"�� �� �����

��&����"� J��&���3� ��� ��� ��� ��D�� ���%�� � ��"� ��� �&��� � ����� �� �����������

����������&�� ���A%��"������������3�"�(���=�.���������""�������%"��������"������3"������

� "%&��������������� "������������&���3�"�(�����������������&���&��%"��&��3�&���3%����

��������� ������&���3� ���&���&����"� ������ ���=���-�

Page 27 of 36

ACS Paragon Plus Environment

Molecular Pharmaceutics

123456789101112131415161718192021222324252627282930313233343536373839404142434445464748495051525354555657585960

Page 29: Insights on the Mechanism of Formation of Protein ... · Molecular Pharmaceutics is published by the American Chemical Society. 1155 Sixteenth Street N.W., Washington, DC 20036

� �*

����B�9�����&��������%�&B�9����&�������������� ������ ��������3"�������� �%����

�� ��������=�E��3�"��������������3"���3%�"&�&�����&����� "���B������ ��� ������������� �����

3�����"��&����3���&� �"������� �����"&=���

���

�-�

�0�

�5�

�*�

�7�

��+�

����

����

����

����

��-�

��0�

��5�

��*�

��7�

��+�

����

����

����

Page 28 of 36

ACS Paragon Plus Environment

Molecular Pharmaceutics

123456789101112131415161718192021222324252627282930313233343536373839404142434445464748495051525354555657585960

Page 30: Insights on the Mechanism of Formation of Protein ... · Molecular Pharmaceutics is published by the American Chemical Society. 1155 Sixteenth Street N.W., Washington, DC 20036

� �7

��.�6#�$'� �H4�=���

���������� #�����������?!-++++�������� ���@��������� �%���� ��������>� ?�@���'���

��&� ?3@����3����&�B��� �������� � ���������-=+���2,�� ��&��+=+���2,�� �����'���&�������

����� ���"�=���

������� �2��>� $�� �"� �������� �� ��'��� ��������� "��&�B��� 4�"�� ��&� &��� ?������-�

"����B����������"�����������! ��&�B�����"�����"������-���������&������&� "����B��0�

��� ���� ���"��� ������� �! ��&� B��� �� "����� "���� �� �**���@=� 6���>� ��� ��� ������5�

�� ���% �&����� �� �"�(,�� 9��������%�����_������_���B�����������&�� �������������*�

3�������������A%�%�J����� ������� ��������������������� "�������"������&���3� ���&�%���7�

B��"�� ��� �����"��� �"���� �� � A%����� �� ��&� "��� �%�������� ��������&���3� � ��� ��� ����+�

��% %��=� �����B������� "������������� ���������3�3"��&%������B�����"� %"�������&����

����&��������=����

������� ���"� %"��� &����� � ���%"���� ���%"�� �� ��'� ��� �� �>�� ?�>�@� ��!%��� �� B���J�,���

&&� ���=���'�?�����@������������� ��B����?��&���&�B���@J�,&&� ����?����B�@=� �����'����

���������������3"���������� ����B����,&&� ���=��-�

���������6���������������������"��%��� ������� %%�>�"��@�������%��� ������'��� �����0�

���B���������I� ����@��� ��� �%��� ������'� ��� "������ ��� ������ ��B���J�,&&� ���=� ����5�

�����"��B���� �" %"��&�%��������"=��*�

��������=G��"&�����'�?"�������"@���&����?���������"@��� ����������������%�����&���������7�

�A%�%�J����� ������?QI�0+J�+I�*+J�+���&�7-J-@���&�&�������������� � ��������?+=�I�+=-I��+�

�=+I�-=+���2,�������'���&��=+I�-=+I��+=+���2,�������@=����

����

Page 29 of 36

ACS Paragon Plus Environment

Molecular Pharmaceutics

123456789101112131415161718192021222324252627282930313233343536373839404142434445464748495051525354555657585960

Page 31: Insights on the Mechanism of Formation of Protein ... · Molecular Pharmaceutics is published by the American Chemical Society. 1155 Sixteenth Street N.W., Washington, DC 20036

� �+

������� �=� 6�"�������� 3�B���� ��� ������ ������� ��� �����"����� ���� �������� ?���� �@����

�" %"��&�����#A=�?�@���&������(��3����&�?��@=���

���������6�"��������3�B�����������&���3���&�������� �&��&�"�����&��"��?������ �&�@���

������� ��� �����"��������� �������� ?�����@�� �" %"��&�����#A=� ?�@���&� �����(��3����&���

?��@=�-�

���������6�"��������3�B���� �������&���3���&����2������&��"��?������ �&�@�������� ���0�

�����"��������� ��������?�����@�� �" %"��&�����#A=�?�@���&������(��3����&�?��@=�5�

�$K#�#� � 2#�=�*�

���������������"��� 9�������B������������� ��������������>��@�����������"%��I�7�

�@� ������ ����������� �� ��� ������ �� �� �A%�%�J����� � ������ ��B���� ��� ��&����"� ��+�

����&%��� ?��&� "�@� ����� ����B���B���� ��&� ��� ��&���3� � ����&%��� ?������ "�@� ����� ����

B��� ��� ����� � �����=� ������� ��&� � �&��� ����� ��% %��� ��&� ��� �&������ �� "%&��� �� ������

�&��� �����������=����

'�2#�=����

�� ��� �� 6��%"�� ���� ��� %���� ������ �� ��� '��&�� �� ������ �� ��� � ,�6� ��� �%�� ���-�

������ �%���� ����������������&�B���-=+���2,������'���&��+=+���2,��������%�����0+J�+����0�

�A%�%�J����� ������5�

�� ��� � ������ ��� ��"������ ��(�� ?Z,�������@�� ���� "�� ��(�� &����3%��� ?���@� ��&� ��3�"����*�

�����������&�����������3����&���������'�������?-=+���2,�@��7�

�� ��� �� ������ ��� ��"������ ��(�� ?Z,�������@�� ���� "�� ��(�� &����3%��� ?���@� ��&� ��3�"����+�

�����������&�����������3����&����������������?-=+���2,�@����

Page 30 of 36

ACS Paragon Plus Environment

Molecular Pharmaceutics

123456789101112131415161718192021222324252627282930313233343536373839404142434445464748495051525354555657585960

Page 32: Insights on the Mechanism of Formation of Protein ... · Molecular Pharmaceutics is published by the American Chemical Society. 1155 Sixteenth Street N.W., Washington, DC 20036

� ��

�� ���������&�� �����"��������(�� ?Z,�������@������ "����(��&����3%���?���@��(��,�����"���

?�@���&���3�"�������3����&����������������&�����&���3���&�������� �&��&�"�?�++�R�@����

%���������A%�%�J����� �������0+J�+���

�� ���������&�� �����"��������(�� ?Z,�������@������ "����(��&����3%���?���@��(��,�����"���

?�@���&���3�"��� ����3����&���� ������������&�����&���3���&����2�����A%�� ���?�++�R�@��-�

%���������A%�%�J����� �������0+J�+�0�

�� ���������&�� �����"��������(�� ?Z,�������@������ "����(��&����3%���?���@��(��,�����"�5�

?�@� ��&� ��3�"��� ���� 3����&� ��� &�������� �"�� ?����� � �&�@� ?�++�R�@�� %����� ���*�

�A%�%�J����� �������0+J�+�7�

��+�

����

����

����

����

��-�

��0�

��5�

��*�

��7�

��+�

����

����

����

����

Page 31 of 36

ACS Paragon Plus Environment

Molecular Pharmaceutics

123456789101112131415161718192021222324252627282930313233343536373839404142434445464748495051525354555657585960

Page 33: Insights on the Mechanism of Formation of Protein ... · Molecular Pharmaceutics is published by the American Chemical Society. 1155 Sixteenth Street N.W., Washington, DC 20036

� ��

'��H$�' #��$H4 #4 ���

����������� �!��������=�'&&����"������������ "%&���������&�����&����A%�� ��&���"����&���

� ,�6���� �%������������ ��������=� ����������"��������"�3"��������� ����������������������

����>JJ�%3�=� �=��=���

�-�

'� KH6��4�H6�' �H4�0�

"�������������#������5�

;���������� �� ������ ��������� �� �!�"�� #������������ $���%�� &�� '(%�)��� �*++,+-*��*�

.%����/������%��"����%��<&�=%����=��� �">�++�-���-��-�+�5�����!>�++�-���-��-�+�7��7�

#������"����� ��������+�

������%� ����B���B�������%��� ���3%�������""��%���=�'""��%���������������������"����

��������"����������������%� ���=�����

�������������������

����B�9�B����%����&�3��2�&B������D� M�%"��%� ���"���&� �"��!�"������B%�&�?�=�=����

�� %3�%�@������������&�������&�B%�&����"����4���,$ ,�++0,+�05�����&�3���H�KJ��#��-�

�� ,����� ������&��$ ������""B�������6KJ���J�*7�7J�++5=��0�

'$F4HE2#�.�#4 ��5�

����B�9�B����%����&�3��2�&B������D� M�%"��%� ���"���&� �"��!�"������B%�&�?�=�=��*�

�� %3�%�@� ��������� ��&� ������&�B%�&� ���"����4���,$ ,�++0,+�05��=�K�"���� ����������7�

���9�� �H�KJ��#� ��� ,����� ���� ��&� �$ � ��� ��""B����� ��6KJ���J�*7�7J�++5=� ����+�

Page 32 of 36

ACS Paragon Plus Environment

Molecular Pharmaceutics

123456789101112131415161718192021222324252627282930313233343536373839404142434445464748495051525354555657585960

Page 34: Insights on the Mechanism of Formation of Protein ... · Molecular Pharmaceutics is published by the American Chemical Society. 1155 Sixteenth Street N.W., Washington, DC 20036

� ��

�%����B����9�B"�&�����"����$����""((������N��(������� ��"�((�������"���� �� "%��O���

�������%��"������"9� ��=���

���

���

�-�

�0�

�5�

�*�

�7�

��+�

����

����

����

����

��-�

��0�

��5�

��*�

��7�

��+�

����

����

����

����

��-�

��0�

Page 33 of 36

ACS Paragon Plus Environment

Molecular Pharmaceutics

123456789101112131415161718192021222324252627282930313233343536373839404142434445464748495051525354555657585960

Page 35: Insights on the Mechanism of Formation of Protein ... · Molecular Pharmaceutics is published by the American Chemical Society. 1155 Sixteenth Street N.W., Washington, DC 20036

� ��

6#�#6#4$#����

�=� ���� �� �=� $=I� � ����&���� P=� �=�� ��"�,'����3"���� ������"�� ��� ������%� � ��"�����=����� ��(��� ����$$%&�-��?�@��*�5,*��=����=� :�%������=I��������=I�.����K=I�E�����4=I�Z�������=���"� %"�����"�,'����3"�������%��� ��,2�9������&��������4��%3�����&�4������ "��=�#������� �����������������$$&�-�77��?*@��-�--,-�0+=�0��=� $��"&�����E=� �=I� 4��� 6=I������� '=� F=I� 2����� �=� .=�� ����&�����3������ ��� $���� �"�5�#�"%��=�!�����70���!�����(����$$%&�����?-,0@��0-�,0-7=�*��=� �%�"� 9��F=��=I�.����������=�E=���������� ��� ���%"������4��A%�%��2�A%�&�=�8��7�����!�����������%%$��?���@��5*+5,5*+7=��+�-=� .��������� �=� E=I� �%�"� 9�� F=� �=�� 4��A%�%�� 2�A%�&� ��""�&� �� � ���%"��=� #����������#��0��� ����%%�&������--=����0=� .����������=�E=I�F"3� 9��F=�'=I��������6=�2=I��%�"� 9��F=��=I�E�33��'=I�E�"�����2=�P=I����E�����=I��������4=��=I����&��&���=�'=I���,��������=��#����������(��� ������%%�&��+�����=����5=� �%�"� 9��F=��=I�.����������=�E=��#������� ������������������%%�&�**��55+*=��-�*=� E�����=I��%�"� 9��F=��=���� ���� �""����&% �&�K���"3����� �3%33"��=�9� �����0���)����������0��#������%%�&��5���*7=��5�7=� �%�"� 9�� F=� �=I� .��������� �=� E=I� F"3� 9�� F=� P=I� E���� �=�� $���� ���(���� ���*��� ���� �""���������&������� �%���� ��������=��� ��)���������������%%�&���� ?�@���0-,�7��0*=��+��+=� ������ =�P=I�2�������P=��=I��������=��=I�Z����G=��������������� �������>����%���������A%�%���������"������������"%��� �� ������=��� ��)���������������%%�&����?�@��7�,7-=������=� �%�"� 9�� F=� �=I� ��� ��� .=� P=�� '��"� ����� �� �"���%�&� �������"�� $�������=��������������9� ������)���%%%��?�7@���7-M��0=������=� 6���� P=I� '��99%����� �=I� #%"������ H=I� ��� ������� $=I� 6������� P=I� .�������� �=���-�#���������%"���%�&���&% �&� �������3%33"��������%��������A%�%���"%���=��� ��)�����0�����������$$�&�����?-@����-,��7=��5���=� 2�"��� $=I� #",�������� �=I� K������� �=� P=�� ��� ���� � �� �"%��� "���"� �� �"���� � ��&��*�&������ � ���%"�� �����5+�9K(� B��� ������ ���� �"� ��� �=��� ��)�������������$$�&������7�?�@���5-,�57=��+���=� '�������=I�.�&��9����'=���,��3�&��'���4�6�A%���&���� ����� ���� �"������������������� �%���� ��������>� ���$�������������&��=�(�������8��$$&��00��?�@��5+-,5+5=�����-=� ������� =�P=�����%��'"3%���=�����#�� ���!������%��&��5���0�,��-=�����0=� G����% ����F=I�F�9% ����G=I� �9����� =I�F�9% ����'=I�H�������=I�����%����F=I���(%�������=�P=��8��9����(�����%�%&���+��?�@����5,��7=��-��5=� 2(���=I�$"������=�$=��(�������%�%&�0����+-,���=��0��*=� '�� ����.=��=I�2����F=I�P����E=I�2����� 9����.=I�F%"9������'=��=I�.����B�"",E�"&�� =I��5�K�"�,��(��� K=I� � .��&��� .=I� ����� b=,G=I� E��"�� �=� �=�� �� ����� 2�%9 ��� ��������*�����3�����&�����4�,6�&%�&����%� ����4� ������� ���4���"�E%�&�K��"���=��� �9����7�$$$&�0��?�+@�����5,��-�=��+��7=� 2B����H=�K=I�6��3�%����4=� P=I�'=� 2�B��� ����I�6��&�""�� 6=� P=�� ����������%���������B����"��,����"�6�����=�8��(����!������%��&��7���?�@���0-,�5-=�����+=� �%�D���� K=�� $���� ���(���� �� �"�&� 2���&� 4������ "��� ��&� �� ����� "�=� ������:0�)0����)� �� ;��/�<��/� )� ���� ;������ �00������)�� 9� ���)� ���� �00��� ��)��4���%((������$=��#&=�$6$�������22$>�� ��6�����"��&����++-I������,00=��-�

Page 34 of 36

ACS Paragon Plus Environment

Molecular Pharmaceutics

123456789101112131415161718192021222324252627282930313233343536373839404142434445464748495051525354555657585960

Page 36: Insights on the Mechanism of Formation of Protein ... · Molecular Pharmaceutics is published by the American Chemical Society. 1155 Sixteenth Street N.W., Washington, DC 20036

� �-

��=� '���&���� �=I� G��� �=�� ����&% �&� #"� ��� �������� �%&���� �� 4�"�� 6�&� ��� ����������� ���� �H��$""�&�"�4������ "��=��0�� ����!������ ����$$�&�0+��?�@��**-,***=�����=� .�����������=I��B"�����=��=����� ��"%����� ��%&���������2���&���3���4�"��6�&=���8��:0����)���%��&��0��5*�,5*7=�����=� K������ �=� �=I� ����� ���� �=�� � �6� ��� �� �� � $���� ���(���� �� ������ ��% %��� ���-�'A%�%����&�4�,'A%�%����&��=�8��9����!� ����(=�4�������%%%&�5��?�,�@���+5,���=�0���=� $��%���F=�F=��� �6J' 6����������'&���������������"��%��� ��=�(��� ����)�5��%%�&��7��?�,-@���-5,�07=�*��-=� ��"���� �=� �=I� �%���� K=�� #!�������� �� ��� �� �&���� ��% %��� �� ������� 3��7��� ��"��&�� �6���� ��=�(�0������)��%��&��-���07,�*5=��+��0=� ����� '=I� K%����� �=I� $�%������ E=� �=�� ������ �� �&���� ��% %���� ��� E���� ��������� �&,����������'��&�����������&���� ��=�(�����) ����%%$&��7��?��@����+�,��+*=�����5=� F���K=I� G�� �=I� 2%�b=I� .%� 2=I� ���� P=I� .=�� b=�� �� ��"%��� �� H���"����&� ���9���������&������#!������""���&����&�.�%�������&�"����$������������ B,���������"�.������$�����������8��!����� �/������$$�&��+*0��?�,�@���0+,�0�=��-��*=� .e"������� �=I�.e(�����=I���% ����=��=I�E������ P=�� ��% %��"� ��&��%� ���"�$������� ����0��"����� ��&����������%��'"3%�����"%���=��� ��)��������������$$�&�����?�@���5�,�*�=��5��7=� G���"�9�����.=��=I� ������� ����=�4=I�#"���9����'=�'=���� �&������% %�����."3%"����*�����������'&������2������������"%��,'��������� ��3������������%����� ���������6��7���� �� ��=�!������8�������$$�&�05��?�@���*-,�7�=��+��+=� �%��F=I�.���3��B��F=I�K������2=I�F"�3�����'=��=I�63����2=��� �6�$���� ���(������������ �� �&���� ��% %��� �� ������� #� ���%"��&� B����� �2.'� �� ��������=� 8�� !�� ���������������)���%%%&�-*��?�@���-5,�00=������=� �9�&���F=I����������=I�'9���F=���� �&������% %���������������%��'"3%���� ������'���� ���&�$���� ��%��� ����"%���=�8��!������>� ��2���������%��&���5��?�@����+,��0=��-���=� :�� � �"���'=I����&&���.=I�$��� ,��%"��'=����&����&�3"��������"������&�����"9��0���3������&�F�����=�(��������������)�$$�&�7��?�@����77,��+-=��5���=� K����� �=I� F%(����� $=I� ���� &��� ���"�� �=I� 2��&��"�� #=�� .6H�'$�� �>� '"������� ����*�K���"��#��� �����2�&,��"�� �&����&�� �"�3"���"� %"������%"���=�8��!�����<������!��0� ���7�$$�&����?�@����-,��5=��+���=� H���3���9��$=I�:�""���'=I����9��'=�#=I�:���.%��������E=��=��'����"� %"��� �� ��������"&� ����&� �� ��� ����� #���"��� �� K�&����� ��&� �"����>� ��� .6H�H�� �� �,���"&�����������������-�'-���&�-�'0=�8��������2�!��0� ��!���) ��$$�&��-���0-0,�050=�����-=� ������ �=,�=I�K%�����.=�� #��� �� �� #�%"�������� �� ���$��""�&�6�"����� �� �� "��!�"����? �!"f@�����4��������������&����&�3"���"������8��!�� ������������)��$$�&�5���?�@��-�,�-�07=��0��0=� ��"����=I�K�����������=I�F%������=�4=���2.'�4������ "��������%����"�����>� ��������5������'�=�!� ����<����;��/�!��������) �$$�&�����?-@���*5,���=��*��5=� ��"����=I�����&B�D��:=I�K�����������=I�����3�����P=I���9B�9����=I�F%������=�4=�:=�6=���7�������� �� ��&����&�3"�� 4������ "��>� '� 4��"� '���� �� � #� ���%"����� ��"�� �"%3"���+���� ���� �"�#""��� �' �&=����� �������/��$$�&��0���*�7,�*��=������������������-�

Page 35 of 36

ACS Paragon Plus Environment

Molecular Pharmaceutics

123456789101112131415161718192021222324252627282930313233343536373839404142434445464748495051525354555657585960

Page 37: Insights on the Mechanism of Formation of Protein ... · Molecular Pharmaceutics is published by the American Chemical Society. 1155 Sixteenth Street N.W., Washington, DC 20036

� �0

�G4H����=� ���������������� �����&% �&�3��%"���%�&��""B��� ��������"� ����������

����������������� ��������������=� ������� ���"��&����������������"�����&���

��,�"�����%�����������������3������ ������=����������&���&����������% %�����&������

�&�������� "%&���������&��� �����������=�K�������B���������B����������������

�� �������������������������=�-�

�0��5�

�*�

�7�

��+�

Page 36 of 36

ACS Paragon Plus Environment

Molecular Pharmaceutics

123456789101112131415161718192021222324252627282930313233343536373839404142434445464748495051525354555657585960